JPH08511237A

JPH08511237A - 放射性同位体のためのタイプｘｎ▲下１▼ｓ▲下１▼ｘ´のキレート剤、それらの金属錯体及びそれらの診断及び治療への使用

Info

Publication number: JPH08511237A
Application number: JP6521543A
Authority: JP
Inventors: ヒルガー，クリストフ−ステファン; ディンケルボルク，ルドガー; クランプ，ボルフガンク; シュイール，ハンス−マーティン
Priority date: 1993-03-31
Filing date: 1994-03-29
Publication date: 1996-11-26
Also published as: EP0692981B1; DE4310999C2; US5961954A; AU692154B2; NO953868D0; CA2156619A1; NZ263795A; DE4310999A1; WO1994022493A1; KR960700762A; EP0692981A1; NO953868L; AU6501894A; HU9502869D0; DE59408144D1; ATE179078T1; HUT73489A

Abstract

(57)【要約】本発明は、断続的なカルコゲン原子を有する二官能価キレート化剤、それらの化合物を含む医薬、放射性診断及び放射性療法へのそれらの使用及びそれらの化合物の生成法に関する。本発明の化合物は、一般式：Ｍ−Ｌ〔式中、ＭはTc又はReの放射性核種を表わし、そしてＬは一般式（II）のリガンドを表わす〕で表わされる。断続的なカルコゲン原子を有する二官能価キレート化剤及び特異的に蓄積する化合物とのそれらのカップリング生成物は診断及び治療目的のための放射性医薬の生成のために卓越して適切であることが驚くべき事には見出された。

Description

【発明の詳細な説明】放射性同位体のためのタイプXN₁S₁X′のキレート剤、それらの金属錯体及びそれらの診断及び治療への使用本発明は、断続的なカルコゲン原子を有する新規二官能価キレート剤、それらの化合物を含む医薬、放射性診断及び放射性治療へのそれらの使用、及びそれらの化合物の製造方法に関する。放射性同位体のための錯生成剤又は放射性金属とのそれらの錯体が放射性診断及び放射性治療に適用され得ることは長い間、知られている。テクネチウム−99 ｍは、放射性診断に最とも頻繁に使用されて来た放射性核種である。なぜならば、それはその好ましい物性（微粒子放射線の存在しない、6.02時間の低い半減期、140KeVのγ−放射線による良好な検出能力）及びその低い生物学的半減期並びに容易な利用性のためにインビボ用途のために特に適切であるからである。テクネチウム−99ｍの錯体を形成する第１段階は核種発生器からのペルテクネテートを得ることであり；次に、それは適切な還元剤（たとえばSnCl₂，S₂O₄ ^2-、等）を用いて低い酸化数に転換される。この酸化数は適切なキレート剤により安定化される。テクネチウムは錯体の電荷を変えることによってその薬理学的性質を激しく変えることができるいくつかの酸化数（＋７〜−１）を有するので、それぞれの疾病の完全な診断を妨げる、インビボレドックス工程又は放射性診断剤からのテクネチウムの放出のために、所望しない生物分布を安全に、確実に且つ安定して妨げるために特定の酸化数でテクネチウムを結合できる、テクネチウム−99 ｍのためのキレート化剤又は錯体リガンドを供給することが必要である。たとえば、環状アミン（Troutner，D.E．et al．：J.Nucl.Med．21，443（198 0））は、テクネチウム及びレニウムのための適切な錯生成剤として見なされるが、しかしそれらの欠点は、それらが９以上のpH値から十分な量でテクネチウム −99ｍを単に結合できることである。N₂O₂システム（Pillai，M.R.A.，Troutner ，D.E．et al.：Inorg.Chem.，29，1850（1990））が臨床的に使用される。非環状Ｎ₂システム、たとえばHMPAOは低い錯体安定性の高い欠点を有する。Tc-99m-H MPAOは、異なった薬力学及び排泄性質を有する低い分解生成物の部分を維持するために、その低い安定性（Ballinger，J.R.et al.，Appl.Radiat.Isot．42，315 （1991）；Billinghurst，M.W.et al.，Appl.Radit.Isot．42，607（1991））のためにラベリングのすぐ後で適用されるべきである。そのような放射性化学不純物は、診断されるべき疾病の検出をより困難にする。それらのキレート又はキレート剤と疾病の中心に選択的に蓄積する他の物質とのカップリングは、簡単な手段により破壊され得ず、その結果、それらは通常、生物に非特異的に広がる。 N₂S₂キレート剤（Bormans，G．et al.：Nucl.Med.Biol.，17，499（1990））、たとえばエチレンジシステイン（EC；Verbruggen，A．M．et al．：J.Nucl.Me d．33，551（1992））は、それらのそれぞれのテクネチウム−99ｍ錯体の十分な安定性の必要条件を満たすが、しかし錯生成媒体の９以上のpH値でたった69％以上の純度の放射性診断剤を形成する。N₃Sシステム（Fritzburg，A．：EPA 0 173 424及びEPA 0 250 013）は安定したテクネチウム−99ｍ錯体を生成するが、しかし放射性核種を挿入するために約100℃の温度まで加熱されるべきである。 N₂S₂及びN₃Sシステムのもう１つの欠点は、それらが生物体において急速且つ特異的な蓄積を伴わないで放出されることである。従って、それらは、限定された程度ではあるが、腎機能診断において単に臨床学的に使用される。それらの使用は、主に需要が疾病組織において特異的に蓄積する物質に対して高められているので限定される。これは、錯生成剤と選択的に蓄積する物質とをその後者の物質がそれらの好ましい錯生成性質を保持しながら容易に連結するために取り扱う場合に達成され得る。しかし、錯体安定性の一定した低下が、その錯生成剤をそのような分子にその官能基の１つによりカップリングした後に観察されることがひじょうに頻繁に生じるので、選択的に蓄積する物質とキレート剤とをカップリングするこれまでのアプローチは、診断学の観点から耐えられ得ない同位体の量が共役体からインビボに放されるのでほとんど満足のいくものではない（Brechbiel，M.W．