JPH08508396A

JPH08508396A - 核マトリックスタンパク質

Info

Publication number: JPH08508396A
Application number: JP6518284A
Authority: JP
Inventors: エス．コフィー，ドナルド; ダブリューパーティン，アラン; エイチゲツェンバーグ，ロバート
Original assignee: ザジョーンズホプキンスユニバーシティースクールオブメディシン
Priority date: 1993-02-09
Filing date: 1994-02-08
Publication date: 1996-09-10
Also published as: WO1994018222A1; US5824490A; US5874539A; EP0684955B1; EP0684955A1; US6030793A; US20030143621A1; ATE302789T1; CA2155645A1; US20060172352A1; DE69434470T2; US5849509A; EP0684955A4; DE69434470D1; US20020168695A1

Abstract

(57)【要約】組織での明確に定められた発現により特徴づけられる核マトリックスタンパク質（ＮＭＰ）を提供する。かかるＮＭＰは細胞の悪性度の段階を診断およびモニターし、ＮＭＰと関連した細胞増殖性疾患を治療する際の有用なマーカーとなる。また、本発明のＮＭＰをコードする実質的に精製されたポリペプチドおよびヌクレオチド配列も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】核マトリックスタンパク質発明の背景１．発明の分野本発明は、核マトリックスタンパク質（nuclear matrixprotein：ＮＭＰ）に関し、特に正常細胞および細胞増殖性疾患と関連した細胞において明確に定められた組織発現パターンを有する新規な核マトリックスタンパク質に関するものである。２．関連技術の説明組換えＤＮＡ技術の進展により、増殖、発生および分化を制御する正常細胞の遺伝子（癌原遺伝子および腫瘍抑制遺伝子）が発見されるようになってきた。ある状況下では、これらの遺伝子の調節が変化を受けて、正常細胞が腫瘍性の増殖挙動をとるようになる。いくつかの場合に、正常細胞の表現型はこれらの遺伝子に関連した種々の操作により修復することができる。これまでに、癌原遺伝子および抑制遺伝子は４０以上知られており、その機能特性に応じていくつかのカテゴリーに類別される。これらには、１）増殖因子および増殖因子受容体、２）例えば細胞質と核の間の、細胞内シグナル伝達経路のメッセンジャー、および３）核の内外に存在する、遺伝子発現およびＤＮＡ複製に影響を与える調節タンパク質、が含まれる。正常細胞の寿命は、増殖能を有する未成熟期で始まり、続いて起こる分化期を通り、最後には細胞死で終わる。一方、癌は悪性度の段階によって規定され得る多段階進行であり、そこでは正常な秩序正しい段階的進行が、おそらくは癌遺伝子、腫瘍抑制遺伝子または他の遺伝子の変異ゆえに、正常でなくなる。癌遺伝子とそれらの産物に関する研究により、癌の原因と進行のメカニズムの基本的な理解が深まり、悪性疾患を診断・治療するためのより合理的な手段が得られるようになった。細胞の増殖および分化の制御に関連した遺伝子として、遺伝子発現およびＤＮＡ複製に影響を及ぼす調節タンパク質をコードしている遺伝子が挙げられる。これらの遺伝子の大半の遺伝子産物は核の中にあり、多くはＤＮＡ結合タンパク質である。動物細胞の核は、クロマチン（染色質）と呼ばれる、タンパク質と結合して複合体を形成している細胞ＤＮＡを含んでいる。クロマチンは核マトリックスと呼ばれる核の内部骨格によって構成される。ＤＮＡと関連した核マトリックスタンパク質（ＮＭＰ）は、細胞での遺伝子発現の調節においてある役割を果たしている増殖／分化調節タンパク質でありうる。増殖調節機構を失っている細胞では、核特異的タンパク質が遺伝子の転写プロモーター領域を活性化し続けて、その遺伝子の過剰発現を引き起こすと想定される。同様に、種々の癌原遺伝子の発現を制御または抑制するサプレッサーとして機能する核タンパク質は、過少発現されるかまたは変異型で発現され、その結果、さもなくば抑制される遺伝子の異常発現を可能とする。最近の癌検査は一般的に非特異的で、感度が低く、そのため臨床用途が限られている。例えば、癌の診断とモニターの両面で広く採用されている生化学的検査は癌胎児性抗原（ＣＥＡ）のレベルを測定するものである。ＣＥＡは胎児組織では大量に検出されるが、正常な成人組織では少量しか検出されない胎児腫瘍性抗原である。ある種の消化器系癌をもつ患者の血清は、免疫学的方法で測定しうる高レベルのＣＥＡを含んでいる。血清中のＣＥＡの量はこれらの腫瘍の鎮静化または再発と相関関係があり、腫瘍を外科的に摘出した後ではそのレベルがいきなり低下する。ＣＥＡレベルが再度上昇することは悪性細胞の復帰を意味する。しかし、ＣＥＡはほぼ全ての成人に低レベルで存在する普通の糖タンパク質でもある。さらに、このタンパク質はいくつかの非悪性状態でも上昇することがあり、多くの癌の存在下では上昇しない。それゆえ、癌マーカーとしては理想に程遠いものである。同様の胎児腫瘍マーカーとしてはアルブミンの胚型であるα−フェトプロテインがある。この抗原も胚組織で多量に検出されるが、正常な成人では少量しか検出されない。これは肝癌を含めて多くの消化器系悪性疾患において上昇する。ＣＥＡと同様に、その低下は癌の鎮静化に、その再上昇は再発に関係がある。２，３の選ばれた症例以外のどの症例においても、このマーカーを悪性疾患のスクリーニングや以前に診断を下された癌のモニタリングに使用するには、感度と特異性が不十分である。上述したことを考慮すると、より効果的な診断、予後および治療法を可能にするような、新しい癌マーカーの必要性が依然存在している。正常細胞と癌細胞における遺伝子発現または細胞構造の調節に関係しているＮＭＰの同定は、細胞の悪性度の段階を確認するための理想的なマーカーを提供するであろう。発明の概要本発明は、細胞の異常な増殖および悪性度のさまざまな段階で明確に定められた組織発現パターンを有する新規な核マトリックスタンパク質（ＮＭＰ）の発見に基づくものである。本発明のＮＭＰは、タンパク質ＮＰＢ−１、ＮＰＢ−２、ＮＰＢ−３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ−５、ＮＰＢ−６、ＮＰＢ−７、ＮＰ−１、ＮＰ−２、ＮＰ−３、ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＢＰＣ−３およびＰＣ−１のいずれか１つに特徴的な組織発現パターンにより明確に定められる。これらのタンパク質は、初めに、正常な前立腺組織（ＮＰ）、正常および良性の両方の過形成前立腺組織（ＮＢＰ）、良性の過形成前立腺組織および癌性の前立腺組織（ＢＰＣ）または前立腺癌組織（ＰＣ）に関連があるとして同定された。本発明は、新規なＮＭＰをコードしているヌクレオチドを提供する。本発明のＮＭＰは、細胞性成分とＮＭＰに結合する試薬とを接触させることからなる被検者における細胞増殖性疾患の検出方法の基礎を提供するものである。この方法は尿生殖器系の組織、特に前立腺組織、の細胞増殖性疾患を検出するのに特に有用である。本発明はまた、ＮＰＢ−１、ＮＰＢ−２、ＮＰＢ−３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ− ５、ＮＰＢ−６、ＮＰＢ−７、ＮＰ−１、ＮＰ−２、ＮＰ−３、ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＢＰＣ−３およびＰＣ−１に関連した細胞増殖性疾患の治療方法を提供する。こうした方法は例えば遺伝子治療を含みうる。図面の簡単な説明図１は、正常ヒト前立腺（Ａ）、良性前立腺過形成（Ｂ）および前立腺癌（Ｃ）の核マトリックスタンパク質の組成を示す。大きな矢印（パネルＡ）：いろいろなタイプの組織に一貫しないで存在していたタンパク質類の可変グループ。小さな矢印：すべての組織において一貫して変化しており、表１で分子量および等電点により同定されるタンパク質。略号：ＬＡ−ラミンＡ、ＬＢ−ラミンＢ、ＬＣ −ラミンＣ、Ａ−アクチン、ＮＰ−正常な前立腺、ＮＰＢ−正常な前立腺およびＢＰＨ、ＢＰＣ−ＢＰＨおよび前立腺癌、ＰＣ−前立腺癌、ｋＤ−１，０００の位の分子量、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ−ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、およびｐＩ−等電点。図２は、ＢＰＨと前立腺癌に特異的な核マトリックスタンパク質を示す。正常な前立腺、ＢＰＨおよび前立腺癌の主な組織特異的核マトリックスタンパク質の概略図。略号：ｋＤ−１，０００の位の分子量、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ−ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、ｐＩ−等電点、およびＢＰＨ −良性の前立腺過形成。図３は、正常な前立腺（正常）から良性の前立腺過形成（ＢＰＨ）への、または前立腺癌（癌）への多段階進行の２つのモデルを示す。モデルＩは、同様の現象が両方の経路で起こることを予告するものである。モデルIIは、正常から、癌へ進行する場合のＢＰＨへ、進行するときに起こる異なる現象を予告するものである。発明の詳細な説明本発明は、実質的に純粋な核マトリックスタンパク質（ＮＭＰ）またはその機能性フラグメントを提供する。該タンパク質はＮＰＢ−１、ＮＰＢ−２、ＮＰＢ −３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ−５、ＮＰＢ−６、ＮＰＢ−７、ＮＰ−１、ＮＰ−２、ＮＰ−３、ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＢＰＣ−３およびＰＣ−１より成る群から選ばれたタンパク質に特徴的な組織発現パターンを有する。本発明はまた、これらのタンパク質をコードしているポリヌクレオチド配列を提供する。本発明のＮＭＰは、一般に、細胞増殖性疾患の特定の時期に細胞内に存在する点に特徴がある。「細胞増殖性疾患」という用語は、悪性細胞集団ばかりでなく、しばしば形態と遺伝子型の両方が周囲の組織と違っているように見える非悪性細胞集団をも表す。悪性疾患（すなわち、癌）は多段階進行であり、本発明のタンパク質は正常細胞から癌細胞へ移行する際に３つの広範な段階と関係している。広範な段階において、正常組織（段階１）は過形成（段階２）の徴候を示し始めるか、または新形成（段階３）の徴候を示す。本明細書中で用いる「過形成（hyperplasia）」とは、組織において異常な増殖または異常な配列を示す細胞のことである。用語「過形成」に含まれるものは、良性腫瘍などの良性の細胞増殖性疾患である。正常組織と良性過形成組織（ＮＰＢ）（非悪性）の両方において組織発現パターンを示す本発明のタンパク質としては、ＮＰＢ−１、ＮＰＢ−２、ＮＰＢ−３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ−５、ＮＰＢ−６およびＮＰＢ−７がある。「組織発現パターン」という用語は、当業者が普通に用いる方法（例えば、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）によって検出され得るレベルでのＮＭＰ遺伝子の遺伝子産物の合成を意味する。本明細書中で用いる「新形成（neoplasia）」とは新たな異常増殖を指し、腫瘍をもたらすことである。過形成と違って、新形成増殖はもとの刺激物の不在下でさえも持続し、制御不能で進行性である点に特徴がある。悪性新生物つまり悪性腫瘍は良性腫瘍と区別され、前者は退形成（anaplasia）の度合がより大きく、侵入および転移の性質を有する。本発明のタンパク質ＰＣ−１は、悪性新生物に見られる発現パターンを有するタンパク質の例である。本発明のタンパク質ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２およびＢＰＣ−３は良性の過形成組織または腫瘍において、さらに新形成組織または腫瘍でも発現されるタンパク質の例である。一方、タンパク質ＮＰ−１、ＮＰ−２およびＮＰ−３は正常組織（非腫瘍）、非過形成組織および非新形成組織において組織発現パターンを有する。したがって、これら後者のタンパク質の存在は本質的に細胞増殖性疾患の存在を問題外とする。