JPH08512033A

JPH08512033A - ４−アザ−プレグナン５α−レダクターゼアイソザイム１阻害剤

Info

Publication number: JPH08512033A
Application number: JP7503118A
Authority: JP
Inventors: デユレツテ，フイリツペ・エル; サツホー，サムヤ・ピー
Original assignee: メルクエンドカンパニーインコーポレーテッド
Priority date: 1993-06-28
Filing date: 1994-06-27
Publication date: 1996-12-17
Anticipated expiration: 2017-09-17
Also published as: US5658922A; ATE158301T1; AU679769B2; DE69405760D1; EP0711164A4; CA2165077A1; EP0711164B1; EP0711164A1; AU7317794A; DE69405760T2; WO1995000147A1; JP3325026B2

Abstract

(57)【要約】式（Ｉ）〔式中R¹は水素またはメチルであり、R²はメチルまたはエチルであり、R³は水素またはメチルであり、C1−C2の炭素−炭素結合は、単結合または二重結合であり得る〕の化合物。このような化合物は、5α−レダクターゼのアイソザイムの遮断を有益とする病的状態の治療に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称 4−アザ−プレグナン5α−レダクターゼアイソザイム1阻害剤発明の分野本発明は、新規な化合物、新規な組成物、これらの使用方法及びこれらの製造方法を提供し、前記化合物は通常、その作用機序が5α−レダクターゼ1アイソザイムの選択的阻害に基づく治療薬として薬理学的に有用である。発明の背景尋常性アクネ、脂漏症、女性多毛症、男性型禿頭症（脱毛症）及び良性前立腺過形成など、幾つかの望ましくない生理的症状発現は、代謝系におけるテストステロンまたは類似のアンドロゲンの過剰蓄積によって惹起されるアンドロゲン過剰性刺激の結果である。アンドロゲン過剰(hy-perandrogenicity)の望ましくない結果に対抗する化学療法薬を提供するという初期の試みは、それ自体が望ましくないホルモン活性を有する数種のステロイド系抗アンドロゲンの発見という結果に終わった。例えば、エストロゲンはアンドロゲンの作用を打ち消すのみでなく、女性化作用を有してもいる。非ステロイド系の抗アンドロゲン、例えば4′−ニトロ−3′−トリフルオロメチル−イソブチラニリド(isobutyranilide )も開発された。Neri等，Endocrinol.91(2)，1972を参照されたい。しかし、非ステロイド系抗アンドロゲンはホルモン作用は有しないが、レセプター部位に関してあらゆる天然アンドロゲンと競合し、従って男性患者、または女性患者の男性胎児を女性化する傾向、及び／または精巣の過剰刺激を惹起するフィードバック作用を開始する傾向を有する。幾つかの標的器官、例えば前立腺におけるアンドロゲン活性の主要な媒介体は、テストステロン−5α−レダクターゼの作用により標的器官において局所的に形成される5α−ジヒドロテストステロンである。テストステロン−5α−レダクターゼの阻害剤は上記器官におけるアンドロゲン過剰性刺激の症状を予防または軽減するべく機能する。本出願人の1983年3月22日付米国特許第4,377,584号を特に参照されたい。今や、特に頭皮組織において表皮組織と相互作用する第二の5 α−レダクターゼアイソザイムが存在することは公知である。この形態は通常5 α−レダクターゼ1と呼称され、一方主に前立腺組織中で相互作用するアイソザイムは5α−レダクターゼ2と呼称される。いずれのアイソザイムも前立腺組織において活性である。アンドロゲン過剰性疾患状態、例えば良性前立腺過形成(BPH)の治療では、ジヒドロテストステロン産生を著しく抑制するべく前立腺において上記両アイソザイムに対して活性である独立薬物 (drug entity)を用いると共に、皮膚及び頭皮の状態、例えば男性のアクネ及び脱毛症並びに女性の多毛症の治療に用いる、頭皮に関連するアイソザイムの5α −レダクターゼ1をきわめて選択的に阻害する別の独立薬物も用いることが望ましい。加えて、上記のような選択的5α−レダクターゼ1阻害剤は、BPHの治療で治療薬として用いる、5α−レダクターゼ2に対して高度に選択的であるフィナステリド(finasteride)[PROSCAR(登録商標)]と配合して用いることも可能である。従って本発明は、5α−レダクターゼアイソザイム1の阻害において十分な活性を有する化合物を提供することを目的とする。本発明はまた、良性前立腺過形成の治療及び／または予防に単独で、または5α−レダクターゼ2阻害剤との配合形態において有用である化合物を提供することも目的とする。加えて、本発明は女性多毛症、男性型禿頭症、アクネ、アンドロゲン産生過剰性(androgenetic)脱毛症、前立腺癌、及び高密度リポタンパク質の血漿中レベルの不十分さの治療に有用な化合物の提供も目的とする。本発明の化合物は上記分野のうちの一つ以上に利用できる。発明の概要本発明の化合物は、一般構造式Ｉ〔式中 R¹は水素またはメチルであり、 R²はメチルまたはエチルであり、 R³は水素またはメチルであり、 C1−C2の炭素−炭素結合は、単結合または二重結合であり得る〕の化合物である。発明の詳細な説明 “薬理有効量”という語は薬物または医薬の、研究者または臨床医が求める組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘起する量を意味する。本発明の化合物は、錠剤、カプセル剤(各々時限放出性製剤及び徐放性製剤を含む)、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁液剤、シロップ剤及び乳剤などの経口投与形態で投与し得る。同様に、本発明の化合物は静脈内( 濃縮塊と注入液との両方)、腹腔内、皮下、局所または筋肉内投与形態でも投与可能であり、その際用いる形態はいずれも医薬分野の当業者に良く知られたものである。