JPH089998A - プローブ - Google Patents
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- JPH089998A JPH089998A JP7189877A JP18987795A JPH089998A JP H089998 A JPH089998 A JP H089998A JP 7189877 A JP7189877 A JP 7189877A JP 18987795 A JP18987795 A JP 18987795A JP H089998 A JPH089998 A JP H089998A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 制限断片長多型を示す新規なＶＮＴＲ配列を
有するプローブを提供すること。 【構成】 ヒト６番染色体のｑ２７の位置に存在しＭｓ
ｐＩ、ＴａｑＩ、ＰｓｔＩ、ＰｖｕIIにより制限断片長
多型を示し、ＭｓｐＩに関して１．４ｋｂから０．６ｋ
ｂの間に少なくとも７個の対立遺伝子が存在し、Ｔａｑ
Ｉに関して２．３ｋｂから２．１ｋｂの間に少なくとも
６個の対立遺伝子が存在し、ＰｓｔＩに関して２．３ｋ
ｂから２．１ｋｂの間に少なくとも７個の対立遺伝子が
存在し、ＰｖｕIIに関して２．０ｋｂから１．３ｋｂの
間に少なくとも８個の対立遺伝子が存在するヒトＶＮＴ
Ｒ配列を有するプローブを提供した。
有するプローブを提供すること。 【構成】 ヒト６番染色体のｑ２７の位置に存在しＭｓ
ｐＩ、ＴａｑＩ、ＰｓｔＩ、ＰｖｕIIにより制限断片長
多型を示し、ＭｓｐＩに関して１．４ｋｂから０．６ｋ
ｂの間に少なくとも７個の対立遺伝子が存在し、Ｔａｑ
Ｉに関して２．３ｋｂから２．１ｋｂの間に少なくとも
６個の対立遺伝子が存在し、ＰｓｔＩに関して２．３ｋ
ｂから２．１ｋｂの間に少なくとも７個の対立遺伝子が
存在し、ＰｖｕIIに関して２．０ｋｂから１．３ｋｂの
間に少なくとも８個の対立遺伝子が存在するヒトＶＮＴ
Ｒ配列を有するプローブを提供した。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトＶＮＴＲ配列を有
するプローブに関する。本発明のプローブは、親子鑑定
や犯罪捜査等における個人識別に利用することができ
る。
するプローブに関する。本発明のプローブは、親子鑑定
や犯罪捜査等における個人識別に利用することができ
る。
【０００２】
【従来の技術】染色体ＤＮＡは生物種ごとに固有の塩基
配列を持つが、詳細に見ると同一種内でも固体間でわず
かに違いが見られる。これはＤＮＡ多型と呼ばれるが、
この多型が制限酵素の認識部位に出現した場合には制限
酵素による切断断片の大きさ（長さ）の違いとしてサザ
ンブロット法等により容易に検出することができるの
で、特に制限断片長多型（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆ
ｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉ
ｓｍ、ＲＦＬＰ）と呼ばれる。従って、この制限断片長
多型を利用して、個人の識別が可能であり、親子鑑定や
犯罪捜査における個人識別に利用されている。動物ＤＮ
Ａのタンパク質非コード領域中には、繰り返し頻度が変
化し易い直列型繰り返し配列が存在する。この配列を含
む制限断片は繰り返し配列の反復回数の違いにより、制
限断片長の多型を示す。この型のものはＶＮＴＲ（ｖａ
ｒｉａｂｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒ
ｅｐｅａｔ）と呼ばれ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５，１６
１６（１９８７））、個人識別などのＤＮＡ診断におい
て有力なマーカーとなっている。従来よりマーカーとし
て利用できる制限断片長多型を示すＶＮＴＲは多数知ら
れているが、同時利用できるマーカーの数が増えれば、
