JPH0853356A - 血小板の粘着及び凝集の阻害 - Google Patents

血小板の粘着及び凝集の阻害

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JPH0853356A
JPH0853356A JP7166851A JP16685195A JPH0853356A JP H0853356 A JPH0853356 A JP H0853356A JP 7166851 A JP7166851 A JP 7166851A JP 16685195 A JP16685195 A JP 16685195A JP H0853356 A JPH0853356 A JP H0853356A
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blood
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JP7166851A
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James W Burns
ダブリュウ． バーンズ ジェイムズ
Cesare R Valeri
アール． ヴァレリ セザーレ
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Boston University
Genzyme Corp
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Boston University
Genzyme Corp
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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 ヒアルロン酸を含む薬剤的組成を投与するこ
とによって血栓症状を阻害または処置する方法を提供す
る。 【構成】 血小板の粘着と凝集を阻害する効果を奏する
量の薬剤を動物に投与することによって、該動物の血栓
症状を処置する該薬剤の調製における、ヒアルロン酸の
使用。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒアルロン酸の投与に
よる血小板の粘着及び凝集の阻害に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血管が損傷を受け、血管細胞の通常の内
皮下細胞障壁（endothelial-cell barrier）が壊れた
際、血小板が直ちに周りの血液から集められ、閉塞血栓
を形成する。この反応は、血小板と巨大分子（macromol
ecules）との相互作用を通じて、内皮下マトリックス
（subendothelial matrix）中で（血小板粘着）、また
血小板自身の間で（血小板凝集）起こるものである。粘
着の最初のプロセスは、凝集とは対照的に、代謝活性を
必要としない。しかしそれは、血漿粘着因子の活性化を
促進する多くの因子を順番に分泌させるような血小板の
活性化を導き、その結果血小板凝集体を補強するような
フィブリン塊の生成に至る。通常の止血環境下では、血
小板凝集体とフィブリン塊は、損傷部位の治癒が起こる
につれて、分解される。
【０００３】血栓症は、血小板凝集体及びフィブリン塊
またはその一方が血管を閉塞させるという病理的過程で
ある。静脈血栓症と肺栓塞は、入院治療を要する患者が
不健康となり、死に至る代表的事由のひとつである。放
射性ラベルしたフィブリノーゲンの研究は、通常の鼠径
ヘルニアが進行する５０歳以上の全患者の約４分の１、
前立腺切除術あるいは股関節手術（hip surgery）を受
けた患者の２分の１以上、急性心筋梗塞の患者のおよそ
３分の１における、下肢の静脈性血栓を明らかにしてい
る。この病的過程にかかりやすくなる要因としては、外
傷後及び手術後固定（posttraumatic and postoperativ
e immobility）（特に中年、老年、あるいは心臓血管手
術（cardiovascular procedures）後の患者において、
その傾向が強い）、妊娠、静脈血栓症の前段階（previo
us episodes of venous thrombosis）、経口避妊薬の使
用、ネフローゼ症候群、真性赤血球増加症、炎症性腸疾
患（inflammatory bowel disease）、ホモシスチン症、
高ホモシステイン症、発作性夜間血色素尿症、ショッ
ク、うっ血性心障害（congestive heart failure）など
がある。
【０００４】血管内のみでのプロセスとして生じる血栓
症は、アテローム性動脈硬化症の主要な因子でもある可
能性がある。ほぼ間違いのない発症機構（この機構によ
って、アテローム性動脈硬化部位が深刻な血流妨害と血
管全域における閉塞に進行する）において、動脈内に沈
積した脂肪（atheromatous plaques）の表面上で起こる
血小板凝集の形成と、それに引き続くこれら白色血栓が
繊維性閉鎖動脈内膜損傷部位（fibrous occlusive inti
mal lesions）に至る組織化、すなわち、心筋梗塞へと
至る冠状動脈血栓症は、ほとんど常に、動脈内の脂肪沈
積部位で起こっている。経皮経管冠状血管形成術（PTC
A）は、一部閉塞しかかった血管から心臓へ至る血流を
再構成するための重要な対処法となってきた。残念なこ
とに、冠状血管形成術を受けた患者のおよそ３０％から
４０％が、治療後６カ月以内に、処置した血管の再狭窄
にかかっている。つまり、現在のところ血管の再狭窄を
防止する信頼に足る方法は、存在しない。そのため、バ
イパス手術、あるいは他のPTCA処置などのような血管再
生施術（revascularization procedure）が、よく必要
とされている。
【０００５】様々な疾患の状態と外科手術に関連する血
栓形成の防止と処置のための現在の治療法は、主として
抗凝血剤ヘパリンまたはワルファリンの使用に集中して
いる。最も一般的で基礎的な治療は、通常迅速なヘパリ
ン投与（heparinization）を含むが、血栓症の再発の危
険が長引く場合には、ワルファリンの長期投与を続いて
行う方がよい。
【０００６】ヘパリンは血小板からのセロトニンとトロ
ンボキサンA2の放出を阻害する。これらの血管作動性物
質（vasoactive substances）は、強肺動脈高血圧、急
性右側血行障害（acute right-side hemodynamic failu
re）、肺塞栓症に関連して起こる心臓性ショックの誘導
物質と考えられている。血栓の広がりを防止し、血小板
の放出を防止するヘパリンの迅速な薬効が、それを用い
る最大の理由である。しかしながら、度々起こるヘパリ
ン投与の併発症は、強い出血である（通常４８時間
後）。そうした出血は、それが頭蓋骨内で起こったと
き、特に危険である。出血の危険性はその出血量に依存
し、また女性、重度疾病患者、大量のアルコールを摂取
する人、ヘパリンとアスピリンを併用している人におい
て危険性が高い。ヘパリンの作用は、硫酸プロタミンの
静脈注射によって中和されるが、プロタミンの使用は、
いくつかの術後併発症と関係がある。それに含まれるの
は、術後性全身低血圧症、アレルギー反応、重篤な肺血
管狭窄（catastrophic pulmonaryvasoconstriction）、
急性肺高血圧症、補体活性化（complement activatio
n）、非心臓性肺水腫、減少する心拍出（decreased car
diac output）、血小板減少症／白血球減少症などであ
る。
【０００７】プロタミン（通常魚類から単離される）は
ヒト免疫系に外来タンパク質として認識され得るので、
以前からプロタミン投与を受けている患者（例えば、プ
ロタミン・インシュリンを投与されている糖尿病患者
は、引き続く投与によって著しい危険性にさらされてい
る（Just Viera, Amer. Surgeon 50:151, 1984）。加え
て、補体活性化による非免疫性経路が、ヘパリンの抗凝
血のプロタミン逆転の間を通して観察される、多くの急
性反応の原因であると考えられるとの研究報告がなされ
ている。
【０００８】ワルファリンは、肝ミトコンドリア内のI
I、VII、IX、X因子のビタミンＫ依存性の合成におい
て、グルタミン酸残基のγ−カルボキシル化に影響を与
える。薬剤は完全に吸収され、血漿中で顕著にタンパク
質と結合するが、その半減期は４２時間である。それは
肝臓内で分解され、その代謝生成物（それは不活性であ
る）は、尿及び便中に排泄される。しかし、ワルファリ
ンは、肝臓内で既に形成され、循環系に放出される前抗
凝血タンパク質（procoagulant proteins）には影響を
及ぼさない。また、これら因子のうちいくつかの半減期
は２４時間よりも長いので、それゆえこの薬剤の抗凝血
効果は数日遅延して現れる。これに加えて、多くの薬剤
がワルファリンと重大な相互作用をする上、ある家系に
おいて、ワルファリンに対する遺伝性耐性が常染色体の
優性特徴として存在する。
【０００９】ヘパリン投与が血栓形成の進行を止めるの
に効果が見られない場合、あるいは閉塞が急性で生命を
脅かす恐れがあるような場合に、血栓崩壊治療が通常用
いられる。３種類の血栓崩壊性薬剤が、現在用いられて
いる。すなわち、ウロキナーゼ（ヒト胎児腎臓細胞から
得られ、プラスミノーゲンを解裂させてプラスミンへ変
える）、ストレプトキナーゼ（ストレプトコッカス属細
菌から得られ、プラスミノーゲンと複合体を作り、活性
化させる）、そして組換え組織プラスミノーゲンアクテ
ィベーター（rtPA）である。これら薬剤は血栓溶解を促
進するが、止血のためのフィブリンをも溶解して、血管
壁出血を引き起こすことがある。それゆえ、ヘパリンあ
るいはワルファリンとこれら血栓崩壊性薬剤を併用する
ことは、通常避けられている。加えて、非組換え性薬剤
は発熱因子及び強力なアレルゲンである。特にストレプ
トキナーゼは、過敏症に関係がある。
【００１０】妊娠期間中の静脈血栓症はよく見られる症
状であるが、肺塞栓症は母体死を引き起こす主要な理由
であるから、妊娠期間中の抗凝血施術は、重大な治療上
の問題を提起している。ワルファリンは胎盤に混入し、
胎児に影響を与える。加えて血管性出血を併発すること
にも関連がある。胎児障害、鼻骨形成不全、変形した骨
の成長、凹凸を生じた骨端は、明らかにクマリン誘導体
のせいである。その投与において危険な期間は、妊娠後
６週から１２週の間であることがわかっている。重度の
胎児中枢神経系の異常、例えば精神遅滞、盲目、聾唖、
痙性、てんかん発作などは、あまり見られない。これら
欠陥は、投与におけるいずれの危険期間とも関係なくあ
らわれ、第２トリメスター及び第３トリメスターを通じ
たワルファリンの投与に関係があると思われる。様々な
先天的視覚異常もまた、ワルファリン治療の後に報告さ
れている。
【００１１】ヘパリンは胎盤に混入はしない。また現
在、投与量を調製したヘパリンは、静脈血栓栓塞症（ve
nous thromboembolism）を併発した妊娠期間中を通じ
て、好んで用いられる抗凝血剤である。しかし、ある調
査では、ヘパリンを投与した妊娠のおよそ８分の１で死
産に終わり、母体の５分の１が未熟児を出産し、うち３
分の１が死亡した。妊娠中のヘパリンの投与に関連する
他の問題は、保留胎盤、胎盤の早期剥離、小血腫であ
る。
【００１２】
【発明を解決するための手段】本発明者らは、ヒアルロ
ン酸が、血小板のフォン・ウィルブランド因子（vWF）
と内皮下マトリックスの構成因子との相互作用に干渉し
て、血小板の凝集と粘着を効果的に阻害することに使用
できることを、見いだした。それ故、この新しい知見
は、病的である、あるいは病的になり得るような多くの
症状において、血小板の粘着と凝集の阻害するためのヒ
アルロン酸の使用を可能にする。
【００１３】ある側面において、本発明は、動物の血管
系中で血小板の凝集と粘着を効果的に阻害する量のヒア
ルロン酸を含む治療用成分を動物に対して投与すること
で、動物、とくにヒトの血栓症状態を処置する方法を特
徴とする。
【００１４】この側面の好ましい態様において、血栓症
状態とは静脈血栓症、特に肺栓塞症（例えば、腸骨大腿
骨血栓症、腸間膜血管血栓症）、バド・チアリ症候群
（Budd-Chiari syndrome））への悪化を導き得るような
静脈血栓症である。本方法は、妊娠期間中の静脈血栓症
の処置において、特に有用である。
【００１５】この側面の好ましい他の態様において、血
栓症状態とは動脈血栓症、特に冠状動脈血栓症である。
【００１６】二つめの側面において、本発明は、血小板
の凝集と粘着を効果的に阻害する量のヒアルロン酸を含
む治療用成分を動物に対して投与することで、血栓症が
悪化する危険がある際に、動物において血栓の形成を阻
害する方法を特徴とするものである。
【００１７】この側面の好ましい態様において、動物
は、血流遮断を解消させるさせる治療によって、血栓が
成長する危険性の増大にさらされているが、ここでは以
下の症状を含む。すなわち、ヘパリンに誘導される血小
板減少症、冠状動脈症、アテローム性動脈硬化症、妊
娠、発作、新形成、肥満症、全身深在性エリテマトーデ
ス、ネフローゼ症候群、真性赤血球増加症、炎症性腸疾
患、ホモシスチン症、高ホモシステイン症、発作性夜間
血色素尿症、ショック、うっ血性心障害である。
【００１８】この側面の好ましい他の態様において、動
物は、以下の医療方法に由来する血栓が成長する危険性
の増大にさらされている。すなわち、心臓手術、心肺バ
イパス、カテーテル挿入、心臓カテーテル挿入、経皮経
管血管形成術、沈着したのり状物質切開術（atherotom
y）である。これには、人工または生体由来のプロテー
ゼ（a synthetic or bioprosthetic prosthesis）（例
えば心臓動脈弁）を配置する処置をも含んでいる。
【００１９】本発明のこれらの側面のいずれにおいて
も、ヒアルロン酸（以下HAと略記することがある）は全
身的にあるいは局所的に投与してよい。HAの投与は、医
療処置に先だって、処置の間中、あるいは処置後であっ
てよいし、あるいは他の薬剤とともに用いてもよい（た
とえば血栓溶解剤など）。
【００２０】また他の側面において、本発明には、プロ
テーゼデバイス（prosthetic device）が血小板にさら
されるよりも前に、その器具の表面と血小板との相互作
用を阻害するのに十分な量のヒアルロン酸を用いること
によって、プロテーゼデバイスを被覆し、その表面への
血小板の粘着を阻害する方法という特徴もある。
【００２１】そうしたデバイスは、あらゆる適当な生体
適合性材料で作ることが可能であるが、それは全てまた
は一部を合成したものであり、医療行為において通常用
いられるものである。好ましい態様では、プロテーゼデ
バイスは冠状バルブ、血管移植片（vascular graft）、
ステントである。
【００２２】また、本発明の好ましい態様において、血
小板粘着を阻害するための、血中への全身系投与のHA溶
液濃度は、０．１％から０．４％（重量パーセント）の
範囲であり、患者の総血液量のおよそ５％以上、１５％
以下の量を投与される。HA溶液の粘度は、１０００セン
チポアズ以下、２０センチポアズ以上であるべきであ
る。HAの分子量は、特別なHA濃度を実現するために要求
された粘度によって、調整されることが可能である。望
ましくは、HAの平均分子量が１×１０5ダルトンより大
きいことで、より望ましいのは、２．２５×１０5と
２．０×１０6の間であり、さらに望ましいのは、７．
０×１０5と２．０×１０6の間である。
【００２３】血小板粘着を阻害しようとする部位におけ
る、HA溶液の局所的投与のためには、HA濃度は、２０セ
ンチポアズから３０００００センチポアズまでの範囲の
HA溶液粘度の場合、０．１％から５．０％までが可能で
ある。
【００２４】HAの分子量は、ユー・Ｌ・Ｐ（Yu L.P.）
らによって「”Rheological Characteristics of micro
bially Derived Sodium Hyaluronate”、American Chem
icalsociety Proceedings Series - Harnessing Biotec
hnology for the 21st Century, M.R. Ladisch and R.B
ose eds., p 80-84, 1992」に報告された光散乱測定法
によって決定できる。
【００２５】ここで記載された粘度は、１０％フルスケ
ールよりも高い結果をもたらすような最も低いせん断率
を用いて、ブルックフィールドコーン（Brookfield con
e）とプレート粘度計によって決定することが可能であ
る。
【００２６】本明細書において、ヒアルロン酸（HA）と
いう単語は、ヒアルロン酸自体とあらゆるそのヒアルロ
ネート塩を意味しているが、これには例えば、ヒアルロ
ン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸
マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウムが含まれる。
【００２７】ここで用いられた”血小板凝集”という単
語は、血小板間の特異的相互作用を通じて、個々の血小
板が互いに集まることを意味している。
【００２８】ここで用いられた”血小板粘着”という単
語は、血小板と表面（例えば、血管壁（vascular wal
l）、プロテーゼデバイス）との相互作用を通じて、表
面上に血小板が集まることを意味している。
【００２９】ここで用いられた”狭窄（restenosis）”
と”閉塞（reocclusion）”という単語は、管あるいは
管路の直径が狭くなったり、締め付けられたりすること
を意味している。
【００３０】ここで用いられた”全身系の”投与という
単語は、通常、静脈内投与によって、物質が効くことを
意図された場所から十分に離れた距離で、物質を投与す
ることを意味している。
【００３１】ここで用いられた”局所的投与”とは、治
療薬剤（例えば、HA）が、その治癒効果を求められてい
る身体の組織のごく近傍において、接触することを意味
している。
【００３２】別に定義されているものの他は、ここで用
いられた全ての技術並びに科学用語は、本発明が属して
いる技術における当業者の一部によって普通に理解され
ているのと同じ意味を有する。ここに記載された方法や
材料に相似していたり同等であったりする方法や材料
が、本発明の実行や試行において用いられることが可能
であるが、最も適当な方法と材料が、ここに記載されて
いる。以下で言及されている出版物は、参照として、本
明細書に組み入れられている。他で言及されているもの
の他は、ここで用いられた、あるいは意図された技術
は、本技術の当業者によく知られている標準的な方法論
である。材料、方法及び具体例は、単に示されただけの
ものであり、制限として意図されたものではない。
【００３３】本発明者らは、ヘパリンやワルファリンと
違って、他の止血作用に影響を与えることのない特殊な
方法で、血小板粘着と凝集に影響を及ぼすために、HAを
用いることが可能であるということを見いだした。例え
ば、本発明以前には、PTCA処置に引き続く血管再閉塞を
防止するためによく用いられた方法は、血管の開放性を
維持するために行う血管形成の部位にステントデバイス
をおくことであり、ステントへの血小板の粘着を抑える
ためにヘパリンを投与することである。しかしながら、
ヘパリンは、影響が及ぶ血管の部位において、常に望ま
しいとは限らない、血液凝固の様々な効果を有してい
る。すなわち、ヘパリンは、通常の血小板機能の強力な
制御因子であるトロンボキサンの産生に影響を与える。
ヘパリンはまた、一般的な環境下で、凝塊の溶解を導く
ような、繊維素溶解活性も有している。
【００３４】これに対して、本発明の方法は、病的状態
あるいは様々な医療処置に関連する病原性血栓形成の危
険性を減少させることを行えると考えられる。ここでい
う医療処置とは、全体の止血に影響を及ぼす危険性を大
幅に減らした上での心臓血管手術、心肺バイパス、カテ
ーテル挿入（例えば、心臓カテーテル挿入、血管形成
術）である。更に、HAは、ヘパリン処置及びワルファリ
ン処置あるいはそのどちらかが用いられないような場合
において、特に有用であろう。その具体例としては、プ
ロタミンアレルギー、ヘパリンに誘導された血小板減
少、ワルファリン耐性を示している患者、同様にワルフ
ァリンに不適合性のある薬剤を処置されている患者、あ
るいは妊婦である。
【００３５】本発明の他の特徴及び有利な点は、以下の
記述及び請求項から明らかである。
【００３６】ヒアルロン酸（HA）は、進化を通じて保存
されてきた、動物細胞の細胞外マトリックスの構成成分
である。このムコ多糖は、［Ｄ−グルクロン酸（１−β
−３）Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（１−β−
４）］ｎ（[D-glucuronic acid(1-β-3) N-acetyl-D-gl
ucosamine (1-β-4)]n）という構造を有する二糖類の繰
り返しからなる直鎖状ポリマーである。それはヒトの全
身各所に遍在し、以下の様々な組織中で通常の構成素と
して幅広い形態で見つかっている。この様々な組織と
は、滑液、硝子体液、血管壁、心膜液、臍帯などであ
る。
【００３７】ヒアルロン酸は、血液中に低濃度で存在し
ている。それは、リンパを経た末梢組織由来である（La
urent et al., Biochem. Int. 2:195, 1981）。血液中
のヒアルロン酸の濃度と、ラベルされたトレーサーによ
って計測されたその代謝回転速度から、１０−１００ｍ
ｇの全量が、毎日成人の血液循環中で代謝されている
と、算定されている（Fraser et al., In The Biology
of Hyaluronan, Ciba Foundation Symposium 143:41-5
9, Wiley, Chichester, England）。
【００３８】ヒアルロン酸の希釈溶液は（非抗原性であ
ることに加えて）、極めて潤滑性（lubricous）が強
く、非常に薄い濃度においてさえ、そうした性質を示
す。HA溶液は、腹部（Urman et al., Fertil Steril 5
6:563, 1991）及び整形外科手術（Hagberg et al., J H
and Surg 17A:935, 1992）に引き続く術後性粘着形成を
減少させることを示している。
【００３９】その抗粘着効果に加えて、HA溶液は、その
材質の独特の粘弾性によって、眼科、整形外科、口腔／
顎顔面手術において、臨床学的に用いられてきた。その
高い粘性ゆえ、投与されたHA溶液は、目の前眼房にとど
まり、眼内水晶体移植の間中ずっと、傷つきやすい角膜
の内皮面に保護を与える（Pape et al., Ophthalmology
87:699, 1980）。変形性関節症（Iwata, Clin Orthop
289:285, 1993）及びある種の側頭下顎関節の障害（Ber
tolami et al., J Oral Maxillofac Surg 51:232, 199
3）の手術において、関節空間に注入されると、HA溶液
は潤滑油のようにふるまって、苦痛軽減の効果を与え
る。興味深いことに、題目のHA溶液は、鼓膜穿孔の治療
においてもまた、有益であることが示されている（Hell
strom et al., Acta Otolaryngol 442:54, 1987）。
【００４０】本発明において投与される組成物は、摂取
可能な担体、好ましくは水性担体（aqueous carrier）
に溶解もしくは懸濁したHAの溶液を含んでいる。さまざ
まな水性担体を用いることが可能であり、例えば水、緩
衝液化した０．９％食塩水、それに類したものなどが用
いられる。そうした組成は、ｐＨ調整及び緩衝化薬剤、
浸透圧調整剤、保湿剤及びそれに類するもののように、
ほぼ生理状態に近づけるのに必要とされている、製剤上
摂取可能な補助物質を含んでいてよい、例えば、乳酸ナ
トリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシ
ウム、ラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノー
ルアミン、などを含んでいる。
【００４１】投与は、間欠性注入（intermittent injec
tions）（例えば、内在する血管内カニューレへの投
与）によっても、またはポンプを用いた絶え間のない速
度での注入によっても、いずれの方法でもよい。効果的
な投与量を決めることは、患者の体重によってさまざま
に変わり、また、多くの因子によって影響されると考え
られる。それには、投与の経路、疾患のタイプと状態、
ある患者の全体的な健康状態などが含まれる。
【００４２】より明確に言えば、HAは、本明細書で言及
したあらゆる医学的状態によって引き起こされた損傷し
た血管壁に対する、血小板粘着とそれに続く凝固を阻害
するのに用いることが可能である。これは、例えば、静
脈内または動脈内カテーテルを用いるなどの標準的な方
法によって、内皮下損傷からは離れた循環部位に、０．
４％のHA溶液を、好ましくは生理学的緩衝剤中で注入す
ることにより、達成することができる。HA溶液は患者の
血液体積の５％以上の量を投与するが、あるいは患者の
血液体積の１０％の方が好ましい。
【００４３】別の方法としては、HAは内皮下損傷部位に
直接投与することも可能である。これを達成することを
可能にした方法は、内皮下細胞損傷部位に直接カテーテ
ルを設置し、損傷部位の近傍にHAをゆっくり投与するこ
とである。この場合、HA溶液の効果的な量は、内皮下細
胞損傷部位に離れたところから溶液を投与するときに必
要とされる量よりも少ないであろう。
【００４４】後者に特異的な具体例は、経管冠状動脈形
成術（PTCA）によって引き起こされた損傷内皮での、血
小板粘着の阻害である。この方法では、バルーンが付い
たカテーテルを、一部閉塞した冠状動脈に挿入する。動
脈の内径を広げることを目的としてバルーンを膨らま
せ、その結果血管を流れる血液流動を改善する。この方
法は、しばしば動脈の内皮下に損傷を与えるが、それ
は、損傷血管壁上で、循環する血液細胞の望ましくない
沈澱を導いてしまう。血管壁に粘着する細胞は、血小
板、白血球、顆粒球（granulocytes）を含む。バルーン
を膨らませることに続いて、カテーテルを抜くことに先
立ち、損傷した血管壁に血小板または顆粒球が粘着する
ことを止めるために、０．１％から０．５％のHA溶液
を、血管形成部位のすぐ近傍に、カテーテルを通して注
入する。これら細胞の血管壁への粘着を減少させること
によって、血管の流通性（vessel patency）が維持さ
れ、血管の再閉塞（vessel reocclusion）が少なくな
り、あるいは阻害される。
【００４５】この方法におけるHA溶液の使用は、沈着し
たのり状物質の切開術（artherotomy）に引き続いても
また適用が可能である。この切開術も、血管壁を損傷
し、それ故血小板沈澱、血栓症、再閉塞を引き起こす。
【００４６】HAはまた、コラーゲンまたは合成血管移植
片、天然または人工心臓弁、血管ステント、他の血液と
接触する製品及び血液透析膜、カテーテル、チューブ類
などの材料のような、血管プロテーゼへの血小板粘着を
阻害もしくは減少させるためにも用いることが可能であ
る。これらの材質への血小板の粘着を阻害することは、
標準的な方法を用いた際に血液と接触することになるよ
うなプロテーゼもしくは血液に接触する材料の表面を、
HA、あるいはその誘導体で被覆することによって達成さ
れる。血液に曝したとき、血小板は、非HA被覆面と比較
して、その表面に粘着しにくくなっている。あらゆるデ
バイスを、その使用に先立ち、熟練した当業者に既知の
標準的細胞粘着アッセイによって、テストすることが好
ましい。例えば、血小板懸濁液を含む小量のサンプル
を、濃縮HAもしくはHAで被覆されたデバイスと共に生理
的温度でインキュベイトし、それから、例えば、ニュー
バウアーチャンバー（Neubauer chamber）にサンプルを
入れ、光学式顕微鏡を用いて、２個もしくはそれ以上の
凝集物中にみられる血小板の割合を評価する（あるい
は、別の方法としては、調べるデバイスの表面に結合し
た血小板の割合によって、評価できる。
【００４７】上述の記載より、当業者においては、本発
明の本質的特性を容易に確認することが可能であり、そ
れについての本質と範囲から離れることなく、種々の使
用法や状況に対応するために、本発明にさまざまな変更
と修正を行うことが可能である。例えば、vWFの活性を
阻害できるようなHAのホモログ、アナログ、誘導体、複
合体を本発明の方法においても用いることが可能である
と考えられる（例えば、Balasz, U.S.Patent No. 45828
65; De Belder PCT Publication No. WO86/00912; Mals
on et al., PCT Publication No. 84/20560; Prestwich
et al., EP Publication No. 0416250A2; Hamilton et
al., U.S. Patent No. 4937270; Burnset al., U.S.Pa
tent No. 5017229）；あらゆる個々のHAの化合物は、本
明細書に記述された方法に従って効果をテストすること
ができる。
【００４８】加えて、本発明はまた、血小板がすでに粘
着した部位に直接用いる臨床学的薬剤を運搬するHAとそ
れを化学的に修飾した誘導体の使用をも含んでいる。例
えば、HA分子に対する化学的結合によって、あるいはそ
の薬剤とHAとの間のイオン性相互作用によって、薬剤を
混在させ、または固定化することで、HAに包含させるこ
とが可能である（例えば、Sparer et al., 1983, Chapt
er 6, pp. 107-119, In Controlled Release Delivery
Systemes, Roseman et al., (ed), Marcel Dekker, In
c.: New Yorkを参照）。HA−薬剤の複合体、すなわちHA
誘導体の複合体は、vWFに結合することができ、血小板
に特異的な結合部位、あるいは損傷した血管壁に、薬剤
を運ぶことが可能である。特定の具体例としては、組織
プラスミノーゲン活性化因子（tissue plasminogen act
ivator）（tPA）とHAとを臨床学的投与量で混合し、上
の実験例に述べたように、HAを注入することである。HA
は、血餅（blood clots）中の血小板に対してtPAを直接
に向かわせ、その結果、薬剤が効くべき特異的部位に運
ぶ。
【００４９】
【実施例】以下に記載された実験は、血小板凝集及び粘
着を阻害する機能におけるHAの効果を述べるものであ
る。 １．出血時間におけるHAの効果 この実験は、PBS（１．５×１０6から２．０×１０6ダ
ルトン）中の０．４％HAの大量非経口注入の効果を調べ
ることを意図したものであり、それは動物の測定された
血液体積の２．５％、５％、あるいは１０％いずれかに
等しい。血流、ガス交換（gas exchange）、血液病理、
そして凝固のパラメーターは、以下に記述したように調
べられた。PBSだけの分離注入（それぞれの動物の血液
体積の１０％に等しい）を、コントロールとして用い
た。健康な雄のヒヒ（ｎ＝６）をこの実験に用いたが、
体重は２７から３６ｋｇの間であった（平均３０．２ｋ
ｇ）。 ［実験方法］実験の約１週間前、それぞれのヒヒの赤血
球の体積を、51Ｃｒラベルされた自己由来の赤血球によ
って調べ、血漿体積は125Ｉラベルされたアルブミンに
よって調べた。本データを用いて、それぞれの動物の循
環血液体積の２．５％、５％、あるいは１０％いずれか
に相当する、注入された体積を決定した。それぞれの動
物個体を、それ自身のコントロールとして供し、それら
を４つの場合に関して調べた。：すなわち、血液体積１
０％に等しい量のPBSの注入（コントロール）後に調
べ、更に、全血液体積の２．５％、５％、あるいは１０
％いずれかに相当する量の試験物質の注入の後にも調べ
た。コントロールまたは試験物質を注入する順番は、ラ
ンダムに行った。それぞれの注入の最初の試験日に、動
物を筋肉内にケタミン（４ｍｇ／ｋｇ）を授与して麻酔
し、麻酔を維持する必要に応じて繰り返した。平均動脈
圧測定のために右大腿動脈にカニューレを挿入した。幹
静脈圧、平均肺動脈圧、平均肺動脈ウェッジ圧、心拍出
量の測定のため、流動管理された肺動脈熱希釈カテーテ
ル（flow-directed pulmonary arterial thermodilutio
n catheter）を、右側面内頸静脈を通して挿入した。定
常状態に達した後、ベースラインサンプルをとり、続い
て試験物質またはコントロール物質のいずれかの静脈内
注入を１５分間以上行った。サンプリングは、注入の
前、注入の後０．５、１、４、６時間、１、２、３、
７、１４、２１、２８日後に行った。
【００５０】ヘマトクリット、ヘモグロビン、赤血球計
測、白血球計測、血小板計測、平均血小板体積を、自動
化細胞計測機（Model JT, coulter Corp., Hialeah, F
L）を用いて、上述したそれぞれのタイムポイントにお
いて計測した。全血液粘度は、浸透型担床粘度測定計
（porous bed viscometer）（Crowley et al., Am J Cl
inPathol 96:729, 1991）を用いて計測した。血液pH、p
O2、pCO2、ナトリウム、カリウム、イオン化カルシウ
ム、%O2ヘモグロビン、%COヘモグロビン、体積%O2、メ
トヘモグロビンは、自動化血液ガス分析機（NovaStat P
rofile 4, Nova Biomedical, Waltham, MA）を用いて測
定した。平均動脈圧、幹静脈圧、平均肺動脈圧、平均肺
動脈ウェッジ圧は、大腿及び肺動脈それぞれにカテーテ
ルを挿入することによって測定した。出血時間は、シン
プレートII出血時間装置（Simplate II bleeding time
device）（Organon Technika, Oklahoma City, OK）を
用いた標準化傷を作ることで、測定した。体内温度（co
re temperature）は、実験当日は肺動脈中で、注入後１
日から２８日は食道中で調べたが、これには食道に設置
した肺動脈カテーテルを用いた。前腕部の皮膚温度は、
熱電対（Mon-A-Therm）と赤外レーザー走査装置（Exerg
en）を用いて調べた。肺機能は、呼吸速度、pO2、pC
O2、呼出された気体の体積を測定することによって調べ
た。呼出された気体は、ダグラスバッグ（Douglas bag
s）に集め、pO2とpCO2はノバ・スタット・プロファイル
・４装置（Nova Stat Profile 4 instrument）を用いて
測定した。尿排出を実験を通じてモニターし、尿サンプ
ルは、BUNとクレアチニンを続いて測定するために、冷
凍した。赤血球p50は、ヘモキシアナライザーを用いて
測定した。
【００５１】加えて、各々のタイムポイントで得られた
血液サンプルの一部は、後の様々な判定基準の測定のた
め、冷凍した。プロトロンビン時間、パーシャル・トロ
ンボプラスチン時間、トロンビン時間、フィブリノーゲ
ンは、自動化クロッティング装置（Coag-A-Mate, Organ
on Technika）を用いて測定した（Feingold et al.,Am
J Vet Res 47:2197-2199, 1986）。アンチトロンビンII
I（Helena Laboratories）は、色素形成アッセイを用い
て測定した（Abildgaard et al., Thromb Res11:549-55
3, 1977）。プロテインＣは、アメリカバイオプロダク
ツ社（AmericaBioproducts Co.）により供給された色素
形成アッセイによって測定した（Nicham et al., CBS 6
5:25）。フォン・ウィルブランド因子とＤ−ダイマーレ
ベル（D-dimer levels）は、ELISAアッセイを用いて測
定したアメリカバイオプロダクツ社（America Bioprodu
cts Co.）により供給された（ Ness et al., Thromb Ha
emost 42:848, 1979; Rylatt et al., Thromb Res 31:7
67, 1983）。フィブロネクチンは、免疫混濁測定アッセ
イによって測定した（ベーリンガー・マンハイム社（Bo
ehringer Mannheim Biochemicals）により供給された）
（Saba et al., JLab Clin Med 98:482, 1981）。血清
及び尿素窒素（BUN）、クレアチニン、全タンパク、ア
ルブミン、乳酸脱水素酵素（LDH）、アラニンアミノト
ランスフェラーゼ（SGPT）、アスパラギン酸アミノトラ
ンスフェラーゼ（SGOT）は、自動化化学分析機によって
測定した（Beckman Instruments Inc., Brea, CA）。C3
a及びC5a異常アルギニン（C3a and C5a dys Arg）は、
放射免疫アッセイを用いて測定した（アマシャム社（Am
ersham Corp.）によって供給された）（ Chenoweth et
al., N Engl J Med 304:497, 1981）。出血時間中に腕
部から採取した血中のトロンボキサンB2レベルの測定
は、放射免疫アッセイによって決定した（ニューイング
ランドニュークリアー社（New England Nuclear Cor
p.）から供給された）。赤血球ATPとDPGは、ファーラン
ド蛍光測定機を用いて測定された（Lamprecht et al.,
In Methods of Enzymatic Analysis. HU Bergmeyer(e
d), pp. 543-558, New York: Academic Press; Keitt,
Am J Med 41: 762-785, 1966）。 ［統計的解析］データは、繰り返し測定による分散一方
向解析（one-way analysis of variance）（ANOVA）と
スチューデント・ニューマン・ケウルス試験（Student-
Newman-Keuls test）によって調べた。統計的有意性
は、ｐ＜０．０５で達成した。統計的解析の結果は、表
１から９に示してある。 ・２．５％及び５％グループ 測定したヒヒの血液体積の２．５％及び５％に相当する
体積の０．４％HA（PBS中）のヒヒへの注入は、コント
ロール注入と比較したあらゆる測定パラメーターにおい
て、なんら大きな影響を示さなかった。 ・１０％グループ 循環血液体積の１０％に相当する量の０．４％HA溶液の
注入の後、幹静脈圧、心拍速度、肺動脈圧には、大きな
変化はなかった。これら動物は、注入（＋１０％の変
化）に続くはじめの３０分間に平均動脈圧の強い増大を
示したが、そうした結果は、コントロールでは観察され
なかった（図１）。心拍出量ははじめの１時間で大きく
減少した（−１３％の変化）が、４時間以内にベースラ
インに戻った（図２）。血液粘度（＋５２％の変化）、
全身性血管抵抗（＋２６％の変化）、肺血管抵抗（＋３
４％の変化）は対応して増大したが、４から６時間以内
に注入前レベルへ徐々に戻ることが観察された（図
３）。１０％HA／PBSを注入したヒヒでは、動脈O2と静
脈pO2が極めて低かった（図４）。ヘマトクリット、白
血球測定、血小板測定は注入に続いては変化はなかっ
た。しかしながら１０％グループでは、出血時間は、コ
ントロールの２倍のレベルにまで、大幅に減少した。こ
れは、注入後７２時間、高い効果を上げ続けた（図
５）。
【００５２】注入に続いて４８間後まで測定された血清
BUN及びクレアチン値は、PBSのみの場合と１０％HA／PB
Sを注入された場合のヒヒと類似していた（図６）。プ
ロトロンビン時間、パーシャル・トロンボプラスチン時
間、トロンビン時間、フィブリノーゲンのレベルは、大
きな変化はなかった。プロテインＣレベルとフォン・ウ
ィルブランド因子は、HA／PBSを注入したヒヒにおい
て、極めて低かった（図７と８）。赤血球p50、赤血球A
TP、赤血球2,3 DPG活性は、コントロールと比較したと
き、１０％HA／PBSで処理した動物は変化していなかっ
た。加えて、全タンパク、アルブミン、SGOT、SGPT、LD
Hは、１０％注入によっては変化しなかった（図９、１
０、１１）。
【００５３】HAは、血清の通常の構成成分であり、わず
か数分の半減期で、血管内で早急に代謝される（Lauren
t et al., FASEB J 6:2397, 1992）。このことによっ
て、循環血液体積の２．５％あるいは５％に相当する量
の０．４％HA溶液の注入では、測定したさまざまなパラ
メーターにはっきりした効果がみられなかったかが説明
されていると考えられる。HAの清掃率は、ミカエリス−
メンテンの速度論によって述べることが可能であるが
（Laurent et al., supra）、１０％体積分を注入する
と、最大代謝速度（Vmax）を短時間で越え、その結果、
一時的な血液粘度の増大を生じていると考えられる。全
体の血液の粘度は、通常体内に拡散しているヘマトクリ
ットに依存しているが、ヘマトクリット（及び動脈酸素
容量）を一定にした場合の粘度の変化は、心拍出量と全
身血管抵抗における独立した変化を引き起こすことが可
能である（Murray et al., Am J Physiol 216:638, 196
9）。加えて、HAを含む溶液は、全血液のように、粘度
がせん断速度に強く依存する非ニュートン様（non-Newt
onian fashion）にふるまう（Laurent, supra）。これ
は、理論上、微小循環における問題を引き起こす可能性
がある。そこでは、低いせん断速度に伴って増加する粘
度が、うっ血と血管内でのスラッジング（sludging）を
誘導する可能性がある（Replogle et al., Circulation
36:148, 1967）。しかし本測定において、少なくとも
微小循環機能の間接的な測定については（腎臓及び肝臓
の機能指標については）、このようなことは観察されな
かった。
【００５４】
【表１】
【００５５】
【表２】
【００５６】
【表３】
【００５７】
【表４】
【００５８】
【表５】
【００５９】
【表６】
【００６０】
【表７】
【００６１】
【表８】
【００６２】
【表９】 ２．血小板相互作用におけるHAの役割 粘着が起こるためには、血小板は血管壁と接触しなくて
はならず、その後、内皮下マトリックスの構成成分に広
がらなくてはならない。血小板表面膜は、特異的マトリ
ックス分子に結合するための粘着レセプターを有してい
る。これらレセプターは、糖蛋白（gb）Ib-IX、内皮下
フォン・ウィルブランド因子のレセプター、粘着レセプ
ターのインテグリンスーパーファミリーの膜グリコプロ
テインのいくつかを含んでいる。ここでいうスーパーフ
ァミリーとは、gbIa/IIa（コラーゲンレセプター）、gp
Ic/IIa（フィブロネクチンレセプター）、gpIc'/IIa
（ラミニンレセプター）、αvβ3（ビトロネクチンレセ
プター）である。加えて、マトリックスの多くの構成成
分（例えばフォン・ウィルブランド因子、トロンボスポ
ンジン、フィブロネクチン、コラーゲン）は、血小板と
作用するのと同様に、相互に作用することができる。い
ったん活性化が起これば、他の血小板−膜インテグリン
（gpIIb/IIIa）が、フォン・ウィルブランド因子とフィ
ブロネクチンに結合する用意がととのい、内皮下マトリ
ックス上に血小板が広がることに関与する。
【００６３】リストセチンは、血小板上のグリコプロテ
イン1bレセプターに結合するvWFの、モノフェージック
な（monophasic）凝集反応を誘導することによる血小板
の凝集を、特異的に促進する薬剤である。vWFがgpIbに
結合した後、血小板はADPとセロトニンを放出するが、
いずれも効果的な血小板凝集物質である。それゆえ、我
々は、以下の実験において、血小板のgp1bレセプターに
結合するフォン・ウィルブランド因子によって起こる血
小板凝集に対する、HAの効果を調べた。
【００６４】血小板凝集は、以下のように、シリーズ１
０００Ｂ・ペイトン・サイエンティフィック・蛍光凝集
測定機（Series 1000B Payton Scientific Lumi-Aggreg
ometer）を用いて行われた。クエン酸ナトリウムで抗凝
集化した新鮮な全血液を、２００×ｇで１０分間遠心
し、上層のPRP層を分離することによって、血小板に富
む血漿（PRP）を、調製した。PRPは、血小板に乏しい血
清（１０分間１００×ｇで２回血液を遠心することで、
調製した）で、３００００／μｌにした。４００μｌの
PRPを、５０μｌの０．４％ｗ／ｗ HA溶液（分子量２．
２×１０6 、１０％最終濃度）、あるいはPBSキャリアバ
ッファに加えた。３７゜Ｃで５分間のインキュベーショ
ンの後、５０μｌの１２ｍｇ／ｍＬリストセチン（Bio/
Data Corp）を加えて、凝集反応（これは、血小板gpIb
レセプターと血漿vWFが介在する）を誘導した。サンプ
ルの光伝導の変化を、リストセチンの添加後５分間モニ
ターした。初期速度は、最初の計測時間の間に得られた
凝集の最大勾配である。
【００６５】凝集反応の傾きと凝集カーブのバイフェイ
ズな形（biphasic shape）は、HAが、vWFと血小板gpIb
レセプターの相互作用によって誘導された血小板凝集を
阻害していることを示している。
【００６６】２つめの実験は、vWF-gpIbに誘導された血
小板凝集の阻害が、HAに特異的であるかどうかを決定す
るために行われた。それ故、本発明者らは、HAを他のポ
リ陰イオン性ポリサッカライド、カルボキシメチルセル
ロース（CMC）と比較した。本研究では、CMC溶液をテス
トした。CMC-1溶液は、適切な粘度［３５０センチポウ
ズ（２．２ ｓｅｃ-1）］において０．７％ CMC（ロッ
ト／７Ｈ３ＳＦ）であった。CMC-2溶液は、適切な粘度
［３５０センチポウズ（２．２ ｓｅｃ-1）］において
２％ CMC（ロット／７ＭＦＰＨ）であった。CMC溶液
は、HA溶液とほぼ同じ粘度に調整し、上の実験例で記載
したように、リストセチン凝集に関して比較した。リス
トセチンで誘導された血小板凝集の量は、CMCと比較す
ると、HA処理をすることで極めて少なくなった（図１
３）が、このことは、血小板凝集におけるHAの効果が、
HAに関して特異的であるが、一般的なポリ陰イオン性溶
液の粘度とは関係しないということを示している。
【００６７】外輪（external ring）によって冠状血管
狭窄をおこしているフォン・ウィルブランド症の豚が、
正常な豚とは対照的に、血管閉塞を開くことができな
い、という知見がある（Nichols et at., Circ. Res. 5
9:15, 1986; Badimon et al.,Circulation 78:1431, 19
98）。ヘパリン投与された、また抗凝集処理されていな
い血液いずれにおいても、高い局所的壁せん断速度（hi
gh local wall shearrates）（狭窄した、または微小の
循環流動）において、vWFの欠如が血小板血栓形成の減
少をもたらすという報告、また、ヘパリンで施した抗凝
集と比較して、血小板沈澱においてかなり大きな減少を
示す、という報告もなされている。そして、狭窄性心臓
血管症と関連する血栓の合併症において、vWFは重要な
役割を担っているらしいということ、また、急性血栓反
応は、他の因子の場合より、vWFの操作に対してより感
受性が高くなるらしいと結論づけられた。
【００６８】従って、HAがvWFの機能を特異的に妨げる
という我々の実験結果は、生命を脅かす、あるいは脅か
すようになる危険性をはらんでいる血栓状態の処置にあ