要するに、ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２およびＢＰＣ−３、それにＰＣ−１は腫瘍細胞と関係があり、ＮＰＢ−１、ＮＰＢ−２、ＮＰＢ−３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ −５、ＮＰＢ−６およびＮＰＢ−７は正常および非悪性の過形成または腫瘍細胞と関係があり、ＰＣ−１は悪性細胞と関係があり、そしてＮＰ−１、ＮＰ−２およびＮＰ−３は非腫瘍細胞と関係がある。「と関係がある」という用語は、タンパク質の発現パターンと癌への進行段階との相関関係を意味する。本発明は実質的に純粋なＮＭＰまたはその機能性フラグメントを提供する。本明細書中で用いる「機能性ポリペプチド」または「機能性フラグメント」という用語は、規定された機能検査により同定される生物学的機能または活性を保有し、かつ細胞の特定の生物学的変異、形態学的変異または表現型の変異と関係があるポリペプチドを指す。生物学的機能を保有するポリペプチドフラグメントは、抗体分子が結合し得るエピトープほどに小さなものから、細胞内の表現型変化の特徴的な誘導またはプログラミングに関与しうるポリペプチドほどに大きなものまで、様々である。本発明のＮＭＰの全体または機能性部分をコードしている機能性ポリペプチドは、それらが核マトリックス中に見いだされて本発明の所与のＮＭＰに特有の組織発現パターンを示す限り、どれも本発明に含まれることが理解されよう。「機能性ポリヌクレオチド」とは、ここに記述する機能性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのことである。「実質的に純粋な」または「単離された」という用語は、本質的に他のポリペプチドまたは他の遺伝子を含まない、それぞれ本発明のＮＭＰ機能性ポリペプチドまたは該ＮＭＰ機能性ポリペプチドをコードする遺伝子を意味し、自然界で通常一緒に存在している他の汚染物質や、自然界では見られない形で存在するような汚染物質を本質的に含まない。本発明はまた、本発明のＮＭＰの機能性誘導体を提供する。「機能性誘導体」とは、分子の「フラグメント」、「変異体」、「類似体」または「化学的誘導体」を意味する。本発明のＤＮＡまたはアミノ酸配列のような分子の「フラグメント」は、該分子のヌクレオチドまたはアミノ酸サブセットを含む。かかる分子の「変異体」は、完全な分子またはそのフラグメントに実質的に類似している天然に存在する分子のことである。分子の「類似体」は、完全な分子またはそのフラグメントに実質的に類似している非天然分子のことである。本発明のＮＭＰを単離するために用いられる方法は、例えばタンパク質用の通常の沈殿剤によるＮＭＰ含有試料の処理、これに続くイオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、限外濾過およびこれらの種々の組合せのような分画化技法を含む、タンパク質物質の分離に常用されている方法である。ＮＭＰは、例えば米国特許第4,885,236号および同第4,882,268号に記述される方法により細胞浮遊液から精製することができる。本発明のポリペプチドの他の精製法は当業者には知られているだろう（例えば、参考としてここに組み入れるCurrent Protocol sin Immunology，Coliganら編集，1992を参照のこと）。ＮＭＰ含有画分は適当な条件下でＳＤＳＰＡＧＥにかけ、ＮＭＰ活性を含むゲル切片または対象のＮＭＰの分子量に対応するゲル切片を回収する。ＳＤＳＰＡＧＥはLaemmliらの方法（Nature，227：680，1970）にしたがって実施できるが、当技術分野で公知の技法である。適当な範囲内にある条件の変更はこの精製法に含まれることが理解されよう。ＳＤＳＰＡＧＥからのＮＭＰ含有画分は逆相ＨＰＬＣにかけ、例えばアセトニトリルを用いて溶出する。得られたＮＭＰは実質的に純粋で、Ｎ末端のアミノ酸配列解析が可能である。この溶液を減圧下で乾燥し、少量のアセトニトリル９５％＋ＴＦＡ（０．０８％）中に再溶解する。その後、濃厚な試料をフェニルチオヒダントイン（ＰＴＨ）分析装置に接続したシークエンサーに導入する。本発明は、新規なＮＭＰ機能性ポリペプチドをコードするＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡのようなポリヌクレオチドを提供する。本発明のＮＭＰの全体または機能性部分をコードするポリヌクレオチドは、それらが核マトリックス中に見いだされて本発明の所与のＮＭＰに特有の組織発現パターンを示す限り、どれも本発明に含まれることが理解されよう。このようなポリヌクレオチドとしては、天然に存在するポリヌクレオチドと、故意に操作した、例えば突然変異誘発を行ったポリヌクレオチドが含まれる。ＮＭＰのポリヌクレオチド配列には、アンチセンス配列および遺伝暗号の結果としての縮重配列も含まれる。天然アミノ酸は２０種類存在しているが、そのうちの大半は１より多いコドンにより特定される。それゆえ、ＮＭＰのアミノ酸配列が機能性ポリペプチドをもたらすのであれば（少なくとも、センスポリヌクレオチド鎖の場合）、全ての縮重ヌクレオチド配列は本発明に包含される。アンチセンスポリヌクレオチドが関係している場合には、本発明はＮＭＰポリペプチドの生産を阻害することができる全てのアンチセンスポリヌクレオチドを包含する。本発明のＤＮＡ配列はいくつかの方法によって得ることができる。例えば、ＤＮＡは当技術分野で公知のハイブリダイゼーション技法を用いて単離することができる。これらには、１）共有しているヌクレオチド配列を検出するためのゲノムまたはｃＤＮＡライブラリーへのプローブのハイブリダイゼーション、２）共有している構造的特徴を検出するための発現ライブラリーの抗体スクリーニング、および３）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による合成が含まれるが、これらに限らない。本発明のＲＮＡ配列は当技術分野で公知の方法により得られる（例えば、参考としてここに組み入れるCurrent Protocols in Molecul ar Biology，Ausubelら編集，1989を参照のこと）。本発明のＮＭＰをコードしている特定ＤＮＡ配列の開発は、（１）ゲノムＤＮＡからの二本鎖ＤＮＡ配列の単離、（２）対象ポリペプチドの必要なコドンを提供するＤＮＡ配列の化学的製造、および（３）真核ドナー細胞から単離されたｍＲＮＡの逆転写による二本鎖ＤＮＡ配列のin vitro合成、によって得ることができる。後者の場合には、ｍＲＮＡの二本鎖ＤＮＡ相補体が最終的に形成され、これは一般的にｃＤＮＡと呼ばれている。組換え法で用いる特定ＤＮＡ配列を開発するためのこれら３つの方法のうち、ゲノムＤＮＡ単離物の単離が最も一般的でない。このことは、イントロンの存在のために哺乳動物ポリペプチドの微生物発現を得ることが望ましい場合に、特に当てはまる。ＤＮＡ配列の合成は、目的のポリペプチド産物のアミノ酸残基の全配列が知られているときには、しばしば最良の方法となる。目的のポリペプチド産物のアミノ酸残基の全配列が不明である場合は、ＤＮＡ配列の直接合成が実施できず、ｃＤＮＡ配列の作製が最良の方法となる。対象のｃＤＮＡ配列を単離するための標準方法の中に、ドナー細胞（高レベルの遺伝子発現を有する）に豊富に存在しているｍＲＮＡの逆転写により誘導されるプラスミド担持ｃＤＮＡライブラリーの作製がある。ポリメラーゼ連鎖反応の技法と併用すると、稀少発現産物でさえもクローニングすることができる。ポリペプチドのアミノ酸配列のかなりの部分が知られている場合には、標的ｃＤＮＡ中に推定上存在する配列と重複する一本鎖または二本鎖の標識ＤＮＡまたはＲＮＡプローブ配列の作製を、ＤＮＡ／ＤＮＡハイブリダイゼーション法（一本鎖形態に変性されたｃＤＮＡのクローン化コピーに対して実施される）において採用できるかもしれない（Jayら，Nucleic AcidResearch，11：232 5，1983）。ハイブリダイゼーション法は、それぞれのプローブが、変性二本鎖ＤＮＡの異種混合物を含むハイブリダイゼーション試料中の特異的ＤＮＡ配列に完全に相補的である可能性をもつ場合、標識した混合合成オリゴヌクレオチドプローブを用いて組換えクローンをスクリーニングするのに有用である。そのようなスクリーニングのためには、一本鎖ＤＮＡまたは変性二本鎖ＤＮＡを用いてハイブリダイゼーションを行うことが望ましい。ハイブリダイゼーションはとりわけ、問題としているポリペプチドに関係するｍＲＮＡの量がきわめて少ない供給源材料に由来するｃＤＮＡクローンの検出に有用である。非特異的な結合を避けるための厳格な（ストリンジェント）ハイブリダイゼーション条件を用いることによって、たとえば、混合物中に存在する、標的ＤＮＡに対するただ一つの完全な相補的プローブに対する標的ＤＮＡのハイブリダイゼーションによって、特異的ｃＤＮＡのクローンのオートラジオグラフィーによる可視化が可能となる（Wallaceら，N ucleic Acid Research，9：879，1981）。ＮＭＰ含有ｃＤＮＡライブラリーは、さまざまなｃＤＮＡを卵母細胞に注入し、ｃＤＮＡ遺伝子が発現して産物が生産されるための十分な時間を与え、たとえばＮＭＰポリペプチドに対する特異的な抗体、あるいはＮＭＰ活性に対する機能的なアッセイおよびＮＭＰに特徴的な組織の発現パターンを用いることによって、目的とするｃＤＮＡの発現産物の存在を検証することによってスクリーニングを行うことができる。核酸のハイブリダイゼーションに依拠したスクリーニング法は、適当なプローブが利用できる限りはいかなる生物のいかなる遺伝子配列をも単離することを可能にする。問題とするタンパク質をコードする配列の一部に対応するオリゴヌクレオチドプローブは、化学的に合成することができる。これはアミノ酸配列の短いオリゴペプチド領域が知られていなければならないことを要求する。タンパク質をコードするＤＮＡ配列は遺伝子暗号から推論されるが、遺伝暗号の縮重を考慮に入れなければならない。配列が縮重している場合には変性二本鎖ＤＮＡの異種混合物を利用した混合添加反応を行うことが可能である。そのようなスクリーニングのためには、ハイブリダイゼーションは一本鎖ＤＮＡまたは変性二本鎖ＤＮＡを用いて行うことが望ましい。本発明の新規なＤＮＡ配列は本質的にＮＭＰの全部または一部をコードするので、サブクローンを調製し、このＤＮＡまたは対応するＤＮＡ配列からより小さなポリペプチド断片を発現させるのは、ごくふつうに行われることである。あるいは、ここに開示した本発明の独自のＮＭＰ種を定めるＤＮＡ断片を用いることによって、知られている技術と結びつけて、全ＮＭＰをコードするＤＮＡ配列を決定することが可能である。そのような技術は米国特許第4,394,443号および米国特許第4,446,235号に述べられており、文献内容は参考としてここに組み入れる。ラムダgt11のようなｃＤＮＡ発現ライブラリーは、ＮＭＰに対する特異的な抗体を用いて、少なくとも一つのエピトープを有するＮＭＰペプチドに対して間接的にスクリーニングを行うことができる。そのような抗体はポリクローナル由来でもモノクローナル由来でもよく、ＮＭＰｃＤＮＡの存在を示す発現産物を検出するのに用いられる。ポリクローナル抗体は動物、たとえばウサギを免疫原性のあるＮＭＰ標品によって免疫し、つづいて当業者にはよく知られた方法によって抗体の精製を行うことにより調製される。本発明に用いられた抗体は本発明のＮＭＰと免疫反応性をもつ。基本的に異なるエピトープ特異性をもつモノクローナル抗体の集合よりなる抗体と、明確に異なるモノクローナル抗体標品の両方が提供される。モノクローナル抗体はタンパク質の抗原含有断片を用い、当技術分野でよく知られている方法（Kohrerら，Na ture，256：195，1975；Current Protocols in Molecular Biology，Ausubel et al.，1989）によって作られる。本発明の抗体は、本発明のＮＭＰを含む配列の単離のためのイムノアフィニティークロマトグラフィーに用いることができる。そのようなイムノアフィニティークロマトグラフィーを用いる一つの方法は、本発明の抗体をＣＮＢｒ−セファロース−４ＢまたはTresyl活性化セファロース（Pharmacia）に結合させることである。これらの固相結合抗体は、次いでその他のタンパク質を含む混合物からＮＭＰを含む配列を特異的に結合し、この配列の単離精製を可能にする。結合したＮＭＰ配列は当業者にはよく知られている技術、たとえばカオトロピック試薬、低ｐＨ、または尿素などを用いて、アフィニティークロマトグラフィーの支持体から溶出することができる。ＮＭＰのＤＮＡ配列はＮＭＰをコードするゲノミックなポリヌクレオチドの増幅のためのプライマーであるオリゴヌクレオチドを用いて作製できる。