JPH09101308A - 梅毒トレポネーマ抗体測定法 - Google Patents
梅毒トレポネーマ抗体測定法Info
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- JPH09101308A JPH09101308A JP25871895A JP25871895A JPH09101308A JP H09101308 A JPH09101308 A JP H09101308A JP 25871895 A JP25871895 A JP 25871895A JP 25871895 A JP25871895 A JP 25871895A JP H09101308 A JPH09101308 A JP H09101308A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 汎用性が高く、かつ非特異反応を起こさず、
正確な測定が可能な梅毒トレポネーマ抗体測定法を提供
する。 【解決手段】 梅毒トレポネーマ抗原を担持させた不溶
性担体を使用して、梅毒トレポネーマ抗体との抗原抗体
反応により生じた上記不溶性担体の凝集の度合いを検出
することにより梅毒トレポネーマ抗体を測定する梅毒ト
レポネーマ抗体測定法であって、上記不溶性担体を凝集
させる反応系中に、アミノエタンスルホン酸誘導体及び
／又はアミノプロパンスルホン酸誘導体が、０．００１
〜０．５モル濃度添加されていることよりなる梅毒トレ
ポネーマ抗体測定法。
正確な測定が可能な梅毒トレポネーマ抗体測定法を提供
する。 【解決手段】 梅毒トレポネーマ抗原を担持させた不溶
性担体を使用して、梅毒トレポネーマ抗体との抗原抗体
反応により生じた上記不溶性担体の凝集の度合いを検出
することにより梅毒トレポネーマ抗体を測定する梅毒ト
レポネーマ抗体測定法であって、上記不溶性担体を凝集
させる反応系中に、アミノエタンスルホン酸誘導体及び
／又はアミノプロパンスルホン酸誘導体が、０．００１
〜０．５モル濃度添加されていることよりなる梅毒トレ
ポネーマ抗体測定法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、不溶性担体に担持
した梅毒トレポネーマ抗原と検体中の梅毒トレポネーマ
抗体との抗原抗体反応に基づいて梅毒トレポネーマ抗体
を測定する梅毒トレポネーマ抗体測定法に関する。
した梅毒トレポネーマ抗原と検体中の梅毒トレポネーマ
抗体との抗原抗体反応に基づいて梅毒トレポネーマ抗体
を測定する梅毒トレポネーマ抗体測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術】梅毒トレポネーマ抗原を不溶性担体に担
持させ、梅毒トレポネーマ抗体との抗原抗体反応により
生じた不溶性担体の凝集の度合いを検出することにより
梅毒トレポネーマ抗体を測定する梅毒トレポネーマ抗体
測定法は、例えば、血液等を検体として、梅毒感染の有
無を迅速かつ正確に検査し診断する方法として汎用され
ている。このような梅毒トレポネーマ抗体測定法には、
その凝集反応を行う形態により、赤血球凝集反応法、ラ
テックス凝集法等が知られている。
持させ、梅毒トレポネーマ抗体との抗原抗体反応により
生じた不溶性担体の凝集の度合いを検出することにより
梅毒トレポネーマ抗体を測定する梅毒トレポネーマ抗体
測定法は、例えば、血液等を検体として、梅毒感染の有
無を迅速かつ正確に検査し診断する方法として汎用され
ている。このような梅毒トレポネーマ抗体測定法には、
その凝集反応を行う形態により、赤血球凝集反応法、ラ
テックス凝集法等が知られている。
【０００３】これら凝集反応の測定において、測定感度
の向上又は抗原抗体反応の促進を目的として、ポリエチ
レングリコール（特開昭５８―４７２５６号公報）、ポ
リグリコシルエチルメタクリレート（特開平４―１２２
８５８号公報）、ポリビニルピロリドン（特開平５―１
８０３８３号公報）等の水溶性高分子化合物を反応系に
添加する方法が知られている。
の向上又は抗原抗体反応の促進を目的として、ポリエチ
レングリコール（特開昭５８―４７２５６号公報）、ポ
リグリコシルエチルメタクリレート（特開平４―１２２
８５８号公報）、ポリビニルピロリドン（特開平５―１
８０３８３号公報）等の水溶性高分子化合物を反応系に
添加する方法が知られている。
【０００４】しかし、これら高分子化合物の添加によっ
ては、目的物質以外の共存物質の反応による凝集である
非特異凝集が生じ、誤った測定結果を与えることがあ
る。そこで、牛血清アルブミン、馬血清アルブミン等の
高分子化合物を添加する工夫が知られている（特開昭５
８―１４４７４８号公報）。しかしながら、このような
アルブミンの添加によっても、非特異反応を完全に阻止
することは不可能である。
ては、目的物質以外の共存物質の反応による凝集である
非特異凝集が生じ、誤った測定結果を与えることがあ
る。そこで、牛血清アルブミン、馬血清アルブミン等の
高分子化合物を添加する工夫が知られている（特開昭５
８―１４４７４８号公報）。しかしながら、このような
アルブミンの添加によっても、非特異反応を完全に阻止
することは不可能である。
【０００５】また、低分子化合物を凝集促進剤として添