et al.：Inorg.Chem．1986，25，2772）。従って、所望する金属イオンを結合するための官能基及び選択的に蓄積する分子を結合するための１つ（又はいくつかの他の）の官能基を有する二官能錯生成剤を生成することが必要である。そのような二官能リガンドは、予備ラベリングが適用される場合においてさえほとんどの種々の生物学的材料にテクネチウム又はレニウム同位体の特定の化学的に定義された結合を可能にする。モノクローナル抗体（たとえばEP出願第 0 247 866号及びEP出願第 0 188 256号）又は脂肪酸（EP出願第 0 2 00 492号）とカップリングされるいくつかのキレート剤が記載されている。しかし、それらは、それらの低い安定性のためにほとんど適切でない上記N₂S₂システムに基づかれていた。選択的に蓄積する物質及び蓄積の機構の両性質はひじょうに変化するので、親油性又は親水性挙動性、膜透過性又は不透過性、等に関して、そのパートナーの生理学的必要条件にキレート剤のカップリングを適合せしめるようにそのキレート剤を変えることができるべきである。従って、選択的に蓄積する種々の結合とカップリングされ、又はカップリングすることができる安定した錯体化合物を供給し、そして置換基が上記必要条件に適合できるよう広範囲の化学的変動性を示すような結合できるキレート剤又は錯体を供給することが本発明の目的である。そのような化合物及びそれらの化合物を含む医薬、並びににそれらの製造方法を提供することがまた本発明のもう１つの目的である。この問題は、断続的なカルコゲン原子を有する新規のまれな二官能価キレート剤及び選択的に蓄積する化合物とのそれらのカップリング生成物が放射性診断及び放射性治療剤を生成するために卓越的に適合されることで驚くべきことには解決される。本発明の目的物は、下記一般式（Ｉ）：Ｍ−Ｌ（Ｉ）〔式中、ＭはTc又はReの放射性核種を表わし、そしてＬは下記一般式（II）：Ｂ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR⁵R⁶−Ａ′−Ｒ¹² （II）（ここで、Ａ及びＡ′は同じであっても又は異なっていても良く、そしてＯ，Ｓ、又はSeカルコゲン原子を表わし、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³，Ｒ⁴，Ｒ⁵及びＲ⁶は同じであっても又は異なっていても良く、そして水素原子及び／又は枝分れした又は枝分れしていないＣ₁−Ｃ₆アルキル残基を表わし、Ｂは下記残基： −NH−CR⁷R⁸−（CR⁹R¹⁰）_n=1,₂−Ｓ−R¹¹ （ここで、Ｒ⁷及びＲ⁸は同じであっても又は異なっていても良く、そして水素原子又は枝分れしていない、枝分れした、環状又は多環式Ｃ₁−Ｃ₆₀アルキル、アルケニル、ポリアルケニル、アルキニル、ポリアルキニル、アリール、アルキルアリール、又はアリールアルキル残基を表わし、前記残基は、追加のヒドロキシ、カルボニル、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノ、アルデヒド、オキソ、オキシ又は20 個までの炭素原子を含むアルコキシ基を任意に担持することができ、そして／又は任意に、一連のＯ，Ｎ，Ｓ，Ｐ，As，Seからの１又は複数のヘテロ原子により中断され得、そして／又は置換され得、Ｒ⁹及びＲ¹⁰は同じであっても又は異なっていても良く、そして水素原子及び／又は枝分れした又は枝分れしていないＣ₁ −Ｃ₆アルキル残基を表わし、Ｒ¹¹は水素原子、硫黄保護基又はＲ⁷又はＲ⁸のような残基を表わし、そしてＲ⁷及びＲ¹¹は、それらを連結する基と共に、ヒドロキシ、オキソ、オキシ又は６個までの炭素原子を含むアルコキシ基を任意に担持することができる４〜８員環を任意に形成する）で表わされる残基を表わし、そしてＲ¹²は水素原子又はカルコゲン保護基を表わす）で表わされるリガンドを表わす〕で表わされる化合物である。一般式（Ｉ）の好ましい化合物は、Ａ及びＡ′が硫黄原子であり、Ｒ¹²は水素原子又は硫黄保護基であることにより特徴づけられる。一般式（Ｉ）の特に好ましい化合物は、Ｒ⁷及びＲ⁸が異なっており、そしてＲ⁸ ，Ｒ⁹及びＲ¹⁰がそれぞれ水素原子を表わすことにより特徴づけられる。本発明の他の目的は、下記一般式（II）：Ｂ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR⁵R⁶−Ａ′−R¹² （II）〔式中、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³，Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶，Ａ，Ａ′及びＢは上記の通りである〕で表わされる、断続的カルコゲン原子を有する新規の二官能リガンドに関する。一般式（II）で表わされるそのような本発明の化合物は、Ａ及びＡ′が硫黄原子であり、そしてＲ¹²は水素原子又は硫黄保護基を表わすことにより特徴づけられる。本発明の特に好ましい化合物は、Ｒ⁷及びＲ⁸が異なり、そしてＲ⁸，Ｒ⁹及びＲ¹⁰ がそれぞれ水素原子であることにより特徴づけられる。本発明のさらにもう１つの目的は、一般式（Ｉ及び／又はII）で表わされる化合物及び疾患組織において選択的に蓄積する物質の共役体であり、それらの物質間には共有結合が存在し、前記結合は、前記物質がカルボキシ又はアミノ基、たとえばペプチド、タンパク質、抗体又はそれらのフラグメントを含む場合、アミド性であり、前記物質がヒドロキシ基、たとえば脂肪アルコールを含む場合、エステルの様であり、そして前記物質がアルデヒド基を含む場合、イミド性である。本発明の特に好ましい共役体は、疾患組織に蓄積する物質がペプチド、たとえばエンドセリン、一部のエンドセリン配列、エンドセリン類似体、エンドセリン誘導体、又はエンドセリンアンタゴニストであることにより特徴づけられる。