抗アンドロゲン薬として所望の化合物を、有効であるが有毒ではない量で用い得る。本発明の化合物は、次の反応図式及び実施例並びにこれらを変形したものに従い、容易に入手可能な出発物質、試薬、及び通常の合成操作を用いて容易に製造し得る。その際の反応では、それ自体当業者に公知であるがここには詳述しない変形例を用いることも可能である。最も好ましい本発明の化合物は、次の実施例に特に示した化合物のいずれかまたは総てである。しかし、これらの化合物が本発明と看做される唯一の種類(gen us)であると解釈するべきではなく、化合物やその部分の任意の組み合わせはそれ自体が一つの種類であり得る。次の実施例において本発明の化合物の製造を詳述する。そこで述べる製法の条件及び過程の公知の変形を本発明の化合物の製造に用い得ることは、当業者には容易に理解される。実施例2〜6 で用いた出発物質の7β−メチル−4−アザ−5α−プレグナン−3,20−ジオン及び7β−メチル−4−アザ−5α−プレグン−1−エン−3,20−ジオンに施す操作は、以前に報告され(1983年3月22日付で本出願人に付与された米国特許第4,377,58 4号)、かつ実施例1にまとめて述べてある操作に類似する。温度は総て、特に断らないかぎり摂氏である。実施例1 3−アセトキシ−プレグン−5−エン−20−オール −10℃において、酢酸プレグネノロン(100g；0.28mol)を無水エタノール（1l ）及び塩化メチレン(0.4l)に溶解させた溶液にホウ水素化ナトリウム(21g)を添加した。4℃で一晩攪拌後、ホウ水素化ナトリウム(10.5g)を更に添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を5％リン酸一ナトリウム(2l)中に注ぐことによって反応を停止させ、塩化メチレンで抽出した。有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで脱水し、かつ無水硫酸ナトリウムのパッドで濾過した。溶媒を回転蒸発(rotoevaporation)により除去して標記化合物を得た(97.6g；収率87％)。3−アセトキシ−20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−プレグン−5−エン 3−アセトキシ−プレグン−5−エン−20−オール(361g；1mol)をジメチルホルムアミド(3.7l)中に懸濁させた攪拌懸濁液にイミダゾール(203.7g；2.28mol)を添加した。t-ブチルジメチルシリル塩化物(228.9g；1.52mol)を10〜15分掛けて添加した。混合物を室温で３日間攪拌した。ジメチルホルムアミドをデカンテーションによって取り出し、これにメタノール(50ml)を添加した。水(4l)を添加し、溶液を酢酸エチル(2×4l)で抽出した。デカンテーション後に残留する沈澱物を酢酸エチルに溶解させ、これを上記酢酸エチル抽出物に添加した。一つに合わせた溶媒抽出物を水、飽和塩溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を回転蒸発によって除去し、生成物を、2：1のヘキサン−塩化メチレン、続いて1：1のヘキサン−塩化メチレンで溶離するシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。標記化合物を20α一異性体と20β−異性体との混合物として単離した(363.3g；収率76％)。3−アセトキシ−20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−プレグン−5−エン−7− オン 3−アセトキシ−20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−プレグン−5−エン(337 g；0.71mol)をメチルエチルケトン(4l)に溶解させた溶液にN−ヒドロキシフタルイミド(115.8g；0.71mol)及び過酸化ジベンゾイル(1.1g；4.4mmol)を添加した。反応混合物を7.5時間還流させながら該混合物に空気を通気した。N−ヒドロキシフタルイミド(9g)及び過酸化ジベンゾイル(0.1g)を更に添加し、還流を5時間継続した。溶媒を回転蒸発によって除去し、塩化メチレン(0.7l)を添加して40℃に加温した。室温に冷却した後懸濁液を濾過し、濾液を塩化メチレン(0.2l)で洗浄した。濾液を回転蒸発させ、かつピリジン（1.35l)及び無水酢酸(135ml)で処理した。一晩攪拌後、溶媒を回転蒸発によって除去し、得られた濃いオレンジ色の油をメタノール(0.6l)に溶解させた。混合物を50℃に加熱し、その後室温に冷却した。溶液を3日間放置してから氷浴中で冷却した。沈澱物を濾別し、メタノールで洗浄し、かつ乾燥して標記化合物を得た(110.6g；収率32％)。濾液を回転蒸発させて乾燥ゴム質とし、それによって253gの粗生成物を得た。20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7−メチル−プレグン−5−エン−3,7−ジオール 3−アセトキシ−20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−プレグン−5−エン−7 −オン(279g；0.57mol)をテトラヒドロフラン(5.6l)に溶解させた溶液を4℃に冷却した。塩化メチルマグネシウムの3Mテトラヒドロフラン溶液(1.037l；3.1mol)を、温度を0℃以下に維持するような速度で添加した。氷浴を除去し、反応混合物を一晩掛けて室温まで加温した。反応混合物を氷浴中で冷却し、塩化アンモニウムの20％溶液(3l)で反応を停止させた。有機層を取り出し、水性層を酢酸エチルで抽出した。有機層を一つに合わせ、飽和塩溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水した。溶液を無水硫酸ナトリウムのパッドで濾過し、溶媒を回転蒸発によって除去して標記化合物を得た(265.7g；収率92.3％)。