加する方法としては、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラ
ジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸とエチレンジアミン
四酢酸塩を同時に添加する方法が知られている（特公平
６―８４９７２号公報）。しかし、この方法ではエチレ
ンジアミン四酢酸塩が梅毒トレポネーマの抗原抗体反応
を阻害するので、梅毒トレポネーマ抗体測定法としては
適した方法ではない。
加する方法としては、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラ
ジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸とエチレンジアミン
四酢酸塩を同時に添加する方法が知られている（特公平
６―８４９７２号公報）。しかし、この方法ではエチレ
ンジアミン四酢酸塩が梅毒トレポネーマの抗原抗体反応
を阻害するので、梅毒トレポネーマ抗体測定法としては
適した方法ではない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記に鑑
み、汎用性が高く、かつ非特異反応を起こさず、正確な
測定が可能な梅毒トレポネーマ抗体測定法を提供するこ
とを目的とする。
み、汎用性が高く、かつ非特異反応を起こさず、正確な
測定が可能な梅毒トレポネーマ抗体測定法を提供するこ
とを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、梅毒トレポネ
ーマ抗原を担持させた不溶性担体を使用して、梅毒トレ
ポネーマ抗体との抗原抗体反応により生じた上記不溶性
担体の凝集の度合いを検出することにより梅毒トレポネ
ーマ抗体を測定する梅毒トレポネーマ抗体測定法であっ
て、上記不溶性担体を凝集させる反応系中に、アミノエ
タンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロパンスルホ
ン酸誘導体が、０．００１〜０．５モル濃度添加されて
いることを特徴とするものである。以下に本発明を詳述
する。
ーマ抗原を担持させた不溶性担体を使用して、梅毒トレ
ポネーマ抗体との抗原抗体反応により生じた上記不溶性
担体の凝集の度合いを検出することにより梅毒トレポネ
ーマ抗体を測定する梅毒トレポネーマ抗体測定法であっ
て、上記不溶性担体を凝集させる反応系中に、アミノエ
タンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロパンスルホ
ン酸誘導体が、０．００１〜０．５モル濃度添加されて
いることを特徴とするものである。以下に本発明を詳述
する。
【０００８】本発明の梅毒トレポネーマ抗体測定法にお
いては、不溶性担体に担持させた梅毒トレポネーマ抗原
と、検体中に存在する梅毒トレポネーマ抗体との間の抗
原抗体反応を、反応系において実施し、凝集反応を完結
させる。そして、この凝集反応の度合いを測定すること
により、検体中に存在する梅毒トレポネーマ抗体の量を
測定するものである。
いては、不溶性担体に担持させた梅毒トレポネーマ抗原
と、検体中に存在する梅毒トレポネーマ抗体との間の抗
原抗体反応を、反応系において実施し、凝集反応を完結
させる。そして、この凝集反応の度合いを測定すること
により、検体中に存在する梅毒トレポネーマ抗体の量を
測定するものである。
【０００９】上記反応系は、上記不溶性担体を、通常
は、緩衝液中で検体と混合することにより行う。本発明
においては、上記反応において、反応系中に、アミノエ
タンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロパンスルホ
ン酸誘導体を添加する。これらは、上記反応での反応媒
体としての緩衝剤であり、かつ凝集促進剤となるもので
ある。
は、緩衝液中で検体と混合することにより行う。本発明
においては、上記反応において、反応系中に、アミノエ
タンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロパンスルホ
ン酸誘導体を添加する。これらは、上記反応での反応媒
体としての緩衝剤であり、かつ凝集促進剤となるもので
ある。
【００１０】上記アミノエタンスルホン酸誘導体及び／
又はアミノプロパンスルホン酸誘導体としては特に限定
されず、例えば、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスル
ホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ′−ビス（２
−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−ヒドロキシ
エチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸（ＨＥ
ＰＥＳ）、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−３
−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、３−（Ｎ−モルホ
リノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ
Ｏ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−ア
ミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−トリス（ヒ
ドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸
（ＴＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−
Ｎ′−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸（ＨＥ
ＰＳＯ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキ
シプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ−トリス
（ヒドロキシメチル）メチル−２−ヒドロキシ−３−ア
ミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）等が挙げられ
る。なかでも特に、凝集促進の効果が著しいので、ＭＯ
ＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＨＥＰＥＳが好ましい。
又はアミノプロパンスルホン酸誘導体としては特に限定
されず、例えば、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスル
ホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ′−ビス（２
−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−ヒドロキシ
エチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸（ＨＥ
ＰＥＳ）、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−３
−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、３−（Ｎ−モルホ
リノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ
Ｏ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−ア
ミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−トリス（ヒ
ドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸
（ＴＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−
Ｎ′−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸（ＨＥ
ＰＳＯ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキ
シプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ−トリス
（ヒドロキシメチル）メチル−２−ヒドロキシ−３−ア
ミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）等が挙げられ
る。なかでも特に、凝集促進の効果が著しいので、ＭＯ
ＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＨＥＰＥＳが好ましい。
【００１１】上記アミノエタンスルホン酸誘導体及び／
又はアミノプロパンスルホン酸誘導体の添加量は、０．
００１〜０．５モル濃度である。濃度が低いと、充分な
凝集促進効果を得ることができず、濃度が高いと、緩衝
剤が溶解しなかったり、低温保存中に結晶が析出したり
するので、上記範囲に限定される。好ましくは、０．０
１〜０．２５モル濃度である。
又はアミノプロパンスルホン酸誘導体の添加量は、０．
００１〜０．５モル濃度である。濃度が低いと、充分な
凝集促進効果を得ることができず、濃度が高いと、緩衝
剤が溶解しなかったり、低温保存中に結晶が析出したり
するので、上記範囲に限定される。好ましくは、０．０
１〜０．２５モル濃度である。
【００１２】本発明の梅毒トレポネーマ抗体測定法にお
いて、アミノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノ
プロパンスルホン酸誘導体は、反応系に存在していれば
よい。例えば、ラテックス試薬を用いた抗原抗体反応の
場合には、梅毒トレポネーマ抗原を担持したラテックス
をアミノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロ
パン誘導体を緩衝剤とした緩衝液中に懸濁することがで
きる。
いて、アミノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノ
プロパンスルホン酸誘導体は、反応系に存在していれば