本発明の共役体の他の好ましい態様は、前記ペプチドが下記配列又はその一部を含むことにより特徴づけられる：その部分的配列又はその環状アミノ酸配列一般式（Ｉ）の本発明の化合物は、ペルテクネテートの形でのテクネチウム− 99ｍ又はペルレネートの形でのReと下記一般式（II）：Ｂ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR³R⁶−Ａ′−Ｒ¹² （II）〔式中、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³，Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶，Ａ，Ａ′及びＢは上記の通りである〕で表わされる化合物とを、還元剤及び場合によっては補助リガンドの存在下で反応せしめることによって生成される。前記一般式（II）の本発明のリガンドは、次の反応スケム：Ｘ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR⁵R⁶−Ａ′−R¹² （III）＋NH₂−（CR⁷R⁸）−（CR⁹R¹⁰）_n=1,₂−Ｓ−R¹¹ （IV） →Ｘ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR⁵R⁶−Ａ′−R¹² （II）〔式中、Ｘは離脱基であり、そしてＲ¹，Ｒ²，Ｒ³，Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶，Ａ，Ａ′及びＢは上記に特定された通りである〕に従って、一般式（III）の化合物と一般式（IV）の化合物とを反応せしめることによって生成される。それらの反応は極性及び非極性非プロトン性溶媒、たとえばジクロロメタン、テトラヒドロフラン、クロロホルム、１，４−ジオキサン、DMF又はDMSO下で−3 0〜＋100℃の間の温度で実施され；補助塩基が発生する酸を除去するために添加される。それらの中で、塩基は、たとえば第三アミン、アルカリ及びアルカリ土類の水酸化物、アルカリ及びアルカリ土類の炭酸塩である。本発明のもう１つの目的は、一般式（II）の化合物又は一般式（Ｉ及び／又は II）の化合物及び組織において選択的に蓄積する物質を含む本発明の共役体、還元剤及び場合によっては補助リガンドから成る放射性医薬を生成するためのキットであり、ここで前記剤は乾燥又は溶液状態で存在し、前記キットは、ペルテクネテート又はペルレネート溶液の形でのテクネチウム−99ｍ又はレニウムと前記化合物とを反応するための説明を包含する使用説明書を含んで成る。本発明のもう１つの目的は、レセプター、及びレセプター及び／又はアテローム硬化性斑を含む組織の非侵入性可視化のための放射性医薬製剤である。それは一般式（Ｉ）の化合物又は一般式（Ｉ及び／又はII）の化合物及び組織において選択的に蓄積する物質を含む本発明の共役体を、場合によっては自然療法において通常であるアジュバンドを含み；前記化合物はテクネチウム−99ｍ又はレニウムをペルテクネテート又はペルレネート溶液の形で用いるキットにおいて調製される。本発明のさらにもう１つの目的は、放射性製剤が患者の体重70kg当り0.5〜10m Ciの用量で適用され、そして患者により放される放射線が記録されることを特徴とする放射性診断試験を実施するための方法である。 Tc-99m又はReによりラベルされた多くの合成されたキレートは、従来文献に記載される比較できるN₂S₂及びN₂Sシステムよりも高い安定性を驚くべきことには示した。たとえば、26時間後でさえ、脂肪アルコールによりカップリングされる本発明の物質（例３ａ，３ｂ）の分解生成物は見出されなかった。Tc-99m又はRe キレート化剤は比較できるN₂S₂，N₂S及びプロピレンアミノキシウム（propylene aminoxium）システムよりも良好に錯化することが比較試験においてまた見出された。本発明に記載されるキレート及びキレート化剤はこれまで知られているシステムよりも明白に良好に診断及び治療目的のために適切である。本発明のキレート化剤は硫黄保護基を伴わないで合成され得ることがそれらのキレート化剤の特定の利点である。これは合成をひじょうに単純にし；さらに、本発明の化合物は、放射性ラベルされる場合、放射性診断又は放射性治療のために使用される溶液、たとえば静脈内投与されるべき溶液にいづれの他の外来性分子も含まない。放射性医薬の生物分布及び従って、診断情報の値は、そのような外来性分子によって頻繁に減じられる。さらに、そのようなリガンド又は疾患組織において選択的に蓄積する物質とのそれらのカップリング生成物はひじょうに穏やかにラベルされ得る。本発明のリガンド及び疾患組織において選択的に蓄積する物質とのそれらのカップリング生成物は、当業者に知られている塩基、酸又は他の補助物質を用いての保護基を分離しないで室温及び生理学的pH値でラベルされ得る。これは、疾患組織において選択的に蓄積するひじょうに敏感な物質がそのような補助物質により化学的に変性されないことを保証し、なぜならば、そのような変性は疾患組織における選択的蓄積を頻繁に減じ、そして放射性診断情報の値を減じるからである。硫黄保護基は、前記に記載される欠点が許容され得る場合、もちろん本発明に使用され得る。その基は、当業者に知られている方法に従って硫黄原子に結合され、そして分離される。疾患組織において選択的に蓄積する物質が、たとえば錯体リガンドの求電子基と疾患組織において選択的に蓄積する物質の求核中心との反応により結合される方法はまた当業者に知られている（たとえばFritzberg et al．：J.Nucl.Med．26，７（1987））。他の点においては、キレート化剤の求核基は、疾患組織において選択的に蓄積する物質の求電子基によりカップリングされる。カップリングのためのパートナーは、他の中でも、変性されたレセプター密度を示す組織を検出できる特定のレセプターに結合する種々の生物分子又はリガンドである。これは、ペプチド、ステロイドホルモン、成長因子及び神経伝達物質を包含する。乳癌及び前立腺癌の改良された診断のための手段は、ステロイドホルモンレセプターのためのリガンドを用いて示されている（S.J.Brandes and J. A.Katzenellenbogen，Nucl.Med.Biol．15，53，1988）。腫瘍細胞は時々、ペプチドホルモン又は成長因子、たとえば上皮増殖因子（EGF）のためのレセプターの変性された密度を示す。濃度の差異は、腫瘍細胞における細胞増殖抑制剤の選択的な蓄積のために利用され得る（E.Aboud-Pirak et al.，Proc.Natl.Acad.Sci .USA 86；3778，1989）。