それだけ検査の精度は高まるので有効である。
配列を持つが、詳細に見ると同一種内でも固体間でわず
かに違いが見られる。これはＤＮＡ多型と呼ばれるが、
この多型が制限酵素の認識部位に出現した場合には制限
酵素による切断断片の大きさ（長さ）の違いとしてサザ
ンブロット法等により容易に検出することができるの
で、特に制限断片長多型（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆ
ｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉ
ｓｍ、ＲＦＬＰ）と呼ばれる。従って、この制限断片長
多型を利用して、個人の識別が可能であり、親子鑑定や
犯罪捜査における個人識別に利用されている。動物ＤＮ
Ａのタンパク質非コード領域中には、繰り返し頻度が変
化し易い直列型繰り返し配列が存在する。この配列を含
む制限断片は繰り返し配列の反復回数の違いにより、制
限断片長の多型を示す。この型のものはＶＮＴＲ（ｖａ
ｒｉａｂｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒ
ｅｐｅａｔ）と呼ばれ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５，１６
１６（１９８７））、個人識別などのＤＮＡ診断におい
て有力なマーカーとなっている。従来よりマーカーとし
て利用できる制限断片長多型を示すＶＮＴＲは多数知ら
れているが、同時利用できるマーカーの数が増えれば、
それだけ検査の精度は高まるので有効である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、制限断片長多型を示す新規なＶＮＴＲ配列を有する
プローブ提供することである。
は、制限断片長多型を示す新規なＶＮＴＲ配列を有する
プローブ提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研
究の結果、ヒトの第６染色体中にＲＦＬＰを示す新規な
ＶＮＴＲ配列を見出し、本発明を完成した。
究の結果、ヒトの第６染色体中にＲＦＬＰを示す新規な
ＶＮＴＲ配列を見出し、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、ヒト６番染色体のｑ
２７の位置に存在し、ＭｓｐＩ、ＴａｑＩ、ＰｓｔＩ、
ＰｖｕIIにより制限断片長多型を示し、ＭｓｐＩに関し
て、１．４ｋｂから０．６ｋｂの間に少くとも７個の対
立遺伝子が存在し、ＴａｑＩに関して２．３ｋｂから
２．１ｋｂの間に少くとも６個の対立遺伝子が存在し、
ＰｓｔＩにおいて２．３ｋｂから２．１ｋｂの間に少く
とも７個の対立遺伝子が存在し、ＰｖｕIIに関して２．
０ｋｂから１．３ｋｂの間に少くとも８個の対立遺伝子
が存在するヒトＶＮＴＲ配列（以下、ｃＣＩ６−１３と
呼ぶことがある）を有するプローブを提供する。
２７の位置に存在し、ＭｓｐＩ、ＴａｑＩ、ＰｓｔＩ、
ＰｖｕIIにより制限断片長多型を示し、ＭｓｐＩに関し
て、１．４ｋｂから０．６ｋｂの間に少くとも７個の対
立遺伝子が存在し、ＴａｑＩに関して２．３ｋｂから
２．１ｋｂの間に少くとも６個の対立遺伝子が存在し、
ＰｓｔＩにおいて２．３ｋｂから２．１ｋｂの間に少く
とも７個の対立遺伝子が存在し、ＰｖｕIIに関して２．
０ｋｂから１．３ｋｂの間に少くとも８個の対立遺伝子
が存在するヒトＶＮＴＲ配列（以下、ｃＣＩ６−１３と
呼ぶことがある）を有するプローブを提供する。
【０００６】また、本発明は、ヒト６番染色体のｑ２７
の位置に存在し、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩ、ＴａｑＩ、Ｐｓ
ｔＩにより制限断片長多型を示しＭｓｐＩに関して４．
２ｋｂから２．３ｋｂの間に少くとも６個の対立遺伝子
が存在し、ＲｓａＩに関して３．０ｋｂから２．２ｋｂ
の間に少くとも４個の対立遺伝子が存在し、ＴａｑＩに
関して１０ｋｂから６．０ｋｂの間に少くとも５個の対
立遺伝子が存在し、ＰｓｔＩに関して６．０ｋｂから