よい。例えば、ラテックス試薬を用いた抗原抗体反応の
場合には、梅毒トレポネーマ抗原を担持したラテックス
をアミノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロ
パン誘導体を緩衝剤とした緩衝液中に懸濁することがで
きる。
【００１３】またこれらを含まないラテックス試薬を使
用することも可能で、この場合には、抗原抗体反応時に
これらが反応系に存在するようにすればよい。例えば、
検体にアミノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノ
プロパンスルホン酸誘導体を添加しておく方法、使用す
る緩衝液を上記緩衝剤からなるものとする方法等があ
り、適宜選択して使用することができる。
用することも可能で、この場合には、抗原抗体反応時に
これらが反応系に存在するようにすればよい。例えば、
検体にアミノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノ
プロパンスルホン酸誘導体を添加しておく方法、使用す
る緩衝液を上記緩衝剤からなるものとする方法等があ
り、適宜選択して使用することができる。
【００１４】従って、本発明の梅毒トレポネーマ抗体測
定法においては、梅毒トレポネーマ抗原を担持した不溶
性担体と上記物質アミノエタンスルホン酸誘導体及び／
又はアミノプロパンスルホン酸誘導体とを含む１液型の
試薬を用いることができ、更にまた、梅毒トレポネーマ
抗原を担持した不溶性担体を含む第１試薬と、上記アミ
ノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロパンス
ルホン酸誘導体を含む緩衝液からなる第２試薬とで構成
された２液型の試薬を用いることもできる。
定法においては、梅毒トレポネーマ抗原を担持した不溶
性担体と上記物質アミノエタンスルホン酸誘導体及び／
又はアミノプロパンスルホン酸誘導体とを含む１液型の
試薬を用いることができ、更にまた、梅毒トレポネーマ
抗原を担持した不溶性担体を含む第１試薬と、上記アミ
ノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロパンス
ルホン酸誘導体を含む緩衝液からなる第２試薬とで構成
された２液型の試薬を用いることもできる。
【００１５】上記反応系のｐＨは、４．５〜１０．０が
好ましく、更に好ましくは、５．８〜８．０である。上
記ｐＨが低かったり高かったりすると、抗原タンパク質
の変性、非特異反応の増加等が起こるので、不適当であ
る。
好ましく、更に好ましくは、５．８〜８．０である。上
記ｐＨが低かったり高かったりすると、抗原タンパク質
の変性、非特異反応の増加等が起こるので、不適当であ
る。
【００１６】本発明に係る上記反応系の温度は、０〜５
０℃が好ましく、さらに好ましくは２０〜４０℃であ
る。また、反応時間は適宜決めることができる。
０℃が好ましく、さらに好ましくは２０〜４０℃であ
る。また、反応時間は適宜決めることができる。
【００１７】本発明に係る上記不溶性担体としては特に
限定されず、例えば、有機高分子粉末、無機物質粉末、
微生物、血球及び細胞膜片、プラスチック製マイクロタ
イタープレート等が挙げられる。上記有機高分子粉末と
しては、例えば、不溶性アガロース、セルロース、不溶
性デキストラン等の天然高分子粉末、ポリスチレン、ス
チレン−スチレンスルホン酸共重合体、アクリロニトリ
ル−ブタジエン−スチレン共重合体、塩化ビニル−アク
リル酸エステル共重合体、酢酸ビニル−アクリル酸エス
テル共重合体等の合成高分子粉末等が挙げられ、特に合
成高分子粉末を均一に懸濁させたラテックスが好まし
い。
限定されず、例えば、有機高分子粉末、無機物質粉末、
微生物、血球及び細胞膜片、プラスチック製マイクロタ
イタープレート等が挙げられる。上記有機高分子粉末と
しては、例えば、不溶性アガロース、セルロース、不溶
性デキストラン等の天然高分子粉末、ポリスチレン、ス
チレン−スチレンスルホン酸共重合体、アクリロニトリ
ル−ブタジエン−スチレン共重合体、塩化ビニル−アク
リル酸エステル共重合体、酢酸ビニル−アクリル酸エス
テル共重合体等の合成高分子粉末等が挙げられ、特に合
成高分子粉末を均一に懸濁させたラテックスが好まし
い。
【００１８】上記無機物質粉末としては、例えば、金、
チタン、鉄、ニッケル等の金属片、シリカ、アルミナ、
炭素末等が挙げられる。
チタン、鉄、ニッケル等の金属片、シリカ、アルミナ、
炭素末等が挙げられる。
【００１９】上記不溶性担体の平均粒径は、測定方法、
測定機器によっても異なるが、０．０５〜１．０μｍの
ものが通常用いられる。上記不溶性担体に梅毒トレポネ
ーマ抗原を担持させる方法としては、例えば、化学的又
は物理的結合により感作させる方法等が挙げられる。上
記化学的結合法としては、カルボジイミド法、カルボジ
ニルイミダゾール法、混合酸無水物法、活性エステル
法、水溶性２価性試薬法等が挙げられる。
測定機器によっても異なるが、０．０５〜１．０μｍの
ものが通常用いられる。上記不溶性担体に梅毒トレポネ
ーマ抗原を担持させる方法としては、例えば、化学的又
は物理的結合により感作させる方法等が挙げられる。上
記化学的結合法としては、カルボジイミド法、カルボジ