陽電子放出法同位体によりラベルされた神経レセプターのためのリガンドは、種々の脳疾患の診断のために都合良く使用されている（ J.J.Forst，Trends in Pharmacol.Sci.，7，490，1989）。他の生物分子は、変化を可視化するために、細胞の代謝中に導入され得る代謝物であり；これは脂肪酸、サッカリド、ペプチド及びアミノ酸を包含する。より不安定なN₂S₂キレート化剤によりカップリングされる脂肪酸はEPA 0 200 492に記載されている。他の代謝生成物、たとえばサッカリド（デスオキシグルコース）、ラクテート、ピルベート及びアミノ酸（ロイシン、メチルメチオニン、グリシン）は、代謝工程における変化を可視化するためにPET技法に使用される（R.Weinreich，Swiss Med. ，8，10，1986）。同様に、非生物学的物質、たとえば減じられた酸素濃度を伴って組織又は組織の一部において細胞成分に不可逆的に結合するミソニダゾール及びその誘導体は、放射性同位体の特定の蓄積のために及び従って、腫瘍又は虚血性部分の可視化のために使用され得る（M.E.Shelton，J.Nucl .Med．30，351，1989）。最後に、キレート化剤はモノクローナル抗体又はそれらのフラグメントによりカップリングされる。本発明のキレート化剤又は脂肪アルコール、脂肪アルコール誘導体又は脂肪アミン及びそれらの誘導体との又はエンドセリン、一部のエンドセリン配列、エンドセリン類似体、エンドセリン誘導体又はエンドセリンアンタゴニストとのそれらのテクネチウム−99ｍ又はRe錯体のカップリング生成物は、テロローム硬化性血管疾患の検出のために特に好ましいことがわかった。それらの誘導体は、それらのLDLレセプターの遺伝的欠損のために、それらの血液に高いLDL濃度を有するWHHLウサギ（及び従って、アテローム硬化性病変）に適用された。３〜40の濃度数がWHHLウサギへの誘導体のi.v. 投与の後、約４〜５時間で、非損傷組織に比較して、アテローム硬化性斑に見出された。これは、放射性診断の通常の方法（たとえばガンマシンチレーションカメラ）を用いての血管のアテローム硬化性部分の検出を可能にした。単にひじょうに遅い段階のアテローム硬化症がより侵入性の方法（たとえば動脈造影法）を用いることによって現在まで診断されている。本発明の物質は、非侵入性方法を用いてひじように初期段階のアテローム硬化症を診断できる決定的な利点を提供する。キレート化剤が、選択的に蓄積する分子とカップリングする前又は後でTc-99m 又はReによりラベルされるかいづれかは重要なことではない。しかし、カップリング錯化の後に生じる場合、放射性錯体と蓄積する化合物との反応は急速で、穏やかであり、且つほぼ定量的であることが必須であり、これにより続く精製は必要とされない。本発明の放射性医薬は、水性媒体に本発明の錯生成剤を溶解し、そして還元剤、好ましくは錫（II）塩、たとえば塩化物又はタルタレートを添加し、場合によっては、自然療法において通常であるアジュバンドを添加し、そして続いて滅菌濾過することによって一般的に知られている手段で生成される。適切な添加剤は、生理学的に耐性の緩衝液（たとえばトロメタミン）、少量の電解質（たとえば塩化ナトリウム）又は安定剤（たとえばグルコネート、ホスフェート又はホスホネート）を包含する。本発明の医薬は溶液又は凍結乾燥物として利用でき、そして市販の発生機から溶離されるTc-99mペルテクネテートの溶液又はペルレネート溶液と共に、適用のすぐ前で混合される。核医学におけるインビボ適用に関しては、本発明の剤は、１×10^-5〜５×10⁴ ｎモル／kg体重の用量で投与される。平均体重70kgに基づいての適用当たりの放射能の量は、診断用途に関しては0.05〜50mCiである。治療用途に関しては、適用される用量は５〜500mCi、好ましくは10〜350mCiである。通常、本発明の剤の溶液0.1〜２mlが静脈、動脈、腹膜又は腫瘍内注射により適用される。静脈内注射が好ましい。次の例は、本発明の目的をより詳細に説明するであろう。例１ａ２，５−ジチアシクロヘキサノン無水ジクロロメタン300mlに溶解された塩化クロロアセチル48ml（0.6モル）を、無水ジクロロメタン600ml中、１，２−ジメルカプトエタン51ml（0.6モル）及びトリエチルアミン168.0ml（1.2モル）の氷冷された溶液に滴下し、そして撹拌する。その後、その混合物を室温で３時間撹拌する。トリエチルアミン塩酸塩を濾過し、そして有機相を水により洗浄する。硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で蒸発し、そして残留物を真空下で蒸留する。（J.Larsen et al. ，Synthesis，1989，134に従がう）。収量：52ｇ（65％）、黄色の油状物。分析：計算値：C 35.80 H 4.51 C 11.92 S 47.76 実測値：C 35.63 H 4.68 S 47.49 例１ｂＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（メトキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミド無水ジクロロメタン250mlに溶解された２，５−ジチアヘキサノン13.42ｇ（0. １モル）を、無水ジクロロメタン500ml中、システインメチルエーテル塩酸塩17. 16ｇ（0.1モル）及びトリエチルアミン10.12ｇ（0.1モル）の溶液にアルゴン雰囲気下で滴下する。その反応混合物を室温で一晩撹拌し続け、そして次に、２％水性クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び水により３度洗浄する。硫酸ナトリウム上での乾燥の後、溶媒を減圧下で蒸発する。油状残留物を、ジエチルエーテルと共に微粉砕することにより結晶化する。収量： 21.32ｇ（79.1％）、白色粉末。分析：計算値：C 35.67 H 5.61 N 5.20 O 17.82 S 35.70 実測値：C 35.48 H 5.72 N 4.97 S 35.43 例１ｃＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（メトキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミドのテクネチウム−99m錯体例１ｂに従って生成されたリガンド10mgを、0.5Ｍのリン酸緩衝液（pH7.5）1. 