JPH09100289A - 新規化合物ｆｒ１９０８９５、ｆｒ１９０８７２及びｆｒ１９０８７３、その製造方法およびその用途 - Google Patents
新規化合物ｆｒ１９０８９５、ｆｒ１９０８７２及びｆｒ１９０８７３、その製造方法およびその用途Info
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- JPH09100289A JPH09100289A JP7279787A JP27978795A JPH09100289A JP H09100289 A JPH09100289 A JP H09100289A JP 7279787 A JP7279787 A JP 7279787A JP 27978795 A JP27978795 A JP 27978795A JP H09100289 A JPH09100289 A JP H09100289A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 細胞周期阻害活性、抗腫瘍活性を有する化合
物およびその製造法の提供；医薬組成物、特に細胞周期
阻害剤および抗腫瘍剤の提供。 【解決手段】 細胞周期阻害活性ひいては抗腫瘍活性を
有する化合物ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２およ
びＦＲ１９０８７３、シュードモナス属に属する１以上
の該化合物の生産菌を培地に培養することによる該化合
物の製造方法、１以上の該化合物を含有する医薬組成
物、並びに１以上の該化合物を含有する、細胞周期阻害
剤および抗腫瘍剤に関する。 【効果】 本発明の化合物は、細胞周期阻害活性及び強
い抗腫瘍活性を示し、哺乳動物に対して、経口又は非経
口投与により癌化学療法に使用し得る。
物およびその製造法の提供；医薬組成物、特に細胞周期
阻害剤および抗腫瘍剤の提供。 【解決手段】 細胞周期阻害活性ひいては抗腫瘍活性を
有する化合物ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２およ
びＦＲ１９０８７３、シュードモナス属に属する１以上
の該化合物の生産菌を培地に培養することによる該化合
物の製造方法、１以上の該化合物を含有する医薬組成
物、並びに１以上の該化合物を含有する、細胞周期阻害
剤および抗腫瘍剤に関する。 【効果】 本発明の化合物は、細胞周期阻害活性及び強
い抗腫瘍活性を示し、哺乳動物に対して、経口又は非経
口投与により癌化学療法に使用し得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規化合物に関す
る。より詳しくは、本発明は、細胞周期阻害作用等を有
する新規化合物、当該化合物の製造方法、並びにこの化
合物の少なくとも１つを含有する医薬組成物に関する。
さらに、本発明は、癌抑制遺伝子産物ｐ５３非依存的
に、サイクリン依存性キナーゼ阻害タンパク質ｐ２１／
Ｃｉｐ１の発現を誘導する物質を含有する抗腫瘍剤に関
する。
る。より詳しくは、本発明は、細胞周期阻害作用等を有
する新規化合物、当該化合物の製造方法、並びにこの化
合物の少なくとも１つを含有する医薬組成物に関する。
さらに、本発明は、癌抑制遺伝子産物ｐ５３非依存的
に、サイクリン依存性キナーゼ阻害タンパク質ｐ２１／
Ｃｉｐ１の発現を誘導する物質を含有する抗腫瘍剤に関
する。
【０００２】
【従来の技術】従来の抗癌剤には、核酸やタンパク質を
アルキル化して不活化させるアルキル化剤（シクロホス
ファミドなど）、核酸合成の拮抗阻害剤（５−フルオロ
ウラシルなど）、一部の抗生物質（アクチノマイシンＤ
など）及び植物アルカロイドなどがある。これらの物質
はいずれも細胞毒性が強く、且つ選択毒性が低いため、
正常細胞にも作用して強い副作用を示し、患者のＱＯＬ
(quality of life) を損なう。また、当初、夢の抗癌剤
として注目されたインターフェロンや腫瘍壊死因子（Ｔ
ＮＦ）などのサイトカインも期待されたほどの効果を挙
げていない。
アルキル化して不活化させるアルキル化剤（シクロホス
ファミドなど）、核酸合成の拮抗阻害剤（５−フルオロ
ウラシルなど）、一部の抗生物質（アクチノマイシンＤ
など）及び植物アルカロイドなどがある。これらの物質
はいずれも細胞毒性が強く、且つ選択毒性が低いため、
正常細胞にも作用して強い副作用を示し、患者のＱＯＬ
(quality of life) を損なう。また、当初、夢の抗癌剤
として注目されたインターフェロンや腫瘍壊死因子（Ｔ
ＮＦ）などのサイトカインも期待されたほどの効果を挙
げていない。
【０００３】細胞の癌化は細胞周期調節機構の異常によ
って起こる。細胞周期制御の中心的役割を担うのは癌抑
制遺伝子産物ｐ５３である。ｐ５３は、外的要因でＤＮ
Ａが損傷した際、遺伝子修復が完了するまで細胞周期を
Ｇ1 期で停止させ、損傷の程度の激しい細胞については
アポトーシスを誘導して除去する機能を有する(Zabett
i, G. P. and Levine, A. J., FASB J., 7: 855-865, 1
993) 。また、ｐ５３を正常細胞で発現させても細胞死
を誘導しない。ｐ５３は転写因子で、塩基特異的に遺伝
子に結合し、転写を活性化させる(Greenblatt, M. S. e
t al., Cancer Res., 54: 4855-4878, 1994)。ｐ５３に
よって誘導されるタンパク質の中で、特に重要な機能を
有するのがｐ２１／Ｃｉｐ１（以下、Ｃｉｐ１と略称す
る）である。Ｃｉｐ１はサイクリン依存性キナーゼ（Ｃ
ＤＫ）と複合体を形成してこの活性を抑制し、癌抑制遺
伝子産物Ｒｂタンパク質等の細胞周期関連タンパク質の
リン酸化（不活性化）を抑制する(Harper, J. W. et a
l., Cell, 75: 805-816, 1993) と共に、増殖細胞核抗
原（ＰＣＮＡ）と結合してＤＮＡポリメラーゼδを阻害
する(Xiong, Y. et al., Nature, 366: 701-704, 199
3)。また、癌細胞で発現させるとＧ1 期停止に続き、ア
ポトーシスを誘導する。さらに、Ｃｉｐ１の発現には、
血清刺激などによるｐ５３非依存的な誘導経路があるこ
とが知られている(Noda, A. et al., Exp. Cell Res.,
211: 90-98, 1994) が、そのメカニズムについては未知
である。
って起こる。細胞周期制御の中心的役割を担うのは癌抑
制遺伝子産物ｐ５３である。ｐ５３は、外的要因でＤＮ
Ａが損傷した際、遺伝子修復が完了するまで細胞周期を
Ｇ1 期で停止させ、損傷の程度の激しい細胞については
アポトーシスを誘導して除去する機能を有する(Zabett
i, G. P. and Levine, A. J., FASB J., 7: 855-865, 1
993) 。また、ｐ５３を正常細胞で発現させても細胞死
を誘導しない。ｐ５３は転写因子で、塩基特異的に遺伝
子に結合し、転写を活性化させる(Greenblatt, M. S. e
t al., Cancer Res., 54: 4855-4878, 1994)。ｐ５３に
よって誘導されるタンパク質の中で、特に重要な機能を
有するのがｐ２１／Ｃｉｐ１（以下、Ｃｉｐ１と略称す
る）である。Ｃｉｐ１はサイクリン依存性キナーゼ（Ｃ
ＤＫ）と複合体を形成してこの活性を抑制し、癌抑制遺
伝子産物Ｒｂタンパク質等の細胞周期関連タンパク質の
リン酸化（不活性化）を抑制する(Harper, J. W. et a
l., Cell, 75: 805-816, 1993) と共に、増殖細胞核抗
原（ＰＣＮＡ）と結合してＤＮＡポリメラーゼδを阻害
する(Xiong, Y. et al., Nature, 366: 701-704, 199
3)。また、癌細胞で発現させるとＧ1 期停止に続き、ア
ポトーシスを誘導する。さらに、Ｃｉｐ１の発現には、
血清刺激などによるｐ５３非依存的な誘導経路があるこ
とが知られている(Noda, A. et al., Exp. Cell Res.,
211: 90-98, 1994) が、そのメカニズムについては未知
である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ｐ５３非依
存的にＣｉｐ１を大量に発現誘導し、細胞周期阻害活性
を有する化合物、かかる化合物の製造方法及びかかる化
合物等の用途を提供することを目的とする。
存的にＣｉｐ１を大量に発現誘導し、細胞周期阻害活性
を有する化合物、かかる化合物の製造方法及びかかる化
合物等の用途を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、シュード
モナス属に属する細菌の培養物から新規化合物、ＦＲＦ
Ｒ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８７
３を分離し、且つ当該化合物が細胞周期阻害（Ｇ1 期停
止）活性を有するものであること、さらには当該化合物
をはじめとする「癌抑制遺伝子産物ｐ５３非依存的に、
サイクリン依存性キナーゼ阻害タンパク質ｐ２１／Ｃｉ
ｐ１の発現を誘導する物質」が抗腫瘍作用を有する新知
見を得た。
モナス属に属する細菌の培養物から新規化合物、ＦＲＦ
Ｒ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８７
３を分離し、且つ当該化合物が細胞周期阻害（Ｇ1 期停
止）活性を有するものであること、さらには当該化合物
をはじめとする「癌抑制遺伝子産物ｐ５３非依存的に、
サイクリン依存性キナーゼ阻害タンパク質ｐ２１／Ｃｉ
ｐ１の発現を誘導する物質」が抗腫瘍作用を有する新知
見を得た。
【０００６】本発明は、細胞周期阻害（Ｇ1 期停止）活
性を有し、後記の物理化学的性質を有する新規化合物、
ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８
