JPH08509723A - Amidino- and guanidino-substituted boronic acid trypsin-like enzyme inhibitors - Google Patents

Amidino- and guanidino-substituted boronic acid trypsin-like enzyme inhibitors

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JPH08509723A
JPH08509723A JP6524316A JP52431694A JPH08509723A JP H08509723 A JPH08509723 A JP H08509723A JP 6524316 A JP6524316 A JP 6524316A JP 52431694 A JP52431694 A JP 52431694A JP H08509723 A JPH08509723 A JP H08509723A
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フイービツグ，ジヨン・マシユー
ケトナー，チヤールズ・エイドリアン
リー，シヤン−リアン・オー
カリーニ，デイビツド・ジヨン
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ザ・デュポン・メルク・ファーマシュウティカル・カンパニー
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Abstract

(57)【要約】 本発明は新規なα−アミノボロン酸に関するものであり、対応する式（Ｉ） のペプチド類似体が開示されている。 (57) [Summary] The present invention relates to a novel α-aminoboronic acid, and the corresponding formula (I) Of peptide analogs are disclosed.

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 アミジノおよびグアニジノ置換ボロン酸 トリプシン様酵素阻害剤 関連出願のクロスリファレンス 本願は、1993年４月27日出願の米国特許出願08／052,835の一部継続出願であ る。 発明の分野 本発明は一般にα−アミノボロン酸、およびα置換基が芳香族グアニジノ、イ ソチオウロニウム、アミジノ基、ハロゲン、シアノ基、あるいは脂肪族アミジノ 、イソチオウロニウムまたはホルムアミジノ基である対応するペプチド類似体に 関する。 発明の背景 単純なボロン酸はセリンプロテアーゼの阻害剤である。例えばKoehlerらのBio chemistry 10；2477（1971年）は２−フェニルエタンボロン酸がミリモル濃度で キモトリプシンを阻害することを報告している。Ｎ−アシル−α−アミノ酸のボ ロン酸類似体の合成はより有効な阻害剤を与えた。Ac−ボロPhe−OH、Ｒ−１− アセトアミド−２−フェニルエタンボロン酸はキモトリプシンを４μMのKiで阻 害する（MattesonらのJ．Am．Chem．Soc.，103;5241(1981年)）。最近、Shenvi は米国特許第4,537,773号（1985年）で、遊離のアミノ基を含有するα−アミノ 酸のボロン酸類似体が有効なアミノペプチダーゼ阻害剤であることを開示した。 Shenviの米国特許第4,499,082号（1985年）は、中性側鎖のあるα−アミノボロ ン酸を含有するペプチドが初期に開示された阻害剤よりも効力が３桁分大き い有効なセリンプロテアーゼ阻害剤であることを開示している。α−アミノボロ ン酸の化学は陽電荷の側鎖のあるボロン酸を含有するペプチド類似体、ボロリシ ン、ボロアルギニン、ボロオルニチンおよびイソチオウロニウム類似体の合成に 発展した（EPA 0 293 881,12／７／88）。これらの化合物はトロンビンおよび他 のトリプシン様酵素の非常に有効な阻害剤を与えた。特別にトロンビン阻害剤と して設計されたボロアルギニン類似体は生体内および生体外の両方の血液凝固の 阻害において非常に有効である。本発明において、この群の化合物は脂肪族アミ ジノおよびホルムアミジノ、芳香族アミジノおよびグアニジノ、並びにシアノお よびハロゲン置換芳香族ボロン酸類似体まで及ぶ。 他のボロン酸が開示されていることに注意すべきである。Metternich（EP 047 1651）は少なくとも１個の非天然アミノ酸残基を含有するボロアルギニンおよび ボロリシンを含有するペプチドを開示している。ElgendyらのTetrahedron Lett. ，33，4209〜4212（1992年）はトロンビン阻害剤である、中性脂肪族側鎖を有す るα−アミノボロン酸を含有するペプチドを開示している。Kakkar（WO 92／078 69）は一般構造式X-Aa1-Aa2-NH-CH(Y)-Z（ここで、Aa1およびAa2は非天然アミノ 酸残基である）のペプチドトロンビン阻害剤を特許請求している。Ｚは-CN、-CO R、-B(R2)(R3)、-P(O)(R)(R)であり、そしてＹは-〔CH2〕n-Qまたは-CH2-AR-Qで ある（ここで、Ｑ＝Ｈ、アミノ、アミジノ、イミダゾール、グアニジノまたはイ ソチオウレイドであり、ｎ＝１〜５であり、そしてR2およびR3は同一または異な ってOH、OR6およびNR6R7からなる群より選択され、あるいはR2およびR3は一緒に なってジオール残基を示す。Ｚが-B(R2)(R3) であるこの特定の群の化合物は本発明の範囲内に含まれる。これはKakkarらの狭 いサブセットであることに注意すべきである。しかしながら、これらの化合物を 製造するのに特定の化学変換が必要であり、Kakkarらはこれらの製造を可能にす る開示をしていない。 発明の概要 本発明は式（Ｉ） 〔式中、R1はa）-CN、-C(NH)NHR6、-NHC(NH)H、-NHC(NH)NHR6、-SC(NH)NHR6、-N HC(NH)NHOH、-NHC(NH)NHCN、-NHC(NH)NHCOR6で置換されたC1〜C12−アルキル、 または Ｘはa） ハロゲン（Ｆ、Cl、Br、Ｉ）、 b） -CN、 c） -NO2、 d） -CF3、 e） -NH2、 f） -NHC(NH)H、 g） -NHC(NH)NHOH、 h） -NHC(NH)NHCN、 i） -NHC(NH)NHR6、 j） -NHC(NH)NHCOR6、 k） -C(NH)NHR6、 l） -C(NH)NHCOR6、 m） -C(O)NHR2、 n） -CO2R2、 o） -OR2、 p） -OCF3、または q） -SC(NH)NHR6であり； R2はa） Ｈ、 b） C1〜C4−アルキル、 c） アリール（ここで、アリールは場合によりハロ（Ｆ、Cl、Br、Ｉ） 、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、-NO2、-CF3、-S(O)r−C1〜C4−アル キル、-OH、-NH2、-NH（C1〜C4−アルキル）、-N（C1〜C4−アルキル）2、-CO2R4 からなる群より選択される１個または２個の置換基で置換されたフェニルまた はナフチルである）、または d） -C1〜C4−アルキルアリール（ここで、アリールは上記で定義された 通りである）であり； R3はＨ、アルキル、アリール、アルキルアリールまたは１〜20個の炭素原子か らなるNH2−ブロッキング基であり； R4およびR5は独立して a） Ｈ、 b） C1〜C4−アルキル、または c） -CH2−アリール（ここで、アリールは上記で定義された通りである ）であり； R6はa） Ｈ、 b） C1〜C4−アルキル、 c） アリール（ここで、アリールは場合によりハロ（Ｆ、Cl、Br、Ｉ） 、C1〜C4−アルキル、C1〜C7−アルコキシ、-NO2、-CF3、-S(O)r−C1〜C4−アル キル、-OH、-NH2、-NH（C1〜C4−アルキル）、-N（C1〜C4−アルキル）2、-CO2R4 からなる群より選択される１個または２個の置換基で置換されたフェニルまた はナフチルである）、または d） -C1〜C4−アルキルアリール（ここで、アリールは上記で定義された 通りである）であり； Ａはアミノ酸残基、または２〜20個のアミノ酸残基からなるペプチドであり； Y1およびY2は a） -OH、 b） -F、 c） C1〜C8−アルコキシであり、または Y1およびY2は一緒になって d） 環状ホウ素エステル（ここで、鎖または環は２〜20個の炭素原子、 また場合によりＮ、ＳまたはＯである１〜３個のヘテロ原子を含有する）を形成 し； ｎは０または１であり； ｐは０〜３であり； ｑは０〜４であり； ｒは０〜２である。但し、R1が脂肪族である場合、-NHC(NH)NHR6の置換基R6は Ｈではない〕 の化合物およびその薬学的に許容しうる塩に関する。 好ましい式（Ｉ）の化合物は、Y1およびY2が a） -OHであり、あるいは Y1およびY2が一緒になって b） 環状ホウ素ピナコールエステルまたは c） 環状ホウ素ピナンジオールエステルを形成し； R1がa） -(CH2)3NHC(NH)H、 b） -(CH2)4C(NH)NH2、 R2がＨであり； ＡがProまたは(D)Phe-Proであり； R3がa） Ｈ、 b） Boc、 c） Ｚ、 d） Ac、 e） ヒドロシンナモイル、 f） C1〜C10−アルキルスルホニル、または g） C1〜C15−アルキルアリールスルホニルである化合物である。 本発明の好ましい化合物の代表例は次の通りである： ・ Ac-(D)Phe-Pro-NH-CH〔(CH2)4CN〕BO2-C10H16 ・ Ac-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)4C(NH)NH2〕BO2-C10H16 ・ Ac-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕B(OH)2 ・ Boc-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕B(OH)2 ・ Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe〔m-C(NH)NH2〕-C10H16 ・ Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-CH2NH2)-C10H16 ・ Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-Br)-C10H16 ・ Ac-(D)Phe-Pro-ボロArg(CN)-C10H16 ・ Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(p-CN)-C10H16 ・ Boc-(D)Phe-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ N,N-(CH3)2-(D)Phe-Pro-ボロPhe-(m-CN)-OH・HCl（異性体Ｉ） ・ Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe-(m-CN)-OH・HCl ・ Ms-(D)Phe-Pro-ボロPhe-(m-CN)-OH・HCl ・ Boc-(D)チアゾリルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ Boc-(D)3-ピリジルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ Ms-(D)3-ピリジルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ Boc-(D)2-ピリジルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ Boc-(D)2-チエニルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ Ms-(D)2-チエニルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ Boc-(D)Phe-Aze-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ ヒドロシンナモイル-Pro-ボロIrg(CH3)-OH・HBr ・ Ac-(D)Phe-Pro-ボロArg(CH3)-OH・HCl ・ PhCH2SO2-(D)Phe-Pro-ボロOrn(CH=NH)-OH・HCl ・ CH3CH2CH2SO2-(D)Phe-Pro-ボロOrn(CH=NH)-OH・HCl ・ CH3CH2CH2SO2-(D)Phe-Pro-ボロArg(CH3)-OH・HCl ・ Ac-(D)Phe-Sar-ボロOrn(CH=NH)-OH・HCl ・ Boc-(D)Phe-Sar-ボロPhe(mCN)-C10H16 ・ Boc-(D)Phe-Aze-ボロOrn(CH=NH)-HO・HCl ・ 4-（フェニル）ベンゾイル-ボロOrn(CH=NH)-C10H16・HCl 本発明はまた、１種以上の前記化合物を含有する組成物、並びに哺乳動物の血 栓症のような異常なタンパク質加水分解の治療において、または診断および他の 商業目的のため血液の血漿へのプロセッシングにおける抗凝血物質として使用さ れる試薬として、このような組成物を使用する方法を提供する。 発明の詳述 本明細書全体を通して、アミノ酸残基またはアミノ酸について次の略語を使用 する： Ala ＝Ｌ−アラニン Arg ＝Ｌ−アルギニン Asn ＝Ｌ−アスパラギン Asp ＝Ｌ−アスパラギン酸 Aze ＝アゼジン−２−カルボン酸 Cys ＝Ｌ−システイン Gln ＝Ｌ−グルタミン Glu ＝Ｌ−グルタミン酸 Gly ＝グリシン His ＝Ｌ−ヒスチジン HomoLys＝Ｌ−ホモリシン Ile ＝Ｌ−イソロイシン Irg ＝L-Argのイソチオウロニウム類似体 Leu ＝Ｌ−ロイシン Lys ＝Ｌ−リシン Met ＝Ｌ−メチオニン Orn ＝Ｌ−オルニチン Phe ＝Ｌ−フェニルアラニン Pro ＝Ｌ−プロリン Ser ＝Ｌ−セリン Thr ＝Ｌ−トレオニン Trp ＝Ｌ−トリプトファン Tyr ＝Ｌ−チロシン Val ＝Ｌ−バリン Sar ＝Ｌ−サルコシン Phe（４−フルオロ）＝パラ−フルオロフェニルアラニン 前記略語の前に付いている「Ｄ」はアミノ酸がＤ−配置であることを示してい る。「Ｄ，Ｌ」はアミノ酸がＤ−およびＬ−配置の混合物で存在することを示し ている。前に付いている「ボロ」はカルボキシルがボロン酸またはボロン酸エス テルと置換されるアミノ酸残基を示す。例えば、R1がイソプロピルであり、Y1お よびY2がOHである場合、Ｃ−末端残基は「ボロVal-OH」略され、「-OHはボロン 酸が遊離酸の形態であることを示す。ピナンジオールボロン酸エステルおよびピ ナコールボロン酸エステルはそれぞれ「-C10H16」および「-C6H12」と略される 。ボロン酸とのエステル化のための他の有用なジオールの例は1,2−エタンジオ ール、1,3−プロパンジオール、1,2−プロパンジオール、2,3−ブタンジオール 、1,2−ジイソプロピルエタンジオール、5,6−デカンジオールおよび1,2−ジシ クロヘキシルエタンジオールである。ホルムアミジノ修飾アミノ基 は（CH=NH）と略される。例えば、-ボロOrn-OH-｛-NH-CH〔(CH2)3-NH-CH(NH)H〕 B(OH)2｝のホルムアミジノ類似体は−ボロOrn(CH=NH)-OHである。側鎖置換基を 含有する類似体は置換基を親残基の名称の後、括弧に入れて示すことにより記載 される。例えば、メタ−シアノ基を含有するボロフェニルアラニンの類似体は- ボロPhe(mCN)-である。ボロArg-のグアニジノ基またはイソチオウロニウム類似 体（ボロIrg）のＮ−アルキル置換基もまた同様に括弧に入れられる。他の略語 はＺ、ベンジルオキシカルボニル；BSA、ベンゼンスルホン酸；THF、テトラヒド ロフラン；Boc-、ｔ−ブトキシカルボニル；Ac-、アセチル；pNA、ｐ−ニトロ− アニリン；DMAP、４−N,N−ジメチルアミノピリジン；Tris、トリス（ヒドロキ シメチル）アミノメタン；MS、マススペクトロメトリー；FAB／MS、高速原子衝 撃マススペクトロメトリーである。LRMS(NH3-CI)およびHRMS(NH3-CI)はそれぞれ NH3をイオン源として使用する低および高分解能マススペクトロメトリーである 。 本発明の化合物の多くが１個以上のキラル中心を含有し、これらの立体異性体 が別個の物理的および生物学的性質を有することは理解される。本発明はすべて の立体異性体またはこれらの混合物を包含する。純粋なエナンチオマーまたはジ アステレオマーが望ましい場合、それらは適当な立体配置の出発物質を使用して 製造することができ、またはキラルクロマトグラフィーやジアステレオマー塩の 再結晶などの標準的な方法により望ましくない立体異性体の混合物から分離する ことができる。 本明細書で使用される「NH2−ブロッキング基」は１〜20個の炭素原子からな る様々なアシル、チオアシル、アルキル、スルホニル、 ホスホリルおよびホスフィニル基を意味する。これらの基の置換基はヘテロ原子 Ｏ、ＳおよびＮを置換基または内鎖成分として含有しうるアルキル、アリールま たはアルキルアリールであってよい。幾つかのNH2−ブロッキング基は有機合成 の分野で当業者に知られている。定義により、NH2−ブロッキング基は除去でき 、または永久にNH2に結合したままである。適当な基の例はホルミル、アセチル 、ベンゾイル、トリフルオロアセチルおよびメトキシスクシニル；アルキルおよ びアルキルアリールスルホニル基、例えばｎ−プロピルスルホニル、フェニルメ チルおよびベンジルスルホニル；芳香族ウレタン保護基、例えばベンジルオキシ カルボニル；および脂肪族ウレタン保護基、例えばｔ−ブトキシカルボニルまた はアダマンチルオキシカルボニルである。GrossおよびMeinhofferの「ペプチド 」、第３巻、３〜88（1981年）とGreeneおよびWutsの「有機合成の保護基」、31 5〜405（1991年）は多数の適当なアミン保護基を開示しており、それらは参考文 献として本明細書に組込まれる。 本明細書で使用される「アミノ酸残基」はＤ−またはＬ−配置の天然または非 天然アミノ酸を意味する。天然アミノ酸残基はAla、Arg、Asn、Asp、Aze、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Irg、Leu、Lys、Met、Orn、Phe、Phe（４−フルオロ ）、Pro、Sar、Ser、Thr、Trp、TyrおよびValである。RobertsおよびVellaccio の「ペプチド」、第５巻、341〜449頁（1983年）は多数の適当な非天然アミノ酸 を開示しており、参考文献として本明細書に組込まれる。また、この文献は非環 状Ｎ−アルキルおよび非環状α，α−ジ置換アミノ酸を記載しているが、列挙し てはいない。内鎖およびＮ−末端アミノ酸残基のＮ−アルキル、、アリールおよ びアルキルアリール類似体は本発 明の範囲内に含まれる。同様に、アルキル、アリールおよびアルキルアリールは α−水素と置換されうる。Ｎ−アルキルおよびα−アルキルアミノ酸残基の例を それぞれ下記に示す。 「アミノ酸残基」はまた、側鎖官能基が当業者に知られている適当な保護基と 結合している様々なアミノ酸を意味する。「ペプチド」、第３巻、３〜88（1981 年）は多数の適当な保護基を開示しており、参考文献として本明細書に組込まれ る。合成 脂肪族側鎖を含有する新規なペプチドボロン酸をスキーム１に示される一連の 反応により製造した。最初に、前駆体NH2-CH〔(CH2)nBr〕BO2-C10H16（ｎ＝３ま たは４）を前記の方法〔KettnerらのJ．Biol．Chem．265，18289〜18297(1990年 )〕により製造し、Ｎ−末端保護基またはＮ−末端および側鎖保護ペプチドと結 合させた。この生成物の例は上記中間体がAc-(D)Phe-Pro-OHに結合している１で ある。１をTHF中、テトラブチルアンモニウムシアニドで55℃において２時間処 理することにより、対応するアルキルシアニド２に変換した。これはシアノ基を 導入するための一般的な方法である。対照的に、この基を導入する他の一般法を 使用することもできるがあまりうまく行かない。例えば、Ac-(D)Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)4-Br〕BO2-C10H16をKCNとN,N-ジメチルホルムアミド中で反応させたが、 検出可能な生成物は得られなかった。本発明者ら のデータは側鎖ブロミドの隣接するアミドNHによる求核置換から生じる環状生成 物の生成と一致する。Z-NH-CH〔(CH2)4-Br〕BO2-C10H16をN,N−ジメチルホルム アミド中、NaCNで処理するとシアノ化合物を与えたが、低収率であり、このこと はウレタン保護基（Ｚ）が存在する場合、簡単には環化が生じないことを示唆し ている。典型的には、２をシリカゲルクロマトグラフィーのような標準的な方法 により精製した。ニトリルをメタノール中におけるHClのような鉱酸の飽和溶液 で処理することにより対応するアミン３を製造した。過剰の溶媒および酸を蒸発 させて除去し、その残留物をアンモニア水溶液と反応させて所望の生成物を得た 。 ホルムアミジノ置換ボロン酸５をAc-(D)Phe-Pro-ボロOrn-C10H 16４のような対 応するアルキルアミンの合成により製造した（スキーム２）。これは１をアジ化 ナトリウムで処理し、次に水素添加して 製造した（Kettnerら、1990年）。アミン４をエチルホルムイミデートで処理し てホルムアミジノ化合物５を得た。 Ｎ−置換イソチオウロニウム誘導体およびＮ−置換グアニジンはスキーム２ａ に示されるようにして容易に製造される。ブロミド１をチオ尿素で処理して直接 イソチオウロニウム21を生成する。別法として、スキーム２に示されるようにし て１をアミン４に変換することができる。KimらのTetrahedron Lett．29，3183 （1988年）に最初に記載された方法を使用して、アミン４を４−DMAPの存在下、 ホルムアミジンスルホン酸と一緒に加熱してグアニジン22を得る。必要なホルム アミジンスルホン酸は対応するチオ尿素を酸化して製造することができる（Walt erおよびRandauのLiebigs Ann．Chem．722，98（1969年）を参照）。 置換ボロン酸７はBarpillらのJ．Hereocyclic Chem．25，1698（1988年）に記 載の方法と同様にして４をジメチルシアノジチオイミノカーボネートまたはジフ ェニルシアノジカーボンイミテートで処理してそれぞれＳ−メチルイソ尿素（６ ）またはＯ−フェニルイソ尿素を生成することにより製造される（スキーム３） 。この中間体をTHFまたはアルコール中、アンモニアで処理して所望の生成物を 得る。 ヒドロキシグアニジノ阻害剤は４を臭化シアノゲンまたは塩化シアノゲン、次 にヒドロキシルアミンで処理して８を生成することにより製造される（スキーム ４）。これらは既知の化学変換である。〔NakaharaらのTetrahedron，33，1591 （1977年）およびBelzeckiらのJ．Chem．Soc．Chem．Commun.，806(1970年)〕。 新規な芳香族ボロン酸の製造をスキーム５に示す。