これらの独特のオリゴヌクレオチドプライマーの作製はＮＭＰをコードするポリヌクレオチドに隣接するフランキング領域の同定にもとづいて行われる。これらのオリゴヌクレオチドプライマーは、ＮＭＰポリペプチドをコードする配列のフランキングヌクレオチドおよびこれに相補的な配列とハイブリダイゼーションを行うことのできる配列を含む。本発明のプライマーは、ＮＭＰをコードするポリヌクレオチドのなかの相当量の核酸の重合の特異的な開始を可能にさせるような、十分な長さと適当な配列をもったオリゴヌクレオチドを含む。特に、ここで用いられている「プライマー」という用語は、ＮＭＰ鎖に実質的に相補的なプライマー伸長反応生成物の合成を開始させることのできる、二つまたはそれ以上、望ましくは三つ以上のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドを含む配列のことを意味する。合成のための実験的条件はヌクレオチド三リン酸およびＤＮＡポリメラーゼなどの重合と伸長のための試薬、および適当な温度およびｐＨを含む。プライマーは増幅の効率を最大にするために一本鎖であることが望ましいが、二本鎖でもよい。二本鎖の場合には、プライマーは伸長反応生成物を調製するために用いる前に、二つの鎖を分離する処理をうける。プライマーとして望ましいのはオリゴデオキシリボヌクレオチドである。プライマーの長さは、ヌクレオチドの重合と伸長を誘導する試薬の存在下で、伸長生成物の合成を開始させるのに十分な長さをもたねばならない。プライマーの正確な長さは、温度、緩衝液、およびヌクレオチド組成などを含む多くの要素によって左右される。オリゴヌクレオチドプライマーは、より少ないヌクレオチドを含むものであってもよいが、典型的な15〜22またはそれ以上のヌクレオチドを含む。本発明のプライマーは、増幅をうけるべきＮＭＰをコードするポリヌクレオチドの各鎖に「実質的に」相補的であるように設計されている。これはプライマーが重合とヌクレオチド伸長の試薬が働きうる条件で、その対応する鎖とハイブリダイゼーションを行うのに十分な相補性をもつことを意味する。言葉をかえれば、プライマーはフランキング配列とハイブリダイゼーションを行うのに十分な相補性をもち、レセプターＮＭＰをコードするポリヌクレオチドの増幅を許すものでなければならない。望ましいのはプライマーがフランキング配列鎖と正確な相補性をもつことである。本発明のオリゴヌクレオチドプライマーは、含まれている反応段階の数に相当する、ＮＭＰをコードするポリヌクレオチドの指数的な量を生成する酵素的な連鎖反応である、増幅過程に用いられる。典型的には一つのプライマーは、ＮＭＰをコードするポリヌクレオチドの負（−）鎖に対して相補的であり、もう一方は正（＋）鎖に対して相補的である。変性させた核酸に対するプライマーのアニーリングに続く、たとえばＤＮＡポリメラーゼＩの大フラグメント（Klenow）などの酵素とヌクレオチドによる伸長反応により、ＮＭＰ配列を含む、新しく合成された（＋）および（−）鎖が生じる。これら新しく合成された配列はまた鋳型ともなるので、変性、プライマーアニーリング、伸長反応のサイクルの繰返しにより、プライマーによって両端の区切られた配列（すなわちＮＭＰポリヌクレオチド配列）の指数的な生成がはかられる。連鎖反応の生成物はその末端が用いられた特異的なプライマーの末端に対応する、ばらばらの核酸二本鎖となる。この分野の専門家は、標的核酸のコピー数を増加させるために利用される、他の増幅手段があることも知るであろう。これら０、例えば、連結活性化転写（ligation activated t ranscription：LAT）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換活性化（strand di splacement activation：SDA）などを含むが、ＰＣＲが望ましい方法である。本発明のオリゴヌクレオチドプライマーは、通常のホスホトリエステルおよびホスホジエステル法またはこの自動化法など、適当な方法を用いで調製することができる。そのような自動化法の一例として、ジエチルホスホルアダイトが出発材料として用いられ、Beaucageら（Tetrahedron Letters 22：1859-1862，1981 ）に述べられたように合成することができる。改質固層支持体上におけるオリゴヌクレオチド合成の一方法は、米国特許第4,458,066号に述べられている。本発明に従って用いることのできる増幅の一方法は米国特許第4,683,202号および同第4,683,195号に述べられているポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。本発明のＮＭＰの特異的な核酸の配列を含むか、または含んでいると考えられる限り、精製または未精製形態の、いかなる核酸標本も上記方法のための出発核酸として用いることができる。したがってこのプロセスは、たとえばＤＮＡまたはＲＮＡ（ｍＲＮＡを含む）を用いることができるが、ここでＤＮＡまたはＲＮＡは一本鎖または二本鎖のいずれでもよい。ＲＮＡが鋳型として用いられる場合は、鋳型をＤＮＡへと逆転写するために至適の酵素および／または条件が用いられる。さらに、それぞれの一方の鎖を含むＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを用いることができる。核酸の混合物もまた用いることができ、あるいは同一の、または異なるプライマーを用いた、ここでさきに述べた増幅反応で生成した核酸も用いられる。増幅されるべき特定の核酸配列（すなわちＮＭＰ配列）は、大きな分子の分画であるかもしれず、または、特定配列が核酸全体の配列を構成するようにはじめにばらばらの分子として存在しうる。増幅すべき配列がはじめに純粋なかたちで存在する必要はないから、それはヒト全ＤＮＡに含まれているような複雑な混合物の微量成分であってもよい。ここで用いられるＤＮＡまたはＲＮＡは、前立腺組織またはその他のさまざまな組織などの身体標本からManiatisら（Molecular Cloning，280：281，1982）によって述べられた方法などの、さまざまな技術によって抽出されうる。抽出された試料が不純（例えば血漿、血清、精液または血液など）な場合には、これは増幅を行う前に試料の細胞、体液、組織または動物細胞膜などをばらばらにし、核酸鎖を露出および／または分離させるのに有効な試薬の量を用いて処理することができる。鎖を露出させ分離させる、溶解と核酸の変性の段階は、増幅をより容易に行わせることを可能にする。試料の標的核酸配列が二本の鎖を含む場合、これを鋳型として用いる前に核酸の鎖を分離する必要がある。鎖の分離は独立の段階として、またはプライマー伸長生成物の合成と同時に行うことができる。この鎖の分離は、物理的、化学的、または酵素的な手段を含む、さまざまの適当な変性条件を用いて行うことができる。「変性」という用語はそのようなすべての方法を含んでいる。核酸二本鎖を分離する一つの物理的方法は、これが変性するまで核酸を加熱することを含む。典型的な熱変性は、約80℃から105℃ の温度範囲で約１分から10分間の処理を含む。鎖の分離はまた、ヘリカーゼとして知られる酵素群または、ヘリカーゼ活性を有し、リボＡＴＰの存在下でＤＮＡを変性することが知られているRecA酵素によって誘導することができる。ヘリカーゼによる核酸の鎖の分離に適当な反応条件はKuhn Hoffmann-Berling（CSH-Qua ntitative Biology，43：63，1978）によって記述されており、RecAを用いる技術についてはC.Radding（Ann．Rev．Genetics，16：405-437，1982）に総説がある。増幅を行うべき配列を含む核酸が一本鎖ならば、その相補的な鎖は一つまたは二つのオリゴヌクレオチドプライマーを加えることによって合成される。単一のプライマーが用いられる場合には、プライマー、重合のための試薬、および後述の４種類のヌクレオチド三リン酸の存在下でプライマー伸長反応生成物が合成される。生成物は一本鎖核酸に部分的に相補性があり、一本鎖核酸とハイブリダイズして鎖の長さが等しくない二本鎖を形成し、これは次いで一本鎖に分けられ、二本の分離した相補的な一本鎖を生じる。あるいは二つのプライマーを一本鎖の核酸に加え、既述のように反応を行わせてもよい。核酸がもともと一本鎖であったか二本鎖であったかには無関係に、核酸の相補的な鎖が分離されると、分離した鎖はもう一本の鎖の合成のための鋳型として直ちに用いられうる状態にある。この合成はプライマーの鋳型へのハイブリダイゼーションが生ずる条件下で行われる。一般に合成は、水性の緩衝液中で生じ、望ましいｐＨは７〜９であり、最も望ましいのは約８である。モル過剰の（ゲノミックな核酸にたいしては通常プライマー：鋳型＝約 10⁸：１）の二つのオリゴヌクレオチドプライマーを、分離した鋳型鎖を含む緩衝液に加えるのが望ましい。しかし、本発明の方法が診断への応用に用いられる場合には、相補的な鎖の量が未知でありうるので、相補的な鎖に対するプライマーの相対量を確実に決定することはできない。しかし、実際問題として増幅されるべき配列が複雑で長い核酸鎖の混合物の一部に含まれている場合には、加えるプライマーの量は相補的な鎖（鋳型）の量よりも一般的にモル過剰である。このプロセスの効率を上げるためには大モル過剰であることが望まれる。デオキシリボヌクレオチド三リン酸、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰを、プライマーと別々にまたはプライマーと共に適量を合成混合物中に加え、生じた溶液を約90〜100℃でおよそ１〜10分間、望ましくは１〜４分間加熱する。この加熱後、溶液の温度をプライマーのハイブリダイゼーションに適当な室温にまで下げる。冷えた溶液に、プライマー伸長反応に影響をあたえる適当な試薬（ここでは“重合試薬”と呼ぶ）を加え、反応を当業界で知られた条件下で行わせる。重合試薬は熱に安定であれば他の試薬とともに添加してもよい。この合成（または増幅）反応は室温から、それ以上の温度では重合試薬が働かなくなるまでの温度で生じうる。したがってたとえば、ＤＮＡポリメラーゼがこの試薬として用いられた場合、温度は一般に40℃以下である。温度は通常室温が用いられる。重合試薬は酵素を含め、プライマー伸長生成物の合成を行わせる機能をもつものであればどんな化合物またはシステムでもよい。この目的に適した酵素は、たとえば熱安定性の酵素（すなわち、変性を行わせるのに十分な高さに上昇させた温度に曝されたのちにプライマー伸長反応を行う酵素）を含み、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩ、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩのKlenow断片、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼ、他の利用可能なＤＮＡポリメラーゼ、ポリメラーゼ変異タンパク質、逆転写酵素、その他の酵素などを含む。適当な酵素はヌクレオチドを適当に結合させ、ＮＭＰ核酸鎖に相補的なプライマー伸長生成物を形成するのを助ける。一般的に、この合成は各プライマーの３’末端ではじまり、異なる長さの分子を生成しつつ合成が終結するまで、鋳型鎖に沿って５’方向に進行する。しかし、上に述べたのと同一の方法を用いて、合成が５’側で開始し、反対方向に進行するような重合試薬もありうる。新しく合成されたＮＭＰ鎖およびその相補的な核酸鎖は上に述べたハイブリダイゼーション条件下で二本鎖分子を形成し、このハイブリッドはこのプロセスの次の段階に用いられる。次の段階では、この新しく合成された二本鎖ＤＮＡはさきに述べた方法のいずれかの方法を用いた変性条件に曝し、一本鎖分子を生じさせる。上記プロセスは一本鎖分子について繰り返される。上に述べた条件下で反応を進行させるために、さらに重合試薬、ヌクレオチド、およびプライマーを加えることができる。ふたたび、この合成は各オリゴヌクレオチドプライマーの一端から開始し、鋳型の一本鎖に沿って進行しもう一本の核酸鎖を生む。この段階の後、伸長生成物の半分は二つのプライマーで区切られた特定の核酸配列より成るであろう。変性および伸長生成物の合成の段階は、検出に必要な程度まで、ＮＭＰ核酸配列の増幅に必要なだけ何度も繰り返すことができる。生じた特定核酸の量は指数的に蓄積することになる。本発明の方法により増幅を行った配列は、ＰＣＲ、オリゴマー制限（Saikiら，Bio/Technology，3：1008-1012，1985）、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）プローブ分析（Connerら，Proc.Natl．Acad．Sci．