たって、HAが臨床的に重要であることを明確にしてい
る。
【図面の簡単な説明】
【図１】 動脈圧におけるHA注入の影響を示した棒グラ
フである。
【図２】 心臓の拍出におけるHA注入の影響を示した棒
グラフである。
【図３】 血液の粘性におけるHA注入の影響を示した棒
グラフである。
【図４】 動脈の酸素におけるHA注入の影響を示した棒
グラフである。
【図５】 出血時間におけるHA注入の影響を示した棒グ
ラフである。
【図６】 血清BUN値の血液体積１０％におけるHA注入
の影響を表現した図である。
【図７】 タンパクＣレベルおけるHA注入の影響を表現
した図である。
【図８】 vWFレベルおけるHA注入の影響を表現した図
である。
【図９】 血清LDHおけるHA注入の影響を表現した図で
ある。
【図１０】血清SGPTおけるHA注入の影響を表現した図で
ある。
【図１１】血清SGOTおけるHA注入の影響を表現した図で
ある。
【図１２】ＡとＢは、リストセチンで誘導した血小板凝
集アッセイにおける、PBSコントロール（図１２Ａ）、
あるいは１０％HA（図１２Ｂ）で処理した血小板サンプ
ルの光透過率の分光測定を示したものである。
【図１３】リストセチンで誘導した血小板凝集における
HAとCMCの影響を示した棒グラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジェイムズ ダブリュウ． バーンズ アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 ボ ストン ＃23ジー タワー １ イー． インディア ロウ 85 (72)発明者 セザーレ アール． ヴァレリ アメリカ合衆国 マサチューセッツ州 マ ーブルヘッドオーシャン アベニュー 372

Claims (32)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 血小板の粘着と凝集を阻害する効果を奏
    する量の薬剤を動物に投与することによって、該動物の
    血栓症状を処置する該薬剤の調製における、ヒアルロン
    酸の使用。
  2. 【請求項２】 請求項１の使用において、血栓症状が静
    脈血栓症であることを特徴とする使用。
  3. 【請求項３】 請求項２の使用において、動物が妊娠し
    ている動物であることを特徴とする使用。
  4. 【請求項４】 請求項１の使用において、血栓症状が動
    脈血栓症であることを特徴とする使用。
  5. 【請求項５】 請求項４の使用において、血栓症状が冠
    状動脈血栓症であることを特徴とする使用。
  6. 【請求項６】 血小板の粘着と凝集を阻害する効果を奏
    する量の薬剤を動物に投与することによって、血栓症が
    拡大する恐れのある、該動物の血栓の形成を阻害する該
    薬剤の調製における、ヒアルロン酸の使用。
  7. 【請求項７】 請求項６の使用において、動物が、止血
    を崩壊させるような疾患が原因で血栓が成長する恐れが
    増加している動物であることを特徴とする使用。
  8. 【請求項８】 請求項７の使用において、医学的状態が
    ヘパリンに誘導された血小板減少であることを特徴とす
    る使用。
  9. 【請求項９】 請求項７の使用において、医学的状態が
    冠状動脈症であることを特徴とする使用。
  10. 【請求項１０】 請求項７の使用において、医学的状態
    がアテローム性動脈硬化症であることを特徴とする使
    用。
  11. 【請求項１１】 請求項６の使用において、動物が、医
    学的状態が原因で血栓が成長する恐れが増大している動
    物であることを特徴とする使用。
  12. 【請求項１２】 請求項１１の使用において、医学的状
    態が心臓手術であることを特徴とする使用。
  13. 【請求項１３】 請求項１２の使用において、医学的状
    態が心肺バイパス施術であることを特徴とする使用。
  14. 【請求項１４】 請求項１１の使用において、医学的状
    態がカテーテル挿入であることを特徴とする使用。
  15. 【請求項１５】 請求項１４の使用において、カテーテ
    ル挿入が心臓カテーテル挿入であることを特徴とする使
    用。
  16. 【請求項１６】 請求項１５の使用において、カテーテ
    ル挿入が経皮経管血管形成術であることを特徴とする使
    用。
  17. 【請求項１７】 請求項１１の使用において、医学的状
    態が沈着したのり状物質の切開手術であることを特徴と
    する使用。
  18. 【請求項１８】 請求項１１の使用において、医学的状
    態がプロテーゼデバイスの設置を含むことを特徴とする
    使用。
  19. 【請求項１９】 請求項１８の使用において、プロテー
    ゼデバイスが冠状動脈弁であることを特徴とする使用。
  20. 【請求項２０】 請求項１８の使用において、プロテー
    ゼデバイスが血管移植片であることを特徴とする使用。
  21. 【請求項２１】 請求項１８の使用において、プロテー
    ゼデバイスがステントであることを特徴とする使用。
  22. 【請求項２２】 請求項１または６の使用において、投
    与が全身的であることを特徴とする使用。
  23. 【請求項２３】 請求項１または６の使用において、投
    与が局所的であることを特徴とする使用。
  24. 【請求項２４】 請求項１の使用において、HAが血栓溶
    解剤による処置の後に投与されることを特徴とする使
    用。
  25. 【請求項２５】 請求項１の使用において、HAが血栓溶
    解剤と同時に投与されることを特徴とする使用。
  26. 【請求項２６】 請求項１１の使用において、HAが前述
    の医学的状態である期間を通して投与されることを特徴
    とする使用。
  27. 【請求項２７】 デバイスと血小板の相互作用を阻害す
    るのに十分な量のヒアルロン酸によって被覆されたプロ
    テーゼデバイス。
  28. 【請求項２８】 請求項２７のデバイスにおいて、プロ
    テーゼデバイスが合成されたものであるデバイス。
  29. 【請求項２９】 請求項２７のデバイスにおいて、プロ
    テーゼデバイスが生体由来のものであるデバイス。
  30. 【請求項３０】 請求項２７のデバイスにおいて、プロ
    テーゼデバイスが冠状バルブであるデバイス。
  31. 【請求項３１】 請求項２７のデバイスにおいて、プロ
    テーゼデバイスがステントであるデバイス。
  32. 【請求項３２】 請求項２７のデバイスにおいて、プロ
    テーゼデバイスが血管移植片であるデバイス。
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