７３に関するものである。また本発明は、シュードモナ
ス属に属するＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及び
／又はＦＲ１９０８７３生産細菌を培地に培養し、得ら
れた培養物から該物質を採取することを特徴とする上記
化合物の製造方法に関するものである。さらに本発明
は、有効成分としてＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７
２及び／又はＦＲ１９０８７３を含有する医薬組成物で
ある。さらにまた、本発明は上記本発明の化合物を含有
する細胞周期阻害剤であり、特に細胞周期をＧ1 期で停
止させるものである細胞周期阻害剤である。さらにま
た、本発明は癌抑制遺伝子産物ｐ５３非依存的に、サイ
クリン依存性キナーゼ阻害タンパク質ｐ２１／Ｃｉｐ１
の発現を誘導する物質を有効成分として含有する抗腫瘍
剤であり、特に当該有効成分が上記本発明の化合物であ
る抗腫瘍剤である。
性を有し、後記の物理化学的性質を有する新規化合物、
ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８
７３に関するものである。また本発明は、シュードモナ
ス属に属するＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及び
／又はＦＲ１９０８７３生産細菌を培地に培養し、得ら
れた培養物から該物質を採取することを特徴とする上記
化合物の製造方法に関するものである。さらに本発明
は、有効成分としてＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７
２及び／又はＦＲ１９０８７３を含有する医薬組成物で
ある。さらにまた、本発明は上記本発明の化合物を含有
する細胞周期阻害剤であり、特に細胞周期をＧ1 期で停
止させるものである細胞周期阻害剤である。さらにま
た、本発明は癌抑制遺伝子産物ｐ５３非依存的に、サイ
クリン依存性キナーゼ阻害タンパク質ｐ２１／Ｃｉｐ１
の発現を誘導する物質を有効成分として含有する抗腫瘍
剤であり、特に当該有効成分が上記本発明の化合物であ
る抗腫瘍剤である。
【０００７】
【発明の実施の形態】新規化合物ＦＲ１９０８９５、Ｆ
Ｒ１９０８７２及びＦＲ１９０８７３は以下の物理化学
的性質を有する。
Ｒ１９０８７２及びＦＲ１９０８７３は以下の物理化学
的性質を有する。
【０００８】 （１）ＦＲ１９０８９５ a)形状： 淡黄色粉末 b)分子式： Ｃ23Ｈ24Ｎ2 Ｏ7 c)融点： １０２−１０５℃ d)分子量： ４４０ [FAB-MS : m/z 441 (M + H)] e)紫外線吸収スペクトル： 図１に示す λmax (CH 3 OH) ： 220 (sh), 273, 305 (sh) nm f)赤外線吸収スペクトル： 図２に示す νmax (KBr) : 3370, 2940, 1710, 1650, 1580, 1510, 1470, 1300, 1250, 1100, 1040 cm -1 g)溶解性： 易溶： メタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド 不溶： 水 h)呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気との反応 陰性：ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応、モーリッシュ反応 i) 1Ｈ核磁気共鳴スペクトル (500 MHz, CDCl 3)： 図３に示す δ (ppm) : 9.96 (1H, s, 交換可能), 9.02 (1H, d, J = 10 Hz), 8.61 (1H, d, J = 11 Hz, 交換可能), 7.36 (1H, dd, J = 8, 8 Hz), 7.05 (1H, d, J = 16 Hz), 6.94 (1H, d, J = 8 Hz), 6.87 (1H, m), 6.74 (1H, d, J = 8 Hz), 6.49 (1H, dd, J = 12, 10 Hz), 6.13 (1H, dd, J = 12, 7 Hz), 5.94 (1H, d, J = 12 Hz), 5.90 (1H, dd, J = 16, 7 Hz), 5.74 (1H, br d, J = 12 Hz), 5.14 (1H, m), 5.06 (1H, m), 3.98 (1H, m), 3.93 (3H, s), 3.73 (1H, m), 3.54 (1H, m), 3.04 (1H, br s, 交換可能), 2.90 (1H, m), 2.50 (1H, m). j)13Ｃ核磁気共鳴スペクトル (125 MHz, CDCl 3)： 図４に示す δ (ppm) : 169.9 (s), 162.2 (s), 160.5 (s), 147.7 (d), 141.2 (s), 135.4 (d), 135.3 (d), 134.0 (d), 129.0 (d), 127.5 (d), 124.6 (d), 124.3 (d), 123.6 (d), 120.2 (d), 116.7 (d), 113.2 (s), 108.1 (d), 75.0 (d), 67.8 (d), 62.3 (q), 57.9 (d), 57.8 (d), 25.7 (t). k)比旋光度： [α］D 23 = −３０６゜(c = 0.5, CH3 OH) l)薄層クロマトグラフィー： シリカゲル，CH2 Cl2 : CH3 OH = 10 : 1 Ｒｆ = ０．４６
【０００９】 （２）ＦＲ１９０８７２ a)形状： 淡黄色粉末 b)分子式： Ｃ23Ｈ24Ｎ2 Ｏ6 c)融点： １０４−１０７℃ d)分子量： ４２４［FAB-MS : m/z 425 (M + H)] e)紫外線吸収スペクトル： 図５に示す λmax (CH 3 OH) ： 282, 305 (sh) nm f)赤外線吸収スペクトル： 図６に示す νmax (KBr) : 3340, 3010, 2940, 1710, 1650, 1580, 1510, 1460, 1290, 1250, 1220, 1200, 1040 cm -1 g)溶解性： 易溶： メタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド 不溶： 水 h)呈色反応： 陽性： 硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気との反応 陰性： ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応、モーリッシュ反応 i) 1Ｈ核磁気共鳴スペクトル (500 MHz, CDCl 3)： 図７に示す δ (ppm) : 10.75 (1H (OH), s, 交換可能), 9.02 (1H, d, J = 10.3 Hz), 8.39 (1H (NH), d, J = 9.9 Hz, 交換可能) , 7.32 (1H, dd, J = 7.7, 7.9 Hz), 6.90-6.82 (3H, m), 6.75 (1H, d, J = 7.4 Hz), 6.72 (1H, dd), 6.50 (1H, dd, J = 10.7, 10.9 Hz), 6.41 (1H, dd, J = 10.0, 10.0 Hz), 6.30 (1H, d, J = 10.0 Hz), 6.09 (1H, d, J = 12.3 Hz), 5.92 (1H, d, J = 11.3 Hz), 5.73 (1H, d, J = 12.2 Hz), 5.30 (1H, dd, J = 4.5, 5.9 Hz), 4.82 (1H, m), 4.34 (1H, m), 3.94 (3H, s), 2.61 (1H, dd, J = 10.7, 12.3 Hz), 2.29 (1H, m). j)13Ｃ核磁気共鳴スペクトル (125 MHz, CDCl 3)： 図８に示す δ (ppm) : 170.9 (s), 162.6 (s), 162.1 (s), 147.7 (d), 140.9 (s), 135.4 (d), 134.1 (d), 133.3 (d), 132.8 (d), 130.8 (d), 130.7 (d), 130.1 (d), 127.0 (d), 126.0 (d), 124.5 (d), 121.7 (d), 117.4 (d), 110.0 (s), 104.5 (d), 77.5 (d), 72.8 (d), 62.3 (q), 27.7 (t). k)比旋光度： ［α］D 23 = −１２４° (c=0.5, CH 3 OH) l)薄層クロマトグラフィー： シリカゲル，CH2 Cl2 : CH3 OH = 10 : 1 Ｒｆ =０．４６