USA，80：278， 1983）、オリゴヌクレオチド連結試験（ＯＬＡ）（Landegrenら，Science，241 ：1077，1988）その他のような特定のＤＮＡ配列の検出に通常用いられる方法のいずれかによって、溶液中、または固体支持体に結合後、さらに評価、検出、クローニング、配列解析を行うことができる。ＮＭＰをコードするＤＮＡ配列は、ＤＮＡを適当な宿主細胞に移入することによってin vitroで発現させることができる。“宿主細胞”はベクターが増殖継代され、そのＤＮＡが発現する細胞である。この用語はさらに検体宿主細胞の子孫細胞も含む。複製の過程で変異が生じる可能性があるので、すべての子孫細胞は親細胞と同一でないかもしれないことが考えられる。しかし、そのような子孫細胞も“宿主細胞”という用語が用いられるときには含まれている。安定した移入、言葉を変えれば外来ＤＮＡが宿主内で継続的に保持される場合の方法は当業界で知られている。本発明において、ＮＭＰポリヌクレオチド配列を組換え発現ベクターに挿入することができる。“組換え発現ベクター”という用語は、ＮＭＰ核酸配列の挿入または組み込みにより操作された、当業界で知られているプラスミド、ウイルスまたは他の運搬体をさす。そのような発現ベクターは宿主の挿入された核酸配列の効率のよい発現を促進するプロモーター配列を含む。この発現ベクターは典型的には、複製起点、プロモーターおよびトランスフォームされた細胞の表現型による選択を可能にする特定遺伝子を含む。本発明における使用に適切なベクターは以下に限るものではないが、バクテリアにおける発現のためのＴ７系発現ベクター（Rosenbergら，Gene 56：125，1987）、哺乳動物細胞における発現のためのｐＭＳＸＮＤ発現ベクター（Lee and Nathans，J．Biol，Chem．263 ：3521，1988）および昆虫細胞における発現のためのバキュロウイルス誘導ベクターなどを含む。ＤＮＡセグメントはベクター中で、調節要素たとえばプロモーター（たとえばＴ７、メタロチオネインＩ、またはポリヘドリンプロモーターなど）と機能的に連結して存在しうる。ＮＭＰをコードするポリヌクレオチド配列は原核生物または真核生物のいずれかのなかでも発現させうる。宿主として微生物、酵母、昆虫および哺乳動物などを含みうる。原核生物中における真核生物またはウイルス配列をもつＤＮＡ配列の発現の方法は当業者間にはよく知られている。宿主中の発現および複製が可能な生物学的に機能をもつウイルスおよびプラスミドＤＮＡは当業者には知られている。そのようなベクターは本発明のＤＮＡ配列を組み込むために用いられる。組換えＤＮＡによる宿主細胞のトランスフォーメーションは当分野の専門家にはよく知られている、通常の技術によって実施することができる。宿主が大腸菌などの原核細胞である場合には、ＤＮＡのとり込み能力のあるコンピテント細胞は、対数増殖期の後に集菌し、ひきつづいてCaCl₂法によって処理するという、当業者にはよく知られた方法により調製することができる。この代りにMgCl₂またはRbClを用いてもよい。トランスフォーメーションは宿主細胞のプロトプラストを形成した後、またはエレクトロポレーションによって行うこともできる。宿主が真核生物である場合、リン酸カルシウム共沈殿などのＤＮＡのトランスフェクション法、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどの通常の機械的方法、リポソームに封入したプラスミドの挿入またはウイルスベクターなどを用いることができる。真核生物細胞はまた本発明のＮＭＰをコードするＤＮＡ配列、およびヘルペス・シンプレックス・チミジンキナーゼ遺伝子など選択に使える表現型をコードする第二の外来ＤＮＡ分子によって同時にトランスフォームすることができる。もう一つの方法はシミアンウイルス40（SV40）またはウシパピローマウイルスなどの真核生物ウイルスベクターを用いて、真核細胞を一時的に感染またはトランスフォームさせてタンパク質を発現させる方法である。（Eukaryotic Viral Vectors，Cold Spring HarborLaboratory，Gluzman ed. ，1982）。本発明が提供する微生物を用いて発現させたタンパク質質またはその断片の単離と精製は、調製用クロマトグラフィーおよびモノクローナルまたはポリクローナル抗体を含む免疫学的分離法などを含む、通常の方法によって行うことができる。本発明で提供される抗体はＮＭＰポリペプチドおよびその断片と免疫反応性をもつ。本発明のＮＭＰポリペプチドはポリペプチドの断片および保存的な変異を含む。ＮＭＰの一次アミノ配列配列の小さな改変は、ここで述べられているＮＭＰポリペプチドに比較して実質的に等しい活性をもつタンパク質を生じうる。そのような改変は部位特異的突然変異誘発によるように意図的なものであることも、自然発生的なこともある。これらの改変で生じるすべてのポリペプチドは、ＮＭＰの生物学的活性が存在する限り、本発明に含まれる。さらに、一つまたはそれ以上のアミノ酸の欠失も、その生物学的活性を大きく変えることなしに、生じる分子の構造の改変をもたらす。これはより広い用途をもったより小さい活性分子の開発に結びつく。ここで用いられる“保存的変異”という用語はアミノ酸残基を別の、生物学的に類似の残基で置換することを意味する。保存的変異の例は、イソロイシン、バリン、ロイシンまたはメチオニンなどの一つの疎水性残基を別の疎水性残０で置換すること、またはアルギニンをリジンで、グルタミン酸をアスパラギン酸で、またはグルタミンをアスパラギンで、さらに類似の方法で置換するような一つの極性残基を別の極性残基で置換することを意味する。本発明のペプチドは、Merrifield，J．Am．Chem.Soc.，85：2149，1962）およびStewart and Young，Solid Phase Peptides Synthesi（Freeman，San Francis co，1969，pp.27-62）に述べられている、0.1〜1.0mMolアミン／ｇポリマーを含むコポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）を用いた、よく知られた固相ペプチド合成法によって合成できる。化学合成の完了に際して、ペプチドは液体ＨＦ−10 ％アニソールで０℃約^１/_４〜１時間処理することにより脱保護され、ポリマーから切断させられる。試薬をしたのち、ペプチドは１％酢酸溶液でポリマーから抽出され、これは次いで凍結乾燥を行って粗生産物を得る。これはふつう、５％酢酸を溶媒として用い、セファデックスＧ−15のゲル濾過などの方法で精製されうる。カラムの適当な分画の凍結乾燥によって均一なペプチドまたはペプチドの誘導体が得られ、これは次いでアミノ酸分析、薄層クロマトグラフィー、高性能液体クロマトグラフィー、紫外吸収スペクトル分析、モル旋光度、溶解度等の標準の技術によって性質を決定し、固相エドマン分解によって定量を行った。本発明は、ＮＭＰポリペプチドまたはその免疫原性のある断片と免疫反応性のある、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む。必要な場合には、ポリクローナル抗体は、たとえばＮＭＰポリペプチドが結合したマトリックスに結合させ、これから溶出することによってさらに精製することができる。本分野の専門家は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の精製および／または濃縮のための免疫学の技術における他のさまざまな一般的技術を承知しているであろう。基本的に異なるエピトープ特異性をもったモノクローナル抗体の集合より成る抗体および各単一のモノクローナル抗体が提供された。本発明で用いられる抗体または免疫グロブリンという用語は、無傷の分子およびＮＭＰのエピトープ決定部位と結合する能力のあるFabおよびF(ab')₂などの断片を含む。ＮＭＰと結合する抗体の結合領域の同定と単離のための望ましい方法はバクテリオファージλベクターシステムである。このベクターシステムは大腸菌におけるマウス抗体レパートリー（Huseら，Science，246：1275-1281，1989）、およびヒト抗体レパートリー（Mullinaxら，Proc．Natl．Acad．Sci.，87：8095-809 9， 1990）からのFab断片の組合わせライブラリーを発現させるために用いられてきた。そこで述べられているように、あらかじめ選択されたリガンドへの結合を示すレセプター（Fab分子）はこれらの抗体発現ライブラリーから同定され、単離された。この方法はモノクローナル抗体を発現しているハイブリドーマ細胞系列のあらかじめ選択されたリガンドとの結合に適用された。目標とするモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマは当業者にはよく理解されている技術を用いて様々な方法で生産することができ、ここではあらためて繰り返さない。これらの技術の詳細はMonoclonal Antibodies-Hybridomas：A New Dimension in Biolo gicalAnalysis，Edited by Roger H.Kennettら，Plenum Press，1980；および米国特許第4,172,174号等（文献内容は参考としてここに組み入れる）に述べられている。ここで用いられる用語“細胞増殖性疾患”は悪性および非悪性（良性）の異常を意味する。この用語はさらに過形成疾患をも含む。これらの増殖性疾患をもつ細胞は、しばしば周囲の正常細胞とはちがった形態学的および遺伝子型的な表現をもつ。さきに述べたように細胞増殖性疾患は、たとえば本発明のＮＭＰの発現、または発現の不在と結びついている。細胞周期の不適切な時期における、または間違った細胞タイプにおけるＮＭＰの発現は細胞増殖性疾患を招くかもしれない。アンチセンスポリヌクレオチドの形をとったＮＭＰポリヌクレオチドはさまざまな器官系、とりわけたとえば、前立腺などの尿生殖器起源の過形成や悪性疾患の治療に有用である。さらに、腎臓や膀胱などの過形成や悪性疾患は本発明のＮＭＰポリヌクレオチドを用いて治療することが可能である。基本的に、ＮＭＰの発現と病因論的な結びつきをもついかなる疾患も、ＮＭＰ発現を変調する本発明の薬剤によって治療を行うことが考慮されよう。“ 変調する”という用語は、ＮＭＰが不適切に発現しているときのＮＭＰ発現の抑制、または、過少に発現しているときのＮＭＰ発現の増強、または発現したＮＭＰがこのポリペプチドの変異型である場合のＮＭＰの発現の増強を期待したものである。細胞増殖性疾患がＮＭＰ発現と関係しているとき（たとえばＢＰＣ−１，２，３およびＰＣ−１）、アンチセンスＮＭＰポリヌクレオチド配列またはＮＭＰ結合抗体を細胞内に導入することができる。あるいは、細胞増殖性疾患が過少発現または変異ＮＭＰポリペプチド（たとえば、ＮＰＢ１−７およびＮＰ−１ −３）の発現と関係がある場合には、センスＮＭＰポリヌクレオチド配列（ＤＮＡコード配列）またはＮＭＰポリペプチドを細胞内に導入することができる。本発明は、ＮＭＰを発現しているかまたはＮＭＰ関連疾患をもつ細胞成分を該成分と結合する試薬と接触させることを含む、被検者におけるＮＭＰ発現細胞またはＮＭＰ関連の細胞増殖性疾患を検出する方法を提供する。その細胞成分はＤＮＡまたはＲＮＡのような核酸、またはタンパク質でありうる。成分が核酸である場合には、試薬は核酸プローブまたはＰＣＲプライマーである。細胞成分がタンパク質の場合には、試薬は抗体プローブである。プローブはたとえば放射性同位元素、蛍光化合物、生物発光化合物、化学発光化合物、金属キレート剤、または酵素などによって直接的または間接的に標識されたものである。当業者は、プローブに結合せるための他の適当な標識を考えることができるであろうし、また通常の実験によってそれを確かめることができるであろう。本発明の目的のためには、ＮＭＰに対して特異的な抗体または核酸プローブは、生物学的液体または組織中のＮＭＰポリペプチド（抗体を用いて）またはポリヌクレオチド（核酸プローブを用いて）の存在を検出するために用いることができる。ＮＭＰ配列中のどのコード配列領域に基づくオリゴヌクレオチドプライマーも、たとえばＰＣＲによるＤＮＡの増幅に有用である。検出可能な量の抗原を含めば、どのような標品も使用可能である。本発明の望ましい標本、とくに前立腺癌の検出に望ましい標本は、尿生殖器由来、とくに前立腺の組織である。あるいは、精液または尿など、ＮＭＰ関連細胞増殖性疾患の徴候を示す細胞を含むかもしれない生物学的液体を用いることができる。望ましい被検体はヒトである。より高い感度が得られる他の技術は、プローブを低分子量のハプテンに結合させることから成るであろう。これらのハプテンは、二次反応の手段によって特異的に検出されうる。