JPH0899902A - Ｉｌ−６レセプター抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤 - Google Patents
Ｉｌ−６レセプター抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤Info
- Publication number
- JPH0899902A JPH0899902A JP25965494A JP25965494A JPH0899902A JP H0899902 A JPH0899902 A JP H0899902A JP 25965494 A JP25965494 A JP 25965494A JP 25965494 A JP25965494 A JP 25965494A JP H0899902 A JPH0899902 A JP H0899902A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- myeloma cells
- cells
- immature
- therapeutic agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 新規な、未熟型骨髄腫細胞治療剤の提供。
【構成】 インターロイキン−６レセプター抗体を有効
成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤。
成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はインターロイキン６レセ
プター抗体を有効成分とする化学療法剤抵抗性である未
熟型骨髄腫細胞治療剤に関する。
プター抗体を有効成分とする化学療法剤抵抗性である未
熟型骨髄腫細胞治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】骨髄腫は形質細胞が悪性化した腫瘍で、
骨髄を増殖の場として複数の部位で発生する腫瘍であ
る。骨髄腫細胞の主要な増殖因子として、インターロイ
キン６（ＩＬ−６）が有力な候補として考えられている
（Ｋａｗａｎｏら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２，８３，１９
８８：Ｋｌｃｉｎら、Ｂｌｏｏｄ，７３，５１７，１９
８９）。
骨髄を増殖の場として複数の部位で発生する腫瘍であ
る。骨髄腫細胞の主要な増殖因子として、インターロイ
キン６（ＩＬ−６）が有力な候補として考えられている
（Ｋａｗａｎｏら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２，８３，１９
８８：Ｋｌｃｉｎら、Ｂｌｏｏｄ，７３，５１７，１９
８９）。
【０００３】ＩＬ−６はＢ細胞刺激因子２あるいはイン
ターフェロンβ２等と呼称されたサイトカインである。
ＩＬ−６はＢリンパ球系細胞の活性化に関与する分化因
子として発見され（Ｈｉｒａｎｏら、Ｎａｔｕｒｅ，３
２４，７３，１９８６）、その後種々の細胞の機能に影
響を及ぼす多機能サイトカインであることが明らかとな
った（Ａｋｉｒａら、Ａｄｖ，ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ，５４，１，１９９３）。
ターフェロンβ２等と呼称されたサイトカインである。
ＩＬ−６はＢリンパ球系細胞の活性化に関与する分化因
子として発見され（Ｈｉｒａｎｏら、Ｎａｔｕｒｅ，３
２４，７３，１９８６）、その後種々の細胞の機能に影
響を及ぼす多機能サイトカインであることが明らかとな
った（Ａｋｉｒａら、Ａｄｖ，ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ，５４，１，１９９３）。
【０００４】ＩＬ−６は、細胞上で二種のタンパク質を
介してその生物学的活性を伝達する。一つは、ＩＬ−６
が結合する分子量約８０ＫＤのリガンド結合性タンパク
質、ＩＬ−６レセプター（ＩＬ−６Ｒ）である。ＩＬ−
６Ｒは、細胞膜を貫通して細胞膜上に発現する膜結合型
の他に、主にその細胞外領域からなる可溶性ＩＬ−６Ｒ
（ｓＩＬ−６Ｒ）として存在する。もう一つは非リガン
ド結合性のシグナル伝達に係わる分子量約１３０ＫＤの
ｇｐ１３０である。ＩＬ−６とＩＬ−６ＲはＩＬ−６／
ＩＬ−６Ｒ複合体を形成し、次いでもう一つの膜タンパ
ク質ｇｐ１３０と結合することにより、ＩＬ−６の生物
学的活性が細胞に伝達される（Ｔａｇａら、Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１９６：９６７，１９８７）。
介してその生物学的活性を伝達する。一つは、ＩＬ−６
が結合する分子量約８０ＫＤのリガンド結合性タンパク
質、ＩＬ−６レセプター（ＩＬ−６Ｒ）である。ＩＬ−
６Ｒは、細胞膜を貫通して細胞膜上に発現する膜結合型
の他に、主にその細胞外領域からなる可溶性ＩＬ−６Ｒ
（ｓＩＬ−６Ｒ）として存在する。もう一つは非リガン
ド結合性のシグナル伝達に係わる分子量約１３０ＫＤの
ｇｐ１３０である。ＩＬ−６とＩＬ−６ＲはＩＬ−６／
ＩＬ−６Ｒ複合体を形成し、次いでもう一つの膜タンパ
ク質ｇｐ１３０と結合することにより、ＩＬ−６の生物
学的活性が細胞に伝達される（Ｔａｇａら、Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１９６：９６７，１９８７）。
【０００５】Ｋａｗａｎｏらは、ＶＬＡ（ｖｅｒｙ ｌ
ａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ）−５
あるいはＭＰＣ（ｍａｔｕｒｅ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌ
ｌ）−１（Ｈｕａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ８２，３７２
１，１９９３、特開平６−８６６８８）等の骨髄腫細胞
上の表面抗原により、骨髄腫細胞がＶＬＡ−５陰
性（-）ＭＰＣ−１- の未熟型骨髄腫細胞、ＶＬＡ−５
- ＭＰＣ−１陽性（+ ）の中間型骨髄腫細胞およびＶＬ
Ａ−５+ ＭＰＣ−１+ 成熟型骨髄腫細胞に分けられるこ
とを報告した（Ｂｌｏｏｄ，８２，５６４，１９９
３）。
ａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ）−５
あるいはＭＰＣ（ｍａｔｕｒｅ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌ
ｌ）−１（Ｈｕａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ８２，３７２
１，１９９３、特開平６−８６６８８）等の骨髄腫細胞
上の表面抗原により、骨髄腫細胞がＶＬＡ−５陰
性（-）ＭＰＣ−１- の未熟型骨髄腫細胞、ＶＬＡ−５
- ＭＰＣ−１陽性（+ ）の中間型骨髄腫細胞およびＶＬ
Ａ−５+ ＭＰＣ−１+ 成熟型骨髄腫細胞に分けられるこ
とを報告した（Ｂｌｏｏｄ，８２，５６４，１９９
３）。
【０００６】また、このうち未熟型骨髄腫細胞が、化学
療法剤に治療抵抗性を示す細胞集団の主体であることが
知られている（Ｋａｗａｎｏら、第５６回日本血液学会
総会要旨集、２６１頁、６４１，１９９４）。これま
で、ＩＬ−６Ｒ抗体を加えることにより、一般的に骨髄
腫細胞の増殖が抑制されること（Ｇｏｔｏら、Ｂｉｏｔ
ｈｅｒａｐｙ ７，６５５，１９９３）およびＩＬ−６
が未熟型骨髄腫細胞の増殖を刺激すること（Ｋａｗａｎ
ｏら、Ｂｌｏｏｄ，８２，５６４，１９９３）が知られ
ていた。
療法剤に治療抵抗性を示す細胞集団の主体であることが
知られている（Ｋａｗａｎｏら、第５６回日本血液学会
総会要旨集、２６１頁、６４１，１９９４）。これま
で、ＩＬ−６Ｒ抗体を加えることにより、一般的に骨髄
腫細胞の増殖が抑制されること（Ｇｏｔｏら、Ｂｉｏｔ
ｈｅｒａｐｙ ７，６５５，１９９３）およびＩＬ−６
が未熟型骨髄腫細胞の増殖を刺激すること（Ｋａｗａｎ
ｏら、Ｂｌｏｏｄ，８２，５６４，１９９３）が知られ
ていた。
【０００７】しかしながら、これら知見は骨髄腫細胞の
増殖を指標としており、骨髄腫の治療において重要であ
ると考えられている化学療法剤抵抗性の主体をなす未熟
型骨髄腫細胞の根絶を示唆するものではなかった。ま
た、これまでＩＬ−６Ｒ抗体が未熟型骨髄腫細胞の根本
的な治療剤に有用であるかについてはなんらデータもな
く、未熟型骨髄腫細胞の生存自体に直接関与しているか
否かは依然として不明であった。
増殖を指標としており、骨髄腫の治療において重要であ
ると考えられている化学療法剤抵抗性の主体をなす未熟
型骨髄腫細胞の根絶を示唆するものではなかった。ま
た、これまでＩＬ−６Ｒ抗体が未熟型骨髄腫細胞の根本
的な治療剤に有用であるかについてはなんらデータもな
く、未熟型骨髄腫細胞の生存自体に直接関与しているか
否かは依然として不明であった。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】化学療法剤抵抗性の主
体をなす未熟型骨髄腫細胞に対し、これまでその根本的
な治療に有効である薬剤は見出されておらず、未熟型骨
髄腫細胞を根絶する効果を有する薬剤の登場が待たれて
いた。従って本発明は未熟型骨髄腫細胞に対する治療剤
を提供しようするものである。
体をなす未熟型骨髄腫細胞に対し、これまでその根本的
な治療に有効である薬剤は見出されておらず、未熟型骨
髄腫細胞を根絶する効果を有する薬剤の登場が待たれて
いた。従って本発明は未熟型骨髄腫細胞に対する治療剤
を提供しようするものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究した結果、ＩＬ−６Ｒ抗体が化学
療法剤抵抗性の主体をなす未熟型骨髄腫細胞の生存を阻
害することを見出し、本発明を完成させた。すなわち、
本発明は、未熟型骨髄腫細胞を根本的に治療する新しい
未熟型骨髄腫細胞治療剤を提供するものである。より詳
しくは、本発明はＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする未熟
型骨髄腫細胞の生存阻害作用を有する未熟型骨髄腫細胞
治療剤を提供する。さらに詳しくは、本発明はＩＬ−６
Ｒ抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞の生存阻害剤
を提供する。
を達成すべく鋭意研究した結果、ＩＬ−６Ｒ抗体が化学
療法剤抵抗性の主体をなす未熟型骨髄腫細胞の生存を阻
害することを見出し、本発明を完成させた。すなわち、
本発明は、未熟型骨髄腫細胞を根本的に治療する新しい
未熟型骨髄腫細胞治療剤を提供するものである。より詳
しくは、本発明はＩＬ−６Ｒ抗体を有効成分とする未熟
型骨髄腫細胞の生存阻害作用を有する未熟型骨髄腫細胞
治療剤を提供する。さらに詳しくは、本発明はＩＬ−６
Ｒ抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞の生存阻害剤
を提供する。
【００１０】
【具体的な説明】本発明で使用されるＩＬ−６レセプタ
ー抗体は、未熟型骨髄腫細胞のＩＬ−６によるシグナル
伝達を遮断し、ＩＬ−６の生物学的活性を阻害するもの
であれば、その由来および種類（モノクローナル、ポリ
クローナル）を問わないが、特に哺乳動物由来のモノク
ローナル抗体が好ましい。この抗体はＩＬ−６Ｒと結合
することにより、ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒの結合を阻害し
て、ＩＬ−６のシグナル伝達を遮断し、ＩＬ−６の生物
学的活性を阻害する抗体である。
ー抗体は、未熟型骨髄腫細胞のＩＬ−６によるシグナル
伝達を遮断し、ＩＬ−６の生物学的活性を阻害するもの
であれば、その由来および種類（モノクローナル、ポリ
クローナル）を問わないが、特に哺乳動物由来のモノク
ローナル抗体が好ましい。この抗体はＩＬ−６Ｒと結合
することにより、ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒの結合を阻害し
て、ＩＬ−６のシグナル伝達を遮断し、ＩＬ−６の生物
学的活性を阻害する抗体である。
【００１１】モノクローナル抗体の産生細胞の動物種は
哺乳類であれば特に制限されず、ヒト抗体またはヒト以
外の哺乳動物由来であってよい。ヒト以外の哺乳動物由
来のモノクローナル抗体としては、その作成の簡便さか
らウサギあるいはげっ歯類由来のモノクローナル抗体が
好ましい。げっ歯類としては、特に制限されないが、マ
ウス、ラット、ハムスターなどが好ましく例示される。
哺乳類であれば特に制限されず、ヒト抗体またはヒト以
外の哺乳動物由来であってよい。ヒト以外の哺乳動物由
来のモノクローナル抗体としては、その作成の簡便さか
らウサギあるいはげっ歯類由来のモノクローナル抗体が
好ましい。げっ歯類としては、特に制限されないが、マ
ウス、ラット、ハムスターなどが好ましく例示される。
【００１２】このようなＩＬ−６レセプター抗体として
は、ＰＭ−１抗体（Ｈｉｒａｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４３：２９００−２９０６，１９８９），ＡＵＫ
１２−２０抗体、ＡＵＫ６４−７抗体あるいはＡＵＫ１
４６−１５抗体（国際特許出願公開番号ＷＯ９２−１９
７５９）などが挙げられる。モノクローナ抗体は、基本
的には公知技術を使用し、以下のようにして作成でき
る。すなわち、ＩＬ−６Ｒを感作抗原として使用して、
これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免
疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合
させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナル
な抗体産生細胞をスクリーニングすることによって作成
できる。
は、ＰＭ−１抗体（Ｈｉｒａｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４３：２９００−２９０６，１９８９），ＡＵＫ
１２−２０抗体、ＡＵＫ６４−７抗体あるいはＡＵＫ１
４６−１５抗体（国際特許出願公開番号ＷＯ９２−１９
７５９）などが挙げられる。モノクローナ抗体は、基本
的には公知技術を使用し、以下のようにして作成でき
る。すなわち、ＩＬ−６Ｒを感作抗原として使用して、
これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免
疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合
させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナル
な抗体産生細胞をスクリーニングすることによって作成
できる。
【００１３】より具体的には、モノクローナル抗体を作
成するには次のようにすればよい。例えば、前記感作抗
原としては、欧州特許出願公開番号ＥＰ３２５４７４号
に開示されたヒトＩＬ−６Ｒの遺伝子配列を用いること
によって得られる。ヒトＩＬ−６Ｒの遺伝子配列を公知
の発現ベクター系に挿入して適当な宿主細胞を形質転換
させた後、その宿主細胞中または、培養上清中から目的
のＩＬ−６Ｒタンパク質を精製し、この精製ＩＬ−６Ｒ
タンパク質を感作抗原として用いればよい。
成するには次のようにすればよい。例えば、前記感作抗
原としては、欧州特許出願公開番号ＥＰ３２５４７４号
に開示されたヒトＩＬ−６Ｒの遺伝子配列を用いること
によって得られる。ヒトＩＬ−６Ｒの遺伝子配列を公知
の発現ベクター系に挿入して適当な宿主細胞を形質転換
させた後、その宿主細胞中または、培養上清中から目的
のＩＬ−６Ｒタンパク質を精製し、この精製ＩＬ−６Ｒ
タンパク質を感作抗原として用いればよい。
【００１４】ＩＬ−６Ｒは細胞膜上に発現しているもの
の他に細胞膜より離脱している可能性のもの（ｓＩＬ−
６Ｒ）が抗原として使用できる。ｓＩＬ−６Ｒは細胞膜
に結合しているＩＬ−６Ｒの主に細胞外領域から構成さ
れており、細胞膜貫通領域あるいは細胞膜貫通領域と細
胞内領域が欠損している点で膜結合型ＩＬ−６Ｒと異な
っている。感作抗原で免疫される哺乳動物としては、特
に限定されるものではないが、細胞融合に使用する親細
胞との適合性を考慮して選択するのが好ましく、一般的
にはマウス、ラット、ハムスター、ウサギ等が使用され
る。
の他に細胞膜より離脱している可能性のもの（ｓＩＬ−
６Ｒ）が抗原として使用できる。ｓＩＬ−６Ｒは細胞膜
に結合しているＩＬ−６Ｒの主に細胞外領域から構成さ
れており、細胞膜貫通領域あるいは細胞膜貫通領域と細
胞内領域が欠損している点で膜結合型ＩＬ−６Ｒと異な
っている。感作抗原で免疫される哺乳動物としては、特
に限定されるものではないが、細胞融合に使用する親細
胞との適合性を考慮して選択するのが好ましく、一般的
にはマウス、ラット、ハムスター、ウサギ等が使用され
る。
【００１５】感作抗原を動物に免疫するには、公知の方
法にしたがって行われる。例えば、一般的方法として、
感作抗原を哺乳動物に腹腔内または、皮下に注射するこ
とにより行われる。具体的には、感作抗原をＰＢＳ（Ｐ
ｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ）
や生理食塩水等で適当量に希釈、懸濁したものを所望に
より通常のアジュバント、例えば、フロイント完全アジ
ュバントを適量併用して、哺乳動物に４−２１日毎に数
回投与するのが好ましい。また、感作抗原免疫時に適当
な担体を使用することができる。
法にしたがって行われる。例えば、一般的方法として、
感作抗原を哺乳動物に腹腔内または、皮下に注射するこ
とにより行われる。具体的には、感作抗原をＰＢＳ（Ｐ
ｈｏｓｐｈａｔｅ−Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ）
や生理食塩水等で適当量に希釈、懸濁したものを所望に
より通常のアジュバント、例えば、フロイント完全アジ
ュバントを適量併用して、哺乳動物に４−２１日毎に数
回投与するのが好ましい。また、感作抗原免疫時に適当
な担体を使用することができる。
【００１６】このように免疫し、血清中に所望の抗体レ
ベルが上昇するのを確認した後に、哺乳動物から免疫細
胞が取り出され、細胞融合に付されるが、好ましい免疫
細胞としては、特に脾細胞が挙げられる。前記免疫細胞
と融合される他方の親細胞としての哺乳動物のミエロー
マ細胞は、すでに、公知の種々の細胞株、例えば、Ｐ３
（Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３）（Ｊ．Ｉｍｍｎｏｌ．１
２３：１５４８，１９７８），ｐ３−Ｕ１（Ｃｕｒｒｅ
ｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏ−ｂｉｏｌｏｇ
ｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８１：１−７，１
９７８），ＮＳ−１（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
６：５１１−５１９，１９７６），ＭＰＣ−１１（Ｃｅ
ｌｌ，８：４０５−４１５，１９７６）：ＳＰ２／０
（Ｎａｔｕｒｅ，２７６：２６９−２７０，１９７
８），ＦＯ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．３５：１
−２１，１９８０），Ｓ１９４（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．
１４８：３１３−３２３，１９７８），Ｒ２１０（Ｎａ
ｔｕｒｅ，２７７：１３１−１３３，１９７９）等が好
適に使用される。
ベルが上昇するのを確認した後に、哺乳動物から免疫細
胞が取り出され、細胞融合に付されるが、好ましい免疫
細胞としては、特に脾細胞が挙げられる。前記免疫細胞
と融合される他方の親細胞としての哺乳動物のミエロー
マ細胞は、すでに、公知の種々の細胞株、例えば、Ｐ３
（Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３）（Ｊ．Ｉｍｍｎｏｌ．１
２３：１５４８，１９７８），ｐ３−Ｕ１（Ｃｕｒｒｅ
ｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏ−ｂｉｏｌｏｇ
ｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８１：１−７，１
９７８），ＮＳ−１（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
６：５１１−５１９，１９７６），ＭＰＣ−１１（Ｃｅ
ｌｌ，８：４０５−４１５，１９７６）：ＳＰ２／０
（Ｎａｔｕｒｅ，２７６：２６９−２７０，１９７
８），ＦＯ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．３５：１
−２１，１９８０），Ｓ１９４（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．
１４８：３１３−３２３，１９７８），Ｒ２１０（Ｎａ
ｔｕｒｅ，２７７：１３１−１３３，１９７９）等が好
適に使用される。
【００１７】前記免疫細胞とミエローマ細胞との細胞融
合は基本的には公知の方法、たとえば、ミルステインら
の方法（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌ．７３：３−４６，１９８１）等に準じて行う
ことができる。より具体的には、前記細胞融合は例え
ば、細胞融合促進剤の存在下に通常の栄養培養中で実施
される。融合促進剤としては例えば、ポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）、センダイウィルス（ＨＶＪ）等が使
用され、更に所望により融合効率を高めるためにジメチ
ルスルホキシド等の補助剤を添加使用することもでき
る。
合は基本的には公知の方法、たとえば、ミルステインら
の方法（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌ．７３：３−４６，１９８１）等に準じて行う
ことができる。より具体的には、前記細胞融合は例え
ば、細胞融合促進剤の存在下に通常の栄養培養中で実施
される。融合促進剤としては例えば、ポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）、センダイウィルス（ＨＶＪ）等が使
用され、更に所望により融合効率を高めるためにジメチ
ルスルホキシド等の補助剤を添加使用することもでき
る。
【００１８】免疫細胞とミエローマ細胞との使用割合
は、例えば、ミエローマ細胞に対して免疫細胞を１−１
０倍とするのが好ましい。前記細胞融合に用いる培養液
としては、例えば、前記ミエローマ細胞株の増殖に好適
なＲＰＭＩ１６４０培養液、ＭＥＭ培養液、その他、こ
の種の細胞培養に用いられる通常の培養液が使用可能で
あり、さらに、牛胎児血清（ＦＣＳ）等の血清補液を併
用することもできる。
は、例えば、ミエローマ細胞に対して免疫細胞を１−１
０倍とするのが好ましい。前記細胞融合に用いる培養液
としては、例えば、前記ミエローマ細胞株の増殖に好適
なＲＰＭＩ１６４０培養液、ＭＥＭ培養液、その他、こ
の種の細胞培養に用いられる通常の培養液が使用可能で
あり、さらに、牛胎児血清（ＦＣＳ）等の血清補液を併
用することもできる。
【００１９】細胞融合は、前記免疫細胞とミエローマ細
胞との所定量を前記培養液中でよく混合し、予め、３７
℃程度に加温したＰＥＧ溶液、例えば、平均分子量１０
００−６０００程度のＰＥＧ通常、培養液に３０−６０
％（ｗ／ｖ）の濃度で添加し、混合することによって目
的とする融合細胞（ハイブリドーマ）が形成される。続
いて、適当な培養液を逐次添加し、遠心して上清を除去
する操作を繰り返すことによりハイブリドーマの生育に
好ましくない細胞融合剤等を除去できる。
胞との所定量を前記培養液中でよく混合し、予め、３７
℃程度に加温したＰＥＧ溶液、例えば、平均分子量１０
００−６０００程度のＰＥＧ通常、培養液に３０−６０
％（ｗ／ｖ）の濃度で添加し、混合することによって目
的とする融合細胞（ハイブリドーマ）が形成される。続
いて、適当な培養液を逐次添加し、遠心して上清を除去
する操作を繰り返すことによりハイブリドーマの生育に
好ましくない細胞融合剤等を除去できる。
【００２０】当該ハイブリドーマは、通常の選択培養
液、例えば、ＨＡＴ培養液（ヒポキサンチン、アミノブ
テリンおよびチミジンを含む培養液）で培養することに
より選択される。当該ＨＡＴ培養液での培養は、目的と
するハイブリドーマ以外の細胞（非融合細胞）が死滅す
るのに十分な時間、通常数日〜数週間継続する。つい
で、通常の限界希釈法を実施し、目的とする抗体を産生
するハイブリドーマのスクリーニングおよび単一クロー
ン化が行われる。
液、例えば、ＨＡＴ培養液（ヒポキサンチン、アミノブ
テリンおよびチミジンを含む培養液）で培養することに
より選択される。当該ＨＡＴ培養液での培養は、目的と
するハイブリドーマ以外の細胞（非融合細胞）が死滅す
るのに十分な時間、通常数日〜数週間継続する。つい
で、通常の限界希釈法を実施し、目的とする抗体を産生
するハイブリドーマのスクリーニングおよび単一クロー
