JPH0884590A - ヒトｂｓｔ−１のマウスホモローグの遺伝子及びアミノ酸配列 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ヒトＢＳＴ−１のマウスホモローグの遺伝子
及びアミノ酸配列を提供する。 【構成】 骨髄間質細胞膜蛋白質のヒトＢＳＴ−１のマ
ウスホモローグのポリペプチドをコードする遺伝子。ポ
リペプチドが、配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列
又はその一部を有するポリペプチドであることを特徴と
する上記のＤＮＡ。配列表の配列番号２に示す塩基配
列、又はこれを一部置換、欠除もしくは付加した塩基配
列にハイブリダイズする塩基配列を有する上記のＤＮ
Ａ。 【効果】 上記遺伝子は、慢性関節リウマチ（ＲＡ）患
者や多発性骨髄腫（ＭＭ）患者の骨髄細胞や滑膜細胞上
のプレＢ細胞増殖支持能を亢進するヒトＢＳＴ−１のマ
ウスホモローグをコードする。本発明によれば、遺伝的
に解明されているマウス系を利用することが可能とな
り、ＢＳＴ−１の機能、特に生体内の機能を研究、解明
するのに有利なマウス系を確立することが可能である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、骨髄間質細胞膜蛋白質
のヒトＢＳＴ−１のマウスホモローグに関し、更に詳し
くは、骨髄間質細胞膜蛋白質のヒトＢＳＴ−１のマウス
ホモローグのポリペプチドをコードする遺伝子、及びヒ
トＢＳＴ−１のマウスホモローグのポリペプチドのアミ
ノ酸配列に関する。

【０００２】本発明の遺伝子は、慢性関節リウマチ（Ｒ
Ａ）患者や多発性骨髄腫（ＭＭ）患者の骨髄細胞や滑膜
細胞上のプレＢ細胞増殖支持能を亢進する骨髄間質細胞
膜蛋白質のヒトＢＳＴ−１のマウスホモローグのポリペ
プチドをコードする。本発明の遺伝子を適当なベクター
に挿入した後、常用の宿主細胞を形質転換することによ
り、大量に均一なヒトＢＳＴ−１のマウスホモローグの
ポリペプチドを製造することが可能となる。このことか
ら、遺伝学的に解明されているマウス系を利用すること
が可能となり、本発明により、前記ＢＳＴ−１の機能、
特にその生体内機能を解明するのに有利なマウス系を確
立することが可能である。

【０００３】

【従来の技術】従来、骨髄細胞の異常が、Ｂ細胞悪性腫
瘍や自己免疫疾患の発生に関与していることが報告され
ている〔Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：２
４３（１９９１）〕。

【０００４】すなわち、多発性骨髄腫（ＭＭ）は、骨髄
の微小環境に依存して進行する悪性腫瘍であり骨髄中で
限定された増殖を示す単一形質球癌であるが、骨髄スト
ローマ細胞に依存的なＢ細胞の分化増殖過程の初期段階
（プレＢ細胞）で多発性骨髄腫（ＭＭ）のガン遺伝子の
転換が起こることが知られている〔Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．，１５０：７９２（１９７９）、及びＣａｎｃｅｒ
Ｇｅｎｅｔ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ，１７：１３（１９
８５）〕。

【０００５】また、多発性骨髄腫（ＭＭ）患者の末梢血
中を循環する多発性骨髄腫（ＭＭ）の前駆細胞の増殖を
骨髄ストローマ細胞が促進するという事実が報告されて
いる〔Ｂｌｏｏｄ，７７：２６８８（１９９１）〕。

【０００６】これらのことから、骨髄ストローマ細胞が
多発性骨髄腫（ＭＭ）の増殖を促進するシグナルを提供
している可能性がある。

【０００７】一方、ＩＬ−６の異常生産が、慢性関節リ
ウマチ（ＲＡ）の発生に関与していることが知られてい
る〔Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８：１７９７
（１９８８）、及びＣｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，６２：Ｓ６０（１９９２）〕。
更に、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０：７２３
（１９９０）、及びＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２
１：６３（１９９１）に報告された自己免疫疾患のマウ
スモデルの結果から、慢性リウマチ（ＲＡ）の骨髄は何
らかの異常が存在することが示唆される。すなわち、慢
性関節リウマチ（ＲＡ）においても、ポリクローナルな
Ｂ細胞活性化が骨髄に起因している可能性が示唆されて
いる。

【０００８】骨髄（ＢＭ）の微小環境におけるＢリンパ
球生成は、サイトカインと間質細胞表面分子により調節
される〔Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３，２１
３−２３５（１９８５）、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．８，１１１−１３７（１９９０）、Ｓｅｍｉ
ｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３，３７９−３９０（１９９
１）、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５３，１２３−１５６
（１９９３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ９１，２８８８−２８８９（１９９４）〕。

【０００９】間質細胞は、インターロイキン６（ＩＬ−
６）〔Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５１，１５
３−１８０（１９９２）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９，５９０７−５９１１（１９９
２）〕、インターロイキン７（ＩＬ−７）〔Ｎａｔｕｒ
ｅ ３３３，５７１−５７３（１９８８）、Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１４６，３７８５−３７９０（１９９１）、
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１，２６０９−２６１
２（１９９１）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，７４８
−７５２（１９９３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０，９１２５−９１２９（１９９
３）〕、又は幹細胞因子〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４
６，３７８５−３７９０（１９９１）、Ｃｅｌｌ ６
３，５−６（１９９０）、Ｃｅｌｌ ６４，１０２５−
１０３５（１９９１）〕、などの種々のサイトカインを
産生し、そのいずれもＢ前駆細胞の増殖・分化に関与す
る。

【００１０】本発明者らは、以前に、慢性関節リウマチ
（ＲＡ）患者由来の骨髄間質細胞株では、健常者由来の
それに比べて、間質細胞依存性のマウスプレＢ細胞株で
あるＤＷ３４の増殖支持能が高まっていることを報告し
た〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９，４０８８−４０９５
（１９９２）〕。

【００１１】本発明者らは、Ｂ細胞の機能異常をきたす
疾患における骨髄微小環境の病的意義を明らかにするこ
とを目的として、研究を進めており、ＲＡ及びＭＭ患者
では、健常者と比較して、骨髄由来ストローマ細胞のプ
レＢ細胞増殖支持能が亢進していること、及びこの支持
能には、プレＢ細胞とストローマ細胞との直接接触が必
須であることを報告すると共に、ＲＡ及びＭＭ患者の骨
髄ストローマ細胞上にプレＢ細胞の増殖を促進する分子
があるはずであるとの洞察に基づいて、各々の患者のス
トローマ細胞をセルライン化し、プレＢ細胞の増殖を支
持する能力を有するストローマ細胞株（ＲＡＳＶ５−
５，ＭＭＳＶ３−３）を樹立した。これらストローマ細
胞株によるプレＢ細胞の増殖支持には、既知のＳｔｅｍ
ｃｅｌｌｆａｃｔｏｒ（ＳＣＦ）、ＩＣＡＭ−１、Ｃ
Ｄ４４、ＶＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１α，ＬＦＡ−１β、
ＮＣＡＭ、ＥＬＡＭ−１とは別の未知の細胞表面分子が
関与していることが示唆された〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１４９：４０８８（１９９２）〕。

【００１２】更に、本発明者らは、骨髄間質細胞抗原１
（ＢＳＴ−１）と名づけられた新規なグリコシルホスフ
ァチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型膜タンパク
質をコードするｃＤＮＡを分離した〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１，５３２５−５３２
９（１９９４）〕。ヒトＢＳＴ−１を発現するＢａｌｂ
／３Ｔ３トランスフェクタントは、ＤＷ３４の増殖を促
進し、このことは、ＢＳＴ−１がＢ細胞前駆体の増殖を
支持する間質細胞表面分子の一つであることを示唆して
いる。

【００１３】ヒトＢＳＴ−１は、ヒトリンパ球抗原ＣＤ
３８とアミノ酸配列で３３％の相同性を有しており、Ａ
ｐｌｙｓｉａ（アメフラシ）のアデノシンジホスフェー
ト（ＡＤＰ）−リボシルサイクラーゼとは２９％の相同
性を有する〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ９１，５３２５−５３２９（１９９４）、ＴＩＢ
Ｓ １７，４９５（１９９２）〕。ＣＤ３８は、ＡＤＰ
リボシルサイクラーゼ活性を有するので〔Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２６２，１０５６−１０５９（１９９３）〕、坑Ｃ
Ｄ３８抗体により誘発される細胞質Ｃａ²⁺の高まりは、
酵素活性により介されることが示唆される〔Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１５１，３１１９−３１３０（１９９
３）〕。

【００１４】ヒトＣＤ３８は、リンパ球の初期ならびに
後期の段階で発現され、リンパ球活性化に関わっている
ことが示唆されるが〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５，２
３９０−２３９６（１９９０）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１４４，２８１１−２８１５（１９９０）、Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３，２４０７−２４１１（１９
９３）〕、ヒトＢＳＴ−１は、間質細胞株で発現される
ので、このことは、ヒトＢＳＴ−１が、ＣＤ３８とは異
なる機能をもつことを示唆している〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１，５３２５−５３２
９（１９９４）〕。

【００１５】

【発明が解決しようとする課題】このような状況下にお
いて、本発明者らは、ヒトＢＳＴ−１に関して種々研究
を進める中で、ＢＳＴ−１の機能を更に分析するために
は、遺伝学的に解明されているマウス系が有利であり、
特に生体内機能を研究し、解明するには有利であるとの
判断のもとに、有用なマウス系を確立することを目標と
して種々研究を積み重ねた結果、骨髄間質細胞膜蛋白質
のヒトＢＳＴ−１のマウスホモローグのクローニングと
種々の細胞と組織における発現、更に、ＢＳＴ−１のマ
ウスホモローグの遺伝子におけるＲＦＬＰ（Ｒｅｓｔｒ
ｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌ
ｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）の存在を示すこと、に成功して、
本発明を完成するに至った。

【００１６】すなわち、本発明は、骨髄間質細胞膜蛋白
質のヒトＢＳＴ−１のマウスホモローグのポリペプチド
をコードする遺伝子、及び該ヒトＢＳＴ−１のマウスホ
モローグのポリペプチドのアミノ酸配列を提供すること
を目的とするものである。

【００１７】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明者らは、ヒトＢＳＴ−１ｃＤＮＡをプローブ
としてマウスｐｒｅ−Ｂ細胞株のｃＤＮＡライブラリー
からスクリーニングを行ない、ヒトＢＳＴ−１のマウス
ホモローグの遺伝子をクローニングし、その解析を行っ
た。また、この解析を基に、該ＢＳＴ−１マウスホモロ
ーグのアミノ酸配列の決定を行った。尚、この遺伝子を
適当なベクターに挿入して形質転換体を得、それを培養
することにより、このＢＳＴ−１のマウスホモローグの
ポリペプチドを大量に製造することができる。

【００１８】続いて、本発明について更に詳細に説明す
る。本発明のＢＳＴ−１のマウスホモローグの遺伝子
は、ヒトＢＳＴ−１ｃＤＮＡをプローブとしてマウスｐ
ｒｅ−Ｂ細胞株のｃＤＮＡライブラリーからスクリーニ
ングを行ない調製した。尚、ヒトＢＳＴ−１ｃＤＮＡ
は、例えば、ヒトＢＳＴ−１を発現する細胞等からｍＲ
ＮＡを調製した後、既知の方法により二本鎖ｃＤＮＡに
変換することにより得られる。このｍＲＮＡの供給源と
なる細胞としては、ヒトＢＳＴ−１を発現している細胞
であれば適宜のものでよいが、一例としては、Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．，１４９：４０８８（１９９２）に開示さ
れた各種ストローマ細胞株をあげることができる。

【００１９】一方、マウスｐｒｅ−Ｂ細胞株のｃＤＮＡ
ライブラリーは、マウスｐｒｅ−Ｂ細胞からｍＲＮＡを
調製した後、既知の方法により二本鎖ｃＤＮＡに変換す
ることにより得られる。すなわち、ｍＲＮＡを得るため
の全ＲＮＡの調製は、グアニジンチオシアネート処理
後、塩化セシウム密度勾配遠心を行ない〔Ｃｈｉｒｇｗ
ｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１
８：５２９４（１９７９）〕全ＲＮＡを得る方法や、バ
ナジウム複合体のリボヌクレアーゼインヒビター存在下
に界面活性剤処理、フェノール処理を行う方法〔Ｂｅｒ
ｇｅｒ ＆ Ｂｉｒｋｅｎｍｅｉｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ，１８：５１４３（１９７９）〕の他、公知
の手段を用いることができる。

【００２０】全ＲＮＡからのｍＲＮＡの調製は、オリゴ
（ｄＴ）を結合した担体、例えば、セファロースやセル
ロース等を用いたアフィニティーカラムクロマトグラフ
ィーかバッチ法により、全ＲＮＡからｐｏｌｙ（Ａ）⁺
ＲＮＡを回収することでできる。また、ショ糖密度勾配
遠心法等によりｐｏｌｙ（Ａ）⁺ ＲＮＡを更に精製する
こともできる。その他、いったんＲＮＡを調製せずに、
直接ｐｏｌｙ（Ａ）⁺ＲＮＡを得る方法や市販のキット
を用いた簡便な方法もある。

【００２１】上記の如くして得たｍＲＮＡから二本鎖ｃ
ＤＮＡを得るには、例えば、ｍＲＮＡを鋳型にして、
３′末端にあるポリＡ−鎖に相補的なオリゴ（ｄＴ）を
プライマーとして逆転写酵素で処理してｍＲＮＡに相補
的なＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を合成する。

【００２２】ｍＲＮＡをアルカリ処理により分解、除去
した後、得られた一本鎖ｃＤＮＡを鋳型にして逆転写酵
素あるいはＤＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｋｌｅｎｏｗ
断片等）処理後、Ｓ１ヌクレアーゼなどで処理するか、
直接ＲＮａｓｅＨ及びＤＮＡポリメラーゼ等で処理する
ことによっても二本鎖ｃＤＮＡを得ることができる〔Ｍ
ａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８２）、及びＧｕｂ
ｌｅｒ ＆ Ｈｏｆｆｍａｎ， Ｇｅｎｅ，２５：２６
３（１９８３）〕。最近、簡便なキットも市販されてお
り、これらを用いて二本鎖ｃＤＮＡを得ることもでき
る。

【００２３】このようにして得られたｃＤＮＡを適当な
ベクター、例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＳＣ１０１等のＥ
Ｋ型プラスミドベクターやλｇｔ１０等のファージベク
ター等に組み込んだ後、大腸菌（Ｘ１７７６，ＨＢ１０
１，ＤＨ１，ＤＨ５など）等を形質転換してｃＤＮＡラ
イブラリーを得ることができる（例えば、前出“Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ”を参照）。

【００２４】ＢＳＴ−１のマウスホモローグのｃＤＮＡ
ライブラリーのスクリーニングは、ＢＳＴ−１のマウス
ホモローグの一部を、ランダムプライマリー標識キット
等で標識したヒトＢＳＴ−１ｃＤＮＡのフラグメントを
用いて分離することにより実施される、すなわち、ＢＳ
Ｔ−１のマウスホモローグのポリペプチドをコードする
ｃＤＮＡは、標識したヒトＢＳＴ−１ｃＤＮＡを制限酵
素で切断した断片、例えば、ＢａｍＨＩ−ＳａｌＩ、Ｓ
ａｌＩ−ＢｇｌＩＩ、ＢｇｌＩＩ−ＰｓｔＩ等のフラグ
メント、の混合物を用いてハイブリダイゼーションを行
なうことにより単離することができる。この場合、ハイ
ブリダイゼーションの方法は、常法により行なえばよい
〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８
１，１９９１−１９９５（１９８４）〕。また、ＢＳＴ
−１のマウスホモローグのｃＤＮＡは、５′ＲＡＣＥ
（Ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃ
ＤＮＡｅｎｄｓ）法を行なって遺伝子工学的に増幅する
こともできる。すなわち、ＢＳＴ−１のマウスホモロー
グの５′末端を含むｃＤＮＡクローンをＰＣＲ（Ｐｏｌ
ｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）法
〔Ｍ．Ｋａｍｍａｎ等，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，１５：５４０４（１９８９）〕を用いて増幅すれ
ばよい。このように、ヒトＢＳＴ−１をプローブとし
て、ＢＳＴ−１のマウスホモローグのｃＤＮＡライブラ
リーからスクリーニングを行ない、更に、ＰＣＲ法によ
りｃＤＮＡを増幅することにより、ヒトＢＳＴ−１のマ
ウスホモローグのポリペプチドをコードする配列表の配
列番号２に示される完全長ｃＤＮＡの塩基配列を得るこ
とができた。また、該ＢＳＴ−１のマウスホモローグの
遺伝子の塩基配列に基づいて配列表の配列番号１に示さ
れるＢＳＴ−１のマウスホモローグのポリペプチドのア
ミノ酸配列が決定された。

【００２５】一般に、真核生物の遺伝子は、ヒトインタ
ーフェロン遺伝子等で知られているように、多形現象を
示すと考えられ〔例えば、Ｎｉｓｈｉ等，Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．，９７：１５３（１９８５）〕、この多形現象
によって１個又はそれ以上のアミノ酸が置換されている
場合もあれば、塩基配列の変化はあってもアミノ酸は全
く変わらない場合もある。

【００２６】また、配列表の配列番号１のアミノ酸配列
の中の１個又はそれ以上のアミノ酸を欠くか又は付加し
たポリペプチドあるいはアミノ酸が１個もしくはそれ以
上のアミノ酸で置換されたポリペプチドでも同様の機能
を有することがある。例えば、ヒトインターロイキン
（ＩＬ−２）遺伝子のシステインに相当する塩基配列を
セリンに相当する配列に変換して得られたポリペプチド
がＩＬ−２活性を保持することも既に公知となっている
〔Ｗａｎｇ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２４：１４３１（１
９８４）〕。

【００２７】更には、既知タンパクの遺伝子と配列表の
配列番号２の遺伝子を適当な制限酵素又はアダプター等
を用いて連結させて、既知タンパクと結合したポリペプ
チドとして産生させることもできる。既知タンパクの遺
伝子としては、例えば、免疫グロブリンがあげられ、そ
の可変領域部分の代わりに配列表の配列番号２に示され
る遺伝子を用いて、Ｆｃ部分と結合させればよい〔（Ｚ
ｅｔｔｌｍｅｉｓｓｌ等，ＤＮＡ ＡＮＤ ＣＥＬＬ
ＢＩＯＬＯＧＹ，９：３４７−３５３（１９９０）〕。

【００２８】また、真核細胞で発現させた場合、その多
くは糖鎖が付加されるが、アミノ酸を１ないしそれ以上
変換することにより糖鎖付加を調節することが可能であ
り、この場合も同様の機能を有することがある。従っ
て、本発明におけるＢＳＴ−１のマウスホモローグのポ
リペプチドをコードする遺伝子を人工的に改変したもの
でも、得られたポリペプチドが同様の機能を有する限
り、それらの遺伝子は全て本発明に含まれる。

【００２９】更に、配列表の配列番号２に示される遺伝
子とハイブリダイズする遺伝子も、その遺伝子から発現
されるポリペプチドが同様の機能を有する限り、本発明
に含まれる。ハイブリダイゼーションは、通常のハイブ
リダイゼーションの条件（例えば、前述の“Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ”を参照）を用いて行うこと
ができるものを全て含む。

【００３０】本発明においては、必要に応じて、常法に
より、前述の方法で得た二本鎖ｃＤＮＡを適当な発現ベ
クターに挿入することにより、他の原核生物又は真核生
物の宿主細胞を形質転換させることができる。

【００３１】二本鎖ｃＤＮＡをベクターと連結させるに
は適当な化学合成ＤＮＡアダプターを付加し、予じめ制
限酵素を用いて開裂させたベクターＤＮＡとＡＴＰ存在
下にＴ４ファージＤＮＡリガーゼで処理することにより
行うことができる。

【００３２】前記発現ベクターは、複製起源、選択マー
カー、発現させようとする遺伝子の前に位置するプロモ
ーター、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化シグナ
ル等を含んでいるものが使用される。

【００３３】哺乳動物細胞における遺伝子発現のプロモ
ーターとしては、レトロウイルス、ポリオーマウイル
ス、アデノウイルス、シミアンウイルス（ＳＶ）４０等
のウイルスプロモーターやヒト・ポリペプチド・チェー
ン・エロンゲーション・ファクター１α（ＨＥＦ−１
α）等の細胞由来のプロモーターを用いればよい。例え
ば、ＳＶ４０のプロモーターを使用する場合は、Ｍｕｌ
ｌｉｇａｎ等の方法〔Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８
（１９７９）〕に従えば、容易に実施することができ
る。

【００３４】複製起源としては、ＳＶ４０ポリオーマウ
イルス、アデノウイルス、牛パピローマウイルス（ＢＰ
Ｖ）等の由来のものを用いることができ、選択マーカー
としては、ホスホトランスフェラーゼＡＰＨ（３′）Ｉ
ＩあるいはＩ（ｎｅｏ）遺伝子、チミジンキナーゼ（Ｔ
Ｋ）遺伝子、大腸菌キサンチン−グアニンホスホリボシ
ルトランスフェラーゼ（Ｅｃｏｇｐｔ）遺伝子、ジヒド
ロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子等を用いることがで
きる。

【００３５】宿主細胞として原核細胞を用いて目的の遺
伝子を形質発現させるには、宿主と適合し得る種由来の
レプリコン、すなわち複製起源及び調節配列を含んでい
るプラスミドベクターで宿主細胞を形質転換させればよ
い。また、ベクターは、形質転換細胞に表現形質（表現
型）の選択性を付与することができるマーカー遺伝子を
持つものが望ましい。例えば、大腸菌の場合には、それ
を宿主とするベクターであるｐＢＲ３２２を用いて形質
転換することができる〔Ｂｏｌｉｖｅｒ等，Ｇｅｎｅ，
２：９５（１９７５）〕。ｐＢＲ３２２は、アンピシリ
ン及びテトラサイクリン耐性の遺伝子を含んでおり、ど
ちらかの耐性を利用することによって形質転換細胞を同
定することができる。原核宿主細胞の遺伝子発現に必要
なプロモーターとしては、β−ラクタマーゼ遺伝子のプ
ロモーター〔Ｃｈａｎｇ等，Ｎａｔｕｒｅ，２７５：６
１５（１９７８）〕や、ラクトースプロモーター〔Ｇｏ
ｅｄｄｅｌ等，Ｎａｔｕｒｅ，２８１：５４４（１９７
９）〕、及びトリプトファンプロモーター〔Ｇｏｅｄｄ
ｅｌ等，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，８：４
０５７（１９８０）〕、ｔａｃプロモーター等があげら
れる。

【００３６】発現系に用いる宿主のうち、原核宿主細胞
としては、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓ）、バシラス・サーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）等があげられる。

【００３７】また、真核宿主細胞としては、例えば、サ
ッカロミセス・セレビシエー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）等の真核微生物があげら
れるほか、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムター卵巣（Ｃ
ＨＯ）細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、Ｈｅｌａ細
胞、ＢＨＫ細胞、ナマルバ細胞、ヒト胎児腎細胞（２９
３細胞）等のホ乳動物由来の細胞も用いることができ
る。尚、形質転換体の培養は、宿主細胞に適した培養条
件を適宜選択して行えばよい。

【００３８】上記形質転換体が産生するポリペプチドの
分離、精製の手段としては、通常の蛋白質で用いられる
方法を適用すればよく、例えば、モノクローナル抗体を
用いたアフィニティークロマトグラフィー等の各種クロ
マトグラフィー、限外ろ過、塩析、透析等も適宜選択、
組合わせれば、目的のポリペプチドを分離、精製するこ
とができる。

【００３９】本発明のＢＳＴ−１のマウスホモローグの
クローニング及びその解析結果について、以下の実施例
によって具体的に説明するが、本発明はこの実施例によ
って何ら限定されるものではない。

【００４０】

【実施例】

実施例１ １．材料と方法 （１）マウス：マウスは、すべて日本ＳＬＣ（浜松、日
本）から購入し、生後３−１２週で使用した。 （２）細胞株：使用したマウス細胞株は下記のとおりで
ある。 線維芽細胞株：Ｌ９２９、ＮＩＨ／３Ｔ３、Ｂａｌｂ／
３Ｔ３、Ｓｗｉｓｓ／３Ｔ３；間質細胞株：ＰＡ６
〔Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１１８，２３３−２
４０（１９８４）〕、ＳＴ２〔ＥＮＢＯ Ｊ．７，１３
３７−１３４３（１９８８）〕、ＢＭＳ１、ＢＭＳ２、
ＳＳ１〔Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８，８６３−
８７２（１９８８）〕；Ｂ細胞株：ＩＬ−３依存性プロ
Ｂ、ＢＡＦ／Ｂ０３；アベルソンウイルス形質転換プロ
／プレＢ、４０Ｅ、２−６−２、１８．８１〔Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１４５，１６０３−１６０８（１９９
０）〕；化学的に形質転換した後期プレＢ、７０／Ｚ
３；ホイットロック／ウィッティ（Ｗｈｉｔｌｏｃｋ／
Ｗｉｔｔｅ）培養から確立された後期プレＢ、１Ａ９
〔Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１，１４９−１６
１（１９９１）〕、ＤＷ３４〔Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１８，１７９７−１７７１（１９８８）〕；未熟
Ｂリンパ腫、ＷＥＨＩ２３１；白血病Ｂ細胞、ＢＣ
Ｌ₁ ；骨髄種：Ｐ３Ｕ１；Ｔリンパ腫：ＢＷ５１４７、
ＥＬ４；白血病骨髄球：ＷＥＨＩ３Ｂ；マクロファージ
細胞株：Ｊ７７４．

【００４１】（３）ｃＤＮＡライブラリーの構築：マウ
スｐｒｅ−Ｂ細胞株１８．８１から分離したポリ（Ａ）
⁺ ＲＮＡは、ｃＤＮＡ合成システム（ファルマシア、ス
ウェーデン）を使用して、ｄｓ ｃＤＮＡに転換され
た。ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩアダプターを取り付け、λｇ
ｔ１１のＥｃｏＲＩ部位にクローン化した。

【００４２】（４）ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニ
ング：マウスＢＳＴ−１ｃＤＮＡの一部を、ランダムプ
ライマー標識キット（ファルマシア）で［α−³²Ｐ］ｄ
ＣＴＰを標識したヒトＢＳＴ−１ｃＤＮＡのＢａｍＨＩ
−ＳａｌＩ（ヌクレオチド３６８−５５９）、ＳａｌＩ
−ＢｇｌＩＩ（ヌクレオチド５５９−７９６）、及びＢ
ｇｌＩＩ−ＰｓｔＩ（ヌクレオチド７９６−１１２７）
断片の混合物を使用して分離した。ハイブリダイゼーシ
ョンは、０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）、１ｍＭ
ＥＤＴＡ、７％ＳＤＳ、及び１％ウシ血清アルブミン
を含む緩衝液中で５５℃で行なった〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１，１９９１−１９９
５（１９８４）〕。濾過物を２×ＳＳＣ中で４回、５分
づつ室温にて洗浄し、２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で
３回、３０分づつ５５℃で洗浄した。

【００４３】（５）５′ＲＡＣＥ（Ｒａｐｉｄ ａｍｐ
ｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ）：
ＢＳＴ−１のマウスホモローグのｃＤＮＡの５´末端を
含むｃＤＮＡを分離するために、マウス脾臓５´ＲＡＣ
Ｅ−ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ（クロンテック、パロアル
ト、カリフォルニア）をＰＣＲにおける鋳型として使用
した。プライマリーＰＣＲ反応は、ＢＳＴ−１のマウス
ホモローグの特定のプライマーである、５′−ＧＴＴＡ
ＴＴＣＴＣＣＣＡＧＡＡＣＡＧＴＧＡＣＴＴＧＴＣＣ−
３´（ヌクレオチド３０１−３２８に相補的）とアンカ
ープライマーの５´−ＣＴＧＧＴＴＣＧＧＣＣＣＡＣＣ
ＴＣＴＧＡＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＡＴＣＧＡＴＡＧ−３
´で行なわれた。プライマリーＰＣＲ反応の１０分の１
稀釈が、遺伝子の特定のプライマーの５′−ＴＧＴＧＣ
ＡＧＴＴＴＴＴＧＴＴＣＣＣＣＡＧＧＣＴＣＡＧＣ−
３′（ヌクレオチド１７９−１９４に相補的）とアンカ
ープライマーによる第２のＰＣＲ反応において使用され
た。ＰＣＲ生成物は、ＥｃｏＲＩ／ＫｐｎＩで切断し、
ｐＵＣ１９のＥｃｏＲＩ／ＫｐｎＩ部位に挿入した。

【００４４】（６）ＤＮＡ配列の解析：ＤＮＡ配列は、
Ａ．Ｌ．Ｆ．ＤＮＡシークエンサー（ファルマシア）を
使って、ジデオキシチェインターミネーター法で行なわ
れた。配列データは、ジーンワークス２．３（インテリ
ジェンテティックス、マウンテンヴュー、カリフォルニ
ア）で解析した。

【００４５】（７）ノーザンブロット法及びサザンブロ
ット法による解析：全ＲＮＡは、組織と細胞株からＡＧ
ＰＣ法により調製された〔Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．
１６２，１５６−１５９（１９８７）〕。レインごとに
全ＲＮＡ１５μｇづつを、ホルムアルデヒドを含む１％
アガロースゲルで電気泳動させ、ジーンスクリーンプラ
ス膜（ＮＥＮリサーチプロダクツ、ボストン、マサチュ
ーセッツ）に移した。ブロットをランダムプライマー標
識の全長のＢＳＴ−１のマウスホモローグのプローブで
ハイブリダイズさせた。ＣＨＯ Ｂをコントロールとし
て使用した〔Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１，１４
０９−１４１８（１９９１）〕．ゲノムＤＮＡを肝臓か
らセパジーン（三光純薬、日本）を使って調製した。制
限エンドヌクレアーゼ切断ゲノムＤＮＡ５μｇを、０．
５％アガロースゲルで電気泳動させ、ジーンスクリーン
プラス膜に移した。

【００４６】２．解析結果 マウスｐｒｅ−Ｂ細胞株１８．８１のｃＤＮＡライブラ
リーの３×１０⁵ クローンからヒトＢＳＴ−１プローブ
でハイブリダイズさせた１２クローンを得た。これらの
クローンからの配列の分析結果は、それらがヒトＢＳＴ
−１ｃＤＮＡと相同性を持つものであることを示した。
このクローンは、全て５′末端を欠いていたので、５′
ＲＡＣＥ法を行なって、追加の１６ｂｐを含む５′ｃＤ
ＮＡクローンを得た。最長のｃＤＮＡ配列は、３１１ア
ミノ酸をコードする読み取り枠を含む１２６５ｂｐであ
った（図１）。

【００４７】疎水性アミノ酸は、残基１−２４において
豊富なので、この領域は、典型的なシグナルペプチドで
あると考えられる。ＢＳＴ−１のマウスホモローグは、
２３のアミノ酸からなる短いＣターミナル疎水性領域を
含み、ＢＳＴ−１のマウスホモローグの疎水性プロフィ
ールは、ＧＰＩアンカー型膜タンパク質であるヒトＢＳ
Ｔ−１のそれに非常に類似していて、ＢＳＴ−１のマウ
スホモローグもＧＰＩアンカー型膜タンパク質であるこ
とを示唆している。

【００４８】マウスＢＳＴ−１のマウスホモローグのア
ミノ酸配列は、ヒトＢＳＴ−１と高い相同性を示し（７
１％）、４つの潜在的なＮ−結合糖鎖部位が存在した。
ＢＳＴ−１のマウスホモローグは、ヒト及びマウスＣＤ
３８と３０％のアミノ酸同一性を示し、Ａｐｌｙｓｉａ
のＡＤＰリボシルサイクラーゼ〔Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１，５３２５−５３２９（１
９９４）〕と２５％の同一性を示した（図２）。

【００４９】タイプＩＩトランスメンブラン糖タンパク
質であるＣＤ３８は、細胞内カルシウムの移動を調整す
る細胞内の第２メッセンジャーであるサイクリックＡＤ
Ｐリボースの合成を触媒するＡＤＰリボシルサイクラー
ゼ活性を有する〔Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６２，１０５６−
１０５９（１９９３）、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ１
５，９５−９７（１９９４）〕。ＢＳＴ−１、ＣＤ３
８、Ａｐｌｙｓｉａのサイクラーゼのアミノ酸配列は、
１０個のシスチン残基が全て存在していることを示し
た。また、ＢＳＴ−１のマウスホモローグの１５１から
２２５のアミノ酸残基の配列は、これらの分子間で高度
に保存されていた。ヒトＢＳＴ−１は、サイクラーゼ活
性を有するので、サイクラーゼ活性とＢＳＴ−１のプレ
Ｂ細胞の増殖支持能の間の関係はまだ明確でないが、こ
の領域は、酵素活性にして重要であると考えられる。

【００５０】ＢＳＴ−１のマウスホモローグの遺伝子の
特性を明らかにするために、種々の系統のマウスのサザ
ンブロット解析を行なった結果、二つの対立遺伝子（Ｅ
ｃｏＲＩ切断の３．１ｋｂと３．０ｋｂのバンドとＨｉ
ｎｄＩＩＩの６．１ｋｂと６．０ｋｂのバンド）が観察
され、ＲＦＬＰが、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＺＢ対Ｃ５７ＢＬ
／６、Ａ／Ｊ、ＮＺＷ、ＭＲＬ／ｌｐｒ、ＢＸＳＢに見
い出された（図３）。ＤＢＡ／２及びＣＢＡ／Ｎ由来の
ＤＮＡは、ＢＡＬＢ／ｃ及びＣ５７ＢＬ／６のそれと、
各々同じパターンを示した。ＮＺＢ／ＷＦ１は、各々の
親系統に相当する制限断片を保有した。

【００５１】ＲＦＬＰの位置を詳細に同定するために、
ＥｃｏＲＩ又はＥｃｏＴ１４Ｉにより切断されたＤＮＡ
が、完全長のプローブか又はＢＳＴ−１のマウスホモロ
ーグのｃＤＮＡの５′末端ＥｃｏＲＩ−ＥｃｏＴ１４Ｉ
断片に相当する０．３ｋｂ断片でプローブされた。５′
プローブでハイブリダイズされたとき、ＲＦＬＰに原因
する唯一の断片が見い出された（図４、図５）。かくし
て、多形性部位をＢＳＴ−１のマウスホモローグの遺伝
子の５′領域にマッピングできた。このＢＳＴ−１のマ
ウスホモローグの遺伝子の多形性領域は、５′非コード
領域、エキソン、イントロンを含み得る。マウス系統間
のＢＳＴ−１ｍＲＮＡのサイズは、ノーザンブロット解
析では明らかに同じであったので、エキソンにはそれほ
ど差異はないと考えられる。

【００５２】ＢＳＴ−１のマウスホモローグの遺伝子の
５′非コード領域とイントロンの多形性は、ＢＳＴ−１
のマウスホモローグの遺伝子の発現のレベルの差異を生
じ得る。しかしながら、正常及び自己免疫傾向のマウス
を含む種々の系統におけるＲＦＬＰとＢＳＴ−１ｍＲＮ
Ａの発現レベルの間に相関は認められなかった。ＢＳＴ
−１のマウスホモローグの遺伝子の観察されたＲＦＬＰ
の生物学的意義はまだ明らかでない。サザンブロット解
析は、ＢＳＴ−１のマウスホモローグの遺伝子に相当す
る主要断片の他に、ＥｃｏＲＩ切断の３．３、２．４、
１．５ｋｂならびにＨｉｎｄＩＩＩ切断の４．６、１．
９ｋｂとして見られる弱いバンドを示し、このことは、
別のＢＳＴ−１ファミリー遺伝子の存在を示唆している
（図３）。

【００５３】組織のノーザンブロット解析の結果は、Ｂ
ＳＴ−１のマウスホモローグのｍＲＮＡには２．５ｋｂ
ｐと１．３ｋｂｐのサイズをもつ２種類が存在すること
を示した（図４）。後者のサイズは、クローン化ｃＤＮ
Ａのそれと一致していた。ＢＳＴ−１のマウスホモロー
グのｍＲＮＡは、骨髄、肺、腎臓、脾臓、心臓、胸腺に
発現したが、脳、肝臓、骨格筋肉には発現しなかった
（図４）。脳、肺、肝臓、腎臓、骨格筋肉におけるＢＳ
Ｔ−１のマウスホモローグの発現パターンは、ヒトＢＳ
Ｔ−１の場合〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ９１，５３２５−５３２９（１９９４）〕と
類似していた。リンパ系器官においては、ＢＳＴ−１の
マウスホモローグのｍＲＮＡは、骨髄で最も豊富に発現
した。

【００５４】次に、種々な細胞株でＢＳＴ−１のマウス
ホモローグのｍＲＮＡの発現を調べた結果を示す（図
５）。ＢＳＴ−１のマウスホモローグのｍＲＮＡは、脊
髄細胞株のＪ７７４、ＷＥＨＩ３Ｂと、アベルソンウイ
ルス転換プロ／プレＢ細胞株の４０Ｅ、２−６−２、１
８．８１と、Ｂ細胞白血病細胞株のＢＣＬ１に発現し
た。二つの後期プレＢ細胞株のＤＷ３４と１Ａ９は、長
期骨髄培養から間質細胞依存性に樹立したものである
が、著しい対照を示した。間質細胞に依存して増殖する
ＤＷ３４は、ＢＳＴ−１を発現しなかった。一方、高細
胞濃度で間質細胞なしで増殖できる１Ａ９細胞は、ＢＳ
Ｔ−１を発現していた。線維芽細胞株では、Ｓｗｉｓｓ
／３Ｔ３のみがＢＳＴ−１を弱く発現した。

【００５５】ヒトＢＳＴ−１は、間質細胞依存プレＢ細
胞株のＤＷ３４〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ９１，５３２５−５３２９（１９９４）〕の
増殖を促す間質細胞表面分子と確認された。しかしなが
ら、ＢＳＴ−１のマウスホモローグは、調べた限りにお
いては種々のマウス間質細胞株には発現せず、ＳＴ２と
ＰＡ６は、いずれもプレＢ細胞株、ＤＷ３４の増殖を支
持することができるが、ＢＳＴ−１を発現しなかった。
ＢＳＴ−１のマウスホモローグは、初期Ｂ系細胞株では
発現したが、ヒトにおいては、調べた限り、ＢＳＴ−１
は、リンパ系細胞株ではほとんど発現せず、いくつかの
間質細胞株で発現した。しかしながら、ＢＳＴ−１を発
現しない間質細胞株もあった〔Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１，５３２５−５３２９（１
９９４）〕。