【００１０】 （３）ＦＲ１９０８７３ a)形状： 淡黄色粉末 b)分子式： Ｃ23Ｈ24Ｎ2 Ｏ6 c)分子量： ４２４［FAB-MS : m/z 425 (M + H)] d)紫外線吸収スペクトル： 図９に示す λmax (CH 3 OH) : 240 (sh), 282, 310 (sh) nm e)赤外線吸収スペクトル： 図１０に示す νmax (KBr) : 3400, 3010, 2940, 1710, 1650, 1513, 1460, 1450, 1290, 1260, 1220, 1120, 1043 cm -1 f)溶解性： 易溶：メタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド 不溶：水 g)呈色反応： 陽性： 硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気との反応 陰性： ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応、モーリッシュ反応 h) 1Ｈ核磁気共鳴スペクトル (500 MHz, CDCl 3)： 図１１に示す δ (ppm) : 10.10 (1H (OH), br s, 交換可能), 9.02 (1H, d, J = 11 Hz), 8.61 (1H (NH), d, J = 11 Hz, 交換可能), 7.36 (1H, dd, J = 8, 8 Hz), 7.23 (1H, d, J = 16 Hz), 7.08 (1H, d, J = 8 Hz), 6.95-6.85 (2H, m), 6.65 (1H, dd, J = 7, 17 Hz), 6.52 (1H, dd, J = 11, 11 Hz), 6.40 (1H, dd, J = 4, 16 Hz), 6.38-6.33 (1H, m), 6.17 (1H, dd, J = 4, 11 Hz), 5.97 (1H, d, J = 11 Hz), 5.82 (1H, m), 5.09 (1H, m), 5.00 (1H, m), 4.60 (1H, m), 3.92 (3H, s), 2.75 (1H, m), 2.55 (1H, m). i)13Ｃ核磁気共鳴スペクトル (125 MHz, CDCl 3)： 図１２に示す δ (ppm) : 171.4 (s), 162.1 (s), 161.1 (s), 147.6 (d), 139.2 (s), 137.5 (d), 135.4 (d), 134.2 (d), 133.4 (d), 130.7 (d), 129.3 (d), 129.0 (d), 126.9 (d), 124.4 (d), 124.4 (d), 117.8 (d), 116.8 (d), 112.4 (s), 106.4 (d), 80.6 (d), 72.0 (d), 62.3 (q), 25.3 (t). j)比旋光度： ［α］D 23 = −７７° (c=0.1, CH 3 OH) k)薄層クロマトグラフィー： シリカゲル，CH2 Cl2 : CH3 OH = 20 : 1 Ｒｆ =０．４８
【００１１】本発明の化合物は、シュードモナス・クロ
ロラフィスＮｏ．４３０６株のようなシュードモナス属
に属するＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及び／又
はＦＲ１９０８７３生産菌を培地に培養し、その培養物
から該化合物を採取することにより調製され得る。シュ
ードモナス属に属するＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８
７２及び／又はＦＲ１９０８７３生産菌のうち、シュー
ドモナス・クロロラフィスＮｏ．４３０６株は、本発明
者らによりメキシコから得られた土壌より新たに分離さ
れた。シュードモナス・クロロラフィス（Pseudomonas
chlororaphis）Ｎｏ．４３０６株は、ブダペスト条約に
基づく国際寄託機関である工業技術院生命工学工業技術
研究所（茨城県つくば市東１丁目１番３号）に１９９５
年９月１３日付で受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５２３２と
して寄託された。
ロラフィスＮｏ．４３０６株のようなシュードモナス属
に属するＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及び／又
はＦＲ１９０８７３生産菌を培地に培養し、その培養物
から該化合物を採取することにより調製され得る。シュ
ードモナス属に属するＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８
７２及び／又はＦＲ１９０８７３生産菌のうち、シュー
ドモナス・クロロラフィスＮｏ．４３０６株は、本発明
者らによりメキシコから得られた土壌より新たに分離さ
れた。シュードモナス・クロロラフィス（Pseudomonas
chlororaphis）Ｎｏ．４３０６株は、ブダペスト条約に
基づく国際寄託機関である工業技術院生命工学工業技術
研究所（茨城県つくば市東１丁目１番３号）に１９９５
年９月１３日付で受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５２３２と
して寄託された。
【００１２】本発明の化合物の生産は、ここに記載の特
定の微生物の使用によるものに限定されないことを理解
されたい。すなわち、少なくとも１つの本発明の化合物
を生産できるいかなる自然又は人工の変異体の使用も包
含するものであり、天然の変異体、およびＸ線照射、紫
外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アジニン、２−アミノプリン等を用いた処理のような慣
用の方法により上述の微生物から誘導され得る人為的な
変異体も含まれる。
定の微生物の使用によるものに限定されないことを理解
されたい。すなわち、少なくとも１つの本発明の化合物
を生産できるいかなる自然又は人工の変異体の使用も包
含するものであり、天然の変異体、およびＸ線照射、紫
外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アジニン、２−アミノプリン等を用いた処理のような慣
用の方法により上述の微生物から誘導され得る人為的な
変異体も含まれる。
【００１３】シュードモナス・クロロラフィスＮｏ．４
３０６株は以下の形態的及び生理的特徴を有する。 （１）形態的特徴 栄養寒天培地上で３０℃、２４時間培養後、光学顕微鏡
及び電子顕微鏡により形態観察を行った。本菌株は、グ
ラム陰性、運動性の桿菌で、大きさは１．０−１．１×
２．０−４．０μｍであった。胞子形成はなかった。
３０６株は以下の形態的及び生理的特徴を有する。 （１）形態的特徴 栄養寒天培地上で３０℃、２４時間培養後、光学顕微鏡
及び電子顕微鏡により形態観察を行った。本菌株は、グ
ラム陰性、運動性の桿菌で、大きさは１．０−１．１×
２．０−４．０μｍであった。胞子形成はなかった。
【００１４】（２）培養的特徴 本菌株の栄養寒天上でのコロニーの性状は、表面はスム
ーズ、灰黄色、円形、周縁は滑らかであった。また、バ
クト・シュードモナス寒天Ｆ培地上で水溶性の蛍光色素
を生成した。さらに、緑色の色素（Chlororaphin色素）
をコロニー上で結晶状に、そして培地中にも生成した。
ーズ、灰黄色、円形、周縁は滑らかであった。また、バ
クト・シュードモナス寒天Ｆ培地上で水溶性の蛍光色素
を生成した。さらに、緑色の色素（Chlororaphin色素）
をコロニー上で結晶状に、そして培地中にも生成した。
【００１５】（３）生理的特徴 本菌株の生理的特徴を表１及び表２に示す。本菌の生育
温度範囲は４℃から３４℃であった。本菌は、カタラー
ゼ、オキシダーゼ、クエン酸の資化性、硝酸塩の還元、
ゼラチン加水分解、Ｔｗｅｅｎ８０加水分解、カゼイン
加水分解及びアルギニンジヒドロラーゼの試験はいずれ
も陽性であった。Ｏ−Ｆ試験は酸化的であり、ピオベル
ジンの生成は陽性であった。インドール生成、澱粉の分
解、ＯＮＰＧ試験はいずれも陰性であった。Ｄ−グルコ
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンニ
トール、シュークロースより酸の生成がみられた。ま
た、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンニト
ール、Ｄ−マンノース、Ｄ−トレハロース、グリセリ
ン、イノシトール、シュークロース、Ｎ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン、グルコン酸、カプリン酸及びリンゴ酸
を資化した。
温度範囲は４℃から３４℃であった。本菌は、カタラー
ゼ、オキシダーゼ、クエン酸の資化性、硝酸塩の還元、
ゼラチン加水分解、Ｔｗｅｅｎ８０加水分解、カゼイン
加水分解及びアルギニンジヒドロラーゼの試験はいずれ
も陽性であった。Ｏ−Ｆ試験は酸化的であり、ピオベル
ジンの生成は陽性であった。インドール生成、澱粉の分
解、ＯＮＰＧ試験はいずれも陰性であった。Ｄ−グルコ
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンニ
トール、シュークロースより酸の生成がみられた。ま
た、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンニト
ール、Ｄ−マンノース、Ｄ−トレハロース、グリセリ
ン、イノシトール、シュークロース、Ｎ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン、グルコン酸、カプリン酸及びリンゴ酸
を資化した。
【００１６】
【表１】
【００１７】
【表２】
【００１８】分類学的研究はBergey's Manual of Syste
matic Bacteriology Vol.1 (Kreig,N.R. and Holt, J.
G. ed., Williams and Wilkins company, Baltimore, 1
984)及びManual for Identification of Medical Bacte
ria (Cowan, S.T. ed., Cambridge University Press,
1974) に記載された方法に従った。上記の特徴をもとに
詳細に検討した結果、本菌はシュードモナス・クロロラ
フィス (Pseudomonaschlororaphis)と推定された。両菌
株を比較検討した結果、両菌株の性質に大きな相違は認
められなかった。以上より、本菌をシュードモナス・ク
ロロラフィスＮｏ．４３０６と同定した。
matic Bacteriology Vol.1 (Kreig,N.R. and Holt, J.