ン化が行われる。
【００２１】このようにして作成されるモノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマは、通常の培養液中で継
代培養することが可能であり、また、液体窒素中で長期
保存することが可能である。当該ハイブリドーマからモ
ノクローナル抗体を取得するには、当該ハイブリドーマ
を通常の方法にしたがい培養し、その培養上清として得
る方法、あるいはハイブリドーマをこれと適合性がある
哺乳動物に移植して増殖させ、その腹水として得る方法
などが採用される。前者の方法は、高純度の抗体を得る
のに適しており、一方、後者の方法は、抗体の大量生産
に適している。
抗体を産生するハイブリドーマは、通常の培養液中で継
代培養することが可能であり、また、液体窒素中で長期
保存することが可能である。当該ハイブリドーマからモ
ノクローナル抗体を取得するには、当該ハイブリドーマ
を通常の方法にしたがい培養し、その培養上清として得
る方法、あるいはハイブリドーマをこれと適合性がある
哺乳動物に移植して増殖させ、その腹水として得る方法
などが採用される。前者の方法は、高純度の抗体を得る
のに適しており、一方、後者の方法は、抗体の大量生産
に適している。
【００２２】さらに、前記の方法により得られるモノク
ローナル抗体は、塩析法、ゲル漉過法、アフィニテイー
クロマトグラフィー法等の通常の精製手段を利用して高
純度に精製することができる。このようにして、作成さ
れるモノクローナル抗体は、放射免疫測定法（ＲＩ
Ａ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ，ＥＬＩＳＡ）、蛍光抗
体法（Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ａｎａ
ｌｙｓｉｓ）等の通常の免疫学的手段により抗原を高感
度かつ高精度で認識することを確認することができる。
ローナル抗体は、塩析法、ゲル漉過法、アフィニテイー
クロマトグラフィー法等の通常の精製手段を利用して高
純度に精製することができる。このようにして、作成さ
れるモノクローナル抗体は、放射免疫測定法（ＲＩ
Ａ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ，ＥＬＩＳＡ）、蛍光抗
体法（Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ａｎａ
ｌｙｓｉｓ）等の通常の免疫学的手段により抗原を高感
度かつ高精度で認識することを確認することができる。
【００２３】本発明に使用されるモノクローナル抗体
は、ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体に限
られるものではなく、ヒトに対する異種抗原性を低下さ
せること等を目的として人為的に改変したものであって
よい。例えば、ヒト以外の哺乳動物、例えば、マウスの
モノクローナル抗体の可変領域とヒト抗体の定常領域と
からなるキメラ抗体を使用することができ、このような
キメラ抗体は、既知のキメラ抗体の製造方法、特に遺伝
子組換技法を用いて製造することができる。
は、ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体に限
られるものではなく、ヒトに対する異種抗原性を低下さ
せること等を目的として人為的に改変したものであって
よい。例えば、ヒト以外の哺乳動物、例えば、マウスの
モノクローナル抗体の可変領域とヒト抗体の定常領域と
からなるキメラ抗体を使用することができ、このような
キメラ抗体は、既知のキメラ抗体の製造方法、特に遺伝
子組換技法を用いて製造することができる。
【００２４】さらに、再構成（ｒｅｓｈａｐｅｄ）した
ヒト抗体を本発明に用いることができる。これはヒト以
外の哺乳動物、たとえばマウス抗体の相補性決定領域に
よりヒト抗体の相補性決定領域を置換したものであり、
その一般的な遺伝子組換手法も知られている。その既知
方法を用いて、本発明に有用な再構成ヒト型抗体を得る
ことができる。
ヒト抗体を本発明に用いることができる。これはヒト以
外の哺乳動物、たとえばマウス抗体の相補性決定領域に
よりヒト抗体の相補性決定領域を置換したものであり、
その一般的な遺伝子組換手法も知られている。その既知
方法を用いて、本発明に有用な再構成ヒト型抗体を得る
ことができる。
【００２５】なお、必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補
性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体
の可変領域のフレームワーク（ＦＲ）領域のアミノ酸を
置換してもよい（Ｓａｔｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．
５３：１−６，１９９３）。このような再構成ヒト抗体
としてヒト型化ＰＭ−１（ｈＰＭ−１）抗体が好ましく
例示される（国際特許出願公開番号ＷＯ９２−１９７５
９を参照）。
性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体
の可変領域のフレームワーク（ＦＲ）領域のアミノ酸を
置換してもよい（Ｓａｔｏら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．
５３：１−６，１９９３）。このような再構成ヒト抗体
としてヒト型化ＰＭ−１（ｈＰＭ−１）抗体が好ましく
例示される（国際特許出願公開番号ＷＯ９２−１９７５
９を参照）。
【００２６】さらには抗原に結合し、ＩＬ−６の活性を
阻害するかぎり抗体の断片、たとえばＦａｂあるいはＦ
ｖ，Ｈ鎖とＬ鎖のＦｖを適当なリンカーで連結させたシ
ングルチェインＦｖ（ｓｃＦｖ）をコードする遺伝子を
構築し、これを適当な宿主細胞で発現させ、前述の目的
に使用することができる。（例えば、Ｂｉｒｄら、ＴＩ
ＢＴＥＣＨ，９：１３２−１３７，１９９１；Ｈｕｓｔ
ｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８５，５８７９−５８８３，１９８８を参照）。
阻害するかぎり抗体の断片、たとえばＦａｂあるいはＦ
ｖ，Ｈ鎖とＬ鎖のＦｖを適当なリンカーで連結させたシ
ングルチェインＦｖ（ｓｃＦｖ）をコードする遺伝子を
構築し、これを適当な宿主細胞で発現させ、前述の目的
に使用することができる。（例えば、Ｂｉｒｄら、ＴＩ
ＢＴＥＣＨ，９：１３２−１３７，１９９１；Ｈｕｓｔ
ｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８５，５８７９−５８８３，１９８８を参照）。
【００２７】本発明のＩＬ−６レセプター抗体を有効成
分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤は、未熟型骨髄腫細胞
のＩＬ−６のシグナル伝達を遮断し、ＩＬ−６により生
存が維持された未熟型骨髄腫細胞の生存が阻害される限
り、それらの未熟型骨髄腫細胞の根絶に有効である。本
発明の未熟型骨髄腫細胞治療剤は、好ましくは非経口的
に、たとえば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、
皮下注射等により全身あるいは局部的に投与することが
できる。さらに、少なくとも一種の医薬用担体または希
釈剤とともに医薬組成物やキットの形態をとることがで
きる。
分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤は、未熟型骨髄腫細胞
のＩＬ−６のシグナル伝達を遮断し、ＩＬ−６により生
存が維持された未熟型骨髄腫細胞の生存が阻害される限
り、それらの未熟型骨髄腫細胞の根絶に有効である。本
発明の未熟型骨髄腫細胞治療剤は、好ましくは非経口的
に、たとえば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、
皮下注射等により全身あるいは局部的に投与することが
できる。さらに、少なくとも一種の医薬用担体または希
釈剤とともに医薬組成物やキットの形態をとることがで
きる。
【００２８】本発明の未熟型骨髄腫細胞治療剤のヒトに
対する投与量は患者の病態、年齢あるいは投与方法によ
り異なるが、適宜適当な量を選択することが必要であ
る。例えば、およそ１−１０００mg／患者の範囲で４回
以下の分割容量を選択することができる。しかしなが
ら、本発明の未熟型骨髄腫細胞治療剤はこれらの投与量
に制限されるものではない。
対する投与量は患者の病態、年齢あるいは投与方法によ
り異なるが、適宜適当な量を選択することが必要であ
る。例えば、およそ１−１０００mg／患者の範囲で４回
以下の分割容量を選択することができる。しかしなが
ら、本発明の未熟型骨髄腫細胞治療剤はこれらの投与量
に制限されるものではない。
【００２９】本発明の未熟型骨髄腫細胞治療剤は常法に
したがって製剤化することができる。たとえば、注射用
製剤は、精製されたＩＬ−６Ｒ抗体を溶剤、たとえば、
生理食塩水、緩衝液などに溶解し、それに、吸着防止
剤、たとえば、Ｔｗｅｅｎ８０、ゼラチン、ヒト血清ア
ルブミン（ＨＳＡ）などを加えたものであり、または、
使用前に溶解再構成するために凍結乾燥したものであっ
てもよい。凍結乾燥のための賦形剤としては例えばマン
ニトール、ブドウ糖などの糖アルコールや糖類を使用す
ることができる。
したがって製剤化することができる。たとえば、注射用
製剤は、精製されたＩＬ−６Ｒ抗体を溶剤、たとえば、
生理食塩水、緩衝液などに溶解し、それに、吸着防止
剤、たとえば、Ｔｗｅｅｎ８０、ゼラチン、ヒト血清ア
ルブミン（ＨＳＡ）などを加えたものであり、または、
使用前に溶解再構成するために凍結乾燥したものであっ
てもよい。凍結乾燥のための賦形剤としては例えばマン
ニトール、ブドウ糖などの糖アルコールや糖類を使用す
ることができる。
【００３０】
【実施例】以下、参考例、実験例および実施例により本
発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定され
るものではない。参考例１ ． ヒトＩＬ−６レセプター抗体ＰＭ−１の調
製 Ｈｉｒａｔａらの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４
３：２９００−２９０６，１９８９）により作成した抗
ＩＬ−６Ｒ抗体ＭＴ１８をＣＮＢｒにより活性化させた
セファロース４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌｓ製、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）と
添付の処方にしたがって結合させ、ＩＬ−６Ｒ（Ｙａｍ
ａｓａｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８２５−８２
８，１９８８）を精製した。
発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定され
るものではない。参考例１ ． ヒトＩＬ−６レセプター抗体ＰＭ−１の調
製 Ｈｉｒａｔａらの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４
３：２９００−２９０６，１９８９）により作成した抗
ＩＬ−６Ｒ抗体ＭＴ１８をＣＮＢｒにより活性化させた
セファロース４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌｓ製、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）と
添付の処方にしたがって結合させ、ＩＬ−６Ｒ（Ｙａｍ
ａｓａｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８２５−８２
８，１９８８）を精製した。
【００３１】すなわち、ヒトミエローマ細胞株Ｕ２６６
を１％ジギトニン（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ
製）、１０mMトリエタノールアミン（pH７．８）および
０．１５Ｍ ＮａＣｌを含む１mMｐ−パラアミノフェニ
ルメタンスルフォニルフルオライドハイドロクロリド
（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ製）（ジギトニン緩衝
液）で可溶化し、セファロース４Ｂビーズと結合させた
ＭＴ１８抗体と混合した。その後、ビーズをジギトニン
緩衝液で６回洗浄し、免疫に用いる部分精製ＩＬ−６Ｒ
とした。
を１％ジギトニン（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ
製）、１０mMトリエタノールアミン（pH７．８）および
０．１５Ｍ ＮａＣｌを含む１mMｐ−パラアミノフェニ
ルメタンスルフォニルフルオライドハイドロクロリド
（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ製）（ジギトニン緩衝
液）で可溶化し、セファロース４Ｂビーズと結合させた
ＭＴ１８抗体と混合した。その後、ビーズをジギトニン
緩衝液で６回洗浄し、免疫に用いる部分精製ＩＬ−６Ｒ
とした。
【００３２】ＢＡＬＢ／ｃマウスを３×１０9 個のＵ２
６６細胞から得た上記部分精製ＩＬ−６Ｒで１０日おき
に４回免疫し、その後常法によりハイブイドーマを作成
した。成長陽性ウェルからのハイブリドーマ培養上清を
下記の方法にてＩＬ−６Ｒへの結合活性を調べた。５×
１０7 個のＵ２６６細胞を３５Ｓ−メチオニン（２．５
ｍＣｉ）で標識し、上記ジギトニン緩衝液で可溶化し
た。
６６細胞から得た上記部分精製ＩＬ−６Ｒで１０日おき
に４回免疫し、その後常法によりハイブイドーマを作成
した。成長陽性ウェルからのハイブリドーマ培養上清を
下記の方法にてＩＬ−６Ｒへの結合活性を調べた。５×
１０7 個のＵ２６６細胞を３５Ｓ−メチオニン（２．５
ｍＣｉ）で標識し、上記ジギトニン緩衝液で可溶化し
た。
【００３３】可溶化したＵ２６６細胞を０．０４ml容量
のセファロース４Ｂビーズと結合させたＭＴ１８抗体と
混合し、その後、ジギトニン緩衝液で６回洗浄し、０．
２５mlのジギトニン緩衝液（pH３．４）により35Ｓ−メ
チオニン標識ＩＬ−６Ｒを流出させ、０．０２５mlの１
ＭＴｒｉｓ（pH７．４）で中和した。０．０５mlのハイ
ブリドーマ培養上清を０．０１mlのＰｒｏｔｅｉｎＧセ
ファロース（Ｐｈｒａｍａｃｉａ製）と混合した。
のセファロース４Ｂビーズと結合させたＭＴ１８抗体と
混合し、その後、ジギトニン緩衝液で６回洗浄し、０．
２５mlのジギトニン緩衝液（pH３．４）により35Ｓ−メ
チオニン標識ＩＬ−６Ｒを流出させ、０．０２５mlの１
ＭＴｒｉｓ（pH７．４）で中和した。０．０５mlのハイ
ブリドーマ培養上清を０．０１mlのＰｒｏｔｅｉｎＧセ
ファロース（Ｐｈｒａｍａｃｉａ製）と混合した。
【００３４】洗浄した後、セファロースを上記で調製し
た０．００５mlの35Ｓ標識ＩＬ−６Ｒ溶液とともにイン
キュベートした。免疫沈降物質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分
析し、ＩＬ−６Ｒと反応するハイブリドーマ培養上清を
調べた。その結果、反応陽性ハイブリドーマクローンＰ
Ｍ−１を樹立した。ハイブリドーマＰＭ−１から産生さ
れるＩＬ−６Ｒ抗体ＰＭ−１は、ＩｇＧｌκ型のサブタ
イプを有する。
た０．００５mlの35Ｓ標識ＩＬ−６Ｒ溶液とともにイン
キュベートした。免疫沈降物質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分
析し、ＩＬ−６Ｒと反応するハイブリドーマ培養上清を
調べた。その結果、反応陽性ハイブリドーマクローンＰ
Ｍ−１を樹立した。ハイブリドーマＰＭ−１から産生さ
れるＩＬ−６Ｒ抗体ＰＭ−１は、ＩｇＧｌκ型のサブタ
イプを有する。
【００３５】ハイブイドーマＰＭ−１が産生する抗体の
ヒトＩＬ−６Ｒに対するＩＬ−６の結合阻害活性をヒト
ミエローマ細胞株Ｕ２６６を用いて調べた。ヒト組換型
ＩＬ−６を大腸菌より調製し（Ｈｉｒａｎｏら、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．，１７：４１，１９８８）、ボル
トン−ハンター試薬（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃ
ｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ．ＭＡ）により 125Ｉ標識した
（Ｔａｇａら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：９６７，
１９８７）。
ヒトＩＬ−６Ｒに対するＩＬ−６の結合阻害活性をヒト
ミエローマ細胞株Ｕ２６６を用いて調べた。ヒト組換型
ＩＬ−６を大腸菌より調製し（Ｈｉｒａｎｏら、Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．，１７：４１，１９８８）、ボル
トン−ハンター試薬（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃ
ｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ．ＭＡ）により 125Ｉ標識した
（Ｔａｇａら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：９６７，
１９８７）。
【００３６】４×１０5 個のＵ２６６細胞を、１００倍
量の過剰な非標識ＩＬ−６の存在下で室温にて、１時
間、７０％（ｖ／ｖ）のハイブリドーマＰＭ−１の培養
上清及び１４０００CPM の 125Ｉ標識ＩＬ−６とともに
培養した。７０μｌのサンプルを４００μｌのマイクロ
フユージポリエチレンチューブに入れた３００μｌのＦ
ＣＳ上に重層し、遠心の後、細胞上の放射活性を測定し
た。その結果、ハイブリドーマＰＭ−１が産生する抗体
は、ＩＬ−６のＩＬ−６Ｒに対する結合を阻害すること
が明らかとなった。
量の過剰な非標識ＩＬ−６の存在下で室温にて、１時
間、７０％（ｖ／ｖ）のハイブリドーマＰＭ−１の培養
上清及び１４０００CPM の 125Ｉ標識ＩＬ−６とともに
培養した。７０μｌのサンプルを４００μｌのマイクロ
フユージポリエチレンチューブに入れた３００μｌのＦ
ＣＳ上に重層し、遠心の後、細胞上の放射活性を測定し
た。その結果、ハイブリドーマＰＭ−１が産生する抗体
は、ＩＬ−６のＩＬ−６Ｒに対する結合を阻害すること
が明らかとなった。
【００３７】参考例２． ヒト型抗体ｈＰＭ−１の作成 ヒト型化抗体ｈＰＭ−１を国際特許出願公開番号ＷＯ９
２−１９７５９に記載の方法により得た。参考例１で作
成されたハイブリドーマＰＭ−１から常法で全ＲＮＡを
調製し、これより一本鎖ｃＤＮＡの合成を行った。ポリ
メラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法によりマウスＰＭ−１の
Ｖ領域のＤＮＡを増幅した。ＰＣＲ法に使用するプライ
マーは、Ｓ．Ｔ．Ｊｏｎｅｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ，９，８８，１９９１に記載されたものを用い
た。
２−１９７５９に記載の方法により得た。参考例１で作
成されたハイブリドーマＰＭ−１から常法で全ＲＮＡを
調製し、これより一本鎖ｃＤＮＡの合成を行った。ポリ
メラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法によりマウスＰＭ−１の
Ｖ領域のＤＮＡを増幅した。ＰＣＲ法に使用するプライ
マーは、Ｓ．Ｔ．Ｊｏｎｅｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ，９，８８，１９９１に記載されたものを用い
た。
【００３８】ＰＣＲ法により増幅したＤＮＡ断片を精製
し、マウスカッパ型Ｌ鎖Ｖ領域をコードする遺伝子を含
むＤＮＡ断片、及びマウスガンマ型Ｈ鎖可変領域をコー
ドする遺伝子を含むＤＮＡ断片を得た。これらのＤＮＡ
断片をプラスミドｐＵＣ１９に連結し、大腸菌ＤＨ５α
のコンビテント細胞に導入して大腸菌形質転換体を得
た。この形質転換体から上記プラスミドを得、プラスミ
ド中のｃＤＮＡコード領域の塩基配列を、常法にしたが
い決定し、さらに各Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）
を決定した。
し、マウスカッパ型Ｌ鎖Ｖ領域をコードする遺伝子を含
むＤＮＡ断片、及びマウスガンマ型Ｈ鎖可変領域をコー
ドする遺伝子を含むＤＮＡ断片を得た。これらのＤＮＡ
断片をプラスミドｐＵＣ１９に連結し、大腸菌ＤＨ５α
のコンビテント細胞に導入して大腸菌形質転換体を得
た。この形質転換体から上記プラスミドを得、プラスミ
ド中のｃＤＮＡコード領域の塩基配列を、常法にしたが
い決定し、さらに各Ｖ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）
を決定した。
【００３９】キメラＰＭ−１抗体を発現するベクターを
作製するため、それぞれマウスＰＭ−１κＬ鎖及びＨ鎖
のＶ領域をコードするｃＤＮＡをＨＣＭＶ発現ベクター
に挿入した。ヒト型化ヒトＰＭ−１抗体を作成するため
に、ＣＤＲ移植法によりマウスＰＭ−１のＶ領域ＣＤＲ
をヒト抗体へ移植した。ヒト型化抗体のＣＤＲが適切な
抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のフレー
ムワーク（ＦＲ）領域のアミノ酸を置換した。
作製するため、それぞれマウスＰＭ−１κＬ鎖及びＨ鎖
のＶ領域をコードするｃＤＮＡをＨＣＭＶ発現ベクター
に挿入した。ヒト型化ヒトＰＭ−１抗体を作成するため
に、ＣＤＲ移植法によりマウスＰＭ−１のＶ領域ＣＤＲ
をヒト抗体へ移植した。ヒト型化抗体のＣＤＲが適切な
抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のフレー
ムワーク（ＦＲ）領域のアミノ酸を置換した。
【００４０】このようにして作成したヒト型化ＰＭ−１
抗体のＬ鎖およびＨ鎖の遺伝子を哺乳類細胞中で発現さ
せるために、ヒトエロンゲーションファクターＩα（Ｈ
ＥＦ−１α）プロモーターを含有するベクターに各々導
入し、ヒト型化ＰＭ−１抗体Ｌ鎖およびＨ鎖を発現する
ベクターを作成した。これら二つの発現ベクターをＣＨ
Ｏ細胞に同時に挿入することにより、ヒト型化ＰＭ−１
（ｈＰＭ−１）を産生する細胞株を樹立した。得られた
ヒト型化抗体のヒトＩＬ−６Ｒへの結合能はＥＬＩＳＡ
にて確認した。さらに、ｈＰＭ−１はマウス抗体および
キメラ抗体と同様に、ヒトＩＬ−６のヒトＩＬ−６Ｒへ
の結合を阻害した。
抗体のＬ鎖およびＨ鎖の遺伝子を哺乳類細胞中で発現さ
せるために、ヒトエロンゲーションファクターＩα（Ｈ
ＥＦ−１α）プロモーターを含有するベクターに各々導
入し、ヒト型化ＰＭ−１抗体Ｌ鎖およびＨ鎖を発現する
ベクターを作成した。これら二つの発現ベクターをＣＨ
Ｏ細胞に同時に挿入することにより、ヒト型化ＰＭ−１
（ｈＰＭ−１）を産生する細胞株を樹立した。得られた
ヒト型化抗体のヒトＩＬ−６Ｒへの結合能はＥＬＩＳＡ
にて確認した。さらに、ｈＰＭ−１はマウス抗体および
キメラ抗体と同様に、ヒトＩＬ−６のヒトＩＬ−６Ｒへ
の結合を阻害した。
【００４１】実験例 （１）骨髄腫細胞の分類 骨髄腫患者から得た骨髄腫細胞を、フローサイトメトリ
ー法を用い、表面抗原に基づく骨髄腫細胞の同定および
分類を行った。骨髄液を、リンパ球分離液Ｓｅｐａｒａ
ｔｅ−Ｌ（Ｍｕｔｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ
Ｃｏ．）により遠心分離し、単核細胞を分離した。
ー法を用い、表面抗原に基づく骨髄腫細胞の同定および
分類を行った。骨髄液を、リンパ球分離液Ｓｅｐａｒａ
ｔｅ−Ｌ（Ｍｕｔｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ
Ｃｏ．）により遠心分離し、単核細胞を分離した。
【００４２】これらの骨髄細胞を２００μｇ／ml ＢＳ
Ａおよび０．０１％ ＮａＮ3 を含むＰＢＳに５×１０
5 個／２０μｌとなるように懸濁し、はじめに各々２０
μｌの抗ＣＤ１９モノクローナル抗体（ｍＡＢ）（Ｉｍ
ｍｕｎｏｔｅｃｈ社）、抗ＣＤ５６ｍＡＢ（Ｃｏｕｌｔ
ｅｒ社）、抗ＶＬＡ−５ｍＡＢ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ
社）あるいは抗ＭＰＣ−１ｍＡＢ（特開平６−８６６８
８参照）を加え、４℃にて３０分間反応させた後、２０
mM Ｓｏｄｉｕｍ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅおよび０．２５
Ｍ ＮａＣｌを含むＰＢＳ（pH７．２）で二回洗浄し
た。
Ａおよび０．０１％ ＮａＮ3 を含むＰＢＳに５×１０
5 個／２０μｌとなるように懸濁し、はじめに各々２０
μｌの抗ＣＤ１９モノクローナル抗体（ｍＡＢ）（Ｉｍ
ｍｕｎｏｔｅｃｈ社）、抗ＣＤ５６ｍＡＢ（Ｃｏｕｌｔ
ｅｒ社）、抗ＶＬＡ−５ｍＡＢ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ
社）あるいは抗ＭＰＣ−１ｍＡＢ（特開平６−８６６８
８参照）を加え、４℃にて３０分間反応させた後、２０
mM Ｓｏｄｉｕｍ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅおよび０．２５
Ｍ ＮａＣｌを含むＰＢＳ（pH７．２）で二回洗浄し
た。
【００４３】次いで、１００倍希釈した４０μｌのＰＥ
（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）結合ヤギ抗マウスＩｇ
Ｇ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ社製）にて染色（４℃、３０
分間）し、前記ＰＢＳにて二回洗浄の後、１５μｌのマ
ウス血清（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社）を加え、４℃、２０分
間インキュベートし、さらに２０μｌの前記ＰＢＳ中で
５μｌのＦＩＴＣ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔ
ｈｉｏｃｉａｎａｔｅ）結合抗ＣＤ３８ｍＡＢ（Ｉｍｍ
ｕｎｏｔｅｃｈ社製）を添加して染色し（４℃、３０分
間）、前記ＰＢＳにて二回洗浄した。
（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）結合ヤギ抗マウスＩｇ
Ｇ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ社製）にて染色（４℃、３０
分間）し、前記ＰＢＳにて二回洗浄の後、１５μｌのマ
ウス血清（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社）を加え、４℃、２０分
間インキュベートし、さらに２０μｌの前記ＰＢＳ中で
５μｌのＦＩＴＣ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔ
ｈｉｏｃｉａｎａｔｅ）結合抗ＣＤ３８ｍＡＢ（Ｉｍｍ
ｕｎｏｔｅｃｈ社製）を添加して染色し（４℃、３０分
間）、前記ＰＢＳにて二回洗浄した。
【００４４】これら二重染色された骨髄細胞をフローサ
イートメーター（ＥＰＩＣＳ ＥＬＩＴＥ，Ｃｏｕｌｔ
ｅｒ社）にて蛍光を測定することにより解析した。骨髄
腫細胞の特徴であるＣＤ３８強陽性の画分に出現する細
胞の表面抗原を解析した結果、骨髄腫細胞は、ＶＬＡ−
５+ ＭＰＣ−１+ の成熟型、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１+
の中間型およびＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１- の未熟型に分
けられた（Ｋａｗａｎｏら、Ｂｌｏｏｄ，８２，５６
４，１９９３）。
イートメーター（ＥＰＩＣＳ ＥＬＩＴＥ，Ｃｏｕｌｔ
ｅｒ社）にて蛍光を測定することにより解析した。骨髄
腫細胞の特徴であるＣＤ３８強陽性の画分に出現する細
胞の表面抗原を解析した結果、骨髄腫細胞は、ＶＬＡ−
５+ ＭＰＣ−１+ の成熟型、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１+
の中間型およびＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１- の未熟型に分
けられた（Ｋａｗａｎｏら、Ｂｌｏｏｄ，８２，５６
４，１９９３）。
【００４５】（２）骨髄腫細胞のアポトーシス誘導 骨髄腫細胞の生存率および死細胞のアポトーシスの判定
を、ＦＤＡ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａ
ｔｅ、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．製）およびＰ
Ｉ（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ、Ｓｉｇｍａ
社）を用いた二種染色フローサイトメトリー法（Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ．，４９，３７７６，１９８９）にて解
析し、図１にアポトーシス誘導した細胞の分布を機械的
に示した。
を、ＦＤＡ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａ
ｔｅ、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．製）およびＰ
Ｉ（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ、Ｓｉｇｍａ
社）を用いた二種染色フローサイトメトリー法（Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ．，４９，３７７６，１９８９）にて解
析し、図１にアポトーシス誘導した細胞の分布を機械的
に示した。
【００４６】ヒト骨髄腫細胞株ＫＭＳ−５（Ｏｈｔｓｕ
ｋｉら、Ａｃｔｏ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．Ｊｐｎ．，５
１，１０５２，１９８８）を（１×１０6 ）個／mlとな
るように１０％ ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ培養液培養液中で
調製し、アポトーシスを誘導するｄｅｘａｍｅｔｈａｓ
ｏｎｅ（Ｓｉｇｍａ製）を１×１０-7Ｍとなるよう添加
した。３７℃にて培養２４時間後にＫＭＳ−５細胞をＦ
ＤＡ／ＰＩにて二重染色し、フローサイトメーターで蛍
光を測定した。その結果、図２に示すように、ｄｅｘａ
ｍｅｔｈａｓｏｎｅ処理により生細胞画分（ＦＤＡ+ Ｐ
Ｉ- ）に加え、アポトーシスが誘導された細胞の画分
（ＦＤＡ- ＰＩ- ）が出現した。
ｋｉら、Ａｃｔｏ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．Ｊｐｎ．，５
１，１０５２，１９８８）を（１×１０6 ）個／mlとな
るように１０％ ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ培養液培養液中で
調製し、アポトーシスを誘導するｄｅｘａｍｅｔｈａｓ
ｏｎｅ（Ｓｉｇｍａ製）を１×１０-7Ｍとなるよう添加
した。３７℃にて培養２４時間後にＫＭＳ−５細胞をＦ
ＤＡ／ＰＩにて二重染色し、フローサイトメーターで蛍
光を測定した。その結果、図２に示すように、ｄｅｘａ
ｍｅｔｈａｓｏｎｅ処理により生細胞画分（ＦＤＡ+ Ｐ
Ｉ- ）に加え、アポトーシスが誘導された細胞の画分
（ＦＤＡ- ＰＩ- ）が出現した。
【００４７】ＦＤＡ+ ＰＩ- 画分およびＦＤＡ- ＰＩ-
画分の細胞をフローサイトメトリーにて分取し、Ｂｒ．
Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．，７１，３４３，１９８８の方
法にしたがい、ＤＮＡを抽出した。このように調製した
ＤＮＡを１．２％アガロースゲル電気泳動にて分析し
た。その結果、図３に示すようにＦＤＡ+ ＰＩ- 画分の
細胞由来のＤＮＡは分解していなかったが、ＦＤＡ- Ｐ
Ｉ- 画分の細胞は、アポトーシスの特徴であるＤＮＡの
明らかな分解およびｌａｄｄｅｒ状のバンドがみられ
た。
画分の細胞をフローサイトメトリーにて分取し、Ｂｒ．
Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．，７１，３４３，１９８８の方
法にしたがい、ＤＮＡを抽出した。このように調製した
ＤＮＡを１．２％アガロースゲル電気泳動にて分析し
た。その結果、図３に示すようにＦＤＡ+ ＰＩ- 画分の
細胞由来のＤＮＡは分解していなかったが、ＦＤＡ- Ｐ
Ｉ- 画分の細胞は、アポトーシスの特徴であるＤＮＡの
明らかな分解およびｌａｄｄｅｒ状のバンドがみられ
た。
【００４８】実施例 実験例に記載のＦＤＡ／ＰＩ二重染色フローサイトメト
リー法により患者骨髄腫細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏにおけ
る生存率の変化を検討した。上記実施例と同様の方法に
て、ＰＥ結合抗ＶＬＡ−５抗体およびＰＥ結合抗ＭＰＣ
−１抗体により、骨髄腫細胞を染色し、以下の細胞群を
分取した。分取したＶＬＡ−５+ ＭＰＣ−１+ の成熟
型、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１+ の中間型およびＶＬＡ−
５- ＭＰＣ−１- の未熟型の骨髄腫細胞を１×１０6 個
／mlとなるよう１０％ ＦＣＳおよび１×１０-5Ｍの２
−メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ培養液中に浮遊
させ、３５×１０mmのｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｉｓｈ（Ｆａｌｃｏｎ社）に分注した。
リー法により患者骨髄腫細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏにおけ
る生存率の変化を検討した。上記実施例と同様の方法に
て、ＰＥ結合抗ＶＬＡ−５抗体およびＰＥ結合抗ＭＰＣ
−１抗体により、骨髄腫細胞を染色し、以下の細胞群を
分取した。分取したＶＬＡ−５+ ＭＰＣ−１+ の成熟
型、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１+ の中間型およびＶＬＡ−
５- ＭＰＣ−１- の未熟型の骨髄腫細胞を１×１０6 個
／mlとなるよう１０％ ＦＣＳおよび１×１０-5Ｍの２
−メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ培養液中に浮遊
させ、３５×１０mmのｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｉｓｈ（Ｆａｌｃｏｎ社）に分注した。
【００４９】これらの細胞を、２０Ｕ／mlの組換型ヒト
ＩＬ−６（ｒＩＬ−６；Ｈｉｒａｎｏら、Ｎａｔｕｒ
ｅ，３２４，７３，１９８６）、５０μｇ／mlのヒト型
化抗ｈＩＬ−６レセプター抗体（ｈＰＭ−１）存在ある
いは非存在下にて３７℃で３日間培養した後、ＦＤＡ／
ＰＩを用いてフローサイトメーター（ＥＰＩＣＳ ＥＬ
ＩＴＥ，Ｃｏｕｌｔｅｒ社）により蛍光を測定し、生細
胞の比率を求めた。なお、コントロールは、ｒＩＬ−６
およびｈＰＭ−１非存在下で培養した。その結果を表１
に示す。
ＩＬ−６（ｒＩＬ−６；Ｈｉｒａｎｏら、Ｎａｔｕｒ
ｅ，３２４，７３，１９８６）、５０μｇ／mlのヒト型
化抗ｈＩＬ−６レセプター抗体（ｈＰＭ−１）存在ある
いは非存在下にて３７℃で３日間培養した後、ＦＤＡ／
ＰＩを用いてフローサイトメーター（ＥＰＩＣＳ ＥＬ
ＩＴＥ，Ｃｏｕｌｔｅｒ社）により蛍光を測定し、生細
胞の比率を求めた。なお、コントロールは、ｒＩＬ−６
およびｈＰＭ−１非存在下で培養した。その結果を表１
に示す。
【００５０】
【表１】
【００５１】さらに、これらの結果から、成熟型、中間
形および未熟型の骨髄腫細胞の生存率にｒＩＬ−６が及
ぼす影響を図４に示す。ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１- の表
面抗原を有する未熟型骨髄腫細胞のｒＩＬ−６反応性と
それに対するｈＰＭ−１抗体の作用を図５に示した。Ｖ
ＬＡ−５+ ＭＰＣ−１+ の成熟型骨髄腫細胞（表１中、
患者由来骨髄腫細胞１−９）は培養液のみでも比較的高
い生存率を保った。これら成熟骨髄腫細胞は、ｒＩＬ−
６にほとんど反応せず、ｈＰＭ−１抗体による生存阻害
効果もみられなかった。一方、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１
- の未熟型骨髄腫細胞（表１中、患者由来骨髄腫細胞１
３−１８）は培養液のみでは生存が維持できず、アポト
ーシスに陥り易いことが示された。
形および未熟型の骨髄腫細胞の生存率にｒＩＬ−６が及
ぼす影響を図４に示す。ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１- の表
面抗原を有する未熟型骨髄腫細胞のｒＩＬ−６反応性と
それに対するｈＰＭ−１抗体の作用を図５に示した。Ｖ
ＬＡ−５+ ＭＰＣ−１+ の成熟型骨髄腫細胞（表１中、
患者由来骨髄腫細胞１−９）は培養液のみでも比較的高
い生存率を保った。これら成熟骨髄腫細胞は、ｒＩＬ−
６にほとんど反応せず、ｈＰＭ−１抗体による生存阻害
効果もみられなかった。一方、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１
- の未熟型骨髄腫細胞（表１中、患者由来骨髄腫細胞１
３−１８）は培養液のみでは生存が維持できず、アポト
ーシスに陥り易いことが示された。
【００５２】これらの細胞はＩＬ−６に対する反応性が
高く、ｒＩＬ−６により生存率が上昇した。この時、ｒ
ＩＬ−６による未熟型骨髄腫細胞の生存維持効果は、ｈ
ＰＭ−１抗体により明らかに阻害された（図５）。コン
トロール、ｒＩＬ−６，ｈＰＭ−１およびｒＩＬ−６と
ｈＰＭ−１各存在下における未熟型骨髄腫細胞（表１
中、患者由来骨髄腫細胞１７）のＦＤＡ／ＰＩ二重染色
像を図６に示す。
高く、ｒＩＬ−６により生存率が上昇した。この時、ｒ
ＩＬ−６による未熟型骨髄腫細胞の生存維持効果は、ｈ
ＰＭ−１抗体により明らかに阻害された（図５）。コン
トロール、ｒＩＬ−６，ｈＰＭ−１およびｒＩＬ−６と
ｈＰＭ−１各存在下における未熟型骨髄腫細胞（表１
中、患者由来骨髄腫細胞１７）のＦＤＡ／ＰＩ二重染色
像を図６に示す。
【００５３】コントロールに比べ、ｒＩＬ−６添加群で
は、アポトーシスを誘導した像（左下、Ｄ）の強度が低
く、生細胞（右下、Ｅ）の割合が大きかった。これに対
し、ｒＩＬ−６およびｈＰＭ−１存在下では、アポトー
シスを誘導した細胞の画分（左下、Ｄ）の強度が高かっ
た。ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１+ を示す中間型骨髄腫細胞
も、未熟型と同程度ではなかったが、ｒＩＬ−６に反応
して生存率が上昇することおよびこの作用がｈＰＭ−１
により阻害されることが示された。
は、アポトーシスを誘導した像（左下、Ｄ）の強度が低
く、生細胞（右下、Ｅ）の割合が大きかった。これに対
し、ｒＩＬ−６およびｈＰＭ−１存在下では、アポトー
シスを誘導した細胞の画分（左下、Ｄ）の強度が高かっ
た。ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１+ を示す中間型骨髄腫細胞
も、未熟型と同程度ではなかったが、ｒＩＬ−６に反応
して生存率が上昇することおよびこの作用がｈＰＭ−１
により阻害されることが示された。
【００５４】
【発明の効果】治療抵抗性を示すことが多い骨髄腫細胞
集団の主体をなす、表面抗原ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１-
の未熟型骨髄腫細胞の生存維持にはＩＬ−６が深く係わ
っている。ＩＬ−６レセプター抗体による未熟型骨髄腫
細胞の生存阻害作用が、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１- 未熟
型骨髄腫細胞で強く認められたことから、本発明のＩＬ
−６レセプター抗体は未熟型骨髄腫細胞治療剤としての
有用性が示唆された。
集団の主体をなす、表面抗原ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１-
の未熟型骨髄腫細胞の生存維持にはＩＬ−６が深く係わ
っている。ＩＬ−６レセプター抗体による未熟型骨髄腫
細胞の生存阻害作用が、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１- 未熟
型骨髄腫細胞で強く認められたことから、本発明のＩＬ
−６レセプター抗体は未熟型骨髄腫細胞治療剤としての
有用性が示唆された。
【図１】図１は、二重染色フローサイトメトリー法によ
る、アポトーシスを誘導した骨髄腫細胞の分布を模式的
に示す。Ｅは生細胞（ＦＤＡ+ ＰＩ- ）、Ｄはアポトー
シス誘導細胞（ＦＤＡ- ＰＩ- ）、Ｃはアポトーシスの
特徴を有さない死細胞の像である。
る、アポトーシスを誘導した骨髄腫細胞の分布を模式的
に示す。Ｅは生細胞（ＦＤＡ+ ＰＩ- ）、Ｄはアポトー
シス誘導細胞（ＦＤＡ- ＰＩ- ）、Ｃはアポトーシスの
特徴を有さない死細胞の像である。
【図２】図２は、デキサメタゾン処理によりアポトーシ
スが誘導された骨髄腫細胞株ＫＭＳ−５のフローサイト
メトリー像である。
スが誘導された骨髄腫細胞株ＫＭＳ−５のフローサイト
メトリー像である。
【図３】図３は、ＦＤＡ+ ＰＩ- （Ｅ）およびＦＤＡ-
ＰＩ- （Ｄ）画分の細胞のＤＮＡアガロースゲル電気泳
動図である。レーン１は分子量マーカー、レーン２はＦ
ＤＡ+ ＰＩ- （Ｅ）画分、レーン３はＦＤＡ- ＰＩ
- （Ｄ）画分である。レーン３でＤＮＡの分解およびア
ポトーシスの特徴であるｌａｄｄｅｒ状のバンドがみら
れる。
ＰＩ- （Ｄ）画分の細胞のＤＮＡアガロースゲル電気泳
動図である。レーン１は分子量マーカー、レーン２はＦ
ＤＡ+ ＰＩ- （Ｅ）画分、レーン３はＦＤＡ- ＰＩ
- （Ｄ）画分である。レーン３でＤＮＡの分解およびア
ポトーシスの特徴であるｌａｄｄｅｒ状のバンドがみら
れる。
【図４】図４は、骨髄腫細胞の生存率にＩＬ−６が及ぼ
す影響を示す。ＩＬ−６存在下において、感熱型骨髄腫
細胞（ＶＬＡ−５+ ＭＰＣ−１+ ）はほぼその存在に影
響を受けない（約１．１倍）。一方、中間型（ＶＬＡ−
５- ＭＰＣ−１+ ）および未熟型骨髄腫細胞（ＶＬＡ−
５- ＭＰＣ−１- ）は各々約２．４倍、３．５倍の生存
細胞数の増加がみられる。
す影響を示す。ＩＬ−６存在下において、感熱型骨髄腫
細胞（ＶＬＡ−５+ ＭＰＣ−１+ ）はほぼその存在に影
響を受けない（約１．１倍）。一方、中間型（ＶＬＡ−
５- ＭＰＣ−１+ ）および未熟型骨髄腫細胞（ＶＬＡ−
５- ＭＰＣ−１- ）は各々約２．４倍、３．５倍の生存
細胞数の増加がみられる。
【図５】図５は、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１- の未熱型骨
髄腫細胞のＩＬ−６に対する反応性と、それに対するｈ
ＰＭ−１抗体の作用を示す。○は表１中の患者由来骨髄
腫細胞１３、□は同１４、△は同１５、●は同１６、×
は同１７、▼は同１８を示す。これらの未熟型骨髄腫細
胞の生存はＩＬ−６により支持され、その生存支持効果
をｈＰＭ−１抗体が明らかに阻害する。
髄腫細胞のＩＬ−６に対する反応性と、それに対するｈ
ＰＭ−１抗体の作用を示す。○は表１中の患者由来骨髄
腫細胞１３、□は同１４、△は同１５、●は同１６、×
は同１７、▼は同１８を示す。これらの未熟型骨髄腫細
胞の生存はＩＬ−６により支持され、その生存支持効果
をｈＰＭ−１抗体が明らかに阻害する。
【図６】図６は、ＶＬＡ−５- ＭＰＣ−１- の未熟型骨
髄腫細胞（表１中、患者由来骨髄腫細胞１７）のコント
ロール、ｒＩＬ−６，ｈＰＭ−１およびｒＩＬ−６とｈ
ＰＭ−１の各存在下におけるＦＤＡ／ＰＩ二重染色像を
示す。
髄腫細胞（表１中、患者由来骨髄腫細胞１７）のコント
ロール、ｒＩＬ−６，ｈＰＭ−１およびｒＩＬ−６とｈ
ＰＭ−１の各存在下におけるＦＤＡ／ＰＩ二重染色像を
示す。
Claims (9)
- 【請求項１】 インターロイキン−６レセプター抗体を
有効成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤。 - 【請求項２】 前記未熟型骨髄腫細胞が、化学療法剤抵
抗性であることを特徴とする請求項１の未熟型骨髄腫細
胞治療剤。 - 【請求項３】 前記未熟型骨髄腫細胞が、ＶＬＡ−５-
ＭＰＣ−１- の表面抗原を有することを特徴とする請求
項１の未熟型骨髄腫細胞治療剤。 - 【請求項４】 前記インターロイキン−６レセプターが
ヒトインターロイキン−６レセプターであることを特徴
とする請求項１の未熟型骨髄腫細胞治療剤。 - 【請求項５】 前記インターロイキン−６レセプター抗
体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項
１の未熟型骨髄腫細胞治療剤。 - 【請求項６】 前記インターロイキン−６レセプター抗
体がヒト型化抗体であることを特徴とする請求項１の未
熟型骨髄腫細胞治療剤。 - 【請求項７】 前記インターロイキン−６レセプター抗
体がＰＭ−１抗体であることを特徴とする請求項１の未
熟型骨髄腫細胞治療剤。 - 【請求項８】 前記インターロイキン−６レセプター抗
体がヒト型化ＰＭ−１抗体であることを特徴とする請求
項１の未熟型骨髄腫細胞治療剤。 - 【請求項９】 インターロイキン−６レセプター抗体を
有効成分とする未熟型骨髄腫細胞の生存阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25965494A JP3630453B2 (ja) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Ｉｌ−６レセプター抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25965494A JP3630453B2 (ja) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Ｉｌ−６レセプター抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0899902A true JPH0899902A (ja) | 1996-04-16 |
| JP3630453B2 JP3630453B2 (ja) | 2005-03-16 |
Family
ID=17337059
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25965494A Expired - Fee Related JP3630453B2 (ja) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | Ｉｌ−６レセプター抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3630453B2 (ja) |
Cited By (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002013860A1 (en) | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Stabilized antibody-containing preparations |
| JP2004292455A (ja) * | 2002-02-14 | 2004-10-21 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 抗体含有溶液製剤 |
| WO2006073070A1 (ja) | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 細胞の培養方法およびその利用 |
| WO2007074880A1 (ja) | 2005-12-28 | 2007-07-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 抗体含有安定化製剤 |
| WO2007119774A1 (ja) | 2006-04-13 | 2007-10-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | タウリントランスポーター遺伝子 |
| JPWO2005090405A1 (ja) * | 2004-03-24 | 2008-04-17 | 中外製薬株式会社 | インターロイキン−６受容体に対するヒト型化抗体のサブタイプ |
| WO2008078715A1 (ja) * | 2006-12-27 | 2008-07-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Ｉｌ－６アンタゴニストを有効成分とする炎症性筋疾患治療剤 |
| WO2008114673A1 (ja) | 2007-03-15 | 2008-09-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ポリペプチドの製造方法 |
| WO2008136398A1 (ja) | 2007-04-26 | 2008-11-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 高濃度アミノ酸含有培地を用いた細胞の培養方法 |
| WO2009020144A1 (ja) | 2007-08-07 | 2009-02-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 異種タンパク質の製造方法 |
| WO2009051109A1 (ja) | 2007-10-15 | 2009-04-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 異種タンパク質を高生産する細胞の作製方法 |
