JPH0859698A - 血液凝固調節能を有する新規ペプチド - Google Patents
血液凝固調節能を有する新規ペプチドInfo
- Publication number
- JPH0859698A JPH0859698A JP6191388A JP19138894A JPH0859698A JP H0859698 A JPH0859698 A JP H0859698A JP 6191388 A JP6191388 A JP 6191388A JP 19138894 A JP19138894 A JP 19138894A JP H0859698 A JPH0859698 A JP H0859698A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- phe
- blood
- blood coagulation
- ala
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】血液凝固調節能を有するペプチドの提供
【構成】ヒト血液の凝固を制御する下記アミノ酸配列又
はそのＮ末，Ｃ末が逆転した配列からなるペプチド NH2-Ala-Phe-Lys-Ala-Asp-Asp-Gly-Pro-Cys-Ｘ-Ala-Ile-Met-Lys-Arg 1 5 10 15 -Phe-Phe-Phe-Asn-Ile-Phe-COOH 20 ［Ｘは、上記配列ではArgであり、逆転した配列ではLys
である］
はそのＮ末，Ｃ末が逆転した配列からなるペプチド NH2-Ala-Phe-Lys-Ala-Asp-Asp-Gly-Pro-Cys-Ｘ-Ala-Ile-Met-Lys-Arg 1 5 10 15 -Phe-Phe-Phe-Asn-Ile-Phe-COOH 20 ［Ｘは、上記配列ではArgであり、逆転した配列ではLys
である］
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血液凝固系の諸因子の
活性に影響を及ぼす新規なペプチドに関するものであ
る。さらに詳細には、第VIIa因子（以下、VIIaと呼ぶこ
とあり）、第Ｘa因子（以下、Ｘａと呼ぶことあり）お
よび活性化プロテインＣ（Activated Protein C：以
下、ＡＰＣと呼ぶことあり）のうち、複数の因子に対し
て作用するペプチドに関するものである。
活性に影響を及ぼす新規なペプチドに関するものであ
る。さらに詳細には、第VIIa因子（以下、VIIaと呼ぶこ
とあり）、第Ｘa因子（以下、Ｘａと呼ぶことあり）お
よび活性化プロテインＣ（Activated Protein C：以
下、ＡＰＣと呼ぶことあり）のうち、複数の因子に対し
て作用するペプチドに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】生体内には、血液の凝固線溶を調節する
役割を有する諸因子が存在し、血液凝固線溶反応のカス
ケード制御に関与している。ヒト血液外因系凝固反応の
起点は細胞膜表面における糖タンパク組織因子（Tissue
Factor）発現である。第VII因子はTissue Factorと複
合体を形成することにより、より活性化された状態とな
りTissue Factor／VIIaの複合体を形成する。この複合
体はVIIaの機能的セリンプロテアーゼ型活性を有し、第
Ｘ因子および第ＩＸ因子に特異的に作用し、各々の因子
を活性化する。その結果として凝固因子が順次活性化さ
れ、フィブリノイド血栓を形成するに至る。また、プロ
テインＣはトロンビン／トロンボモデュリン複合体によ
り活性化されてＡＰＣとなり、第Ｖ因子、および第VIII
因子を阻害することにより、血液抗凝固因子として作用
する。
役割を有する諸因子が存在し、血液凝固線溶反応のカス
ケード制御に関与している。ヒト血液外因系凝固反応の
起点は細胞膜表面における糖タンパク組織因子（Tissue
Factor）発現である。第VII因子はTissue Factorと複
合体を形成することにより、より活性化された状態とな
りTissue Factor／VIIaの複合体を形成する。この複合
体はVIIaの機能的セリンプロテアーゼ型活性を有し、第