0mlに溶解する。このリガンド溶液50μｌを、リン酸緩衝液（pH7.5）250μｌ、脱酸素化されたシトレート水溶液（50mg／ml）50μｌ、脱酸素化された錫（II）塩化物水溶液（５mg／ml、 0.05Ｎ HCl）2.5μl及びペルテクネテート溶液（400−900μCi）100μｌと共に混合する。10分間のインキュベーションの後、その反応混合物をHPLCを用いて形成されたTc錯体の純度について試験する：Hamilton PRP-1カラム、５μｍ、125 ×4.6mm；7.5分内で100％Ａ〜100％Ｂのグラジエント溶離（溶離剤Ａ：リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4；溶離剤Ｂ：アセトニトリル／リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4（75／25）；2.0ml／分。放射性化学純度は、98％以上である。例２ａＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（ヒドロキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミド例１ｂに従って生成されたリガンド2.69ｇ（10ｍモル）を、２Ｎの水酸化ナトリウム水溶液200mlにアルゴン雰囲気下で溶解する。室温で２時間、撹拌した後、その溶液を、アルゴン−飽和された濃塩酸（pH＝３）を用いて沈殿せしめ；沈殿された油状残留物を酢酸エステルにより抽出する。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で蒸発する。油状残留物を、ジエチルエーテルと共に微粉砕することにより結晶化する。収量：732mg（28.7％）、白色粉末。分析：計算値：C 32.92 H 5.13 N 5.49 O 18.80 S 37.66 実測値：C 32.73 H 5.38 N 5.30 S 37.41 例２ｂＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（ヒドロキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミドのテクネチウム−99ｍ錯体例２ａに従って生成されたリガンド10mgを、0.5Ｍのリン酸緩衝液（pH7.5）1.0mlに溶解する。このリガンド溶液50μlを、リン酸緩衝液（pH7.5 ）250μｌ、脱酸素化されたシトレート水溶液（50mg／ml）50μｌ、脱酸素化された錫（II）塩化物水溶液（５mg／ml、0.05Ｎ HCl）2.5μｌ及びペルテクネテート溶液（400−900 μCi）100μｌと共に混合する。10分間のインキュベーションの後、その反応混合物をHPLCを用いて形成されたTc錯体の純度について試験する：Hamilton PRP-1カラム、５μｍ、125×4.6mm；7.5分内で100％Ａ〜100％Ｂのグラジエント溶離（溶離剤Ａ：リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4；溶離剤Ｂ：アセトニトリル／リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4（75／25）；2.0ml／分。放射性化学純度は、98％以上である。例３ａＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（デシルオキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミド無水ジクロロメタン250mlに溶解された２，５−ジチアヘキサノン13.42ｇ（0. 1モル）を、無水ジクロロメタン500ml中、システインデシルエーテル塩酸塩29.7 9ｇ（0.1モル）及びトリエチルアミン10.12ｇ（0.1モル）の溶液にアルゴン雰囲気下で滴下する。その反応混合物を室温で一晩撹拌し続け、そして次に、２％水性クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び水により３度洗浄する。硫酸ナトリウム上での乾燥の後、溶媒を減圧下で蒸発する。油状残留物を、ジエチルエーテルと共に微粉砕することにより結晶化する。収量： 31.45ｇ（79.5％）、白色粉末。分析：計算値：C 51.61 H 8.41 N 3.54 O 12.13 S 24.31 実測値：C 51.48 H 8.52 N 3.40 S 24.05 例３ｂＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（デシルオキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミドのテクネチウム−99ｍ錯体例３ａに従って生成されたリガンド10mgを、エタノール1.0mlに溶解する。このリガンド溶液50μｌを、リン酸緩衝液（pH8.5）250μｌ、脱酸素化されたシトレート水溶液（50mg／ml）50μｌ、脱酸素化された錫（II）塩化物水溶液（５mg ／ml、0.05Ｎ HCl）2.5μｌ及びペルテクネテート溶液（400−900 μCi）100μ ｌと共に混合する。10分間のインキュベーションの後、その反応混合物をHPLCを用いて形成されたTc錯体の純度について試験する：Hamilton PRP-1カラム、５μ ｍ、125×4.6mm；7.5分内で100％Ａ〜100％Ｂのグラジエント溶離（溶離剤Ａ：リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4；溶離剤Ｂ：アセトニトリル／リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4（75／25）；2.0ml／分。放射性化学純度は、 95％以上である。例４ａＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（２−メトキシエトキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミド例１ｂに記載されるリガンド2.69mg（10ｍモル）を、トルエン−ｐ−スルホン酸水和物190mg（１ｍモル）の存在下で無水エチレングリコールモノメチルエーテル250mlにおいて６時間、アルゴン雰囲気下で還流する。次に溶媒を減圧下で蒸発し、そして油状残留物をジクロロメタンに取る。ジクロロメタン溶液を、２％水性クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び水により３度洗浄する。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で蒸発する。得られた油状物を、シリカゲル上でクロマトグラフィー処理する（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール８：２）。最後に、それをジエチルエーテルから再結晶化する。収量：632mg（22.2％）、白色粉末。分析：計算値：C 38.32 H 6.11 N 4.47 O 20.42 S 30.68 実測値：C 38.14 H 6.37 N 4.18 S 30.41 例４ｂＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（メトキシエトキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミドのテクネチウム−99ｍ錯体例４ａに従って生成されたリガンド10mgを、エタノール1.0mlに溶解する。このリガンド溶液50μｌを、リン酸緩衝液（pH8.5）250μｌ、脱酸素化されたシトレート水溶液（50mg／ml）50μｌ、脱酸素化された錫（II）塩化物水溶液（５mg ／ml、0.05Ｎ HCl）2.5μｌ及びペルテクネテート溶液（400−900 μCi）100μ ｌと共に混合する。10分間のインキュベーションの後、その反応混合物をHPLCを用いて形成されたTc錯体の純度について試験する：Hamilton PRP-1カラム、５μ ｍ、125×4.6mm；7.5分内で100％Ａ〜100％Ｂのグラジエント溶離（溶離剤Ａ：リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4；溶離剤Ｂ：アセトニトリル／リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4（75／25）；2.0ml／分。放射性化学純度は、 95％以上である。例５ａＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（オクチルアミノカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミドｎ−オクチルアミン70mlを、エタノール30ml中、例１ｂで生成されたリガンド 2.69ｇ（10ｍモル）の溶液に添加し；反応混合物を次に、アルゴン雰囲気下で６時間煮沸加熱する。それを中ぐらいの高さの真空下で蒸発し、そして残留物をアルゴン下で、２％水性クエン酸200ml及びジクロロメタン200mlと共に混合する。その混合物を15分間、強く撹拌し、ジクロロメタン相を分離し、そして２％水性クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び水により３度洗浄する。硫酸ナトリウム上での乾燥の後、溶媒を減圧下で蒸発する。残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理する（溶離剤：ジクロロメタン／メタノール95：5）。最後に、それをジエチルエーテルから再結晶化する。収量：548mg（14.9％）、白色粉末。分析：計算値：C 49.15 H 8.25 N 7.64 O 8.73 S 26.24 実測値：C 49.08 H 8.31 N 7.66 S 26.02 例５ｂＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（オクチルアミノカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミドのテクネチウム−99ｍ錯体例５ａに従って生成されたリガンド10mgを、エタノール1.0mlに溶解する。このリガンド溶液50μｌを、リン酸緩衝液（pH8.5）250μｌ、脱酸素化されたシトレート水溶液（50mg／ml）50μｌ、脱酸素化された錫（II）塩化物水溶液（５mg ／ml、0.05Ｎ HCl）2.5μｌ及びペルテクネテート溶液（400−900 μCi）100μ ｌと共に混合する。10分間のインキュベーションの後、その反応混合物をHPLCを用いて形成されたTc錯体の純度について試験する：Hamilton PRP-1カラム、５μ ｍ、125×4.6mm；7.5分内で100％Ａ〜100％Ｂのグラジエント溶離（溶離剤Ａ：リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4；溶離剤Ｂ：アセトニトリル／リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4（75／25）；2.0ml／分。放射性化学純度は、95％以上である。例６ａＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（２，３−ジヒドロキシプロピル−アミノカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミド例１ｂで生成されたリガンド2.69ｇ（10ｍモル）をエタノール30ml及びアミノプロパンジオール30mlに溶解し、そしてアルゴン雰囲気下で７時間、煮沸加熱する。エタノールを減圧下で蒸留し、そして残留物をアルゴン−飽和された水と共に混合し；pH７の値を、アルゴン−飽和された濃塩酸を用いて設定する。黄色の溶液を凍結乾燥し、そして残留物をシリカゲルRP18上でクロマトグラフィー処理する（溶離剤：水、テトラヒドロフラン０〜50％）。無色のガラス状物を、溶媒の蒸発後に得る。収量：378mg（10％）、無色のガラス状物。無水物質に関する分析：計算値：C 36.57 H 6.14 N 8.53 O 19.48 S 29.28 実測値：C 36.31 H 6.47 N 8.34 S 29.01 例６ｂＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（２，３−ジヒドロキシプロピルアミノカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミドのテクネチウム−99ｍ錯体例６ａに従って生成されたリガンド10mgを、エタノール1.0mlに溶解する。このリガンド溶液50μｌを、リン酸緩衝液（pH8.5）250μｌ、脱酸素化されたシトレート水溶液（50mg／ml）50μｌ、脱酸素化された錫（II）塩化物水溶液（５mg ／ml、0.05Ｎ HCl）2.5μｌ及びペルテクネテート溶液（400−900 μCi）100μ ｌと共に混合する。10分間のインキュベーションの後、その反応混合物をHPLCを用いて形成された Tc錯体の純度について試験する：Hamilton PRP-1カラム、５μｍ、125×4.6mm； 7.5分内で100％Ａ〜100％Ｂのグラジエント溶離（溶離剤Ａ：リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4；溶離剤Ｂ：アセトニトリル／リン酸水素ナトリウム、0 .005Ｍ、pH 7.4（75／25）；2.0ml／分。放射性化学純度は、95％以上である。例７ａＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（カルボニル−hi s-leu-asp-ile-ile-trp）−エチル）−メルカプトアセトアミド２，５−ジエチルシクロヘキサノン（例１ａ）134mg（１ｍモル）を、アルゴン下で、NH₂-cys-his-leu-asp-ile-ile-trp（Barany and Merrifield，The Pept ides：Analysis，Biology，Academic Press，New York 1980；Stewart and Youn g，Solid Phase Peptides Syntheses，2nd.ed.，Pierce Chemical W.，Rockford ，II，1984に記載される方法に類似する方法に従って生成された）900mg（１ｍモル）及びトリエチルアミン304mg（３ｍモル）のジメチルホルムアミド100mlの溶液に添加する。その反応混合物を室温で13時間、撹拌する。反応が完結した後、溶液を濾過し、そして溶媒を減圧下で除去する。残留油状物を、ジメチルホルムアミド50mlを３度混合する。そしてそれぞれの時点で蒸発する。その残留物を無水ジエチルエーテル100mlと共に撹拌する。白色固体材料が沈殿し、それを濾過する。その材料を、ジメチルホルムアミド及びジエチルエーテルの混合物から精製のために再結晶化する。収量：423mg（40.9％）、白色粉末。無水物質に関する分析：計算値：C 53.47 H 6.63 N 13.56 O 17.03 S 9.31 実測値：C 53.19 H 6.92 N 13.28 S 8.97 例７ｂＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（カルボニル−hi s-leu-asp-ile-ile-trp）−エチル）−メルカプトアセトアミドのテクネチウム −99ｍ錯体例７ａに従って生成されたリガンド10mgを、エタノール1.0mlに溶解する。このリガンド溶液50μｌを、リン酸緩衝液（pH8.5）250μｌ、脱酸素化されたシトレート水溶液（50mg／ml）50μｌ、脱酸素化された錫（II）塩化物水溶液（５mg ／ml、0.05Ｎ HCl）2.5μｌ及びペルテクネテート溶液（400−900 μCi）100μ ｌと共に混合する。10分間のインキュベーションの後、その反応混合物をHPLCを用いて形成されたTc錯体の純度について試験する：Hamilton PRP-1カラム、５μ ｍ、125×4.6mm；7.5分内で100％Ａ〜100％Ｂのグラジエント溶離（溶離剤Ａ：リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4；溶離剤Ｂ：アセトニトリル／リン酸水素ナトリウム、0.005Ｍ、pH 7.4（75／25）；2.0ml／分。放射性化学純度は、 95％以上である。例８ WHHLウサギのアテローム硬化性血管損傷部におけるＳ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（デシルオキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミドのテクネチウム−99ｍ錯体の蓄積Ｓ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−（２−メルカプト−１−（デシルオキシカルボニル）−エチル）−メルカプトアセトアミド（例３ａに従って生成された）を、例３ｂに記載されるようにしてラベルする。例３ｂに従ってラベルされた物質99.9GBq（2.7mCi）を、リン酸緩衝溶液により１mlに希釈し、そして麻酔されたWHHLウサギ、Rompun／Ketavet（１：２）に静脈を通して投与する。ウサギを、その適用後５時間で殺害し、そして大動脈のオートラジオグラム及びスーダン（III）染色を実施し、アテローム硬化性斑を可視化する（第１図）。正常な壁とアテローム硬化性壁との間での蓄積因子は、斑の厚さに依存して３〜８であった（スーダン（III）染色）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ディンケルボルク，ルドガードイツ連邦共和国，デー―13585 ベルリン，エムデンツァイル５ (72)発明者クランプ，ボルフガンクドイツ連邦共和国，デー―13503 ベルリン，ダンビルドシュタイク 41アー (72)発明者シュイール，ハンス−マーティンドイツ連邦共和国，デー―15344 シュトラウスベルク，ベルリネールシュトラーセ 34

Claims