４．３ｋｂの間に少くとも６個の対立遺伝子が存在する
ヒトＮＶＴＲ配列（以下ｃＣＩ６−７８と呼ぶことがあ
る）を有するプローブを提供する。
の位置に存在し、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩ、ＴａｑＩ、Ｐｓ
ｔＩにより制限断片長多型を示しＭｓｐＩに関して４．
２ｋｂから２．３ｋｂの間に少くとも６個の対立遺伝子
が存在し、ＲｓａＩに関して３．０ｋｂから２．２ｋｂ
の間に少くとも４個の対立遺伝子が存在し、ＴａｑＩに
関して１０ｋｂから６．０ｋｂの間に少くとも５個の対
立遺伝子が存在し、ＰｓｔＩに関して６．０ｋｂから
４．３ｋｂの間に少くとも６個の対立遺伝子が存在する
ヒトＮＶＴＲ配列（以下ｃＣＩ６−７８と呼ぶことがあ
る）を有するプローブを提供する。
【０００７】また本発明は、ヒト６番染色体のｑ２６の
位置に存在し、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩ、ＴａｑＩ、Ｐｓｔ
Ｉにより制限断片長多型を示しＭｓｐＩに関して２．５
ｋｂから１．８ｋｂの間に少くとも５個の対立遺伝子が
存在し、ＲｓａＩに関して、１．５ｋｂから１．３ｋｂ
の間に少くとも３個の対立遺伝子が存在し、ＴａｑＩに
関して１．８ｋｂから１．３ｋｂの間に少くとも５個の
対立遺伝子が存在し、ＰｓｔＩに関して１．５ｋｂから
１．１ｋｂの間に少くとも７個の対立遺伝子が存在する
ヒトＶＮＴＲ配列（以下ｃＣＩ６−９１と呼ぶことがあ
る）を有するプローブを提供する。
位置に存在し、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩ、ＴａｑＩ、Ｐｓｔ
Ｉにより制限断片長多型を示しＭｓｐＩに関して２．５
ｋｂから１．８ｋｂの間に少くとも５個の対立遺伝子が
存在し、ＲｓａＩに関して、１．５ｋｂから１．３ｋｂ
の間に少くとも３個の対立遺伝子が存在し、ＴａｑＩに
関して１．８ｋｂから１．３ｋｂの間に少くとも５個の
対立遺伝子が存在し、ＰｓｔＩに関して１．５ｋｂから
１．１ｋｂの間に少くとも７個の対立遺伝子が存在する
ヒトＶＮＴＲ配列（以下ｃＣＩ６−９１と呼ぶことがあ
る）を有するプローブを提供する。
【０００８】また、本発明は、ヒト６番染色体のｑ２７
の位置に存在しＭｓｐＩ、ＲｓａＩにおいて制限断片長
多型を示しＭｓｐＩにより１０ｋｂから４．０ｋｂの間
に少くとも６個の対立遺伝子が存在し、ＲｓａＩに関し
て７．０ｋｂから５．５ｋｂの間に少くとも４個の対立
遺伝子が存在するヒトＶＮＴＲ配列（以下、ｃＣＩ６−
１０７と呼ぶことがある）を有するプローブを提供す
る。
の位置に存在しＭｓｐＩ、ＲｓａＩにおいて制限断片長
多型を示しＭｓｐＩにより１０ｋｂから４．０ｋｂの間
に少くとも６個の対立遺伝子が存在し、ＲｓａＩに関し
て７．０ｋｂから５．５ｋｂの間に少くとも４個の対立
遺伝子が存在するヒトＶＮＴＲ配列（以下、ｃＣＩ６−
１０７と呼ぶことがある）を有するプローブを提供す
る。
【０００９】上述のように、本発明は、上記した各特徴
を有するｃＣＩ６−１３、ｃＣＩ６−７８、ｃＣＩ６−
９１及びｃＣＩ６−１０７の４種類のヒトＶＮＴＲ配列
を提供したものである。
を有するｃＣＩ６−１３、ｃＣＩ６−７８、ｃＣＩ６−
９１及びｃＣＩ６−１０７の４種類のヒトＶＮＴＲ配列
を提供したものである。
【００１０】なお、本発明において、例えば、「Ｍｓｐ
Ｉに関して１．４ｋｂから０．６ｋｂの間に少なくとも
７個の対立遺伝子が存在する」とは、下記説明から明ら
かなように、ＭｓｐＩで消化した場合に、１．４ｋｂか
ら０．６ｋｂの範囲内のサイズを有する、サイズの異な
る制限断片が少なくとも７種類存在するという意味であ
る。
Ｉに関して１．４ｋｂから０．６ｋｂの間に少なくとも
７個の対立遺伝子が存在する」とは、下記説明から明ら
かなように、ＭｓｐＩで消化した場合に、１．４ｋｂか
ら０．６ｋｂの範囲内のサイズを有する、サイズの異な
る制限断片が少なくとも７種類存在するという意味であ
る。