たとえば、アビジンと反応するビオチン、または特異的な抗ハプテン抗体と反応することができるジニトロフェノール、ピリドキサールおよびフルオレセインなどのハプテンを用いるのが一般的である。さきに述べた本発明の特定のＮＭＰを発現する細胞またはＮＭＰ関連の細胞増殖性疾患を検出するための方法は、臨床的に軽快した状態にある被検者における残存する前立腺癌または他の悪性疾患、または良性の過形成状態の検出のために用いることができる。さらに、細胞におけるＮＭＰポリペプチドの検出方法は、特定のＮＭＰを発現している細胞を、正常細胞で発現しているＮＭＰと比較して固定することを通じて、細胞増殖性疾患を検出するために有用である。本発明の方法を用いて、細胞におけるＮＭＰの発現が同定され、適切な治療計画をたてることが可能である（たとえば、センスまたはアンチセンス遺伝子治療、および通常の化学療法）。本発明のＮＭＰの発現パターンは細胞の悪性度の段階によって変化するので、前立腺組織などの標本は、ＮＭＰの発現を検出し、細胞の悪性度の段階を診断するために、一連のＮＭＰ特異的試薬（たとえば、核酸プローブまたはＮＭＰに対する抗体）によってスクリーンできる。本発明のモノクローナル抗体は、たとえば、液相でまたは固相担体に結合した状態で利用される、イムノアッセイへの使用に適している。さらに、これらのイムノアッセイにおけるモノクローナル抗体は、さまざまな方法で検出可能に標識しうる。本発明のモノクローナル抗体を用いることができるイムノアッセイのタイプの例は、直接または間接的フォーマットの拮抗的（競合的）または非拮抗的（競合的）イムノアッセイである。そのようなイムノアッセイの例にはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）およびサンドイッチ（イムノメトリック）アッセイがある。本発明のモノクローナル抗体を用いた抗原の検出は、生理学的な標本上の免疫組織化学アッセイを含め、前進（forward）、逆行（reverse）、同時のモードのいずれかで実施されるイムノアッセイを用いて行うことができる。あるいは、本発明の抗体は、ウェスタンブロットや二次元ゲルなどの電気泳動的に分散されるゲルプロトコールでＮＭＰを検出するために用いることができる。本分野の専門家は不必要な実験を経ずに、他のイムノアッセイ法があることがわかるし、また容易に確認できるだろう。本発明のモノクローナル抗体は、さまざまな異なる担体に結合でき、ＮＭＰの存在を検出するのに用いられる。よく知られた担体の例は、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然および改質セルロース、ポリアクリルアミド、アガロースおよびマグネタイトである。担体の性質は、本発明の目的に応じて可溶、不溶のどちらでもありうるだろう。当業者はモノクローナル抗体を結合させるための他の適当な担体を考えることができるであろうし、その点は通常の実験を通して確かめることができるであろう。アッセイを行うにあたって、インキュベーション液中に、ある種の“ブロッカー”を含ませることが望まれるかもしれない（通常、標識された可溶性抗体とともに加えられる）。“ブロッカー”は、実験標本中に存在する抗ＮＭＰ免疫グロブリンに対する、非特異的なタンパク質、プロテアーゼまたは抗ヘテロ親和性免疫グロブリンなどが固相支持体の上の抗体または放射性標識した指示抗体を架橋または破壊することによって、誤った陽性または負の結果を生じることがないのを確実にするために加える。したがって“ブロッカー”の選択は本発明で述べられたアッセイの特異性に大きな影響を与える。アッセイに用いられるものと同一のクラスまたはサブクラス（アイソタイプ）の無関係（すなわち非特異的）な抗体（たとえばＩｇＧ１，ＩｇＧ２ａ，ＩｇＭ等）が“ブロッカー”として用いられうる。適当な感度を保ちつつ、なお標本中に存在する交差反応性のタンパク質による望ましくない干渉を防止するためには、“ブロッカー” の濃度（ふつう１−100μg／μl）が重要である。本発明で用いられている用語“エピトープ”は、本発明のモノクローナル抗体と特異的な相互作用を行いうるあらゆる決定基を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖のような、分子の化学的に活性な表面グループより成り、通常、三次元構造的特徴および特定の荷電特徴をもっている。本発明のモノクローナル抗体を、抗原のin vivo検出に使用するにあたっては、検出可能に標識されたモノクローナル抗体が、診断的に有効な量で与えられる。“診断的に有効な”とは、検出可能に標識された抗体が、モノクローナル抗体が特異的に結合するＮＭＰ抗原をもつ部位の検出を可能にするのに十分な量で投与されることである。投与される、検出可能に標識されたモノクローナル抗体の濃度は、ＮＭＰをもつ細胞への結合がバックグラウンドに対して検出可能であるような十分量でなければならない。さらに、最良の標的対バックグラウンドのシグナル比を得るためには、検出可能に標識された抗体は循環系から速やかに除去されることが望ましい。原則的には、in vivo診断のための、検出可能に標識されたモノクローナル抗体の投与量は、被検者の年令、性別、疾患の程度により変わるであろう。モノクローナル抗体の投与量は約0.00lmg／m²から約500mg／m²の範囲であり、望ましいのは0.1mg／m²から約200mg／m²、最も望ましいのは約0.1mg／m²から約10mg／m² である。そのような投与量は、たとえば注射を複数回行うか、腫瘍の重症度および当業者に知られている他の要因によって変化しうる。 in vivo診断造影を得るためには、与えられた放射性同位元素の選択にあたって、使用できる検出機器のタイプが主な要因となる。選ばれる放射性同位元素は、与えられた機器のタイプによって検出可能な崩壊のタイプをもたなければならない。in vivo診断のための放射性同位元素を選ぶための他の重要な要素は、放射性同位元素の半減期が、標的によって最大にとり込まれた時点でもなお検出できるに十分なだけ長く、宿主への有害な照射が最小となるのに十分なだけ短いようにすることである。理想的には、in vivo造影に用いられる放射性同位元素は粒子の放出がなく、しかし通常のガンマカメラで容易に検出されるような、140 〜250keVの領域で大量の光子を生じるものである。 in vivo診断のためには、放射性同位元素は中間的官能基を用いて直接または間接に免疫グロブリンに結合させることができる。免疫グロブリンに金属イオンとして存在する、放射性同位元素を結合するために用いられることの多い中間的官能基はジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）およびエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）および類似の分子などの二官能性キレート剤である。本発明のモノクローナル抗体に結合することのできる典型的な金属イオンとしては、¹¹¹Ｉｎ，⁹⁷Ｒｕ，⁶⁷Ｇａ，⁶⁸Ｇａ，⁷²Ａｓ，⁸⁹Ｚｒおよび²⁰¹Ｔｌがある。本発明のモノクローナル抗体は、磁気共鳴造影（ＭＲＩ）または電子スピン共鳴（ＥＳＲ）におけるように、in vivo診断の目的のために常磁性同位体で標識することができる。一般的に診断的造影を視覚化するための通常の方法は何であっても用いることができる。ふつう、ガンマ線およびポジトロン放出放射性同位元素がカメラ造影用に、常磁性同位元素がＭＲＩのために使われる。それらの技術にとくに有用な元素には¹⁵⁷Ｇｄ，⁵⁵Ｍｎ，¹⁶²Ｄｙ，⁵²Ｃｒおよび⁵⁶Ｆｅが含まれる。本発明のモノクローナル抗体は、ＮＭＰ関連細胞増殖性疾患の回復の過程をモニターすることに用いられうる。したがって、ＮＭＰを発現する細胞数の増減または精液や尿などのさまざまな体液中に存在するＮＭＰの変動を測定することによって、疾患の改善を狙った特定の治療法が有効であるかどうかを決定することが可能であろう。本発明のモノクローナル抗体はまた単独で、あるいはエフェクター細胞との組合わせで（Douillardら，Hybridoma，５ Supp．l：S 139，1986）、本発明のモノクローナル抗体B反応性のあるエピトープをもったＮＭＰポリペプチドを発現する細胞増殖性疾患を有する動物における免疫療法に用いることができる。免疫療法に用いる場合、本発明のモノクローナル抗体は治療薬で標識されることもされないこともあろう。これらの薬剤は本発明のモノクローナル抗体に直接または間接的に結合させることができる。間接的な結合の一つの例はスペーサー成分（moiety）を用いることである。これらのスペーサー成分（moiety）は不溶性または可溶性（Dienerら，Science,231：148，1986）のどちらでもよく、また標的部位でモノクローナル抗体分子からの薬剤の放出を可能にするよう選択されうる。免疫療法のための本発明のモノクローナル抗体に結合させることのできる治療薬の例は、薬物、放射性同位元素、レクチン、毒素などである。本発明のモノクローナル抗体に結合させうる薬物はタンパク質性および非タンパク質性の薬物を含む。“非タンパク質性薬物”という用語はたとえばマイトマイシンＣ、ダウノルビシンおよびビンブラスチンなどの古典的に薬物と呼ばれている化合物を含む。本発明のモノクローナル抗体の標識に用いることのできるタンパク質性の薬物は、免疫調節因子（immunomodulator）およびその他の生体応答改変剤（modifie r）を含む。“生体応答改変剤”という用語は、本発明のモノクローナル抗体が特異性を示すＮＭＰ関連腫瘍の破壊を促進するように免疫応答を改変することに関与する物質を含む。免疫応答改変剤の例は、リンホカインのような化合物を含む。リンホカインは腫瘍壊死因子、インターロイキン、リンホトキシン、マクロファージ活性化因子、遊走阻止因子、コロニー刺激因子、およびインターフェロンなどを含む。本発明のモノクローナル抗体を標識することのできるインターフェロンは、αインターフェロン、βインターフェロンおよびγインターフェロンおよびこれらのサブタイプを含む。免疫療法のための、本発明の放射性同位元素を結合したモノクローナル抗体の使用にあたっては、腫瘍細胞の分布および同位元素の安定性と放射などの要因によって、ある種のアイソタイプが他のアイソタイプよりも望ましいということがある。必要があれば、腫瘍細胞の分布は上に述べたin vivoの診断技術によって評価されうる。細胞増殖性疾患によっては、ある放射性物質がほかの放射性物質より好まれることがある。一般的に、アルファおよびベータ粒子を放出する放射性同位元素が免疫療法には好まれる。たとえば、動物が固形の腫瘍病巣をもつ場合には、⁹⁰Ｙなど、数ミリメートルの組織を貫通できる高エネルギーのベータ放射性物質が望ましい。これに反して、細胞増殖性疾患が白血病の場合のような単純な標的細胞から成る場合も、²¹²Ｂｉなどの短距離の高エネルギーアルファ放射性物質が望ましい。治療を目的として本発明のモノクローナル抗体に結合させることのできる放射性同位元素の例は、¹²⁵Ｉ，¹³¹Ｉ，⁹⁰Ｙ，⁶⁷Ｃｕ，²¹²Ｂｉ，²¹¹Ａｔ，²¹²Ｐｂ，⁴⁷Ｓｃ，¹⁰⁹Ｐｄ，⁶⁵Ｚｎおよび¹⁸⁸Ｒｅである。レクチンは通常植物材料から単離され、特定の糖成分に結合するタンパク質である。多くのレクチンはまた細胞を凝集させ白血球を刺激する能力をもつ。しかし、リシンは免疫療法に用いられてきた毒性のレクチンである。これは毒性の起源であるリシンのαペプチド鎖を抗体分子に結合し、毒性効果の部位特異的デリバリーを可能にすることを通じて達成される。毒素は十分量では致死的な効果をもつことが多い、植物、動物、または微生物によって生産される有毒の物質である。ジフテリア毒素はCorynebacterium diph theriaによって生産される物質であり、治療目的に使うことができる。この毒素は適当な条件下では分離できるαおよびβサブユニットからできている。毒素Ａ成分は抗体に結合させることができ、ＮＭＰ保有細胞への部位特異的デリバリーに用いられる。本発明のモノクローナル抗体と結合させうる他の因子は、当業者には知られているかまたは容易に確かめられるであろう。本発明の標識または未標識モノクローナル抗体は、上記のような治療剤と組み合わせて使用することもできる。特に好ましいのは、本発明のモノクローナル抗体、免疫調節剤、および他の生物学的応答変更剤（modifier）からなる治療剤の組み合わせである。このように、本発明のモノクローナル抗体は例えばアルファーインターフェロンと組み合わせて使用することができる。この治療様式は、癌細胞によるモノクローナル抗体反応性抗原の発現を増大させることにより、モノクローナル抗体の癌に対する標的設定を強化する（Greinerら、Science，235：895，1987）。あるいは、本発明のモノクローナル抗体は例えばガンマ−インターフェロンと組み合わせて使用できる。