【特許請求の範囲】Ｉ．下記一般式（Ｉ）：Ｍ−Ｌ（Ｉ）〔式中、ＭはTc又はReの放射性核種を表わし、そしてＬは下記一般式（II）：Ｂ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR⁵R⁶−Ａ′−R¹² （II）（ここで、Ａ及びＡ′は同じであっても又は異なっていても良く、そしてＯ，Ｓ、又はSeカルコゲン原子を表わし、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³，Ｒ⁴，Ｒ⁵及びＲ⁶は同じであっても又は異なっていても良く、そして水素原子及び／又は枝分れした又は枝分れしていないＣ₁−Ｃ₆アルキル残基を表わし、Ｂは下記残基： −NH−CR⁷R⁸−（CR⁹R¹⁰）_n=1,₂−Ｓ−R¹¹ （ここで、Ｒ⁷及びＲ⁸は同じであっても又は異なっていても良く、そして水素原子又は枝分れしていない、枝分れした、環状又は多環式Ｃ₁−Ｃ₆₀アルキル、アルケニル、ポリアルケニル、アルキニル、ポリアルキニル、アリール、アルキルアリール、又はアリールアルキル残基を表わし、前記残基は、追加のヒドロキシ、カルボニル、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノ、アルデヒド、オキソ、オキシ又は20個までの炭素原子を含むアルコキシ基を任意に担持することができ、そして／又は任意に、一連のＯ，Ｎ，Ｓ，Ｐ，As，Seからの１又は複数のヘテロ原子により中断され得、そして／又は置換され得、Ｒ⁹及びＲ¹⁰は同じであっても又は異なっていても良く、そして水素原子及び／又は枝分れした又は枝分れしていないＣ₁−Ｃ₆アルキル残基を表わし、Ｒ¹¹は水素原子、硫黄保護基又はＲ⁷又はＲ⁸のような残基を表わし、そしてＲ⁷及びＲ¹¹は、それらを連結する基と共に、ヒドロキシ、オキソ、オキシ又は６個までの炭素原子を含むアルコキシ基を任意に担持することができる４〜８員環を任意に形成する）で表わされる残基を表わし、そしてＲ¹²は水素原子又はカルコゲン保護基を表わす）で表わされるリガンドを表わす〕で表わされる化合物。２．前記Ａ及びＡ′が硫黄原子であり、そしてＲ¹²が水素原子又は硫黄保護基である請求の範囲第１項記載の化合物。３．前記Ｒ⁷及びＲ⁸は異なっており、そしてＲ⁸，Ｒ⁹及びＲ¹⁰はそれぞれ水素原子である請求の範囲第１又は２項記載の化合物。４．下記一般式（II）：Ｂ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR⁵R⁶−Ａ′−R¹² （II）〔式中、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³，Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶，Ａ，Ａ′及びＢは請求の範囲第１項に特定される意味を有する〕で表わされるリガンド。５．前記Ａ及びＡ′が硫黄原子を表わし、そしてＲ¹²が水素原子又は硫黄保護基を表わす請求の範囲第４項記載のリガンド。６．前記Ｒ⁷及びＲ⁸は異なっており、そしてＲ⁸，Ｒ⁹及びＲ¹⁰はそれぞれ水素原子である請求の範囲第４又は５項記載のリガンド。７．一般式（Ｉ及び／又はII）の化合物及び疾患組織に選択的に蓄積する物質を含む共役体であって、共有結合が前記物質間に存在し、前記結合が、前記物質がカルボキシ又はアミノ基、たとえばペプチド、タンパク質、抗体又はそれらのフラグメントを含む場合、アミド性であり、前記物質がヒドロキシ基、たとえば脂肪アルコールを含む場合、エステルの様であり、そして前記物質がアルデヒド基を含む場合、イミド性であることを特徴とする共役体。８．疾患組織に蓄積する前記物質がペプチド、たとえばエンドセリン、部分的エンドセリン配列、エンドセリン類似体、エンドセリン誘導体又はエンドセリンアンタゴニストである請求の範囲第７項記載の共役体。９．前記ペプチドが、下記配列：その部分的配列又はその環状アミノ酸配列で成る請求の範囲第７項記載の共役体。 10．一般式（Ｉ）の化合物の生成方法であって、ペルテクネテートの形でのテクネチウム−99ｍ又はペルレネートの形でのReと下記一般式（II）：Ｂ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR³R⁴−Ａ′−R¹² （II）〔式中、Ｒ¹，Ｒ²，Ｒ³，Ｒ⁵，Ｒ⁶，Ｒ¹²，Ａ，Ａ′及びＢは請求の範囲第１項の通りである〕で表わされる化合物とを、還元剤及び場合によっては補助リガンドの存在下で反応せしめることを特徴とする方法。 11．一般式（II）のリガンドの生成方法であって、次の反応スケム：Ｘ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR⁵R⁶−Ａ′−R¹² （III）＋NH₂−CR⁷R⁸−（CR⁹R¹⁰）_n=1,₂−Ｓ−R¹¹ （IV） →Ｂ−CO−CR¹R²−Ａ−CR³R⁴−CR⁵R⁶−Ａ′−R¹² （II）〔式中、Ｘは離脱基であり、そしてＲ¹，Ｒ²，Ｒ³，Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶，Ａ，Ａ′及びＢは請求の範囲第１項記載の通りである〕に従って、一般式（III）の化合物と一般式（IV）の化合物とを反応せしめることを特徴とする方法。 12．請求の範囲第４〜６のいづれか１項記載の一般式（II）の化合物、又は請求の範囲第７〜９のいづれか１項記載の共役体、還元剤及び場合によっては補助リガンドから成る放射性医薬を生成するためのキットであり、ここで前記剤は乾燥又は溶液の状態で存在し、ペルテクネテート又はペルレネート溶液の形でのテクネチウム−99ｍ又はレニウムと前記化合物とを反応するための説明を包含する使用説明書をさらに含んで成るキット。 13．レセプター、及びレセプター及び／又はアテローム硬化性斑を含む組織の非侵入性インビボ可視化のための放射性医薬製剤であって、請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載の式（Ｉ）の化合物、又は請求の範囲第７〜９のいづれか１項記載の共役体、及び場合によっては自然療法において通常であるアジュバンドを含み；前記化合物はテクネチウム−99ｍ又はレニウムをペルテクネテート又はペルレネート溶液の形で用いる請求の範囲第12項記載のキットにおいて調製されることを特徴とする製剤。 14．請求の範囲第13項記載の放射性製剤が患者の体重70kg当り0.1〜30mCi、好ましくは0.5〜10mCiの用量で適用され、そして患者により放される放射線が記録されることを特徴とする放射性診断試験を実施するための方法。