JPH0868756A - 顕微鏡の落射蛍光照明装置 - Google Patents
顕微鏡の落射蛍光照明装置Info
- Publication number
- JPH0868756A JPH0868756A JP6228818A JP22881894A JPH0868756A JP H0868756 A JPH0868756 A JP H0868756A JP 6228818 A JP6228818 A JP 6228818A JP 22881894 A JP22881894 A JP 22881894A JP H0868756 A JPH0868756 A JP H0868756A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- light
- epi
- destructive
- field stop
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 観察視野領域のうちの一部の領域のみにケー
ジド化合物を破壊するための破壊光を照射することので
きる、顕微鏡の落射蛍光照明装置を提供すること。 【構成】 本発明においては、落射照明用の励起光を標
本に照射するための励起光照射光学系と、前記標本に含
まれたケージド化合物を破壊するための破壊光を前記標
本に照射するための破壊光照射光学系とを備えた、顕微
鏡の落射蛍光照明装置において、前記破壊光照射光学系
は、前記破壊光を発するための光源と、該光源からの光
を前記標本の観察視野領域内に集光するための集光レン
ズ手段と、前記光源と前記集光手段との間に位置決めさ
れ前記標本上における前記破壊光の照射領域を規定する
ための視野絞りとを備えている。
ジド化合物を破壊するための破壊光を照射することので
きる、顕微鏡の落射蛍光照明装置を提供すること。 【構成】 本発明においては、落射照明用の励起光を標
本に照射するための励起光照射光学系と、前記標本に含
まれたケージド化合物を破壊するための破壊光を前記標
本に照射するための破壊光照射光学系とを備えた、顕微
鏡の落射蛍光照明装置において、前記破壊光照射光学系
は、前記破壊光を発するための光源と、該光源からの光
を前記標本の観察視野領域内に集光するための集光レン
ズ手段と、前記光源と前記集光手段との間に位置決めさ
れ前記標本上における前記破壊光の照射領域を規定する
ための視野絞りとを備えている。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、顕微鏡の落射蛍光照明
装置に関する。
装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】顕微鏡の観察方法として、水銀ランプ等
の光源からの短い波長の励起光を標本上の観察視野領域
に照明し、標本から発する長い波長の蛍光を観察する落
射蛍光法がある。具体的には、対物レンズから拡大像に
至る観察光学系の平行光束光路中に配置されたダイクロ
イックミラーによって水銀ランプ等からの短い波長の励
起光を反射し、反射光を対物レンズを介して標本に照明
する。この落射蛍光法の一方法として、ケージド化合物
を用いたケージドコンパウンド法が知られている。
の光源からの短い波長の励起光を標本上の観察視野領域
に照明し、標本から発する長い波長の蛍光を観察する落
射蛍光法がある。具体的には、対物レンズから拡大像に
至る観察光学系の平行光束光路中に配置されたダイクロ
イックミラーによって水銀ランプ等からの短い波長の励
起光を反射し、反射光を対物レンズを介して標本に照明
する。この落射蛍光法の一方法として、ケージド化合物
を用いたケージドコンパウンド法が知られている。
【０００３】以下、ケージドコンパウンド法の原理につ
いて説明する。一般に、生体中の細胞の働きは、カルシ
ウムによって制御されると考えられている。そして、ケ
ージド化合物は、たとえばこのカルシウム分子が他の分
子によってあたかもかごの中に取り込まれた（ケージ
ド）ようになっている。このケージド化合物は、強力な
光エネルギによって破壊されカルシウムを放出する。こ
の瞬間、生体はカルシウムによって運動を引き起こす。
ケージドコンパウンド法は、このときの細胞の動きを捉
えようとするものである。
いて説明する。一般に、生体中の細胞の働きは、カルシ
ウムによって制御されると考えられている。そして、ケ
ージド化合物は、たとえばこのカルシウム分子が他の分
子によってあたかもかごの中に取り込まれた（ケージ
ド）ようになっている。このケージド化合物は、強力な
光エネルギによって破壊されカルシウムを放出する。こ
の瞬間、生体はカルシウムによって運動を引き起こす。
ケージドコンパウンド法は、このときの細胞の動きを捉
えようとするものである。
【０００４】ケージド化合物が破壊されて放出されるカ
ルシウムは特異的な蛍光を発するので、カルシウムの動
きを観察するために落射蛍光照明装置を用いる。この場
合、ケージド化合物を破壊するための光源が必要であ
る。落射蛍光法とケージド化合物とを組み合わせた方法
が、ケージドコンパウンド法である。なお、ケージドコ
ンパウンド法に用いる化合物は、カルシウムを放出する
ケージド化合物に限定されるものではなく、ヌクレオチ
ド、神経伝達物質、蛍光色素、ルシフェリン等を放出す
るケージド化合物を用いてもよい。
ルシウムは特異的な蛍光を発するので、カルシウムの動
きを観察するために落射蛍光照明装置を用いる。この場
合、ケージド化合物を破壊するための光源が必要であ
る。落射蛍光法とケージド化合物とを組み合わせた方法
が、ケージドコンパウンド法である。なお、ケージドコ
ンパウンド法に用いる化合物は、カルシウムを放出する
ケージド化合物に限定されるものではなく、ヌクレオチ
ド、神経伝達物質、蛍光色素、ルシフェリン等を放出す
るケージド化合物を用いてもよい。
【０００５】ケージドコンパウンド法を用いた従来の顕
微鏡の落射蛍光照明装置では、ケージド化合物を破壊す
るための強力な光すなわち破壊光を標本に照射する必要
がある。一般的には、たとえばキセノン光源に高圧を印
加することによって破壊光を得ることができる。こうし
て得られた破壊光は、光ファイバー等のライトガイドを
介して標本全体に直接照射される。
微鏡の落射蛍光照明装置では、ケージド化合物を破壊す
るための強力な光すなわち破壊光を標本に照射する必要
がある。一般的には、たとえばキセノン光源に高圧を印
加することによって破壊光を得ることができる。こうし
て得られた破壊光は、光ファイバー等のライトガイドを
介して標本全体に直接照射される。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】上述のような従来の顕
微鏡の落射蛍光照明装置では、光ファイバーなどを介し
て破壊光を標本全体に直接照明している。このため、破
壊光の照射領域を観察視野領域のうちの特定の領域に小
さく絞り込むことができない。その結果、観察の際に細
胞の特定部分での反応のみを特に観察したいという要求
に答えることができないという不都合があった。
微鏡の落射蛍光照明装置では、光ファイバーなどを介し
て破壊光を標本全体に直接照明している。このため、破
壊光の照射領域を観察視野領域のうちの特定の領域に小
さく絞り込むことができない。その結果、観察の際に細
胞の特定部分での反応のみを特に観察したいという要求
に答えることができないという不都合があった。
【０００７】また、従来の顕微鏡の落射蛍光照明装置で
は、標本全体に破壊光を直接照明しているので光が分散
してしまう。このため、ケージド化合物を破壊するのに
十分な強さの破壊光を得ることが困難であるという不都
合があった。本発明は、前述の課題に鑑みてなされたも
のであり、観察視野領域のうちの一部の領域のみにケー
ジド化合物を破壊するための破壊光を照射することので
きる、顕微鏡の落射蛍光照明装置を提供することを目的
とする。
は、標本全体に破壊光を直接照明しているので光が分散
してしまう。このため、ケージド化合物を破壊するのに
十分な強さの破壊光を得ることが困難であるという不都
合があった。本発明は、前述の課題に鑑みてなされたも
のであり、観察視野領域のうちの一部の領域のみにケー
ジド化合物を破壊するための破壊光を照射することので
きる、顕微鏡の落射蛍光照明装置を提供することを目的
とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するため
に、本発明においては、落射照明用の励起光を標本に照
射するための励起光照射光学系と、前記標本に含まれた
ケージド化合物を破壊するための破壊光を前記標本に照
射するための破壊光照射光学系とを備えた、顕微鏡の落
射蛍光照明装置において、前記破壊光照射光学系は、前
記破壊光を発するための光源と、該光源からの光を前記
標本の観察視野領域内に集光するための集光レンズ手段
と、前記光源と前記集光手段との間に位置決めされ前記
標本上における前記破壊光の照射領域を規定するための
視野絞りとを備えていることを特徴とする落射蛍光照明
装置を提供する。
に、本発明においては、落射照明用の励起光を標本に照
射するための励起光照射光学系と、前記標本に含まれた
ケージド化合物を破壊するための破壊光を前記標本に照
射するための破壊光照射光学系とを備えた、顕微鏡の落
射蛍光照明装置において、前記破壊光照射光学系は、前
記破壊光を発するための光源と、該光源からの光を前記
標本の観察視野領域内に集光するための集光レンズ手段
と、前記光源と前記集光手段との間に位置決めされ前記
標本上における前記破壊光の照射領域を規定するための
視野絞りとを備えていることを特徴とする落射蛍光照明
装置を提供する。
【０００９】本発明の好ましい態様によれば、前記視野
絞りは、絞り込み可能である。また、前記視野絞りは、
光軸に垂直な面内において移動可能であることが好まし
い。さらに、前記光源は前記視野絞りの近傍に配置さ
れ、前記光軸に垂直な面内において前記視野絞りと一体
的に移動可能であることが好ましい。
絞りは、絞り込み可能である。また、前記視野絞りは、
光軸に垂直な面内において移動可能であることが好まし
い。さらに、前記光源は前記視野絞りの近傍に配置さ
れ、前記光軸に垂直な面内において前記視野絞りと一体
的に移動可能であることが好ましい。
【００１０】
【作用】本発明の落射蛍光照明装置では、標本に含まれ
たケージド化合物を破壊するための破壊光を視野絞りを
介して集光レンズ手段によって標本上に集光する。した
がって、落射照明用の励起光が照射される標本の観察視
野領域のうちの一部の領域のみに破壊光を照射して、標
本の一部の細胞の反応を観察することができる。
たケージド化合物を破壊するための破壊光を視野絞りを
介して集光レンズ手段によって標本上に集光する。した
がって、落射照明用の励起光が照射される標本の観察視
野領域のうちの一部の領域のみに破壊光を照射して、標
本の一部の細胞の反応を観察することができる。
【００１１】なお、視野絞りを絞り込み可能にすること
により、所望の大きさの領域に所望の強さの破壊光を照
射することができる。また、視野絞りを光軸に垂直な面
内において二次元的に移動可能にすることにより、観察
視野領域の任意の領域に順次破壊光を照射しながら、観
察視野領域全体に亘って蛍光観察を行うことができる。
により、所望の大きさの領域に所望の強さの破壊光を照
射することができる。また、視野絞りを光軸に垂直な面
内において二次元的に移動可能にすることにより、観察
視野領域の任意の領域に順次破壊光を照射しながら、観
察視野領域全体に亘って蛍光観察を行うことができる。
【００１２】
【実施例】以下、本発明の実施例を、添付図面に基づい
て説明する。図１は、本発明の第１実施例にかかる顕微
鏡の落射蛍光照明装置の構成を示す図である。図示の顕
微鏡は倒立型の顕微鏡であり、観察すべき標本１の図中
下方に落射照明用対物レンズ２が配置してあり、対物レ
ンズ２の下方から落射照明が施されるようになってい
る。落射照明用の光源１１からの光束は、コレクタレン
ズ１２によって集光されて一旦結像した後、レンズ１５
および励起フィルタＥＸ１を介してダイクロイックミラ
ーＤＭに入射する。
て説明する。図１は、本発明の第１実施例にかかる顕微
鏡の落射蛍光照明装置の構成を示す図である。図示の顕
微鏡は倒立型の顕微鏡であり、観察すべき標本１の図中
下方に落射照明用対物レンズ２が配置してあり、対物レ
ンズ２の下方から落射照明が施されるようになってい
る。落射照明用の光源１１からの光束は、コレクタレン
ズ１２によって集光されて一旦結像した後、レンズ１５
および励起フィルタＥＸ１を介してダイクロイックミラ
ーＤＭに入射する。
【００１３】なお、コレクタレンズ１２とレンズ１５と
の間の結像位置には視野絞りＦＳ１が配置されている。
また、ダイクロイックミラーＤＭは、顕微鏡の観察光学
系のリレーレンズ系３中（平行光路中）に配置されてい
る。ダイクロイックミラーＤＭにより図中上方に反射さ
れた落射照明用光束は、対物レンズ２を介して標本１の
観察視野領域を照明する。標本１と視野絞りＦＳ１とは
共役の位置にあり、観察視野領域は視野絞りＦＳ１の開
口部の形状および大きさに依存して規定される。
の間の結像位置には視野絞りＦＳ１が配置されている。
また、ダイクロイックミラーＤＭは、顕微鏡の観察光学
系のリレーレンズ系３中（平行光路中）に配置されてい
る。ダイクロイックミラーＤＭにより図中上方に反射さ
れた落射照明用光束は、対物レンズ２を介して標本１の
観察視野領域を照明する。標本１と視野絞りＦＳ１とは
共役の位置にあり、観察視野領域は視野絞りＦＳ１の開
口部の形状および大きさに依存して規定される。
【００１４】なお、本実施例ではＢ励起法を用いてお
り、励起フィルタＥＸ１は波長が４３０〜４８０ｎｍの
光すなわち励起光を透過する特性を有する。一方、ダイ
クロイックミラーＤＭは波長が３３０〜５００ｎｍの光
を反射し、落射照明された標本で発生する波長が５００
ｎｍ以上の光だけを透過する特性を有する。このよう
に、光源１１、コレクタレンズ１２、視野絞りＦＳ１、
レンズ１５、励起フィルタＥＸ１、ダイクロイックミラ
ーＤＭ、および対物レンズ２は、落射蛍光照明装置の励
起光照射光学系を構成している。
り、励起フィルタＥＸ１は波長が４３０〜４８０ｎｍの
光すなわち励起光を透過する特性を有する。一方、ダイ
クロイックミラーＤＭは波長が３３０〜５００ｎｍの光
を反射し、落射照明された標本で発生する波長が５００
ｎｍ以上の光だけを透過する特性を有する。このよう
に、光源１１、コレクタレンズ１２、視野絞りＦＳ１、
レンズ１５、励起フィルタＥＸ１、ダイクロイックミラ
ーＤＭ、および対物レンズ２は、落射蛍光照明装置の励
起光照射光学系を構成している。
【００１５】一方、ケージド化合物を破壊するための破
壊光照射用光源１６は、たとえば高圧電源（不図示）に
接続されたキセノン光源であってフラッシュ光を発す
る。キセノン光源１６からの光は、コレクタレンズ１７
によって集光され光ファイバ１８の入力端１８ａに結像
する。ファイバ１８を伝搬した光は射出端１８ｂに達
し、二次光源となって射出される。射出端１８ｂからの
発散光は、標本１の図中上方に配置された対物レンズ２
０を介して標本１上を照明し、標本に含まれたケージド
化合物を破壊する。
壊光照射用光源１６は、たとえば高圧電源（不図示）に
接続されたキセノン光源であってフラッシュ光を発す
る。キセノン光源１６からの光は、コレクタレンズ１７
によって集光され光ファイバ１８の入力端１８ａに結像
する。ファイバ１８を伝搬した光は射出端１８ｂに達
し、二次光源となって射出される。射出端１８ｂからの
発散光は、標本１の図中上方に配置された対物レンズ２
０を介して標本１上を照明し、標本に含まれたケージド
化合物を破壊する。
【００１６】なお、ファイバ１８の射出端１８ｂの近傍
には、対物レンズ２０に対して標本１と共役な位置に視
野絞りＦＳ２が配置されている。視野絞りＦＳ２は、開
口部を絞り込むことが可能であり、且つ光軸と直交する
面内において二次元的に移動可能である。こうして、標
本１上において破壊光の照射領域は、視野絞りＦＳ２に
よって規定されるようになっている。
には、対物レンズ２０に対して標本１と共役な位置に視
野絞りＦＳ２が配置されている。視野絞りＦＳ２は、開
口部を絞り込むことが可能であり、且つ光軸と直交する
面内において二次元的に移動可能である。こうして、標
本１上において破壊光の照射領域は、視野絞りＦＳ２に
よって規定されるようになっている。
【００１７】また、視野絞りＦＳ２と対物レンズ２０と
の間には、励起フィルタＥＸ２が配置されている。励起
フィルタＥＸ２は、ケージド化合物を破壊するための紫
外光として波長が３３０〜３８０ｎｍの光を透過する特
性を有する。このように、キセノン光源１６、コレクタ
レンズ１７、ファイバ１８、視野絞りＦＳ２、励起フィ
ルタＥＸ２および対物レンズ２０は、落射蛍光照明装置
の破壊光照射光学系を構成している。
の間には、励起フィルタＥＸ２が配置されている。励起
フィルタＥＸ２は、ケージド化合物を破壊するための紫
外光として波長が３３０〜３８０ｎｍの光を透過する特
性を有する。このように、キセノン光源１６、コレクタ
レンズ１７、ファイバ１８、視野絞りＦＳ２、励起フィ
ルタＥＸ２および対物レンズ２０は、落射蛍光照明装置
の破壊光照射光学系を構成している。
【００１８】こうして、光源１１からの励起光または光
源１６からの破壊光が照射された標本で発生した波長５
００ｎｍ以上の蛍光は、対物レンズ２によって集光され
た後、リレーレンズ系３中のダイクロイックミラーＤＭ
を透過する。ここで、５２０ｎｍ以上の波長を有する光
を透過する吸収フィルタＢＡを介して観察に有害な光が
除去された後、標本からの蛍光はミラー４に入射する。
ミラー４において図中左斜め上方に反射された光は、拡
大像５を形成する。
源１６からの破壊光が照射された標本で発生した波長５
００ｎｍ以上の蛍光は、対物レンズ２によって集光され
た後、リレーレンズ系３中のダイクロイックミラーＤＭ
を透過する。ここで、５２０ｎｍ以上の波長を有する光
を透過する吸収フィルタＢＡを介して観察に有害な光が
除去された後、標本からの蛍光はミラー４に入射する。
ミラー４において図中左斜め上方に反射された光は、拡
大像５を形成する。
【００１９】拡大像５からの光は、リレーレンズ系６お
よびプリズム７を介して再結像し、像８が形成される。
像８は、接眼レンズ９を介して観察者の肉眼１０によっ
て観察される。このように、対物レンズ２、リレーレン
ズ系３、ミラー４、リレーレンズ系６、プリズム７およ
び接眼レンズ９は、顕微鏡の観察光学系を構成してい
る。
よびプリズム７を介して再結像し、像８が形成される。
像８は、接眼レンズ９を介して観察者の肉眼１０によっ
て観察される。このように、対物レンズ２、リレーレン
ズ系３、ミラー４、リレーレンズ系６、プリズム７およ
び接眼レンズ９は、顕微鏡の観察光学系を構成してい
る。
【００２０】本実施例では、ケージド化合物を破壊する
ための破壊光が視野絞りＦＳ２を介して対物レンズ２０
により標本１上に集光される。したがって、落射照明用
の励起光が照射される標本１の観察視野領域のうちの一
部の領域のみに破壊光を照射して、標本の一部の細胞の
反応を観察することができる。また、視野絞りＦＳ２を
適宜絞り込むことにより、標本１の観察視野領域の範囲
内において、所望の小さな領域に所望の強度を有する破
壊光を効率良く照射することができる。その結果、より
微小な領域により強力な励起光を照明することが可能で
ある。
ための破壊光が視野絞りＦＳ２を介して対物レンズ２０
により標本１上に集光される。したがって、落射照明用
の励起光が照射される標本１の観察視野領域のうちの一
部の領域のみに破壊光を照射して、標本の一部の細胞の
反応を観察することができる。また、視野絞りＦＳ２を
適宜絞り込むことにより、標本１の観察視野領域の範囲
内において、所望の小さな領域に所望の強度を有する破
壊光を効率良く照射することができる。その結果、より
微小な領域により強力な励起光を照明することが可能で
ある。
【００２１】さらに、視野絞りＦＳ２を光軸直交面にお
いて二次元的に適宜移動させることによって、標本１の
細胞の一部の特定した領域にのみ選択的に励起光を照射
することができる。換言すれば、観察視野領域の任意の
領域に順次破壊光を照射しながら、観察視野領域全体に
亘って蛍光観察を行うことができる。また、励起光を供
給する二次光源であるファイバ１８の射出端１８ｂを視
野絞りＦＳ２とともに二次元的に移動させることによ
り、ファイバ１８の径以上の範囲に亘って標本１に破壊
光を照射することが可能になる。さらに、対物レンズ２
０を光軸に沿って移動させることにより、色収差による
ピントずれを補正して極めて小さな領域に良好な結像性
能で破壊光を照射することができる。
いて二次元的に適宜移動させることによって、標本１の
細胞の一部の特定した領域にのみ選択的に励起光を照射
することができる。換言すれば、観察視野領域の任意の
領域に順次破壊光を照射しながら、観察視野領域全体に
亘って蛍光観察を行うことができる。また、励起光を供
給する二次光源であるファイバ１８の射出端１８ｂを視
野絞りＦＳ２とともに二次元的に移動させることによ
り、ファイバ１８の径以上の範囲に亘って標本１に破壊
光を照射することが可能になる。さらに、対物レンズ２
０を光軸に沿って移動させることにより、色収差による
ピントずれを補正して極めて小さな領域に良好な結像性
能で破壊光を照射することができる。
【００２２】図２は、本発明の第２実施例にかかる顕微
鏡の落射蛍光照明装置の構成を示す図である。図２では
顕微鏡の観察光学系の部分を省略し、落射蛍光照明装置
の構成を主として示している。実施例２の装置は、実施
例１の装置と類似の構成を有し同様の作用効果を有する
が、ケージド化合物破壊用の光が顕微鏡の観察光学系の
一部の光路を介して標本に導かれる点が実施例１と相違
する。すなわち、実施例２では破壊光と励起光とが一部
共通の光路を介して共通の対物レンズにより標本上に集
光される点だけが大きく相違するので、実施例１と同様
な構成および動作についての重複する説明を省略する。
図２の装置では、図１に示す構成要素と同様の機能を有
する要素に同じ参照符号を付している。
鏡の落射蛍光照明装置の構成を示す図である。図２では
顕微鏡の観察光学系の部分を省略し、落射蛍光照明装置
の構成を主として示している。実施例２の装置は、実施
例１の装置と類似の構成を有し同様の作用効果を有する
が、ケージド化合物破壊用の光が顕微鏡の観察光学系の
一部の光路を介して標本に導かれる点が実施例１と相違
する。すなわち、実施例２では破壊光と励起光とが一部
共通の光路を介して共通の対物レンズにより標本上に集
光される点だけが大きく相違するので、実施例１と同様
な構成および動作についての重複する説明を省略する。
図２の装置では、図１に示す構成要素と同様の機能を有
する要素に同じ参照符号を付している。
【００２３】図２の落射蛍光照明装置の励起光照射光学
系では、光源１１からの光束がコレクタレンズ１２によ
って集光されて一旦結像した後、コリメータレンズ１３
により平行光束に変換される。この平行光束は、励起フ
ィルタＥＸ１を介してダイクロイックミラーＤＭ２に入
射する。
系では、光源１１からの光束がコレクタレンズ１２によ
って集光されて一旦結像した後、コリメータレンズ１３
により平行光束に変換される。この平行光束は、励起フ
ィルタＥＸ１を介してダイクロイックミラーＤＭ２に入
射する。
【００２４】なお、コレクタレンズ１２とコリメータレ
ンズ１３との間の結像位置には視野絞りＦＳ３が配置さ
れている。ダイクロイックミラーＤＭ２により図中左側
に反射された落射照明用の平行光束は、レンズ１４によ
って結像した後コリメータレンズ１５によって平行光束
となり、ダイクロイックミラーＤＭ１に入射する。ここ
で、レンズ１４とコリメータレンズ１５との間の結像位
置には視野絞りＦＳ１が配置されている。また、ダイク
ロイックミラーＤＭ１は、顕微鏡の観察光学系のリレー
レンズ系３中（平行光路中）に配置されている。
ンズ１３との間の結像位置には視野絞りＦＳ３が配置さ
れている。ダイクロイックミラーＤＭ２により図中左側
に反射された落射照明用の平行光束は、レンズ１４によ
って結像した後コリメータレンズ１５によって平行光束
となり、ダイクロイックミラーＤＭ１に入射する。ここ
で、レンズ１４とコリメータレンズ１５との間の結像位
置には視野絞りＦＳ１が配置されている。また、ダイク
ロイックミラーＤＭ１は、顕微鏡の観察光学系のリレー
レンズ系３中（平行光路中）に配置されている。
【００２５】ダイクロイックミラーＤＭ１により図中上
方に反射された平行光束は、対物レンズ２を介して標本
１の観察視野領域を照明する。このように、標本１と視
野絞りＦＳ１および視野絞りＦＳ３とは共役の位置にあ
り、観察視野領域は視野絞りＦＳ１および視野絞りＦＳ
３の開口部の形状および大きさに依存して規定される。
方に反射された平行光束は、対物レンズ２を介して標本
１の観察視野領域を照明する。このように、標本１と視
野絞りＦＳ１および視野絞りＦＳ３とは共役の位置にあ
り、観察視野領域は視野絞りＦＳ１および視野絞りＦＳ
３の開口部の形状および大きさに依存して規定される。
【００２６】なお、第２実施例でもＢ励起法を用いてお
り、励起フィルタＥＸ１は波長が４３０〜４８０ｎｍの
光を透過する特性を有する。一方、ダイクロイックミラ
ーＤＭ１は波長が３３０〜５００ｎｍの光を反射し、落
射照明された標本で発生する波長が５００ｎｍ以上の光
だけを透過する特性を有する。さらに、ダイクロイック
ミラーＤＭ２は波長が４００〜６６０ｎｍの光を反射
し、波長が２８０〜３９０ｎｍの光を透過する特性を有
する。こうして、ダイクロイックミラーＤＭ２は、光源
１１からの励起光（４３０〜４８０ｎｍ）を反射し、後
述する光源１６からの破壊光（３３０〜３８０ｎｍ）を
透過する。
り、励起フィルタＥＸ１は波長が４３０〜４８０ｎｍの
光を透過する特性を有する。一方、ダイクロイックミラ
ーＤＭ１は波長が３３０〜５００ｎｍの光を反射し、落
射照明された標本で発生する波長が５００ｎｍ以上の光
だけを透過する特性を有する。さらに、ダイクロイック
ミラーＤＭ２は波長が４００〜６６０ｎｍの光を反射
し、波長が２８０〜３９０ｎｍの光を透過する特性を有
する。こうして、ダイクロイックミラーＤＭ２は、光源
１１からの励起光（４３０〜４８０ｎｍ）を反射し、後
述する光源１６からの破壊光（３３０〜３８０ｎｍ）を
透過する。
【００２７】一方、図２の落射蛍光照明装置の破壊光照
射光学系では、キセノン光源１６からの光がコレクタレ
ンズ１７によって集光され、光ファイバ１８の入力端１
８ａに結像する。ファイバ１８を伝搬した光は射出端１
８ｂに達し、二次光源となって射出する。射出端１８ｂ
からの発散光は、光軸に沿って移動可能なコリメータレ
ンズ１９および励起フィルタＥＸ２を介して上述のダイ
クロイックミラーＤＭ２に入射する。ダイクロイックミ
ラーＤＭ２を透過した光は、上述の落射照明用の平行光
束と同様に、レンズ１４、コリメータレンズ１５、ダイ
クロイックミラーＤＭ１および対物レンズ２を介して標
本１上を照明し、ケージド化合物を破壊する。
射光学系では、キセノン光源１６からの光がコレクタレ
ンズ１７によって集光され、光ファイバ１８の入力端１
８ａに結像する。ファイバ１８を伝搬した光は射出端１
８ｂに達し、二次光源となって射出する。射出端１８ｂ
からの発散光は、光軸に沿って移動可能なコリメータレ
ンズ１９および励起フィルタＥＸ２を介して上述のダイ
クロイックミラーＤＭ２に入射する。ダイクロイックミ
ラーＤＭ２を透過した光は、上述の落射照明用の平行光
束と同様に、レンズ１４、コリメータレンズ１５、ダイ
クロイックミラーＤＭ１および対物レンズ２を介して標
本１上を照明し、ケージド化合物を破壊する。
【００２８】なお、ファイバ１８の射出端１８ｂの近傍
には、標本１と共役な位置に視野絞りＦＳ２が配置され
ている。視野絞りＦＳ２は、開口部を絞り込むことが可
能であり、且つ光軸と直交する面内において二次元的に
移動可能である。また、励起フィルタＥＸ２は、ケージ
ド化合物を破壊するための紫外光として波長が３３０〜
３８０ｎｍの光を透過する特性を有する。本実施例にお
いても、コリメータレンズ１９を光軸に沿って移動させ
ることにより、色収差によるピントずれを補正して極め
て小さな領域に良好な結像性能で破壊光を照射すること
ができる。
には、標本１と共役な位置に視野絞りＦＳ２が配置され
ている。視野絞りＦＳ２は、開口部を絞り込むことが可
能であり、且つ光軸と直交する面内において二次元的に
移動可能である。また、励起フィルタＥＸ２は、ケージ
ド化合物を破壊するための紫外光として波長が３３０〜
３８０ｎｍの光を透過する特性を有する。本実施例にお
いても、コリメータレンズ１９を光軸に沿って移動させ
ることにより、色収差によるピントずれを補正して極め
て小さな領域に良好な結像性能で破壊光を照射すること
ができる。
【００２９】なお、上述の各実施例では、倒立型の顕微
鏡を例にとって本発明を説明しているが、一般の正立型
の顕微鏡にも本発明を適用することができる。また、上
述の各実施例では、落射蛍光法としてＢ励起法にしたが
う構成を示したが、他の適当な励起法を用いることもで
きる。さらに、上述の各実施例では、光ファイバを介し
て破壊光の二次光源を形成しているが、光ファイバを用
いることなく破壊光用光源の近傍に直接視野絞りを配置
してもよいことは明らかである。
鏡を例にとって本発明を説明しているが、一般の正立型
の顕微鏡にも本発明を適用することができる。また、上
述の各実施例では、落射蛍光法としてＢ励起法にしたが
う構成を示したが、他の適当な励起法を用いることもで
きる。さらに、上述の各実施例では、光ファイバを介し
て破壊光の二次光源を形成しているが、光ファイバを用
いることなく破壊光用光源の近傍に直接視野絞りを配置
してもよいことは明らかである。
【００３０】
【効果】以上説明したように、本発明によれば、破壊光
を視野絞りを介して集光レンズ手段によって標本上に集
光するので、標本の一部の細胞の反応を観察することが
できる。また、視野絞りを絞り込み可能にすることによ
り、所望の大きさの領域に所望の強さの破壊光を照射す
ることができる。さらに、視野絞りを光軸に垂直な面内
において二次元的に移動可能にすることにより、観察視
野領域の任意の領域に順次破壊光を照射しながら、観察
視野領域全体に亘って蛍光観察を行うことができる。
を視野絞りを介して集光レンズ手段によって標本上に集
光するので、標本の一部の細胞の反応を観察することが
できる。また、視野絞りを絞り込み可能にすることによ
り、所望の大きさの領域に所望の強さの破壊光を照射す
ることができる。さらに、視野絞りを光軸に垂直な面内
において二次元的に移動可能にすることにより、観察視
野領域の任意の領域に順次破壊光を照射しながら、観察
視野領域全体に亘って蛍光観察を行うことができる。
【図１】本発明の第１実施例にかかる顕微鏡の落射蛍光
照明装置の構成を示す図である。
照明装置の構成を示す図である。
【図２】本発明の第２実施例にかかる顕微鏡の落射蛍光
照明装置の構成を示す図である。
照明装置の構成を示す図である。
１ 標本 ２ 対物レンズ ３ リレーレンズ系 ４ ミラー ５、８ 像面 ７ プリズム １１、１６ 光源 １８ ファイバ ＥＸ 励起フィルタ ＢＡ 吸収フィルタ ＤＭ ダイクロイックミラー ＦＳ 視野絞り
Claims (7)
- 【請求項１】 落射照明用の励起光を標本に照射するた
めの励起光照射光学系と、前記標本に含まれたケージド
化合物を破壊するための破壊光を前記標本に照射するた
めの破壊光照射光学系とを備えた、顕微鏡の落射蛍光照
明装置において、 前記破壊光照射光学系は、 前記破壊光を発するための光源と、該光源からの光を前
記標本の観察視野領域内に集光するための集光レンズ手
段と、前記光源と前記集光手段との間に位置決めされ前
記標本上における前記破壊光の照射領域を規定するため
の視野絞りとを備えていることを特徴とする落射蛍光照
明装置。 - 【請求項２】 前記視野絞りは、絞り込み可能であるこ
とを特徴とする請求項１に記載の落射蛍光照明装置。 - 【請求項３】 前記視野絞りは、光軸に垂直な面内にお
いて移動可能であることを特徴とする請求項２に記載の
落射蛍光照明装置。 - 【請求項４】 前記光源は前記視野絞りの近傍に配置さ
れ、前記光軸に垂直な面内において前記視野絞りと一体
的に移動可能であることを特徴とする請求項３に記載の
落射蛍光照明装置。 - 【請求項５】 前記光源からの光を集光するための第２
の集光レンズ手段と、該第２の集光レンズ手段によって
集光された位置に入射端を有し射出端まで入射光を伝搬
するためのライトガイド手段とをさらに備え、 前記ライトガイド手段の射出端は前記視野絞りの近傍に
配置され、前記射出端からの光は前記視野絞りを介して
前記標本の観察視野領域内に集光されることを特徴とす
る請求項１乃至３のいずれか１項に記載の落射蛍光照明
装置。 - 【請求項６】 前記ライトガイド手段の射出端は、光軸
に垂直な面内において前記視野絞りと一体的に移動可能
であることを特徴とする請求項５に記載の落射蛍光照明
装置。 - 【請求項７】 前記集光レンズ手段を構成するレンズの
うち少なくとも１つのレンズは光軸に沿って移動可能な
可動レンズであり、該可動レンズを光軸に沿って移動さ
せて前記視野絞りの前記標本上における合焦を行うこと
を特徴とする請求項１乃至６のいずれか１項に記載の落
射蛍光照明装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6228818A JPH0868756A (ja) | 1994-08-30 | 1994-08-30 | 顕微鏡の落射蛍光照明装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6228818A JPH0868756A (ja) | 1994-08-30 | 1994-08-30 | 顕微鏡の落射蛍光照明装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0868756A true JPH0868756A (ja) | 1996-03-12 |
Family
ID=16882347
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6228818A Pending JPH0868756A (ja) | 1994-08-30 | 1994-08-30 | 顕微鏡の落射蛍光照明装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0868756A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009080502A (ja) * | 2008-12-05 | 2009-04-16 | Carl Zeiss Jena Gmbh | 走査ユニット付き顕微鏡における放射を走査ヘッドに結合するための配置およびその操作方法 |
| WO2015029408A1 (ja) * | 2013-08-27 | 2015-03-05 | 独立行政法人理化学研究所 | 対物レンズの駆動制御方法及び蛍光顕微鏡システム |
-
1994
- 1994-08-30 JP JP6228818A patent/JPH0868756A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009080502A (ja) * | 2008-12-05 | 2009-04-16 | Carl Zeiss Jena Gmbh | 走査ユニット付き顕微鏡における放射を走査ヘッドに結合するための配置およびその操作方法 |
| WO2015029408A1 (ja) * | 2013-08-27 | 2015-03-05 | 独立行政法人理化学研究所 | 対物レンズの駆動制御方法及び蛍光顕微鏡システム |
| JP2015045684A (ja) * | 2013-08-27 | 2015-03-12 | 独立行政法人理化学研究所 | 対物レンズの駆動制御方法及び蛍光顕微鏡システム |
| US9921398B2 (en) | 2013-08-27 | 2018-03-20 | Riken | Drive control method for objective lens and fluorescence microscope system |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6924930B2 (en) | Microscope illumination device | |
| JP5286774B2 (ja) | 顕微鏡装置と、これに用いられる蛍光キューブ | |
| JP2001272606A (ja) | 照明光学系及び照明光学系を備えた顕微鏡 | |
| US7915575B2 (en) | Laser scanning microscope having an IR partial transmission filter for realizing oblique illumination | |
| JP2011118264A (ja) | 顕微鏡装置 | |
| US8294984B2 (en) | Microscope | |
| JP2001235684A (ja) | 共焦点走査型顕微鏡 | |
| JPH09203864A (ja) | Ｎｆｍ一体型顕微鏡 | |
| US8154796B2 (en) | Microscope apparatus | |
| JPH11133306A (ja) | 共焦点顕微鏡 | |
| WO2009142312A1 (ja) | 顕微鏡装置 | |
| JP2008225096A (ja) | 顕微鏡装置および顕微鏡観察方法 | |
| JP2010091679A (ja) | 顕微鏡装置とこれに用いられる蛍光キューブ | |
| JP4172212B2 (ja) | 顕微鏡標本の照明方法とこれを用いた照明装置を有する顕微鏡 | |
| JP3339244B2 (ja) | 落射蛍光顕微鏡 | |
| US20060087727A1 (en) | Apparatus, system and method for selective photobleaching, imaging and confocal microscopy | |
| JPH0990232A (ja) | 顕微鏡用照明装置 | |
| JPH0868756A (ja) | 顕微鏡の落射蛍光照明装置 | |
| JP3968629B2 (ja) | 蛍光画像計測装置 | |
| JP4222664B2 (ja) | 落射蛍光顕微鏡 | |
| JP2006003747A (ja) | 光走査型観察装置 | |
| JP2003185928A (ja) | 照明装置及び該装置を備えた蛍光顕微鏡 | |
| JP2006220954A (ja) | 蛍光顕微鏡装置 | |
| JP2007271529A (ja) | 顕微蛍光観測装置 | |
| JP4686015B2 (ja) | 照明装置 |