20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7−メチル−プレグン−4,6−ジエン−3− オン 20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7−メチル−プレグン−5−エン−3,7− ジオール(298g；0.59mol)をトルエン(3l)及びシクロヘキサノン(1.03l)に溶解させた溶液を共沸させて750mlの溶媒を除去した。アルミニウムイソプロポキシド( 121g)をトルエン(620ml)に溶解させた溶液を添加し、得られた溶液を共沸させて更に65Omlの溶媒を除去した。還流冷却器を装填して、溶液を一晩還流させた。溶液を40℃に冷却し、Supercell（登録商標）(125g)及び水(125ml)を添加した。 10分間攪拌後、混合物を濾過し、固体をトルエン(550ml)で洗浄した。溶媒を回転蒸発によって除去してオレンジ色の液体を得、この液体を、ヘキサン、続いてヘキサン中の5→10％酢酸エチルで溶離するシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。標記化合物を20α−異性体と20β−異性体との混合物として単離した(199.4g；収率76％)。20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−７β−メチル−プレグン−4−エン−3−オン 5％パラジウム−炭(7.12g)及びベンジルアルコール(213ml)をヘプタン(356ml) に加えたスラリーを20分間還流させた。混合物を80℃に冷却し、20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7−メチル−プレグン−4,6−ジエン−3−オン(71.2g；0.1 6mol)をヘプタン(427ml)に溶解させた溶液を添加した。スラリーを9.5時間還流させた。反応混合物を室温に冷却し、ソルカフロック(solka flok)濾過助剤を介して濾過し、その後前記助剤をヘキサンで洗浄した。濾液をアセトニトリルで抽出し、その後アセトニトリルをヘキサンで逆抽出した。ヘプタン及びヘキサン抽出物を一つに合わせ、飽和硫酸ナトリウム及び飽和塩溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水した。溶液を無水硫酸ナトリウムのパッドで濾過し、溶媒を回転蒸発によって除去した。ヘキサン中の7％酢酸エチルで溶離するシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって標記化合物を精製した(31.4g；収率44％)。20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−７β−メチル−5−オキソ−A−ノル−3,5 −セコプレグナン−3−酸 20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7β−メチル−プレグン−4−エン−3− オン(73.57g；0.165mo1)をt-ブタノール(0.96l)に溶解させた溶液に炭酸ナトリウム(25.8g)の水溶液(120ml)を添加した。混合物を攪拌しながら80℃に加熱した。過ヨウ素酸ナトリウム(244g)及び過マンガン酸カリウム(1.91g)の水溶液(0.96 l)を加温してこれをゆっくり添加し、その後反応混合物を2時間還流させた。反応混合物を室温に冷却し、SuperCellのパッドで濾過した。濾過ケークを水(2×1 90ml)で洗浄した。一つに合わせた濾液を、回転蒸発によってt-ブタノールを除去してから塩化メチレンで洗浄した。水溶液を2N塩酸でpH3以下に酸性化し、塩化メチレンで抽出した(3回)。有機抽出物を一つに合わせ、5％重亜硫酸ナトリウム溶液及び飽和塩溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を回転蒸発によって除去して、標記化合物を白色の泡として得た(62.3g；収率83％)。20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7β−メチル−4−アザプレグン−5-エン 20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7β−メチル−5−オキソ−A−ノル−3,5 −セコプレグナン−3−酸(26g；56mmol)をエチレングリコール(500ml)に溶解させた溶液に、窒素下に無水酢酸アンモニウム(50g)を添加した。混合物を180℃で 5時間加熱し、室温に冷却し、水(3.5l)で稀釈した。1時間攪拌後、固体を濾別し、水性層を塩化メチレン(500ml)で抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を回転蒸発によって除去した。残留物を先に濾別した固体と合わせ、真空オーブン内で一晩乾燥して標記化合物を得た(23.9g；収率96％)。20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7β−メチル−5α−4−アザプレグナン 20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7β−メチル−4−アザプレグン−5−エン(23.9g；53.6mmol)を酢酸(250ml) に溶解させた溶液に酸化白金(1.8g)を添加した。混合物を水素（1気圧）下に一晩攪拌した。反応混合物をセライト濾過助剤のパッドで濾過し、濾液をトルエン (3×500ml)と共蒸発させて酢酸を全部除去した。残留物をクロロホルムに溶解させ、再びセライト濾過助剤のパッドで濾過して残留する触媒を除去した。溶媒を回転蒸発により除去して標記化合物を得、この化合物を、これ以上の精製を行なわずに直接次のステップに用いた。20−ヒドロキシ−7β−メチル−5α−4−アザプレグナン−3−オン粗な20−t-ブチルジメチルシリルオキシ−7β−メチル−5α−4−アザプレグナン(25.2g)をアセトニトリル(300ml)に加えたスラリーにフッ化水素酸水溶液(1 2ml)を添加した。室温で8時間攪拌後、反応混合物を0℃に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム溶液をゆっくり添加した。混合物を塩化メチレン(3×500ml)で抽出し、一つに合わせた抽出物を水、飽和塩溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を回転蒸発により除去して標記化合物を得(22.3g)、この化合物を精製せずに次の反応に用いた。7β−メチル−5α−4−アザプレグナン−3,20−ジオン 20−ヒドロキシ−7β−メチル−5α−4−アザプレグナン−3−オン(22.3g；67 mmol)を窒素下に乾燥塩化メチレン(110ml)に溶解させた溶液を攪拌し、これに4 −メチルモルホリンN−オキシド(11.8g；100mmol)、次いで4Åモレキュラーシーブ(33g)を添加した。得られた混合物に過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム(1.2g)を添加した。室温で4時間攪拌後、反応混合物を300ml容の半融ガラス漏斗内のシリカゲルパッドに注いで該パッドを通過させ、その後前記パッドを4 ：1の酢酸エチル−塩化メチレン(5l)で溶離した。溶媒を回転蒸発により除去して標記化合物を再結晶させた(16.3g)。7β−メチル−5α−4−アザプレグン−1−エン−3,20−ジオン 7β−メチル−5α−4-アザプレグナン−3,2O−ジオン(5.5g；16.6mmol)を乾燥トルエン(100ml)に溶解させた溶液に2,3−ジクロロ−5,6−ジシアノ−1,4−ベンゾキノン(DDQ；4.52g；19.92mmol)、次いでビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセトアミド(17.6ml；66.4mmol)及びトリフル酸(triflic acid)(0.11ml；1.3 mmol)を添加した。混合物を窒素下に室温で24時間攪拌し、その後アセト酢酸メチル(1.8ml；1.66mmol)を添加し、4時間の攪拌に続いて還流を48時間継続した。反応混合物を、重炭酸ナトリウム(8g)及び亜硫酸ナトリウム(3g)を含有する水(500 ml)の中へ注いだ。溶液を塩化メチレン(3×250ml)で抽出し、水、飽和塩溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を回転蒸発によって除去し、生成物を、溶離液としてヘキサン中の10％イソプロパノールを用いて溶離するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して標記化合物とした(2.47g)。実施例2 4,7β,20−トリメチル−20−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグナン−3−オン 103mg(0.31mmol)の7β−メチル−5α−4−アザプレグナン−3,20−ジオンを10 mlの乾燥テトラヒドロフランに溶解させた溶液に、N₂下に−40℃において6当量のエーテル中の臭化メチルマグネシウム(1.86mmol)を添加した。反応混合物を攪拌し、90分掛けて室温まで加温した。塩化アンモニウム水溶液(5ml)を添加し、溶媒を蒸発させた。残留物を塩化メチレンと水とに分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。粗な残留物を5mlの乾燥ジメチルホルムアミドに溶解させ、0℃に冷却した。ヨウ化メチル (10当量；3.1mmol)及び水素化ナトリウム(2当量；0.6mmol)を添加し、反応混合物を室温で48時間攪拌した。塩化アンモニウム水溶液を添加し、反応混合物を10 0mlの水へ注ぎ、毎回25mlの酢酸エチルで3回抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。生成物を、濃度勾配5→20％のヘキサン中のイソプロパノールを20ml/分で用いる19×300mmの8μmシリカカラム上でのHPLCにより精製して51mg(0.141mmol；収率46％)の標記化合物を得た。 MS(FAB)：M+1＝362 NMR(CDCl₃，TMSからのδ)：0.82(s，3H)、0.83(s，3H)、1.03(d，J＝6.14Hz，3H )、1.17(s，3H)、1.28(s，3H)、2.42(m，2H)、2.90(s，3H)、3.03(m，1H)。実施例3 7β,20−ジメチル−20−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグン−1−エン−3−オン 20mg(0.06mmol)の7β−メチル−5α−4−アザプレグン−１−エン−3,20−ジオンを4mlの乾燥テトラヒドロフランに溶解させた溶液に、N₂下に−40℃において10当量のエーテル中の臭化メチルマグネシウム(0.6mmol)を添加した。反応混合物を撹拌し、18時間掛けて室温まで加温した。塩化アンモニウム水溶液 (5ml)を添加し、溶媒を蒸発させた。残留物を塩化メチレンと水とに分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。生成物を、ヘキサン中の5％イソプロパノールを20ml/分で用いる19×300mmの8μmシリカカラム上でのHPLCにより精製して16mg(0.046mmol；収率77％)の標記化合物を得た。 MS(EI)：M+=345、M(-CH₃)＝330、M(-CH₃,H₂O)＝312 NMR(CDCl₃，TMSからのδ)：0.84(s，3H)、0.89(s，3H)、1.01(d，J＝5.8Hz，3H) 、1.17(s，3H)、1.29(s，3H)、2.42(m，2H)、3.3(m，1H)、5.22(b，1H)、5.79(d d，Ja＝2.4Hz，Jb＝9.9Hz，1H)、6.78(d，J＝9.9Hz)。実施例4 4,7β,20−トリメチル−20−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグン−1−エン−3− オン 73mg(0.22mmol)の7β−メチル−5α−4−アザプレグン−1−エン−3,20−ジオンを7mlの乾燥テトラヒドロフランに溶解させた溶液に、N₂下に−40℃において3 当量のエーテル中のメチルリチウム(0.7mmol)を添加した。反応混合物を攪拌し、TLCによって監視した。3時間後、再度メチルリチウム（0.5当量)を添加した。 2時間後、10当量のヨウ化メチル(2.2mmol)を添加し、反応混合物を18時間掛けて室温まで加温した。塩化アンモニウム水溶液(5ml)を添加し、溶媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチルと水とに分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。生成物を、濃度勾配5→15％のヘキサン中のイソプロパノールを20ml/分で用いる19×300mmの8μmシリカカラム上でのHPLCにより精製して34mg(0.095mmo l；収率43％)の標記化合物を得た。 MS(EI)：M+＝359 NMR(CDCl₃，TMSからのδ)：0.84(s，6H)、1.05(d，J＝5.9Hz，3H)、1.17(s，3H) 、1.29(s，3H)、2.4(m，2H)、2.93(s，3H)、3.3(m，1H)、5.83(d，J＝9.9Hz，1H )、6.67(d，J＝9.9Hz，1H)。実施例5 4,7β−ジメチル−20−エチル−20(S)−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグナン− 3−オン 90mg(0.27mmol)の7β−メチル−5α−4−アザプレグナン−3,20−ジオンを10m lの乾燥テトラヒドロフランに溶解させた溶液に、N₂下に−40℃において10当量のエーテル中の臭化エチルマグネシウム(2.7mmol)を添加した。反応混合物を攪拌し、90分掛けて室温まで加温した。塩化アンモニウム水溶液(5ml)を添加し、溶媒を蒸発させた。残留物を塩化メチレンと水とに分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。粗な残留物を、濃度勾配5→10％のヘキサン中のイソプロパノールを20ml/分で用いる19×300mmの8μmシリカカラム上でのHPLCにより精製して65mg(0.18mmol ；収率65％)の4NHアザステロイドを得た。この4NHアザステロイド63mg(0.17mmol )を5mlの乾燥ジメチルホルムアミドに溶解させた溶液をN₂下に0℃に冷却した。ヨウ化メチル(10当量；1.7mmol)及び水素化ナトリウム(1.2当量；0.2mmol)を添加し、反応混合物を室温で24時間攪拌した。塩化アンモニウム水溶液を添加し、反応混合物を100mlの水へ注ぎ、毎回25mlの酢酸エチルで３回抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。生成物を、濃度勾配5→10％のヘキサン中のイソプロパノールを20ml/分で用いる19×300mm の8μｍシリカカラム上でのHPLCにより精製して40mg(0.106mmol；収率63％)の標記化合物を得た。 MS(EI)：M+＝375 NMR(CDCｌ₃，TMSからのδ)：0.82(s，3H)、0.82(t，J＝7.5Hz，3H)、0.85(s，3H )、1.03(d，J＝6.1Hz，3H)、1.23(s，3H)、2.42(m，2H)、2.90(s，3H)、3.0(m， 1H)。実施例6 7β−メチル−20−エチル−2O(S)−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグン−1−エン−3−オン 100mg(0.303mmol)の7β−メチル−5α−4−アザプレグン−1−エン−3,20−ジオンを10mlの乾燥テトラヒドロフランに溶解させた溶液に、N₂下に−40℃において15当量のエーテル中の臭化エチルマグネシウム(4.5mmol)を添加した。反応混合物を攪拌し、18時間掛けて室温まで加温した。塩化アンモニウム水溶液(5ml) を添加し、溶媒を蒸発させた。残留物を塩化メチレンと水とに分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。生成物を、ヘキサン中の5％イソプロパノールを20ml/分で用いる19×300mmの8μmシリカカラム上でのHPLCにより精製して53mg(0.147mmol；収率49％)の標記化合物を得た。 MS(FAB)：M+1＝360 NMR(CDCl₃，TMSからのδ)：0.83(t，J=7.5Hz，3H)、0.87(s，3H)、0.89(s，3H) 、1.02(d，J=5.7Hz，3H)、1.23(s，3H)、3.32(m，1H)、5.79(dd，Ja＝2.4Hz，Jb ＝9.9Hz，1H)、6.79(d，J＝10.0Hz)。実施例7 4,7β−ジメチル−20−エチル−20(S)−ヒドロキシ−5α −4−アザプレグン−1−エン−3−オン 46mg(0.128mmol)の7β−メチル−20−エチル−20(S)−ヒドロキシ−5α−4− アザプレグン−1−エン−3−オン(実施例6で製造)を5mlの乾燥ジメチルホルムアミドに溶解させた溶液をN₂下に0℃に冷却した。ヨウ化メチル(10当量；1.3mmol) 及び水素化ナトリウム（2当量；25mmol)を添加し、反応混合物を室温で24時間攪拌した。塩化アンモニウム水溶液を添加し、反応混合物を100mlの水へ注ぎ、毎回25mlの酢酸エチルで3回抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。生成物を、塩化メチレン中の10％アセトンを用いるシリカゲルMPLCにより精製して30mg(0.08mmol；収率63％)の標記化合物を得た。 MS(FAB)：M+＝374 NMR(CDCl₃，TMSからのδ)：0.82(t，J＝7.5Hz，3H)、0.85(s，3H)、0.87(s，3H) 、1.02(d，J＝5.7Hz，3H)、1.23(s，3H)、2.93(s，3H)、3.32(m，1H)、5.83(d， Jb＝10.0Hz，1H)、6.68(d，J＝10.0Hz)。実施例8 20−メトキシ−4,7β,20−トリメチル−5α−4−アザプレグナン−3-オン 20mg(0.06mmol)の20−ヒドロキシ−4,7β,20−トリメチル−5α−4−アザプレグナン−3−オン(実施例2で製造)を4mlの乾燥ジメチルホルムアミドに溶解させた溶液に0℃においてヨウ化メチル(10当量；0.6mmol)及び水素化ナトリウム(5当量；0.3mmol)を添加し、反応混合物を室温で48時間攪拌した。塩化アンモニウム水溶液を添加し、反応混合物を100mlの水へ注ぎ、かつ毎回25mlの酢酸エチルで3 回抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、蒸発させた。生成物を、ヘキサン中の5％イソプロパノール溶離液を20ml/分で用いる 19×300mmの8μmシリカカラム上でのHPLCにより精製して15mg(0.04mmol；収率67 ％)の標記化合物を得た。 MS(EI)：M+＝375、M-CH₃＝360 NMR(CDCl₃，TMSからのδ)：0.77(s，3H)、0.82(s，3H)、1.02(d，J＝6.1Hz，3H) 、1.16(s，3H)、1.16(s，3H)、2.42(m，2H)、2.90(s，3H)、3.0(m，1H)、3.13(s ，3H)。生物学的アッセイヒト前立腺及び頭皮5α−レダクターゼの調製フリーザーミルを使用してヒト組織サンプルを微粉砕し、Potter-Elvehjemホモジナイザーを使用して0.25Mスクロースを含有する40mMリン酸カリウム、pH6.5、5mM硫酸マグネシウム、25mM塩化カリウム、1mM弗化フェニルメチルスルホニル、1mMジチオトレイトール(DTT)中でホモジナイズした。1,500×gで15分間ホモジネートを遠心分離することにより粗核ペレットを調製した。粗核ペレットを2回洗い、緩衝液2容量に再懸濁した。再懸濁したペレットにグリセロールを最終濃度20％まで加えた。酵素懸濁液を−80℃ でアリコートとして凍結した。前立腺及び頭皮レダクターゼをこれらの条件下で保存した場合、少なくとも4カ月間安定であった。5α−レダクターゼアッセイ最終容量100μlに含まれる反応混合物は、40mM緩衝液(ヒト頭皮ではリン酸カリウム、pH6.5；ヒト前立腺5α−レダクターゼではクエン酸カリウム、pH5.5)、 0.3〜10μM¹⁴C-T(又は³H-T)、1mM DTT及び500μM NADPHである。典型的には、前立腺ホモジネート50〜100μg又は頭皮ホモジネート75〜200μgを加えることによりアッセイを開始し、37℃でインキュベートした。10〜50分後、DHT及びT各10μ gを含有する70％シクロヘキサン：30％酢酸エチルの混合物250μlで抽出することにより反応を停止した。水層と有機層をエッペンドルフマイクロ遠心機で14,000rpmで遠心分離することにより分離した。有機層を順相HPLC(70％シクロヘキサン：30％酢酸エチル1ml/min中で平衡した10cm Whatman partisil 5シリカカラム；保持時間DHT6.8〜7.2分；アンドロスタンジオール7.6〜8.0分；T9.1〜9.7分)にかけた。HPLCシステムはHitachi Mo del 655Aオートサンプラー、Applied Biosystems Model 757可変UVデテクター及びRadiomatic Model A120放射能アナライザーを備えるWaters Model 680 Gradie nt Systemから構成した。HPLC溶離液をFlo Scint 1(Radiomatic)1容量と混合することにより放射能流量検出器を使用してTからDHTへの変換をモニターした。記載の条件下でDHTの生成は少なくとも25分間線形であった。ヒト前立腺及び頭皮調製物で観察されたステロイドは、T、DHT及びアンドロスタンジオールのみであった。阻害試験化合物は100％エタノールに溶解させた。試験するべき化合物を、基質のテストステロンの添加による試験開始前に酵素(5α−レダクターゼタイプ1または2) と共にプリインキュベートした。IC₅₀値は、テストステロンからジヒドロテストステロンへの酵素変換を対照の50％に減少させるのに必要な阻害剤の濃度である。阻害剤の濃度を0.1nMから1000nMまで変化させる6点滴定を用いてIC₅₀ 値を測定した。上述のアッセイにおいて本発明の代表的化合物を、5α−レダクターゼタイプ1及びタイプ2阻害に関して試験した。本明細書中で5α−レダクターゼ2阻害剤と呼称する化合物は、上述のアッセイにおいて5α−レダクターゼ2アイソザイムの阻害を示す、約100nM以下のIC₅₀値を有する化合物である。ヒト真皮乳頭細胞アッセイ真皮乳頭は各毛包の基部に位置する小型の細胞群であり、現在これらの細胞が毛の成長の基礎を成す幹細胞であると考えられている。真皮乳頭細胞は5α−レダクターゼ活性を有することが判明しており、従って5α−レダクターゼの阻害剤を該細胞の培養系において試験することが可能である。単離及び培養真皮乳頭細胞は、A．G．Messenger，“Cul-ture of Dermal Papi lla Cells from Human Hair Folli-cles,”Br．J．Dermatol．110，pp．685-689 ，1984及びS． Itami等，“5α-Reductase Activity in Cultured Human Dermal Papilla Cells from Beard Compaired with Reti-cular Dermal Fibroblasts,”J．Invest．De rmatol．94 ，pp．150-152，1990の方法に従って調製する。試験全体において、異なる２個体のひげ真皮乳頭細胞及び後頭頭皮毛(occipital scalp hair)を用いる。実験は総て、4〜6代目の継代培養後の集密状態において行なう。集密的細胞単層をリン酸緩衝溶液で２回濯ぎ、ラバーポリスマンで培養皿から掻き取り、遠心管内に集める。細胞懸濁液を4℃で10分間1,500rpmで遠心する。4℃においてペレットを、250mMスクロース、1mM MgCl₂及び2mM CaCl₂を含有するpH7.5の20mMトリス−HCl緩衝液中に、渦を生じさせ、かつ25ゲージのニードルに10回通すことにより再懸濁させる。得られる粗ホモジネートをテフロン−ガラスホモジナイザーによって更にホモジナイズし、これを細胞ホモジネートとして用いる。5α− レダクターゼの細胞下局在を調べるためには、上記細胞ホモジネートを800×gで 10分間遠心して粗な核ペレットを得る。