G. ed., Williams and Wilkins company, Baltimore, 1
984)及びManual for Identification of Medical Bacte
ria (Cowan, S.T. ed., Cambridge University Press,
1974) に記載された方法に従った。上記の特徴をもとに
詳細に検討した結果、本菌はシュードモナス・クロロラ
フィス (Pseudomonaschlororaphis)と推定された。両菌
株を比較検討した結果、両菌株の性質に大きな相違は認
められなかった。以上より、本菌をシュードモナス・ク
ロロラフィスＮｏ．４３０６と同定した。
【００１９】一般に、本発明の化合物は、本発明の化合
物生産菌を同化し得る炭素源や窒素源を含む栄養培地中
で、好ましくは好気性の条件下で培養することにより製
造され得る（例えば、振とう培養、液内培養等）。栄養
培地中の炭素源としては、好ましくはグルコース、フル
クトース、グリセリン、スターチのような炭水化物であ
る。またラクトース、アラビノース、キシロース、デキ
ストリン、糖密等の他の炭素源を含有してもよい。窒素
源としては、好ましくは酵母抽出物、ペプトン、グルテ
ン粉、綿実粉、大豆粉、コーンスティープリカー、乾燥
酵母等、およびアンモニウム塩（例えば、硝酸アンモニ
ウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等）、尿
素、アミノ酸等のような無機および有機窒素化合物であ
る。炭素源および窒素源は、組み合わせて使用すること
が有利であるが、それらが純粋な形態で使用される必要
はない。なぜなら、微量の成長因子と大量の無機質の栄
養素を含む純度の低い材料も、また使用には適している
からである。所望により、炭酸カルシウム、リン酸ナト
リウムまたはリン酸カリウム、ヨウ化ナトリウムまたは
ヨウ化カリウム、マグネシウム塩、塩化コバルト等のよ
うな無機塩が培地に添加され得る。必要により、培養培
地が非常に泡立つときは、流動パラフィン、高級アルコ
ール、植物油、鉱物油またはシリコーンのような消泡剤
が添加され得る。
物生産菌を同化し得る炭素源や窒素源を含む栄養培地中
で、好ましくは好気性の条件下で培養することにより製
造され得る（例えば、振とう培養、液内培養等）。栄養
培地中の炭素源としては、好ましくはグルコース、フル
クトース、グリセリン、スターチのような炭水化物であ
る。またラクトース、アラビノース、キシロース、デキ
ストリン、糖密等の他の炭素源を含有してもよい。窒素
源としては、好ましくは酵母抽出物、ペプトン、グルテ
ン粉、綿実粉、大豆粉、コーンスティープリカー、乾燥
酵母等、およびアンモニウム塩（例えば、硝酸アンモニ
ウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等）、尿
素、アミノ酸等のような無機および有機窒素化合物であ
る。炭素源および窒素源は、組み合わせて使用すること
が有利であるが、それらが純粋な形態で使用される必要
はない。なぜなら、微量の成長因子と大量の無機質の栄
養素を含む純度の低い材料も、また使用には適している
からである。所望により、炭酸カルシウム、リン酸ナト
リウムまたはリン酸カリウム、ヨウ化ナトリウムまたは
ヨウ化カリウム、マグネシウム塩、塩化コバルト等のよ
うな無機塩が培地に添加され得る。必要により、培養培
地が非常に泡立つときは、流動パラフィン、高級アルコ
ール、植物油、鉱物油またはシリコーンのような消泡剤
が添加され得る。
【００２０】本発明の化合物の大量生産の条件として、
液内好気性培養条件が好ましい。少量生産には、フラス
コまたは瓶中での振とうまたは表面培養が採用される。
さらに大きいタンクで増殖を行うときには、本発明の化
合物の製造工程での増殖の遅れを避けるために、増殖型
（対数増殖期）の生産菌を製造タンク中への接種に使用
することが好ましい。よって、望ましくは、生産菌を比
較的少量の培地に接種し、培養する（前培養）ことによ
り、微生物の増殖型の接種物を製造し、そして、その前
培養を無菌的に大きなタンクに移し、本培養に供する。
増殖型の接種物を製造する培地としては、本発明の化合
物生産菌の本培養に利用される培地と実質的に同一かま
たは若干異なった培地が使用され得る。
液内好気性培養条件が好ましい。少量生産には、フラス
コまたは瓶中での振とうまたは表面培養が採用される。
さらに大きいタンクで増殖を行うときには、本発明の化
合物の製造工程での増殖の遅れを避けるために、増殖型
（対数増殖期）の生産菌を製造タンク中への接種に使用
することが好ましい。よって、望ましくは、生産菌を比
較的少量の培地に接種し、培養する（前培養）ことによ
り、微生物の増殖型の接種物を製造し、そして、その前
培養を無菌的に大きなタンクに移し、本培養に供する。
増殖型の接種物を製造する培地としては、本発明の化合
物生産菌の本培養に利用される培地と実質的に同一かま
たは若干異なった培地が使用され得る。
【００２１】培地混合物の攪拌および通気は、種々の方
法で行われ得る。攪拌は、プロペラまたは同様の機械的
な攪拌装置の使用、培養器の回転または振とう、種々の
ポンプ装置の使用、または滅菌エアーを培地に通すこと
により行われ得る。通気は滅菌エアーを培養混合物に通
すことにより行われ得る。培養は、通常約４℃〜約３４
℃、好ましくは約２０℃〜約３０℃の温度で、５０時間
〜１００時間行われ、培養条件およびスケールに従って
変え得る。このようにして製造された本発明の化合物
は、抗生物質のような他の培養生産物の採取に一般に使
用される慣用の方法により培養物から採取され得る。一
般に、本発明の化合物は、培養物から、通常の溶媒を用
いた抽出、減圧下での濃縮、凍結乾燥、ｐＨ調整、通常
の樹脂を用いた処理（例えば、陰イオン又は陽イオン交
換樹脂、非イオン性吸着樹脂）、通常の吸着剤を用いた
処理（例えば、活性炭、珪酸、シリカゲル、セルロー
ス、アルミナ）、結晶化、再結晶等のような方法により
分離される。
法で行われ得る。攪拌は、プロペラまたは同様の機械的
な攪拌装置の使用、培養器の回転または振とう、種々の
ポンプ装置の使用、または滅菌エアーを培地に通すこと
により行われ得る。通気は滅菌エアーを培養混合物に通
すことにより行われ得る。培養は、通常約４℃〜約３４
℃、好ましくは約２０℃〜約３０℃の温度で、５０時間
〜１００時間行われ、培養条件およびスケールに従って
変え得る。このようにして製造された本発明の化合物
は、抗生物質のような他の培養生産物の採取に一般に使
用される慣用の方法により培養物から採取され得る。一
般に、本発明の化合物は、培養物から、通常の溶媒を用
いた抽出、減圧下での濃縮、凍結乾燥、ｐＨ調整、通常
の樹脂を用いた処理（例えば、陰イオン又は陽イオン交
換樹脂、非イオン性吸着樹脂）、通常の吸着剤を用いた
処理（例えば、活性炭、珪酸、シリカゲル、セルロー
ス、アルミナ）、結晶化、再結晶等のような方法により
分離される。
【００２２】ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及び
ＦＲ１９０８７３の生理学的性質は、以下の試験で詳細
に説明される。 試験例１〔ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦ
Ｒ１９０８７３の抗菌、抗カビ活性〕 ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８
７３の数種の細菌、カビに対する抗菌活性をパルプ法に
より検討した。３７℃で一晩培養後、最小発育阻止濃度
（ＭＩＣ）を測定した。その結果、ＦＲ１９０８９５、
ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８７３は、試験したグ
ラム陽性菌、グラム陰性菌及びカビ（例えば、バチラス
・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、エシ
ェリシア・コリ、アスペルギルス１３０５）に対して、
いずれも１０００μｇ／ｍｌの濃度で抗菌活性を示さな
かった。
ＦＲ１９０８７３の生理学的性質は、以下の試験で詳細
に説明される。 試験例１〔ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦ
Ｒ１９０８７３の抗菌、抗カビ活性〕 ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８
７３の数種の細菌、カビに対する抗菌活性をパルプ法に
より検討した。３７℃で一晩培養後、最小発育阻止濃度
（ＭＩＣ）を測定した。その結果、ＦＲ１９０８９５、
ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８７３は、試験したグ
ラム陽性菌、グラム陰性菌及びカビ（例えば、バチラス
・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、エシ
ェリシア・コリ、アスペルギルス１３０５）に対して、
いずれも１０００μｇ／ｍｌの濃度で抗菌活性を示さな
かった。
【００２３】試験例２〔ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０
８７２及びＦＲ１９０８７３のインビトロ (in vitro)
抗腫瘍活性〕 癌細胞として、異なるｐ５３遺伝子の状態を有する３種
のヒト培養癌細胞株、Ａ５４９ヒト肺腺癌（正常型ｐ５
３）、ＨＴ２９ヒト結腸腺癌（点変異型ｐ５３）及びＨ
Ｌ−６０ヒト白血病細胞（ｐ５３欠損型）を用いた。Ｆ
Ｒ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８７
３の２倍順次希釈液（メタノール溶液）を１０％仔牛血
清、ペニシリンＧ（５０ｕｎｉｔｓ／ｍｌ）及びストレ
プトマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を添加したダルベッコ
（Dulbecco）変法最少必須培地（以下、Dul 完全培地と
略す）５０μｌを含む９６穴マイクロ滴定プレート中に
調製した。ヒト培養癌細胞株を、その細胞に最も好適な
培地を用いてインビトロで継代後、濃度１×１０5 個／
ｍｌになるように調製した。この細胞懸濁液５０μｌを
各ウェルに注入し、３７℃、５％の炭酸ガスを含有する
加湿雰囲気中で７日間インキュベーションした後、Mosm
ann の方法(J. Immunol. Methods, 65: 55-63, 1983)に
従い，ＭＴＴ法により分析した。ＭＴＴ（３−（４，５
−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニ
ルテトラゾリウムブロミド、シグマ社製）をリン酸緩衝
生理食塩水（ＰＢＳ）に５ｍｇ／ｍｌになるように溶解
し、濾過滅菌して少量の不溶性残査を除いた。このＭＴ
Ｔ溶液を培養終了後のヒト癌細胞株に加え（培地１００
μｌあたり１０μｌ）、さらに３７℃で４時間インキュ
ベーションした。酸性イソプロピルアルコール（０．０
４規定塩酸を含むイソプロピルアルコール）１００μｌ
を各ウェルに加えて十分攪拌し、暗青色結晶を溶解させ
た後、マイクロプレートリーダー(Model MTP-120; Coro
na Electric Co.,Ltd., Katsuta, Japan)を用いて６６
０ｎｍをレファレンス波長として５５０ｎｍの吸光度を
測定し、生細胞数を定量した。細胞生育を５０％阻止す
るのに必要な物質濃度（ＩＣ50）を、薬理濃度の対数を
薬物処理細胞の生育率に対してプロットして測定した。
結果を表３に示す。
８７２及びＦＲ１９０８７３のインビトロ (in vitro)
抗腫瘍活性〕 癌細胞として、異なるｐ５３遺伝子の状態を有する３種
のヒト培養癌細胞株、Ａ５４９ヒト肺腺癌（正常型ｐ５
３）、ＨＴ２９ヒト結腸腺癌（点変異型ｐ５３）及びＨ
Ｌ−６０ヒト白血病細胞（ｐ５３欠損型）を用いた。Ｆ
Ｒ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８７
３の２倍順次希釈液（メタノール溶液）を１０％仔牛血
清、ペニシリンＧ（５０ｕｎｉｔｓ／ｍｌ）及びストレ
プトマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を添加したダルベッコ
（Dulbecco）変法最少必須培地（以下、Dul 完全培地と
略す）５０μｌを含む９６穴マイクロ滴定プレート中に
調製した。ヒト培養癌細胞株を、その細胞に最も好適な
培地を用いてインビトロで継代後、濃度１×１０5 個／
ｍｌになるように調製した。この細胞懸濁液５０μｌを
各ウェルに注入し、３７℃、５％の炭酸ガスを含有する
加湿雰囲気中で７日間インキュベーションした後、Mosm
ann の方法(J. Immunol. Methods, 65: 55-63, 1983)に
従い，ＭＴＴ法により分析した。ＭＴＴ（３−（４，５
−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニ
ルテトラゾリウムブロミド、シグマ社製）をリン酸緩衝
生理食塩水（ＰＢＳ）に５ｍｇ／ｍｌになるように溶解
し、濾過滅菌して少量の不溶性残査を除いた。このＭＴ
Ｔ溶液を培養終了後のヒト癌細胞株に加え（培地１００
μｌあたり１０μｌ）、さらに３７℃で４時間インキュ
ベーションした。酸性イソプロピルアルコール（０．０
４規定塩酸を含むイソプロピルアルコール）１００μｌ
を各ウェルに加えて十分攪拌し、暗青色結晶を溶解させ
た後、マイクロプレートリーダー(Model MTP-120; Coro
na Electric Co.,Ltd., Katsuta, Japan)を用いて６６
０ｎｍをレファレンス波長として５５０ｎｍの吸光度を
測定し、生細胞数を定量した。細胞生育を５０％阻止す
るのに必要な物質濃度（ＩＣ50）を、薬理濃度の対数を
薬物処理細胞の生育率に対してプロットして測定した。
結果を表３に示す。
【００２４】
【表３】
【００２５】試験例３〔ＦＲ１９０８９５及びＦＲ１９
０８７２のヒト癌細胞におけるＣｉｐ１発現に及ぼす効
果〕 ヒト癌細胞株Ａ５４９、ＨＴ２９、ＨＬ−６０（１×１
０6 個）を、１０ｃｍペトリ皿（ベクトンディキンソン
社製登録商標ＦＡＬＣＯＮ）でDul 完全培地中２４時間
培養後、ＦＲ１９０８９５又はＦＲ１９０８７２を添加
し、さらに１６ないし２４時間培養した。薬剤処理細胞
を回収後、RNeasy Total RNA Kit（QIAGEN社製) を用い
添付プロトコールに従って全ＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ
定量後、RNA PCR Kit (TaKaRa 社製) 及び DNA Therma
l Cycler 480 (PERKIN ELMER社製) を用いて添付プロト
コールと常法に従ってＣｉｐ１ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡ）の
増幅を行った。プライマーは以下のものを用いた。 5'-primer 5'-AAGCTTGGATCCTCAGAGGAGGCGCCATGTCAGAA-3' (35mer) 3'-primer 5'-AAGCTTGGATCCTTCCTGTGGGCGGATTAGGGCTTCCTC-3' (39mer) 上記プライマーの組合せにより、Ｃｉｐ１の全長ｃＤＮ
Ａが増幅される。ＰＣＲ反応液を２％アガロースゲル電
気泳動し、増幅断片を分析した。結果の一部を図１３に
示す。ＦＲ１９０８９５及びＦＲ１９０８７２は、ｐ５
３遺伝子の状態に関係なく、いずれの癌細胞においても
Ｃｉｐ１ｍＲＮＡを誘導した。
０８７２のヒト癌細胞におけるＣｉｐ１発現に及ぼす効
果〕 ヒト癌細胞株Ａ５４９、ＨＴ２９、ＨＬ−６０（１×１
０6 個）を、１０ｃｍペトリ皿（ベクトンディキンソン
社製登録商標ＦＡＬＣＯＮ）でDul 完全培地中２４時間
培養後、ＦＲ１９０８９５又はＦＲ１９０８７２を添加
し、さらに１６ないし２４時間培養した。薬剤処理細胞
を回収後、RNeasy Total RNA Kit（QIAGEN社製) を用い
添付プロトコールに従って全ＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ
定量後、RNA PCR Kit (TaKaRa 社製) 及び DNA Therma
l Cycler 480 (PERKIN ELMER社製) を用いて添付プロト
コールと常法に従ってＣｉｐ１ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡ）の
増幅を行った。プライマーは以下のものを用いた。 5'-primer 5'-AAGCTTGGATCCTCAGAGGAGGCGCCATGTCAGAA-3' (35mer) 3'-primer 5'-AAGCTTGGATCCTTCCTGTGGGCGGATTAGGGCTTCCTC-3' (39mer) 上記プライマーの組合せにより、Ｃｉｐ１の全長ｃＤＮ
Ａが増幅される。ＰＣＲ反応液を２％アガロースゲル電
気泳動し、増幅断片を分析した。結果の一部を図１３に
示す。ＦＲ１９０８９５及びＦＲ１９０８７２は、ｐ５
３遺伝子の状態に関係なく、いずれの癌細胞においても
Ｃｉｐ１ｍＲＮＡを誘導した。
【００２６】試験例４〔ＦＲ１９０８７２のヒト癌細胞
株における細胞周期に及ぼす効果〕 ＨＴ２９細胞（１×１０6 個）を細胞培養皿（１００×
２０ｍｍ、ベクトンディキンソン社製登録商標ＦＡＬＣ
ＯＮ）に移し、Dul 完全培地で、ＦＲ１９０８７２（５
００μｇ／ｍｌ）存在下、３７℃、５％の炭酸ガスを含
む加湿雰囲気中で１６時間培養した。５−ブロモ−２’
−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ、シグマ社製）溶液〔１
ｍｇ／ｍｌリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）〕を最終濃
度３０μｇ／ｍｌとなるように培養液に加え、さらに３
０分培養し、被験細胞のＤＮＡにＢｒｄＵを取り込ませ
た。被験細胞をトリプシンにて回収し、ＰＢＳで洗浄
後、５００μｌのＰＢＳに再懸濁させた。細胞懸濁液に
５ｍｌの冷７０％水性エタノールを攪拌しながら加え、
さらに４℃に３０分間保ち細胞を固定した。０．５％仔
牛血清及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（半井化学社製）を
含むＰＢＳ（洗浄液）で洗浄後、被験細胞単離核を７０
０μｌの４規定塩酸（和光純薬社製）に懸濁し、室温で
３０分間放置した。７００μｌの０．１規定四ホウ酸ナ
トリウム溶液（半井化学社製）で中和し、洗浄液で洗っ
た後、２０μｌのフルオレセイン標識抗ＢｒｄＵ抗体溶
液（ベクトンディキンソン社製）に懸濁し、室温で３０
分反応させた。洗浄液で洗った後、抗体処理単離核ＤＮ
Ａをヨウ化プロピジウム溶液（１０μｇ／ｍｌ ＰＢ
Ｓ、シグマ社製）で染色した。ＦＲ１９０８７２の細胞
周期遷移に対する効果は、フルオレッセンス・アクティ
ベーティド・セル・ソーター（Fluorescence Activated
Cell Sorter; ＦＡＣＳ、ベクトンディキンソン社製）
を用い、ＤＮＡ合成速度とＤＮＡ量を測定することによ
り検定した。結果を図１４に示す。ＦＲ１９０８７２処
理細胞はＤＮＡ量の増加，ＢｒｄＵの取り込みの上昇が
みられず、Ｇ1 期にアレスト (arrest) されていること
が示された。
株における細胞周期に及ぼす効果〕 ＨＴ２９細胞（１×１０6 個）を細胞培養皿（１００×
２０ｍｍ、ベクトンディキンソン社製登録商標ＦＡＬＣ
ＯＮ）に移し、Dul 完全培地で、ＦＲ１９０８７２（５
００μｇ／ｍｌ）存在下、３７℃、５％の炭酸ガスを含
む加湿雰囲気中で１６時間培養した。５−ブロモ−２’
−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ、シグマ社製）溶液〔１
ｍｇ／ｍｌリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）〕を最終濃
度３０μｇ／ｍｌとなるように培養液に加え、さらに３
０分培養し、被験細胞のＤＮＡにＢｒｄＵを取り込ませ
た。被験細胞をトリプシンにて回収し、ＰＢＳで洗浄
後、５００μｌのＰＢＳに再懸濁させた。細胞懸濁液に
５ｍｌの冷７０％水性エタノールを攪拌しながら加え、
さらに４℃に３０分間保ち細胞を固定した。０．５％仔
牛血清及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（半井化学社製）を
含むＰＢＳ（洗浄液）で洗浄後、被験細胞単離核を７０
０μｌの４規定塩酸（和光純薬社製）に懸濁し、室温で
３０分間放置した。７００μｌの０．１規定四ホウ酸ナ
トリウム溶液（半井化学社製）で中和し、洗浄液で洗っ
た後、２０μｌのフルオレセイン標識抗ＢｒｄＵ抗体溶
液（ベクトンディキンソン社製）に懸濁し、室温で３０
分反応させた。洗浄液で洗った後、抗体処理単離核ＤＮ
Ａをヨウ化プロピジウム溶液（１０μｇ／ｍｌ ＰＢ
Ｓ、シグマ社製）で染色した。ＦＲ１９０８７２の細胞
周期遷移に対する効果は、フルオレッセンス・アクティ
ベーティド・セル・ソーター（Fluorescence Activated
Cell Sorter; ＦＡＣＳ、ベクトンディキンソン社製）
を用い、ＤＮＡ合成速度とＤＮＡ量を測定することによ
り検定した。結果を図１４に示す。ＦＲ１９０８７２処
理細胞はＤＮＡ量の増加，ＢｒｄＵの取り込みの上昇が
みられず、Ｇ1 期にアレスト (arrest) されていること
が示された。
【００２７】試験例５（ＦＲ１９０８９５による癌細胞
のアポトーシス誘導作用） Ａ５４９ヒト腺癌細胞をts−ｐ５３で形質転換したＡＰ
−３細胞（１×１０5個）を、１０ｃｍペトリ皿でDul
完全培地にてＦＲ１９０８９５存在下、一定時間培養し
た。処理細胞を回収後、Cell Death Detection ELISA(B
oehringer mannheim社製) を用い、添付プロトコールに
従って断片化ＤＮＡを定量した。その結果を図１５に示
す。ＦＲ１９０８９５は、処理後３日目よりＡＰ−３細
胞にアポトーシスによる細胞死の生化学的指標であるＤ
ＮＡの断片化を引き起こし、以後断片化ＤＮＡ量は時間
の経過とともに増加した。
のアポトーシス誘導作用） Ａ５４９ヒト腺癌細胞をts−ｐ５３で形質転換したＡＰ
−３細胞（１×１０5個）を、１０ｃｍペトリ皿でDul
完全培地にてＦＲ１９０８９５存在下、一定時間培養し
た。処理細胞を回収後、Cell Death Detection ELISA(B
oehringer mannheim社製) を用い、添付プロトコールに
従って断片化ＤＮＡを定量した。その結果を図１５に示
す。ＦＲ１９０８９５は、処理後３日目よりＡＰ−３細
胞にアポトーシスによる細胞死の生化学的指標であるＤ
ＮＡの断片化を引き起こし、以後断片化ＤＮＡ量は時間
の経過とともに増加した。
【００２８】試験例６（急性毒性） ＦＲ１９０８９５を、ＩＣＲマウス（雌、６週齢）に経
口投与した結果、ＬＤ50値は、＞１０ｍｇ／ｋｇであっ
た。
口投与した結果、ＬＤ50値は、＞１０ｍｇ／ｋｇであっ
た。
【００２９】試験例７（血中濃度測定） ＦＲ１９０８９５を、ＩＣＲマウス（雌、６週齢）に皮
下投与した。採血は、クロロホルム麻酔下、心臓採血に
より行った。血漿を酢酸エチル抽出し、ＨＰＬＣにて薬
剤の血中濃度を定量した。結果を図１６に示す。ＦＲ１
９０８９５は極めて速やかに吸収されたが、血中持続時
間は短かった。
下投与した。採血は、クロロホルム麻酔下、心臓採血に
より行った。血漿を酢酸エチル抽出し、ＨＰＬＣにて薬
剤の血中濃度を定量した。結果を図１６に示す。ＦＲ１
９０８９５は極めて速やかに吸収されたが、血中持続時
間は短かった。
【００３０】本発明の化合物は、ｐ５３非依存的にＣｉ
ｐ１の発現を誘導し、細胞周期をＧ1 期で停止させ、さ
らに、癌細胞に対してはＧ1 期停止に続いてアポトーシ
スを誘導することにより強い抗腫瘍効果を示す。上記の
生物学的特徴から、本発明の化合物は、哺乳動物（例え
ば、ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ウ
シ、ブタ）用の医薬として使用され、特に細胞周期阻害
剤、ひいては抗腫瘍剤として有用である。
ｐ１の発現を誘導し、細胞周期をＧ1 期で停止させ、さ
らに、癌細胞に対してはＧ1 期停止に続いてアポトーシ
スを誘導することにより強い抗腫瘍効果を示す。上記の
生物学的特徴から、本発明の化合物は、哺乳動物（例え
ば、ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ウ
シ、ブタ）用の医薬として使用され、特に細胞周期阻害
剤、ひいては抗腫瘍剤として有用である。
【００３１】本発明の化合物は、医薬上許容できる担体
との混合物として、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、
ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ウシ、ブタ）に、カプセ
ル、錠剤、顆粒剤、散剤、バッカル錠、舌下錠及び液剤
のような医薬組成物の形態で経口又は非経口投与され得
る。医薬上許容できる担体は、薬学的な目的のために通
常使用される種々の有機または無機の担体物質を含有し
得、具体的にはフィルム賦形剤（例えば、ショ糖、スタ
ーチ、マンニット、ソルビット、ラクトース、グルコー
ス、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カル
シウム等）、結合剤（例えば、セルロース、メチルセル
ロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピル
ピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレング
リコール、ショ糖、スターチ等）、崩壊剤（例えば、ス
ターチ、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースのカルシウム塩、ヒドロキシプロピル−ス
ターチ、グリコール−スターチのナトリウム塩、炭酸水
素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム
等）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、エ
アロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等）、着香
剤（例えば、クエン酸、メントール、グリシン、オレン
ジパウダー等）、防腐剤（例えば、安息香酸ナトリウ
ム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパ
ラベン等）、安定化剤（例えば、クエン酸、クエン酸ナ
トリウム、酢酸等）、沈殿防止剤（例えば、メチルセル
ロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニ
ウム等）、分散剤（例えば、表面活性化剤等）、水性の
希釈剤（例えば、水）、油（例えば、ゴマ油）、基剤ワ
ックス（例えば、カカオバター、ポリエチレングリコー
ル、白色ワセリン等）が挙げられる。
との混合物として、哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、
ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ウシ、ブタ）に、カプセ
ル、錠剤、顆粒剤、散剤、バッカル錠、舌下錠及び液剤
のような医薬組成物の形態で経口又は非経口投与され得
る。医薬上許容できる担体は、薬学的な目的のために通
常使用される種々の有機または無機の担体物質を含有し
得、具体的にはフィルム賦形剤（例えば、ショ糖、スタ
ーチ、マンニット、ソルビット、ラクトース、グルコー
ス、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カル
シウム等）、結合剤（例えば、セルロース、メチルセル
ロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピル
ピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレング
リコール、ショ糖、スターチ等）、崩壊剤（例えば、ス
ターチ、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースのカルシウム塩、ヒドロキシプロピル−ス
ターチ、グリコール−スターチのナトリウム塩、炭酸水
素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム
等）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、エ
アロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等）、着香
剤（例えば、クエン酸、メントール、グリシン、オレン
ジパウダー等）、防腐剤（例えば、安息香酸ナトリウ
ム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパ
ラベン等）、安定化剤（例えば、クエン酸、クエン酸ナ
トリウム、酢酸等）、沈殿防止剤（例えば、メチルセル
ロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニ
ウム等）、分散剤（例えば、表面活性化剤等）、水性の
希釈剤（例えば、水）、油（例えば、ゴマ油）、基剤ワ
ックス（例えば、カカオバター、ポリエチレングリコー
ル、白色ワセリン等）が挙げられる。
【００３２】本発明の化合物の投与量は、疾患の種類、
患者の体重及び／又は年齢、さらには投与経路の種類の
ような種々の要因に依存して変わり得る。本発明の化合
物の最適投与量は、経口又は注射、外用剤等の非経口的
に０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内から適宜選択
される。
患者の体重及び／又は年齢、さらには投与経路の種類の
ような種々の要因に依存して変わり得る。本発明の化合
物の最適投与量は、経口又は注射、外用剤等の非経口的
に０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内から適宜選択
される。
【００３３】
【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的
に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限
定されるものではない。
に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限
定されるものではない。
【００３４】実施例１ （１）シュードモナス・クロロラフィスＮｏ．４３０６
株の培養 ポリペプトン（１％）、酵母エキス（０．５％）、塩化
ナトリウム（０．５％）の組成の種培地を５００ｍｌ容
エルレンマイヤーフラスコに１６０ｍｌ加え、１２０℃
で３０分間滅菌した。それらにＮｏ．４３０６株の斜面
培養物を一白金耳ずつ接種し、ロータリーシェーカーで
毎分２５０回転、３０℃で２４時間振とう培養した。予
めグルコース（２％）、グリセリン（３％）、脱脂大豆
粉（２％）、コーンスティープリカー（０．２％）、鰹
肉エキス（０．１％、和光純薬）、硫酸アンモニウム
（０．２％）、硫酸マグネシウム（０．０１％）及び炭
酸カルシウム（０．１％）の組成の培地（ｐＨ７．０）
４．８Ｌを３０本の５００ｍｌ容エルレンマイヤーフラ
スコに１６０ｍｌずつ注入し、１２０℃で３０分間滅菌
した後、上記培養物を３．２ｍｌずつ接種して、ロータ
リーシェーカーで毎分２５０回転、２５℃で４日間振と
う培養した。
株の培養 ポリペプトン（１％）、酵母エキス（０．５％）、塩化
ナトリウム（０．５％）の組成の種培地を５００ｍｌ容
エルレンマイヤーフラスコに１６０ｍｌ加え、１２０℃
で３０分間滅菌した。それらにＮｏ．４３０６株の斜面
培養物を一白金耳ずつ接種し、ロータリーシェーカーで
毎分２５０回転、３０℃で２４時間振とう培養した。予
めグルコース（２％）、グリセリン（３％）、脱脂大豆
粉（２％）、コーンスティープリカー（０．２％）、鰹
肉エキス（０．１％、和光純薬）、硫酸アンモニウム
（０．２％）、硫酸マグネシウム（０．０１％）及び炭
酸カルシウム（０．１％）の組成の培地（ｐＨ７．０）
４．８Ｌを３０本の５００ｍｌ容エルレンマイヤーフラ
スコに１６０ｍｌずつ注入し、１２０℃で３０分間滅菌
した後、上記培養物を３．２ｍｌずつ接種して、ロータ
リーシェーカーで毎分２５０回転、２５℃で４日間振と
う培養した。
【００３５】（２）ＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７
２及びＦＲ１９０８７３の分離及び精製 培養終了後、培養物（４．８Ｌ）に等量のアセトンを加
え、室温で１時間抽出した後、珪藻土２００ｇを添加
し、濾過した。得られた濾液（９Ｌ）を５Ｌまで減圧濃
縮し、ｐＨ７．０に調整した後、等量の酢酸エチルを加
えて抽出した。抽出残査に再び酢酸エチルを加え、抽出
を繰り返した。得られた抽出液を減圧濃縮し、得られた
油状物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０
０ｍｌ、うち５０ｍｌをまぶしとした）に付した。この
カラムをｎ−ヘキサン（３００ｍｌ）、ｎ−ヘキサン及
び酢酸エチル（３：１；ｖ／ｖ）の混液（３００ｍｌ）
で洗った後、ｎ−ヘキサン及び酢酸エチル（１：１；ｖ
／ｖ）の混液（３００ｍｌ）で溶出した。細胞周期阻害
活性を有する溶出液（活性は温度感受性変異型ｐ５３で
トランスフォームしたヒト肺腺癌Ａ５４９細胞を用いて
モニターした）を減圧濃縮し、得られた油状物質を再び
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００ｍｌ）に
付した。カラムをジクロロメタン（３００ｍｌ）、ジク
ロロメタン及びメタノール（１００：１；ｖ／ｖ）の混
液（３００ｍｌ）並びにジクロロメタン及びメタノール
（５０：１；ｖ／ｖ）の混液（３００ｍｌ）で洗った
後、ジクロロメタン及びメタノール（２５：１；ｖ／
ｖ）の混液（３００ｍｌ）で溶出した。活性溶出液を減
圧濃縮し、得られた油状物質を２０ｍｌのメタノールに
溶解した。該メタノール溶液を逆相樹脂「ＹＭＣ ＯＤ
Ｓ−ＡＭ」（商標、ＹＭＣ社製）（ＯＤＳ−ＡＭ１２０
−Ｓ−５０タイプ）を充填したカラムに付した。カラム
を７０％水性メタノールで展開し、各活性画分を減圧濃
縮、乾燥してＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及び
ＦＲ１９０８７３の淡黄色粉末をそれぞれ２５０ｍｇ、
２００ｍｇ及び１５ｍｇ得た。
２及びＦＲ１９０８７３の分離及び精製 培養終了後、培養物（４．８Ｌ）に等量のアセトンを加
え、室温で１時間抽出した後、珪藻土２００ｇを添加
し、濾過した。得られた濾液（９Ｌ）を５Ｌまで減圧濃
縮し、ｐＨ７．０に調整した後、等量の酢酸エチルを加
えて抽出した。抽出残査に再び酢酸エチルを加え、抽出
を繰り返した。得られた抽出液を減圧濃縮し、得られた
油状物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０
０ｍｌ、うち５０ｍｌをまぶしとした）に付した。この
カラムをｎ−ヘキサン（３００ｍｌ）、ｎ−ヘキサン及
び酢酸エチル（３：１；ｖ／ｖ）の混液（３００ｍｌ）
で洗った後、ｎ−ヘキサン及び酢酸エチル（１：１；ｖ
／ｖ）の混液（３００ｍｌ）で溶出した。細胞周期阻害
活性を有する溶出液（活性は温度感受性変異型ｐ５３で
トランスフォームしたヒト肺腺癌Ａ５４９細胞を用いて
モニターした）を減圧濃縮し、得られた油状物質を再び
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００ｍｌ）に
付した。カラムをジクロロメタン（３００ｍｌ）、ジク
ロロメタン及びメタノール（１００：１；ｖ／ｖ）の混
液（３００ｍｌ）並びにジクロロメタン及びメタノール
（５０：１；ｖ／ｖ）の混液（３００ｍｌ）で洗った
後、ジクロロメタン及びメタノール（２５：１；ｖ／
ｖ）の混液（３００ｍｌ）で溶出した。活性溶出液を減
圧濃縮し、得られた油状物質を２０ｍｌのメタノールに
溶解した。該メタノール溶液を逆相樹脂「ＹＭＣ ＯＤ
Ｓ−ＡＭ」（商標、ＹＭＣ社製）（ＯＤＳ−ＡＭ１２０
−Ｓ−５０タイプ）を充填したカラムに付した。カラム
を７０％水性メタノールで展開し、各活性画分を減圧濃
縮、乾燥してＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及び
ＦＲ１９０８７３の淡黄色粉末をそれぞれ２５０ｍｇ、
２００ｍｇ及び１５ｍｇ得た。
【００３６】
【発明の効果】以上の説明で明らかなように、本発明の
化合物は、ｐ５３非依存的にｐ２１／Ｃｉｐ１の発現を
誘導し、細胞周期をＧ1 期で停止させるとともに、癌細
胞に対しては、Ｇ1 期停止に引き続いてアポトーシスを
誘導し、その増殖を抑制する作用を示す新規化合物であ
る。そのため、哺乳動物に対する抗腫瘍剤として有効で
あると考えられる。
化合物は、ｐ５３非依存的にｐ２１／Ｃｉｐ１の発現を
誘導し、細胞周期をＧ1 期で停止させるとともに、癌細
胞に対しては、Ｇ1 期停止に引き続いてアポトーシスを
誘導し、その増殖を抑制する作用を示す新規化合物であ
る。そのため、哺乳動物に対する抗腫瘍剤として有効で
あると考えられる。
【図１】ＦＲ１９０８９５の紫外線吸収スペクトルを示
すチャートである。
すチャートである。
【図２】ＦＲ１９０８９５の赤外線吸収スペクトルを示
すチャートである。
すチャートである。
【図３】ＦＲ１９０８９５の 1Ｈ核磁気共鳴スペクトル
を示すチャートである。
を示すチャートである。
【図４】ＦＲ１９０８９５の13Ｃ核磁気共鳴スペクトル
を示すチャートである。
を示すチャートである。
【図５】ＦＲ１９０８７２の紫外線吸収スペクトルを示
すチャートである。
すチャートである。
【図６】ＦＲ１９０８７２の赤外線吸収スペクトルを示
すチャートである。
すチャートである。
【図７】ＦＲ１９０８７２の 1Ｈ核磁気共鳴スペクトル
を示すチャートである。
を示すチャートである。
【図８】ＦＲ１９０８７２の13Ｃ核磁気共鳴スペクトル
を示すチャートである。
を示すチャートである。
【図９】ＦＲ１９０８７３の紫外線吸収スペクトルを示
すチャートである。
すチャートである。
【図１０】ＦＲ１９０８７３の赤外線吸収スペクトルを
示すチャートである。
示すチャートである。
【図１１】ＦＲ１９０８７３の 1Ｈ核磁気共鳴スペクト
ルを示すチャートである。
ルを示すチャートである。
【図１２】ＦＲ１９０８７３の13Ｃ核磁気共鳴スペクト
ルを示すチャートである。
ルを示すチャートである。
【図１３】ＦＲ１９０８９５及びＦＲ１９０８７２のヒ
ト癌細胞におけるｐ２１／Ｃｉｐ１の発現誘導効果を示
す電気泳動写真である。
ト癌細胞におけるｐ２１／Ｃｉｐ１の発現誘導効果を示
す電気泳動写真である。
【図１４】ＦＲ１９０８７２の細胞周期阻害効果を示す
プロットである。
プロットである。
【図１５】ＦＲ１９０８９５の癌細胞のアポトーシス誘
導効果を示すプロットである。
導効果を示すプロットである。
【図１６】ＦＲ１９０８９５の血中濃度の経時変化を示
すプロットである。
すプロットである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (72)発明者 高瀬 茂弘 茨城県石岡市総社１−12−10 (72)発明者 寺野 紘 茨城県土浦市真鍋2600−３
Claims (7)
- 【請求項１】 以下の性質を有する化合物ＦＲ１９０８
９５、ＦＲ１９０８７２及びＦＲ１９０８７３からなる
群より選択される化合物。 （１）ＦＲ１９０８９５ a)形状： 淡黄色粉末 b)分子式： Ｃ23Ｈ24Ｎ2 Ｏ7 c)融点： １０２−１０５℃ d)分子量： ４４０ [FAB-MS : m/z 441 (M + H)] e)紫外線吸収スペクトル： 図１に示す λmax (CH3OH) ： 220 (sh), 273, 305 (sh) nm f)赤外線吸収スペクトル： 図２に示す νmax (KBr) : 3370, 2940, 1710, 1650, 1580, 1510, 1470, 1300, 1250, 1100, 1040 cm -1 g)溶解性： 易溶： メタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド 不溶： 水 h)呈色反応： 陽性： 硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気との反応 陰性： ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応、モーリッシュ反応 i) 1Ｈ核磁気共鳴スペクトル (500 MHz, CDCl 3)： 図３に示す δ (ppm) : 9.96 (1H, s, 交換可能), 9.02 (1H, d, J = 10 Hz), 8.61 (1H, d, J = 11 Hz, 交換可能), 7.36 (1H, dd, J = 8, 8 Hz), 7.05 (1H, d, J = 16 Hz), 6.94 (1H, d, J = 8 Hz), 6.87 (1H, m), 6.74 (1H, d, J = 8 Hz), 6.49 (1H, dd, J = 12, 10 Hz), 6.13 (1H, dd, J = 12, 7 Hz), 5.94 (1H, d, J = 12 Hz), 5.90 (1H, dd, J = 16, 7 Hz), 5.74 (1H, br d, J = 12 Hz), 5.14 (1H, m), 5.06 (1H, m), 3.98 (1H, m), 3.93 (3H, s), 3.73 (1H, m), 3.54 (1H, m), 3.04 (1H, br s, 交換可能), 2.90 (1H, m), 2.50 (1H, m). j)13Ｃ核磁気共鳴スペクトル (125 MHz, CDCl 3)： 図４に示す δ (ppm) : 169.9 (s), 162.2 (s), 160.5 (s), 147.7 (d), 141.2 (s), 135.4 (d), 135.3 (d), 134.0 (d), 129.0 (d), 127.5 (d), 124.6 (d), 124.3 (d), 123.6 (d), 120.2 (d), 116.7 (d), 113.2 (s), 108.1 (d), 75.0 (d), 67.8 (d), 62.3 (q), 57.9 (d), 57.8 (d), 25.7 (t). k)比旋光度： [α］D 23 = −３０６゜(c = 0.5, CH3OH) （２）ＦＲ１９０８７２ a)形状： 淡黄色粉末 b)分子式： Ｃ23Ｈ24Ｎ2 Ｏ6 c)融点： １０４−１０７℃ d)分子量： ４２４［FAB-MS : m/z 425 (M + H)] e)紫外線吸収スペクトル： 図５に示す λmax (CH 3 OH) ： 282, 305 (sh) nm f)赤外線吸収スペクトル： 図６に示す νmax (KBr) : 3340, 3010, 2940, 1710, 1650, 1580, 1510, 1460, 1290, 1250, 1220, 1200, 1040 cm -1 g)溶解性： 易溶： メタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド 不溶： 水 h)呈色反応： 陽性： 硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気との反応 陰性： ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応、モーリッシュ反応 i) 1Ｈ核磁気共鳴スペクトル (500 MHz, CDCl 3)： 図７に示す δ (ppm) : 10.75 (1H (OH), s, 交換可能), 9.02 (1H, d, J = 10.3 Hz), 8.39 (1H (NH), d, J = 9.9 Hz, 交換可能), 7.32 (1H, dd, J = 7.7, 7.9 Hz), 6.90-6.82 (3H, m), 6.75 (1H, d, J = 7.4 Hz), 6.72 (1H, dd), 6.50 (1H, dd, J = 10.7, 10.9 Hz), 6.41 (1H, dd, J = 10.0, 10.0 Hz), 6.30 (1H, d, J = 10.0 Hz), 6.09 (1H, d, J = 12.3 Hz), 5.92 (1H, d, J = 11.3 Hz), 5.73 (1H, d, J = 12.2 Hz), 5.30 (1H, dd, J = 4.5, 5.9 Hz), 4.82 (1H, m), 4.34 (1H, m), 3.94 (3H, s), 2.61 (1H, dd, J = 10.7, 12.3 Hz), 2.29 (1H, m). j)13Ｃ核磁気共鳴スペクトル (125 MHz, CDCl 3)： 図８に示す δ (ppm) : 170.9 (s), 162.6 (s), 162.1 (s), 147.7 (d), 140.9 (s), 135.4 (d), 134.1 (d), 133.3 (d), 132.8 (d), 130.8 (d), 130.7 (d), 130.1 (d), 127.0 (d), 126.0 (d), 124.5 (d), 121.7 (d), 117.4 (d), 110.0 (s), 104.5 (d), 77.5 (d), 72.8 (d), 62.3 (q), 27.7 (t). k)比旋光度： ［α］D 23 = −１２４° (c = 0.5, CH 3 OH) （３）ＦＲ１９０８７３ a)形状： 淡黄色粉末 b)分子式： Ｃ23Ｈ24Ｎ2 Ｏ6 c)分子量： ４２４［FAB-MS : m/z 425 (M + H)] d)紫外線吸収スペクトル： 図９に示す λmax (CH 3 OH) ： 240 (sh), 282, 310 (sh) nm e)赤外線吸収スペクトル： 図１０に示す νmax (KBr) : 3400, 3010, 2940, 1710, 1650, 1513, 1460, 1450, 1290, 1260, 1220, 1120, 1043 cm -1 f)溶解性： 易溶： メタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド 不溶： 水 g)呈色反応： 陽性： 硫酸セリウム反応、ヨウ素蒸気との反応 陰性： ニンヒドリン反応、塩化第二鉄反応、モーリッシュ反応 h) 1Ｈ核磁気共鳴スペクトル (500 MHz, CDCl 3)： 図１１に示す δ (ppm) : 10.10 (1H (OH), br s, 交換可能), 9.02 (1H, d, J = 11 Hz), 8.61 (1H (NH), d, J = 11 Hz, 交換可能), 7.36 (1H, dd, J = 8, 8 Hz), 7.23 (1H, d, J = 16 Hz), 7.08 (1H, d, J = 8 Hz), 6.95-6.85 (2H, m), 6.65 (1H, dd, J = 7, 17 Hz), 6.52 (1H, dd, J = 11, 11 Hz), 6.40 (1H, dd, J = 4, 16 Hz), 6.38-6.33 (1H, m), 6.17 (1H, dd, J = 4, 11 Hz), 5.97 (1H, d, J = 11 Hz), 5.82 (1H, m), 5.09 (1H, m), 5.00 (1H, m), 4.60 (1H, m), 3.92 (3H, s), 2.75 (1H, m), 2.55 (1H, m). i)13Ｃ核磁気共鳴スペクトル (125 MHz, CDCl 3)： 図１２に示す δ (ppm) : 171.4 (s), 162.1 (s), 161.1 (s), 147.6 (d), 139.2 (s), 137.5 (d), 135.4 (d), 134.2 (d), 133.4 (d), 130.7 (d), 129.3 (d), 129.0 (d), 126.9 (d), 124.4 (d), 124.4 (d), 117.8 (d), 116.8 (d), 112.4 (s), 106.4 (d), 80.6 (d), 72.0 (d), 62.3 (q), 25.3 (t). j)比旋光度： ［α］D 23 = −７７° (c = 0.1, CH 3 OH) - 【請求項２】 栄養培地中でシュードモナス(Pseudomon
as) に属するＦＲ１９０８９５、ＦＲ１９０８７２及び
ＦＲ１９０８７３からなる群より選択される少なくとも
１つの化合物の生産菌を培地に培養し、得られた培養物
から該化合物を採取することを特徴とする請求項１に記
載の化合物の製造方法。 - 【請求項３】 請求項１に記載の少なくとも１つの化合
物を含有する医薬組成物。 - 【請求項４】 請求項１に記載の少なくとも１つの化合
物を含有する細胞周期阻害剤。 - 【請求項５】 細胞周期阻害剤が、細胞周期をＧ1 期で
停止させるものである請求項４に記載の細胞周期阻害
剤。 - 【請求項６】 癌抑制遺伝子産物ｐ５３非依存的に、サ
イクリン依存性キナーゼ阻害タンパク質ｐ２１／Ｃｉｐ
１の発現を誘導する物質を有効成分として含有する抗腫
瘍剤。 - 【請求項７】 請求項１に記載の少なくとも１つの化合
物を含有する抗腫瘍剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7279787A JPH09100289A (ja) | 1995-10-02 | 1995-10-02 | 新規化合物ｆｒ１９０８９５、ｆｒ１９０８７２及びｆｒ１９０８７３、その製造方法およびその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7279787A JPH09100289A (ja) | 1995-10-02 | 1995-10-02 | 新規化合物ｆｒ１９０８９５、ｆｒ１９０８７２及びｆｒ１９０８７３、その製造方法およびその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09100289A true JPH09100289A (ja) | 1997-04-15 |
Family
ID=17615918
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7279787A Pending JPH09100289A (ja) | 1995-10-02 | 1995-10-02 | 新規化合物ｆｒ１９０８９５、ｆｒ１９０８７２及びｆｒ１９０８７３、その製造方法およびその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09100289A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002512362A (ja) * | 1998-04-17 | 2002-04-23 | ライジェル・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 細胞パラメーターにおける変化を検出し、小分子ライブラリィをスクリーンするための複数パラメーターｆａｃｓ |
| US8334238B2 (en) | 1998-04-17 | 2012-12-18 | Rigel, Inc. | Multiparameter FACS assays to detect alterations in cellular parameters and to screen small molecule libraries |
-
1995
- 1995-10-02 JP JP7279787A patent/JPH09100289A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002512362A (ja) * | 1998-04-17 | 2002-04-23 | ライジェル・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 細胞パラメーターにおける変化を検出し、小分子ライブラリィをスクリーンするための複数パラメーターｆａｃｓ |
| US8334238B2 (en) | 1998-04-17 | 2012-12-18 | Rigel, Inc. | Multiparameter FACS assays to detect alterations in cellular parameters and to screen small molecule libraries |
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