ニルイミダゾール法、混合酸無水物法、活性エステル
法、水溶性２価性試薬法等が挙げられる。
【００２０】上記試薬を用いて梅毒トレポネーマ抗体を
測定する際の反応系としては、例えば、ラテックス凝集
反応、血球凝集反応等が利用され、上記反応により生じ
た凝集を測定する方法としては、凝集の程度を光学的に
観察する方法、又は、目視により観察する方法等が挙げ
られる。
測定する際の反応系としては、例えば、ラテックス凝集
反応、血球凝集反応等が利用され、上記反応により生じ
た凝集を測定する方法としては、凝集の程度を光学的に
観察する方法、又は、目視により観察する方法等が挙げ
られる。
【００２１】具体的には、光学的に観察する方法におい
ては、測定は、検体、検体希釈液及び梅毒トレポネーマ
抗体を担持させた不溶性担体を混合した後、その混合液
の散乱光強度、吸光度又は透過光強度を検出する。測定
の波長は、３００〜２４００ｎｍが使用でき、測定方法
は公知の方法に従い、用いる不溶性担体の粒径、濃度、
反応時間によって散乱光強度、吸光度又は透過光強度の
増加若しくは減少を測定する。これらの方法は単独で用
いられても併用されてもよい。
ては、測定は、検体、検体希釈液及び梅毒トレポネーマ
抗体を担持させた不溶性担体を混合した後、その混合液
の散乱光強度、吸光度又は透過光強度を検出する。測定
の波長は、３００〜２４００ｎｍが使用でき、測定方法
は公知の方法に従い、用いる不溶性担体の粒径、濃度、
反応時間によって散乱光強度、吸光度又は透過光強度の
増加若しくは減少を測定する。これらの方法は単独で用
いられても併用されてもよい。
【００２２】目視により観察する方法においては、通
常、検体と抗原が担持された不溶性担体を含む溶液を判
定板上で混合し、揺り動かした後、凝集の有無を判定す
る。判定には単に肉眼で判定する以外に、ビデオカメラ
で撮影し画像処理を施すことによって判定することもで
きる。
常、検体と抗原が担持された不溶性担体を含む溶液を判
定板上で混合し、揺り動かした後、凝集の有無を判定す
る。判定には単に肉眼で判定する以外に、ビデオカメラ
で撮影し画像処理を施すことによって判定することもで
きる。
【００２３】
【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。
【００２４】実施例１ （梅毒トレポネーマ抗原担持ラテックス液の調製）１０
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に梅毒トレポネーマ
抗原液（蛋白質濃度１５μｇ／ｍｌ）４００μｌを平均
粒径４００μｍのポリスチレンラテックス（固形分１０
％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）１００μｌに添加
し、４℃で１時間攪拌した。次いでウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）を１％（Ｗ／Ｖ）含有する１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．４）２ｍｌを添加し、１．５時間攪拌
した。この液を１０℃で３０分問、１８０００ｒ．ｐ．
ｍ．で遠心分離した。得られた沈殿物にＢＳＡを０．２
５％（ｗ／ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．４）５ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁させ、梅毒
トレポネーマ抗原担持ラテックス液を調製した（第１試
薬）。
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に梅毒トレポネーマ
抗原液（蛋白質濃度１５μｇ／ｍｌ）４００μｌを平均
粒径４００μｍのポリスチレンラテックス（固形分１０
％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）１００μｌに添加
し、４℃で１時間攪拌した。次いでウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）を１％（Ｗ／Ｖ）含有する１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．４）２ｍｌを添加し、１．５時間攪拌
した。この液を１０℃で３０分問、１８０００ｒ．ｐ．
ｍ．で遠心分離した。得られた沈殿物にＢＳＡを０．２
５％（ｗ／ｖ）含有する１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．４）５ｍｌを添加し、ラテックスを懸濁させ、梅毒
トレポネーマ抗原担持ラテックス液を調製した（第１試
薬）。
【００２５】（検体希釈液の調製）ｐＨ７．０の０．１
Ｍ ＭＯＰＳ緩衝液に、ＢＳＡを０．２５％（Ｗ／Ｖ）
となるように溶解した（第２試薬）。
Ｍ ＭＯＰＳ緩衝液に、ＢＳＡを０．２５％（Ｗ／Ｖ）
となるように溶解した（第２試薬）。
【００２６】（梅毒トレポネーマ抗体価の測定）生化学
自動分析装置（日立７０５０形、日立製作所社製）によ
り、０．５０、１００、２５０、５００各Ｔ．Ｕ．の標
準梅毒トレポネーマ陽性血清を測定した。測定条件は、
温度３７℃、波長５７０ｎｍとした。測定方法は、検体
又は標準液２０μｌを分注後、直ちに検体希釈液（第２
試薬）３５０μｌの添加・混合を行い、次いでラテック
ス液（第１試薬）５０μｌの添加・混合を行った。反応
量は、ラテックス液添加後８０秒から３２０秒の問の吸
光度変化量とし、各標準血清測定時の吸光度変化量（ｎ
＝３の平均値）を表１に示した。表１中の数値は、吸光
度変化量（１／１００００）を表す。
自動分析装置（日立７０５０形、日立製作所社製）によ
り、０．５０、１００、２５０、５００各Ｔ．Ｕ．の標
準梅毒トレポネーマ陽性血清を測定した。測定条件は、
温度３７℃、波長５７０ｎｍとした。測定方法は、検体
又は標準液２０μｌを分注後、直ちに検体希釈液（第２
試薬）３５０μｌの添加・混合を行い、次いでラテック
ス液（第１試薬）５０μｌの添加・混合を行った。反応
量は、ラテックス液添加後８０秒から３２０秒の問の吸
光度変化量とし、各標準血清測定時の吸光度変化量（ｎ
＝３の平均値）を表１に示した。表１中の数値は、吸光
度変化量（１／１００００）を表す。
【００２７】実施例２ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＰＩＰＥＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＰＩＰＥＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。
【００２８】実施例３ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。 実施例４ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．０５Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。 実施例４ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．０５Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。
【００２９】実施例５ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．０５Ｍ ＰＩＰＥＳ
緩衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定
を行った。結果を表１に示した。 実施例６ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．０５Ｍ ＨＥＰＥＳ
緩衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定
を行った。結果を表１に示した。
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．０５Ｍ ＰＩＰＥＳ
緩衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定
を行った。結果を表１に示した。 実施例６ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．０５Ｍ ＨＥＰＥＳ
緩衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定
を行った。結果を表１に示した。
【００３０】比較例１ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ６．５の１００ｍＭ リン酸緩衝
液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を行
った。結果を表１に示した。 比較例２ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．６Ｍ ＭＯＰＳ緩衝
液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を行
った。結果を表１に示した。
衝液の代わりに、ｐＨ６．５の１００ｍＭ リン酸緩衝
液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を行
った。結果を表１に示した。 比較例２ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．６Ｍ ＭＯＰＳ緩衝
液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を行
った。結果を表１に示した。
【００３１】比較例３ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．６Ｍ ＨＥＰＥＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。 比較例４ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．６Ｍ ＰＩＰＥＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．６Ｍ ＨＥＰＥＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。 比較例４ 検体希釈液として、ｐＨ７．０の０．１Ｍ ＭＯＰＳ緩
衝液の代わりに、ｐＨ７．０の０．６Ｍ ＰＩＰＥＳ緩
衝液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして測定を
行った。結果を表１に示した。
【００３２】
【表１】
【００３３】表１から明かなように、比較例では０Ｔ．
Ｕ．と５００Ｔ．Ｕ．の吸光度変化量の差が小さいた
め、抗体価が小さい検体を測定する場合に陰性検体との
差が明確とならない等の問題があるが、実施例による
と、０Ｔ．Ｕ．と５００Ｔ．Ｕ．の吸光度変化量の差が
大きく、高感度であることから、抗体価が小さい検体で
あっても、陰性、陽性の区別が容易となり、効率よく梅
毒トレポネーマ抗体を検出することができることが判っ
た。
Ｕ．と５００Ｔ．Ｕ．の吸光度変化量の差が小さいた
め、抗体価が小さい検体を測定する場合に陰性検体との
差が明確とならない等の問題があるが、実施例による
と、０Ｔ．Ｕ．と５００Ｔ．Ｕ．の吸光度変化量の差が
大きく、高感度であることから、抗体価が小さい検体で
あっても、陰性、陽性の区別が容易となり、効率よく梅
毒トレポネーマ抗体を検出することができることが判っ
た。
【００３４】
【発明の効果】本発明は、上述の通りであり、反応系中
にアミノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロ
パンスルホン酸誘導体を添加することにより、汎用性が
高く、感度が充分な梅毒トレポネーマ抗体測定法が得ら
れるので、梅毒トレポネーマの有効な診断法を確立する
ことが可能である。
にアミノエタンスルホン酸誘導体及び／又はアミノプロ
パンスルホン酸誘導体を添加することにより、汎用性が
高く、感度が充分な梅毒トレポネーマ抗体測定法が得ら
れるので、梅毒トレポネーマの有効な診断法を確立する
ことが可能である。
Claims (2)
- 【請求項１】 梅毒トレポネーマ抗原を担持させた不溶
性担体を使用して、梅毒トレポネーマ抗体との抗原抗体
反応により生じた前記不溶性担体の凝集の度合いを検出
することにより梅毒トレポネーマ抗体を測定する梅毒ト
レポネーマ抗体測定法であって、前記不溶性担体を凝集
させる反応系中に、アミノエタンスルホン酸誘導体及び
／又はアミノプロパンスルホン酸誘導体が、０．００１
〜０．５モル濃度添加されていることを特徴とする梅毒
トレポネーマ抗体測定法。 - 【請求項２】 アミノエタンスルホン酸誘導体及び／又
はアミノプロパンスルホン酸誘導体が、３−（Ｎ−モル
ホリノ）プロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ′−
ビス（２−エタンスルホン酸）、及び／又は、Ｎ−２−
ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホ
ン酸である請求項１記載の梅毒トレポネーマ抗体測定
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25871895A JPH09101308A (ja) | 1995-10-05 | 1995-10-05 | 梅毒トレポネーマ抗体測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25871895A JPH09101308A (ja) | 1995-10-05 | 1995-10-05 | 梅毒トレポネーマ抗体測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09101308A true JPH09101308A (ja) | 1997-04-15 |
Family
ID=17324133
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25871895A Pending JPH09101308A (ja) | 1995-10-05 | 1995-10-05 | 梅毒トレポネーマ抗体測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09101308A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016125948A (ja) * | 2015-01-07 | 2016-07-11 | Jsr株式会社 | 粒子分散液、標的物質の検出に用いるためのキット、及び標的物質の検出方法 |
-
1995
- 1995-10-05 JP JP25871895A patent/JPH09101308A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016125948A (ja) * | 2015-01-07 | 2016-07-11 | Jsr株式会社 | 粒子分散液、標的物質の検出に用いるためのキット、及び標的物質の検出方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20040317 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |