JPH08508570A - 電気化学ルミネッセンアッセイ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ある種の界面活性剤及び、必要に応じて塩化アルカリ及びこの目的に適した試薬を用いて電気化学ルミネッセンス現象を測定する方法。

Description

【発明の詳細な説明】 電気化学ルミネッセンアッセイ 本発明の主題は電気化学ルミネッセンス現象を測定する方法、該方法を用いて 分析対象物を検出する方法、該方法に利用できる試薬溶液、及び該方法を実施す るために特に適した装置である。 電気化学ルミネッセンス現象を測定する方法は数年前から知られている。こう した方法は、特殊な金属複合体が、電磁線を放射して基底状態に移行する励起状 態に、酸化によって達する能力を利用している。この種類の方法及び好適な金属 複合体は例えばＷＯ８６／０２７３４号に記載されている。 この技術は次第により複雑になった。ＷＯ９０／０５２９６号では、酸化され るとき強い還元剤であるアミン、好ましくはトリプロピルアミンを試験組成物に 添加している。電気化学反応は、電気化学ルミネッセンス（ＥＣＬ）部分、すな わち金属複合体が電磁線を放射してアミンが酸化され得る電解質内で起きる。明 細書には、ｐＨ６−９、好ましくは７−７．５のリン酸緩衝液が水溶液中におけ る好適な電解質であると述べられている。 電磁放射を増大させるために、ＷＯ９０／０５３０２号ではこの試験組成物に 界面活性剤であるトリトンＸ−１００またはトリトンＮ−４０１の添加を提示し ている。ＷＯ９０／０５４１１号にはＥＣＬを測定する装置の改良について記載 されている。 更に、分析対象物、その同族体、またはこれに特異的な物質を電気化学ルミネ ッセンス標識することによって分析対象物を検出する技術の利用が可能になった 。電気化学ルミネッセンスは存在している分析対象物の量を決定するために利用 された。通常用い られている標識を電気化学ルミネッセンス標識に置き換えた特殊なイムノアッセ イについて記載する。 この技術の更なる改良及び応用についてはＷＯ８７／０６７０６号、ＷＯ８９ ／０４３９２号、ＷＯ８９／１０５５２号、ＷＯ８９／１０５５１号、ＷＯ９０ ／０５３０１号、及びＷＯ９０／１１５１１号に記載されている。これらの公報 の記載については、知られているものとする。 従って、本発明の目的は、特に電気化学ルミネッセンスアッセイ法と組み合わ せた分析対象物の検出の感度の点で、上記の既知の方法を改良することである。 本発明の主題は、溶液が脂肪アルコールエトキシレート、プランタレン及びオ クチルグルコシド、またはこれらの混合物からなる群から選ばれる界面活性剤で ある溶液、あるいはこの溶液に接触する固相における電気化学現象を測定する方 法である。 更に、本発明の主題はまた該方法を用いて分析対象物を検出する方法、及び該 方法を実施するための好適な試薬である。 本発明の主題は上記の先行技術に基づく教示である。電気化学ルミネッセンス 法の基礎はこれらの先行技術文献により詳細に記載されている。電気化学ルミネ ッセンスを測定する装置は、試薬溶液のための容器を有する測定ユニット、測定 中試薬溶液に接触している少なくとも２つの電極（作用（working）電極と対向 （counter）電極）、及び電気化学ルミネッセンス過程で発生する光線を測定す る検出器を具備する。通常、初期電圧（分極前）が溶液に最初にかけられる。次 いで、この電圧は溶液中に含有される物質、例えばアミンの酸化還元能によって 増大する。こうして酸 化された物質は、例えばある種のルテニウム複合体のような、化学ルミネッセン スを生じて光を放射することのできる物質を励起する。特定の時間内に検出器が 感知した光線の量は、電気化学ルミネッセンス物質の量の指標となる。電気化学 ルミネッセンス物質が分析対象物、その同族体、またはこれに特異的に働く物質 に対する標識である場合、例えばイムノアッセイのような場合は、感知された光 線は分析対象物の存在の指標となる。 実験によって、ＷＯ９０／０５３０２号から知られ、通常界面活性剤トウィー ン２０と組み合わせて利用される一般に用いられる界面活性剤トリトンＸ−１０ ０では、最適な結果は得られないことが示された。一つには、トリトンＸ−１０ ０は分解しにくく、従って環境に対して有益ではない。他方、実験により、驚く ことにはある種の他の界面活性剤がトリトンＸ−１００と比較してＥＣＬ方法を 改良することが示された。これらの特殊な界面活性剤は、シグナル強度の増大、 より高い検出感度を達成するシグナル／ノイズ比率の改良、下方検出閾値の低下 、そして最終的にはより高い精度の達成のために用いられる。 好適な界面活性剤としては、例えばポリドカノール（ドデシルポリ−（エチレ ングリコールエーテル）_n）、Ｃ１４−Ｅ０９（ポリ（エチレングリコールエー テル）_n）、ゲナポール（イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）_n ）、Ｃ８−Ｅ０９（オクチルアルコールポリ（エチレングリコールエーテル）_n ）等の脂肪アルコールエトキシレート；プランタレン（登録商標）（アルキルポ リグルコシド）及びオクチルグルコシド（オクチル−ベータ−Ｄ−グルコピラノ シド）またはこれらの混合物から なる群から選ばれたものが特に有用であることがわかった。界面活性剤は０．０ ０１から１．０％の範囲の濃度で用いられる。最適濃度はそれぞれの界面活性剤 で容易に決定することができる。最も好適な濃度は０．１から０．５％の範囲で ある。 ５−１０ｍＭの濃度のアジ化ナトリウムは、通常この試験組成物において保存 剤として用いられる。この環境に対して有害な試薬は、アジ化物よりも環境に対 してずっと有益なビオバンまたはオキサバンに変えることができることが実験に よって示された。 驚くことには、これらの安定剤はＥＣＬ過程に対してもう１つのポジティブな 効果、すなわち測定シグナルの増加という効果を有している。オキサバン及びビ オバンは０．０１から１％、好ましくは０．１から０．５％の濃度で用いられる 。 溶液、または溶液に接触した固相における電気化学現象を測定する本発明に係 る方法は、溶液の凝固点より高く、４０℃より低い温度で行うことができる。 測定ユニットに矩形波（square-wave）電圧をかけることによって感度を更に 上げることができる。このことは初期電圧が最終電圧の値まで直接（最高０．４ 秒以内に）上がることを意味する。励起時間中はこの電圧を一定に保つことが必 要である。この時間の後、この電圧は系の酸化還元能以下の値まで直接下げられ る。更に、この測定は動的測定範囲、すなわち特定のイムノアッセイにおける分 析対象物の濃度を測定できる範囲をも改良する。より低い温度を用いた場合には 、塩の添加が測定のために好ましい。 （Ａｇ／ＡｇＣｌにたとえれば）作用電極にかける矩形波最終電圧を、酸化し 得る物質の酸化還元能と２．２Ｖの間の最高値ま でに制限することが有利であることが証明された。特に好ましい電圧は１．２か ら２．２Ｖの範囲である。最も好ましいのは１．４Ｖの値である。これらの値は 用いる電極がプラチナまたは金の場合に達成される。 もし一般に用いられる傾斜（ramp）電圧、例えばデルタ電圧を用いる場合、（ Ａｇ／ＡｇＣｌにたとえれば）最終電圧は最大３．０Ｖに制限される。 驚くことに、電気化学ルミネッセンスの生成に先立ち、Ａｇ／ＡｇＣｌ電極に たとえれば、作用電極に＋４００から−４００ｍＶの間の初期電圧をかけること によってシグナルを増大させることもできた。特に好ましい電圧は０ｍＶから＋ ２００ｍＶの範囲である。前と同じく、これらの値は用いる電極がプラチナまた は金の場合に達成される。電極になる物質の能力は容易に計算できる。 更に、シグナルはｐＨを６．５から９．０の間、好ましくは６．５から７．５ の間、より好ましくは６．８に調整することによっても増大させることができる 。これはこの範囲における適当なｐＨ緩衝液を用いて好適に達成できる。更に、 溶液に０．０５ｍｍｏｌ／ｌから０．５ｍｏｌ／ｌの濃度の１種または数種のア ルカリまたはアルカリ土類ハロゲン化物を含有させることもできる。塩化ナトリ ウムは好ましい物質である。 上記の測定法は、それ自体既知のアッセイ法を既に顕著に改良している。更に 、これらの測定法を組み合わせることによって、分析対象物の検出アッセイの感 度及び／または動的測定範囲を更に顕著に増大させることが可能である。 例えば、サンドイッチ原理または競合的な方法によるイムノアッセイにおいて 、分析対象物の検出感度が増大すると、用いる方法あるいは装置は更に簡素化で きる。例えば、検出器としてのフォトダイオードの利用、系の目盛り調整の簡素 化、シグナルの増大によって測定時間が短くなるため、単位時間当たりに行う試 験の数の増加、あるいは試料容積の減量が可能である。 本発明のもう１つの主題は、電気化学的に酸化し得るアミンまたは酸化される とき強力な還元剤であるアミンを含有する、電気化学現象を測定し、また特に分 析対象物を検出するための試薬溶液である。この溶液は脂肪アルコールエトキシ レート、プランタレン（登録商標）及びオクチルグルコシド、あるいはこれらの 混合物からなる群から選ばれる界面活性剤を含有する。更に、０．１ｍｍｏｌ／ ｌから０．５ｍｏｌ／ｌの濃度の塩化アルカリを含有し、及び／または６．８か ら８．０のｐＨ値を有する。更にまた、この溶液は通常用いられる別の物質、例 えば緩衝剤、安定化剤及び保存剤を含有することができる。 試薬溶液はビオバンまたはオキサバンで安定化するのが好ましい。 電気化学ルミネッセンスによる検出を行うための装置は、例えばＷＯ９０／０ ５３０２号の実施例１に詳細に記載されている。更に、こうした装置には、もし アッセイをそのような低温下で行うとすれば、０から２５℃の温度に測定ユニッ ト及び／または液体容器を冷却する手段を有するようにすることができる。測定 ユニットは電気化学ルミネッセンスを測定するセルであることが理解される。液 体容器は貯蔵容器でも、測定中測定ユニットに入れ られる試薬溶液のためのチューブのような供給装置でもよい。 本発明の別の主題は電気化学ルミネッセンス標識を用いて分析対象物を検出す る方法である。ここで電気化学ルミネッセンス現象を測定するために上記に掲げ た中の方法が利用できる。 以下の実施例は本発明を更に説明するものである。実施例１ 本発明に従って用いられる界面活性剤の効果を一連の実験において決定した。 個々の試験パラメーター、すなわち定量すべき分析対象物に依存しないシグナル の生成に対する界面活性剤の影響を決定するために、ビオチン化またはルテニル 化抗体を付着させるストレプトアビジン−被覆磁気粒子を用いた（ＨＳＡＰ：“ 熱ストレプトアビジン粒子”）。 測定用セル（Origen 1.0 by IGEN，Rockville，USA or Magnalyser）に永久磁 石をも有するＷＯ９０／０５３０２号の実施例１に記載した装置を測定に用いた 。この装置はまた光電増倍管、ポテンシオスタット、電気化学的フロースルーセ ル（flow-throughcell）、液体輸送剤及び５０チューブの試料用回転子を有する 。 分析を実施するために以下の物質を試薬チューブ中で混合した： ＨＳＡＰ（凍結乾燥したＨＳＡＰをトリス／ポリドカノール緩衝液（１００ｍ Ｍ；０．１％）ｐＨ９．０に溶解して６００μｇ／ｍｌの作用溶液を得た） ５０μｌ ＰＢＳ緩衝液（５０ｍＭ ＫＨ₂ＰＯ₄；１００ｍＭ ＮａＣｌ；０．１％ＢＳ Ａ；ｐＨ７．０） ２００μｌ 試薬溶液（２００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ₂緩衝液；１００ｍＭ ＴＰＡ；ｐＨ７． ５；試験するそれぞれの試薬について） この混合液は測定用チューブにピペットで入れられ、測定用セルに移した。Ｈ ＳＡＰを緩衝液（ＡＢ）で洗浄し、シグナルの量はこの緩衝液中で測定した。 用いた抗体はビオチン−ＤＤＳ（ビオチニル−アミノ−３，６−ジオキサオク タノイル−アミノカルボニル−ヘプタノイック酸−Ｎ−ヒドロキシサクシニミド エステル）でビオチン化した。（トリス）（２，２’−ビピリジル）ルテニウム クロライド６水和物をＤＤＳ（ジサクシニルスベレート）を用いて抗体に結合さ せた。 ストレプトアビジン−被覆磁気粒子はDeutsche Dynal GmbH，Germanyから購入 した（ダイナビーズＭ−２８０ストレプトアビジン）。 測定に用いた緩衝液（ＡＢ）の組成は以下の通りである： ＫＨ₂ＰＯ₄ ^＊２Ｈ₂Ｏ ０．２Ｍ ＫＯＨ ０．０７６Ｍ ＮａＣｌ ０．０５ｍＭ ＴＰＡ（トリプロピルアミン）０．１Ｍ 界面活性剤 表に示す濃度 オキサバン／ビオバン ０．１／０．３％ ｐＨ ７．５ 対照として、既知の一般の界面活性剤トウィーン２０及びトリトンＸ−１００ を、それぞれ０．０５％の濃度で用いた。対照とするため、この界面活性剤で得 られるシグナル強度を表１では１００％とした。もう１つの測定値として、緩衝 液（ＡＢ）における非特異的なシグナル強度を決定し、ＨＳＡＰ／ＡＢシグナル 強 度の比率を計算するために用いた。ＨＳＡＰの存在下及び非存在下のこのシグナ ル強度の比率は、アッセイの感度の良い指標である。表１に示す結果より、本発 明の界面活性剤が最適であることが明らかに理解できる。 ポリドカノール及びＣ８−Ｅ０９でＨＳＡＰ／ＡＢ比率に対する最適な効果が 示される。トウィーン／トリトンＸ−１００以外の界面活性剤はシグナル強度に ネガティブな影響を及ぼした。 用いた界面活性剤の名前及び略号 Ｃ８−Ｅ０９：オクチルアルコールポリ（エチレングリコールエーテル）_n Ｃ１４−Ｅ０９：ポリ（エチレングリコールエーテル）_n Ｃ１６−Ｅ０９：セチルポリ（エチレングリコールエーテル）_n ドデシルマルトシド：ドデシル−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）α−Ｄ− グルコピラノシド ゲナポール：イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）_n オクチルグルコシド：オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド プランタレン：アルキルポリグルコシド（Ｃ１４−Ｃ１６） ラルフォン３−１４：ｎ−テトラデシル−ｎ，ｎ−ジメチル−３−アミノ−１− プロパンサルフェー ＳＤＳ：ソディウムラウリルサルフェー ポリドカノール：ドデシルポリ（エチレングリコールエーテル）_n トリトンＸ−１００：オクチルフェノールポリ（エチレングリコールエーテル）_n トウィーン：ポリ（オキシエチレン）ｎ−ソルビタン−モノラウレー実施例２ ＮａＣｌに依存して測定用セルに２８−３５℃で傾斜電圧をかけた場合のセル 温度のシグナル回復及び動力学（dynamics）に対する効果を調べるためにパラメ ーター非依存性試験（ＨＳＡＰ）を用いた。 試験は実施例１に記載したように行った。緩衝液（ＡＢ）を以下の組成の緩衝 液ＢＭＧ２で置き換えた。 Ｈ₃ＰＯ₄ ０．２Ｍ ポリドカノール ０．１％ オキサバン ０．１％ トリプロピルアミン ０．１６Ｍ ＫＯＨ ０．１２Ｍ ｐＨ ６．８ ＮａＣｌ 表に示す濃度 結果は表２に示す。温度及び塩濃度の増加は共に、緩衝液（ＢＭＧ２）単独、 及びＨＳＡＰ共存下で得られるＥＣＬシグナルの増大をもたらす。ＨＳＡＰ／Ａ Ｂ、ＨＳＡＰ／ＦＣ及びＦＣ／ＡＢ比率はほぼ温度非依存性であるが、塩濃度に 依存する。 ＢＭＧ２：試料緩衝液ＢＭＧ２のみの対照 ＦＣ：（ビオチン化及びルテニル化した抗体）の結合していない対照 ＨＳＡＰ：熱ストレプトアビジン粒子 温度が２０℃より低くなった場合は、塩化アルカリを添加し、溶液のｐＨを７ ．２５から７．７５の間の好ましい値に調整することが必要である。実施例３ Ｔ₃の検出 本発明のＢＭＧ１の試験組成物と先行技術の試験組成物（ＢＭＧ０）とを比較 するためにトリヨードチロニン（Ｔ₃）の検出のためのイムノアッセイを用いた 。 試薬溶液は以下の組成であった。 以下の試薬も更に用いた： ＨＥＰＥＳ緩衝液７．０：ＨＥＰＥＳ−Ｎａ７．０ ０．１Ｍ ０．０６％ ＡＮＳ ０．１％ ウシＩｇＧ ０．５％ バイコ（Byco） ５０ｍＭ ＮａＣｌ ＰＡＢ−ＲＵ （ルテニル化ポリクローナル抗体） ＤＤＳを介して（トリス）（２，２’ −ビピリジル）ルテニウムクロライド ６水和物をＴ₃に対するＰＡＢに結合 させたもの １００ｎｇ／ｍｌ （ＨＥＰＥＳ緩衝液７．０中） ＰＨ−ＢＩ （Ｔ₃−ビオチン化ポリハプテン） ＰＨ ＰＡＢ←→Ｋ−ＩｇＧ（ＤＥ）Ｂ ＯＣ−Ｔ₃−１Ｂｉ ６００ｎｇ／ｍｌ （ＨＥＰＥＳ緩衝液７．０中） 試料：標準ａ−ｅ Ｔ₃濃度：ａ：０．２４ｎｇ／ｍｌ ｂ：０．８８ｎｇ／ｍｌ ｃ：１．９０ｎｇ／ｍｌ ｄ：３．０５ｎｇ／ｍｌ ｅ：６．６５ｎｇ／ｍｌ ヒト血清３種 ５００ｍｇ／ｄｌヘモグロビン（Ｈｂ）含有／非含有ヒト 血清２種 ストレプトアビジン被覆磁気粒子： ダイナビーズＭ−２８０ストレプトアビジン （Deutsche Dynal GmbH，Germany） ６００μｇ／ｍｌ（ＨＥＰＥＳ緩衝液７．０中） 検出反応を行うために以下の物質を混合した： ＰＡＢ−Ｒｕ ５０μｌ ダイナビーズＭ−２８０ ５０μｌ 試料 ３０μｌ ＰＨ−Ｂｉ ５０μｌ ＢＭＧ０または１ ５００μｌ この混合液を２８℃で１６分間インキュベートし、次いで２８℃の温度にした 測定用セルに入れた。粒子を試験用混合液によりＢＭＧ０または１で洗浄し、そ の後測定した。次にデルタ傾斜電圧をかけた。測定電圧は０．５６５Ｖ及びＰＭ Ｔ７２０ｍＶであった。 結果を表３にまとめた。ＢＭＧ０で見られたヘモグロビンによる妨害はＢＭＧ １ではもはや見られなかった。このことは下方検出限界に影響しない。 実施例４ ＨＢｓＡｇの検出 サンドイッチイムノアッセイにおいて、ＨＢｓＡｇの検出のために本発明に係 る試験組成物ＢＭＧ１を用いた。結果をＢＭＧ０で得られたものと比較した。Ｂ ＭＧ０及び１は実施例３で記載した組成物とした。 以下の試薬を用いた： ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．５：ＨＥＰＥＳ−Ｎａ ０．０５Ｍ ウシ血清アルブミン １％ ゲナポールＸ０８０ ０．１％ ウシ（Ｒ）−ＩｇＧ ０．１％ マウス−ＩｇＭ １０μｇ／ｍｌ ＣＡＭ（クロルアセトアミド） ０．１％ ＭＩＴ（メチルイソチアゾロン）０．０１％ ＡＢ−Ｂｉ（ビオチン−ＤＤＳでビオチン化した抗体） ＭＡＢ＜ＨＢｓ＞Ｍ５Ａ１０−ＩｇＧ−Ｂｉ（ＤＤＳ） １：７．５ ３００ｎｇ／ｍｌ （ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．５中） ＴＡＧ（ルテニル化抗体） ＭＡＢ＜ＨＢｓ＞Ｍ５Ａ１０−Ｆ（ａｂ’）２−ＢＰＲＵ ＤＤＳを用いて（トリス）（２，２’−ビピリジル）ルテ ニウムクロライド６水和物をＨＢｓＡｇ（Ｆ（ａｂ’）断 片）に対するモノクローナル抗体に結合させたもの ５００ｎｇ／ｍｌ（ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．５中） 試料：標準ａ−ｈ ＨＢｓＡｇ濃度 ａ： ０Ｕ／ｍｌ ｂ： ０．２２Ｕ／ｍｌ ｃ： ０．５２Ｕ／ｍｌ ｄ： １．０８Ｕ／ｍｌ ｅ： ２．３０Ｕ／ｍｌ ｆ： ４．５０Ｕ／ｍｌ ｇ：１０．３０Ｕ／ｍｌ ｈ：２２．２０Ｕ／ｍｌ ストレプトアビジン−被覆磁気粒子： ダイナビーズＭ−２８０ストレプトアビジン ６００μｇ／ｍｌ（ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．５中） 検出反応のために以下の物質を混合した： ダイナビーズＭ−２８０ ５０μｌ ＡＢ−Ｂｉ ５０μｌ ＴＡＧ ４０μｌ 試料 ５０μｌ ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ７．５ ２０μｌ ＢＭＧ０または１ １５０μｌ この混合液を２８℃で１６分間インキュベートし、次いで２８℃まで加熱した 測定用セルに入れた。粒子をＢＭＧ０または１で洗浄し、その後測定した。 結果を表４にまとめた。ＢＭＧ１の使用により、下方検出限界が顕著に改良さ れた。ＣＶもＢＭＧ０と比較して下げられた。目盛り定め曲線の標準試料ｈの値 のａに対する比率はＢＭＧ１で増加し、目盛り定め曲線の鑑別が改良できる。 実施例５ ＴＳＨの検出 ＴＳＨ（甲状腺剌激ホルモン）の検出のためのサンドイッチイムノアッセイに 、先行技術での試験組成物ＢＭＧ０と比較して試験組成物ＢＭＧ１及びオキサバ ンなしのＢＭＧ１を用いた。ＢＭＧ０及びＢＭＧ１は実施例３で記載した組成物 とした。 甲状腺剌激ホルモン（ＴＳＨ）はサンドイッチイムノアッセイで定量した。ア ッセイは実施例１で記載した装置を用いて実施した。 検出反応のために以下の物質を混合した： インキュベーション用緩衝液 ５０μｌ （６．０６ｇ／ｌ トリ×ＨＣｌ； １ｇ／ｌ クロルアセトアミド； ０．１ｇ／ｌ メチルイソチアゾロン、ｐＨ８．０； ５０ｇ／ｌ ウシ血清アルブミン； １０ｇ／ｌ Ｒ−ＩｇＧを含有） ストレプトアビジン−被覆磁気粒子（Dynal、２．８μｍ）６０ ０μｇ／ｍｌ（インキュベーション用緩衝液中） ４０μｌ ＤＳＳ（ジサクシニジルスベレート）でビオチン化したＴＳＨに対するモノクロ ーナル抗体（ＭＡＢ）３．０ｐｇ／ｍｌ（インキュベーション用緩衝液中） ４０μｌ ＴＡＧ： ＤＳＳを介して（トリス）（２，２’−ビピリジル）ルテニウムクロライド６水 和物をＴＳＨに対するＭＡＢに結合させたもの １．２μｇ／ｍｌ（インキュベーション用緩衝液中） ４０μｌ 試料液または標準 ５０μｌ 再懸濁液（試薬溶液（ＢＭＧ１）の添加） １００μｌ この混合液を室温（２１℃）で１６分間インキュベートし、次いで室温にした 測定用セルに移した。固定化した粒子を試薬溶液ＢＭＧ１で洗浄し、ＢＭＧ１中 で測定した。 用いた試料は以下のＴＳＨ濃度の標準ａ−ｅであった。 ａ：０ μＵ／ｍｌ ｂ：０．３９μＵ／ｍｌ ｃ：３．５４μＵ／ｍｌ ｄ：１２．４μＵ／ｍｌ ｅ：４４．３μＵ／ｍｌ 結果を表５にまとめた。ＢＭＧ０と比較して、ＢＭＧ１では検出限界の改良が 示された。保存剤オキサバンの添加は下方検出閾値を更に下げた。双方のケース において、変動係数も顕著に改良された（ＢＭＧ１±オキサバン）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 Ｐ４４０１５７７．１ (32)優先日 1994年１月20日 (33)優先権主張国 ドイツ（ＤＥ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＮ，ＦＩ，Ｊ Ｐ，ＫＲ，ＮＯ，ＮＺ，ＲＵ，ＵＡ，ＵＳ (72)発明者 ミュラー，ギュンター ドイツ連邦共和国 ディー―82380 パイ ゼンベルグ，ヴイ．―ボーデンシュヴィン ―ヴェーク ６番地 (72)発明者 ノイマン，ウルリッヒ ドイツ連邦共和国 ディー―82362 ヴァ イルハイム，エスティー．―アンナ―ヴェ ーク ８番地 (72)発明者 ギーセン，ウルスラ ドイツ連邦共和国 ディー―82362 ヴァ イルハイム，アム エッセルスバーグ ９ 番地 (72)発明者 ホイル，ニコラス ドイツ連邦共和国 ディー―82327 チュ ツィンク，ブラウハウスシュトラーセ 25 番地

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．溶液が脂肪アルコールエトキシレート、プランタレン及びオクチルグルコシ ドまたはこれらの混合物からなる群から選ばれる界面活性剤であることを特徴と する、溶液または溶液に接触した固相における電気化学ルミネッセンス現象を測 定する方法。 ２．脂肪アルコールエトキシレートがポリドカノール、Ｃ１４−Ｅ０９、ゲナポ ールまたはＣ８−Ｅ０９であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。 ３．溶液が１種または数種のアルカリまたはアルカリ土類ハロゲン化物を含有す ることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。 ４．溶液のｐＨが６．５から９．０の範囲であることを特徴とする、請求項１か ら３に記載の方法。 ５．電気化学ルミネッセンスを２．２Ｖの最大矩形波（square-wave）電圧また は３．０Ｖの最大傾斜（ramp）電圧をかけることによって行うことを特徴とする 、請求項１から４に記載の方法。 ６．脂肪アルコールエトキシレート、プランタレン及びオクチルグルコシドまた はこれらの混合物からなる群から選ばれる界面活性剤を含有することを特徴とす る、酸化されて強力な還元剤となる電気化学的に酸化し得るアミンを含有する、 電気化学現象を測定するための試薬溶液。 ７．界面活性剤を０．００１から１％の濃度で含有することを特徴とする、請求 項６に記載の試薬溶液。 ８．更に塩化アルカリを０．０５ｍｍｏｌ／ｌから０．５ｍｏｌ／ｌの濃度で含 有することを特徴とする、請求項６または７に記 載の試薬溶液。 ９．ｐＨが６．５から９．０の間であることを特徴とする、請求項６から８に記 載の試薬溶液。 １０．電気化学ルミネッセンスを測定するために請求項１−５の１に記載の方法 を用いることを特徴とする、電気化学ルミネッセンス標識を介して分析対象物を 検出する方法。