この場合エフェクター細胞によるＦｃ受容体の発現が活性化および増大され、その結果モノクローナル抗体のエフェクター細胞との結合を増進し、標的腫瘍細胞を殺す。当業者は種々の生物学的応答変更剤を選択し、本発明のモノクローナル抗体の効力を強化する所望のエフェクター機能を創造できる。本発明のモノクローナル抗体をここに記述するような種々の治療剤と組み合わせて用いる場合には、モノクローナル抗体および治療剤は通常実質的に同時期に投与される。「実質的に同時期に」という表現は、モノクローナル抗体および治療剤が時間的にかなり接近して投与されることを意味する。通常、治療剤をモノクローナル抗体より先に投与することが好ましい。例えば、治療剤をモノクローナル抗体の１〜６日前に投与することができる。治療剤の投与は、例えば腫瘍の性質、患者の状態、および治療剤の半減期等の因子により、毎日行なうことも可能であるし、または他の任意の間隔で行なうこともできる。本発明のモノクローナル抗体を使用して、本明細書に記述されているすべての特徴を結合した治療法を設計することができる。例えば、ある与えられた状況においては、本発明のモノクローナル抗体をエフェクター細胞および同じまたは異なる治療剤と組み合わせて投与する前に、１つまたは複数の治療剤を投与することが望ましいであろう。例えば、前立腺、腎臓または膀胱癌の患者にまずガンマ −インターフェロンおよびインターロイキン−２を３〜５日間毎日投与し、５日目に本発明のモノクローナル抗体をエフェクター細胞ならびにガンマ−インターフェロンおよびインターロイキン−２と組み合わせて投与することが望ましいであろう。また、本発明のモノクローナル抗体と共にリポソーム類を抗体の膜として使用し、ＮＭＰを発現している腫瘍にリポソームを特異的に送達させることも可能である。これらのリポソーム類は、モノクローナル抗体のほかに腫瘍部位に到達して放出される前記のような免疫治療剤を含有するように作成することができる（ Wolffら、Biophysical Acta，802：259，1984）。本発明のモノクローナル抗体の投与量範囲は、悪性疾患の症状を改善する所望の効果を奏するに十分なだけ大きい投与量範囲である。投与量は、望ましくない交差反応、アナフィラキシー反応等の副作用を生じるほど大きくてはならない。一般的に、投与量は患者の年齢、状態、性別、病気の程度によって変わり、当業者によって決定されうる。投与量は合併症の場合、各医師によって調整可能である。投与量は約0.1mg/kgから約2000mg/kgの間であり、好ましくは約0.1mg/kgから約500mg/kgであり、１日または数日間、１日に１回または複数回投与される。一般に本発明のモノクローナル抗体を治療剤と組み合わせて投与する場合は、in vivo診断イメージングに使用される用量に匹敵するより低い用量が使用できる。本発明のモノクローナル抗体は、注射または時間をかけた緩慢な灌流により非経口的に投与することができる。本発明のモノクローナル抗体は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、体腔内に、または経皮的に、単独でまたはエフェクター細胞と組み合わせて投与することができる。本発明はまた、ＮＭＰ関連細胞増殖性疾患の患者をＮＭＰヌクレオチド配列を用いて治療する方法を提供する。サプレッサーポリペプチドをコードする可能性のあるＮＭＰヌクレオチド配列は、正常細胞における発現に較べて少なく発現される可能性がある。それゆえ、この配列に向けられた適切な治療または診断技法を設計することが可能である。したがって、細胞増殖性疾患が悪性疾患に関連したＮＭＰの発現を伴う場合は、翻訳レベルでＮＭＰ発現を妨害する核酸配列が使用できる。この方法は、例えばアンチセンス核酸およびリボザイムを利用して、特定のＮＭＰｍＲＮＡをアンチセンス核酸でマスクするか、またはそれをリボザイムで開裂することにより、特定ＮＭＰｍＲＮＡの翻訳を阻止する。細胞増殖性疾患または異常細胞表現型が例えばＮＭＰサプレッサーの過少発現を伴う場合は、障害を有する患者にＮＭＰをコードする核酸配列（センス）を投与することができるであろう。アンチセンス核酸とは、特定のｍＲＮＡ分子の少なくとも一部に対して相補的なＤＮＡまたはＲＮＡ分子である（Weintraub，Scientific Amer ican，262：40，1990）。細胞内でアンチセンス核酸は対応するｍＲＮＡとハイブリダイズし、２本鎖分子を形成する。細胞は２本鎖をなすｍＲＮＡを翻訳しないので、アンチセンス核酸はｍＲＮＡの翻訳を妨害する。約１５個のヌクレオチドからなるアンチセンスオリゴマーが好ましい。なぜなら、それらは容易に合成され、また標的のＮＭＰ産生細胞に導入した時に大きい細胞よりも問題を起こすことが少ないからである。遺伝子のin vitro翻訳を阻止するためにアンチセンス法を用いることは当分野では周知である（Marcus-Sakura，Anal.Biochem.，172 ：289，1988）。リボザイムとは自分以外の１本鎖ＲＮＡをＤＮＡ制限エンドヌクレアーゼと類似の方法で特異的に開裂する能力を有するＲＮＡ分子である。これらのＲＮＡをコードするヌクレオチド配列の修飾によって、ＲＮＡ分子中の特異的ヌクレオチド配列を認識し、そのＲＮＡ分子を開裂する分子を工学的に作成することが可能である（Cech，J.Amer.Med.Assn.，260：3030，1988）。この方法の主要な利点は、それらの分子が配列特異的であるため、特定の配列を有するｍＲＮＡのみが不活性化されることである。リボザイムには２つの基本的な型がある。すなわち、テトラヒメナ（tetrahyn eba）型（Hasselhoff，Nature，334：585，1988）および「ハンマーヘッド」型である。テトラヒメナ型リボザイムは長さが４塩基の配列を認識し、ハンマーヘッド型リボザイムは長さが１１〜１８塩基の塩基配列を認識する。認識配列が長いほど、その配列が標的ｍＲＮＡ種においてのみ起こる可能性が大きい。したがって、特異的ｍＲＮＡ種を不活性化するためにはテトラヒメナ型リボザイムよりハンマーヘッド型リボザイムが好ましく、１８塩基からなる認識配列はより短い認識配列より好ましい。本発明はまた、ＮＭＰによって仲介される細胞増殖性疾患を治療するための遺伝子治療法を提供する。このような治療は、適切なＮＭＰポリヌクレオチド（アンチセンスまたはセンス）を増殖性疾患を有する患者の細胞に導入することによってその治療的効果を達成するであろう。アンチセンスＮＭＰポリヌクレオチドの送達は、キメラウイルス等の組換え発現ベクターまたはコロイド分散系を用いることにより達成できる。ＮＭＰの過少発現または癌を伴うＮＭＰの発現を伴う疾患は、それぞれセンスまたはアンチセンス核酸配列を用いる遺伝子治療法によって治療することができるであろう。本明細書に教示する遺伝子治療に使用できる種々のウイルスベクターには、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルスまたは、好ましくはレトロウイルスのようなＲＮＡウイルスが含まれる。好ましくは、そのレトロウイルスベクターは、マウスまたはトリのレトロウイルスの誘導体である。単一の外来遺伝子を挿入することのできるレトロウイルスベクターの例として以下のものが挙げられるが、それらだけに限定されない。すなわち、モロニーマウス白血病ウイルス（MoMuLV）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（HaMuSV）、マウス乳腺癌ウイルス（MuMTV）およびラウス肉腫ウイルス（RSV）である。多くの追加のレトロウイルスベクターは、多重遺伝子を導入できる。これらのベクターはすべて、選択マーカー用の遺伝子を移動又は導入できるので、導入細胞が同定され、生成される。興味のあるＮＭＰ配列を、例えば特定の標的細胞上の受容体に対するリガンドをコードする別な遺伝子と共にウイルスベクターに挿入することにより、そのベクターは標的特異的となる。例えば糖、糖脂質、またはタンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入することによって、レトロウイルスベクターを標的特異的とすることができる。好ましい標的設定は、レトロウイルスベクターを標的とする抗体を用いることにより達成される。当業者は、レトロウイルスゲノム中に挿入されＮＭＰセンスまたはアンチセンスポリヌクレオチドを含有するレトロウイルスベクターの標的特異的送達を可能とする特異的ポリヌクレオド配列を知り、また過度の実験を行なうことなく容易に確かめることができるであろう。組換えレトロウイルスは不完全なものなので、感染性のベクター粒子を産生するためには助けを必要とする。この助けは、例えばＬＴＲ内の調節配列の制御下にあるレトロウイルスの構造遺伝子の全てをコードするプラスミドを含有するヘルパー細胞系を使用することにより得られる。これらのプラスミドは、パッケージング機構が包み込み（encapsidation）のためのＲＮＡ転写物の認識を可能とするヌクレオチド配列を欠く。パッケージングシグナルを欠失したヘルパー細胞系には、例えばΨ２、ＰＡ３１７およびＰＡ１２が含まれるが、これらだけに限定されない。これらの細胞系は、ゲノムが全くパッケージされないので中空ウイルス粒子を産生する。パッケージングシグナルは無傷だが構造遺伝子が他の興味のある遺伝子に置き換えられている細胞にレトロウイルスベクターが導入されると、ベクターはパッケージされ、ベクターウイルス粒子が産生される。または、通常のリン酸カルシウムトランスフェクションにより、ＮＩＨ３Ｔ３もしくは他の組織培養細胞に、レトロウイルス構造遺伝子gag，polおよびenv をコードするプラスミドを直接トランスフェクトさせることも可能である。次に、これらの細胞に興味のある遺伝子を含有するベクタープラスミドをトランスフェクトさせる。得られた細胞はレトロウイルスベクターを培地に放出する。ＮＭＰアンチセンスポリヌクレオチドのためのもう１つの標的設定された送達系はコロイド拡散系である。コロイド拡散系には、巨大分子複合体、微小カプセル、微小球体、ビーズ、および水中油滴エマルジョン、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質に基づく系が含まれる。本発明における好ましいコロイド系はリポソームである。リポソームはin vitroおよびin vivoの送達手段として有用な人工膜小胞である。１枚の薄層からなるサイズが０．２〜４．０μｍの大きい小胞（ＬＵＶ）は、大きい巨大分子を含有する水性緩衝液の相当な部分を包み込むことが可能であることが判明している。ＲＮＡ、ＤＮＡおよび無傷のウイルス粒子を水性の内部に包み込み、生物学的に活性な形態で細胞に送ることが可能である（Fraleyら、Trends Biochem．Sci.，6：77，1981）。哺乳動物細胞に加え、リポソームは植物、酵母、および細菌細胞におけるポリヌクレオチドの送達に使用されてきた。リポソームが有効な遺伝子輸送手段であるためには、以下の特徴が存在しなければならない。すなわち、（１）高い効率での、また生物学的活性を損なうことのない、興味のある遺伝子の包み込み；（２）非標的細胞と比較して、標的細胞と優先的かつ実質的な結合；（３）小胞の水性内容物の標的細胞細胞質への高効率での送達；および（４）遺伝子情報の正確かつ効果的な発現（Manninoら、Biotechniques，6：682，1988）。リポソームの組成は普通リン脂質、特に高相転移温度リン脂質と通常はステロイド、特にコレステロールとの組み合わせである。他のリン脂質または他の脂質もまた使用できる。リポソームの物理的特徴は、ｐＨ、イオン強度、および二価のカチオンの存在に依存する。リポソーム作成に有用な脂質の例には、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン等のホスファチジル化合物、スフィンゴ脂質、セレブロシド、およびガングリオシドが含まれる。特に有用なのは脂質部分が１４〜１８個、特に１６〜１８個の炭素原子を含有し、飽和しているジアシルホスファチジルグリセロールである。例示的なリン脂質には、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、およびジステアロイルホスファチジルコリンが含まれる。リポソームの標的設定は解剖学的および機械学的因子に基づいて分類されている。解剖学的分類は、例えば臓器特異的、細胞特異的、および細胞小器官特異的等の選択性のレベルに基づくものである。機械学的標的設定は、それが受動的か能動的かに基づいて区別できる。受動的標的設定は洞様毛細血管を含有する臓器における網内細胞系（ＲＥＳ）の細胞に分布するリポソーム生来の傾向を利用する。他方、能動的標的設定は、自然に存在するリポソームの局在部位とは異なる臓器および細胞型への目標付けを達成するため、リポソームをモノクローナル抗体、糖、糖脂質、またはタンパク質等の特異的リガンドと結合させることによる、またはリポソームの組成もしくは大きさを変えることによるリポソームの変更を含む。標的設定された送達系の表面を種々の方法で修飾することが可能である。リポソームからなる標的設定された送達系の場合は、標的設定リガンドをリポソームの二重膜と安定した結合状態で維持するため、脂質基をリポソームの脂質二重膜に組み込むことができる。脂質鎖を標的設定リガンドと結合するために、種々の結合基が使用できる。一般的に、標的設定された送達系の表面に結合される化合物は、標的設定された送達系が所望の細胞を発見し、そこに向かって進むことを可能とするようなリガンドおよび受容体であろう。リガンドは別の化合物（例えば受容体）と結合する、興味のある任意の化合物であってよい。一般的に、特異的エフェクター分子と結合する表面膜タンパク質は受容体と称される。本発明においては、本発明の抗体は好ましい受容体である。リポソームを特異的細胞表面リガンド（この場合、選択されたＮＭＰ）に向かわせるために、抗体を使用することができる。好ましくは標的組織は尿生殖器で、特に前立腺組織である。腎臓および膀胱組織もまた使用できる。ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体をリポソーム二重膜に共有結合させるためには多数の方法が使用できる。抗体によって標的設定されたリポソームは、モノクローナルもしくはポリクローナル抗体、または標的細胞上の抗原性エピトープに効率よく結合しさえすればそれらの断片、例えばＦａｂまたはＦ（ａｂ’）₂等を含むことができる。非経口投与のための調製物には、滅菌水性または非水性溶液、懸濁液およびエマルジョンが含まれる。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイル等の植物油、およびオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが挙げられる。水性担体には、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液が含まれ、さらに生理食塩水及び緩衝化媒体が含まれる。非経口的ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンガーブドウ糖、ブドウ糖および塩化ナトリウムが含まれる。乳酸加リンガー静注ビヒクルは、流体および養分補充物、電解質補充物（例えばリンガーブドウ糖に基づくもの）等を含む。防腐剤及び他の添加物、例えば抗菌剤、酸化防止剤、キレート化剤、不活性ガス、等も存在してよい。本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドまたはモノクローナル抗体を含有する薬剤または医薬組成物の調製方法に関し、該薬剤はＮＭＰ関連細胞増殖性疾患の治療に使用されるものである。本発明のＮＭＰは、細胞のＮＭＰに影響を及ぼす組成物をスクリーニングする道具として有用である。したがって本発明は別の態様において、試験すべき組成物および細胞（または細胞懸濁液）を含む成分をそれらの成分の相互作用を可能とするのに十分な条件下でインキュベートし、次に該組成物のＮＭＰへの効果を測定することを含む、ＮＭＰに影響を及ぼす組成物を同定する方法を提供する。ＮＭＰに対する観察される効果は、阻害的または刺激的でありうる。例えば、前立腺の悪性疾患細胞において、ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＰＢＣ− ３またはＰＣ−１発現に対して阻害的な組成物は、その組成物で処理する前と後に、細胞または細胞抽出物におけるＮＭＰレベルを測定することにより同定することができる。または、ＮＰ−１、ＮＰ−２またはＮＰ−３のレベルをモニターして、正常細胞に見いだされるこれらＮＭＰの発現を刺激する組成物を同定することも可能である。本発明のアッセイに使用される材料は、キットの作成に理想的に適合している。このようなキットは、バイアル、試験管、等の１個以上の容器手段を厳重収納するために小区画に分けられたキャリアー手段を包含することができ、各容器手段は上記の方法で使用される個々のエレメントのうち１つを包含する。例えば、容器手段の１つは検出可能に標識された、または標識可能なプローブを包含することができる。このようなプローブは、標的タンパク質または標的核酸に対してそれぞれ特異的な抗体またはヌクレオチドでありうる。ここでその標的は本発明のＮＭＰの存在を示すか、またはその存在と相互関係を有する。標的核酸を検出するのにキットが核酸ハイブリダイゼーションを使用する場合は、キットは標的核酸配列を増幅するためのヌクレオチドを含有する容器、および／または例えばビオチン結合タンパク質、例えばレポーター分子に結合したアビジンまたはストレプトアビジン、酵素、蛍光または放射核種標識、等のレポーター手段を包含する容器をも持つことができる。以下に記述する実施例は本発明を説明するためのものであり、本発明を制限するものではない。このような実施例は、使用されるであろう方法の典型的なものであるが、当業者に公知の他の方法を代わりに使用することもできる。実施例１核マトリックスタンパク質の同定および精製患者。臨床的に限局性の（Ｂ段階、Ｔ２）前立腺癌（Ｎ＝１９）〔グリーソン（Gleason）等級５〜９〕のため恥骨後方前立腺完全切除を受ける、または良性前立腺過形成（ＢＰＨ，Ｎ＝２）のため開放（open）前立腺切除を受ける２１名の男性患者由来の新鮮な前立腺組織を検査した。組織調製物。外科的摘出から１５分以内に新鮮な組織を得た。１４個の標本由来の顕著な腫瘍小結節１個から約１グラムの総腫瘍を取った。１グラムの正常な前立腺組織を、１３個の標本における腫瘍小結節に対側性の前立腺葉から得た。１グラムのＢＰＨ組織を、１２個の標本における対側性葉の尿道周囲領域より得、２個の開放（open）前立腺切除標本のそれぞれから２５〜３０グラムのＢＰＨ組織を得た。除去されたすべての組織は、ヘマトキシリンおよびエオシン切片を用いて、切片の近位および遠位両末端について組織学的に確認した。核マトリックスタンパク質の精製。FeyおよびPenmanの方法（Proc．Natl．Aca d．Sci．USA，85：121-125，1988）にしたがって、核マトリックスタンパク質を単離した。要約すると、新鮮なヒト前立腺組織を小片（１mm³）に刻み、テフロン製乳棒を用いて氷上で２mMバナジルリボヌクレオシド（RNAase阻害剤）および１mMフッ化フェニルメチルスルホニル（セリンプロテアーゼ阻害剤）を含有する溶液に溶解した0.5 ％Triton X-100とホモジナイズし、脂質および可溶性タンパク質を放出させた。次に、抽出物を350ミクロンのナイロンメッシュで濾過し、0.25Ｍ硫酸アンモニウムを用いて抽出し、可溶性の細胞骨格エレメントを放出させた。可溶性クロマチンを除去するため、25℃でDNases処理を行なった。残存画分は中間フィラメントおよび核マトリックスタンパク質を含有していた。次にこの画分を８M尿素を用いて分解し、不溶性成分（主として炭水化物および細胞外マトリックス成分からなる）をペレット化した。上記の尿素を透析により除去し、中間フィラメントを再度集合させ、遠心により除去した。次に核マトリックスタンパク質をエタノール沈降させた。Comassie^TMPlusタンパク質アッセイ試薬キット（Pierce，Rock ford，IL）を用いて、タンパク質濃度を測定した。ゲル電気泳動の準備のため、核マトリックスタンパク質を９Ｍ尿素、65mM ３-［（３-コラミドプロピル）ジメチルアミノ）-１-プロパノスルホネート、2.2％両性電解質、および140mMジチオトレイトルからなるサンプル緩衝液に再度溶解した。二次元電気泳動。Investigator 2-Dゲルシステム（Milligan/Biosearch，Bedf ord，MA）を用いて高分解能二次元ゲル電気泳動を実施した（Patton，W.F.ら、B ioTechniques，8：518-527，1990）。1.5時間の前電気泳動（prefocusing）の後で、１nmｘ18onのチューブゲル（tube gel）を用いて、18,000 V-hで一次元等電点電気泳動を実施した。チューブゲルを押し出し、１-mmのあらかじめ流しておいた10％Tris-酢酸ドデシル硫酸ナトリウムDuracryl^TM（Millipore ，Co.，Bedford，MA）高引張り強度（HTS）ポリアクリルアミド電気泳動スラブゲルの上に載せ、12℃の一定温度に制御してゲルを約５時間電気泳動にかけた。 50％メタノールおよび10％酢酸でゲルを固定した。充分に洗浄して再度脱水したのち、50mMリン酸（pH 7.2）で緩衝化してからゲルを5％グルタルアルデヒドおよび５mMジチオトレイトルで処理した。Wrayの方法（Wray，W．ら、Anal．Bioch em，118：197-203，1981）を用いて、ゲルを銀染色した（Accurate Chemical Co .，Inc.，Westbury，NY）。50マイクログラムの核マトリックスタンパク質を各ゲルに負荷した。タンパク質分子量標準は、GELCODE（Dacheng，H.ら、J．Cell Biol.，110：569-580，1990）、タンパク質分子量マーケットキット（MW 12,400 〜97,400）（Pierce，Rockford，IL）を用いて測定した。等電点は、カルバミル化クレアチンキナーゼ標準品［pH7.0〜4.950，（BDH Limited，England）］を用いて測定した。核マトリックスタンパク質の組織間における変異を決定する際は、種々の組織由来のすべてのサンプルにおいて明確に、かつ再現性をもって観察された、または存在しなかったタンパク質スポットのみを考慮した。患者間の核マトリックスタンパク質パターンには、１５０個のタンパク質スポットのうちどの患者にも一貫して見られる約１２０個について、顕著な類似性が見られた。正常、前立腺ＢＰＨ、および前立腺癌を比較したときに一貫して存在する、または不在の１４個の核マトリックスタンパク質が同定された。分子量が５６ＫｄでｐＩ＝６．５８のタンパク質（ＰＣ−１）は、検査したすべて（１４／１４）のヒト前立腺癌標本に現れたが、正常な前立腺組織（０／１３）またはＢＰＨ組織（０／１４）においては全く検出されなかった核マトリックスタンパク質を表した。図１は正常なヒト前立腺（Ａ）、良性前立腺過形成（Ｂ）および前立腺癌（Ｃ）の核マトリックスタンパク質組成を示す。ほとんどの核マトリックス調製物に存在することが知られている４つのタンパク質、すなわちラミンＡ、ラミンＢ、ラミンＣおよびアクチンが以前に報告された分子量および等電点に基づいて同定され（Fey，E.G.ら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA，85：121-125，1988）、図１ＡにそれぞれＬＡ、ＬＢ、ＬＣおよびＡと明示された。図１は、正常なヒト前立腺（図１Ａ）、ヒトＢＰＨ（図１Ｂ）およびヒト前立腺癌（図１Ｃ）より単離された核マトリックスタンパク質の典型的な高分解能二次元ゲル電気泳動パターンを示す。正常な前立腺、ＢＰＨおよび前立腺癌（全標本を検査）の間で異なるゲルスポットを矢印でマークし、表１で用いられている名称と対応するレッテルを付けて同定した。表１は、２１名の患者からなる群の正常な前立腺、ＢＰＨおよび前立腺癌組織由来の核マトリックスタンパク質を比較したとき、一貫して存在する、または不在であることが判明した１４個の異なるタンパク質スポットの分子量および等電点を示す。図２は、種々の組織間で異なったタンパク質スポットの位置を要約し、またＢＰＨおよび前立腺癌における特異的核マトリックスタンパク質を示す。正常な前立腺、ＢＰＨおよび前立腺癌の主要な組織特異的核マトリックスタンパク質の大要である。略語：kD −単位1000で表された分子量、SDS-PAGE−ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、pl−等電点、およびBPH-良性前立腺過形成。 BPHにのみ存在し、正常な前立腺および前立腺癌には存在しないというＮＭＰは検出されなかった。同様に、正常な前立腺および前立腺癌の両方に存在するが、BPHには存在しないというＮＭＰはなかった。ＰＣ−１（分子量が５６Ｋｄで等電点が６．５８）は、ヒト前立腺癌組織にのみ見られ、正常な前立腺およびＢＰＨサンプルのすべてに一貫して存在しなかったＮＭＰを表す。追加の試験において、ＰＣ−１は腎臓および膀胱癌の標本に発見されたが、正常な腎臓および膀胱組織には検出されなかった。