Ｘ因子および第ＩＸ因子に特異的に作用し、各々の因子
を活性化する。その結果として凝固因子が順次活性化さ
れ、フィブリノイド血栓を形成するに至る。また、プロ
テインＣはトロンビン／トロンボモデュリン複合体によ
り活性化されてＡＰＣとなり、第Ｖ因子、および第VIII
因子を阻害することにより、血液抗凝固因子として作用
する。
【０００３】従来、VIIaおよびＸａの活性を阻害する因
子として、ＴＦＰＩ（Tissue Factor Pathway Inhibito
r）が知られている（G.J.Broze et al:Nature,vol/338,
518-520(1989)）。ＴＦＰＩは３ヶ所のクーニッツ型阻
害領域を持ち、血液内皮細胞膜表面上で、Tissue Facto
r,VIIa，Ｘａと四量体を形成し、VIIaおよびＸａの活性
を阻害すること、さらにＴＦＰＩのVIIaとの結合部位は
クーニッツ１領域であることが示されている（G.J.Broz
e et al;Biochemistry,vol/29,7539-7545(1990)）。そ
こで我々は、このクーニッツ１領域に着目し、その部分
ペプチドの血液凝固反応系に及ぼす影響を調べた結果、
27Ala〜47Pheの配列を有する21アミノ酸部分が、Tissue
Factorにより惹起される血液凝固反応を抑制すること
を認め、特願平4-318496として出願した。
子として、ＴＦＰＩ（Tissue Factor Pathway Inhibito
r）が知られている（G.J.Broze et al:Nature,vol/338,
518-520(1989)）。ＴＦＰＩは３ヶ所のクーニッツ型阻
害領域を持ち、血液内皮細胞膜表面上で、Tissue Facto
r,VIIa，Ｘａと四量体を形成し、VIIaおよびＸａの活性
を阻害すること、さらにＴＦＰＩのVIIaとの結合部位は
クーニッツ１領域であることが示されている（G.J.Broz
e et al;Biochemistry,vol/29,7539-7545(1990)）。そ
こで我々は、このクーニッツ１領域に着目し、その部分
ペプチドの血液凝固反応系に及ぼす影響を調べた結果、
27Ala〜47Pheの配列を有する21アミノ酸部分が、Tissue
Factorにより惹起される血液凝固反応を抑制すること
を認め、特願平4-318496として出願した。
【０００４】今回我々は鋭意検討を重ね、ＴＦＰＩ由来
ペプチドの血液凝固線溶に及ぼす影響を調べた結果、意
外なことに、上記ＴＦＰＩ由来２１アミノ酸はその由来
であるＴＦＰＩのクーニッツ１領域の活性から類推され
るVIIa阻害活性のみならず、Ｘa阻害活性やＡＰＣ抑制
作用など広範な血液凝固調節能を有することを認めた。
ペプチドの血液凝固線溶に及ぼす影響を調べた結果、意
外なことに、上記ＴＦＰＩ由来２１アミノ酸はその由来
であるＴＦＰＩのクーニッツ１領域の活性から類推され
るVIIa阻害活性のみならず、Ｘa阻害活性やＡＰＣ抑制
作用など広範な血液凝固調節能を有することを認めた。
【０００５】そこで、我々は、この事実をもとに上記Ｔ
ＦＰＩ由来２１アミノ酸をモチーフとして、新規なペプ
チドを合成し、血液凝固線溶系に及ぼす影響を調べたと
ころ、新たに２種類（以下ペプチド１，ペプチド２と呼
ぶ）のペプチドが、ＴＦＰＩ由来２１アミノ酸とは異な
る活性プロファイルを有する、有用性の高い新規ペプチ
ドであることを認め、本発明に至った。
ＦＰＩ由来２１アミノ酸をモチーフとして、新規なペプ
チドを合成し、血液凝固線溶系に及ぼす影響を調べたと
ころ、新たに２種類（以下ペプチド１，ペプチド２と呼
ぶ）のペプチドが、ＴＦＰＩ由来２１アミノ酸とは異な
る活性プロファイルを有する、有用性の高い新規ペプチ
ドであることを認め、本発明に至った。
【０００６】本発明記載のペプチド１、あるいはペプチ
ド２を用いれば、血液凝固線溶活性に異常をきたす全て
の疾患、たとえば、動脈硬化、糖尿病性細小血管症、DI
Cにおいて、組織の損傷や血管の炎症が起きた際に出現
したTissue Factor による血栓形成傾向や性状増悪化傾
向を抑制することが期待できる。
ド２を用いれば、血液凝固線溶活性に異常をきたす全て
の疾患、たとえば、動脈硬化、糖尿病性細小血管症、DI
Cにおいて、組織の損傷や血管の炎症が起きた際に出現
したTissue Factor による血栓形成傾向や性状増悪化傾
向を抑制することが期待できる。
【０００７】また、低分子ペプチドであるため、ＴＦＰ
Ｉタンパクと異なり、血中での安定性に優れ、体内での
失活やクリアランスされる可能性は低い。また、種々の
剤型の適応が可能であり、投与ルートの選択の幅は極め
て広く、有用性は高い。
Ｉタンパクと異なり、血中での安定性に優れ、体内での
失活やクリアランスされる可能性は低い。また、種々の
剤型の適応が可能であり、投与ルートの選択の幅は極め
て広く、有用性は高い。
【０００８】
【発明の構成】すなわち、本発明は、下記アミノ酸配列
[I ]、および[II ]を有し、血液凝固線溶調節能を有す
る新規なペプチドである。
[I ]、および[II ]を有し、血液凝固線溶調節能を有す
る新規なペプチドである。
【０００９】
【化３】 NH2-Ala-Phe-Lys-Ala-Asp-Asp-Gly-Pro-Cys-Arg-Ala-Ile-Met-Lys-Arg・・［I］ 1 5 10 15 -Phe-Phe-Phe-Asn-Ile-Phe-COOH 20 NH2-Phe-Ile-Asn-Phe-Phe-Phe-Arg-Lys-Met-Ile-Ala-Lys-Cys-Pro-Gly・・［II］ 1 5 10 15 -Asp-Asp-Ala-Lys-Phe-Ala-COOH 20 本発明記載のペプチドは、ペプチド合成装置を用いてt-
Boc法やF-moc法など、従来より知られた方法によって合
成することができる。合成されたペプチドはレジン切断
後、逆相カラムクロマトグラフィー等によって精製する
ことができる。また、精製ペプチドのアミノ酸配列は、
アミノ酸シーケンサーを用いて確認することができる。
Boc法やF-moc法など、従来より知られた方法によって合
成することができる。合成されたペプチドはレジン切断
後、逆相カラムクロマトグラフィー等によって精製する
ことができる。また、精製ペプチドのアミノ酸配列は、
アミノ酸シーケンサーを用いて確認することができる。
【００１０】本発明記載のペプチドが血液凝固線溶系に
与える影響を調べる際には、凍結乾燥した精製ペプチド
を重量測定後、超純水に溶解し、適当な濃度になるよう
に調製し用いることができる。
与える影響を調べる際には、凍結乾燥した精製ペプチド
を重量測定後、超純水に溶解し、適当な濃度になるよう
に調製し用いることができる。
【００１１】本発明記載のペプチド［I ］、および［I
I］を合成し、ヒト血漿に添加して反応させた後ヒトTis
sue Factorを加えて撹拌し、凝固が起こるまでの時間を
測定し、上記ペプチドが外因系凝固に及ぼす影響を確か
めると、上記ペプチド［I ］、［II］ともに凝固延長作
用がみられ、その作用の大きさは、 ペプチド［I ］＞ペプチド［II］ である。
I］を合成し、ヒト血漿に添加して反応させた後ヒトTis
sue Factorを加えて撹拌し、凝固が起こるまでの時間を
測定し、上記ペプチドが外因系凝固に及ぼす影響を確か
めると、上記ペプチド［I ］、［II］ともに凝固延長作
用がみられ、その作用の大きさは、 ペプチド［I ］＞ペプチド［II］ である。
【００１２】VIIa は第Ｘ因子および第 IＸ因子の活性
化、Ｘａはプロトロンビンをトロンビンに変換すること
により、血液凝固を促進する因子であり、VIIa は合成
基質S-2288、Ｘaは合成基質S-2222を用いて、その活性
を測定することができる。
化、Ｘａはプロトロンビンをトロンビンに変換すること
により、血液凝固を促進する因子であり、VIIa は合成
基質S-2288、Ｘaは合成基質S-2222を用いて、その活性
を測定することができる。
【００１３】また、ＡＰＣは凝固促進因子である活性化
第V 因子、および活性化第VIII因子を分解する抗凝固活
性、ならびに組織プラスミノーゲンアクティベーターの
阻害剤であるPAI−１を失活させることに起因する線溶
活性を有しており、ＡＰＣの活性は合成基質S-2366を用
いて測定することができる。
第V 因子、および活性化第VIII因子を分解する抗凝固活
性、ならびに組織プラスミノーゲンアクティベーターの
阻害剤であるPAI−１を失活させることに起因する線溶
活性を有しており、ＡＰＣの活性は合成基質S-2366を用
いて測定することができる。
【００１４】本発明記載のペプチド［I ］、および［I
I］を合成し、S-2288を用いてVIIa阻害作用を検討する
と、上記ペプチド［I ］、［II］ともにVIIa 阻害作用
がみられ、その作用の大きさは、 ペプチド［I ］＞ペプチド［II］ である。
I］を合成し、S-2288を用いてVIIa阻害作用を検討する
と、上記ペプチド［I ］、［II］ともにVIIa 阻害作用
がみられ、その作用の大きさは、 ペプチド［I ］＞ペプチド［II］ である。
【００１５】また、S-2222を用いてＸa阻害作用を検討
すると、ペプチド［I ］、［II］ともにＸa阻害作用が
みられ、その作用の大きさは、 ペプチド［Ｉ］＞ペプチド［II］ である。
すると、ペプチド［I ］、［II］ともにＸa阻害作用が
みられ、その作用の大きさは、 ペプチド［Ｉ］＞ペプチド［II］ である。
【００１６】また、S-2366を用いてＡＰＣ阻害作用を検
討すると、ペプチド［I ］にＡＰＣ阻害作用がみられ
る。
討すると、ペプチド［I ］にＡＰＣ阻害作用がみられ
る。
【００１７】すなわち、ペプチド［II］は、VIIa およ
びＸaを同時に阻害する血液抗凝固ペプチドであり、ペ
プチド［I ］は、VIIa活性抑制、Ｘa活性抑制に基づく
抗凝固能と、ＡＰＣ抑制活性に基づく凝固亢進能を合わ
せ持つ、マルチファンクショナルな血液凝固調節ペプチ
ドである。一見、抗凝固能と凝固亢進能は相反する作用
であるが、血栓形成傾向にある部位では抗凝固能を発揮
し、出血傾向にある部位では凝固亢進する方向に作用す
ることで、複雑な血液凝固カスケード反応のバランスを
巧みに保つペプチドである可能性がある。
びＸaを同時に阻害する血液抗凝固ペプチドであり、ペ
プチド［I ］は、VIIa活性抑制、Ｘa活性抑制に基づく
抗凝固能と、ＡＰＣ抑制活性に基づく凝固亢進能を合わ
せ持つ、マルチファンクショナルな血液凝固調節ペプチ
ドである。一見、抗凝固能と凝固亢進能は相反する作用
であるが、血栓形成傾向にある部位では抗凝固能を発揮
し、出血傾向にある部位では凝固亢進する方向に作用す
ることで、複雑な血液凝固カスケード反応のバランスを
巧みに保つペプチドである可能性がある。
【００１８】本発明記載のペプチド［I ］、および［I
I］は、それ自体はもちろんのこと、適当な修飾基、保
護基などを付加してペプチドの安定性ならびに活性を高
めることも可能である。
I］は、それ自体はもちろんのこと、適当な修飾基、保
護基などを付加してペプチドの安定性ならびに活性を高
めることも可能である。
【００１９】以下、実施例により本発明をさらに詳しく
説明する。
説明する。
【００２０】
【実施例１】合成ペプチドの作成 下記No.1，No.2の各ペプチドをApplied Biosystems社の
ペプチド合成装置430A型を用いて、t-Boc法により合成
した。
ペプチド合成装置430A型を用いて、t-Boc法により合成
した。
【００２１】
【化４】 No.1 NH2-Ala-Phe-Lys-Ala-Asp-Asp-Gly-Pro-Cys-Arg-Ala-Ile-Met-Lys-Arg 1 5 10 15 -Phe-Phe-Phe-Asn-Ile-Phe-COOH No.2 NH2-Phe-Ile-Asn-Phe-Phe-Phe-Arg-Lys-Met-Ile-Ala-Lys-Cys-Pro-Gly 1 5 10 15 -Asp-Asp-Ala-Lys-Phe-Ala-COOH No.1のアミノ酸配列を有するペプチドを含む乾燥レジン
1.5ｇにアニソール2.25ｍｌ、エチルメチルスルフィド
0.38ｍｌを加えた後、ペプチド研究所製Ｉ型ＨＦ処理装
置によってレジンからペプチドを切り出した。続いてグ
ラスフィルター（Ｇ３）上でジエチルエーテル（無水）
とクロロホルムで交互に５回洗浄した。最後に２Ｎ酢酸
５０ｍｌを加えて、合成ペプチドを含む抽出液を取得し
た。
1.5ｇにアニソール2.25ｍｌ、エチルメチルスルフィド
0.38ｍｌを加えた後、ペプチド研究所製Ｉ型ＨＦ処理装
置によってレジンからペプチドを切り出した。続いてグ
ラスフィルター（Ｇ３）上でジエチルエーテル（無水）
とクロロホルムで交互に５回洗浄した。最後に２Ｎ酢酸
５０ｍｌを加えて、合成ペプチドを含む抽出液を取得し
た。
【００２２】このペプチド抽出液３００μｌをバッファ
ーＡ（1%アセトニトリル，0.1%ＴＦＡ／水）で１０倍に
希釈し、逆相カラム（ＶＹＤＡＣ、Ｃ１８、4.6mmx250m
m）を用いて精製した。溶出条件は、
ーＡ（1%アセトニトリル，0.1%ＴＦＡ／水）で１０倍に
希釈し、逆相カラム（ＶＹＤＡＣ、Ｃ１８、4.6mmx250m
m）を用いて精製した。溶出条件は、
【００２３】
【表１】
【００２４】上表のバッファーＡとバッファーＢとを混
合した直線濃度勾配により流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで行
った。
合した直線濃度勾配により流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで行
った。
【００２５】この条件下、No.1のアミノ酸配列を有する
ペプチドは約２７分で溶出し、該ペプチド溶出画分の凍
結乾燥後の重量は５．３ｍｇであった。
ペプチドは約２７分で溶出し、該ペプチド溶出画分の凍
結乾燥後の重量は５．３ｍｇであった。
【００２６】NO. ２のアミノ酸配列を有するペプチドを
含む乾燥レジン1.5ｇにアニソール2.25ｍｌ、エチルメ
チルスルフィド0.38ｍｌを加えた後、ペプチド研究所製
Ｉ型ＨＦ処理装置によってレジンからペプチドを切り出
した。続いてグラスフィルター（Ｇ３）上でジエチルエ
ーテル（無水）とクロロホルムで交互に５回洗浄した。
最後に２Ｎ酢酸５０ｍｌを加えて、合成ペプチドを含む
抽出液を取得した。
含む乾燥レジン1.5ｇにアニソール2.25ｍｌ、エチルメ
チルスルフィド0.38ｍｌを加えた後、ペプチド研究所製
Ｉ型ＨＦ処理装置によってレジンからペプチドを切り出
した。続いてグラスフィルター（Ｇ３）上でジエチルエ
ーテル（無水）とクロロホルムで交互に５回洗浄した。
最後に２Ｎ酢酸５０ｍｌを加えて、合成ペプチドを含む
抽出液を取得した。
【００２７】このペプチド抽出液３００μｌをバッファ
ーＡで１０倍に希釈し、逆相カラム（ＶＹＤＡＣ、Ｃ１
８、4.6mmx250mm）を用いて精製した。溶出条件は、
ーＡで１０倍に希釈し、逆相カラム（ＶＹＤＡＣ、Ｃ１
８、4.6mmx250mm）を用いて精製した。溶出条件は、
【００２８】
【表２】
【００２９】上表のバッファーＡとバッファーＢとを混
合した直線濃度勾配により流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで行
った。
合した直線濃度勾配により流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで行
った。
【００３０】この条件下、No.２のアミノ酸配列を有す
るペプチドは約２３分で溶出し、該ペプチド溶出画分の
凍結乾燥後の重量は５．３ｍｇであった。
るペプチドは約２３分で溶出し、該ペプチド溶出画分の
凍結乾燥後の重量は５．３ｍｇであった。
【００３１】
【実施例２】ペプチドの抗凝固活性（プロトロンビン時間）の測定 ２５ｍＭCaCl2を含む１００倍希釈トロンボレルＳ液
（ベーリングベルケ社製）１００μｌに１２５μg/mlの
ペプチド溶液１００μｌを加え、３７℃で１０分間反応
させた。それにヒト血漿１００μｌ添加し、撹拌後凝固
時間を、血液凝固自動測定装置（Amelung-Coaguromete
r,KC10A）を用いて測定した。結果を表３に示した。
（ベーリングベルケ社製）１００μｌに１２５μg/mlの
ペプチド溶液１００μｌを加え、３７℃で１０分間反応
させた。それにヒト血漿１００μｌ添加し、撹拌後凝固
時間を、血液凝固自動測定装置（Amelung-Coaguromete
r,KC10A）を用いて測定した。結果を表３に示した。
【００３２】その結果、ペプチドNo.1に血液凝固時間の
延長が認められた。
延長が認められた。
【００３３】
【表３】
【００３４】
【実施例３】ＡＰＣ共存下でのペプチドの抗凝固活性（活性化部分ト
ロンボプラスチン時間）の測定 種々の濃度のペプチド、および２５０ngのＡＰＣをふく
む１００μｌの溶液を３７℃で１０分間加温した後、ヒ
ト血漿１００μｌを加えて、さらに３７℃で１分間加温
した。そこにActin（バクスターデイド社製）１００μ
ｌを添加し、３７℃で２分間反応させた後に２５ｍＭの
CaCl2を１００μｌ加え、撹拌後凝固時間を、血液凝固
自動測定装置（Amelung-Coagurometer,KC10A）を用いて
測定した。結果を図１に示した。
ロンボプラスチン時間）の測定 種々の濃度のペプチド、および２５０ngのＡＰＣをふく
む１００μｌの溶液を３７℃で１０分間加温した後、ヒ
ト血漿１００μｌを加えて、さらに３７℃で１分間加温
した。そこにActin（バクスターデイド社製）１００μ
ｌを添加し、３７℃で２分間反応させた後に２５ｍＭの
CaCl2を１００μｌ加え、撹拌後凝固時間を、血液凝固
自動測定装置（Amelung-Coagurometer,KC10A）を用いて
測定した。結果を図１に示した。
【００３５】その結果、ペプチドNo.1,およびNo.2にＡ
ＰＣの抗凝固活性を抑制する作用が認められた。
ＰＣの抗凝固活性を抑制する作用が認められた。
【００３６】
【実施例４】VIIa活性の阻害作用の測定 １μg/mlのVIIa溶液１０μｌに種々の濃度のペプチド溶
液３０μｌを添加し、３７℃で１５分間加温した後、そ
こに２．５mMの合成基質S-2288（第一科学薬品（株）
製）を１０μｌ添加し、４０５nmにおける吸光度の変化
（吸光度/分）を測定した。ペプチド濃度が０のときの
値を１００％として、その相対値の結果を図２に示し
た。
液３０μｌを添加し、３７℃で１５分間加温した後、そ
こに２．５mMの合成基質S-2288（第一科学薬品（株）
製）を１０μｌ添加し、４０５nmにおける吸光度の変化
（吸光度/分）を測定した。ペプチド濃度が０のときの
値を１００％として、その相対値の結果を図２に示し
た。
【００３７】その結果、ペプチドNo.1,およびNo.2にVII
a の活性を容量依存的に抑制する作用が認められた。
a の活性を容量依存的に抑制する作用が認められた。
【００３８】
【実施例５】Ｘa活性の阻害作用の測定 １μg/mlのＸa溶液１０μｌに種々の濃度のペプチド溶
液３０μｌを添加し、３７℃で１５分間加温した後、そ
こに２．５mMの合成基質S-2222（第一化学薬品（株）
製）を１０μｌ添加し、４０５nmにおける吸光度の変化
（吸光度/分）を測定した。ペプチド濃度が０のときの
値を１００％として、その相対値の結果を図３に示し
た。
液３０μｌを添加し、３７℃で１５分間加温した後、そ
こに２．５mMの合成基質S-2222（第一化学薬品（株）
製）を１０μｌ添加し、４０５nmにおける吸光度の変化
（吸光度/分）を測定した。ペプチド濃度が０のときの
値を１００％として、その相対値の結果を図３に示し
た。
【００３９】その結果、ペプチドNo.1,およびNo.2にＸa
の活性を容量依存的に抑制する作用が認められた。
の活性を容量依存的に抑制する作用が認められた。
【００４０】
【実施例６】ＡＰＣ活性の阻害作用の測定 １μg/mlのＡＰＣ溶液１０μｌに種々の濃度のペプチド
溶液３０μｌを添加し、３７℃で１５分間加温した後、
そこに２．５mMの合成基質S-2366（第一科学薬品（株）
社製）を１０μｌ添加し、４０５nmにおける吸光度の変
化（吸光度/分）を測定した。ペプチド濃度が０のとき
の値を１００％として、その相対値の結果を図４に示し
た。
溶液３０μｌを添加し、３７℃で１５分間加温した後、
そこに２．５mMの合成基質S-2366（第一科学薬品（株）
社製）を１０μｌ添加し、４０５nmにおける吸光度の変
化（吸光度/分）を測定した。ペプチド濃度が０のとき
の値を１００％として、その相対値の結果を図４に示し
た。
【００４１】その結果、ペプチドNo.1にＡＰＣの活性を
容量依存的に抑制する作用が認められた。
容量依存的に抑制する作用が認められた。
【００４２】配列番号：１ 配列の長さ：２１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ile Met Lys Arg 1 5 10 15 Phe Phe Phe Asn Ile Phe 20
【００４３】配列番号：２ 配列の長さ：２１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Phe Ile Asn Phe Phe Phe Arg Lys Met Ile Ala Lys Cys Pro Gly 1 5 10 15 Asp Asp Ala Lys Phe Ala 20
【図１】ＡＰＣ共存下での本発明ペプチドの抗凝固活性
を示す。
を示す。
【図２】本発明のペプチドによる活性化第七因子活性の
阻害効果を示す。
阻害効果を示す。
【図３】本発明のペプチドによる活性化第十因子活性の
阻害効果を示す。
阻害効果を示す。
【図４】本発明のペプチドによるＡＰＣ活性の阻害効果
を示す。
を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鈴木 宏治 三重県津市上浜町６丁目４番35号
Claims (2)
- 【請求項１】 ヒト血液の凝固を制御する下記アミノ酸
配列からなるペプチド 【化１】 NH2-Ala-Phe-Lys-Ala-Asp-Asp-Gly-Pro-Cys-Arg-Ala-Ile-Met-Lys-Arg 1 5 10 15 -Phe-Phe-Phe-Asn-Ile-Phe-COOH 20 - 【請求項２】 ヒト血液の凝固を制御する下記アミノ酸
配列からなるペプチド 【化２】 NH2-Phe-Ile-Asn-Phe-Phe-Phe-Arg-Lys-Met-Ile-Ala-Lys-Cys-Pro-Gly 1 5 10 15 -Asp-Asp-Ala-Lys-Phe-Ala-COOH 20
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6191388A JPH0859698A (ja) | 1994-08-15 | 1994-08-15 | 血液凝固調節能を有する新規ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6191388A JPH0859698A (ja) | 1994-08-15 | 1994-08-15 | 血液凝固調節能を有する新規ペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0859698A true JPH0859698A (ja) | 1996-03-05 |
Family
ID=16273777
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6191388A Pending JPH0859698A (ja) | 1994-08-15 | 1994-08-15 | 血液凝固調節能を有する新規ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0859698A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0867450A4 (en) * | 1995-10-24 | 2000-01-19 | Juridical Foundation | NEW PEPTIDE |
-
1994
- 1994-08-15 JP JP6191388A patent/JPH0859698A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0867450A4 (en) * | 1995-10-24 | 2000-01-19 | Juridical Foundation | NEW PEPTIDE |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5478810A (en) | Peptide amides, processes for the preparation thereof and agents containing these as fibrin/thrombin clotting inhibitors | |
| Delaria et al. | Characterization of placental bikunin, a novel human serine protease inhibitor | |
| DE69635447T2 (de) | Plasma-kallikrein inhibitoren vom kunitz-typ | |
| US5373090A (en) | Aprotinin analogues and a process for the production thereof | |
| US6060451A (en) | Thrombin inhibitors based on the amino acid sequence of hirudin | |
| US6113896A (en) | Pharmaceutical compositions containing ecotin and homologs thereof | |
| JPH0390033A (ja) | 呼吸器疾患治療用ポリペプチドおよびそれを含有する医薬 | |
| CZ284911B6 (cs) | Lidská varianta inhibitoru proteasy Kunitzova typu | |
| US5612194A (en) | Methods of producing effective recombinant serine protease inhibitors and uses of these inhibitors | |
| CA2006658C (en) | An anticoagulant substance obtained from urine | |
| CZ164494A3 (en) | Human variant of kunitz-type protease inhibitor | |
| HUT70292A (en) | Human kunitz-type protease inhibitor variants | |
| Rovelli et al. | Characterization of the heparin-binding site of glia-derived nexin/protease nexin-1 | |
| CA2053242C (en) | Protease inhibitor | |
| JPH05502047A (ja) | ヒルジンの類似体 | |
| KR100212162B1 (ko) | 히루딘의 아미노산 시퀸스를 기재로 한 트롬빈 억제제 | |
| JPH0859698A (ja) | 血液凝固調節能を有する新規ペプチド | |
| CA2315976C (en) | Serine protease inhibitors | |
| US5637479A (en) | Method of modulating DNA binding activity of recombinant α-1 antichymotrypsin and other serine protease inhibitors | |
| CA2375475C (en) | Serine proteinase inhibitors | |
| EP0832129A1 (en) | Peptide fragments of tissue factor and their use for treatment and prevention of clotting disorders | |
| KR950703357A (ko) | 레트로바이러스 감염의 억제방법(inhibtion of retrovirus infection) | |
| JPH02218695A (ja) | 新規イソヒルジン類 | |
| US6369031B1 (en) | Protein Z-dependent protease inhibitor | |
| WO1998009993A1 (en) | Novel protease inhibitors derived from guamerin |