JPH0866188A

JPH0866188A - 耐熱性非還元性糖質生成酵素とその製造方法並びに用途

Info

Publication number: JPH0866188A
Application number: JP7179599A
Authority: JP
Inventors: Tetsuya Nakada; 哲也仲田; Hiroto Chaen; 博人茶圓; Toshiyuki Sugimoto; 利行杉本; Toshio Miyake; 俊雄三宅
Original assignee: Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd
Current assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Priority date: 1994-06-24
Filing date: 1995-06-23
Publication date: 1996-03-12
Anticipated expiration: 2019-08-25
Also published as: JP3557287B2

Abstract

(57)【要約】【目的】澱粉部分分解物から非還元性糖質の製造方法
の確立とその用途開発を目的とする。【構成】本発明は、グルコース重合度が３以上から選
ばれる１種または２種以上の還元性澱粉部分分解物から
末端にトレハロース構造を有する非還元性糖質を生成す
る新規耐熱性非還元性糖質生成酵素とその製造方法、及
びこの新規耐熱性非還元性糖質生成酵素を用いて製造さ
れる末端にトレハロース構造を有する非還元性糖質、こ
れを含有する低還元性糖質、およびこれらから製造され
るトレハロース、並びにこれら非還元性糖質を含有せし
めた組成物を主な構成とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、耐熱性非還元性糖質生
成酵素とその製造方法並びに用途に関し、更に詳細に
は、グルコース重合度３以上の１種又は２種以上還元性
澱粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有する非
還元性糖質を生成する新規耐熱性非還元性糖質生成酵
素、その製造方法、この新規耐熱性非還元性糖質生成酵
素を用いて製造される末端にトレハロース構造を有する
非還元性糖質、これを含む低還元性糖質、及び、これら
から製造されるトレハロース、並びにこれら非還元性糖
質を含有せしめた組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】グルコースを構成糖とする非還元性糖質
として、古くからトレハロース（α，α−トレハロー
ス）が知られており、その存在は、『アドバンシズ・イ
ン・カーボハイドレイト・ケミストリー（Ａｄｖａｎｃ
ｅｓｉｎＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＣｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ）』、第１８巻、第２０１乃至２２５頁（１９６
３年）アカデミック・プレス社（米国）及び『アプライ
ド・アンド・エンビロメンタル・マイクロバイオロジー
（ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａ
ｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）』、第５６巻、第３２
１３乃至３２１５頁（１９９０年）などにも記載されて
いるように、少量ながら、微生物、きのこ、昆虫など広
範囲に及んでいる。トレハロースは、非還元性糖質ゆえ
にアミノ酸や蛋白質等のアミノ基を有する物質とアミノ
カルボニル反応を起こさず、アミノ酸含有物質を損なわ
ないことから、褐変、劣化を懸念することなく利用、加
工できることが期待され、その工業的製造方法の確立が
望まれている。

【０００３】トレハロースの製造方法としては、例え
ば、特開昭５０−１５４４８５公報で報告されている微
生物を用いる方法や、特開昭５８−２１６６９５公報で
提案されているマルトース・ホスホリラーゼとトレハロ
ース・ホスホリラーゼとの組合せでマルトースを変換す
る方法などが知られている。しかしながら、微生物を用
いる方法は、菌体を出発原料とし、これに含まれるトレ
ハロースの含量が、通常、固形物当り１５ｗ／ｗ％（以
下、本明細書では、特にことわらない限り、ｗ／ｗ％を
％と略称する。）未満と低く、その上、これを抽出・精
製する工程が煩雑で、工業的製造方法としては不適であ
る。また、マルトース・ホスホリラーゼ及びトレハロー
ス・ホスホリラーゼを用いる方法は、いずれもグルコー
スリン酸を経由しており、その基質濃度を高めることが
困難であり、また、両酵素の反応系が平衡反応で目的物
の生成率が低く、更には、両酵素の反応系を安定に維持
して反応をスムーズに進行させることが困難であって、
未だ、工業的製造方法として実現するに至っていない。

【０００４】これに関係して、『月刊フードケミカ
ル』、８月号、第６７乃至７２頁（１９９２年）、「澱
粉利用開発の現状と課題」の「オリゴ糖」の項におい
て、「トレハロースについては著しい応用範囲が考えら
れるが、本糖の澱粉糖質からの直接糖転移、加水分解反
応を用いた酵素的生産は、現在のところ学術的には不可
能であるといわれている。」と記載されているように、
澱粉を原料とし、酵素反応によってトレハロースを製造
することは、従来、学術的にも不可能であると考えられ
てきた。

【０００５】一方、澱粉を原料として製造される澱粉部
分分解物、例えば、澱粉液化物、各種デキストリン、各
種マルトオリゴ糖などは、通常、その分子の末端に還元
基を有し還元性を示すことが知られている。このような
澱粉部分分解物を本明細書では、還元性澱粉部分分解物
と称する。一般的に、還元性澱粉部分分解物は、固形物
当りの還元力の大きさをデキストロース・エクイバレン
ト（ＤｅｘｔｒｏｓｅＥｑｕｉｖａｌｅｎｔ，ＤＥ）と
して表している。この値の大きいものは、通常、分子が
小さく低粘度で甘味が強いものの、反応性が強く、アミ
ノ酸や蛋白質などのアミノ基を持つ物質とアミノカルボ
ニル反応を起こし易く、褐変し、悪臭を発生して、品質
を劣化し易い性質のあることが知られている。

【０００６】このような還元性澱粉部分分解物の種々の
特性は、ＤＥの大小に依存しており、還元性澱粉部分分
解物とＤＥとの関係は極めて重要である。従来、当業界
では、この関係を断ち切ることは不可能とさえ信じられ
てきた。

【０００７】還元性澱粉部分分解物とＤＥとの関係を断
ち切る唯一の方法は、還元性澱粉部分分解物を高圧水素
添加法などによって、その還元基を糖アルコールに変換
して非還元性糖質にする方法である。しかし、この方法
は、高圧オートクレーブを必要とし、多量の水素やエネ
ルギーを消費するのみならず、防災上からも高度な安全
施設や管理を必要としている。その上、得られる還元性
澱粉部分分解物の糖アルコールは、原料の還元性澱粉部
分分解物がグルコースのみからなるのに対し、グルコー
スとソルビトールとから構成される点で異なり、それを
摂取することによって、一過性であるが、難消化、緩化
の症状を起こす懸念もある。従って、還元性澱粉部分分
解物の構成糖であるグルコースを変えることなく、その
還元力を低減若しくは消滅させる方法の確立が望まれて
いた。

【０００８】斯かる状況に鑑み、本発明者が、澱粉糖か
らトレハロース構造を有する糖質を生成する酵素につき
鋭意検索したところ、先に、特願平５−３４９２１６号
明細書で開示した土壌からの分離菌リゾビウム（Ｒｈｉ
ｚｏｂｉｕｍ）属に属する微生物Ｍ−１１、及び土壌か
らの分離菌アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｏ
ｒ）属に属する微生物Ｑ３６などの微生物が、グルコー
ス重合度３以上の還元性澱粉部分分解物から末端にトレ
ハロース構造を有する非還元性糖質を生成するという、
従来未知の全く新規な非還元性糖質生成酵素を産生する
ことが判明した。また、この酵素を用いて得られる末端
にトレハロース構造を有する非還元性糖質にグルコアミ
ラーゼ又はα−グルコシダーゼを作用させることによ
り、容易にトレハロースを製造しうることも見い出し
た。

【０００９】しかしながら、上記のリゾビウム属又はア
ルスロバクター属の酵素は耐熱性に乏しく、これらの酵
素を用いて末端にトレハロース構造を有する非還元性糖
質やトレハロースを製造しようとすると、約５５℃以下
の温度で酵素反応する必要がある。これに関係して、
『酵素応用の知識』、初版、第８０乃至第１２９頁（１
９８６年）、「糖質関連酵素とその応用」の「糖質関連
酵素」の項において、「工業的な糖化条件では、５５℃
以下では雑菌汚染の危険性が伴い、糖化反応中にｐＨが
低下する。」と記載されているように、澱粉を原料と
し、長時間にわたる酵素反応の場合、５５℃以下の温度
の反応条件では、雑菌汚染により反応液がｐＨ低下し、
反応途中で酵素失活することが懸念され、リゾチーム等
の添加による雑菌汚染防止や反応液のｐＨ調整を必要と
する場合もある。また、澱粉部分分解物の加水分解率が
低い場合、老化による不溶化物の生成も懸念される。一
方、耐熱性酵素は高い反応温度でも酵素反応が進行する
ため、耐熱性酵素を用いた反応では、微生物汚染の懸念
が少なく、また、澱粉部分分解物の老化も起こりにくい
と考えられる。そこで、５５℃を越える温度での酵素反
応が可能な耐熱性非還元性糖質生成酵素を用いる、末端
にトレハロース構造を有する非還元性糖質やトレハロー
スの新規製造方法の確立が望まれる。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、耐熱性非還
元性糖質生成酵素を用いた還元性澱粉部分分解物からの
非還元性糖質の新規製造方法とその非還元性糖質並びに
その用途を提供しようとするものである。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために、還元性澱粉部分分解物から末端にト
レハロース構造を有する非還元性糖質を生成する耐熱性
非還元性糖質生成酵素の実現に期待を込めて、この酵素
を産生する微生物を広く検索してきた。その結果、スル
フォロブス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ）属に属する微生物
スルフォロブス・アシドカルダリウス（Ｓｕｌｆｏｌｏ
ｂｕｓａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ３３
９０９及びＡＴＣＣ４９４２６、さらに、スルフォロブ
ス・ソルファタリカス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓｓｏｌ
ｆａｔａｒｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ３５０９１及びＡＴＣＣ
３５０９２が、還元性澱粉部分分解物から末端にトレハ
ロース構造を有する非還元性糖質を生成し、８５℃付近
まで安定である新規耐熱性非還元性糖質生成酵素を産生
することを見いだし、この耐熱性非還元性糖質生成酵素
を還元性澱粉部分分解物に作用させることにより、目指
していた５５℃を越える作用条件で、末端にトレハロー
ス構造を有する非還元性糖質が容易に製造しうることを
見い出し、また、還元性澱粉部分分解物に、この耐熱性
非還元性糖質生成酵素を作用させ、次いでグルコアミラ
ーゼ又はα−グルコシダーゼを作用させることにより、
容易にトレハロースを製造しうることを見い出し、本発
明を完成した。併せて、この非還元性糖質、これを含む
低還元性糖質及び／又はトレハロースを含有せしめた飲
食物、化粧品、医薬品などの組成物を確立し本発明を完
成した。なお、本明細書では、特にことわらない限り、
還元性澱粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有
する非還元性糖質を生成し、５５℃を越える温度で酵素
反応可能な新規耐熱性非還元性糖質生成酵素を、耐熱性
非還元性糖質生成酵素と称する。

【００１２】本発明では、上記菌のみならず、スルフォ
ロブス属に属し、還元性澱粉部分分解物から末端にトレ
ハロース構造を有する非還元性糖質を生成する耐熱性非
還元性糖質生成酵素を産生する他の菌株、更には、それ
らの菌株の変異株なども適宜用いられる。

【００１３】本発明の微生物の培養に用いる培地は、微
生物が生育でき、本発明の耐熱性非還元性糖質生成酵素
を産生しうる栄養培地であればよく、合成培地及び天然
培地のいずれでもよい。炭素源としては、微生物が資化
しうる物であればよく、例えば、グルコース、フラクト
ース、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビ
トール、糖蜜、澱粉部分分解物などの糖質、又は、クエ
ン酸、コハク酸などの有機酸又はそれらの塩なども使用
することができる。培地におけるこれらの炭素源の濃度
は炭素源の種類により適宜選択される。例えば、澱粉部
分分解物の場合には、通常、２０％以下が望ましく、菌
の生育及び増殖からは５％以下が好ましい。窒素源とし
ては、例えば、アンモニウム塩、硝酸塩などの無機窒素
化合物及び、例えば、尿素、コーン・スティープ・リカ
ー、カゼイン、ペプトン、酵母エキス、肉エキスなどの
有機窒素含有物が用いられる。また、無機成分として
は、例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム
塩、ナトリウム塩、リン酸塩、マンガン塩、亜鉛塩、鉄
塩、銅塩、モリブデン塩、コバルト塩などが適宜用いら
れる。

【００１４】培養は、通常、温度４０乃至９５℃、好ま
しくは５０乃至９０℃、ｐＨ２乃至７、好ましくは２乃
至６から選ばれる条件で行われる。培養時間は本微生物
が増殖しうる時間であればよく、好ましくは１０乃至１
００時間である。また、培養液の溶存酸素濃度には特に
制限はないが、通常、０．５乃至２０ｐｐｍが好まし
い。そのため、通気量を調節したり、撹拌したり、通気
に酸素を追加したり、また、ファーメンター内の圧力を
高めるなどの手段が採用される。また、培養方式は、回
分培養又は連続培養のいずれでもよい。

【００１５】このようにして、微生物を培養した後、本
発明の酵素を回収する。本酵素活性は、培養物の菌体に
主に認められ、公知の方法によって精製し、用いること
が望ましい。例えば、菌体抽出物を硫安塩析して濃縮し
た粗酵素標品を透析後、東ソー株式会社製ゲル『ＤＥＡ
Ｅ−トヨパール』などを用いた陰イオン交換カラムクロ
マトグラフィー、同社製ゲル『ブチルトヨパール』など
を用いた疎水カラムクロマトグラフィーを用いて精製す
ることにより、ほとんど夾雑酵素を除去した部分精製酵
素標品を得ることができる。更に続いて、セプラコル社
製ゲル『ウルトロゲルＡｃＡ４４』などを用いたゲ
ル瀘過クロマトグラフィー、ファルマシア・エルケービ
ー社製ゲル『ＭｏｎｏＱ』などを用いた陰イオン交換
カラムクロマトグラフィーを用いて精製することによ
り、電気泳動的に単一な酵素も得ることができる。

【００１６】このようにして得られる本発明の耐熱性非
還元性糖質生成酵素は、下記の理化学的性質を有する。（１）作用グルコース重合度３以上からから選ばれる１種又は２種
以上の還元性澱粉部分分解物から末端にトレハロース構
造を有する非還元性糖質を生成する。（２）分子量ＳＤＳ−ゲル電気泳動法により、約６９，０００乃至７
９，０００ダルトン。（３）等電点アンフォライン含有電気泳動法により、ｐＩ約５．４乃
至６．４。（４）至適温度ｐＨ５．５、６０分間反応で、７５℃付近。（５）至適６０℃、６０分間反応で、ｐＨ５．０乃至５．５付近。（６）温度安定性ｐＨ７．０、６０分間保持で、８５℃付近まで安定。（７）ｐＨ安定性２５℃、１６時間保持で、ｐＨ約４．０乃至９．５。

【００１７】本発明の耐熱性非還元性糖質生成酵素の活
性は次のようにして測定する。基質としてマルトペンタ
オース１．２５ｗ／ｖ％（２０ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ
５．５）４ｍｌに酵素液を１．０ｍｌ加え６０℃で６０
分間反応させた後、１００℃で３０分間加熱して反応を
停止させ、その反応液を正確に脱イオン水で１０倍に希
釈し、その希釈液の還元力をソモギー・ネルソン法にて
測定する。対照として、あらかじめ１００℃で３０分間
加熱することにより失活させた酵素液を用いて同様に測
定する。銅液を加え反応を停止させ、還元力をソモギー
・ネルソン法にて測定する。上記の測定方法を用いて、
１分間に１μｍｏｌｅのマルトペンタオースに相当する
還元力を減少させる酵素量を１単位と定義した。

【００１８】本酵素の基質としては、澱粉、アミロペク
チン、アミロースなどの澱粉をアミラーゼ又は酸などに
よって部分的に加水分解して得られる還元性澱粉部分分
解物が用いられる。アミラーゼで分解した還元性澱粉部
分分解物としては、例えば、『ハンドブック・オブ・ア
ミレーシズ・アンド・リレイテッド・エンザイムズ（Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋｏｆＡｍｙｌａｓｅｓａｎｄＲ
ｅｌａｔｅｄＥｎｚｙｍｅｓ）』、（１９８８年）パ
ーガモン・プレス社（東京）に記載されている、α−ア
ミラーゼ、マルトトリオース生成アミラーゼ、マルトテ
トラオース生成アミラーゼ、マルトペンタオース生成ア
ミラーゼ、マルトヘキサオース生成アミラーセなどのア
ミラーゼで分解した還元性澱粉部分分解物を用いる。更
には、還元性澱粉部分分解物を調製する際、プルラナー
ゼ及びイソアミラーゼなどの枝切酵素を作用させること
も随意である。また、マルトオリゴ糖、例えば、マルト
トリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなどの１
種又は２種以上を用いることも有利に実施できる。

【００１９】基質濃度は特に限定されない。例えば、
０．１％の基質溶液として用いた場合でも、本酵素の反
応は進行するが、工業的には、２％以上、望ましくは５
乃至５０％の高濃度反応が好適であり、末端にトレハロ
ース構造を有する非還元性糖質を有利に生成できる。反
応温度は酵素が安定な温度、すなわち８５℃付近までで
行えばよいが、好ましくは５５乃至７０℃付近の温度を
用いる。反応ｐＨは、通常、３乃至９の範囲に調整すれ
ばよいが、好ましくはｐＨ約４乃至７の範囲に調整す
る。反応時間は、酵素反応の進行具合により適宜選択す
ればよく、通常、基質固形物グラム当たり約０．１乃至
１００単位の酵素使用量で０．１乃至１００時間程度で
ある。

【００２０】上記の反応によって得られた非還元性糖質
を含む反応液は、基質に用いた還元性澱粉部分分解物と
比較して、顕著に還元力が低下している。例えば、基質
にマルトペンタオースを用いた場合、本酵素反応により
反応液が示す還元力は、基質マルトペンタオース溶液の
示す始発還元力の約７５％が消失し、約２５％まで低下
する。

【００２１】反応液は、常法により、瀘過、遠心分離な
どして不溶物を除去した後、活性炭で脱色、Ｈ型、ＯＨ
型イオン交換樹脂で脱塩し、濃縮し、シラップ状製品と
する。更に、乾燥して粉末状製品にすることも随意であ
る。必要ならば、更に、精製、例えば、イオン交換カラ
ムクロマトグラフィー、活性炭カラムクロマトグラフィ
ー、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどのカラム
クロマトグラフィーによる分画、アルコール及びアセト
ンなど有機溶媒による分別、適度な分離性能を有する膜
による分離、更には、酵母での発酵処理、アルカリ処理
などによる残存している還元性糖質の分解除去などの方
法を１種又は２種以上組合わせて精製することにより、
最高純度の非還元性糖質製品を得ることも容易である。

【００２２】とりわけ、工業的大量生産方法としては、
イオン交換カラムクロマトグラフィーの採用が好適であ
り、例えば、特開昭５８−２３７９９号公報、特開昭５
８−７２５９８号公報などに開示されている強酸性カチ
オン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより
夾雑糖類を除去し、目的物の含量を向上させた非還元性
糖質を有利に製造することができる。この際、固定床方
式、移動床方式、疑似移動床方式のいずれの方式を採用
することも随意である。

【００２３】このようにして得られた本発明の末端にト
レハロース構造を有する非還元性糖質又はこれを含む低
還元性糖質を、必要により、アミラーゼ、例えば、α−
アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼなど
や、又はα−グルコシダーゼで分解し、甘味性、還元力
などを調整したり、粘性を低下させたりすることも、ま
た、水素添加して残存する還元性糖質を糖アルコールに
して還元力を消滅せしめることなどの更なる加工処理を
施すことも随意である。

【００２４】とりわけ、本発明の非還元性糖質又はこれ
を含む低還元性糖質に対して、グルコアミラーゼ又はα
−グルコシダーゼを作用させることにより容易にトレハ
ロースを製造することができる。即ち、これらの非還元
性又は低還元性糖質にグルコアミラーゼ又はα−グルコ
シダーゼを作用させてトレハロースとグルコースとの混
合溶液とし、これを、前述の精製方法、例えば、イオン
交換カラムクロマトグラフィーなどにより、グルコース
を除去し、トレハロース高含有画分を採取する。これを
精製、濃縮して、シラップ状製品を得ることも、更に濃
縮して過飽和にし、晶出させてトレハロース含水結晶又
は無水結晶トレハロースを得ることも有利に実施でき
る。

【００２５】トレハロース含水結晶を製造するには、例
えば、純度６０％以上、濃度６５乃至９０％のトレハロ
ース含有液を助晶缶にとり、必要に応じて、０．１乃至
２０％の種晶共存下で、温度９５℃以下、望ましくは、
１０乃至９０℃の範囲で、撹拌しつつ徐冷し、トレハロ
ース含水結晶を含有するマスキットを製造する。また、
減圧濃縮しながら、晶析させる連続晶析法を採用するこ
とも有利に実施できる。マスキットからトレハロース含
水結晶又はこれを含有する含蜜結晶を製造する方法は、
例えば、分蜜方法、ブロック粉砕方法、流動造粒方法、
噴霧乾燥方法など公知の方法を採用すればよい。

【００２６】分蜜方法の場合には、通常、マスキットを
バスケット型遠心分離機にかけ、トレハロース含水結晶
と蜜（母液）とを分離し、必要により、該結晶に少量の
冷水をスプレーして洗浄することも容易な方法であり、
より高純度のトレハロース含水結晶を製造するのに好適
である。噴霧乾燥方法の場合には、通常、濃度６０乃至
８５％、晶出率２０乃至６０％程度のマスキットを高圧
ポンプでノズルから噴霧し、結晶粉末が溶解しない温
度、例えば、６０乃至１００℃の熱風で乾燥し、次いで
３０乃至６０℃の温風で約１乃至２０時間熟成すれば非
吸湿性又は難吸湿性の含蜜結晶が容易に製造できる。ま
た、ブロック粉砕方法の場合には、通常、水分１０乃至
２０％、晶出率１０乃至６０％程度のマスキットを数時
間乃至３日間静置して全体をブロック状に晶出固化さ
せ、これを粉砕又は切削などの方法によって粉末化し乾
燥すれば、非吸湿性又は難吸湿性の含蜜結晶が容易に製
造できる。

【００２７】また、無水結晶トレハロースを製造するに
は、トレハロース含水結晶を乾燥して変換させることも
できるが、一般的には、水分１０％未満の高濃度トレハ
ロース高含有溶液を助晶缶にとり、種晶共存下で５０乃
至１６０℃、望ましくは８０乃至１４０℃の範囲で撹拌
しつつ無水結晶トレハロースを含有するマスキットを製
造し、これを比較的高温乾燥条件下で、例えば、ブロッ
ク粉砕方法、流動造粒方法、噴霧乾燥方法などの方法で
晶出、粉末化して製造される。

【００２８】このようにして製造される本発明の非還元
性糖質、これを含む低還元性糖質及びトレハロースは、
原料の還元性澱粉部分分解物と比較して、還元性が低く
安定であり、他の素材、特にアミノ酸、オリゴペプチ
ド、蛋白質などのアミノ酸又はアミノ基を含有する物質
と混合、加工しても、褐変することも、異臭を発生する
こともなく、混合した他の素材を損なうことも少ない。
また、還元性澱粉部分分解物の場合とは違って、還元力
が、低いにもかかわらず低粘度であり、平均グルコース
重合度が低いものの場合には、良質で上品な甘味を有し
ている。

【００２９】更に、アミラーゼ、例えば、すい臓由来α
−アミラーゼにより分解し、低分子非還元性オリゴ糖や
低分子マルトオリゴ糖を生成し、また、これらオリゴ糖
も、α−グルコシダーゼや小腸酵素でも容易に分解し、
グルコース及びトレハロースを生成し、更に生成したト
レハロースは、トレハラーゼにより容易にグルコースに
まで分解することから、経口摂取により、消化吸収さ
れ、カロリー源として利用される。また、虫歯誘発菌な
どによって、発酵されにくく、虫歯を起こしにくい甘味
剤としても利用できる。また、浸透圧調節性、賦形性、
照り付与性、保湿性、粘性、他糖の晶出防止性、難発酵
性、澱粉の老化防止性などの性質を具備している。

【００３０】また、本発明のトレハロースは、経管栄養
剤、輸液剤などとして非経口的に使用され、毒性、副作
用の懸念もなく、よく代謝、利用され、生体へのエネル
ギー補給に有利に利用することができる。また、安定な
甘味料であることにより、トレハロース含水結晶製品の
場合には、プルラン、ヒドロキシエチルスターチ、ポリ
ビニルピロリドンなどの結合剤と併用して錠剤の糖衣剤
として利用することも有利に実施できる。

【００３１】また、無水結晶トレハロースの場合には、
食品、医薬品、化粧品、その原材料、又は、加工中間物
などの含水物の脱水剤としても有利に利用でき、安定で
高品質の粉末、顆粒、錠剤など固状物を容易に製造する
ことができる。

【００３２】従って、本発明の非還元性糖質、又はこれ
を含む低還元性糖質及びこれらから製造されるトレハロ
ースは、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、賦
形剤、脱水剤などとして、飲食物、嗜好物、飼料、餌
料、化粧品、医薬品などの各種組成物に有利に利用でき
る。

【００３３】本発明の非還元性糖質、これを含む低還元
性糖質及びこれらから製造されるトレハロースは、その
まま甘味付けのための調味料として使用することができ
る。必要ならば、例えば、粉飴、ブドウ糖、マルトー
ス、蔗糖、異性化糖、蜂蜜、メイプルシュガー、イソマ
ルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、
ラクトスロース、ソルビトール、マルチトール、ラクチ
トール、ジヒドロカルコン、ステビオシド、α−グリコ
シルステビオシド、レバウディオシド、グリチルリチ
ン、Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエ
ステル、サッカリン、グリシン、アラニンなどのような
他の甘味料の１種又は２種以上の適量と混合して使用し
てもよく、また必要ならば、デキストリン、澱粉、乳糖
などのような増量剤と混合して使用することもできる。

【００３４】また、本発明の非還元性糖質、これを含む
低還元性糖質及びこれらから製造されるトレハロースの
粉末乃至結晶状製品は、そのままで、又は必要に応じ
て、増量剤、賦形剤、結合剤などと混合して、顆粒、球
状、短棒状、板状、立方体、錠剤など各種形状に成型し
て使用することも随意である。

【００３５】また、本発明の非還元性糖質、これを含む
低還元性糖質及びこれらから製造されるトレハロースの
甘味は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの他の
呈味を有する各種物質とよく調和し、耐酸性、耐熱性も
大きいので、一般の飲食物の甘味付け、呈味改良に、ま
た品質改良などに有利に利用できる。

【００３６】例えば、アミノ酸、ペプチド類、醤油、粉
末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、
マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、粉末すし
酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、ケチャップ、
焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スープの素、
ダシの素、核酸系調味料、複合調味料、みりん、新みり
ん、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなど各種調理
料として有利に使用できる。

【００３７】また、例えば、せんべい、あられ、おこ
し、餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羮、水羊
羮、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、
パン、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリ
ン、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリ
ーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレ
ート、チューインガム、キャラメル、キャンデーなどの
洋菓子、アイスクリーム、シャーベット、などの氷菓、
果実のシロップ漬、氷蜜などのシロップ類、フラワーペ
ースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、スプ
レッドなどのペースト類、ジャム、マーマレード、シロ
ップ漬、糖果などの果実、野菜の加工食品類、福神漬、
べったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、たく
あん漬の素、白菜漬の素などの漬物の素類、ハム、ソー
セージなどの畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、
かまぼこ、ちくわ、天ぷらなどの魚肉製品、ウニ、イカ
の塩辛、酢こんぶ、さきするめ、ふぐみりん干しなどの
各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝などで製造
されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、こんぶ巻など
の惣菜食品、ヨーグルト、チーズなどの乳製品、魚肉、
畜肉、果実、野菜のビン詰、缶詰類、清酒、合成酒、リ
キュール、洋酒などの酒類、コーヒー、紅茶、ココア、
ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼
飲料水、プリンミックス、ホットケーキミックス、即席
しるこ、即席スープなどの即席食品、更には、離乳食、
治療食、ドリンク剤、ペプチド食品、冷凍食品などの各
種飲食物への甘味付けに、呈味改良に、また、品質改良
などに有利に利用できる。