【００１１】上記４種類のヒトＶＮＴＲ配列は、後述の
実施例において示すように、公知の方法（Ａｍ．Ｊ．Ｈ
ｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４８，２５８（１９９１）； Ｇｅ
ｎｏｍｉｃｓ ９，５３６（１９９１））により、ヒト
６番染色体を分析し、発見されたＶＮＴＲマーカーをク
ローニングして得られたものである。
実施例において示すように、公知の方法（Ａｍ．Ｊ．Ｈ
ｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４８，２５８（１９９１）； Ｇｅ
ｎｏｍｉｃｓ ９，５３６（１９９１））により、ヒト
６番染色体を分析し、発見されたＶＮＴＲマーカーをク
ローニングして得られたものである。
【００１２】本発明のヒトＶＮＴＲ配列は、そのＤＮＡ
鎖をプローブとして利用することにより固体識別等に用
いることができる。その利用方法は従来法と全く同様で
あり、該ＤＮＡ鎖に周知の方法により標識を付すことに
より、サザンブロット法におけるプローブとして利用で
きる。また試料を予め遺伝子増幅法により増幅し、この
ようにして増幅したＤＮＡを検出するプローブとしても
利用できる。
鎖をプローブとして利用することにより固体識別等に用
いることができる。その利用方法は従来法と全く同様で
あり、該ＤＮＡ鎖に周知の方法により標識を付すことに
より、サザンブロット法におけるプローブとして利用で
きる。また試料を予め遺伝子増幅法により増幅し、この
ようにして増幅したＤＮＡを検出するプローブとしても
利用できる。
【００１３】
【発明の効果】本発明により新規なヒトＶＮＴＲ配列を
有するプローブが提供された。本発明のプローブは、固
体識別等を従来よりも高精度に行なうことに寄与する。
有するプローブが提供された。本発明のプローブは、固
体識別等を従来よりも高精度に行なうことに寄与する。
【００１４】
【実施例】ヒト第６染色体のみを含むヒト×マウス雑種
細胞Ａ９（ｎｅｏ６／ｔ）よりＤＮＡを抽出し、制限酵
素Ｓａｕ３ＡＩにて部分的に切断した後、ショ糖密度勾
配遠心を行ない、３５−４２ｋｂ分画を分取した。３５
−４２ｋｂＤＮＡ断片は、Ｋｌｅｎｏｗ酵素を用い、ｄ
ＣＴＰ、ｄＴＴＰにて部分的に挿入した。
細胞Ａ９（ｎｅｏ６／ｔ）よりＤＮＡを抽出し、制限酵
素Ｓａｕ３ＡＩにて部分的に切断した後、ショ糖密度勾
配遠心を行ない、３５−４２ｋｂ分画を分取した。３５
−４２ｋｂＤＮＡ断片は、Ｋｌｅｎｏｗ酵素を用い、ｄ
ＣＴＰ、ｄＴＴＰにて部分的に挿入した。
【００１５】コスミドベクターはｐＷＥＸ１５を用い
た。これはｐＷＥ１５（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４，２１６０（１９８７））の
ＢａｍＨＩ部位をＫｌｅｎｏｗ酵素を用いて挿入した
後、リンカー（５´−ＣＣＴＣＧＣＧＡＧＧ−３´）を
用いて制限酵素ＸｈｏＩの認識部位に変換したものであ
る。ｐＷＥＸ１５は制限酵素ＸｈｏＩにて切断した後、
Ｋｌｅｎｏｗ酵素を用い、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰにて部分
的に挿入した。
た。これはｐＷＥ１５（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４，２１６０（１９８７））の
ＢａｍＨＩ部位をＫｌｅｎｏｗ酵素を用いて挿入した
後、リンカー（５´−ＣＣＴＣＧＣＧＡＧＧ−３´）を
用いて制限酵素ＸｈｏＩの認識部位に変換したものであ
る。ｐＷＥＸ１５は制限酵素ＸｈｏＩにて切断した後、
Ｋｌｅｎｏｗ酵素を用い、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰにて部分
的に挿入した。
【００１６】３５−４２ｋｂＤＮＡ断片とベクターＤＮ
Ａ（ｐＷＥＸ１５）を６６ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐ
Ｈ７．５）、６．６ｍＭ ＭｇＣｌ2 、０．１ｍＭ Ａ
ＴＰ、１０ｍＭ ＤＴＴ、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ存在下１
６℃で１晩ライゲーションを行ないｉｎ ｖｉｔｒｏ
ｐａｃｋａｇｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｓ （Ｇｉｇａｐ
ａｃｋ Ｇｏｌｄ）を用い、パッケージングを行なっ
た。
Ａ（ｐＷＥＸ１５）を６６ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐ
Ｈ７．５）、６．６ｍＭ ＭｇＣｌ2 、０．１ｍＭ Ａ
ＴＰ、１０ｍＭ ＤＴＴ、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ存在下１
６℃で１晩ライゲーションを行ないｉｎ ｖｉｔｒｏ
ｐａｃｋａｇｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｓ （Ｇｉｇａｐ
ａｃｋ Ｇｏｌｄ）を用い、パッケージングを行なっ
た。
【００１７】コスミドクローンを５０μｇ／ｍｌアンピ
シリンを含むＬＢアガープレート上に、１０−１５コロ
ニー／ｃｍ2 の密度になるように合計１６０，０００個
まいた。32Ｐ標識したヒトＤＮＡをプローブとしてコロ
ニーハイブリダイゼーションを行ない、ヒトＤＮＡを含
んでいるコロニーを選択し、９６穴マイクロプレートに
保存した。
シリンを含むＬＢアガープレート上に、１０−１５コロ
ニー／ｃｍ2 の密度になるように合計１６０，０００個
まいた。32Ｐ標識したヒトＤＮＡをプローブとしてコロ
ニーハイブリダイゼーションを行ない、ヒトＤＮＡを含
んでいるコロニーを選択し、９６穴マイクロプレートに
保存した。
【００１８】各々のコスミドクローンから自動プラスミ
ド抽出システム（ＰＩ−１００）を用いてＤＮＡ抽出し
た。このＤＮＡをｒａｎｄｏｍ ｈｅｘａｎｕｃｌｅｏ
ｔｉｄｅ−ｐｒｉｍｉｎｇ法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．１３７，２６６（１９８４））にて32Ｐ標識し、プ
ローブとした。
ド抽出システム（ＰＩ−１００）を用いてＤＮＡ抽出し
た。このＤＮＡをｒａｎｄｏｍ ｈｅｘａｎｕｃｌｅｏ
ｔｉｄｅ−ｐｒｉｍｉｎｇ法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．１３７，２６６（１９８４））にて32Ｐ標識し、プ
ローブとした。
【００１９】互いに無関係な６人のヒトより抽出したＤ
ＮＡを各々制限酵素ＭｓｐＩ、ＴａｑＩ、ＲｓａＩ、Ｂ
ｇｌII、ＰｓｔＩ、ＰｖｕIIにて切断し、サザンブロッ
トした。
ＮＡを各々制限酵素ＭｓｐＩ、ＴａｑＩ、ＲｓａＩ、Ｂ
ｇｌII、ＰｓｔＩ、ＰｖｕIIにて切断し、サザンブロッ
トした。
【００２０】プレハイブリダイゼーションは１０％ＳＤ
Ｓ−７％ポリエチレングリコール（８０００）、２００
μｇ／ｍｌヒト胎盤ＤＮＡを含む溶液にて６５℃１晩行
なった。ハイブリダイゼーションは32Ｐ標識したＤＮＡ
プローブにて６５℃１６〜２４ｈｒ行なった。ハイブリ
ダイゼーション後、フィルターを０．１×ＳＳＣ−０．
１％ＳＤＳ溶液で６５℃２回洗浄後、Ｋｏｄａｋ ＸＡ
Ｒフィルムを用い、オートラジオグラフィーを行なっ
た。
Ｓ−７％ポリエチレングリコール（８０００）、２００
μｇ／ｍｌヒト胎盤ＤＮＡを含む溶液にて６５℃１晩行
なった。ハイブリダイゼーションは32Ｐ標識したＤＮＡ
プローブにて６５℃１６〜２４ｈｒ行なった。ハイブリ
ダイゼーション後、フィルターを０．１×ＳＳＣ−０．
１％ＳＤＳ溶液で６５℃２回洗浄後、Ｋｏｄａｋ ＸＡ
Ｒフィルムを用い、オートラジオグラフィーを行なっ
た。
【００２１】ＲＦＬＰを示したコスミドクローンについ
ては、ビオチン標識プローブによる蛍光ｉｎ ｓｉｔｕ
ハイブリダイゼーションを行ない、染色体上の位置を決
定した。染色体標本は７０％ホルムアミド−２×ＳＳＣ
溶液中で７０℃２分間処理した後、７０％エタノール中
に入れ５分間、さらに１００％エタノール中に入れ５分
間静置し脱水した。
ては、ビオチン標識プローブによる蛍光ｉｎ ｓｉｔｕ
ハイブリダイゼーションを行ない、染色体上の位置を決
定した。染色体標本は７０％ホルムアミド−２×ＳＳＣ
溶液中で７０℃２分間処理した後、７０％エタノール中
に入れ５分間、さらに１００％エタノール中に入れ５分
間静置し脱水した。
【００２２】コスミドＤＮＡは、ニックトランスレーシ
ョンにより、ビオチン１６−ｄＵＴＰ標識した。超音波
処理したニシン精子ＤＮＡ、Ｅ．ｃｏｌｉ ｔＲＮＡを
各々２０μｇ加え、エタノール沈殿した後、ホルムアミ
ド溶液に溶解し、５−１０倍量のヒト胎盤ＤＮＡを加え
７５℃、１０分間変性した。ビオチン標識したプローブ
を染色体標本上に滴下し、３７℃で１晩ハイブリダイゼ
ーションを行なった。
ョンにより、ビオチン１６−ｄＵＴＰ標識した。超音波
処理したニシン精子ＤＮＡ、Ｅ．ｃｏｌｉ ｔＲＮＡを
各々２０μｇ加え、エタノール沈殿した後、ホルムアミ
ド溶液に溶解し、５−１０倍量のヒト胎盤ＤＮＡを加え
７５℃、１０分間変性した。ビオチン標識したプローブ
を染色体標本上に滴下し、３７℃で１晩ハイブリダイゼ
ーションを行なった。
【００２３】標本は５０％ホルムアミド−１×ＳＳＣ、
２×ＳＳＣで各々３７℃１回洗浄した後、１×ＳＳＣで
室温で１５分間洗浄した。４×ＳＳＣ、１５μｇＦＩＴ
Ｃ−アビジン／ｍｌ、１％ＢＳＡ溶液下、３７℃で４５
分間処理し、４×ＳＳＣ、４×ＳＳＣ−０．１％Ｔｒｉ
ｔｏｎＸ、４×ＳＳＣで各々１０分間室温で洗浄した。
２×ＳＳＣで各々３７℃１回洗浄した後、１×ＳＳＣで
室温で１５分間洗浄した。４×ＳＳＣ、１５μｇＦＩＴ
Ｃ−アビジン／ｍｌ、１％ＢＳＡ溶液下、３７℃で４５
分間処理し、４×ＳＳＣ、４×ＳＳＣ−０．１％Ｔｒｉ
ｔｏｎＸ、４×ＳＳＣで各々１０分間室温で洗浄した。
【００２４】標本はｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ
処理した後、顕微鏡にて観察した。
処理した後、顕微鏡にて観察した。
【００２５】ＶＮＴＲを示したコスミドについては、Ｔ
７ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）を用い、塩基配列の決定を行なった。
７ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）を用い、塩基配列の決定を行なった。
【００２６】結果 ｃＣＩ６−１３をプローブとしてハイブリダイズした時
の結果を図１に示した。ＭｓｐＩにおいては１．４ｋｂ
から０．６ｋｂの間に７個の対立遺伝子が存在し、６例
中４例で異型接合性を示した。ＴａｑＩに関しては２．
３ｋｂから２．１ｋｂの間に６個の対立遺伝子が存在
し、６例中４例で異型接合性を示した。ＰｓｔＩに関し
ては、２．３ｋｂから２．１ｋｂの間に７個の対立遺伝
子が存在し、６例中３例で異型接合性を示した。Ｐｖｕ
IIに関しては、２．０ｋｂから１．３ｋｂの間に８個の
対立遺伝子が存在し、６例中４例で異型接合性を示し
た。
の結果を図１に示した。ＭｓｐＩにおいては１．４ｋｂ
から０．６ｋｂの間に７個の対立遺伝子が存在し、６例
中４例で異型接合性を示した。ＴａｑＩに関しては２．
３ｋｂから２．１ｋｂの間に６個の対立遺伝子が存在
し、６例中４例で異型接合性を示した。ＰｓｔＩに関し
ては、２．３ｋｂから２．１ｋｂの間に７個の対立遺伝
子が存在し、６例中３例で異型接合性を示した。Ｐｖｕ
IIに関しては、２．０ｋｂから１．３ｋｂの間に８個の
対立遺伝子が存在し、６例中４例で異型接合性を示し
た。
【００２７】ｃＣＩ６−７８をプローブとしてハイブリ
ダイズした時の結果を図２に示した。ＭｓｐＩに関して
は、４．２ｋｂから２．３ｋｂの間に６個の対立遺伝子
が存在し、６例中６例で異型接合性を示した。ＲｓａＩ
に関しては、３．０ｋｂから２．２ｋｂの間に４個の対
立遺伝子が存在し、６例中５例で異型接合性を示した。
ＴａｑＩに関しては、１０ｋｂから６．０ｋｂの間に５
個の対立遺伝子が存在し６例中５例で異型接合性を示し
た。ＰｓｔＩに関しては、６．０ｋｂから４．３ｋｂの
間に６個の対立遺伝子が存在し、６例中５例で異型接合
性を示した。
ダイズした時の結果を図２に示した。ＭｓｐＩに関して
は、４．２ｋｂから２．３ｋｂの間に６個の対立遺伝子
が存在し、６例中６例で異型接合性を示した。ＲｓａＩ
に関しては、３．０ｋｂから２．２ｋｂの間に４個の対
立遺伝子が存在し、６例中５例で異型接合性を示した。
ＴａｑＩに関しては、１０ｋｂから６．０ｋｂの間に５
個の対立遺伝子が存在し６例中５例で異型接合性を示し
た。ＰｓｔＩに関しては、６．０ｋｂから４．３ｋｂの
間に６個の対立遺伝子が存在し、６例中５例で異型接合
性を示した。
【００２８】ｃＣＩ６−９１をプローブとしてハイブリ
ダイズした時の結果を図３に示した。ＭｓｐＩに関して
は、２．５ｋｂから１．８ｋｂの間に５個の対立遺伝子
が存在し、６例中２例で異型接合性を示した。ＲｓａＩ
に関しては１．５ｋｂから１．３ｋｂの間に３個の対立
遺伝子が存在し、６例中１例で異型接合性を示した。Ｔ
ａｑＩに関しては１．８ｋｂから１．３ｋｂの間に５個
の対立遺伝子が存在し、６例中３例で異型接合性を示し
た。ＰｓｔＩに関しては、１．５ｋｂから１．１ｋｂの
間に７個の対立遺伝子が存在し、６例中６例で異型接合
性を示した。
ダイズした時の結果を図３に示した。ＭｓｐＩに関して
は、２．５ｋｂから１．８ｋｂの間に５個の対立遺伝子
が存在し、６例中２例で異型接合性を示した。ＲｓａＩ
に関しては１．５ｋｂから１．３ｋｂの間に３個の対立
遺伝子が存在し、６例中１例で異型接合性を示した。Ｔ
ａｑＩに関しては１．８ｋｂから１．３ｋｂの間に５個
の対立遺伝子が存在し、６例中３例で異型接合性を示し
た。ＰｓｔＩに関しては、１．５ｋｂから１．１ｋｂの
間に７個の対立遺伝子が存在し、６例中６例で異型接合
性を示した。
【００２９】ｃＣＩ６−１０７をプローブとしてハイブ
リダイズした時の結果を図４に示した。ＭｓｐＩに関し
ては、１０ｋｂから４．０ｋｂの間に６個の対立遺伝子
が存在し、６例中４例で異型接合性を示した。ＲｓａＩ
に関しては７．０ｋｂから５．５ｋｂの間に４個の対立
遺伝子が存在し、６例中２例で異型接合性を示した。
リダイズした時の結果を図４に示した。ＭｓｐＩに関し
ては、１０ｋｂから４．０ｋｂの間に６個の対立遺伝子
が存在し、６例中４例で異型接合性を示した。ＲｓａＩ
に関しては７．０ｋｂから５．５ｋｂの間に４個の対立
遺伝子が存在し、６例中２例で異型接合性を示した。
【図１】ｃＣＩ６−１３をプローブとしてハイブリダイ
ズした時の結果を示すオートラジオグラムの模式図。
ズした時の結果を示すオートラジオグラムの模式図。
【図２】ｃＣＩ６−７８をプローブとしてハイブリダイ
ズした時の結果を示すオートラジオグラムの模式図。
ズした時の結果を示すオートラジオグラムの模式図。
【図３】ｃＣＩ６−９１をプローブとしてハイブリダイ
ズした時の結果を示すオートラジオグラムの模式図。
ズした時の結果を示すオートラジオグラムの模式図。
【図４】ｃＣＩ６−９１をプローブとしてハイブリダイ
ズした時の結果を示すオートラジオグラムの模式図。
ズした時の結果を示すオートラジオグラムの模式図。
Claims (4)
- 【請求項１】 ヒト６番染色体のｑ２７の位置に存在し
ＭｓｐＩ、ＴａｑＩ、ＰｓｔＩ、ＰｖｕIIにより制限断
片長多型を示し、ＭｓｐＩに関して１．４ｋｂから０．
６ｋｂの間に少なくとも７個の対立遺伝子が存在し、Ｔ
ａｑＩに関して２．３ｋｂから２．１ｋｂの間に少なく
とも６個の対立遺伝子が存在し、ＰｓｔＩに関して２．
３ｋｂから２．１ｋｂの間に少なくとも７個の対立遺伝
子が存在し、ＰｖｕIIに関して２．０ｋｂから１．３ｋ
ｂの間に少なくとも８個の対立遺伝子が存在するヒトＶ
ＮＴＲ配列を有するプローブ。 - 【請求項２】 ヒト６番染色体のｑ２７の位置に存在
し、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩ、ＴａｑＩ、ＰｓｔＩにより制
限断片長多型を示し、ＭｓｐＩに関して４．２ｋｂから
２．３ｋｂの間に少くとも６個の対立遺伝子が存在し、
ＲｓａＩに関して３．０ｋｂから２．２ｋｂの間に少く
とも４個の対立遺伝子が存在しＴａｑＩに関して１０ｋ
ｂから６．０ｋｂの間に少くとも５個の対立遺伝子が存
在し、ＰｓｔＩに関して６．０ｋｂから４．３ｋｂの間
に少くとも６個の対立遺伝子が存在するヒトＶＮＴＲ配
列を有するプローブ。 - 【請求項３】 ヒト６番染色体のｑ２６の位置に存在
し、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩ、ＴａｑＩ、ＰｓｔＩにより制
限断片長多型を示し、ＭｓｐＩに関して２．５ｋｂから
１．８ｋｂの間に少くとも５個の対立遺伝子が存在し、
ＲｓａＩに関して１．５ｋｂから１．３ｋｂの間に少く
とも３個の対立遺伝子が存在し、ＴａｑＩに関して１．
８ｋｂから１．３ｋｂの間に少くとも５個の対立遺伝子
が存在し、ＰｓｔＩに関して１．５ｋｂから１．１ｋｂ
の間に少くとも７個の対立遺伝子が存在するヒトＶＮＴ
Ｒ配列を有するプローブ。 - 【請求項４】 ヒト６番染色体のｑ２７の位置に存在
し、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩに関して制限断片長多型を示
し、ＭｓｐＩに関して１０ｋｂから４．０ｋｂの間に少
くとも６個の対立遺伝子が存在し、ＲｓａＩに関して
７．０ｋｂから５．５ｋｂの間に少くとも４個の対立遺
伝子が存在するヒトＶＮＴＲ配列を有するプローブ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7189877A JPH089998A (ja) | 1995-07-03 | 1995-07-03 | プローブ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7189877A JPH089998A (ja) | 1995-07-03 | 1995-07-03 | プローブ |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP35948291A Division JP2534597B2 (ja) | 1991-12-27 | 1991-12-27 | プロ―ブ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH089998A true JPH089998A (ja) | 1996-01-16 |
Family
ID=16248680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7189877A Pending JPH089998A (ja) | 1995-07-03 | 1995-07-03 | プローブ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH089998A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003278605B2 (en) * | 2002-06-21 | 2009-06-18 | Reckitt Benckiser (Uk) Limited | Cleaning wipe having water staining resistance |
-
1995
- 1995-07-03 JP JP7189877A patent/JPH089998A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003278605B2 (en) * | 2002-06-21 | 2009-06-18 | Reckitt Benckiser (Uk) Limited | Cleaning wipe having water staining resistance |
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