ハロゲンまたはシアノ置換 基を含有する官能化ベンジルアニオン（例としてシアノ基を示す）はTHFまたは 他の不活性溶媒中で活性化Zn金属、次にCuCN・２LiClで処理することにより得ら れる〔Berkら，Organo-metallics９，3053〜3064(1990年)〕。ジクロロメチルボ ロン酸ピナンジオールをTsaiらのOrganometallics２，1543〜1545（1983年）に 記載の方法により製造した。それを金属転移アニオンと反応させて９を生成した 。これはこれらの官能化ベンジルアニオンを製造する唯一の許容される方法であ った。例えば、MichelらのJ．Organometallic Chem．204，１〜12（1981年）に 記載の方法により塩化ｐ−ニトロベンジルをリチウム金属で処理したが、同定で きる生成物は得られなかった。同様に、ZhuらのJ．Org．Chem．56，1445〜1453 （1991年）に記載の条件を使用して塩化ｐ−シアノベンジルをZnCl2の存在下、 リチウムナフタレニドで処理したが、所望の生成物は得られなかった。 α−アミノボロン酸10は９をヘキサメチルジシラザンのリチウム塩で処理し、 そしてトリメチルシラニル基を無水HClで処理して除去することにより得られた 。10を既知の方法によりＮ−末端保護基またはペプチドに結合させた。 脂肪族アミジノ化合物３の製造について記載したものと同じ反応順序で芳香族 置換シアニド11を対応するアミジノ化合物12に変換した。 11を水素添加して対応するアミノメチル基を芳香族置換基13として得ることが できる（スキーム６）。対応するホルムアミジノ、シアノグアニジノ、ヒドロキ シグアニジノおよびグアニジノ化合物（14、15、16および17）はそれぞれ、スキ ーム１の脂肪族系について記載した手順により製造される。 芳香族グアニジノ阻害剤20は前駆体Ｒ−ボロPhe-C10H16から製造した（スキー ム７）。芳香環をNO+BF4 -と反応させてニトロ化して18を得、それを対応するア ミン19に還元した。アミンはアミノイミノメタンスルホン酸〔MosherらのTetrah edral Lett．29，3183(1988年)〕またはシアンアミド（Kettnerら、1990年）と 反応させることによりグアニジンに変換される。 プロトン核磁気共鳴のNMR化学シフトは内部規準のテトラメチルシランからダ ウンフィールドのδ単位（ppm）で表わす。元素分析はGalbraith Laboratories Inc．およびMicroanalysis Inc．が行なった。遊離のボロン酸のFAB／MS試料は 一貫性のある結果を与えず、この手段によるエステル保護基の除去の監視を困難 にした。しかしながら、ピナンジオールおよびピナコール基の存在はNMRスペク トルで容易に観測される。ピナンジオールエステルのメチル基はδ0.9で観測さ れ、そしてピナコール基のメチル基はδ1.1で一重項として観測される。ピナン ジオール保護基を除去した後、試料をメタノール中、約２当量のピナコールで５ 分間処理し、溶媒を蒸発さ せてMSを行なった。同様に、ピナコールを除去して得られた遊離のボロン酸のMS 試料はピナンジオールで処理して調製した。幾つかの場合において、エチレング リコールを質量分光分析用マトリックスとして使用してボロン酸−エチレングリ コールエステル（EGエステルと称する）を得た。以下の実施例についての分析デ ータは表１に示す。 実施例 １ Ac-(D)Phe-Pro-NH-CH〔(CH2)4CN〕BO2-C10H16の合成 中間体Ac-(D)Phe-Pro-NH-CH〔(CH2)4Br〕BO2-C10H16を混合無水物法を使用し て製造した。Ac-(D)Phe-Pro-OH（3.04g、10ミリモル）を50mlのTHFに溶解し、Ｎ −メチルモルホリン（1.1ml、10ミリモル）を加えた。溶液をCCl4ドライアイス 浴を使用して−20℃に冷却し、イソブチルクロロホルメート（1.30ml、10ミリモ ル）を加えた。−20℃で５分後、20mlのTHFに溶解して−20℃に予め冷却したNH2 -CH〔(CH2)4Br〕BO2-C10H16・HCl（3.81g、10ミリモル）に混合物を加えた。トリ エチルアミン（1.39ml、10ミリモル）を加え、混合物を−20℃で１時間、そして 室温で２時間撹拌した。不溶性物質を濾過により除去し、濾液を減圧下で蒸発さ せた。残留物を50mlの酢酸エチルに溶解し、75mlの0.2Ｎ HCl、５％ NaHCO3およ び飽和塩化ナトリウム水溶液で連続的に洗浄した。有機相をNa2SO4上で乾燥し、 真空下で濃縮してAc-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)4Br〕BO2-C10H16（6.01g、収率95 ％）を得た。 臭化物（1.89g、3.0ミリモル）およびテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムシアニ ド（3.2g、11.8ミリモル、４当量）を50mlのアセトニトリルに溶解した。この溶 液を90℃で３時間加熱し、溶媒を減圧下 で除去した。残留物を50mlの酢酸エチルに溶解し、それぞれ50mlの飽和NaCl水溶 液で３回洗浄した。酢酸エチル溶液を無水Na2SO4上で乾燥し、蒸発させて2.5gの 粗生成物を得た。それを溶離剤としてCHCl3中の５％MeOHを使用するシリカゲル クロマトグラフィーにより精製して所望の生成物を得た（0.50g、収率29％）。 LRMS(NH3-CI) m／e〔M(C32H45N4O5B)+NH4 +〕計算値：594.4、実測値：594 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C32H45N4O5B)+H+〕計算値：577.3561、実測値：577.35 55 実施例 ２ Ac-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)4C(NH)NH2〕-BO2-C10H16・ベンゼンスルホン酸の合成 ニトリル（実施例１、0.40g、0.70ミリモル）をメタノール中における飽和HCl の冷溶液50mlに溶解し、溶液を４℃で一晩撹拌した。次に溶液を減圧下で濃縮し た。残留物を無水メタノール（50ml）に溶解し、NH3気体を溶液中で１時間泡立 たせ、溶液を50℃で３時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物を最小容量のメタ ノール中で懸濁し、0.11gのベンゼンスルホン酸（１当量）を加えた。メタノー ルを蒸発させ、残留物をヘキサンで摩砕して所望の生成物を淡黄色の粉末として 得た（0.52g、収率99％）。 FABMS：m／e〔M(C32H48N5O5B)+H+〕計算値：594.38、実測値：594.14 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C32H48N5O5B)+H+〕計算値：594.3827、実測値：594.38 24 実施例 ３ Ac-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3NHC(NH)H〕BO2-C10H16またはAc-(D)Phe-Pro-ボロOr n(CH=NH)-C10H16の合成 エチルホルムイミデート・HClをOhmeおよびSchmitzのAngew．Chem．Internat ．第６版、566（1967年）に記載の方法により製造し、そしてAc-(D)Phe-Pro-ボ ロOrn-C10H16をKettnerらの方法（1990年）により製造した。ホルムイミデート （1.29g、11.7ミリモル）および４−N,N−ジメチルアミノピリジン（1.44g）を4 0mlのエタノールに溶解したAc-(D)Phe-Pro-ボロOrn-C10H16・BSA（2.78g、3.92ミ リモル）の溶液に加えた。得られる溶液を８時間還流した。溶媒を除去した後、 残留物をSephedex（登録商標）LH 20のカラムおよび溶媒としてメタノールを使 用するクロマトグラフィーにより精製して純粋な生成物を得た（1.28g、収率56 ％）。 HRMS(NH3-CI) m/e〔M(C31H46BN5O5)+H+〕計算値：580.3670、実測値：580.367 9 実施例 ４ Ac-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕B(OH)2の合成 本発明者らが以前に米国特許出願08／010731で開示した方法を使用するエステ ル交換により、Ac-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕-BO2-C10H16・HCl（実施 例３）のボロン酸部分のピナンジオール保護基を除去した。ピナンジオールエス テル（0.30g、0.51ミリモル）およびフェニルボロン酸（0.31g、2.6ミリモル） をエーテルおよび水の１：１混合物10ml中で懸濁し、室温で2.5時間撹拌した。 相を分離し、水相をエーテルで十分に洗浄した。水相を蒸発させて固体を得た。 この物質をエーテルで摩砕して所望の生成物を白色の非晶質固体として得た（0. 20g、収率83％）。 LRMS(NH3-CI) m／e〔ピナコールエステルM(C27H42N5O5B)+H+〕計算値：528.3 、実測値：528 HRMS(NH3-CI) m／e〔ピナコールエステルM(C27H42N5O5B)+H+〕計算値：528.33 57、実測値：528.3347 実施例 ５ Boc-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕BO2-C10H16の合成 Boc-Pro-ボロOrn-C10H16・BSAもまた前記の方法（Kettnerら、1990年）により 製造した。このペプチド（3.0g、6.5ミリモル）を25mlの無水エタノールに溶解 し、４−N,N−ジメチルアミノピリジン（1.6g、12.9ミリモル）およびエチルホル ムイミデート・HCl（1.4g、12.9ミリモル）を加えた。溶液を85℃の油浴で１時 間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物をメタノールに溶解し、メタノール中のLH 20のカラム（2.5×100cm）上でクロマトグラフィー処理して1.3gの所望の生成物 を得た。 LRMS(NH3-CI) m／e〔M(C25H43N4O5B)+H+〕計算値：491.5、実測値：491 実施例 ６ Boc-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕BO2-C10H16の合成 反応を実施例３に記載の方法を使用して行なった。Boc-(D)Phe-Pro-ボロOrn-C10 H16・BSA（3.7g、4.78ミリモル）、４−N,N−ジメチルアミノピリジン（1.71g 、13.8ミリモル）およびエチルホルムイミデート・HCl（1.54g、13.8ミリモル） を50mlの無水エタノールに溶解し、85℃で７時間加熱した。所望の生成物をLH20 のカラム上のクロマトグラフィーにより1.56gの収量で得た。 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C34H52N5O6B)+H+〕計算値：638.4089、実 測値：638.4082 実施例 ７ Boc-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕B(OH)2の合成 Boc-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕BO2-C10H16・0.40BSA、0.60HCl（実 施例６、0.16g、0.22ミリモル）およびフェニルボロン酸（0.13g、1.1ミリモル ）を５mlのエーテルおよび５mlの水の混合物中に入れ、室温で４時間撹拌した。 相を分離し、有機相を５mlの水で洗浄した。合一した水相をエーテルで十分に洗 浄した。水相を蒸発させ、残留物をエーテルで摩砕して所望の生成物を白色の固 体として得た（0.10g）。 LRMS(NH3-CI) m／e〔ピナコールエステルM(C30H48N5O6B)+H+〕計算値：586.4 、実測値：586 HRMS(NH3-CI) m／e〔ピナコールエステルM(C30H48N5O6B)+H+〕計算値：586.37 76、実測値：586.3772 実施例 ８ H-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕BO2-C10H16・２HClの合成 Boc-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕BO2-C10H16・0.40BSA、0.60HCl（実 施例６、0.20g、0.25ミリモル）を２mlの４Ｎ HCl：ジオキサンに溶解し、、室 温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をエーテルで摩砕して0.18gの所 望の生成物を得た。 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C29H44N5O4B)+H+〕計算値：538.3565、実測値：538.35 69 実施例 ９ H-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H〕B(OH)2の合成 H-(D)Phe-Pro-NH-CH〔(CH2)3-NH-C(NH)H〕BO2-C10H16・0.35BSA、 0.65 HCl（実施例８、0.10g、0.16ミリモル）を実施例４に記載の方法に従って フェニルボロン酸と反応させて所望の生成物を得た（0.053g）。 LRMS(NH3-CI) m／e〔ピナコールエステルM(C25H40N5O4B)+H+〕計算値：486.3 、実測値：486 HRMS(NH3-CI) m／e〔ピナコールエステルM(C25H40N5O4B)+H+〕計算値：486.32 51、実測値：486.3255 実施例 10 H2NCH〔CH2C6H4-m-CN〕BO2C10H16・HClまたはH-ボロPhe(m-CN)-C10H16・HClの合成 第１の中間体Cl-CH〔CH2-(ｍ−シアノフェニル)〕BO2-C10H16を臭化ｍ−シア ノベンジルおよびジクロロメチルボロネートピナンジオールから製造した。、１ mlのTHF中における亜鉛粉末（1.0g）を０〜５℃に冷却し、７mlのTHF中における 臭化ｍ−シアノベンジル（1.37g、7.0ミリモル）の溶液を滴加した（５秒／滴） 。反応混合物を５℃で２時間撹拌した。LiBr（1.22g、14ミリモル）、CuCN（0.6 3g、7.0ミリモル）および６mlのTHFからなる混合物を50mlのフラスコ中に入れ、 −40℃に冷却した。次にベンジル系有機亜鉛試薬をカニューレ挿入により加えた 。混合物を−20℃まで加温し、５分間撹拌した。それを−78℃に冷却し、純粋な ジクロロメチルボロン酸ピナンジオール（1.47g、5.6ミリモル）を滴加した。得 られる混合物を−78℃で２時間、そして室温で２日間撹拌した。飽和NH4Cl水溶 液（20ml）を混合物に加え、水溶液をそれぞれ20mlのエーテルで３回抽出した。 合一した有機層を無水MgSO4上で乾燥し、真空下で蒸発させて粗製化合物を得た （1.8g）。それをヘキサン（100ml）、次 にヘキサン（200ml）中の15％エーテルでカラムを段階的に溶離するシリカゲル クロマトグラフィーにより精製して所望の生成物を得た（0.53g、収率27％）。 LRMS(NH3-CI) m／e〔M(C19H23NO2BCl)+NH4 +〕計算値：361.2、実測値：361.1 −78℃で２mlのTHF中におけるヘキサメチルジシラザンの溶液（0.21ml、0.98 ミリモル）の溶液にｎ−ブチルリチウム（1.45Ｍ、0.67ml、0.98ミリモル）を加 えた。アニオン生成の完了を確実にするため、溶液を室温までゆっくりと加温し た。得られる溶液を−78℃に冷却し、２mlのTHF中のCl-CH〔CH2-(ｍ−シアノフ ェニル)〕BO2-C10H16（0.33g、0.98ミリモル）を加えた。混合物を室温まで加温 し、一晩撹拌した。、溶媒を蒸発させ、８mlのヘキサンを加えて懸濁液を得た。 ジオキサン中のHCl（4.1Ｎ、1.5ml、6.0ミリモル）を−78℃で加えた。混合物を 室温までゆっくりと加温し、２時間撹拌した。さらにヘキサン（６ml）を加え、 粗生成物を沈殿物として単離した。この生成物をクロロホルムに溶解し、不溶性 物質を濾過により除去した。濾液を減圧下で蒸発させて油状物を得た（約0.2g） 。最後の精製を溶媒としてメタノールを使用するSephedex（登録商標）LH 20カ ラム上のクロマトグラフィーにより行なった。Ｈ−ボロPhe(m-CN)-C10H16・HClを 油状物として得た（0.12g、収率34％）。 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C19H26BN2O2)+H+〕計算値：325.2087、実測値：325.20 94 実施例 11 Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-CN)-C10H16の合成 Ac-(D)Phe-Pro-OH（0.10g、0.33ミリモル）およびＮ−メチルモ ルホリン（0.037ml、0.33ミリモル）を−20℃で５mlのTHF中のイソブチルクロロ ホルメート（0.043ml、0.33ミリモル）と反応させた。５分後、３mlの冷THFに溶 解したＨ−ボロPhe(m-CN)-C10H16・HCl（実施例10、0.12g、0.33ミリモル）およ びトリエチルアミン（0.046ml、0.33ミリモル）を加えた。混合物を−20℃で１ 時間撹拌し、室温でさらに１時間撹拌した。不溶性物質を濾過により除去し、溶 媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチルに溶解し、そして0.20 NHCl、５％NaHCO3 および飽和NaCl水溶液で洗浄した。有機層を無水Na2SO4上で乾燥し、真空下で蒸 発させて0.2gの油状物を得た。それをSephedex（登録商標）LH 20のカラム上の クロマトグラフィーにより精製して0.13gの所望の生成物を得た（収率65％）。 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C35H43BN4O5)+H+〕計算値：611.3405、実測値：611.34 16 実施例 12 Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe〔m-C(NH)NH2〕-C10H16の合成 実施例１１のAc-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-CN)-C10H16（50mg）をメタノール中に おけるHClの飽和溶液５mlに溶解した。溶液を４℃で一晩撹拌した。溶媒を除去 した後、残留物を５mlの無水メタノール中で再懸濁し、０℃に冷却し、そして無 水NH3を溶液中で0.5時間泡立たせた。それを60℃で6.2時間加熱した。溶媒を蒸 発させ、１当量のベンゼンスルホン酸（13mg）および１mlのメタノールを加えた 。溶媒をN2下で蒸発させ、生成物をエーテルで摩砕して所望の生成物を淡褐色の 粉末として得た（65mg、収率100％）。 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C35H47BN5O5)+H+〕計算値：628.3670、実測値：628.36 88 実施例 13 Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-CH2NH2)-C10H16の合成 Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-CN)-C10H16を５mlのメタノール中に入れ、10％ Pd ／C（25mg）および0.1Ｎ HCl（0.41ml）を加え、そして混合物をH2下、室温で2. 5時間撹拌した。溶液をセライトを通して濾過し、20mlのメタノールで洗浄した 。濾液を減圧下で濃縮し、残留物をエーテルで摩砕して純粋な生成物を白色の粉 末として得た（15.6mg、収率59％）。 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C35H47N4O5B)+H+〕計算値：615.3718、実測値：615.37 00 実施例 14 Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-Br)-C10H16の合成 Cl-CH〔CH2-（ｍ−ブロモ−フェニル）〕BO2-C10H16を臭化ｍ−ブロモベンジ ルのアニオンを作り、それをジクロロメチルボロン酸ピナンジオールに結合させ ることにより製造した。この中間体および対応するアミンを実施例10に記載の方 法を使用して製造した。アミンを実施例11に記載の方法を使用してAc-(D)Phe-Pr o-OHに結合させた。 LRMS(NH3-CI) m／e〔M(C34H43N3O5BrB)+H+〕計算値：666.3、実測値：666.2 実施例 15 Ac-(D)Phe-Pro-ボロArg(CN)-C10H16の合成 Ac-(D)Phe-Pro-ボロOrn-C10H16・HCl（0.15g、0.25ミリモル）、トリエチルア ミン（0.035ml、0.25ミリモル）およびジフェニルシアノカルボンイミデート（A ldrich，0.060g、0.25ミリモル）をTHF中 で５時間緩やかに加熱還流し、次に室温で一晩撹拌した。試料をクロロホルムで 希釈し、水および飽和NaCl水溶液で洗浄した。それをK2CO3上で乾燥し、溶媒と してメタノール：クロロホルム（１：９）を使用するシリカゲルクロマトグラフ ィーにより精製して80mgのAc-(D)Phe-Pro-NH-CH〔(CH2)3-NH-C(N-CN)O-Ph〕BO2- C10H16を得た。 LRMS(NH3-CI) m／e〔M(C38H49N6O6B)+H+〕計算値：697.7、実測値：697 上記生成物（0.060g、0.080ミリモル）を0.5mlのTHFに溶解し、室温で30分間 １当量の30％アンモニア水溶液と反応させた。さらに４当量のアンモニアを加え 、溶液を室温で一晩撹拌した。大過剰のアンモニアを加え、反応混合物を室温で ２日間撹拌した。反応混合物を塩化メチレンで希釈し、水および飽和NaCl水溶液 で洗浄した。それをK2CO3上で乾燥し、溶媒としてメタノールおよびクロロホル ム（１：９）を使用するシリカゲルカラム上のクロマトグラフィーにより精製し て15mgの所望の生成物を得た。 LRMS(NH3-CI) m／e〔M(C32H46N7O5B)+H+〕計算値：619.5、実測値：620 実施例 16 Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(p-CN)-C10H16の合成 ClCH〔CH2C6H4-p-CN〕BO2C10H16を臭化ｐ−シアノベンジルのアニオンを作り 、それをジクロロメチルボロネートピナンジオールと結合させることにより製造 した。この中間体および対応するアミンを実施例10に記載の方法を使用して製造 した。NH2CH〔CH2C6H4-p-CN〕BO2C10H16（実施例78）を実施例11に記載の方法を 使用してAc-(D)Phe-Pro-OHに結合させた。 HRMS(NH3-CI) m／e〔M(C35H43N4O5B)+H+〕計算値：611.3405、実測値：611.34 08 実施例 17 Boc-(D)Phe-Pro-ボロPhe(mCN)-C10H16の合成 Boc-(D)Phe-Pro-OH（0.43g、1.2ミリモル）、Ｈ−ボロPhe(mCN)-C10H16・HCl（ 0.42g、1.2ミリモル）、Ｎ−メチルモルホリン（0.26ml、2.4ミリモル）、ヒド ロキシベンゾトリアゾール・H2O（0.36g、2.4ミリモル）およびジシクロヘキシ ルカルボジイミド（0.25g、1.2ミリモル）を20mlのジクロロメタン中、室温で一 晩反応させることによりBoc-(D)Pre-Pro-ボロPhe(mCN)-C10H16を製造した。反応 混合物を濾過し、濾液をメタノール中のSephedex LH-20のカラム（2.5×100cm） 上でクロマトグラフィー処理して0.36gの所望の生成物を得た。 実施例 18 H-(D)Phe-Pro-ボロPhe(mCN)-C10H16・HClの合成 Boc-(D)Phe-Pro-ボロPhe(mCN)-C10H16（0.21g）を２mlの４Ｎ HClジオキサン と室温で２時間反応させた。溶媒を蒸発させて除去し、残留物をエーテルで摩砕 して0.11gの所望の生成物を白色の固体として得た。 実施例 19 H-(D)Phe-Pro-ボロPhe(mCN)-OH・HClの合成 H-(D)Phe-Pro-ボロPhe(mCN)-C10H16・HCl（0.63g、1.0ミリモル）を実施例７に 記載の方法を使用して５当量のフェニルボロン酸と反応させて0.46gの生成物を 得た。 実施例 20 N,Nジメチル-(D)Phe-Pro-ボロPhe(mCN)-OH・HClの合成 H-(D)Phe-Pro-ボロPhe(mCN)-OH・HCl（0.20g、0.42ミリモル）、37％ホルムア ルデヒド水溶液（0.34ml、4.2ミリモル）を２mlのアセトニトリルに溶解した。 シアノホウ水素化ナトリウム（0.080g、1.3ミリモル）を加え、５分後に氷酢酸 （20μl）を加えた。反応pHは約７であった。５時間後、さらに酢酸（20μl）を 加え、混合物を１時間撹拌した。反応混合物を20mlの酢酸エチルに注ぎ込み、有 機相を10mlの飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥 した。溶媒を蒸発させて0.16gの油状物を得、それをエーテルで摩砕して白色の 固体を得た。 実施例 52 Ac-(D)Phe-Pro-NH-H〔(CH2)3SC(NH)NHCH3〕B(OH)2の合成 中間体Ac-(D)Phe-Pro-NH-CH〔(CH2)3Br〕BO2C10H16を実施例１の混合無水物法 を使用して製造した。10mlの無水エタノール中におけるこの臭化物（0.35g、0.5 7ミリモル）および１−メチル−２−チオ尿素（0.077g、0.85ミリモル）の溶液 を18時間還流した。冷却後、溶媒を真空下で除去し、生成物をSephadex（登録商 標）LH-20ゲル上のクロマトグラフィー（溶離：メタノール）を使用して過剰の チオ尿素から分離して0.31g（77％）のイソチオウロニウム生成物を得た。次に 、このボロン酸エステル（0.28g）を実施例４に記載のようにして脱保護して0.1 3g（57％）の所望の生成物を得た。 LRMS(ESI) m／e〔M(C22H34BN5O5S)+H+〕計算値：492、実測値：492 HRMS(NH3-CI)m／e〔エチレングリコールエステルM(C24H36BN5O5S)+H+〕計算値 ：518.260847、実測値：518.261656 実施例 54 Ac-(D)Phe-Pro-NH-CH〔(CH2)3NHC(NH)NHCH3〕B(OH)2の合成 Ac-(D)Phe-Pro-ボロOrn-BO2C10H16・HCl〔0.50g、0.85ミリモル、Kettnerらの 方法（1990年）により製造した〕、４−メチルアミノピリジン（0.21g、1.7ミリ モル）、Ｎ−メチルアミノ−イミノメタンスルホン酸（0.24g、1.7ミリモル）お よび10mlの無水エタノールの溶液を18時間還流した。冷却後、混合物を濾過し、 沈殿物をクロロホルムで洗浄した。、合一した濾液を真空下で濃縮し、残留物を 10mlのクロロホルムに溶解した。クロロホルム溶液を氷冷0.1Ｎ塩酸（２×３ml ）、氷冷水（２×３ml）およびブラインで洗浄した。得られる有機溶液を無水硫 酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、そして濃縮した。生成物をSephadex（登録 商標）LH-20ゲル上のクロマトグラフィー（溶離：メタノール）を使用して精製 して0.30g（55％）のグアニジンを得た。次に、このボロン酸エステルを実施例 ４に記載のようにして脱保護して0.14g（59％）の所望の生成物を得た。 LRMS(NH3-CI)m／e〔エチレングリコールエステルM(C24H37BN6O5)+H+〕計算値 ：501、実測値：501 HRMS(NH3-CI)m／e〔エチレングリコールエステルM(C24H37BN6O5)+H+〕計算値 ：501.299674、実測値：501.300760 適当な出発物質を使用して上記のスキームおよび方法により、表１の実施例の 化合物を製造することができる。 使用効果 本発明のＮ−アシルおよびＮ−ペプチドボロン酸は新規な群の、トリプシン様 酵素の強力な可逆性阻害剤である。トリプシン様酵素はＣ−末端アルギニルまた はリシル残基を遊離させる塩基性残基でペプチド結合を加水分解するプロテアー ゼの一群である。これらの中には、止血に必要な血液凝固および繊維素溶解系の 酵素がある。これらはII、Ｘ、VII、IX、XII因子、カリクレイン、組織プラスミ ノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ様プラスミノーゲン活性化因子およびプラス ミンである。補体系の酵素、（受精に必要な）アクロシン、膵臓トリプシンもま たこの群に含まれる。これらのプロテアーゼによる高レベルのタンパク質分解は 病気の状態をもたらしうる。例えば、消費性凝固障害；凝固系や繊維素溶解系の 酵素およびそれに伴なうプロテアーゼ阻害剤の血液濃度の減少を特徴とする症状 はしばしば致命的となる。合成阻害剤が介在することは明らかに有益である。よ り特定的に、トロンビンによるタンパク質分解は血液の凝固に必要である。トロ ンビンの阻害作用は血液凝固の有効な阻害剤をもたらす。有効なトロンビン阻害 剤の重要性は、ヘパリン（およびそのタンパク質阻害剤、アンチトロンビンIII との複合体）のような慣用の抗凝血物質が心筋梗塞および他の凝血障害と関連づ けられる動脈血栓症をブロックするのに効果的でないという観察の結果により強 調される。しかしながら、異なる官能基を含有する低分子量のトロンビン阻害剤 は動脈血栓症をブロックするのに有効であった〔HansonおよびHarkerのProc．Na tl．Acad．Sci.（米国），85,3184〜3188(1988年)〕。したがって、本発明者ら は緩衝液中および血漿中のトロンビンの阻害における本化合物の使用効果を証明 する ことを選択した。とりわけ、本化合物は心筋梗塞のような高められたトロンビン 活性から生じる疾患の治療のための薬剤として、または診断および他の商業目的 のため血液の血漿へのプロセッシングにおいて抗凝血物質として使用される試薬 として役立つ。 血液生産物のプロセッシングにおいて使用される場合、本発明の化合物は抗凝 血物質を加える必要なく全血と混合されうる。本発明の化合物は血液凝固を阻害 する働きをし、それにより全血の所望の細胞成分または血漿タンパク質へのプロ セッシングを容易にする。プロセッシングの終了後、本化合物を所望ならば膜限 外濾過、透析または隔膜濾過（diafiltration）により除去して所望の生産物を 得ることができる。低分子量のこれらの化合物はヘパリンのような慣用の抗凝血 物質と比べてより容易に所望の生産物から分解することができる。 本発明の化合物は異常なタンパク質分解およびそれに伴なう幾つかの疾患状態 、例えば炎症、膵臓炎および遺伝性血管浮腫のコントロールにおいて有効である と考えられる。 血液凝固プロテアーゼトロンビンの阻害剤としての、本発明の化合物の生体外 の有効性を２つの異なる条件の下で測定した：（１）合成基質を使用する緩衝液 中での測定；（２）血漿中での測定（血液凝固の速度が測定される）。前者の方 法では、色素産生基質Ｓ2238（H-(D)Phe-Pip-Arg-PNA、ここでPIPはピペコリン 酸である；Helena Laboratories Beaumont，TX）をKettnerらのJ．Biol．Chem． 265,18289〜18297（1990年）に記載のものと同様の手順に従って使用した。この 加水分解はpNAの放出をもたらし、それを分光光度計で観測し、405nmにおける吸 光度の増加を測定した。基質加水分解につ いてのミカエリス定数KmはLineweaverおよびBurkの方法を使用して0.20Ｍ NaCl を含有するpH7.5の0.10Ｍリン酸ナトリウム緩衝液および0.5％PEG 8000中、25℃ で測定した。 トロンビン（0.19nM）を基質（0.20mM）と阻害剤の存在下で反応させることに よりKi値を測定した。反応を30分間行ない、速度（吸光度の変化度対時間）を25 〜30分の時間枠で測定した。次の関係式を使用してKi値を計算した。 〔式中、voは阻害剤の不在下での対照の速度であり、 vsは阻害剤の存在下での速度であり、 Ｉは阻害剤の濃度であり、 Kiは酵素；阻害剤複合体の解離定数であり、 Ｓは基質の濃度であり、そして Kmはミカエリス定数である〕 血漿中のトロンビンの血液凝固活性の阻害作用をウサギの血漿中で測定した。 3.2％クエン酸水溶液で血液を１：10に希釈し、遠心分離することにより血漿を 調製した。緩衝液は0.9％塩化ナトリウムを含有するpH7.4の0.10Ｍ Trisおよび2 .5mg／mlのウシ血清アルブミンで構成された。ウシのトロンビンはSigma社から 入手し、24NIH単位／mlに希釈した。阻害剤を含有する血漿（200μl）および緩 衝液（50μl）をフィブラメーター（fivrameter）中、37℃で３分間インキュベ ートした。トロンビン（50μl）を加えて反応を開始し、凝血時間を測定した。 阻害剤を含まないことを除けば同一の条件で 対照を行なった。トロンビンの最終濃度は４NIH単位／mlであった。 凝血時間の延長に対する本化合物の有効性についての他の尺度はIC50（阻害剤 の不在下で２NIH単位／mlのトロンビンについて観測さ れた時間に相対して凝血を長くするのに必要な阻害剤の濃度）として報告するこ とができる。本発明の化合物についての代表的なデータでは、実施例３、７、９ 、11および12がそれぞれ0.25、0.075未満、0.10、0.60および0.85μMでトロンビ ンの凝血時間を２倍に増加した。 生体内での抗凝血物質としての本発明の化合物の有効性は、0.5〜10mg／kgの 投与量で本化合物を経口または静脈内投与した後の、意識を有するイヌまたは麻 酔をかけたラットから採取した血液試料の活性化部分血栓形成時間（activated partial thromboplastintime）の延長により証明された。動脈血または静脈血を シリンジで採取し、１／10容量の3.2％クエン酸ナトリウムと混合した。遠心分 離して血漿を得、そして標準的な臨床上の活性化部分血栓形成時間（APTT試薬、 Sigma Chemical社製）をフィブロメーターで37℃において測定した。投与後別々 の時間に採取した血液試料からの結果は少なくとも投与前に得られた値と比べて ２倍の活性化部分血栓形成時間に等しい、有効な抗凝血応答を示した。このモデ ルにおいて、実施例４、57および77は静脈内投与後有効であり、そして実施例４ 、56、57、60および66は経口投与後有効であることがわかった。同様に、実施例 31および54の経口投与は活性をトロンビンの凝血時間の増加により測定すること を除けば同一のモデルにおいて、少なくとも２倍の抗凝血活性をもたらした。 Detailed Description of the Invention                           Invention title               Amidino- and guanidino-substituted boronic acids               Trypsin-like enzyme inhibitor                   Cross-reference of related applications   This application is a continuation-in-part application of US patent application 08 / 052,835 filed April 27, 1993. It                             Field of the invention   The present invention generally relates to α-aminoboronic acids, and the α-substituent is an aromatic guanidino, Sothiouronium, amidino group, halogen, cyano group, or aliphatic amidino To the corresponding peptide analogues, which are isothiouronium or formamidino groups Related.                             Background of the Invention   Simple boronic acids are inhibitors of serine proteases. Bio by Koehler et al. Chemistry 10; 2477 (1971) shows 2-phenylethaneboronic acid in millimolar concentrations. It has been reported to inhibit chymotrypsin. N-acyl-α-amino acid The synthesis of rhoic acid analogs provided more effective inhibitors. Ac-boro Phe-OH, R-1- Acetamido-2-phenylethaneboronic acid induces chymotrypsin with 4 μM KiBlocked by (Matteson et al., J. Am. Chem. Soc., 103; 5241 (1981)). Recently, Shenvi In U.S. Pat. No. 4,537,773 (1985), α-amino containing free amino groups. It has been disclosed that the boronic acid analog of the acid is an effective aminopeptidase inhibitor. Shenvi, U.S. Pat. No. 4,499,082 (1985), discloses an α-aminoborol with a neutral side chain. Acid-containing peptides are three orders of magnitude more potent than the initially disclosed inhibitors It is disclosed to be an effective serine protease inhibitor. α-aminoboro Acid chemistry is based on a peptide analog containing a boronic acid with a positively charged side chain, borolici For the synthesis of benzene, boroarginine, boroornithine and isothiouronium analogues Developed (EPA 0 293 881,12 / 7/88). These compounds are thrombin and others Gave a very effective inhibitor of the trypsin-like enzyme. Specially with thrombin inhibitors Designed boroarginine analogs for blood coagulation both in vivo and in vitro Very effective in inhibition. In the present invention, compounds of this group are aliphatic amines. Zino and formamidino, aromatic amidino and guanidino, and cyano and And halogen-substituted aromatic boronic acid analogs.   It should be noted that other boronic acids are disclosed. Metternich (EP 047 1651) is a boroarginine containing at least one unnatural amino acid residue and Disclosed are peptides containing borolysine. Elgendy et al. Tetrahedron Lett. , 33, 4209-4212 (1992) is a thrombin inhibitor with a neutral aliphatic side chain Disclosed are peptides containing α-aminoboronic acid. Kakkar (WO 92/078 69) is the general structural formula X-Aa.1-Aa2-NH-CH (Y) -Z (where Aa1And Aa2Is an unnatural amino Acid residue) peptide thrombin inhibitors are claimed. Z is -CN, -CO R, -B (R2) (R3), -P (O) (R) (R), and Y is-[CH2] N-Q or -CH2-By AR-Q Yes, where Q = H, amino, amidino, imidazole, guanidino or Sothioureido, n = 1-5, and R2And R3Are the same or different OH, OR6And NR6R7Selected from the group consisting of or R2And R3Together Represents a diol residue. Z is -B (R2) (R3) Within this scope of the invention is this particular group of compounds. This is the narrowness of Kakkar et al. Note that this is a large subset. However, these compounds It requires specific chemical transformations to be manufactured and Kakkar et al. Is not disclosed.                             Summary of the invention   The invention has the formula (I) (Where R1Is a) -CN, -C (NH) NHR6, -NHC (NH) H, -NHC (NH) NHR6, -SC (NH) NHR6, -N HC (NH) NHOH, -NHC (NH) NHCN, -NHC (NH) NHCOR6C replaced by1~ C12-Alkyl, Or   X is a) halogen (F, Cl, Br, I),       b) -CN,       c) -NO2,       d) -CF3,       e) -NH2,       f) -NHC (NH) H,       g) -NHC (NH) NHOH,       h) -NHC (NH) NHCN,       i) -NHC (NH) NHR6,       j) -NHC (NH) NHCOR6,       k) -C (NH) NHR6,       l) -C (NH) NHCOR6,       m) -C (O) NHR2,       n) -CO2R2,       o) -OR2,       p) -OCF3, Or       q) -SC (NH) NHR6And   R2Is a) H,       b) C1~ CFour-Alkyl,       c) Aryl, where aryl is optionally halo (F, Cl, Br, I) , C1~ CFour-Alkyl, C1~ CFour-Alkoxy, -NO2, -CF3, -S (O) r-C1~ CFour-Al Kill, -OH, -NH2, -NH (C1~ CFour-Alkyl), -N (C1~ CFour-Alkyl)2, -CO2RFour A phenyl substituted with one or two substituents selected from the group consisting of Is naphthyl), or       d) -C1~ CFour-Alkylaryl (wherein aryl is as defined above) Is the street);   R3Is H, alkyl, aryl, alkylaryl or 1 to 20 carbon atoms Consisting of NH2A blocking group;   RFourAnd RFiveIndependently       a) H,       b) C1~ CFour-Alkyl, or       c) -CH2-Aryl, where aryl is as defined above ) Is;   R6Is a) H,       b) C1~ CFour-Alkyl,       c) Aryl, where aryl is optionally halo (F, Cl, Br, I) , C1~ CFour-Alkyl, C1~ C7-Alkoxy, -NO2, -CF3, -S (O) r-C1~ CFour-Al Kill, -OH, -NH2, -NH (C1~ CFour-Alkyl), -N (C1~ CFour-Alkyl)2, -CO2RFour A phenyl substituted with one or two substituents selected from the group consisting of Is naphthyl), or       d) -C1~ CFour-Alkylaryl (wherein aryl is as defined above) Is the street);   A is an amino acid residue or a peptide consisting of 2 to 20 amino acid residues;   Y1And Y2Is       a) -OH,       b) -F,       c) C1~ C8-Alkoxy, or   Y1And Y2Are together       d) Cyclic boron ester (wherein the chain or ring is 2 to 20 carbon atoms, Optionally containing 1 to 3 heteroatoms which are N, S or O) Do;   n is 0 or 1;   p is 0-3;   q is 0-4;   r is 0-2. However, R1Is aliphatic, then —NHC (NH) NHR6Substituent R6Is Not H] And a pharmaceutically acceptable salt thereof.   Preferred compounds of formula (I) are Y1And Y2But       a) -OH, or   Y1And Y2Together       b) Cyclic boron pinacol ester or       c) forming a cyclic boron pinanediol ester;   R1Is a)-(CH2)3NHC (NH) H,       b)-(CH2)FourC (NH) NH2,   R2Is H;   A is Pro or (D) Phe-Pro;   R3A) H,       b) Boc,       c) Z,       d) Ac,       e) hydrocinnamoyl,       f) C1~ CTen-Alkylsulfonyl, or       g) C1~ CFifteenA compound that is an alkylarylsulfonyl.   Representative examples of preferred compounds of the invention are as follows: ・ Ac- (D) Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)FourCN] BO2-CTenH16 ・ Ac- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)FourC (NH) NH2] BO2-CTenH16 ・ Ac- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] B (OH)2 ・ Boc- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] B (OH)2 ・ Ac- (D) Phe-Pro-boro Phe 〔m-C (NH) NH2] -CTenH16 ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (m-CH2NH2) -CTenH16 ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (m-Br) -CTenH16 ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Arg (CN) -CTenH16 ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (p-CN) -CTenH16 ・ Boc- (D) Phe-Pro-Boro Phe- (m-CN) -CTenH16 ・ N, N- (CH3)2-(D) Phe-Pro-boro Phe- (m-CN) -OH.HCl (Isomer I) ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe- (m-CN) -OH ・ HCl ・ Ms- (D) Phe-Pro-Boro Phe- (m-CN) -OH ・ HCl ・ Boc- (D) thiazolylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16 ・ Boc- (D) 3-pyridylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16 ・ Ms- (D) 3-Pyridylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16 ・ Boc- (D) 2-pyridylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16 ・ Boc- (D) 2-thienylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16 ・ Ms- (D) 2-thienylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16 ・ Boc- (D) Phe-Aze-Boro Phe- (m-CN) -CTenH16 ・ Hydrocinnamoyl-Pro-boro Irg (CH3) -OH ・ HBr ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Arg (CH3) -OH / HCl ・ PhCH2SO2-(D) Phe-Pro-Boro Orn (CH = NH) -OH ・ HCl ・ CH3CH2CH2SO2-(D) Phe-Pro-Boro Orn (CH = NH) -OH ・ HCl ・ CH3CH2CH2SO2-(D) Phe-Pro-Boro Arg (CH3) -OH / HCl ・ Ac- (D) Phe-Sar-boro Orn (CH = NH) -OH ・ HCl ・ Boc- (D) Phe-Sar-Boro Phe (mCN) -CTenH16 ・ Boc- (D) Phe-Aze-Boro Orn (CH = NH) -HO ・ HCl ・ 4- (Phenyl) benzoyl-boro Orn (CH = NH) -CTenH16・ HCl   The invention also relates to compositions containing one or more of the above compounds, as well as mammalian blood. In the treatment of abnormal protein hydrolysis such as thrombosis, or in diagnosis and other Used as an anticoagulant in the processing of blood into plasma for commercial purposes. A method of using such a composition as a reagent is provided.                             Detailed description of the invention   Throughout this specification the following abbreviations for amino acid residues or amino acids are used: Do:   Ala = L-alanine   Arg = L-arginine   Asn = L-asparagine   Asp = L-aspartic acid   Aze = Azedin-2-carboxylic acid   Cys = L-cysteine   Gln = L-glutamine   Glu = L-glutamic acid   Gly = Glycine   His = L-histidine   HomoLys = L-homolysin   Ile = L-isoleucine   Irg = isothiouronium analog of L-Arg   Leu = L-leucine   Lys = L-lysine   Met = L-methionine   Orn = L-ornithine   Phe = L-phenylalanine   Pro = L-proline   Ser = L-serine   Thr = L-threonine   Trp = L-tryptophan   Tyr = L-tyrosine   Val = L-valine   Sar = L-sarcosine   Phe (4-fluoro) = para-fluorophenylalanine   The "D" preceding the abbreviation indicates that the amino acid is in the D-configuration. It "D, L" indicates that the amino acids exist in a mixture of D- and L-configurations ing. The "boro" that precedes the carboxyl is boronic acid or boronic acid ester. The amino acid residue that is replaced with ter is shown. For example, R1Is isopropyl and Y1Oh And Y2Is OH, the C-terminal residue is abbreviated as “boro Val-OH” and “-OH is boron. Indicates that the acid is in the free acid form. Pinanediol boronate and Each nacol boronate ester has a "-CTenH16] And "-C6H12Is abbreviated as . Examples of other useful diols for esterification with boronic acids are 1,2-ethanedio , 1,3-propanediol, 1,2-propanediol, 2,3-butanediol , 1,2-diisopropylethanediol, 5,6-decanediol and 1,2-dicis It is chlorhexylethanediol. Formamidino modified amino group Is abbreviated (CH = NH). For example, -boro Orn-OH-{-NH-CH [(CH2)3-NH-CH (NH) H] B (OH)2} Is a -boroOrn (CH = NH) -OH. Side chain substituents The analogs contained are described by showing the substituent in parentheses after the name of the parent residue. To be done. For example, an analog of borophenylalanine containing a meta-cyano group is- Boro Phe (mCN)-. Boro Arg- Guanidino or Isothiouronium analog N-alkyl substituents of the form (boroIrg) are also bracketed. Other abbreviations Is Z, benzyloxycarbonyl; BSA, benzene sulfonic acid; THF, tetrahydr Rofuran; Boc-, t-butoxycarbonyl; Ac-, acetyl; pNA, p-nitro- Aniline; DMAP, 4-N, N-dimethylaminopyridine; Tris, Tris (hydroxy Cimethyl) aminomethane; MS, mass spectrometry; FAB / MS, fast atom bombardment Hit mass spectrometry. LRMS (NH3-CI) and HRMS (NH3-CI) NH3Low and high resolution mass spectrometry using helium as an ion source .   Many of the compounds of the present invention contain one or more chiral centers and their stereoisomers Are understood to have distinct physical and biological properties. The invention is all Stereoisomers of or a mixture thereof. Pure enantiomer or di If the stereoisomers are desired, they should be prepared using the appropriate configuration of the starting materials. Can be prepared, or of chiral chromatography or diastereomeric salts. Separation from a mixture of undesired stereoisomers by standard methods such as recrystallization be able to.   As used herein, "NH2-A "blocking group" consists of 1 to 20 carbon atoms. Various acyl, thioacyl, alkyl, sulfonyl, Means phosphoryl and phosphinyl groups. The substituents on these groups are heteroatoms Alkyl, aryl which may contain O, S and N as a substituent or an internal chain component. Or may be alkylaryl. Some NH2-Blocking groups are organic Are known to those skilled in the art. By definition, NH2-Blocking groups can be removed , Or NH forever2Remains bound to. Examples of suitable groups are formyl, acetyl , Benzoyl, trifluoroacetyl and methoxysuccinyl; alkyl and And alkylarylsulfonyl groups such as n-propylsulfonyl, phenylmeth Cyl and benzylsulfonyl; aromatic urethane protecting groups such as benzyloxy Carbonyl; and aliphatic urethane protecting groups such as t-butoxycarbonyl or Is adamantyloxycarbonyl. Gross and Meinhoffer "Peptides , Vol. 3, 3-88 (1981) and Greene and Wuts, "Protective groups for organic synthesis", 31. 5 to 405 (1991) disclose a number of suitable amine protecting groups, which are Incorporated herein by reference.   As used herein, an "amino acid residue" is a natural or non-natural D- or L-configuration. Means a natural amino acid. Natural amino acid residues are Ala, Arg, Asn, Asp, Aze, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Irg, Leu, Lys, Met, Orn, Phe, Phe (4-fluoro) ), Pro, Sar, Ser, Thr, Trp, Tyr and Val. Roberts and Vellaccio "Peptides", Vol. 5, pp. 341-449 (1983), describes a number of suitable unnatural amino acids. Are disclosed and incorporated herein by reference. In addition, this document Similar N-alkyl and acyclic α, α-disubstituted amino acids are listed but Not. Inner chain and N-terminal amino acid residue N-alkyl, aryl and And alkylaryl analogs It is included in the range of light. Similarly, alkyl, aryl and alkylaryl are It can be replaced by α-hydrogen. Examples of N-alkyl and α-alkyl amino acid residues Each is shown below.   An "amino acid residue" also includes a suitable protecting group whose side chain functional group is known to those skilled in the art. Means various amino acids attached. "Peptides", Volume 3, 3-88 (1981 ) Disclose a number of suitable protecting groups, which are incorporated herein by reference. ItSynthesis   A novel peptide boronic acid containing an aliphatic side chain was prepared as shown in Scheme 1 Prepared by reaction. First, the precursor NH2-CH 〔(CH2) nBr] BO2-CTenH16(N = 3 Or 4) as described above [Kettner et al. Biol. Chem. 265, 18289-18297 (1990 )], And ligation with N-terminal protective group or N-terminal and side chain protected peptide I put them together. An example of this product is the above intermediate linked to Ac- (D) Phe-Pro-OH.1so is there.1Was treated with tetrabutylammonium cyanide in THF at 55 ° C for 2 hours. The corresponding alkyl cyanideTwoConverted to. This is a cyano group This is a common method of introduction. In contrast, other general methods of introducing this group You can use it, but it doesn't work very well. For example, Ac- (D) Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)Four-Br] BO2-CTenH16Was reacted with KCN in N, N-dimethylformamide, No detectable product was obtained. The inventors Data for cyclization resulting from nucleophilic substitution of side-chain bromide with adjacent amide NH. Consistent with the creation of objects. Z-NH-CH 〔(CH2)Four-Br] BO2-CTenH16To N, N-dimethylform Treatment with NaCN in the amide gave the cyano compound, but in low yield Suggests that in the presence of the urethane protecting group (Z), cyclization does not occur easily. ing. Typically,TwoA standard method such as silica gel chromatography Purified by. Saturated solution of a mineral acid such as HCl in nitrile in methanol Corresponding amine by treatment withThreeWas manufactured. Evaporate excess solvent and acid And removed and the residue was reacted with aqueous ammonia solution to give the desired product. .   Formamidino-substituted boronic acid5Ac- (D) Phe-Pro-Boro Orn-CTenH 16 4Like a pair Prepared by synthesis of the corresponding alkylamine (Scheme 2). this is1Azide Treated with sodium, then hydrogenated Manufactured (Kettner et al., 1990). AmineFourTreated with ethylformimidate Formamidino compound5Got   N-substituted isothiouronium derivatives and N-substituted guanidines are described in Scheme 2a It is easily manufactured as shown in. Bromide1Directly with thiourea Isothiouroniumtwenty oneTo generate. Alternatively, as shown in Scheme 2, hand1The amineFourCan be converted to. Kim et al. Tetrahedron Lett. 29, 3183 Amine using the method first described in (1988)FourIn the presence of 4-DMAP, Guamidine heated with formamidine sulfonic acidtwenty twoGet. Required Holm Amidinesulfonic acid can be produced by oxidizing the corresponding thiourea (Walt er and Randau's Liebigs Ann. Chem. 722, 98 (1969)).   Substituted boronic acid7Is J. of Barpill et al. Hereocyclic Chem. 25, 1698 (1988) In the same way as described aboveFourWith dimethyl cyanodithioimino carbonate or dif S-methylisourea (6 ) Or by producing O-phenylisourea (Scheme 3) . This intermediate is treated with ammonia in THF or alcohol to give the desired product. obtain.   Hydroxy guanidino inhibitorsFourThe cyanogen bromide or cyanogen chloride, next Treated with hydroxylamine8Is produced by generating (scheme 4). These are known chemical transformations. [Nakahara et al., Tetrahedron, 33, 1591 (1977) and Belzecki et al. Chem. Soc. Chem. Commun., 806 (1970)].   The production of the novel aromatic boronic acid is shown in Scheme 5. Halogen or cyano substitution Functionalized benzyl anions containing groups (examples show cyano groups) are THF or Obtained by treatment with activated Zn metal followed by CuCN.2LiCl in another inert solvent. [Berk et al., Organo-metallics 9, 3053-3064 (1990)]. Dichloromethylbo Pinanediol Ronate in Organometallics 2,1543-1545 (1983) by Tsai et al. It was prepared by the method described. Reacting it with a metal transfer anion9Generated . This is the only acceptable method of producing these functionalized benzyl anions. It was. For example, Michel et al. Organometallic Chem. 204, 1 to 12 (1981) P-Nitrobenzyl chloride was treated with lithium metal by the method described and No product was obtained. Similarly, Zhu et al. Org. Chem. 56, 1445 ~ 1453 (1991) using p-cyanobenzyl chloride in ZnCl 2 using the conditions described.2In the presence of Treatment with lithium naphthalenide did not yield the desired product.   α-aminoboronic acidTenIs9Treated with lithium salt of hexamethyldisilazane, And was obtained by treating the trimethylsilanyl group with anhydrous HCl to remove it. .TenWas attached to the N-terminal protecting group or peptide by known methods.   Aliphatic amidino compoundsThreeAromatics in the same reaction sequence as described for the preparation of Substituted cyanide11Corresponding amidino compound12Converted to.   11By hydrogenating the corresponding aminomethyl group to an aromatic substituent13Can get as Yes (Scheme 6). Corresponding formamidino, cyanoguanidino, hydroxy Ciguanidino and guanidino compounds (14,Fifteen,16and17) Is each It is prepared by the procedure described for the aliphatic system of Form 1.   Aromatic guanidino inhibitors20Is the precursor R-boro Phe-CTenH16Manufactured from (ski 7). NO aromatic ring+BFFour -React with and nitrate18To get the corresponding Min19Reduced to. The amine is aminoiminomethanesulfonic acid [Tetrah of Mosher et al. edral Lett. 29, 3183 (1988)] or cyanamide (Kettner et al., 1990) It is converted to guanidine by the reaction.   The NMR chemical shifts of proton nuclear magnetic resonance are calculated from the internal standard tetramethylsilane. It is expressed in unfield δ units (ppm). Galbraith Laboratories for elemental analysis Inc. And Microanalysis Inc. Did. FAB / MS sample of free boronic acid Difficult to monitor removal of ester protecting groups by this means without giving consistent results I chose However, the presence of the pinanediol and pinacol groups was confirmed by NMR spectroscopy. It is easily observed in Torr. The methyl group of pinanediol ester was observed at δ 0.9. And the methyl group of the pinacol group is observed as a singlet at δ1.1. Pinang After removal of the diol protecting group, the sample was treated with about 2 equivalents of pinacol in methanol. Process for minutes and evaporate the solvent Then MS was performed. Similarly, MS of free boronic acid obtained by removing pinacol Samples were prepared by treatment with pinanediol. In some cases, ethylene glycol Boronic acid-ethylene glycol was used as a matrix for mass spectrometry. Cole ester (designated as EG ester) was obtained. Analytical data for the following examples The data are shown in Table 1. Example 1 Ac- (D) Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)FourCN] BO2-CTenH16Synthesis of   Intermediate Ac- (D) Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)FourBr] BO2-CTenH16Using the mixed anhydride method Manufactured. Ac- (D) Phe-Pro-OH (3.04 g, 10 mmol) was dissolved in 50 ml of THF and N -Methylmorpholine (1.1 ml, 10 mmol) was added. CCl the solutionFourdry ice Cool to −20 ° C. using a bath and isobutyl chloroformate (1.30 ml, 10 millimolar). Le). After 5 minutes at -20 ° C, NH dissolved in 20 ml of THF and pre-cooled to -20 ° C2 -CH 〔(CH2)FourBr] BO2-CTenH16-The mixture was added to HCl (3.81 g, 10 mmol). bird Ethylamine (1.39 ml, 10 mmol) was added, the mixture was at -20 ° C for 1 hour, and Stir at room temperature for 2 hours. Insoluble material was removed by filtration and the filtrate was evaporated under reduced pressure. I let you. The residue was dissolved in 50 ml of ethyl acetate and 75 ml of 0.2N HCl, 5% NaHCO.3And And washed successively with saturated aqueous sodium chloride solution. The organic phase is Na2SOFourDried on Concentrated under vacuum and Ac- (D) Phe-Pro-NHCH [(CH2)FourBr] BO2-CTenH16(6.01g, yield 95 %).   Bromide (1.89 g, 3.0 mmol) and tetra-n-butylammonium cyanide (3.2 g, 11.8 mmol, 4 eq) was dissolved in 50 ml of acetonitrile. This melt The solution is heated at 90 ° C for 3 hours and the solvent is removed under reduced pressure. Removed in. Dissolve the residue in 50 ml of ethyl acetate and add 50 ml of saturated aqueous NaCl solution. The solution was washed 3 times. Ethyl acetate solution is anhydrous Na2SOFourDried over and evaporated to give 2.5 g A crude product was obtained. CHCl as an eluent3Silica gel using 5% MeOH in Purification by chromatography gave the desired product (0.50 g, 29% yield).   LRMS (NH3-CI) m / e [M (C32H45NFourOFiveB) + NHFour +] Calculated: 594.4, Measured: 594   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C32H45NFourOFiveB) + H+] Calculated value: 577.3561, Measured value: 577.35 55 Example 2 Ac- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)FourC (NH) NH2] -BO2-CTenH16・ Synthesis of benzenesulfonic acid   Nitrile (Example 1, 0.40 g, 0.70 mmol) was added to saturated HCl in methanol. Was dissolved in 50 ml of a cold solution of and the solution was stirred overnight at 4 ° C. The solution is then concentrated under reduced pressure It was Dissolve the residue in anhydrous methanol (50 ml) and add NH.3Bubble gas in solution for 1 hour The solution was heated at 50 ° C. for 3 hours. Evaporate the solvent and remove the residue from the Suspended in Nol and added 0.11 g of benzenesulfonic acid (1 eq). Methano The residue was triturated with hexane to give the desired product as a pale yellow powder. Obtained (0.52 g, yield 99%).   FABMS: m / e [M (C32H48NFiveOFiveB) + H+] Calculated: 594.38, Measured: 594.14   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C32H48NFiveOFiveB) + H+] Calculated: 594.3827, Measured: 594.38 twenty four Example 3 Ac- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3NHC (NH) H] BO2-CTenH16Or Ac- (D) Phe-Pro-Boro Or n (CH = NH) -CTenH16Synthesis of   Ethylformimidate.HCl was added to Ohme and Schmitz's Angew. Chem. Internat ． 6th edition, 566 (1967) and manufactured by the method described in Ac- (D) Phe-Pro- Orn-CTenH16Was manufactured by the method of Kettner et al. (1990). Holmimi dating (1.29 g, 11.7 mmol) and 4-N, N-dimethylaminopyridine (1.44 g) Ac- (D) Phe-Pro-boro Orn-C dissolved in 0 ml ethanolTenH16・ BSA (2.78g, 3.92 Mi Limol). The resulting solution was refluxed for 8 hours. After removing the solvent, The residue was used as a column on Sephedex® LH 20 and methanol as the solvent. Purification by in-house chromatography gave pure product (1.28 g, 56% yield). %).   HRMS (NH3-CI) m / e 〔M (C31H46BNFiveOFive) + H+] Calculated: 580.3670, Measured: 580.367 9 Example 4 Ac- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] B (OH)2Synthesis of   Estée using the method previously disclosed by the inventors in US patent application 08/010731 Exchanged, Ac- (D) Phe-Pro-NHCH [(CH2)3-NHC (NH) H] -BO2-CTenH16・ HCl (Implementation The pinanediol protecting group on the boronic acid moiety of Example 3) was removed. Pinandiol S Tell (0.30 g, 0.51 mmol) and phenylboronic acid (0.31 g, 2.6 mmol) Was suspended in 10 ml of a 1: 1 mixture of ether and water and stirred at room temperature for 2.5 hours. The phases were separated and the aqueous phase was washed well with ether. The aqueous phase was evaporated to give a solid. This material was triturated with ether to give the desired product as a white amorphous solid (0. 20 g, yield 83%).   LRMS (NH3-CI) m / e [Pinacol ester M (C27H42NFiveOFiveB) + H+] Calculated: 528.3 , Measured value: 528   HRMS (NH3-CI) m / e [Pinacol ester M (C27H42NFiveOFiveB) + H+] Calculated: 528.33 57, measured value: 528.3347 Example 5 Boc-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] BO2-CTenH16Synthesis of   Boc-Pro-Boro Orn-CTenH16-BSA is also prepared by the method described above (Kettner et al., 1990). Manufactured. Dissolve this peptide (3.0 g, 6.5 mmol) in 25 ml absolute ethanol , 4-N, N-dimethylaminopyridine (1.6 g, 12.9 mmol) and ethylform Muimidate.HCl (1.4 g, 12.9 mmol) was added. Solution at 85 ° C oil bath at 1:00 Heated for a while. The solvent was evaporated, the residue was dissolved in methanol and LH in methanol was added. Chromatography on 20 columns (2.5 x 100 cm) gives 1.3 g of the desired product. Got   LRMS (NH3-CI) m / e [M (Ctwenty fiveH43NFourOFiveB) + H+] Calculated: 491.5, Measured: 491 Example 6 Boc- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] BO2-CTenH16Synthesis of   The reaction was carried out using the method described in Example 3. Boc- (D) Phe-Pro-Boro Orn-CTen H16-BSA (3.7 g, 4.78 mmol), 4-N, N-dimethylaminopyridine (1.71 g , 13.8 mmol) and ethylformimidate HCl (1.54 g, 13.8 mmol) Was dissolved in 50 ml of absolute ethanol and heated at 85 ° C. for 7 hours. LH20 the desired product Chromatography on a column gave a yield of 1.56 g.   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C34H52NFiveO6B) + H+] Calculated: 638.4089, actual Measured: 638.4082 Example 7 Boc- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] B (OH)2Synthesis of   Boc- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] BO2-CTenH16・ 0.40BSA, 0.60HCl (actual Example 6, 0.16 g, 0.22 mmol) and phenylboronic acid (0.13 g, 1.1 mmol) ) Was placed in a mixture of 5 ml ether and 5 ml water and stirred at room temperature for 4 hours. The phases were separated and the organic phase was washed with 5 ml water. Wash the combined aqueous phases thoroughly with ether. Clean The aqueous phase is evaporated and the residue triturated with ether to give the desired product as a white solid. Obtained as a body (0.10 g).   LRMS (NH3-CI) m / e [Pinacol ester M (C30H48NFiveO6B) + H+] Calculated: 586.4 , Measured value: 586   HRMS (NH3-CI) m / e [Pinacol ester M (C30H48NFiveO6B) + H+] Calculated: 586.37 76, found: 586.3772 Example 8 H- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] BO2-CTenH16・ Synthesis of 2HCl   Boc- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] BO2-CTenH16・ 0.40BSA, 0.60HCl (actual Example 6, 0.20 g, 0.25 mmol) was dissolved in 2 ml of 4N HCl: dioxane, Stir for 1 hour at warm. The solvent was evaporated and the residue triturated with ether to give 0.18 g. The desired product was obtained.   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C29H44NFiveOFourB) + H+] Calculated: 538.3565, Measured: 538.35 69 Example 9 H- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] B (OH)2Synthesis of   H- (D) Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)3-NH-C (NH) H] BO2-CTenH16・ 0.35BSA, 0.65 HCl (Example 8, 0.10 g, 0.16 mmol) was used according to the method described in Example 4. Reaction with phenylboronic acid gave the desired product (0.053g).   LRMS (NH3-CI) m / e [Pinacol ester M (Ctwenty fiveH40NFiveOFourB) + H+] Calculated: 486.3 , Measured value: 486   HRMS (NH3-CI) m / e [Pinacol ester M (Ctwenty fiveH40NFiveOFourB) + H+] Calculated: 486.32 51, actual value: 486.3255 Example 10 H2NCH 〔CH2C6HFour-m-CN] BO2CTenH16・ HCl or H-boro Phe (m-CN) -CTenH16・ HCI synthesis   First intermediate Cl-CH [CH2-(m-Cyanophenyl)] BO2-CTenH16M-shear bromide Prepared from nobenzyl and dichloromethylboronate pinanediol. 1 Zinc powder (1.0 g) in ml THF was cooled to 0-5 ° C and added in 7 ml THF. A solution of m-cyanobenzyl bromide (1.37 g, 7.0 mmol) was added dropwise (5 seconds / drop). . The reaction mixture was stirred at 5 ° C. for 2 hours. LiBr (1.22 g, 14 mmol), CuCN (0.6 3 g, 7.0 mmol) and 6 ml of THF in a 50 ml flask, Cooled to -40 ° C. Then benzylic organozinc reagent was added by cannula insertion . The mixture was warmed to -20 ° C and stirred for 5 minutes. Cool it to -78 ° C and purify Pinandiol dichloromethylboronic acid (1.47 g, 5.6 mmol) was added dropwise. Profit The resulting mixture was stirred at −78 ° C. for 2 hours and at room temperature for 2 days. Saturated NHFourCl water soluble Liquid (20 ml) was added to the mixture and the aqueous solution was extracted three times with 20 ml of ether each time. The combined organic layers were dried over anhydrous MgSOFourDried above and evaporated under vacuum to give crude compound (1.8g). Add it to hexane (100 ml), then Silica gel eluting the column stepwise with 15% ether in hexane (200 ml). Purification by chromatography gave the desired product (0.53 g, 27% yield).   LRMS (NH3-CI) m / e [M (C19Htwenty threeNO2BCl) + NHFour +] Calculated: 361.2, Measured: 361.1   A solution of hexamethyldisilazane (0.21 ml, 0.98) in 2 ml THF at -78 ° C. N-butyllithium (1.45 M, 0.67 ml, 0.98 mmol) to a solution of I got it. Warm the solution slowly to room temperature to ensure complete anion formation. It was The resulting solution was cooled to -78 ° C and Cl-CH [CH 2 in 2 ml of THF2-(m-Cyanof BO)2-CTenH16(0.33 g, 0.98 mmol) was added. Warm the mixture to room temperature And stirred overnight. The solvent was evaporated, and 8 ml of hexane was added to obtain a suspension. HCl in dioxane (4.1 N, 1.5 ml, 6.0 mmol) was added at -78 ° C. The mixture The mixture was slowly warmed to room temperature and stirred for 2 hours. Hexane (6 ml) was added, The crude product was isolated as a precipitate. The product is insoluble in chloroform Material was removed by filtration. The filtrate was evaporated under reduced pressure to give an oil (about 0.2g). . The final purification was Sephedex® LH 20 mL using methanol as the solvent. Performed by chromatography on a ram. H-boro Phe (m-CN) -CTenH16・ HCl Obtained as an oil (0.12 g, yield 34%).   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C19H26BN2O2) + H+] Calculated: 325.2087, Measured: 325.20 94 Example 11 Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (m-CN) -CTenH16Synthesis of   Ac- (D) Phe-Pro-OH (0.10 g, 0.33 mmol) and N-methyl Ruphorin (0.037 ml, 0.33 mmol) was added to isobutylchloro in 5 ml of THF at -20 ° C. Reacted with formate (0.043 ml, 0.33 mmol). After 5 minutes, dissolve in 3 ml of cold THF. Solved H-boro Phe (m-CN) -CTenH16HCl (Example 10, 0.12 g, 0.33 mmol) and And triethylamine (0.046 ml, 0.33 mmol) were added. Mix at -20 ° C for 1 Stir for 1 h and at room temperature for another 1 h. Remove insoluble material by filtration and dissolve The medium was evaporated. The residue was dissolved in ethyl acetate and 0.20 NHCl, 5% NaHCO3 And washed with saturated aqueous NaCl solution. The organic layer is anhydrous Na2SOFourDried over and steamed under vacuum Emission gave 0.2 g of an oil. Place it on the column of Sephedex® LH 20 Purification by chromatography gave 0.13 g of the desired product (yield 65%).   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C35H43BNFourOFive) + H+] Calculated: 611.3405, Measured: 611.34 16 Example 12 Ac- (D) Phe-Pro-boro Phe 〔m-C (NH) NH2] -CTenH16Synthesis of   Ac- (D) Phe-Pro-boro Phe (m-CN) -C of Example 11TenH16(50 mg) in methanol It was dissolved in 5 ml of a saturated solution of HCl in. The solution was stirred at 4 ° C overnight. Remove solvent After that, the residue was resuspended in 5 ml anhydrous methanol, cooled to 0 ° C. and Water NH3Was bubbled through the solution for 0.5 hours. It was heated at 60 ° C. for 6.2 hours. Steam solvent Evolved and added 1 equivalent of benzenesulfonic acid (13 mg) and 1 ml of methanol. . Solvent is N2Evaporate under and triturate the product with ether to give the desired product a light brown color. Obtained as a powder (65 mg, yield 100%).   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C35H47BNFiveOFive) + H+] Calculated: 628.3670, Measured: 628.36 88 Example 13 Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (m-CH2NH2) -CTenH16Synthesis of   Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (m-CN) -CTenH1610% Pd in 5 ml of methanol / C (25 mg) and 0.1 N HCl (0.41 ml) were added, and the mixture was added to H 22Below, at room temperature 2. Stir for 5 hours. The solution was filtered through Celite and washed with 20 ml methanol . The filtrate was concentrated under reduced pressure and the residue was triturated with ether to give pure product as a white powder. Obtained as powder (15.6 mg, yield 59%).   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C35H47NFourOFiveB) + H+] Calculated: 615.3718, Measured: 615.37 00 Example 14 Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (m-Br) -CTenH16Synthesis of   Cl-CH 〔CH2-(M-Bromo-phenyl)] BO2-CTenH16With b-bromobenzide To form the anion of the silane and attach it to the pinanediol dichloromethylboronic acid. It was manufactured by This intermediate and the corresponding amine are described in Example 10. Manufactured using the method. The amine was treated with Ac- (D) Phe-Pr using the method described in Example 11. Coupled to o-OH.   LRMS (NH3-CI) m / e [M (C34H43N3OFiveBrB) + H+] Calculated value: 666.3, Measured value: 666.2 Example 15 Ac- (D) Phe-Pro-Boro Arg (CN) -CTenH16Synthesis of   Ac- (D) Phe-Pro-Boro Orn-CTenH16・ HCl (0.15 g, 0.25 mmol), triethyl Min (0.035 ml, 0.25 mmol) and diphenylcyanocarbonimidate (A ldrich, 0.060 g, 0.25 mmol) in THF Gently heated at reflux for 5 hours and then stirred at room temperature overnight. Sample with chloroform Dilute and wash with water and saturated aqueous NaCl. K it2CO3Dried over and with solvent Silica gel chromatograph using methanol: chloroform (1: 9) 80 mg of Ac- (D) Phe-Pro-NH-CH [(CH2)3-NH-C (N-CN) O-Ph] BO2- CTenH16Got   LRMS (NH3-CI) m / e [M (C38H49N6O6B) + H+] Calculated: 697.7, Measured: 697   Dissolve the above product (0.060 g, 0.080 mmol) in 0.5 ml of THF and let stand at room temperature for 30 minutes. It was reacted with 1 equivalent of 30% aqueous ammonia solution. Add 4 more equivalents of ammonia The solution was stirred overnight at room temperature. A large excess of ammonia was added and the reaction mixture at room temperature. Stir for 2 days. The reaction mixture was diluted with methylene chloride, water and saturated aqueous NaCl solution. Washed with. K it2CO3Dried over methanol and chloroform as solvents. Purified by chromatography on a silica gel column using a column (1: 9). To give 15 mg of the desired product.   LRMS (NH3-CI) m / e [M (C32H46N7OFiveB) + H+] Calculated: 619.5, Measured: 620 Example 16 Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (p-CN) -CTenH16Synthesis of   ClCH 〔CH2C6HFour-p-CN] BO2CTenH16To produce the anion of p-cyanobenzyl bromide , By combining it with dichloromethylboronate pinanediol did. This intermediate and the corresponding amine were prepared using the method described in Example 10. did. NH2CH 〔CH2C6HFour-p-CN] BO2CTenH16(Example 78) according to the method described in Example 11. Used to couple to Ac- (D) Phe-Pro-OH.   HRMS (NH3-CI) m / e [M (C35H43NFourOFiveB) + H+] Calculated: 611.3405, Measured: 611.34 08 Example 17 Boc- (D) Phe-Pro-Boro Phe (mCN) -CTenSynthesis of H16   Boc- (D) Phe-Pro-OH (0.43 g, 1.2 mmol), H-boro Phe (mCN) -CTenH16・ HCl ( 0.42 g, 1.2 mmol), N-methylmorpholine (0.26 ml, 2.4 mmol), hydr Roxybenzotriazole / H2O (0.36 g, 2.4 mmol) and dicyclohexyl Rucarbodiimide (0.25 g, 1.2 mmol) in 20 ml of dichloromethane at room temperature. Boc- (D) Pre-Pro-boro Phe (mCN) -C by reacting overnightTenH16Was manufactured. reaction The mixture was filtered and the filtrate was a column of Sephedex LH-20 in methanol (2.5 x 100 cm). Chromatography above gave 0.36 g of the desired product. Example 18 H- (D) Phe-Pro-Boro Phe (mCN) -CTenH16・ HCI synthesis   Boc- (D) Phe-Pro-Boro Phe (mCN) -CTenH16(0.21 g) with 2 ml of 4N HCl dioxane Was reacted at room temperature for 2 hours. The solvent was evaporated off and the residue was triturated with ether. Gave 0.11 g of the desired product as a white solid. Example 19 Synthesis of H- (D) Phe-Pro-boro Phe (mCN) -OH ・ HCl   H- (D) Phe-Pro-Boro Phe (mCN) -CTenH16HCl (0.63 g, 1.0 mmol) in Example 7 Reaction with 5 equivalents of phenylboronic acid using the method described gives 0.46 g of product. Obtained. Example 20 Synthesis of N, N dimethyl- (D) Phe-Pro-boro Phe (mCN) -OH ・ HCl   H- (D) Phe-Pro-boro Phe (mCN) -OH.HCl (0.20 g, 0.42 mmol), 37% formua An aqueous solution of aldehyde (0.34 ml, 4.2 mmol) was dissolved in 2 ml of acetonitrile. Sodium cyanoborohydride (0.080g, 1.3mmol) was added and after 5 minutes glacial acetic acid. (20 μl) was added. The reaction pH was about 7. After 5 hours, add more acetic acid (20 μl) The mixture was stirred for 1 hour. The reaction mixture was poured into 20 ml of ethyl acetate and The organic phase was washed with 10 ml of saturated aqueous sodium chloride solution and dried over anhydrous sodium sulfate. did. Evaporation of solvent gave 0.16 g of an oil which was triturated with ether to give a white A solid was obtained. Example 52 Ac- (D) Phe-Pro-NH-H 〔(CH2)3SC (NH) NHCH3] B (OH)2Synthesis of   Intermediate Ac- (D) Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)3Br] BO2CTenH16The mixed anhydride method of Example 1 Was manufactured using. This bromide (0.35 g, 0.5 7 mmol) and 1-methyl-2-thiourea (0.077 g, 0.85 mmol) in solution Was refluxed for 18 hours. After cooling, the solvent was removed under vacuum and the product was Sephadex®. Standard) Excess of excess using chromatography on LH-20 gel (elution: methanol) Separation from thiourea gave 0.31 g (77%) of the isothiouronium product. next The boronate ester (0.28 g) was deprotected as described in Example 4 to give 0.1 Obtained 3 g (57%) of the desired product.   LRMS (ESI) m / e 〔M (Ctwenty twoH34BNFiveOFiveS) + H+] Calculated value: 492, Measured value: 492   HRMS (NH3-CI) m / e [Ethylene glycol ester M (Ctwenty fourH36BNFiveOFiveS) + H+〕Calculated values : 518.260847, Found: 518.261656 Example 54 Ac- (D) Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)3NHC (NH) NHCH3] B (OH)2Synthesis of   Ac- (D) Phe-Pro-Boro Orn-BO2CTenH16HCl [0.50 g, 0.85 mmol, Kettner et al. Method (1990)], 4-methylaminopyridine (0.21 g, 1.7 mm Mol), N-methylamino-iminomethanesulfonic acid (0.24 g, 1.7 mmol) and And a solution of 10 ml absolute ethanol was refluxed for 18 hours. After cooling, the mixture is filtered, The precipitate was washed with chloroform. The combined filtrate was concentrated under vacuum and the residue was It was dissolved in 10 ml of chloroform. Chloroform solution is ice-cooled 0.1N hydrochloric acid (2 x 3 ml ), Ice cold water (2 × 3 ml) and brine. The obtained organic solution is Dry over magnesium acidate, filter and concentrate. Product Sephadex (registered Purified using chromatography (trademark) LH-20 gel (elution: methanol) To give 0.30 g (55%) of guanidine. Next, this boronic ester was used as an example. Deprotection as described in 4 gave 0.14 g (59%) of the desired product.   LRMS (NH3-CI) m / e [Ethylene glycol ester M (Ctwenty fourH37BN6OFive) + H+〕Calculated values : 501, measured value: 501   HRMS (NH3-CI) m / e [Ethylene glycol ester M (Ctwenty fourH37BN6OFive) + H+〕Calculated values : 501.299674, Found: 501.300760   Using the schemes and methods described above, using the appropriate starting materials, the The compound can be prepared. Use effect   The N-acyl and N-peptide boronic acids of the present invention are a novel group of trypsin-like It is a strong reversible inhibitor of the enzyme. The trypsin-like enzyme is a C-terminal arginyl or Is a protease that hydrolyzes peptide bonds at basic residues that release lysyl residues. It is a group of ze. Among these are the blood coagulation and fibrinolytic systems required for hemostasis. There is an enzyme. These are factors II, X, VII, IX, XII, kallikrein, tissue plasmids. Nogen activator, urokinase-like plasminogen activator and plus It's Min. Complement system enzymes, acrosin (necessary for fertilization), and pancreatic trypsin It is included in the octopus group. High levels of proteolysis by these proteases It can lead to illness. For example, consumer coagulopathy; coagulation system and fibrinolysis system Symptoms characterized by decreased blood levels of enzymes and associated protease inhibitors Is often fatal. The intervention of synthetic inhibitors is clearly beneficial. Yo More specifically, thrombin proteolysis is required for blood coagulation. Toro The inhibitory effect of nbin leads to an effective inhibitor of blood coagulation. Effective thrombin inhibition The importance of the drug is heparin (and its protein inhibitor, antithrombin III Conventional anticoagulants (such as complex with) are associated with myocardial infarction and other coagulation disorders. Strengthened by the results of the observation that it is not effective in blocking cerebral arterial thrombosis Adjusted. However, low molecular weight thrombin inhibitors containing different functional groups Was effective in blocking arterial thrombosis [Hanson and Harker Proc. Na tl. Acad. Sci. (USA), 85, 3184-3188 (1988)]. Therefore, the present inventors Demonstrates the efficacy of the compound in inhibiting thrombin in buffer and plasma Do I chose that. Among other things, the compound is associated with increased thrombin such as myocardial infarction. As a drug for the treatment of diseases resulting from activity or for diagnostic and other commercial purposes Used as an anticoagulant in the processing of blood into plasma for Serve as.   When used in the processing of blood products, the compounds of the invention are anticoagulant. It can be mixed with whole blood without the need to add blood substances. Compounds of the invention inhibit blood coagulation The whole blood, thereby promoting the desired blood cell components or plasma proteins. Make sessing easy. After processing, the compound can be Remove the desired product by external filtration, dialysis or diafiltration. Obtainable. These low molecular weight compounds are commonly used in conventional anticoagulants such as heparin. It can be decomposed from the desired product more easily than the substance.   The compounds of the present invention are associated with abnormal proteolysis and some of the disease states associated therewith. , Effective in controlling inflammation, pancreatitis and hereditary angioedema it is conceivable that.   In vitro of compounds of the invention as inhibitors of blood coagulation protease thrombin Was measured under two different conditions: (1) buffer using synthetic substrate (2) Measurement in plasma (the rate of blood coagulation is measured). The former In the method, the chromogenic substrate S2238 (H- (D) Phe-Pip-Arg-PNA, where PIP is pipecoline Acid; Helena Laboratories Beaumont, TX) by Kettner et al. Biol. Chem. 265, 18289-18297 (1990) and used according to similar procedure. this Hydrolysis resulted in the release of pNA, which was observed spectrophotometrically and absorbed at 405 nm. The increase in light intensity was measured. Substrate hydrolysis Michaelis constant KmUses 0.20M NaCl using the method of Lineweaver and Burk In 0.10M sodium phosphate buffer pH 7.5 containing 0.5% PEG 8000 at 25 ° C It was measured at.   To react thrombin (0.19nM) with substrate (0.20mM) in the presence of inhibitor Than KiThe value was measured. The reaction is performed for 30 minutes and the rate (change in absorbance vs. time) is set to 25 Measured in a time frame of ~ 30 minutes. K using the relationiThe value was calculated. (Where voIs the rate of control in the absence of inhibitor,   vsIs the rate in the presence of the inhibitor,   I is the concentration of the inhibitor,   KiIs the dissociation constant of the enzyme; inhibitor complex,   S is the concentration of the substrate, and   KmIs the Michaelis constant]   The inhibitory effect of thrombin on blood coagulation activity in plasma was measured in rabbit plasma. Blood was diluted 1:10 with a 3.2% aqueous citric acid solution and centrifuged to remove plasma. Prepared. The buffer is 0.10M Tris pH 7.4 containing 0.9% sodium chloride and 2 It was composed of 0.5 mg / ml bovine serum albumin. Bovine thrombin from Sigma Obtained and diluted to 24 NIH units / ml. Plasma containing inhibitor (200 μl) and slow Incubate the buffer (50 μl) in a fivrameter at 37 ° C for 3 minutes. I started. Thrombin (50 μl) was added to start the reaction and the clotting time was measured. Under the same conditions except that it contains no inhibitors A control was performed. The final concentration of thrombin was 4 NIH units / ml.   Another measure of the efficacy of this compound for prolonging the clotting time is IC50(Inhibitor Observed for 2 NIH units / ml thrombin in the absence of Concentration of inhibitor required to prolong coagulation relative to the time taken). You can Representative data for compounds of the invention are found in Examples 3, 7, 9 , 11 and 12 are thrombi at 0.25, less than 0.075, 0.10, 0.60 and 0.85 μM, respectively. The blood coagulation time was doubled.   The efficacy of the compounds of the invention as anticoagulants in vivo is 0.5-10 mg / kg. Conscious dogs or hemp after oral or intravenous administration of the compound at a dose Activated partial thrombus formation time (activated thrombus formation time) of blood samples collected from drunk rats It was proved by the extension of partial thromboplastintime). Arterial or venous blood Collected with a syringe and mixed with 1/10 volume of 3.2% sodium citrate. Centrifuge Separate to obtain plasma and standard clinically activated partial thrombus formation time (APTT reagent, Sigma Chemical) was measured with a fibrometer at 37 ° C. Separate after administration The results from blood samples taken at the time of at least compared to the values obtained before administration There was an effective anticoagulant response equivalent to a 2-fold activated partial thrombus formation time. This model In Examples 4, 57 and 77 are effective after intravenous administration, and Example 4 , 56, 57, 60 and 66 were found to be effective after oral administration. Similarly, the example Oral administration of 31 and 54 measures activity by increasing thrombin clotting time. In the same model except that, it resulted in at least a 2-fold increase in anticoagulant activity.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＥＤ Ｃ０７Ｋ 7/08 Ｃ０７Ｋ 5/065 9455−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＥＤ 5/078 ＡＣＢ 5/087 ＡＢＥ 7/06 ＺＮＡ ＡＣＪ 7/08 ＡＢＳ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，Ｈ Ｕ，ＪＰ，ＫＲ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＳＫ (72)発明者 リー，シヤン−リアン・オー アメリカ合衆国デラウエア州19810‐3221. ウイルミントン．ノースロツクフイールド ドライブ3304 (72)発明者 カリーニ，デイビツド・ジヨン アメリカ合衆国デラウエア州19803‐3107. ウイルミントン．ジユーリアンロード1921─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Internal reference number FI A61K 38/00 AED C07K 7/08 C07K 5/065 9455-4C A61K 37/02 AED 5/078 ACB 5/087 ABE 7/06 ZNA ACJ 7/08 ABS (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE) , AU, CA, CZ, FI, HU, JP, KR, NO, NZ, PL, SK (72) Inventor Lee, Cyan-Lian Oh, Delaware, USA 19810-3221. Wilmington. Northlock Field Drive 3304 (72) Inventor Carini, David Zyon, Delaware, USA 19803-3107. Wilmington. The Youlian Road 1921

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．式（Ｉ） 〔式中、R1はa）-CN、-C(NH)NHR6、-NHC(NH)H、-NHC(NH)NHR6、-SC(NH)NHR6、 -NHC(NH)NHOH、-NHC(NH)NHCN、-NHC(NH)NHCOR6で置換されたC1〜C12−アルキル 、または Ｘはa）ハロゲン（Ｆ、Cl、Br、Ｉ）、 b） -CN、 c） -NO2、 d） -CF3、 e） -NH2、 f） -NHC(NH)H、 g） -NHC(NH)NHOH、 h） -NHC(NH)NHCN、 i） -NHC(NH)NHR6、 j） -NHC(NH)NHCOR6、 k） -C(NH)NHR6、 l） -C(NH)NHCOR6、 m） -C(O)NHR2、 n） -CO2R2、 O） -OR2、 p） -OCF3、または q） -SC(NH)NHR6であり； R2はa） Ｈ、 b） C1〜C4−アルキル、 c） アリール（ここで、アリールは場合によりハロ（Ｆ、Cl、Br、Ｉ ）、C1〜C4-アルキル、C1〜C4−アルコキシ、-NO2、-CF3、-S(O)r-C1〜C4-アル キル、-OH、-NH2、-NH（C1〜C4-アルキル）、-N（C1〜C4-アルキル）2、-CO2R4 からなる群より選択される１個または２個の置換基で置換されたフェニルまたは ナフチルである）、または d） -C1〜C4-アルキルアリール（ここで、アリールは上記で定義され た通りである）であり； R3はＨ、アルキル、アリール、アルキルアリールまたは１〜20個の炭素原子 からなるNH2-ブロッキング基であり； R4およびR5は独立して a） Ｈ、 b） C1〜C4−アルキル、または c） -CH2−アリール（ここで、アリールは上記で定義された通りであ る）であり； R6はa） Ｈ、 b） C1〜C4−アルキル、 c）アリール（ここで、アリールは場合によりハロ（Ｆ、Cl、Br、Ｉ） 、C1〜C4−アルキル、C1〜C7−アルコキシ、 -NO2、-CF3、-S(O)r−C1〜C4−アルキル、-OH、-NH2、-NH（C1〜C4−アルキル） 、-N（C1〜C4−アルキル）2、-CO2R4からなる群より選択される１個または２個 の置換基で置換されたフェニルまたはナフチルである）、または d） -C1〜C4−アルキルアリール（ここで、アリールは上記で定義され た通りである）であり； Ａはアミノ酸残基、または２〜20個のアミノ酸残基からなるペプチドであり ； Y1およびY2は a） -OH、 b） -F、 c） C1〜C8−アルコキシであり、または Y1およびY2は一緒になって d）環状ホウ素エステル（ここで、鎖または環は２〜20個の炭素原子、 また場合によりＮ、ＳまたはＯである１〜３個のヘテロ原子を含有する）を形成 し； ｎは０または１であり； ｐは０〜３であり； ｑは０〜４であり； ｒは０〜２である。但し、Ｒ1が脂肪族である場合、-NHC(NH)NHR6の置換基R6 はＨではない〕 の化合物およびその薬学的に許容しうる塩。 ２．Y1およびY2が a） -OHであり、あるいは Y1およびY2が一緒になって b）環状ホウ素ピナコールエステルまたは c）環状ホウ素ピナンジオールエステルを形成し； R1がa） -(CH2)3NHC(NH)H、 b） -(CH2)4C(NH)NH2、 R2がＨであり； ＡがProまたは(D)Phe-Proであり； R3がa） Ｈ、 b） Boc、 c） Ｚ、 d） Ac、 e） ヒドロシンナモイル、 f） C1〜C10−アルキルスルホニル、または g） C1〜C15−アルキルアリールスルホニル である請求項１記載の化合物。 である請求項１記載の化合物。 ４．R1がa）-CN、-C(NH)NH2、-NH-C(NH)Hで置換されたC3〜C4-ア ルキルである請求項１記載の化合物。 Ｘがa）ハロゲン（Cl、Br）、 b） -CN、 c） -C(NH)NH2、 d） -NH2、または e） -NHC(NH)NH2であり、そして ｐが０〜１である請求項１記載の化合物。 ６．R3がＨ、アルキル、Ac、Boc、C1〜C10-アルキルスルホニル、C1〜C15-アル キルアリールスルホニル、C1〜C15-アリールスルホニルである請求項１記載の化 合物。 ７．ｎが０である請求項１記載の化合物。 ８．〔A〕が独立してAla、Arg、Asn、Asp、Aze、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Hom oLys、Ile、Leu、Lys、Met、Orn、Phe、Phe（４−フルオロ）、Pro、Ser、Thr、 Trp、TyrおよびValからなる群より選択されるＤまたはＬ配置のアミノ酸残基で 構成される請求項１記載の化合物。 ９．〔A〕がProまたは(D)Phe-Proで構成される請求項１記載の化合物。 10．・Ac-(D)Phe-Pro-NH-CH〔(CH2)4CN］BO2-C10H16 ・Ac-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)4C(NH)NH2〕BO2-C10H16 ・Ac-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H］B(OH)2 ・Boc-(D)Phe-Pro-NHCH〔(CH2)3-NHC(NH)H］B(OH)2 ・Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe〔m-C(NH)H2〕-C10H16 ・Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-CH2NH2)-C10H16 ・Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(m-Br)-C10H16 ・Ac-(D)Phe-Pro-ボロArg(CN)-C10H16 ・Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe(p-CN)-C10H16 ・Boc-(D)Phe-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・N,N-(CH3)2-(D)Phe-Pro-ボロPhe-(m-CN)-OH・HCl（異性体Ｉ） ・Ac-(D)Phe-Pro-ボロPhe-(m-CN)-OH・HCl ・Ms-(D)Phe-Pro-ボロPhe-(m-CN)-OH・HCl ・Boc-(D)チアゾリルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・Boc-(D)3-ピリジルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・Ms-(D)3-ピリジルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・Boc-(D)2-ピリジルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・Boc-(D)2-チエニルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・Ms-(D)2-チエニルアラニン-Pro-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・Boc-(D)Phe-Aze-ボロPhe-(m-CN)-C10H16 ・ヒドロシンナモイル-Pro-ボロIrg(CH3)-OH・HBr ・Ac-(D)Phe-Pro-ボロArg(CH3)-OH・HCl ・PhCH2SO2-(D)Phe-Pro-ボロOrn(CH=NH)-OH・HCl ・CH3CH2CH2SO2-(D)Phe-Pro-ボロOrn(CH=NH)-OH・HCl ・CH3CH2CH2SO2-(D)Phe-Pro-ボロArg(CH3)-OH・HCl ・Ac-(D)Phe-Sar-ボロOrn(CH=NH)-OH・HCl ・Boc-(D)Phe-Sar-ボロPhe(mCN)-C10H16 ・Boc-(D)Phe-Aze-ボロOrn(CH=NH)-OH・HCl ・4-（フェニル）ベンゾイル-ボロOrn(CH=NH)-C10H16・HCl からなる群より選択される請求項１記載の化合物。[Claims] 1. Formula (I)   (Where R1Is a) -CN, -C (NH) NHR6, -NHC (NH) H, -NHC (NH) NHR6, -SC (NH) NHR6, -NHC (NH) NHOH, -NHC (NH) NHCN, -NHC (NH) NHCOR6C replaced by1~ C12-Alkyl , Or   X is a) halogen (F, Cl, Br, I),         b) -CN,         c) -NO2,         d) -CF3,         e) -NH2,         f) -NHC (NH) H,         g) -NHC (NH) NHOH,         h) -NHC (NH) NHCN,         i) -NHC (NH) NHR6,         j) -NHC (NH) NHCOR6,         k) -C (NH) NHR6,         l) -C (NH) NHCOR6,         m) -C (O) NHR2,         n) -CO2R2,         O) -OR2,         p) -OCF3, Or         q) -SC (NH) NHR6And     R2Is a) H,         b) C1~ CFour-Alkyl,         c) Aryl (wherein aryl is optionally halo (F, Cl, Br, I ), C1~ CFour-Alkyl, C1~ CFour-Alkoxy, -NO2, -CF3, -S (O) r-C1~ CFour-Al Kill, -OH, -NH2, -NH (C1~ CFour-Alkyl), -N (C1~ CFour-Alkyl)2, -CO2RFour A phenyl substituted with one or two substituents selected from the group consisting of Naphthyl), or         d) -C1~ CFour-Alkylaryl (wherein aryl is defined above) It's just like that);     R3Is H, alkyl, aryl, alkylaryl or 1 to 20 carbon atoms Consisting of NH2-A blocking group;     RFourAnd RFiveIndependently         a) H,         b) C1~ CFour-Alkyl, or         c) -CH2-Aryl, where aryl is as defined above. Is);     R6Is a) H,         b) C1~ CFour-Alkyl,         c) aryl, where aryl is optionally halo (F, Cl, Br, I) , C1~ CFour-Alkyl, C1~ C7-Alkoxy, -NO2, -CF3, -S (O)r-C1~ CFour-Alkyl, -OH, -NH2, -NH (C1~ CFour-Alkyl) , -N (C1~ CFour-Alkyl)2, -CO2RFour1 or 2 selected from the group consisting of Phenyl or naphthyl substituted with a substituent of), or         d) -C1~ CFour-Alkylaryl, where aryl is defined above It's just like that);     A is an amino acid residue or a peptide consisting of 2 to 20 amino acid residues ;     Y1And Y2Is         a) -OH,         b) -F,         c) C1~ C8-Alkoxy, or     Y1And Y2Are together         d) Cyclic boron ester (wherein the chain or ring is 2 to 20 carbon atoms, Optionally containing 1 to 3 heteroatoms which are N, S or O) Do;     n is 0 or 1;     p is 0-3;     q is 0-4;     r is 0-2. Where R1Is aliphatic, then —NHC (NH) NHR6Substituent R6 Is not H]   And a pharmaceutically acceptable salt thereof. 2. Y1And Y2But         a) -OH, or     Y1And Y2Together         b) cyclic boron pinacol ester or         c) forming a cyclic boron pinane diol ester;     R1Is a)-(CH2)3NHC (NH) H,         b)-(CH2)FourC (NH) NH2,     R2Is H;     A is Pro or (D) Phe-Pro;     R3A) H,         b) Boc,         c) Z,         d) Ac,         e) hydrocinnamoyl,         f) C1~ CTen-Alkylsulfonyl, or         g) C1~ CFifteen-Alkylarylsulfonyl   The compound according to claim 1, which is   The compound according to claim 1, which is 4. R1Is a) -CN, -C (NH) NH2, C substituted with -NH-C (NH) H3~ CFour-A A compound according to claim 1 which is rukyi.     X is a) halogen (Cl, Br),         b) -CN,         c) -C (NH) NH2,         d) -NH2, Or         e) -NHC (NH) NH2And     The compound according to claim 1, wherein p is 0 to 1. 6. R3Is H, alkyl, Ac, Boc, C1~ CTen-Alkylsulfonyl, C1~ CFifteen-Al Killarylsulfonyl, C1~ CFifteen-Arylsulfonyl. Compound 7. The compound according to claim 1, wherein n is 0. 8. [A] is independently Ala, Arg, Asn, Asp, Aze, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Hom oLys, Ile, Leu, Lys, Met, Orn, Phe, Phe (4-fluoro), Pro, Ser, Thr, An amino acid residue in the D or L configuration selected from the group consisting of Trp, Tyr and Val A compound according to claim 1 which is constituted. 9. The compound according to claim 1, wherein [A] is composed of Pro or (D) Phe-Pro. Ten.・ Ac- (D) Phe-Pro-NH-CH 〔(CH2)FourCN] BO2-CTenH16     ・ Ac- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)FourC (NH) NH2] BO2-CTenH16     ・ Ac- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] B (OH)2     ・ Boc- (D) Phe-Pro-NHCH 〔(CH2)3-NHC (NH) H] B (OH)2     ・ Ac- (D) Phe-Pro-boro Phe 〔m-C (NH) H2] -CTenH16     ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (m-CH2NH2) -CTenH16     ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (m-Br) -CTenH16     ・ Ac- (D) Phe-Pro-boro Arg (CN) -CTenH16     ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe (p-CN) -CTenH16     ・ Boc- (D) Phe-Pro-Boro Phe- (m-CN) -CTenH16     ・ N, N- (CH3)2-(D) Phe-Pro-boro Phe- (m-CN) -OH.HCl (Isomer I)     ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Phe- (m-CN) -OH ・ HCl     ・ Ms- (D) Phe-Pro-Boro Phe- (m-CN) -OH ・ HCl     ・ Boc- (D) thiazolylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16     ・ Boc- (D) 3-pyridylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16     ・ Ms- (D) 3-pyridylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16     ・ Boc- (D) 2-pyridylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16     ・ Boc- (D) 2-thienylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16     ・ Ms- (D) 2-thienylalanine-Pro-boro Phe- (m-CN) -CTenH16     ・ Boc- (D) Phe-Aze-Boro Phe- (m-CN) -CTenH16     Hydrocinnamoyl-Pro-boro Irg (CH3) -OH ・ HBr     ・ Ac- (D) Phe-Pro-Boro Arg (CH3) -OH / HCl     ・ PhCH2SO2-(D) Phe-Pro-Boro Orn (CH = NH) -OH ・ HCl     ・ CH3CH2CH2SO2-(D) Phe-Pro-Boro Orn (CH = NH) -OH ・ HCl     ・ CH3CH2CH2SO2-(D) Phe-Pro-Boro Arg (CH3) -OH / HCl     ・ Ac- (D) Phe-Sar-boro Orn (CH = NH) -OH ・ HCl     ・ Boc- (D) Phe-Sar-Boro Phe (mCN) -CTenH16     ・ Boc- (D) Phe-Aze-boro Orn (CH = NH) -OH ・ HCl     ・ 4- (Phenyl) benzoyl-boro Orn (CH = NH) -CTenH16・ HCl   The compound of claim 1 selected from the group consisting of:
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