生じた上清を10,000×gで15分間遠心して粗なミトコンドリアペレットを生じさせる。その際の上清を100,000×gで60分間遠心してミクロソームペレット及び細胞質ゾルを得る。各粒状画分を2回洗浄し、緩衝液中に再懸濁させる。標準的なインキュベーション混合物は、50nM[³H]−テストステロンと、1mM NA DPHと、pH5.5の100mMクエン酸ナトリウムまたはpH7.5の100mMトリス−HClと、50 μlの細胞ホモジネートとによって最終量100μlに製造する。各管に50〜100μg の細胞タンパク質を入れる。インキュベーションは37℃で30分間行なう。このインキュベーションの間、反応は時間に比例する。最適pHを調べるためには、pH4. 5〜6.5のクエン酸塩緩衝液及びpH7.0〜9.0のトリス−HCl緩衝液を用いる。タンパク質含量はLowry等，“Protein Measurement with the Folin Phenol Reagent ,”J．Biol．Chem．193，pp．265-275，1951の方法によって測定する。インキュベーション後、各110μgの担体ステロイドを含有する4倍量のクロロホルム−メタノール(体積比2：1)の添加によって反応を停止させる。抽出したステロイドを、以前Gomez等，“In Vitro Metabolism of Testosterone-4-¹⁴C and Δ-androstene-3,17-dione-4-¹⁴C in Human Skin,”Biochem．7，pp．24-32，1 968に述べてあった薄層クロマトグラフィーによって分析し、各ステロイドの純度を再結晶法によって測定する。５α−レダクターゼの活性は、生成したジヒドロテストステロン、アンドロスタンジオール及びアンドロスタンジオンの総量によって表わされる。[1,2-³H]−テストステロン(55.2Ci/mmol)がNew England N uclear Corporation(Boston，MA)から入手可能であり、また未標識ステロイドは Sigma Chemical Company(St．Louis，MO)から購入し得る。ウシ胎児血清はHazle -ton(Lenaxa，Kansas)から入手可能である。その他の化学薬剤は総て試薬品質のものとする。ファジーラットアクネモデル成体ファジーラットはラットの一変種で、毛の成長が萎縮しており、背の皮膚全体が褐色の脂漏によって覆われており、またアンドロゲンの循環に起因すると証明されていることだが春機発動期後の皮脂産生が異常に多い。選択した関心ある５α−レダクターゼ阻害剤をプロピレングリコール、イソプロパノール、ミリスチン酸イソプロピル及び水(50/30/2/18％)から成る賦形剤に加えて当該阻害剤の0.1％、0.05％及び0.025％溶液を調製し、これらを雄の成体ファジーラットの背に毎日動物1匹当たり0.2mlの量で4週間局所適用する。対照には賦形剤のみを適用し、かつそのうちの5匹は去勢する。2週間後に脂漏が適用量に応じて減少する。4週間経過後、ブロモデオキシウリジン(BrdU；200mg/kg)を腹腔内注射してから2時間後に動物を殺す。皮膚組織をリン酸緩衝液中のEDTA(20mM)の存在下に37℃で1.5時間インキュベートする。表皮に結合した毛嚢脂腺単位を真皮から剥ぎ取り、BrdUの免疫染色のためにホルマリンで固定する。BrdU陽性核を示すDNA合成細胞は外側腺縁(outer glandular border)に位置する。1葉当たりのS期細胞数を微小複製(m icro-image)装置で測定する。ホルマリンで固定した皮膚を用い、凍結連続切片を1％オスミウムで染色して葉の大きさを測定する。陽性の皮膚5α−レダクターゼ阻害剤は、腺細胞の回転率を抑え、かつ葉の大きさを減少させることによって皮脂産生の抑制を誘起する。本発明は本発明の新規治療方法で使用するのに適切な局所、経口及び非経口医薬製剤を提供することを目的とする。例えば良性前立腺肥大、前立腺炎の治療、並びに前立腺癌、アンドロゲン過剰症状の治療及び予防に使用する活性成分として本発明の化合物を含有する組成物は、全身投与を目的として従来の賦形剤に配合した広範囲の治療剤形で投与することができ、例えばタブレット、カプセル、溶液もしくは懸濁液として経口投与により、又は注射により投与することができる。製剤の1日投与量は0.5〜1,000mg/成人/日の広い範囲をとり得る。組成物は、治療すべき患者の症状にあわせて用量を調節できるように活性成分0.5、1.0、2.5 、5.0、10.0、15.0、25.0及び50.0mgを含有する計量錠剤として提供するのが好ましい。薬剤の有効量は通常、約0.002mg〜約50mg/kg体重/日の用量レベルである。好ましくは、用量範囲は約0.01mg〜7mg/kg体重/日である。これらの用量は製剤の毒性量を十分下回る。脱毛症、尋常性アクネ、脂漏症、女性多毛症の治療には、局所、経口又は非経口投与に適した医薬的に許容可能なキャリヤーと共に活性化合物を含有する医薬組成物として本発明の化合物を投与する。これらの局所医薬組成物は皮膚塗布に適したクリーム、軟膏、ゲル又はエアゾール製剤の形態であり得る。本発明の化合物を含有するこれらの局所医薬組成物は通常、賦形剤約95％と混合した約0.1〜15％、好ましくは約5％の活性化合物を含有する。本発明の化合物は、タブレット、カプセル(各々時限放出製剤及び徐放製剤を含む)、ピル、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁液、シロップ及びエマルジョンのような経口剤形で投与することができる。また、いずれも医薬分野で当業者に周知の剤形を使用して静脈内（丸塊及び浸剤の両方）、腹腔内、皮下又は筋肉内に投与することもできる。有効且つ非毒性量の所望の化合物を5α−レダクターゼ剤として使用することができる。本発明の化合物を使用する投与方法は、患者のタイプ、種類、年齢、体重、性別及び医学的症状；治療すべき症状の重度；投与経路；患者の腎及び肝機能；並びに使用する特定化合物又はその塩を含む種々の因子に従って選択される。通常の知識を有する医師又は獣医師であれば、症状の進行を予防、阻止又は抑制するために必要な薬剤の有効量を容易に決定及び処方することができよう。無毒性で効力を生じる範囲内の薬剤濃度に最適精度で達するには、標的部位に対する薬剤利用率の動態に基づく規範が必要である。このためには、薬剤の分布、平衡及び排泄を考慮する必要がある。適応症に使用する場合の本発明の経口用量は、有利には本発明の化合物を1日1 回投与するか、又は1日の合計用量を1日に2、3又は4回に分けて投与する。更に、本発明の好適化合物は適切な鼻腔内賦形剤の局所使用により鼻腔内剤形で投与してもよいし、当業者に周知の経皮パッチ剤形を使用して経皮経路で投与してもよい。経皮送達系として投与する場合は、薬剤投与は当然のことながら投与期間を通して断続的でなく連続的となる。本発明の方法において、明細書に詳細に記載する化合物は活性成分の形態をとることができ、一般に所期投与形態(即ち経口用タブレット、カプセル、エリキシル剤、シロップ等)を考慮して適切に選択され且つ従来の医薬プラクティスに合致する適切な医薬的希釈剤、賦形剤又はキャリヤー(本明細書中では「キャリヤー」物質と総称する)との混合物として投与される。例えば、タブレット又はカプセル形態で経口投与するには、有効薬剤成分をエタノール、グリセロール、水等のような医薬的に許容可能な経口非毒性不活性キャリヤーと組み合わせることができる。更に、所望又は必要に応じて適切なバインダー、滑剤、崩壊剤及び着色剤も混合物に配合することができる。適切なバインダーとしては澱粉、ゼラチン、天然糖類(例えばグルコース又はβ−ラクトース)、トウモロコシ甘味剤、天然及び合成ゴム(例えばアラビアゴム、トラガカントゴム又はアルギン酸ナトリウム)、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ろう等が挙げられる。これらの剤形で使用される滑剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が挙げられる。崩壊剤の非限定的な例としては、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等を挙げることができる。本発明の化合物は更に小粒径一枚膜小胞、大粒径一枚膜小胞及び多重層小胞のようなリポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームはコレステロール、ステアリルアミン又はホスファチジルコリンのような種々のリン脂質から形成することができる。本発明の化合物は更に、化合物分子を結合した個々のキャリヤーとしてモノクローナル抗体を使用することにより送達することもできる。本発明の化合物は更に、標的にあった薬剤キャリヤーとしての可溶性ポリマーと結合することもできる。このようなポリマーの例としては、パルミトイル残基で置換されたポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピル、メタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール又はポリエチレンオキシドポリリシンを挙げることができる。更に、本発明の化合物は薬剤を制御下に放出するのに有用な類の生物分解ポリマー(例えばポリ乳酸、ポリε−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート及びヒドロゲルの架橋又は両親媒性ブロックコポリマー)と結合することができる。以上、特定の好適態様について本発明を説明及び例示したが、発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく種々の変更、変形及び置き換えが可能であることが当業者に理解されよう。例えば、上記本発明の化合物の適応症のいずれかについて治療を受ける哺乳動物の応答の相異に応じて、上記好適用量以外の有効用量を適用することができる。また、観察される個々の薬理的応答は選択される特定活性化合物又は医薬キャリヤーの有無並びに、使用する製剤型及び投与方法に依存して異なり、予想される結果のこのような相違は本発明の目的及び実施により予期されるものである。従って、本発明は以下の請求の範囲のみに限定され、このような請求の範囲は妥当な範囲内で広く解釈されるべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ (72)発明者サツホー，サムヤ・ピーアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージイ・ 08857、オールド・ブリツジ、イーグル・コート・５

Claims

【特許請求の範囲】１．式Ｉ〔式中 R¹は水素またはメチルであり、 R²はメチルまたはエチルであり、 R³は水素またはメチルであり、 C1−C2の炭素−炭素結合は、単結合または二重結合であり得る〕の化合物。２．4,7β，20−トリメチル−20−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグナン−3−オン、 7β,20−ジメチル−20−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグン−1−エン−3−オン、 4,7β,20−トリメチル−20−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグン−1−エン−3− オン、 4,7β−ジメチル−20−エチル−20(S)−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグナン− 3−オン、 7β−メチル−20−エチル−20(S)−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグン−1−エン−3−オン、 4,7β−ジメチル−20−エチル−20(S)−ヒドロキシ−5α−4−アザプレグン−1 −エン−3−オン、及び 20−メトキシ−4,7β，20−トリメチル−5α−4−アザプレグナン−3-オンの中から選択された化合物。３．医薬に許容可能なキャリヤを含有し、かつ請求項１に記載の化合物を、アンドロゲン過剰状態の治療を必要とする哺乳動物におけるそのような治療に十分な薬理有効量で含有する医薬組成物。