【００３８】また、家畜、家禽、その他蜜蜂、蚕、魚な
どの飼育動物のために飼料、餌料などの嗜好性を向上さ
せる目的で使用することもできる。その他、タバコ、練
歯磨、口紅、リップクリーム、内服液、錠剤、トロー
チ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤な
ど各種固形物、ペースト状、液状などで嗜好物、化粧
品、医薬品などの各種組成物への甘味剤として、又は呈
味改良剤、矯味剤として、さらには品質改良剤、安定剤
などとして有利に利用できる。品質改良剤、安定剤とし
ては、有効成分、活性などを失い易い各種生理活性物質
又はこれを含む健康食品、医薬品などに有利に適用でき
る。例えば、インターフェロン−α、インターフェロン
−β、インターフェロン−γ、ツモア・ネクロシス・フ
ァクター−α、ツモア・ネクロシス・ファクター−β、
マクロファージ遊走阻止因子、コロニー刺激因子、トラ
ンスファーファクター、インターロイキンＩＩなどのリ
ンホカイン、インシュリン、成長ホルモン、プロラクチ
ン、エリトロポエチン、卵細胞刺激ホルモンなどのホル
モン、ＢＣＧワクチン、日本脳炎ワクチン、はしかワク
チン、ポリオ生ワクチン、痘苗、破傷風トキソイド、ハ
ブ抗毒素、ヒト免疫グロブリンなどの生物製剤、ペニシ
リン、エリスロマイシン、クロラムフェニコール、テト
ラサイクリン、ストレプトマイシン、硫酸カナマイシン
などの抗生物質、チアミン、リボフラビン、Ｌ−アスコ
ルビン酸、肝油、カロチノイド、エルゴステロール、ト
コフェロールなどのビタミン、リパーゼ、エラスター
ゼ、ウロキナーゼ、プロテアーゼ、β−アミラーゼ、イ
ソアミラーゼ、グルカナーゼ、ラクターゼなどの酵素、
薬用人参エキス、スッポンエキス、クロレラエキス、ア
ロエエキス、プロポリスエキスなどのエキス類、ウイル
ス、乳酸菌、酵母などの生菌、ロイヤルゼリーなどの各
種生理活性物質も、その有効成分、活性を失うことな
く、安定で高品質の液状、ペースト状又は固状の健康食
品や医薬品などに容易に製造できることとなる。

【００３９】以上述べたような各種組成物に末端にトレ
ハロース構造を有する非還元性糖質、これを含む低還元
性糖質、及びこれから製造されるトレハロースを含有せ
しめる方法は、その製品が完成するまでの工程に含有せ
しめればよく、例えば、混和、溶解、融解、浸漬、浸
透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入、晶出、固化など公
知の方法が適宜選ばれる。その量は、通常、０．１％以
上、望ましくは、１％以上含有せしめるのが好適であ
る。

【００４０】次に実験により本発明をさらに具体的に説
明する。

【００４１】

【実験１スルフォロブス・アシドカルダ
リウスＡＴＣＣ３３９０９由来耐熱性非還元性糖質生
成酵素の調製】ペプトン０．１ｗ／ｖ％、酵母エキス
０．１ｗ／ｖ％、硫酸アンモニウム０．２ｗ／ｖ％、リ
ン酸一カリウム０．０５ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム七
水塩０．０２ｗ／ｖ、塩化カリウム０．０２ｗ／ｖ％及
び水からなる液体培地を５００ｍｌ容三角フラスコに約
１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２０℃で２０
分間滅菌し、冷却した後、硫酸にてｐＨ３．０に調整し
た。この液体培地にスルフォロブス・アシドカルダリウ
スＡＴＣＣ３３９０９を接種し、７５℃、１３０ｒｐｍ
で２４時間培養したものを第１次種培養液とした。

【００４２】容量１０ｌのファーメンターに第１次種培
養の場合と同組成の培地約５ｌを入れて殺菌、冷却して
ｐＨ３．０、温度７５℃とした後、第１次種培養液１ｖ
／ｖ％を接種し、温度７５℃、通気量５００ｍｌ／分で
約４８時間通気培養したものを第２次種培養液とした。

【００４３】容量３００ｌのファーメンターに第１次種
培養の場合と同組成の培地約２５０ｌを入れて殺菌、冷
却してｐＨ３．０、温度７５℃とした後、第２次種培養
液１ｖ／ｖ％を接種し、温度７５℃、通気量１００ｌ／
分で約４２時間通気培養した。得られた培養液約１７０
ｌをＳＦ膜及び遠心分離することにより、菌体を湿重量
として２５８ｇ回収した。この菌体に１０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）を３００ｍｌ加え、懸濁した後、株
式会社日本精機製作所製超音波破砕機モデル『ＵＳ３０
０』で菌体を破砕した。破砕液を遠心分離（１０，００
０ｒｐｍ、３０分間）することにより、約３００ｍｌの
遠心上清液を得た。その液に飽和度０．７になるように
硫酸アンモニウムを加え溶解させ、４℃、２４時間放置
した後、遠心分離して塩析物を回収した。得られた塩析
物を１０ｍＭトリス・塩酸酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶
解させた後、同じ緩衝液に対して２４時間透析し、遠心
分離し不溶物を除いた。その透析液（約６００ｍｌ）を
２回に分けて、ＤＥＡＥ−トヨパールを用いたイオン交
換カラムクロマトグラフィー（ゲル量約３５０ｍｌ）を
行った。吸着した本酵素を０Ｍから０．３Ｍ塩化ナトリ
ウム濃度のリニアグラジエントでカラムより溶出させ、
０．１Ｍ塩化ナトリウム濃度付近で溶出した酵素活性画
分を回収した。得られた酵素活性画分を１Ｍ硫酸アンモ
ニウムを含む１０ｍＭトリス・塩酸酸緩衝液（ｐＨ８．
５）に対して透析し、その透析液を遠心分離し不溶物を
除き、得られる上清を、東ソー株式会社製ゲル『ブチル
トヨパール６５０』を用いた疎水カラムクロマトグラ
フィー（ゲル量３５０ｍｌ）に供した。吸着した本酵素
を１Ｍから０Ｍ硫酸アンモニウム濃度のリニアグラジエ
ントでカラムより溶出させ、０．８Ｍ硫酸アンモニウム
濃度付近で溶出した酵素活性画分を約４４０単位回収し
た。得られた部分精製標品は、約２０単位／ｍｇ蛋白質
の比活性を示した。

【００４４】部分精製標品を０．２Ｍ塩化ナトリウムを
含む１０ｍＭトリス・塩酸酸緩衝液（ｐＨ８．５）に対
して透析し、その透析液を遠心分離し不溶物を除き、得
られる上清をウルトロゲルＡｃＡ４４を用いたゲル
濾過クロマトグラフィー（ゲル量３５０ｍｌ）に供し、
酵素活性画分を回収した後、１０ｍＭトリス・塩酸酸緩
衝液（ｐＨ８．５）に対して透析し、その透析液を遠心
分離し不溶物を除き、得られる上清をＭｏｎｏＱを用
いたイオン交換カラムクロマトグラフィー（ゲル量１０
ｍｌ）に供し、吸着した本酵素を０Ｍから０．２Ｍ塩化
ナトリウム濃度のリニアグラジエントでカラムより溶出
させ、０．１Ｍ塩化ナトリウム濃度付近で溶出した耐熱
性非還元性糖質生成酵素活性画分を約４０単位回収し
た。

【００４５】得られた精製耐熱性非還元性糖質生成酵素
標品は、約８１単位／ｍｇ蛋白質の比活性を示し、ＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル（ゲル濃度１０％）を用い
る電気泳動法で純度を検定したところ、蛋白バンドは単
一であることが示され、電気泳動的に単一な純度の高い
標品であった。

【００４６】

【実験２耐熱性非還元性糖質生成酵素の理化学的性
質】

【実験２−１作用】基質として、グルコース、マルト
ース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルト
ペンタオース、マルトヘキサオース、及びマルトヘプタ
オースの１０％水溶液を調製し、それぞれに実験１の方
法で得られた精製耐熱性非還元性糖質生成酵素を基質固
形分グラム当たり２単位の割合で加え、６０℃、ｐＨ
５．５で４８時間作用させた後、脱塩し、和光純薬工業
株式会社製カラム『ワコービーズＷＢ−Ｔ−３３０』を
用いた高速液体クロマトグラフィーで反応生成物を分析
した。高速液体クロマトグラフィーは、室温下で行い、
溶離液として水を流速０．５ｍｌ／分で流し、東ソー株
式会社製示差屈折計『ＲＩ−８０１２』で分析した。そ
の結果を表１に示す。

【００４７】

【表１】

【００４８】表１の結果から明らかなように、本精製酵
素は、グルコース重合度３以上の澱粉部分分解物である
マルトトリオース乃至マルトヘプタオースから、末端に
トレハロース構造に有する非還元性糖質であるα−グル
コシルトレハロース乃至α−マルトペンタオシルトレハ
ロースを生成することが判明した。反応物中には残存す
るそれぞれの基質とグルコース重合度が変わることなく
生成した非還元性糖質以外に、比較的少量の基質の加水
分解物であるグルコースや低分子マルトオリゴ糖及びそ
れから生成される非還元性糖質が存在し、非還元性糖質
生成作用以外にも、弱いながら加水分解作用を有するこ
とが判明した。また、本精製酵素によるそれぞれの基質
からの非還元性糖質及び加水分解物により生成した還元
性糖質の生成率は、マルトトリオースから３０．２％及
び２７．６％で、マルトテトラオースから６５．４％及
び１８．４％で、マルトペンタオース乃至マルトヘプタ
オースから約７４乃至７５％及び約２乃至３％であり、
グルコース重合度が５以上のマルトオリゴ糖からは非還
元性糖質を高い生成率で生成し、加水分解物の生成は僅
かであることが判明した。なお、グルコース、マルトー
スからは、新たな糖質を生成しないことが判明した。

【００４９】

【実験２−２分子量】ユー・ケー・レムリが『ネーチ
ャー（Ｎａｔｕｒｅ）』、第２２７巻、第６８０乃至６
８５頁（１９７０年）に報告している方法に準じてＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動したところ、本酵
素は、分子量約６９，０００乃至７９，０００ダルトン
に相当する位置に単一バンドを示した。なお、このとき
の分子量マーカーには、ミオシン（２００，０００ダル
トン）、β−ガラクトシダーゼ（１１６，２５０ダルト
ン）、フォスフォリラーゼＢ（９７，４００ダルト
ン）、血清アルブミン（６６，２００ダルトン）及びオ
ボアルブミン（４５，０００ダルトン）を使用した。

【００５０】

【実験２−３等電点】精製耐熱性非還元性糖質生成酵
素をポリアクリルアミドゲル（２％アンフォライン含
有、ファルマシア・エルケービー社製）を用いる等電点
電気泳動法に供し、泳動後、ゲルのｐＨを測定して本酵
素の等電点を求めたところ、等電点は約５．４乃至６．
４であった。

【００５１】

【実験２−４至適温度】常法により、２０ｍＭ酢酸緩
衝液（ｐＨ５．５）中で６０分間インキュベートする条
件で試験したところ、図１に示すように、本酵素は、７
５℃付近に至適温度を示した。

【００５２】

【実験２−５至適ｐＨ】常法により、ｐＨの相違する
マッキルヴェイン氏緩衝液中、６０℃で６０分間インキ
ュベートする条件で試験したところ、図２に示すよう
に、本酵素は、ｐＨ５．０乃至５．５付近に至適ｐＨを
示した。

【００５３】

【実験２−６温度安定性】常法により、１０ｍＭ燐酸
緩衝液（ｐＨ７．０）中で６０分間インキュベートする
条件で試験したところ、図３に示すように、本酵素は、
８５℃付近まで安定であった。

【００５４】

【実験２−７ｐＨ安定性】常法により、ｐＨの相違す
るマッキルヴェイン氏緩衝液、又は炭酸ナトリウム−炭
酸水素ナトリウム緩衝液中、２５℃で１６時間インキュ
ベートする条件で試験したところ、図４に示すように、
本酵素は、ｐＨ４．５乃至９．５付近まで安定であっ
た。

【００５５】

【実験２−８Ｎ末端アミノ酸配列】実験１の方法で得
られた精製耐熱性非還元性糖質生成酵素標品の一部をそ
れぞれ蒸留水に対して透析した後、蛋白量として約８０
μｇをＮ末端アミノ酸配列分析用の試料とした。Ｎ末端
アミノ酸配列は、アプライド・バイオシステムズ・ジャ
パン販売気相プロテイン・シーケンサ『４７３Ａ型』を
用い、Ｎ末端から１０残基まで分析した。得られたＮ末
端配列を次に示す。

【００５６】

【００５７】

【実験３他のスルフォロブス属微生物由来の耐熱性非
還元性糖質生成酵素の調製】スルフォロブス・アシドカ
ルダリウスＡＴＣＣ３３９０９に代えて、スルフォロ
ブス・アシドカルダリウスＡＴＣＣ４９４２６、スル
フォロブス・ソルファタリカスＡＴＣＣ３５０９１及
びスルフォロブス・ソルファタリカスＡＴＣＣ３５０
９２を用いた以外は、実験１と同様にファーメンターで
４２時間培養した。それぞれの培養液約１７０ｌから菌
体を回収し、超音波処理し、その上清を硫安塩析、透析
し、更にイオン交換カラムクロマトグラフィーと疎水カ
ラムクロマトグラフィーにかけ、部分精製酵素標品を
得、その性質を調べた。結果を表２にまとめた。

【００５８】

【表２】

【００５９】また、これらの部分精製酵素を用いて、実
験２−１の方法に従って、非還元性糖質の生成を調べた
ところ、いずれの酵素もスルフォロブス・アシドカルダ
リウスＡＴＣＣ３３９０９由来の耐熱性非還元性糖質
生成酵素の場合と同様に、グルコース重合度３以上から
選ばれる還元性澱粉部分分解物から末端にトレハロース
構造を有するグルコース重合度３以上から選ばれる非還
元性糖質を生成することが判明した。

【００６０】以下、本発明の非還元性糖質、それを含む
低還元性糖質及びトレハロースの製造方法を実施例Ａ
で、非還元性糖質、それを含む低還元性糖質及び／又は
トレハロースを含有せしめた組成物を実施例Ｂで示す。

【００６１】

【実施例Ａ−１】スルフォロブス・アシドカルダリウス
ＡＴＣＣ３３９０９を実験１の方法に準じて、ファー
メンターで約４２時間培養した。培養後、ＳＦ膜を用い
て菌体を濃縮し、更に遠心分離して菌体を回収した。実
験３の方法に準じ、菌体を超音波処理し、その上清を硫
安塩析、透析し、更にイオン交換カラムクロマトグラフ
ィーと疎水カラムクロマトグラフィーを行い、比活性が
約２０単位／ｍｇの部分精製酵素液（１８．０単位／ｍ
ｌ）を得た。濃度６％の馬鈴薯澱粉乳を加熱糊化させた
後、ｐＨ４．５、温度５０℃に調整し、これにイソアミ
ラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を澱粉グラム
当り２５００単位の割合になるよう加え、２０時間反応
させた。その反応液をｐＨ６．５に調整し、オートクレ
ーブ（１２０℃）を１０分間行い、次いで６０℃に冷却
し、これにノボ社製α−アミラーゼ『ターマミール６０
Ｌ』を澱粉グラム当り３０単位の割合になるよう加え、
２０時間反応させた。その反応液をオートクレーブ（１
２０℃）を２０分間行った後、６５℃に冷却し、ｐＨを
５．５に調整し、これに上記調製の耐熱性非還元性糖質
生成酵素を澱粉グラム当たり１単位の割合になるよう加
え、９６時間反応させた。その反応液を９７℃で３０分
間保った後、冷却し、瀘過して得られる瀘液を、常法に
従って、活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹
脂により脱塩して精製し、更に濃縮して濃度約７０％の
シラップを固形分当たり約９０％で得た。本品は、ＤＥ
２４．６であって、非還元性糖質を固形分当り、α−グ
ルコシルトレハロース１２．０％、α−マルトシルト
レハロース５．５％、α−マルトトリオシルトレハロ
ース２９．９％、α−マルトテトラオシルトレハロー
ス１．５％、及びα−マルトペンタオシルトレハロース
２．２％を含有しており、温和で上品な甘味、適度の
粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良
剤、安定剤、賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、
医薬品など各種組成物に有利に利用できる。

【００６２】

【実施例Ａ−２】実施例Ａ−１の方法で得られた糖液を
原糖液とし、非還元性糖質の含量を高めるため、東京有
機化学工業株式会社製ナトリウム型強酸性カチオン交換
樹脂『ＸＴ−１０１６』（架橋度４％）を用いたカラム
分画を行った。樹脂を内径５．４ｃｍのジャケット付ス
テンレス製カラム４本に充填し、直列につなぎ樹脂層全
長２０ｍとした。カラム内温度を５５℃に維持しつつ、
糖液を樹脂に対して５ｖ／ｖ％加え、これに５５℃の温
水をＳＶ０．１３で流して分画し、グルコース及びマル
トース高含有画分を除去し、非還元性糖質高含有画分を
採取した。更に、精製、濃縮し、真空乾燥し、粉砕し
て、非還元性糖質高含有粉末を固形分当たり約６４％で
得た。本品はＤＥ４．８であって、非還元性糖質を、固
形物当り、α−グルコシルトレハロース１８．２％、
α−マルトシルトレハロース７．９％、α−マルトト
リオシルトレハロース４６．６％、α−マルトテトラ
オシルトレハロース２．３％、及びα−マルトペンタ
オシルトレハロース３．４％を含有しており、実施例
Ａ−１と同様に、温和で上品な甘味、適度の粘度、保湿
性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、
賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各
種組成物に有利に利用できる。

【００６３】

【実施例Ａ−３】３３％とうもろこし澱粉乳に最終濃度
０．１％となるように炭酸カルシウムを加えた後、ｐＨ
６．５に調整し、これにターマミール６０Ｌを澱粉グラ
ム当たり０．２％になるよう加え、９５℃で１５分間反
応させた。その反応液をオートクレーブ（１２０℃）を
１０分間行った後、５５℃に冷却し、これに特開昭６３
−２４０７８３号公報で開示されている株式会社林原生
物化学研究所製マルトテオラオース生成アミラーゼを澱
粉グラム当たり５単位の割合になるように加え、６時間
反応させ、これに上田化学株式会社製α−アミラーゼ
『α−アミラーゼ２Ａ』を澱粉グラム当り３０単位加
え、更に６５℃で４時間反応させた。その反応液をオー
トクレーブ（１２０℃）を１０分間行い、次いで６５℃
に冷却し、ｐＨを５．５に調整した後、これに実施例Ａ
−１の方法で調製した耐熱性非還元性糖質生成酵素を澱
粉グラム当り２単位の割合になるよう加え、４８時間反
応させた。その反応液を９７℃で３０分間保った後、冷
却し、瀘過して得られる瀘液を、常法に従って、活性炭
で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩し
て精製し、更に濃縮して濃度約７０％のシラップを固形
物当り収率約９０％で得た。本品は、ＤＥ１７．１であ
って、非還元性糖質を、固形物当りα−グルコシルトレ
ハロース８．９％、α−マルトシルトレハロース２
９．３％、α−マルトトリオシルトレハロース０．８
％、α−マルトテトラオシルトレハロース０．７％、
及びα−マルトペンタオシルトレハロース０．７％を
含有しており、温和で上品な甘味、適度の粘度、保湿性
を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、賦
形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種
組成物に有利に利用できる。

【００６４】

【実施例Ａ−４】実施例のＡ−３の方法で得られた糖液
を原糖液とし、本液のα−マルトシルトレハロースの含
量を高めるため、分画用樹脂として、ダウケミカル社販
売マグネシウム型強酸性カチオン交換樹脂『ダウエック
ス５０Ｗ×４』を用いた以外は、実施例Ａ−２の方法に
従ってカラムクロマトグラフィーを行い、α−マルトシ
ルトレハロース高含有画分を採取した。更に、精製、濃
縮し、噴霧乾燥して、非還元性糖質高含有粉末を固形物
当たり収率約４１％で得た。本品は、非還元性糖質を固
形物当り、α−グルコシルトレハロース１０．９％、
α−マルトシルトレハロース６１．３％、α−マルト
トリオシルトレハロース１．０％含有しており、その
ＤＥは、２．５を示し、極めて還元性が少なく、実施例
Ａ−３と同様に、温和で上品な甘味、適度の粘度、保湿
性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、
賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各
種組成物に有利に利用できる。

【００６５】

【実施例Ａ−５】松谷化学工業株式会社製澱粉部分分解
物『パインデックス＃４』４０重量部を水６０重量部に
加熱溶解し、この溶液を６５℃、ｐＨ５．５に調整した
後、実施例Ａ−１に方法で調製した耐熱性非還元性糖質
生成酵素を澱粉部分分解物グラム当り１単位の割合にな
るように加えて、９６時間反応させ、次いで９７℃に３
０分間加熱して、酵素を失活させた。本反応液を濃度約
２０％まで希釈し、ナガセ生化学工業株式会社製グルコ
アミラーゼ『グルコチーム』を澱粉部分分解物グラム当
り１０単位加えて１０時間反応させ、次いで加熱して酵
素を失活させた。本溶液を、常法に従って、活性炭で脱
色し、イオン交換樹脂により脱塩し、濃度約６０％に濃
縮した。本糖液中には固形物当り３０．１％のトレハロ
ースを含有していた。分画用樹脂として、オルガノ株式
会社販売ナトリウム型強酸性カチオン交換樹脂『ＣＧ６
０００』を用いた以外は、実施例Ａ−２の方法に従って
カラムクロマトグラフィーを行い、トレハロース高含有
画分を採取した。本高含有液は、固形物当り約９７％の
トレハロースを含有していた。本溶液を濃度約７５％に
濃縮した後、助晶缶にとり、種晶としてトレハロース含
水結晶約２％を加えて徐冷し、晶出率約４５％のマスキ
ットを得た。本マスキットを乾燥塔上のノズルより１５
０ｋｇ／ｃｍ²の高圧にて噴霧した。これと同時に８５
℃の熱風を乾燥塔の上部より４５℃の温風を送りつつ、
該粉末を乾燥塔外に徐々に移動させて、取り出した。こ
の結晶粉末を熟成塔に充填して温風を送りつつ、１０時
間熟成させ、結晶化と乾燥を完了し、トレハロース含水
結晶粉末を得た。本品は、実質的に吸湿性を示さず、取
扱いが容易であり、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、
安定剤、賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬
品など各種組成物に有利に利用できる。

【００６６】

【実施例Ａ−６】スルフォロバス・ソルファタリカス
ＡＴＣＣ３５０９１を実験３の方法に準じて、ファーメ
ンターで約４２時間培養した。培養後、ＳＦ膜を用いて
菌体を濃縮し、更に遠心分離して菌体を回収し、超音波
処理し、その上清を硫安塩析、透析し、更にイオン交換
カラムクロマトグラフィーと疎水カラムクロマトグラフ
ィーを行い、比活性が約１８単位／ｍｇの部分精製酵素
液（１９．０単位／ｍｌ）を得た。３０％とうもろこし
澱粉乳を用いて、実施例Ａ−３の方法に準じて、ターマ
ミール６０Ｌ、次いでマルトテトラオース生成アミラー
ゼ（株式会社林原生物化学研究所製）及びα−アミラー
ゼ２Ａを作用させ、オートクレーブ（１２０℃）処理
し、次いで、６５℃に冷却し、これに上記の方法で調製
した耐熱性非還元性糖質生成酵素を澱粉グラム当たり２
単位になるように加え、６４時間反応させた。次いで、
９７℃に３０分間加熱して酵素を失活させた。本反応液
を、実施例Ａ−５の方法に準じて、グルコチームを作用
させ、脱色、脱塩して、濃度約６０％に濃縮した。本糖
液中には、固形物当たり約２３％のトレハロースを含有
していた。本糖液を実施例Ａ−５の方法に準じて塩型強
酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィ
ーを行い、トレハロース高含有画分を採取した。本高含
有液は、固形物当たり約９５％のトレハロースを含有し
ていた。本溶液を蒸発釜にとり、減圧下で煮詰め、水分
４．０％のシラップとし、助晶機に移し、これに種晶と
して無水結晶トレハロースをシラップ固形分当たり１％
加え、９５℃で５分間撹拌助晶し、次いで、アルミ製バ
ットに取り出し、１００℃で６時間晶出熟成させてブロ
ックを調製した。次いで、本ブロックを切削機にて粉砕
し、流動乾燥して、水分０．３％の無水結晶トレハロー
ス粉末を得た。本品は、食品、医薬品、化粧品、その原
材料、又は加工中間物などの含水物の脱水剤としてのみ
ならず、上品な甘味を有する白色粉末甘味料としても有
利に利用できる。

【００６７】

【実施例Ｂ−１甘味料】実施例Ａ−４の方法で得た非
還元性糖質高含有粉末１重量部に、東洋精糖株式会社販
売α−グリコシルステビオシド『αＧスイート』０．０
１重量部及び味の素株式会社製Ｌ−アスパルチル−Ｌ−
フェニルアラニンメチルエステル『アスパルテーム』
０．０１重量部を均一に混合し、顆粒成型機にかけて、
顆粒状甘味料を得た。本品は、甘味の質が優れ、蔗糖の
約２倍の甘味度を有し、甘味度当たりカロリーは、蔗糖
の約１／２に低下している。本甘味料は、それに配合し
た高甘味度甘味物の分解もなく、安定性に優れており、
低カロリー甘味料として、カロリー摂取を制限している
肥満者、糖尿病者などのための低カロリー飲食物などに
対する甘味付けに好適である。また、本甘味料は、虫歯
誘発菌による酸の生成が少なく、不溶性グルカンの生成
も少ないことより、虫歯を抑制する飲食物などに対する
甘味付けにも好適である。

【００６８】

【実施例Ｂ−２ハードキャンディー】濃度５５％蔗糖
溶液１００重量部に実施例Ａ−３の方法で得た非還元性
糖質含有シラップ３０重量部を加熱混合し、次いで減圧
下で水分２％未満になるまで加熱濃縮し、これにクエン
酸１重量部及び適量のレモン香料と着色料とを混和し、
常法に従って成型し、製品を得た。本品は、歯切れ、呈
味良好で、蔗糖の晶出も起こらない高品質のハードキャ
ンデーである。

【００６９】

【実施例Ｂ−３チューインガム】ガムベース３重量部
を柔らかくなる程度に加熱溶融し、これに蔗糖４重量部
及び実施例Ａ−５の方法で得たトレハロース含水結晶粉
末３重量部とを加え、更に適量の香料と着色料とを混合
し、常法に従って、ロールにより練り合わせ、成形、包
装して製品を得た。本品は、テクスチャー、風味とも良
好なチューインガムである。

【００７０】

【実施例Ｂ−４加糖練乳】原乳１００重量部に実施例
Ａ−１の方法で得た非還元性糖質含有シラップ３重量部
及び蔗糖１重量部を溶解し、プレートヒーターで加熱殺
菌し、次いで濃度７０％に濃縮し、無菌状態で缶詰して
製品を得た。本品は、温和な甘味で、風味もよく、乳幼
児食品、フルーツ、コーヒー、ココア、紅茶などの調味
用に有利に利用できる。

【００７１】

【実施例Ｂ−５乳酸菌飲料】脱脂粉乳１７５重量部、
実施例Ａ−２の方法で得た非還元性糖質高含有粉末８０
重量部及び特開平４−２８１７９５号公報で開示されて
いるラクトスクロース高含有粉末５０重量部を水１，２
００重量部に溶解し、６５℃で３０分間殺菌し、４０℃
に冷却後、これに、常法に従って、乳酸菌のスターター
を３０重量部植菌し、３７℃で８時間培養して乳酸菌飲
料を得た。本品は、風味良好な乳酸菌飲料である。ま
た、本品は、オリゴ糖を含有し、乳酸菌を安定に保持す
るだけでなく、ビフィズス菌増殖促進作用をも有する。

【００７２】

【実施例Ｂ−６粉末ジュース】噴霧乾燥により製造し
たオレンジ果汁粉末３３重量部に対して、実施例Ａ−２
の方法で得た非還元性糖質高含有粉末５０重量部、蔗糖
１０重量部、無水クエン酸０．６５重量部、リンゴ酸
０．１重量部、Ｌ−アスコルビン酸０．１重量部、クエ
ン酸ソーダ０．１重量部、プルラン０．５重量部、粉末
香料適量をよく混合撹拌し、粉砕し微粉末にしてこれを
流動層造粒機に仕込み、排風温度４０℃、風量１５０ｍ
³とし、これに、実施例Ａ−１の方法で得た非還元性糖
質含有シラップをバインダーとしてスプレーし、３０分
間造粒し、計量、包装して製品を得た。本品は、果汁含
有率約３０％の粉末ジュースである。また、本品は異
味、異臭がなく、長期に安定であった。

【００７３】

【実施例Ｂ−７カスタードクリーム】コーンスターチ
１００重量部、実施例Ａ−３の方法で得た非還元性糖質
含有シラップ１００重量部、マルトース８０重量部、蔗
糖２０重量部及び食塩１重量部を充分に混合し、鶏卵２
８０重量部を加えて撹拌し、これに沸騰した牛乳１，０
００重量部を徐々に加え、更に、これを火にかけて撹拌
を続け、コーンスターチが完全に糊化して全体が半透明
になった時に火を止め、これを冷却して適量のバニラ香
料を加え、計量、充填、包装して製品を得た。本品は、
なめらかな光沢を有し、温和な甘味で美味である。

【００７４】

【実施例Ｂ−８あん】原料あずき１０重量部に、常法
に従って、水を加えて煮沸し、渋切り、あく抜きして、
水溶性夾雑物を除去して、あずきつぶあん約２１重量部
を得た。この生あんに、蔗糖１４重量部、実施例Ａ−４
の方法で得た非還元性糖質高含有シラップ５重量部及び
水４重量部を加えて煮沸し、これに少量のサラダオイル
を加えてつぶあんをこわさないように練り上げ、製品の
あんを約３５重量部得た。本品は、色焼けもなく、舌ざ
わりもよく、風味良好で、あんパン、まんじゅう、だん
ご、もなか、氷菓などのあん材料として好適である。

【００７５】

【実施例Ｂ−９パン】小麦粉１００重量部、イースト
２重量部、砂糖５重量部、実施例Ａ−２の方法で得た非
還元性糖質高含有粉末１重量部及び無機フード０．１重
量部を、常法に従って、水でこね、中種を２６℃で２時
間発酵させ、その後３０分間熟成し、焼き上げた。本品
は、色相、すだちとも良好で適度な弾力、温和な甘味を
有する高品質のパンである。

【００７６】

【実施例Ｂ−１０ハム】豚もも肉１，０００重量部に
食塩１５重量部及び硝酸カリウム３重量部を均一にすり
込んで、冷室に１昼夜堆積する。これを水５００重量
部、食塩１００重量部、硝酸カリウム３重量部、実施例
Ａ−４の方法で得た非還元性糖質高含有粉末４０重量部
及び香辛料からなる塩漬液に冷室で７日間漬け込み、次
いで、常法に従って、冷水で洗浄し、ひもで巻き締め、
燻煙し、クッキングし、冷却包装して製品を得た。本品
は、色合いもよく、風味良好な高品質のハムである。

【００７７】

【実施例Ｂ−１１粉末ペプチド】不二製油株式会社製
４０％食品用大豆ペプチド溶液『ハイニュートＳ』１重
量部に、実施例Ａ−５の方法で得たトレハロース含水結
晶粉末２重量部を混合し、プラスチック製バットに入
れ、５０℃で減圧乾燥し、粉砕して粉末ペプチドを得
た。本品は、風味良好で、プレミックス、冷菓などの製
菓用材料としてのみならず、経口流動食、経管流動食な
どの離乳食、治療用栄養剤などとしても有利に利用でき
る。

【００７８】

【実施例Ｂ−１２粉末卵黄】生卵から調製した卵黄を
プレート式加熱殺菌機で６０乃至６４℃で殺菌し、得ら
れる液状卵黄１重量部に対して、実施例Ａ−６の方法で
得た無水結晶トレハロース粉末４重量部の割合で混合し
た後バットに移し、一夜放置して、トレハロース含水結
晶に変換させてブロックを調製した。本ブロックを切削
機にかけて粉末化し、粉末卵黄を得た。本品は、プレミ
ックス、冷菓、乳化剤などの製菓用材料としてのみなら
ず、経口流動食、経管流動食などの離乳食、治療用栄養
剤などとしても有利に利用できる。また、美肌剤、育毛
剤などとしても有利に利用できる。

【００７９】

【実施例Ｂ−１３化粧用クリーム】モノステアリン酸
ポリオキシエチレングリコール２重量部、自己乳化型モ
ノステアリン酸グリセリン５重量部、実施例Ａ−２の方
法で得た非還元性糖質高含有粉末２重量部、α−グリコ
シルルチン１重量部、流動パラフィン１重量部、トリ
オクタン酸グリセリン１０重量部及び防腐剤の適量を常
法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸２重量部、１，
３−ブチレングリコール５重量部及び精製水６６重量部
を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量
を加えて撹拌混合しクリームを製造した。本品は、抗酸
化性を有し、安定性が高く、高品質の日焼け止め、美肌
剤、色白剤などとして有利に利用できる。

【００８０】

【実施例Ｂ−１４固体製剤】ヒト天然型インターフェ
ロン−α標品（株式会社林原生物化学研究所製）を、常
法に従って、固定化抗ヒトインターフェロン−α抗体カ
ラムにかけ、該標品に含まれるヒト天然型インターフェ
ロン−αを吸着させ、安定剤である牛血清アルブミンを
素通りさせて除去し、次いで、ｐＨを変化させて、ヒト
天然型インターフェロン−αを実施例Ａ−５の方法で得
たトレハロース含水結晶粉末を５％含有する生理食塩水
を用いて溶出した。本液を精密濾過し、約２０倍量の株
式会社林原商事販売無水結晶マルトース粉末『ファイン
トース』に加えて脱水、粉末化し、これを打錠機にて打
錠し、１錠（約２００ｍｇ）当たりヒト天然型インター
フェロン−αを約１５０単位含有する錠剤を得た。本品
は、舌下錠などとして、一日当たり、大人１乃至１０錠
程度が経口的に投与され、ウイルス性疾患、アレルギー
性疾患、リューマチ、糖尿病、悪性腫瘍などの治療に有
利に利用できる。とりわけ、近年、患者数の急増してい
るエイズ、肝炎などの治療剤として有利に利用できる。
本品は、トレハロースと共にマルトースが安定剤として
作用し、室温でも放置してもその活性を長期間よく維持
する。

【００８１】

【実施例Ｂ−１５糖衣錠】重量１５０ｍｇの素錠を芯
剤とし、これに実施例Ａ−５の方法で得たトレハロース
含水結晶粉末４０重量部、プルラン（平均分子量２０
万）２重量部、水３０重量部、タルク２５重量部及び酸
化チタン３重量部からなる下掛け液を用いて錠剤重量が
約２３０ｍｇになるまで糖衣し、次いで、同じトレハロ
ース含水結晶粉末６５重量部、プルラン１重量部及び水
３４重量部からなる上掛け液を用いて、糖衣し、更に、
ロウ液で艶出しして光沢の在る外観の優れた糖衣錠を得
た。本品は、耐衝撃性にも優れており、高品質を長期間
維持する。

【００８２】

【実施例Ｂ−１６流動食用固体製剤】実施例Ａ−５の
方法で製造したトレハロース含水結晶粉末５００重量
部、粉末卵黄２７０重量部、脱脂粉乳２０９重量部、塩
化ナトリウム４．４重量部、塩化カリウム１．８重量
部、硫酸マグネシウム４重量部、チアミン０．０１重量
部、アスコルビン酸ナトリウム０．１重量部、ビタミン
Ｅアセテート０．６重量部及びニコチン酸アミド０．０
４重量部からなる配合物を調製し、この配合物２５グラ
ムずつ防湿性ラミネート小袋に充填し、ヒートシールし
て製品を得た。本品は、１袋分を約１５０乃至３００ｍ
ｌの水に溶解して流動食とし、経口的、又は鼻腔、胃、
腸などへ経管的使用方法により利用され、生体へのエネ
ルギー補給用に有利に利用できる。

【００８３】

【実施例Ｂ−１７外傷治療用膏薬】実施例Ａ−５の方
法で製造したトレハロース含水結晶粉末２００重量部及
びマルトース３００重量部に、ヨウ素３重量部を溶解し
たメタノール５０重量部を加え混合し、更に１０ｗ／ｖ
％プルラン水溶液２００重量部を加えて混合し、適度の
延び、付着性を示す外傷治療用膏薬を得た。本品は、ヨ
ウ素による殺菌作用のみならず、トレハロースによる細
胞へのエネルギー補給剤としても作用することから、治
癒期間が短縮され、創面もきれいに治る。

【００８４】

【発明の効果】上記から明らかなように、本発明の新規
耐熱性非還元性糖質生成酵素は、５５℃を越える温度で
酵素反応が容易に行えるため、微生物汚染を懸念するこ
となく、澱粉部分分解物を同じグルコース重合度の非還
元性糖質に高収率で変換する。その非還元性糖質の分
離、精製も容易であり、このようにして得られる非還元
性糖質、これを含む低還元性糖質及びこれから製造され
るトレハロースは安定性に優れ、良質で上品な甘味を有
している。非還元性糖質、これを含む低還元性糖質及び
トレハロースは甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定
剤、賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品な
ど各種組成物に有利に利用できる。

【００８５】従って、本発明の確立は、安価で無限の資
源である澱粉に由来する澱粉部分分解物から、従来、望
むべくして容易に得られなかった末端にトレハロース構
造を有する非還元性糖質、これを含む低還元性糖質、及
びこれから容易に製造されるトレハロースを、工業的に
大量かつ安価に供給できる全く新しい道を拓くこととな
り、それが与える影響の大きさは、食品、化粧品、医薬
品分野は勿論のこと、農水畜産業、化学工業にも及び、
これら産業界に与える工業的意義は計り知れないものが
ある。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の耐熱性非還元性糖質生成酵素の酵素活
性に及ぼす温度の影響を示す図である。

【図２】本発明の耐熱性非還元性糖質生成酵素の酵素活
性に及ぼすｐＨの影響を示す図である。

【図３】本発明の耐熱性非還元性糖質生成酵素の安定性
に及ぼす温度の影響を示す図である。

【図４】本発明の耐熱性非還元性糖質生成酵素の安定性
に及ぼすｐＨの影響を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ２３Ｇ 3/00 １０１１０６ 3/30 Ａ２３Ｌ 1/19 1/236 Ａ 1/305 1/31 Ａ 1/32 ＡＤ 2/39 Ａ６１Ｋ 7/00 ＪＦ 31/70 Ｃ０７Ｈ 1/00 1/08 3/04 3/06 Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｚ 7433−4ＣＣ１２Ｐ 19/14 Ｚ 7432−4Ｂ 19/16 7432−4Ｂ 19/20 7432−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 9/24 Ｃ１２Ｒ 1:01）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】還元性澱粉部分分解物から末端にトレハ
ロース構造を有する非還元性糖質を生成する耐熱性非還
元性糖質生成酵素。
【請求項２】還元性澱粉部分分解物が、グルコース重
合度３以上から選ばれる１種又は２種以上の還元性澱粉
部分分解物であり、非還元性糖質が、末端にトレハロー
ス構造を有する非還元性糖質であることを特徴とする請
求項１記載の耐熱性非還元性糖質生成酵素。
【請求項３】耐熱性が、ｐＨ７．０、６０分間保持の
条件で、８５℃付近まで安定であることを特徴とする請
求項１又は２記載の耐熱性非還元性糖質生成酵素。
【請求項４】耐熱性非還元性糖質生成酵素が微生物由
来の酵素であることを特徴とする請求項１、２又は３記
載の耐熱性非還元性糖質生成酵素。
【請求項５】微生物が、スルフォロブス属に属する微
生物である請求項４記載の耐熱性非還元性糖質生成酵
素。
【請求項６】下記の理化学的性質を有する耐熱性非還
元性糖質生成酵素。（１）作用グルコース重合度３以上からから選ばれる１種又は２種
以上の還元性澱粉部分分解物であり、非還元性糖質が、
末端にトレハロース構造を有する非還元性糖質を生成す
る。（２）分子量ＳＤＳ−ゲル電気泳動法により、約６９，０００乃至７
９，０００ダルトン。（３）等電点アンフォライン含有電気泳動法により、ｐＩ約５．４乃
至６．４。（４）至適温度ｐＨ５．５、６０分間反応で、７５℃付近。（５）至適ｐＨ６０℃、６０分間反応で、ｐＨ５．０乃至５．５付近。（６）温度安定性ｐＨ７．０、６０分間保持で、８５℃付近まで安定。（７）ｐＨ安定性２５℃、１６時間保持で、ｐＨ約４．０乃至９．５。
【請求項７】還元性澱粉部分分解物から末端にトレハ
ロース構造を有する非還元性糖質を生成する耐熱性非還
元性糖質生成酵素産生能を有する微生物を、栄養培地に
培養して、得られる培養物から該耐熱性非還元性糖質生
成酵素を採取することを特徴とする還元性澱粉部分分解
物から末端にトレハロース構造を有する非還元性糖質を
生成する耐熱性非還元性糖質生成酵素の製造方法。
【請求項８】微生物が、スルフォロブス属に属する微
生物である請求項７記載の耐熱性非還元性糖質生成酵素
の製造方法。
【請求項９】グルコース重合度３以上から選ばれる１
種又は２種以上の還元性澱粉部分分解物から末端にトレ
ハロース構造を有する非還元性糖質を生成する耐熱性非
還元性糖質生成酵素産生能を有する微生物を、栄養培地
に培養して、得られる培養物から該耐熱性非還元性糖質
生成酵素を採取することを特徴とするグルコース重合度
３以上から選ばれる１種又は２種以上の還元性澱粉部分
分解物から末端にトレハロース構造を有する非還元性糖
質を生成する耐熱性非還元性糖質生成酵素の製造方法。
【請求項１０】グルコース重合度３以上から選ばれる
１種又は２種以上の還元性澱粉部分分解物から末端にト
レハロース構造を有する非還元性糖質を生成する耐熱性
非還元性糖質生成酵素を作用させ、得られる末端にトレ
ハロース構造を有する非還元性糖質、又はこれを含む低
還元性糖質。
【請求項１１】澱粉を部分的に加水分解して得られる
グルコース重合度３以上から選ばれる１種又は２種以上
の還元性澱粉部分分解物を含有する溶液に、グルコース
重合度３以上から選ばれる１種又は２種以上の還元性澱
粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有する非還
元性糖質を生成する耐熱性非還元性糖質生成酵素を作用
させ、得られる末端にトレハロース構造を有する非還元
性糖質、又はこれを含む低還元性糖質。
【請求項１２】グルコース重合度３以上から選ばれる
１種又は２種以上の還元性澱粉部分分解物を含有する溶
液に、グルコース重合度３以上の１種又は２種以上の還
元性澱粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有す
る非還元性糖質を生成する耐熱性非還元性糖質生成酵素
を作用させ、末端にトレハロース構造を有する非還元性
糖質及び夾雑糖質含有溶液とし、これを強酸性カチオン
交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにかけ、得
られる含量を向上させた末端にトレハロース構造を有す
る非還元性糖質。
【請求項１３】グルコース重合度３以上から選ばれる
１種又は２種以上の還元性澱粉部分分解物を含有する溶
液に、グルコース重合度３以上の１種又は２種以上の還
元性澱粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有す
る非還元性糖質を生成する耐熱性非還元性糖質生成酵素
を作用させ、得られる末端にトレハロース構造を有する
非還元性糖質、又はこれを含む低還元性糖質を含有せし
めた組成物。
【請求項１４】組成物が、飲食物、化粧品又は医薬品
である請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】グルコース重合度３以上から選ばれる
１種又は２種以上の還元性澱粉部分分解物を含有する溶
液に、グルコース重合度３以上の１種又は２種以上の還
元性澱粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有す
る非還元性糖質を生成する耐熱性非還元性糖質生成酵素
を作用させ、次いでグルコアミラーゼ又はα−グルコシ
ダーゼを作用させ、得られるトレハロース。
【請求項１６】トレハロースが、含水結晶又は無水結
晶である請求項１５記載のトレハロース。
【請求項１７】グルコース重合度３以上から選ばれる
１種又は２種以上の還元性澱粉部分分解物を含有する溶
液に、グルコース重合度３以上の１種又は２種以上の還
元性澱粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有す
る非還元性糖質を生成する耐熱性非還元性糖質生成酵素
を作用させ、次いで、グルコアミラーゼ又はα−グルコ
シダーゼを作用させ、トレハロース及び夾雑糖質含有溶
液とし、これを強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラム
クロマトグラフィーにかけ、得られる含量を向上させた
トレハロース。
【請求項１８】グルコース重合度３以上から選ばれる
１種又は２種以上の還元性澱粉部分分解物を含有する溶
液に、グルコース重合度３以上の１種又は２種以上の還
元性澱粉部分分解物から末端にトレハロース構造を有す
る非還元性糖質を生成する耐熱性非還元性糖質生成酵素
を作用させ、次いで、グルコアミラーゼ又はα−グルコ
シダーゼを作用させ、得られるトレハロースを含有せし
めた組成物。
【請求項１９】組成物が、飲食物、化粧品又は医薬品
である請求項１８記載の組成物。