| WO2009054433A1 (ja) | 2007-10-24 | 2009-04-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 異種タンパク質製造のための細胞及びそれを用いた製造方法 |
| WO2009084659A1 (ja) | 2007-12-27 | 2009-07-09 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 高濃度抗体含有溶液製剤 |
| EP2172480A2 (en) | 2005-02-21 | 2010-04-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for producing proteins using hamster IGF-1 |
| EP2261230A1 (en) | 2002-09-11 | 2010-12-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein purification method |
| WO2011051231A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the production of a glycosylated immunoglobulin |
| EP2336149A1 (en) | 2001-03-09 | 2011-06-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein purification method |
| US9017677B2 (en) | 1997-03-21 | 2015-04-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of treating a disease mediated by sensitized T cells |
| US10168326B2 (en) | 2013-07-04 | 2019-01-01 | F. Hoffmann-La Roche Inc. | Interference-suppressed immunoassay to detect anti-drug antibodies in serum samples |
| US10744201B2 (en) | 2003-04-28 | 2020-08-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for treating rheumatoid arthritis with a human IL-6 receptor antibody and methotrexate |
| EP4219694A1 (en) | 2015-03-26 | 2023-08-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process of production with controlled copper ions |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190120439A (ko) | 2010-11-08 | 2019-10-23 | 제넨테크, 인크. | 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체 |
-
1994
- 1994-09-30 JP JP25965494A patent/JP3630453B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (50)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9017677B2 (en) | 1997-03-21 | 2015-04-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of treating a disease mediated by sensitized T cells |
| JP5485489B2 (ja) * | 2000-08-11 | 2014-05-07 | 中外製薬株式会社 | 抗体含有安定化製剤 |
| EP2311492A1 (en) | 2000-08-11 | 2011-04-20 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody-containing stabilized preparations |
| WO2002013860A1 (en) | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Stabilized antibody-containing preparations |
| EP2311492B1 (en) | 2000-08-11 | 2017-10-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody-containing stabilized preparations |
| JP2012072173A (ja) * | 2000-08-11 | 2012-04-12 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 抗体含有安定化製剤 |
| US8632778B2 (en) | 2000-08-11 | 2014-01-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Stabilized anti-interleukin-6 antibody-containing preparations |
| EP1314437A4 (en) * | 2000-08-11 | 2008-10-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | ANTIBODY-CONTAINING STABILIZED PREPARATIONS |
| EP2336149A1 (en) | 2001-03-09 | 2011-06-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein purification method |
| EP3088412A1 (en) | 2001-03-09 | 2016-11-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein purification method |
| JP2004292455A (ja) * | 2002-02-14 | 2004-10-21 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 抗体含有溶液製剤 |
| US8840884B2 (en) | 2002-02-14 | 2014-09-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody-containing solution pharmaceuticals |
| US9051384B2 (en) | 2002-02-14 | 2015-06-09 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antibody-containing solution formulations |
| JPWO2003068260A1 (ja) * | 2002-02-14 | 2005-06-02 | 中外製薬株式会社 | 抗体含有溶液製剤 |
| EP3192528A1 (en) | 2002-02-14 | 2017-07-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Formulation of anti-il6r antibody-containing solutions comprising a sugar as a stabilizer |
| EP3578168A1 (en) | 2002-02-14 | 2019-12-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Formulation of antibody-containing solutions comprising a sugar as a stabilizer |
| JP2010174042A (ja) * | 2002-02-14 | 2010-08-12 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 抗体含有溶液製剤 |
| EP3225625A1 (en) | 2002-09-11 | 2017-10-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein purification method |
| EP2261230A1 (en) | 2002-09-11 | 2010-12-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein purification method |
| US10654888B2 (en) | 2002-09-11 | 2020-05-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for removing viruses in a physiologically-active protein-containing sample |
| EP1561756B1 (en) | 2002-09-11 | 2015-12-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of purifying protein |
| US10744201B2 (en) | 2003-04-28 | 2020-08-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for treating rheumatoid arthritis with a human IL-6 receptor antibody and methotrexate |
| US8734800B2 (en) | 2004-03-24 | 2014-05-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor |
| JPWO2005090405A1 (ja) * | 2004-03-24 | 2008-04-17 | 中外製薬株式会社 | インターロイキン−６受容体に対するヒト型化抗体のサブタイプ |
| EP3736295A1 (en) | 2004-03-24 | 2020-11-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor |
| US9902777B2 (en) | 2004-03-24 | 2018-02-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for producing subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor |
| EP3269738A1 (en) | 2004-03-24 | 2018-01-17 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor |
| US8398980B2 (en) | 2004-03-24 | 2013-03-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Subtypes of humanized antibody against interleuken-6 receptor |
| WO2006073070A1 (ja) | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 細胞の培養方法およびその利用 |
| EP2843040A1 (en) | 2005-01-05 | 2015-03-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cell culture method and utilization of the same |
| EP2172480A2 (en) | 2005-02-21 | 2010-04-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for producing proteins using hamster IGF-1 |
| WO2007074880A1 (ja) | 2005-12-28 | 2007-07-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 抗体含有安定化製剤 |
| WO2007119774A1 (ja) | 2006-04-13 | 2007-10-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | タウリントランスポーター遺伝子 |
| EP2228450A1 (en) | 2006-04-13 | 2010-09-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Taurine transporter gene |
| WO2008078715A1 (ja) * | 2006-12-27 | 2008-07-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Ｉｌ－６アンタゴニストを有効成分とする炎症性筋疾患治療剤 |
| WO2008114673A1 (ja) | 2007-03-15 | 2008-09-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ポリペプチドの製造方法 |
| WO2008136398A1 (ja) | 2007-04-26 | 2008-11-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 高濃度アミノ酸含有培地を用いた細胞の培養方法 |
| WO2009020144A1 (ja) | 2007-08-07 | 2009-02-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 異種タンパク質の製造方法 |
| WO2009051109A1 (ja) | 2007-10-15 | 2009-04-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 異種タンパク質を高生産する細胞の作製方法 |
| WO2009054433A1 (ja) | 2007-10-24 | 2009-04-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 異種タンパク質製造のための細胞及びそれを用いた製造方法 |
| WO2009084659A1 (ja) | 2007-12-27 | 2009-07-09 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 高濃度抗体含有溶液製剤 |
| US10501769B2 (en) | 2009-10-26 | 2019-12-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method for the production of a glycosylated immunoglobulin |
| WO2011051231A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the production of a glycosylated immunoglobulin |
| EP3202785A1 (en) | 2009-10-26 | 2017-08-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Method for the production of a glycosylated immunoglobulin |
| US11021728B2 (en) | 2009-10-26 | 2021-06-01 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method for the production of a glycosylated immunoglobulin |
| US11136610B2 (en) | 2009-10-26 | 2021-10-05 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method for the production of a glycosylated immunoglobulin |
| US11377678B2 (en) | 2009-10-26 | 2022-07-05 | Hoffman-La Roche Inc. | Method for the production of a glycosylated immunoglobulin |
| US10168326B2 (en) | 2013-07-04 | 2019-01-01 | F. Hoffmann-La Roche Inc. | Interference-suppressed immunoassay to detect anti-drug antibodies in serum samples |
| US10761091B2 (en) | 2013-07-04 | 2020-09-01 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Interference-suppressed immunoassay to detect anti-drug antibodies in serum samples |
| EP4219694A1 (en) | 2015-03-26 | 2023-08-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process of production with controlled copper ions |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3630453B2 (ja) | 2005-03-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3630453B2 (ja) | Ｉｌ−６レセプター抗体を有効成分とする未熟型骨髄腫細胞治療剤 | |
| KR102840400B1 (ko) | 키메라 항원 수용체 및 car-t 세포 및 사용 방법 | |
| JP3471195B2 (ja) | ナイトロジェンマスタード系抗癌剤と組合わせて使用するための骨髄腫治療剤 | |
| TWI351967B (en) | A preventive agent for vasculitis | |
| JP7262597B2 (ja) | 二重特異性抗体及びその作製方法と使用 | |
| RU2177805C2 (ru) | Средство, применяемое при лечении опухолей лимфатической ткани | |
| EP2248529B1 (en) | NKG2D antibodies for use in the treatment of autoimmune or inflammatory diseases | |
| JP2023106392A (ja) | Ｃｄ３抗原結合性断片及びその使用 | |
| WO2018036473A1 (zh) | 抗ctla4-抗pd-1双功能抗体、其药物组合物及其用途 | |
| KR20030043990A (ko) | 아이엘-6 안타고니스트를 유효 성분으로서 함유하는건선의 예방 또는 치료제 | |
| KR20200118447A (ko) | 인간 원형질막 소포 관련 단백질 pv-1에 특이적으로 결합하는 단일클론항체 및 이의 제조방법과 용도 | |
| CN109232740B (zh) | 一种抗pd-l1抗体及其在抗肿瘤治疗中的应用 | |
| CN116745325A (zh) | Bcma靶向抗体、嵌合抗原受体及其应用 | |
| CN102307900B (zh) | 通过结合胞间粘附分子1调节树突细胞分化和功能的抗体及其用途 | |
| CN115322257B (zh) | Bcma靶向抗体、嵌合抗原受体及其应用 | |
| KR100362974B1 (ko) | 림프구계 종양에 대한 항체의 증진제 | |
| KR20000075732A (ko) | 임파구의 활성화 억제제 | |
| CN103025354A (zh) | 自身免疫疾病和变应性疾病的治疗药 | |
| US20090081221A1 (en) | Method for suppressing cancer cell metastasis and pharmaceutical composition for use in the method | |
| TW200528127A (en) | Expression enhancer for hm1.24 antigen | |
| US20030180799A1 (en) | Antibodies against plasma cells | |
| JPH09295999A (ja) | アポトーシスを誘起する物質のスクリーニング方法 | |
| CN118974094A (zh) | 一种抗原结合蛋白及其应用 | |
| JP4522431B2 (ja) | 造血器腫瘍の治療剤 | |
| JPH10298106A (ja) | リンパ球の活性化抑制剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20031201 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040106 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20040303 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20040513 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Effective date: 20040520 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Effective date: 20041116 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20041214 |
|
| R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20071224 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081224 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081224 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091224 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091224 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091224 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 6 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101224 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 6 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101224 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111224 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 7 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111224 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121224 Year of fee payment: 8 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |