JPH08512129A

JPH08512129A - 抗常習性麻酔鎮痛活性スクリーニングのための組成物および方法並びに治療

Info

Publication number: JPH08512129A
Application number: JP7502986A
Authority: JP
Inventors: サディー、ウォルフガング
Original assignee: University of California
Current assignee: University of California
Priority date: 1993-06-23
Filing date: 1994-06-17
Publication date: 1996-12-17
Also published as: CA2164966A1; EP0705433A1; EP0705433A4; AU7112094A; WO1995000848A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、麻酔性鎮痛剤中毒状態の調節を測定するアッセーを提供する。本発明の実施によって、活性化オピオイドμレセプター状態に対する被験化合物の作用について、それら被験化合物を分類することが可能となる。オピオイドμレセプター細胞を検査条件下で被験化合物とともに処理するとき、１実施例では、被験化合物の自発的ｃＡＭＰオーバーシュートおよび逆作動薬誘発ｃＡＭＰオーバーシュートを引き出す傾向が決定され、それは常習性傾向の代用測定として役立つ。逆作動薬誘発ｃＡＭＰオーバーシュートは、オピオイドμレセプターのための構造的に活性な状態と呼ばれるものの存在を明示する。これらのアッセーの使用は、オピオイドμレセプターの構造的活性化に対する所望の作用をもつ化合物の同定につながった。これら化合物の治療的有効性は、麻酔性鎮痛剤を常習する患者、または過剰量の麻酔性鎮痛剤を投与された患者、または麻酔性鎮痛剤で疼痛が解除される患者を処置することを含む。

Description

【発明の詳細な説明】抗常習性麻酔鎮痛活性スクリーニングのための組成物および方法並びに治療発明の分野本発明は、一般に麻酔薬の薬理活性のスクリーニングに関し、より具体的には、化合物の麻酔活性を分類するために役立つアッセーおよび、そのようなアッセーによって確定される抗常習性薬剤を用いる治療に関する。発明の背景内在性のアヘン製剤レセプターは１９７０年代に発見され、特定の薬剤が常習性をもたらすメカニズムを明らかにするために熱心に研究が行われてきた。しかしながら、薬剤中毒の分子メカニズムにおけるネスラー(Nestler)の１９９２年の概論の中で、彼は、そのようなメカニズムは未だ理解されていないと記載している(J.Neurosci.，12(7)，2439-2450，1992)。多数のオピオイドレセプターの種々のタイプが同定されている。とりわけ、既知のレセプタータイプではオピオイドμレセプターがある。麻酔性鎮痛剤はオピオイドμレセプターに作用し、痛覚脱失を生じる。しかしながら、麻酔性鎮痛剤の持続的使用は、典型的には習慣性または中毒をもたらし、その１つを用いることによって他のものに対する交叉耐性／依存性を生じる。それらを治療として使用するにもかかわらず、患者はこの麻酔性鎮痛剤に対して耐性が増していくので、痛みからの解放を達成するためには用量を増加させることが要求される。続いて、望ましくない副作用、例えば肉体的依存性が発生する傾向がある。麻酔性鎮痛剤の実例は、例えばアヘンの種々のアルカロイド（例えばモルヒネ）、モルヒネ塩（例えば臭化水素酸モルヒネ、塩酸モルヒネ、ムチン酸モルヒネ、オレイン酸モルヒネおよび硫酸モルヒネ）およびモルヒネ類似体（ノルモルヒネ、ジアセチルジヒドロモルヒネ、コデインおよびジアセチルモルヒネ（ヘロイン））である。他の広く用いられている麻酔性鎮痛剤には、メタドン、メペリジン、レボルファノール、プロポキシフェン、フェンタニル、オキシモルホン、アニレリジン、メトポンおよびペンタゾシンが含まれる。医薬の鎮痛特性をヒトで調べる前に、先ず小型のゲッ歯類および／またはサルで実験を行うべきであるということは、現実的および行政的な配慮からしばしば要請されているので、麻酔性鎮痛剤の作動薬的作用と依存性誘導特性は、ヒトの他に種々の哺乳類種で研究することが可能であり、現に研究されている。ヒト以外の哺乳類でモルヒネ様特性を有する薬剤は、ヒトでモルヒネ様であることが分かった。さらに、ヒトでの作用を予見することができると広く受け入れられている動物を用いて、種々の鎮痛アッセーが開発されてきた。長期的に麻酔薬に曝されているときの生化学的変化は、標的組織（例えばラットの青斑（ＬＣ）、これはアヘン製剤依存性の好ましいモデルである）を用いて調べることができる。したがって、習慣的なアヘン剤処置では、ＬＣニューロンはアヘン剤の急性抑制作用に対して耐性を生じ、さらに平行して、常習的な処置によって、レセプターと生理学的反応との間の各主要ステップで、ｃＡＭＰの第二のメッセンジャー系の劇的なアップレギュレーションが生じ、その結果依存状態をもたらすことが示された（例えばネスラーの２４４０ページを参照のこと）。今日まで、μオピオイドレセプター系のアッセーでは、麻酔中毒時におけるこの系の主要変化を全く検出することができなかった。したがって、現在の研究の多くは、依存状態を説明することを目的として、このレセプターの下流域の事象（例えば長期的遺伝子調節）に向けられてきた。麻酔薬の依存性傾向は、潜在的な鎮痛剤としてのその臨床的有用性を極度に制限し、さらに、違法な麻酔薬の使用によって社会に重い代償を課すが故に、麻酔薬依存状態を予防もしくは回復させるか、または薬物の緩慢な使用中止を促進することができる薬剤のスクリーニングは、麻酔性鎮痛剤の臨床的有用性を大いに高め、さらに、違法な薬剤使用に対する戦いにおいて効果的な医薬武器として役立つであろう。発明の要旨オピオイドμレセプターが作動薬に曝されることによってレセプターが構造的に活性化されることとなる新規なメカニズムが提唱される。麻酔性鎮痛剤に対する中毒状態は、このメカニズムを介して調節される。本発明の１つの目的は、μレセプターの構造的活性化を防止または回復させる化合物の研究において、中毒状態の調節を検出または測定する手段を提供し、さらに、μレセプターの構造的に活性な状態に対する被検物の作用に関して、それら被検物を分類することである。本発明の他の目的は、麻酔性鎮痛剤に常習癖を有するか、もしくは過剰量の麻酔性鎮痛剤を服用した患者、または疼痛が麻酔性鎮痛剤で緩和される患者を治療する方法である。本発明の治療方法は、通常オピオイドμレセプターの構造的活性化に所望の作用を有する薬剤の選択を伴う。これら所望の作用は、本発明のアッセーによって知ることができる。したがって、本発明の実施によって、麻酔性鎮痛剤の臨床的利用性が大いに高められ、さらに、違法な薬剤使用に対する戦いにおいて効果的な医薬的武器として役立つことが期待される。図面の簡単な説明図１は、耐性依存状態を理解するために有用な関係を示す模式図である。好ましい実施例の詳細な説明本発明の１つの目的は、構造的に活性なレセプターに対する被検化合物の作用を知るために、μレセプター活性について被験化合物をスクリーニング、または分類することである。本発明を実施するために、ｃＡＭＰに対する作用が、本発明の１実施例ではマーカーとして使用される。ｃＡＭＰ値の使用は、オピオイドμレセプター活性を決定する証拠として本発明の好ましい実施例ではあるが、他の作用およびマーカーもまた有用なものとして包含される。例えば、本発明のリガンド結合アッセースクリーニング例は、ｃＡＭＰアッセースクリーニングよりも速い。なぜならば、リガンド結合スクリーニングは、構造的に活性化されたμレセプター部位へのそれらの親和性について多数の化合物を迅速に検査することができるからである。オピオイドμレセプター活性についての証明としてｃＡＭＰ値を用いる場合、図１では、構造的に活性なμレセプターは“μ＊”と表されている。すなわち、 μ＊レセプターはμオピオイドレセプターの構造的に活性な状態を示し、一方、 μレセプターは休止状態で、これは、作動薬による刺激に感受性を有する。ｃＡＭＰ系は、Ｇ蛋白、アデニリルシクラーゼおよび蛋白キナーゼＡを含む第二のメッセンジャーカスケードから成る。活性化μレセプターは、一般にｃＡＭＰ系を抑制し、矢印の大きさは、この抑制の相対的な強さを示している。未経験状態（薬物に未だ曝されたことがない）では、μ＊状態の活性度は最小であり、殆どのレセプターは薬物感受性である。説明のために、モルヒネを模範作動薬として、さらに古典的な拮抗薬（すなわちそれ自身では活性を持たないが、休止状態のμ レセプターに対する作動薬の作用を阻害する）としてナロキソン（およびＣＴＯＰも（これは下記で考察する））を使用する。麻酔性作動薬の前処置により生じる依存状態が高まりつつあるとき、ｃＡＭＰ系の実質的アップレギュレーションが生じ、作動薬の排除に際してｃＡＭＰの定常状態応答逸脱（オーバーシュート）（以下では“自発的ｃＡＭＰオーバーシュート”という）をもたらす。これと並んで、μからμ＊への緩慢な最終的変換が生じ、それによって作動薬の作用に感受性を有する残りのμレセプターの数が減少し、耐性を生じる。さらに、豊富なμ＊状態が増すことは、ｃＡＭＰ系のアップレギュレーションを代償し、正常なｃＡＭＰレベル近くを維持するために必須である。それゆえに、耐性−依存状態の特徴は、μ＊活性の増加とｃＡＭＰのアップレギュレーョンの結合である。ナロキソンは図１に示すように逆の作動薬として作用する、すなわち、それはμ＊活性を阻害する。それゆえ、薬物を含まない耐性−依存組織へのナロキソンの添加は、ｃＡＭＰオーバーシュート（本明細書では“ナロキソンｃＡＭＰオーバーシュート”と呼ぶ）の増加をもたらす。対照的に、ＣＴＯＰは、活性に影響を与えること無くμ＊に結合することによって、中性または効果非発現性（ヌル）拮抗物質として活性なμ＊レセプター部位で作用する。本発明の実施を説明する際、構造的に活性なμレセプターをモニターする手段と合わせてオピオイドμレセプター源（例えばｃＡＭＰ系）を、以下ではまとめて、時に“生物学的系”と呼ぶ。ｃＡＭＰ産生に曝されるか、または組み合わされる好ましいオピオイドμレセプター源は、ヒト神経芽腫（ＮＢ）細胞株（ＳＫ −Ｎ−ＳＨ）およびそのサブクローンＳＨ−ＳＹ５Ｙで、両者とも豊富なμオピオイドレセプター（細胞１個につき約５００００部位）を発現している。完全な細胞を適切な細胞培養条件下て増殖させるとき、この細胞はｃＡＭＰを産生するであろう。本発明の目的のために有用な生物学的系の別の源は、実験動物（例えばラットおよびマウスであるが、これらは、ヒトのオピオイドμレセプター活性の好ましいモデルである）由来のある種の組織（例えば、ラットの青斑またはモルモットの回腸）が可能である。生物学的系として完全細胞が用いられる場合は、アジュバントまたはアデニリルシクラーゼの刺激剤（例えばＰＧＥ、ＶＩＰ、またはフォルスコリン）を添加し、さらに、ホスホジエステラーゼ抑制物質（例えばＩＢＭＸ）を避けることが好ましい。細胞は、好ましくは先ず、例えば１−１０μＭのレチノイック酸で分化させ、ｃＡＭＰ系に共役する刺激性または抑制性レセプターを強化させる。そのような生物学的系の調製物は以下に記載されている：Yuら、J．Neurochem.，5 ，J．Pharmac．Exp．Ther.，245，350-355(1988)。オピオイドμレセプターに富む細胞を、本発明の検査に基づいて被験組成物で処理する場合、この被験組成物の自発的で逆作動薬誘発性のｃＡＭＰオーバーシュートを誘発する傾向を決定することができ、これは、常習性の代用測定として用いることができる。逆作動薬誘発性ｃＡＭＰオーバーシュートは、構造的に活性なレセプターが存在することを示している。このアッセーの変形例では、細胞を麻酔性鎮痛剤で１２時間またはそれより長く処理し、依存状態を誘発し、続いて麻酔性作動薬または拮抗剤と疑われる化合物または化合物の混合物を、逆作動薬誘発ｃＡＭＰオーバーシュートに類似する能力、または中等度に耐性の細胞における作動薬（例えばモルヒネ）惹起ｃＡＭＰレベルの抑制に類似する能力について検査することができる。コントロール値は、作動薬誘発オピオイドμレセプター活性の非存在下で、ｃＡＭＰ産生に対するレセプターの作用を測定することによって決定される。薬物を含まない作動薬前処置依存細胞におけるｃＡＭＰレベルに対する作用を単独では持たないように見える被験化合物は、それでも、作動薬または逆作動薬のいずれかと組み合わせて検査し、ヌル拮抗物質をつきとめるべきである。ヌル拮抗物質（すなわち単独で投与した場合、モルヒネの作用をブロックするかまたは、モルヒネとナロキソンの両方の作用をブロックする）であることが分かった化合物は、極端で急激な薬物中断のリスクを避けながら過剰投与量の麻酔性鎮痛剤を治療する能力を有するか、または、長期作用を最小限にし選択的に薬物の急性作用をブロックすることによって（例えば逆作動薬による可能な全体的μレセプターアップレギュレーション）、さらなる薬物の使用を中止させるために役立つかもしれない。要約すれば、本発明の特徴の１つは、オピオイドμレセプター活性に対する作用をスクリーニングするために有用なアッセーである。このアッセーは、ｃＡＭＰ系を含むか、またはｃＡＭＰ系と組み合わせて用いることができるキットを用いて実施できる。例えば、ＳＫ−Ｎ−ＳＨのような細胞株を用いる場合は、この細胞株は、増殖条件下でｃＡＭＰを産生することができ、オピオイドμレセプターに富んでいる。初めのｃＡＭＰ値は、作動薬誘発オピオイドμレセプター活性の非存在下で、これらレセプターの初めの部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって決定される。この初めのｃＡＭＰ値はコントロール値として用いられる。第二および第三のｃＡＭＰ値もまた決定される。第二のｃＡＭＰ値は、レセプターが構造的に活性状態にあるが、実質的には作動薬分子が存在しないとき、レセプターの第二の部分のｃＡＭＰ生産に対する作用を測定することによって決定される。第三のｃＡＭＰ値は、レセプターが構造的に活性で、実質的にいずれの作動薬分子も含まず、しかも逆作動薬分子を実質的にすべてのレセプターと結合させるために十分な量の逆作動薬が存在するとき、このレセプターの第二の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって決定される。第三のｃＡＭＰ値を決定する場合、実質的に全てのレセプターに逆作動薬分子を結合させるために適切な高濃度を用い、最大の作用を得ることが好ましい（例えば最大のｃＡＭＰオーバーシュート）。第二のｃＡＭＰ値と第三のｃＡＭＰ値との間の差異は、レセプターの活性を示す。作動薬が“実質的に存在しない”（第二および第三のｃＡＭＰ値を決定する場合）ということは、ほぼ最大の作用を与える投与量で前処置した後、全作動薬の約１％未満が残存し、その結果反応曲線では作用が測定不可能であることを意味する。排除されたか否かの決定には、ラジオイムノアッセーを用いるか、または洗浄水で未投薬細胞を曝し、さらに作用が存在するか否かをバイオアッセーによって決定する方法でこの洗浄水を調べてもよい。作動薬が１μＭのモルヒネのならば、典型的には細胞を注意深く３回洗浄することによって実質的な除去は達成される。インビボでこのアッセーを実施する場合は、組織を取り出し、薄く切り水浴で洗浄する。種々のアッセーによって、薬理学的な効能に影響を与えること無く、構造的に活性なμレセプターを防止または減少させる被験組成物の検査が可能になる。そのような薬剤は、麻酔性作動薬のインキュベーション（保温）中に（構造的に活性な状態を生成するため）、または麻酔性作動薬の除去後にオピオイドμレセプターに添加して、逆作動薬によって誘発されるオーバーシュートがより迅速に逆転できるか否かを検査することができる。この種類の被験化合物は、構造的に活性なレセプターの生成を防止または逆転させる能力を有し、したがって、（麻酔性鎮痛剤とともに治療として用いた場合）麻酔性鎮痛剤の常習性を抑制する能力をもつか、または単独で麻酔薬中毒の治療薬として有用であるかもしれない。そのような化合物のいくつか（Ｈ７、Ｈ９およびＨＡ−１００４）をこの提唱スクリーニングによって同定した。さらに、Ｈ７（１−（５−イソキノリンスルフォニル）−２−メチルピペラジンジヒドロクロリド）は、モルヒネ注射マウスの耐性依存状態を本来の状態に逆転させることが示され、この種類の化合物の治療的有効性が明らかになった。最近得られた証拠は、構造的に活性なμレセプター状態は、Ｇ蛋白共役レセプターキナーゼ（ＧＲＫ）類に属するキナーゼによるμレセプターの燐酸化によって形成されることを提唱する。したがって、Ｈ７およびそのような他の化合物は、おそらく他の可能な治療用途としてＧＲＫ抑制物質として使用できるであろう。さらにまた、構造的に活性なμレセプター状態の形成を防止し、および／または逆転させる薬剤のまた別のスクリーニング方法として、ＧＲＫについての標準的な酵素活性分析、例えばチェンとその共同研究者らによって記載された方法がある（Chenら、J．Biol．Chem.，268:7825-7831(1993)）。細胞膜が所望の生物学的系の源である場合は、典型的には上記と同じまたは同様な前処置を用いることができるが、インビトロで細胞膜を用いてｃＡＭＰアッセーを実施することになろう。一般に本発明の実施は、オピオイドμレセプターに対する作用、例えばオピオイドμレセプター活性を有する被験化合物が、構造的に活性なμレセプターと反応するか否か、または被験化合物が、構造的に活性なμレセプター状態を防止または逆転させるか否かを決定するために有用である。本発明の実施は、完全な逆作動薬、部分的な逆作動薬または部分的な作動薬のようにリガンドの分類を可能にする。さらに、被験化合物がヌル（または中性）拮抗剤であるか否かを決定することができる。 “完全な逆作動薬”とは、構造的に活性なμレセプター状態の作用を完全に抑制する薬剤を意味する。 “部分的な逆作動薬”とは、最大投与量で構造的に活性なμレセプター状態の作用を部分的に抑制する薬剤を意味する。 “部分的な拮抗剤”とは、最大投与量で休止状態の、薬物感受性μレセプター状態の部分的な活性化を引き起こす。 “ヌル、または中性拮抗剤”とは、その活性に変化を生じること無くレセプターに単に結合する化合物を意味する。ヌル拮抗物質は、休止状態の、薬物感受性 μレセプター状態、または構造的に活性なμレセプター状態、または両方の状態に選択的に結合するかもしれない例えば本発明のアッセーを用いて一旦薬剤を分類すると、薬物中毒を治療するための最適な特性が、標準的なインビボの動物実験で得られる。以下でさらに詳しく述べるように、これらの分類は、被験化合物または組成物のｃＡＭＰ作用を比較する対照点としてある種のｃＡＭＰ値を決定することによって実施することができる。すなわち、前述の第一、第二および第三のｃＡＭＰ値が、被験化合物または組成物を分類するために用いられる。レセプターは作動薬の非存在下で一定の最小基本活性を示し、さらに、作動薬に曝すことによって通常脱感作が生じ（例えば燐酸化によって）、したがって薬剤に対する耐性が生じる。しかしながら、本明細書では、神経伝達物質レセプターを作動薬に曝すことによって構造的活性化がもたらされる（これはもはや作動薬の存在に左右されない）ということが提唱される。麻酔剤の抑制的な影響を代償するためにｃＡＭＰ系はアップレギュレーションを生じるので、μレセプターの構造的活性化が増加する（すなわちもはや作動薬を必要としない）。したがって、μ＊レセプターと強化ｃＡＭＰ系は互いに均衡を保つ。このタイプの活性化はμオピオイドレセプターとともに生じると仮定すると、多くの耐性および依存現象の説明がつく。レセプターが構造的に活性な場合では、残存する不活性なレセプターをさらに刺激する作動薬と、この活性化レセプターを不活性な基本状態に回復させる“作動薬とは区別される。１例はベンゾジアゼピンレセプターであるが、この場合、作動薬は抗不安薬で、一方逆作動薬は不安誘発的である。依存状態で構造的活性化μレセプターに応用された場合、逆作動薬は、活性なμ＊レセプター状態を基本状態に逆転させることによって、逆作動薬はｃＡＭＰレベルを高めるであろうと予想される。以下でさらに考察するように、ナロキソンは実際そのような逆作動薬であり、一方それはまた、休止状態の、薬物感受性μレセプター状態の古典的拮抗物質である。したがって、例えば、モルヒネによる刺激に際してＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞のμオピオイドレセプターは、徐々に構造的に活性なμ＊形に変換されるが、この形ははもはや作動薬の存在によって影響を受けない。完全な依存状態において最大の構造的活性化が期待される。ＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞を１μＭのモルヒネで１２−４８時間前処置し、続いて薬物を完全に除去した後、ナロキソンはＰＧＥ₁刺激ｃＡＭＰの蓄積を顕著に高め、一方２０分またはそれ未満の時間しかモルヒネ処理を施さなかった細胞では増加は認められず、減少すら観察される。したがって、ナロキソンは、構造的に活性化されたμオピオイドレセプターでは逆作動薬として作用する（ＥＣ５０〜３ｎＭ）。これらの結果は、実験動物でモルヒネの依存が増加するにつれ、禁断症状を誘発するために必要なナロキソンの投与量は、活性μ＊状態の増加のために極めて減少するという観察と一致する。ｃＡＭＰ系と構造的に活性なμレセプターのアップレギュレーションにつれて、活性化されるべき残存するレセプターは少なくなるので、麻酔性作動薬に対する耐性が予想される。さらに、逆作動薬が作用することができるより多くの活性化レセプターが存在するので、より少い投与量のナロキソンで急激な薬物の使用中止が期待できるであろう。つまり、活性化μレセプター状態の衰退は、体内からの薬物除去速度よりむしろ、禁断症状の時間経過を指令するであろう。禁断症状のピーク後に残存する構造的レセプター活性によって、長期間に亙る明らかな禁断症状システムを誘発するナロキソンの持続的な活性を説明できる。そのような構造的に活性なμオピオイドレセプターメカニズムは、麻酔薬中毒の現在の仮定の範囲を越え、このメカニズムは、構造的活性化を防止または逆転させるか、または、ヌル拮抗剤もしくは部分的逆作動薬の適切な特徴を示すことによって（依存状態を持続させることなく、また過剰な禁断症状を引き起こすこともなく継続的に薬物に曝すことを制限して）、薬物使用中止を促進させる薬剤の発見にそれ自体役立つ。したがって、混合作動薬−拮抗剤または部分的作動薬麻酔薬として先に分類された化合物は、麻酔薬中毒を治療するために潜在的な有効性をもつ部分的逆作動作用を示すかもしれない。構造的に活性なレセプター状態の調節に寄与するメカニズムを知ることは、個々の薬物の依存傾向の診断用検査に役立つであろう。麻酔薬の依存状態を確立し持続させる推進力の説明となる強制メカニズムは以前には提唱されていなかった。このプロセスにおけるμレセプターのための重要な役割は長い間推測されてはきたが、実験結果は、顕著な変化を示すことはできなかった。構造的活性化過程はそれ自体、抗常習性薬剤をスクリーニングし、麻酔薬依存性の分子メカニズムを探索するために役立つので、本発明の実施によって、麻酔薬の有用な活性を望ましくない長期的作用から分離するという新規なアプローチの提供が期待される。先に記載したように、本発明のアッセーを実施するための用いられる生物学的系は、例えば細胞を１２時間またはそれ以上麻酔性鎮痛剤で処理することによって前処置して、依存状態を誘発することができる。選択される特定の細胞保温および前処置条件は、表１に要約するようにｃＡＭＰ測定と処置とのいくつかの関係につれて変動するであろう。表１に提唱するように、洗浄工程の後およびｃＡＭＰアッセーの前（ＰＧＥ₁）に、約２時間以内の回復保温工程（ここでは薬物は存在しない）が用いられ、その間に構造的に活性なμレセプター状態の逆転について検査できる。表１について、“第一のｃＡＭＰ値”、“第二のｃＡＭＰ値”および“第三のｃＡＭＰ値”の用語は前述のように、“第一のｃＡＭＰ値”は未処置の細胞のコントロール値で、“第二のｃＡＭＰ値”は自発的なｃＡＭＰオーバーシュートで、回復時間が３０分またはそれ以上の場合は急激にコントロール値まで低下し、 “第三のｃＡＭＰ値”は自発的ｃＡＭＰオーバーシュートを越えるナロキソンオーバーシュートで、これは構造的に活性なμ＊状態を表す。この“第三のｃＡＭＰ値”は、回復保温が実施される場合は少なくとも２時間上昇したままである。本発明の実施については、μレセプターの構造的活性化を防止する代表的化合物の同定を可能にすることによってその有用性は既に証明され、またそれは、ヌル拮抗剤の同定にも役立った。本発明の別の特徴は、過剰量の麻酔性鎮痛剤を服用したと疑われる患者を治療する方法である。したがって、疑われる麻酔性鎮痛剤に対してヌル拮抗剤であると決定された薬剤が選択される。このヌル拮抗剤は、好ましくは本発明のアッセーを用いることによって決定されているであろう。実施例２に示すように、したがってヌル拮抗剤の決定によって、疑われる麻酔性鎮痛剤に対して選択されたヌル拮抗剤を医薬的に有効な量で投与することができる。これは、好ましくは、投与される用量は、麻酔剤の過剰投与の治療においてまたは禁断症状の治療開始時に、中毒患者において重篤な禁断症状を誘発すること無く麻酔性鎮痛剤作用を阻害するために有効であることを示している。このことは、典型的には過剰量の麻酔性鎮痛剤を投与されていると疑われる患者にナロキソンが投与されている場合（患者は即座に重篤な禁断症状を呈する）に、本発明を実施するについての利点である。ヌル拮抗剤であると決定された薬剤の医薬的に有効な量は、確立されたいずれかの臨床的疼痛モデルにおける無痛覚阻害のドースレスポンス曲線と安全な投与量を確立することによって臨床的に容易に決定できるであろう。ゲッ歯類の動物モデルにおける無痛覚は、尾部打撃法（D'Amour & Smith，J．Pharmac．Exp．Th er.，72:74-79(1941)；Tulunay & Takemoriによって改変（J．Pharmac．Exp．Th er.，190:395-400(1974)、この文献は両方とも参照により本明細書に含まれる）によって容易に測定できる。ＥＤ₅₀値、その９５％信頼限界および２つのＥＤ₅₀ 値間の有効比の有意差は、リッチフィールドとウィルコクソンの方法（Litchfie ld & Wilcoxon J．Pharmac．Exp．Ther.，96:99-113(1949)、この文献は参照により本明細書に含まれる）によって決定できる。本発明の別の特徴は、患者の疼痛を処置する治療方法である。本発明のこの特徴では、オピオイドμレセプターの構造的活性化を防止、および／またはオピオイドμレセプターの構造的活性化を逆転させる薬剤が決定される。この決定は、好ましくは、実施例１で記載し例証したように実施される。続いて薬剤を選択し、治療的に有効な量、例えば疼痛解除量の麻酔性鎮痛剤と組み合わせて投与される。すなわち、本発明の特徴は、麻酔性鎮痛剤の臨床使用を増やすことである。なぜならば、選択された薬剤は、急性作用を阻害すること無く麻酔性鎮痛剤の長期的な麻酔作用を防止することができるからである。また別に、構造的μ＊レセプター活性化を逆転させることが示された薬剤は、麻酔剤中毒の患者の治療に用いられる。この薬剤はしたがって、依存状態の推進力を除去し、それによって麻酔剤中毒を効果的に治療できるであろう。選択を決定された薬剤の治療的に有効な量は、薬剤による前処置によってその後のナロキソン誘発禁断症状が阻害される、麻酔性鎮痛剤のドース−レスポンス曲線から確認できる。本発明の特徴は、さらに具体例によってこれから詳述するが、これらは本発明を例証するもので、限定することを目的とするものではない。実施例１レセプター活性は、一般に燐酸化によって調節されているので、構造的に活性なμレセプター状態の形成を防止し逆転させるいくつかの既知の蛋白キナーゼ抑制物質の活性について、以下のように本発明にしたがって調べた。被験化合物（１０−１００μＭ）をまず、１μＭのモルヒネと共にまたは単独（コントロール）でＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞と１２時間の前処置時間保温し、その後洗浄し、回復期間を設けず、さらにｃＡＭＰアッセー（表１参照）を実施し３種のｃＡＭＰ値を確立し、それによって自発的、およびナロキソン誘発ｃＡＭＰオーバーシュートを決定する。第二の実験系では、被験化合物（１０−１００μＭ）を３０分または２時間の回復期間中に培養液に添加した。最初の実験系は、ナロキソンｃＡＭＰオーバーシュートを防止する（すなわち、活性μ＊状態の形成の防止）薬剤を同定するためにデザインされ、一方、第二の実験系は、短時間で構造的μレセプター活性を逆転させる薬剤を同定するためにデザインされた。調べた化合物の内で、Ｈ７（１−（５−イソ−キノリンスルフォニル）−２− メチルピペラジンジヒドロクロリド（１０および１００μＭ）は、モルヒネ前処置とともに１２時間添加され、その後モルヒネとＨ７薬剤の両方を完全に除去したとき、ナロキソンのｃＡＭＰオーバーシュートを停止させる。対照的に、Ｈ７による１２時間の前処置は、モルヒネによるｃＡＭＰレベルの急性抑制を防ぐことはなかった。これは、Ｈ７は、休止μレセプター状態の作動薬誘発活性化に干渉しないことを示している。さらに、１２時間のモルヒネ前処置時間後直ちに（３０−１２０分の回復期間中に）添加したときは、Ｈ７は完全にナロキソンｃＡＭＰオーバーシュートを逆転させた。すなわち、それは、構造的に活性なμ＊状態を休止μ状態に逆転させた。構造的に活性なμレセプター状態の形成を防止できる蛋白キナーゼ抑制物質として同定された他の化合物は、Ｈ９（Ｎ−（２−アミノエチル）−５−イソキノリンスルフォンアミドジヒドロクロリド）およびＨＡ−１００４（Ｎ−（２−グアニジノエチル）−５−イソキノリンスルフォンアミドヒドロクロリド）である。この種類の化合物はまたＧＲＫ抑制物質であることが示唆されるので、別のスクリーニング方法は、ＧＲＫについての標準的酵素活性分析である（Chenら、J．Biol．Chem.，268:7825-7831(1993)）。Ｈ７は、ＰＫＡおよびＰＫＣを含むいくつかの蛋白キナーゼを抑制することが知られている。Ｈ７は、構造的に活性なμレセプター状態の形成に寄与しないことによって、急性作用を阻害すること無く、長期的な麻酔作用を防止、および逆転させることができる種類の化合物の代表である。このタイプの化合物は、麻酔性鎮痛剤の臨床使用を増やし、さらに麻酔剤中毒を治療するために有用である。実施例２本発明のスクリーニングを実施する別の目的は、構造的に活性なμオピオイドレセプター状態を逆転させる能力をもたないオピオイドヌル拮抗剤をつきとめることである。ナロキソンはμオピオイド拮抗物質（すなわちμレセプターの活性化を阻害する）と考えられるが、一方、本明細書で定義され（すなわち、構造的に活性なレセプターを遮断する）、さらに以前に詳述したようにそれはまた逆作動薬でもある。したがって、重篤で即座の禁断症状を引き起こす能力は高い。１μＭのモルヒネで１２時間前処置したＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞を用いて、ＣＴＯＰ（Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＮＨ₂）（１μＭ）は、μレセプター状態の構造的活性を逆転させない（すなわち、それはナロキソンｃＡＭＰオーバーシュートを引き起こさない）ことが分かった。一方、それは、モルヒネの急性作用を完全に阻害することが以前に知られていた。本発明のｃＡＭＰアッセー系では、今やそのような化合物は、休止 μレセプター状態での拮抗剤から予想されたようにモルヒネの急性作用を阻害することが分かったが、またナロキソンの逆作動薬作用も阻害するであろう。本発明のアッセーでＣＴＯＰのこれらの特性についてテストするために、ＳＫ −Ｎ−ＳＨ細胞を１μＭのモルヒネ（またはコントロールとしては薬剤なし）で１２時間前処置し第一および第二のｃＡＭＰ値を確定した（ｃＡＭＰアッセー（表１参照）の前の回復時間なし）。続いてナロキソンをＣＴＯＰ（１−１０μＭ）で置き換え、第三のｃＡＭＰ値を決定した。第二および第三のｃＡＭＰ値は異ならなかったので、ＣＴＯＰは、ナロキソンのようには逆作動薬として作用しない。ＣＴＯＰがナロキソンの作用を阻害するか否かをテストするために、ＣＴＯＰ（１−１０μＭ）およびナロキソン（０．１−１μＭ）をまとめてｃＡＭＰアッセーに添加した。ナロキソンｃＡＭＰオーバーシュートの逆転によって、活性 μ＊状態において中性（ヌル）拮抗剤として作用することが示された。さらに、ＣＴＯＰ（１−１０μＭ）はまた、モルヒネ（１μＭ）によって引き起こされたｃＡＭＰレベルの低下を逆転させたが、このことによって、ＣＴＯＰは休止μ状態で拮抗物質として作用することが確認される。同様な結果はＣＴＯＰ類似体ＣＴＡＰ（Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＮＨ₂）およびナロルフィンで得られた。選択的μ拮抗剤ＣＴＯＰ（ナロキソンとは完全に異なる）は、したがってμレセプターのヌル拮抗物質の模範例で、構造的に活性なμレセプター状態に対して作用をもたない。そのようなヌル拮抗物質のあり得べき使用には２つの要素がある。第一に、それは、麻酔剤の過剰投与と対抗するために臨床的に投与される拮抗物質として作用することができ、重篤な即時禁断症状が避けられるというナロキソンを越える利点を持つ（禁断症状は、構造的μレセプター活性の逆転に強く起因すると仮定して）。第二に、ヌル拮抗物質は、依存状態の悪循環を遮断するために例えばＨ７のような化合物と組み合わせて、麻酔剤中毒治療または治療の誘発に有用である。もう一度図１について言えば、ペプチドμオピオイド拮抗物質ＣＴＯＰは、ここではヌルまたは中性拮抗剤としてμ＊レセプターで作用することが示されている。したがって、ＣＴＯＰは作動薬モルヒネの作用をμ状態で阻害するだけでなく、活性化μ＊状態で逆作動薬ナロキソン作用をも阻害する。中性拮抗物質の治療的可能性は、モルヒネ依存マウスで引き起こされる禁断症状は極めてわずかであり、さらにナロキサン誘発禁断症状も減少することを示す実験によって明らかにされる。本発明のまた別の応用は、自家制限性最大活性をもつ麻酔薬をつきとめることである。幾つかの麻酔剤は、ベル型のドースレスポンス曲線を示す。これらの薬剤は、中間の投与量レベルで最大の作用を表し、それより高い投与量ではその作用は逆転する。オピオイド薬剤のこの態様メカニズムは未だ分かっていない。μ レセプターの部分的作動薬はまた、高い投与量では構造的に活性化されたμレセプターで逆作動薬としても作用し、それによってそれ自身の作用を阻害する。作動薬の能力と逆作動薬の特性とは、十分な急性作用が得られ、さらに呼吸抑制に関連する最大の作用が弱くなるようにバランスさせる必要がある。安全な鎮痛剤としての目的化合物は、十分な能力をもち、さらに最大反応と呼吸抑制のような副作用を制限する構造的に活性なμレセプターでの有効性をもつ μ（部分的）作動薬である。ブプレノルフィン（臨床的に用いられている鎮痛剤）は、そのような化合物の模範例であるが、その自家制限性特性は、呼吸抑制と中毒傾向を防止するには不十分である。この態様で識別される、構造的に活性な μレセプターで作用するヌル拮抗物質のみが、通常の作動薬と組み合わせてピーク効果を最小限にし、または作用時間を制限するために役立つ。先に記載したように、本発明を実施する場合はオピオイドμレセプターでの作用の単独インジケーターとしてｃＡＭＰ系を用いる必要はない。³Ｈ標識オピオイドトレーサーを使用し本発明の特徴のリガンド結合アッセーによって、構造的に活性なμレセプターに結合する能力をもつ薬剤のスクリーニングを迅速に実施することができる。麻酔性作動薬（例えばモルヒネ、ＤＡＭＧＥ）は、構造的に活性なμレセプターに極めて低い親和性をもち、さらに不活性なμレセプターを遮断する分析用手段として役立ち、したがって、μ＊状態が劇的に増加していることが示されている耐性−依存組織において、例えば³Ｈ−ナロキソンまたは³Ｈ −ＣＴＯＰで構造的に活性なμ部位を選択的に標識することが可能である。したがって、本発明のリガンド結合アッセーは、複数のオピオイドレセプター（そのうちの少なくとも幾つか（好ましくは大半）は構造的に活性状態である）を提供することを含む。不活性ないずれのレセプターも麻酔性作動薬で遮断されている。このレセプターは、十分な濃度で十分な時間麻酔性鎮痛剤で処置されるときに、構造的に活性な状態で提供される。不活性なレセプターのいずれも麻酔性拮抗剤で遮断される。したがって、この構造的に活性なμ部位は、例えば放射性原子（好ましくはトリチウム標識オピオイドトレーサー）で選択的に標識できる。続いて、レセプターを被験化合物に曝したとき、この被験化合物が選択的に標識レセプターに結合するか否かを決定できる。例えば放射性トレーサーによる選択的標識は、好ましくは約２０℃−３７℃の温度範囲内で保温することによって達成できる。したがって、被験化合物を加える場合は、通常の競合結合アッセーは結合親和性を求めるために実施できる。そのようなリガンド結合アッセースクリーニングは、多数の被験化合物の構造的に活性なμ部位への親和性をテストする場合は、ｃＡＭＰアッセースクリーニングよりも迅速である。実施例３麻酔剤耐性および依存性の提唱されているモデルは一般的な現象であり、μオピオイドレセプターを含む全ての組織に適用できるはずである。モルモット−ブタ回腸は、最も広く使用されているインビトロ組織調製物の１つであるが、この場合、麻酔性作動薬は、機能的終末点として電気的に誘発される痙攣を抑制する。（モルヒネを完全に除去した後）ナロキソン誘発痙攣を特徴とする依存状態を発生させるためには、モルヒネに極めて短時間（〜５分）曝せば十分である。このナロキソン誘発痙攣反応は、モルヒネ前処置ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるナロキソンｃＡＭＰオーバーシュートと同等物である。モルモット−ブタ回腸をキナーゼ抑制物質と中性拮抗物質の作用をテストするために用いた。μ＊形成の提唱メカニズムから予想されるように、Ｈ７および幾つかの類似体（Ｈ９、ＨＡ−１００４、Ｈ８）による処置はナロキソン誘発痙攣を強く抑制したが、これはμ＊形成の防止を示唆している。さらに、提唱された、中性μレセプター拮抗物質ＣＴＯＰは依存状態のモルモット−ブタ回腸で痙攣を生じなかったが、ナロキソン誘発痙攣は抑制した。これらの結果は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるこれらの化合物の反応態様から全て予想されたことであるが、これは、μレセプターの構造的活性化は依存状態に必須であるという考え方の強力な証明を提供するものである。さらに、モルモット−ブタ回腸またはマウス精管のような器官組織はまた、抗常習性薬剤（例えばキナーゼ抑制剤および中性拮抗物質）をスクリーニングするために適切である。実施例４最近、いくつかの研究室でμレセプター遺伝子がクローニングされた（例えば、Chenら、Molec．Pharmacolo.，44:8-12(1993)）。我々は、抗常習性薬剤のスクリーニングに使用するためにより簡便で明瞭なμ＊活性検出用に、μ遺伝子をＵ２９３細胞（Ｕ２９３−μ〜１０⁶部位／細胞）に安定的に核酸感染させた。モルヒネ前処置と薬剤の洗浄は、Ｓｈ−ＳＹ５Ｙ細胞について記載したものと同じであった。この場合のｃＡＭＰ蓄積の刺激は、１０μＭのフォルスコリン１０分処理で最も良く施された。これらの条件下では、モルヒネ前処置の後、測定可能な自発的ｃＡＭＰオーバーシュートがあったが、しかしながら、１−１０μＭのナロキソン添加は、ｃＡＭＰレベルにおける極めて大きな新たな増加をもたらした（５００−６００％≡ナロキソンｃＡＭＰオーバーシュート）。このことは、ｃＡＭＰレベルを抑制する実質的なμ＊活性の存在を示唆している。これらの結果は、麻酔剤耐性−依存状態は、核酸感染非ニューロン性細胞において再生することができることを示している。したがって、これは、抗常習性薬剤を同定する有望なスクリーニング方法として役立つであろう。好ましい実施例とともに上記に本発明を詳述したが、実施例の記述は説明を意図したものであって本発明の範囲を制限するためではないことは理解されよう。本発明の範囲は、添付の請求の範囲によって明らかにされる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．多数のオピオイドμレセプター；作動薬誘発オピオイドμレセプター活性の非存在下で、該レセプターの最初の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって決定できる第一のｃＡＭＰ値；構造的に活性な状態に有るが、作動薬分子を実質的に含まないときに、該レセプターの第二の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって決定できる第二のｃＡＭＰ値；（ａ）構造的に活性な状態にあり、（ｂ）いずれの作動薬分子も実質的に含まず、さらに（ｃ）実質的に全てのレセプターに逆作動薬分子を結合させるに十分な量の逆作動薬の存在下で、該レセプターの第二の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって決定できる第三のｃＡＭＰ値；という上記の項目を含むｃＡＭＰ系と組み合わせたとき、オピオイドμレセプター活性に対する作用をスクリーニングするために有用なキット。２．細胞増殖条件下でｃＡＭＰを産生することができ、さらにオピオイドμレセプターを有する細胞株；作動薬誘発オピオイドμレセプター活性の非存在下で、該レセプターの最初の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって決定できる第一のｃＡＭＰ値；構造的に活性な状態に有るが、作動薬分子を実質的に含まないときに、該レセプターの第二の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって決定できる第二のｃＡＭＰ値；（ａ）構造的に活性な状態にあり、（ｂ）いずれの作動薬分子も実質的に含まず、さらに（ｃ）実質的に全てのレセプターに逆作動薬分子を結合させるに十分な量の逆作動薬の存在下て、該レセプターの第二の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって決定できる第三のｃＡＭＰ値；という上記の項目を含むオピオイドμレセプター活性に対する作用のスクリーニングに有用な細胞株キット。３．該細胞株がＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞またはＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞である、請求の範囲第２項のキット。４．該細胞株が、μ遺伝子を安定的に核酸感染させたＵ２９３細胞である、請求の範囲第２項のキット。５．ｃＡＭＰ産生系に曝された多数のオピオイドμレセプターを提供し；作動薬誘発オピオイドμレセプター活性の非存在下で、該レセプターの最初の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって第一のｃＡＭＰ値を決定し；構造的に活性な状態に有るが、作動薬分子を実質的に含まないときに、該レセプターの第二の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって第二のｃＡＭＰ値を決定し；（ａ）構造的に活性な状態にあり、（ｂ）いずれの作動薬分子も実質的に含まず、さらに（ｃ）実質的に全てのレセプターに逆作動薬分子または被験化合物分子を結合させるに十分な量の逆作動薬または被験化合物の存在下で、該レセプターの第二の部分のｃＡＭＰ産生に対する作用を測定することによって第三のｃＡＭＰ値を決定し；さらに、該レセプターの検査部分と被験組成物とを合わせ、検査ｃＡＭＰ値としてｃＡＭＰ産生に対するその作用を測定する；という上記の項目を含むオピオイドμレセプター活性に対する作用をスクリーニングするために有用なアッセー。６．ｃＡＭＰ産生系に曝される多数のオピオイドμレセプターが、生細胞として提供され、さらにアデニリルシクラーゼ刺激剤を含む、請求の範囲第５項のアッセー。７．該細胞がＳＫ−Ｎ−ＳＨまたはＳＨ−ＳＹ５Ｙである、請求の範囲第６項のアッセー。８．該細胞が、μ遺伝子を安定的に核酸感染させたＵ２９３である、請求の範囲第６項のアッセー。９．該細胞が、μ遺伝子を安定的に核酸感染させたＵ２９３であり、該アデニリルシクラーゼ刺激剤がフォルスコリンである、請求の範囲第６項のアッセー。１０．さらに、第一のｃＡＭＰ値、第二のｃＡＭＰ値および第三のｃＡＭＰ値のうち１つまたは２つ以上に対して検査ｃＡＭＰ値を比較することを含む、請求の範囲第５項のアッセー。１１．さらに、第一のｃＡＭＰ値、第二のｃＡＭＰ値および第三のｃＡＭＰ値のうち１つまたは２つ以上に対して検査ｃＡＭＰ値を比較することによって、被験組成物を部分的作動薬、ヌル作動薬、部分的逆作動薬または完全逆作動薬として分類することを含む、請求の範囲第５項のアッセー。１２．第二のｃＡＭＰ値と第三のｃＡＭＰ値との間の違いは、構造的に活性な状態にある該レセプターの活性化を表すものである、請求の範囲第５項のアッセー。１３．少なくともその幾分かは構造的に活性な状態にある多数のオピオイドμレセプターを、麻酔性作動薬で遮断したいずれかの不活性なレセプターとともに提供し；さらに、該構造的に活性なレセプターを選択的に標識することを含む、オピオイドμレセプターに対する作用を決定するために有用なリガンド結合アッセー。１４．該標識が放射性原子を用いて実施される、請求の範囲第１３項のアッセー。１５．さらに、該レセプターを被験組成物に曝すことを含む、請求の範囲第１３項のアッセー。１６．さらに、該被験組成物が選択的に標識されたレセプターに結合するか否かを決定することを含む、請求の範囲第１５項のアッセー。１７．該遮断麻酔性作動薬がモルヒネまたはＤＡＭＧＥである、請求の範囲第１３項のアッセー。１８．該オピオイドμレセプターが、麻酔性鎮痛剤とともに保温することによって構造的に活性化される、請求の範囲第１３項のアッセー。１９．該標識がトリチウムを含む化合物を用いて実施される、請求の範囲第１４項のアッセー。２０．該標識が³Ｈ−ナロキソンまたは³Ｈ−ＣＴＯＰを用いる、請求の範囲第１９項のアッセー。２１．該標識が³Ｈ−ＣＴＡＰまたは³Ｈ−Ｄ−Ｔｉｃ−ＣＴＡＰまたは³Ｈ−ナロルフィンを用いる、請求の範囲第１９項のアッセー。２２．問題の麻酔性鎮痛剤に対してヌル拮抗物質であることが分かった薬剤を選択し；さらに該問題の麻酔性鎮痛剤に対して選択されたヌル拮抗物質を医薬的に有効な量で投与することを含む、過剰量の麻酔性鎮痛剤を摂取したと思われる患者の治療方法。２３．該投与量が、麻酔剤過剰投与を治療する際に重篤な禁断症状を誘発すること無く中毒患者において麻酔性作動薬作用を遮断するために有効であるか、または薬剤使用中止の処置を開始するために有効である、請求の範囲第２２項の方法。２４．投与される該ヌル拮抗物質がＤ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ −Ｔｒｐ−Ｏｒｎ−Ｔｙｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＮＨ₂を含む、請求の範囲第２２項の方法。２５．該投与されるヌル拮抗物質がナロルフィンである、請求の範囲第２２項の方法。２６．該投与されるヌル拮抗物質がＣＴＡＰ（Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ− Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＮＨ₂）である、請求の範囲第２２項の方法。２７．該投与されるヌル拮抗物質がＤ−Ｔｉｃ−ＣＴＡＰ（Ｄ−Ｔｉｃ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＮＨ₂）である、請求の範囲第２２項の方法。２８．オピオイドμレセプターの構造的活性化を防止することが分かった薬剤を選択し；さらに疼痛解除量の麻酔性鎮痛剤と合わせて治療的に有効量の該選択薬剤を投与することを含む、患者の疼痛を治療する方法。２９．該選択薬剤が１−（５−イソキノリン−スルフォニル）−２− メチルピペラジンジヒドロクロリドであり、該麻酔性鎮痛剤がモルヒネである、請求の範囲第２８項の治療方法。３０．該選択薬剤がＨ９（Ｎ−（２−アミノエチル）−５−イソキノリンスルフォンアミドジヒドロクロリド）である、請求の範囲第２６項の治療方法。３１．該選択薬剤がＨＡ−１００４（Ｎ−（２−グアニジノエチル） −５−イソキノリンスルフォンアミドヒドロクロリド）である、請求の範囲第２６項の治療方法。３２．オピオイドμレセプターの構造的活性化を防止するか、および／または逆転させることが分かった薬剤を選択し；さらに該中毒患者に治療的に有効な量の該選択薬剤を投与することを含む、麻酔剤中毒患者の治療方法。３３．該選択薬剤が１−（５−イソキノリン−スルフォニル）−２− メチルピペラジンジヒドロクロリドである、請求の範囲第３２項の治療方法。３４．該選択薬剤がＨ９（Ｎ−（２−アミノエチル）−５−イソキノリンスルフォンアミドジヒドロクロリド）である、請求の範囲第３２項の治療方法。３５．該選択薬剤がＨＡ−１００４（Ｎ−（２−グアニジノエチル） −５−イソキノリンスルフォンアミドヒドロクロリド）である、請求の範囲第３２項の治療方法。