【００５６】解析の結果は、ＢＳＴ−１の発現パターン
は、ヒトとマウスでは異なることを示唆しているともい
える。あるいは、ＢＳＴ−１のマウスホモローグのｍＲ
ＮＡは、骨髄で豊富に発現した以上、骨髄における脊髄
系細胞と同様に、間質細胞もマウスにおいてＢＳＴ−１
を発現するはずであるが、この可能性はまだ検討中であ
る。仮りにそうであれば、マウスとヒトにおけるＢＳＴ
−１発現の明らかな相違は、ＢＳＴ−１にポジティブな
間質細胞とネガィブな間質細胞のセットの存在ならびに
この発明で調べた特定の形質転換マウスＢ前駆細胞株に
おけるＢＳＴ−１の異常な発現の存在のためともいえ
る。

【００５７】他の可能性として、ＢＳＴ−１ファミリー
を異なる発現パターンでコードする二つの遺伝子がある
ことで、一つはＢＳＴ−１αをコードし、もう一つはＢ
ＳＴ−１βをコードする。この可能性は、サザンブロッ
ト解析で見い出された弱いバンドの存在で支持された。
更に、ヒトにおけるＢＳＴ−１遺伝子と相同の別の遺伝
子の存在を観察したが、それは、ヒトＢＳＴ−１遺伝子
がマッピングされている染色体１４ｑ３２．３以外の因
子座に位置すると考えられる。そうであれば、以前に報
告したヒトＢＳＴ−１がＢＳＴ−１αであるとすると、
ヒトＢＳＴ−１βのマウスホモローグをコードするｃＤ
ＮＡをクローン化したと考えられる。いずれにしても、
ＢＳＴ−１の発現と機能の全体図を理解するためには、
推定されるマウスＢＳＴ−１αのマウスホモローグのｃ
ＤＮＡをクローン化することが必須である。

【００５８】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明は、ヒトＢ
ＳＴ−１のマウスホモローグのポリペプチドをコードす
る遺伝子、及び該ヒトＢＳＴ−１のマウスホモローグの
ポリペプチドのアミノ酸配列に関するものであり、本発
明の遺伝子は、慢性関節リウマチ（ＲＡ）患者や多発性
骨髄腫（ＭＭ）患者の骨髄細胞や滑膜細胞上のプレＢ細
胞増殖支持能を亢進する骨髄間質細胞膜蛋白質のヒトＢ
ＳＴ−１のマウスホモローグのポリペプチドをコードす
る。

【００５９】本発明の遺伝子を適当なベクターに挿入し
た後、常用の宿主細胞を形質転換することにより、大量
に均一なＢＳＴ−１のマウスホモローグを製造すること
が可能であり、このことから、遺伝学的に解明されてい
るマウス系を利用することが可能となり、本発明によ
り、前記ＢＳＴ−１の機能、特にその生体内機能を研
究、解明するのに有利なマウス系を確立することが可能
である。

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：３１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Ala Val Gln Gly Gly Leu Leu Ser Leu Trp Leu Trp Leu Trp Leu 5 10 15 Ser Leu Leu Thr Val Leu Leu Gly Ala Arg Ala Arg Trp Arg Gly Glu 20 25 30 Gly Thr Thr Pro His Leu Gln Ser Ile Phe Leu Gly Arg Cys Ala Glu 35 40 45 Tyr Thr Thr Leu Leu Ser Leu Gly Asn Lys Asn Cys Thr Ala Ile Trp 50 55 60 Glu Ala Phe Lys Gly Val Leu Asp Lys Asp Pro Cys Ser Val Leu Pro 65 70 75 80 Ser Asp Tyr Asp Leu Phe Ile Asn Leu Ser Arg His Pro Ile Pro Arg 85 90 95 Asp Lys Ser Leu Phe Trp Glu Asn Asn His Leu Leu Val Met Ser Tyr 100 105 110 Gly Glu Asn Thr Arg Arg Leu Val Ala Leu Cys Asp Val Leu Tyr Gly 115 120 125 Lys Val Gly Asp Phe Leu Ser Trp Cys Arg Gln Glu Asn Ala Ser Gly 130 135 140 Leu Asp Tyr Gln Ser Cys Pro Thr Ser Glu Asp Cys Glu Asn Asn Ala 145 150 155 160 Val Asp Ser Tyr Trp Lys Ser Ala Ser Met Gln Tyr Ser Arg Asp Ser 165 170 175 Ser Gly Val Ile Asn Val Met Leu Asn Gly Ser Glu Pro Lys Gly Ala 180 185 190 Tyr Pro Thr Arg Gly Phe Phe Ala Asp Phe Glu Ile Pro Tyr Leu Gln 195 200 205 Lys Asp Lys Val Thr Arg Ile Glu Ile Trp Val Met His Asp Val Gly 210 215 220 Gly Pro Asn Val Glu Ser Cys Gly Glu Gly Ser Val Lys Ile Leu Glu 225 230 235 240 Asp Arg Leu Glu Ala Leu Gly Phe Gln His Ser Cys Ile Asn Asp Tyr 245 250 255 Arg Pro Val Lys Phe Leu Met Cys Val Asp His Ser Thr His Pro Asp 260 265 270 Cys Ile Met Asn Ser Ala Ser Ala Ser Met Arg Arg Glu Ser Ala Ser 275 280 285 Leu His Ala Ile Gly Asp Ala Ser Leu Leu Ile Ser Leu Leu Val Ala 290 295 300 Leu Ala Ser Ser Ser Gln Ala 305 310 配列番号：２ 配列の長さ：１２６５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列の特徴 特徴を表す記号：ｓｉｇ ｐｅｐｔｉｄｅ 存在位置：１．．８５ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ATCAAAGTTC TTG ATG GCT GTC CAG GGA GGC CTG TTG TCT CTG TGG CTG 49 TGG CTA TGG CTG TCC TTG CTG ACA GTG CTG CTG GGG GCA AGA GCG CGG 97 TGG AGA GGG GAG GGT ACC ACT CCT CAC CTC CAG AGC ATC TTC CTG GGC 145 CGC TGC GCA GAG TAC ACC ACG CTG CTG AGC CTG GGG AAC AAA AAC TGC 193 ACA GCC ATC TGG GAG GCC TTC AAG GGG GTG CTG GAC AAG GAC CCC TGC 241 TCT GTG CTC CCC TCA GAC TAT GAT CTC TTC ATT AAC CTC TCC AGG CAC 289 CCC ATT CCT AGG GAC AAG TCA CTG TTC TGG GAG AAT AAC CAC CTG CTC 337 GTT ATG AGC TAT GGG GAG AAC ACC CGC CGC CTC GTG GCC CTG TGC GAC 385 GTG CTG TAT GGC AAA GTT GGC GAT TTC TTG AGC TGG TGT CGA CAG GAA 433 AAT GCC TCT GGA CTT GAC TAC CAG TCC TGC CCC ACA TCA GAA GAC TGT 481 GAA AAC AAC GCC GTG GAC TCC TAT TGG AAA AGT GCA TCC ATG CAG TAT 529 TCA AGA GAC AGT TCA GGG GTG ATC AAC GTC ATG CTG AAT GGC TCG GAG 577 CCA AAA GGA GCC TAT CCC ACG AGA GGG TTT TTT GCA GAT TTT GAA ATC 625 CCG TAC TTA CAA AAG GAT AAA GTC ACA AGA ATA GAG ATC TGG GTT ATG 673 CAT GAC GTT GGA GGG CCC AAT GTG GAA TCC TGT GGC GAA GGC AGT GTG 721 AAA ATC CTG GAA GAC AGA TTG GAG GCC CTG GGG TTC CAG CAC AGC TGT 769 ATC AAT GAC TAC CGA CCA GTG AAG TTC TTA ATG TGT GTG GAC CAC AGC 817 ACT CAC CCC GAC TGT ATC ATG AAC TCA GCC TCA GCA TCT ATG CGG AGG 865 GAG AGC GCA TCT CTT CAT GCA ATA GGA GAC GCC AGC CTT CTC ATT TCT 913 CTC TTA GTA GCT TTG GCT TCA AGT TCT CAG GCG TGACTAGAAA ATCCCCACAG 966 GGTTCTAACA GAAGCCAGCC TTGCAGCAAC CCTTGAGTAG TCCACTGTCC TGTGTAAACT 1026 AAGGAAACCC ACTGTCTCAA GACAAACCCT TCTAGAAAAA CAATGTAACC AGACGGTAAT 1086 CCAGTTGTAT TTACACTCAT GATTCAAGAA ACAAGGCATT CATCTAGTCC TGCTTAGCAG 1146 ACAGAAGTTG CTACTGTGGA GTTAAAGTTA TTATCTCTTA TTTGATAATG GTACAAAGCA 1206 CTGAGACCTG GAGAATAGTT TAATCTTAAA TAATTAAATG TATTTATGGA AAAAAAAAA 1265

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のＢＳＴ−１ｃＤＮＡマウスホモローグ
の遺伝子配列及び決定されたアミノ酸配列を示す。推定
のＮ−及びＣ−末端の疎水性領域は、─── 及び──
─で、各々、示される。＊は、潜在的なＮ−結合糖鎖部
位を示す。

【図２】本発明のマウスホモローグ（ｍｕｒｉｎｅ Ｂ
ＳＴ−１）とヒトＢＳＴ−１，ＣＤ３８，Ａｐｌｙｓｉ
ａＡＤＰ−リボシルサイクラーゼの相同性の比較を示
す。ＢＳＴ−１マウスホモローグと他のものの間の２以
上の同一アミノ酸は線で囲んである。一致性（ｃｏｎｓ
ｅｎｓｕｓ）は、全ての中の３以上のアミノ酸を示す。
存在するシステイン残基は＊でマークされている。

【図３】ＢＳＴ−１マウスホモローグの遺伝子座におけ
るＲＦＬＰを電気泳動図により示す。サザンブロット解
析は、各種のマウス系統の肝臓から得られた染色体ＤＮ
Ａについて実施した。ＤＮＡは、ＥｃｏＲＩ又はＨｉｎ
ｄＩＩＩで切断した。全長１．３ＫｂのＢＳＴ−１マウ
スホモローグｃＤＮＡのプローブを、ＢＳＴ−１遺伝子
座を見つけるのに使用した。

【図４】ＢＳＴ−１マウスホモローグの遺伝子座におけ
るＲＦＬＰを電気泳動図により示す。サザンブロット解
析は、各種のマウス系統の肝臓から得られた染色体ＤＮ
Ａについて実施した。ＤＮＡは、ＥｃｏＲＩ又はＥｃｏ
Ｔ１４Ｉで切断した。全長１．３ＫｂのＢＳＴ−１マウ
スホモローグｃＤＮＡのプローブを、ＢＳＴ−１遺伝子
座を見つけるのに使用した。

【図５】ＢＳＴ−１マウスホモローグの遺伝子座におけ
るＲＦＬＰを電気泳動図により示す。サザンブロット解
析は、各種のマウス系統の肝臓から得られた染色体ＤＮ
Ａについて実施した。ＤＮＡは、ＥｃｏＲＩ又はＥｃｏ
Ｔ１４Ｉで切断した。ＢＳＴ−１マウスホモローグｃＤ
ＮＡの５′末端に相当する０．３ＫｂのＥｃｏＲＩ−Ｅ
ｃｏＴ１４Ｉフラグメントを、ＢＳＴ−１遺伝子座を見
つけるのに使用した。

【図６】ＢＳＴ−１マウスホモローグｍＲＮＡのノーザ
ンブロット解析を示す。マウス組織中のＢＳＴ−１ｍＲ
ＮＡの発現を表わす。ＢＡＬＢ／ｃマウス組織から分離
した全ＲＮＡを解析した。ブロットは、完全長のＢＳＴ
−１マウスホモローグｃＤＮＡのプローブでハイブリダ
イズした。同じフィルターをＣＨＯ Ｂプローブで再ハ
イブリダイズした。サイズマーカーはマウス２８Ｓ及び
１８ＳのリボゾームＲＮＡである。Ｓｋｅｌｅｔａｌ：
骨格筋、ＢＭ：骨髄。

【図７】ＢＳＴ−１マウスホモローグｍＲＮＡのノーザ
ンブロット解析を示す。各種の細胞株におけるＢＳＴ−
１マウスホモローグｍＲＮＡの発現を表わす。全ＲＮＡ
は、細胞株から分離され、完全長のＢＳＴ−１マウスホ
モローグｃＤＮＡとハイブリダイズした。Ｆ：線維芽細
胞株、Ｓ：間質細胞株、Ｂ：Ｂ系細胞株、Ｔ：Ｔ系細胞
株、Ｍ：骨髄細胞株。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 骨髄間質細胞膜蛋白質のヒトＢＳＴ−１
   のマウスホモローグのポリペプチドをコードするＤＮ
   Ａ。
2. 【請求項２】 ポリペプチドが、配列表の配列番号１に
   示すアミノ酸配列又はその一部を有するポリペプチドで
   あることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡ。
3. 【請求項３】 配列表の配列番号２に示す塩基配列、又
   はこれを一部置換、欠除もしくは付加した塩基配列にハ
   イブリダイズする塩基配列を有する請求項１に記載のＤ
   ＮＡ。