悪性疾患細胞におけるＮＢＰ−１−７およびＮＰ−１−３の不在は、これらのＮＭＰをコードする遺伝子は癌サプレッサー遺伝子として機能するのかもしれないことを示唆している。このことは、良性過形成組織においても不在であったＮＰ−１−３について特にそう言える。各タンパク質の名称は、図１において同定されたタンパク質に対応している。実施例２正常な前立腺細胞から前立腺癌への進行モデル前立腺疾患発症に必要な正確な分子的および／または環境的現象はほとんど分かっていないが、前立腺癌の発症は多段階過程であることが充分立証されている（Carter，H.B.ら、J．Urol.，143：742-746，1990）。Ashley（Ashley，D.F.B. ，J．Path．Bact.，90：217-225，1965）ならびにArmitageおよびDoll（Armitag e，P.およびDoll，R.，Brit．J．Cancer，8：1-15，1954）の独創的研究に基づく、米国における前立腺癌およびＢＰＨに関する年齢特異的発症率を用いた疫学的研究は、ＢＰＨの発症は２段階過程である可能性が高く、他方、臨床的に明確な前立腺癌の発症は多段階（２現象より多い）過程を包含する可能性が高いことを示している（Carter，H.B.ら、J．Urol.，143：742-746，1990）。正常な前立腺上皮細胞のＢＰＨまたは前立腺癌への進行に関して、２つの異なるモデルを仮定することができる。図３は、正常な前立腺（Normal）から良性前立腺過形成（BPH）への、または前立腺癌（Cancer）への多段階的進行の２つのモデルを示す。モデルＩは類似の現象が両方の経路で起こることを予測する。モデルＩＩは、正常からＢＰＨへ進行する際は、癌へと進行する際とは異なる現象が起こることを予測する。最初のモデル（モデルＩ）は、正常からＢＰＨへ、または正常から前立腺癌へ進行する際の初期の現象は類似している（モデルＩの現象Ａ−Ｂ）と予測する。第２のモデル（モデルＩＩ）は、ＢＰＨおよび癌への進行は異なる現象を経るものであろうと予測する（現象Ａ−Ｂ対現象Ｅ−Ｈ）。核マトリックスタンパク質の存在または不在をこれらのモデルをテストする表現型マーカーとして用いると、特定グループのタンパク質スポットがＢＰＨおよび前立腺癌の両方に不在または存在し（NP 1-3， BPC 1-3）、さらに付加的タンパク質スポットが前立腺癌にのみ存在または不在であれば（NPB1-7またはPC-1）、モデルＩは満たされるであろうと予測される。このように、核マトリックスタンパク質において観察されたすべての相違はモデルＩを満足させた。モデルＩＩを満足させるには、１つまたは複数のタンパク質がＢＰＨにのみ存在または不在である必要があり、これはいかなるサンプルにおいても観察されなかった。したがって、これらのデータはＢＰＨへと進行する細胞の核マトリックス内では前立腺癌へと進行する細胞に起こるのと類似の表現型発現が起こる、とするモデルＩを支持する。その結果、本発明のＮＭＰは前立腺癌のような細胞増殖疾病の正常から良性疾患、良性疾患から悪性疾患への段階と進行をモニターし、検出するのに使用できる。次に、この情報を適切な治療を開始するために使用できる。上記は本発明を説明するためのもので、本発明の範囲を制限するものではない。実際、当業者はここに記述された教示に基づいて、過度の実験を行なうことなく、容易に更なる態様を想像し、作り出すことができよう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｋ 14/435 8517−4ＨＣ０７Ｋ 14/435 14/82 8517−4Ｈ 14/82 Ｃ１２Ｎ 1/21 8828−4ＢＣ１２Ｎ 1/21 5/10 9358−4ＢＣ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 9453−4ＢＣ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 8310−2ＪＧ０１Ｎ 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/53 8310−2Ｊ 33/577 Ｂ 33/577 9281−4ＢＣ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者パーティン，アランダブリューアメリカ合衆国 21236 メリーランド州バルチモア，ヘッジフォードコート７番地 (72)発明者ゲツェンバーグ，ロバートエイチアメリカ合衆国 06405 コネティカット州ブランフォードグリーンズファームロード 244番地

Claims

【特許請求の範囲】１．ＮＰＢ−１、ＮＰＢ−２、ＮＰＢ−３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ−５、ＮＰＢ− ６、ＮＰＢ−７、ＮＰ−１、ＮＰ−２、ＮＰ−３、ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＢＰＣ−３およびＰＣ−１より成る群から選ばれたタンパク質に特有の組織発現パターンを有する、実質的に純粋な核マトリックスタンパク質またはその機能性フラグメント。２．組織が尿生殖器の組織である、請求項１に記載のタンパク質。３．組織が前立腺の組織である、請求項２に記載の尿生殖器組織。４．前記タンパク質が腫瘍細胞と関連づけられる、請求項１に記載のタンパク質。５．前記タンパク質がＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＢＰＣ−３およびＰＣ−１より成る群から選ばれる、請求項４に記載のタンパク質。６．腫瘍細胞が良性である、請求項４に記載の腫瘍細胞。７．腫瘍細胞が悪性である、請求項４に記載の腫瘍細胞。８．前記タンパク質が非悪性細胞と関連づけられる、請求項１に記載のタンパク質。９．前記タンパク質がＮＰＢ−１、ＮＰＢ−２、ＮＰＢ−３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ−５、ＮＰＢ−６およびＮＰＢ−７より成る群から選ばれる、請求項８に記載のタンパク質。 10．前記タンパク質が非腫瘍細胞と関連づけられる、請求項１に記載のタンパク質。 11．前記タンパク質がＮＰ−１、ＮＰ−２およびＮＰ−３より成る群から選ばれる、請求項10に記載のタンパク質。 12．請求項１のタンパク質をコードする単離精製された核酸から本質的に成るポリヌクレオチド配列。 13．請求項12のポリヌクレオチドの少なくとも一部を含む核酸プローブ。 14．ポリヌクレオチドがＤＮＡである、請求項12に記載のポリヌクレオチド。 15．ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項12に記載のポリヌクレオチド。 16．請求項12のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。 17．請求項12のポリヌクレオチドに対して相補的であるポリヌクレオチド配列。 18．請求項12または17のポリヌクレオチドを含む組換え発現ベクター。 19．ベクターがウイルスである、請求項18に記載のベクター。 20．ウイルスがＲＮＡウイルスである、請求項19に記載のベクター。 21．ＲＮＡウイルスがレトロウイルスである、請求項20に記載のベクター。 22．ベクターがコロイド分散系である、請求項18に記載のベクター。 23．コロイド分散系がリポソームである、請求項22に記載のベクター。 24．リポソームが本質的に標的特異性である、請求項23に記載のベクター。 25．リポソームが解剖学的に標的設定（targeting）される、請求項24に記載のベクター。 26．リポソームが機械学的に標的設定される、請求項24に記載のベクター。 27．機械学的な標的設定が受動的である、請求項26に記載のベクター。 28．機械学的な標的設定が能動的である、請求項26に記載のベクター。 29．リポソームが糖、糖脂質およびタンパク質より成る群から選ばれた成分とのカップリングにより能動的に標的設定される、請求項28に記載のベクター。 30．タンパク質成分が抗体である、請求項29に記載のベクター。 31．ベクターがプラスミドである、請求項18に記載のベクター。 32．請求項１の１以上のタンパク質と結合する抗体。 33．抗体がモノクローナルである、請求項32に記載の抗体。 34．抗体がポリクローナルである、請求項32に記載の抗体。 35．細胞性成分を、請求項１の１以上のタンパク質に結合する試薬と接触させることを含む、被検者における細胞増殖性疾患の検出方法。 36．細胞増殖性疾患が尿生殖器の組織にある、請求項35に記載の方法。 37．尿生殖器組織が前立腺である、請求項36に記載の方法。 38．細胞性成分が核酸である、請求項35に記載の方法。 39．核酸がＤＮＡである、請求項38に記載の方法。 40．核酸がＲＮＡである、請求項38に記載の方法。 41．細胞性成分がタンパク質である、請求項35に記載の方法。 42．試薬がプローブである、請求項35に記載の方法。 43．プローブが核酸である、請求項42に記載の方法。 44．プローブが抗体である、請求項42に記載の方法。 45．抗体がポリクローナルである、請求項44に記載の方法。 46．抗体がモノクローナルである、請求項44に記載の方法。 47．プローブが検出できるように標識されている、請求項42に記載の方法。 48．標識が放射性同位体、生物発光化合物、化学発光化合物、蛍光化合物、金属キレートまたは酵素より成る群から選ばれる、請求項47に記載の方法。 49．ＮＰＢ−１、ＮＰＢ−２、ＮＰＢ−３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ−５、ＮＰＢ− ６、ＮＰＢ−７、ＮＰ−１、ＮＰ−２、ＮＰ−３、ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＢＰＣ−３およびＰＣ−１より成る群から選ばれたタンパク質と関連づけられる細胞増殖性疾患の治療方法であって、該疾患をもつ患者に、ＮＰＢ−１、ＮＰＢ− ２、ＮＰＢ−３、ＮＰＢ−４、ＮＰＢ−５、ＮＰＢ−６、ＮＰＢ−７、ＮＰ−１、ＮＰ−２、ＮＰ−３、ＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＢＰＣ−３およびＰＣ−１より成る群から選ばれたタンパク質の活性を変調（modulate）する、治療上有効な量の試薬を投与することを含む方法。 50．試薬がアンチセンスポリヌクレオチド配列である、請求項49に記載の方法。 51．試薬がセンスポリヌクレオチド配列である、請求項49に記載の方法。 52．試薬が抗体である、請求項49に記載の方法。 53．抗体がモノクローナルである、請求項52に記載の方法。 54．細胞増殖性疾患が尿生殖器の組織にある、請求項49に記載の方法。 55．尿生殖器組織が前立腺である、請求項54に記載の方法。 56．宿主対象者の細胞に、請求項１のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを導入することを含む遺伝子治療法。 57．宿主対象者の細胞にin vitroで発現ベクターを導入し、その後、形質転換細胞を宿主対象者に導入する、請求項56に記載の方法。 58．発現ベクターがＲＮＡウイルスである、請求項56に記載の方法。 59．ＲＮＡウイルスがレトロウイルスである、請求項58に記載の方法。 60．対象者がヒトである、請求項56に記載の方法。 61．細胞のＮＭＰに作用を及ぼす組成物の同定方法であって、ａ．該組成物およびＮＭＰ含有細胞を含む成分をインキュベートし、その際、該成分に相互作用させておくのに十分な条件下でインキュベーションを行い、そしてｂ．該組成物によって生じたＮＭＰに対する作用を測定する、ことを含む方法。 62．前記の作用がＮＭＰの阻害である、請求項61に記載の方法。 63．ＮＭＰがＢＰＣ−１、ＢＰＣ−２、ＢＰＣ−３およびＰＣ−１より成る群から選ばれる、請求項62に記載の方法。 64．前記の作用がＮＭＰの刺激である、請求項61に記載の方法。 65．ＮＭＰがＮＰ−１、ＮＰ−２およびＮＰ−３より成る群から選ばれる、請求項64に記載の方法。 66．請求項１のタンパク質と関連した細胞増殖性疾患の指標となる標的細胞性成分の検出に有用なキットであって、プローブを入れた容器を含む１以上の容器を厳重な拘束状態で受け入れるように区画化されているキャリアー手段を含んでなるキット。 67．標的細胞性成分がポリペプチドであり、プローブが抗体である、請求項66に記載のキット。 68．細胞性成分が核酸標的であり、プローブがポリヌクレオチドハイブリダイゼーションプローブである、請求項66に記載のキット。 69．標的核酸を増幅させるためのオリゴヌクレオチドプライマーを入れた容器をさらに含む、請求項68に記載のキット。