JPH09107972A - 甲状腺ホルモンを認識する抗体の遺伝子断片等 - Google Patents
甲状腺ホルモンを認識する抗体の遺伝子断片等Info
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- JPH09107972A JPH09107972A JP7274012A JP27401295A JPH09107972A JP H09107972 A JPH09107972 A JP H09107972A JP 7274012 A JP7274012 A JP 7274012A JP 27401295 A JP27401295 A JP 27401295A JP H09107972 A JPH09107972 A JP H09107972A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 遺伝子工学的に変異を導入した抗体を製造し
又は自然の抗体を使用する上で生じる課題を解決し得る
抗体を製造する際の材料となる、抗体の遺伝子断片を提
供する。 【構成】 甲状腺ホルモンを認識し得る抗体のＨ鎖Ｖ領
域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片及びＬ鎖Ｖ領域蛋白質
をコ−ドする遺伝子断片、これら遺伝子断片を含む発現
用ベクタ−、該ベクタ−により形質転換された宿主細胞
及び該宿主細胞を培養する甲状腺ホルモンを認識し得る
抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質等の製造方法。
又は自然の抗体を使用する上で生じる課題を解決し得る
抗体を製造する際の材料となる、抗体の遺伝子断片を提
供する。 【構成】 甲状腺ホルモンを認識し得る抗体のＨ鎖Ｖ領
域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片及びＬ鎖Ｖ領域蛋白質
をコ−ドする遺伝子断片、これら遺伝子断片を含む発現
用ベクタ−、該ベクタ−により形質転換された宿主細胞
及び該宿主細胞を培養する甲状腺ホルモンを認識し得る
抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質等の製造方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、甲状腺ホルモンを認識
する抗体の遺伝子断片等に関し、詳しくは甲状腺ホルモ
ンを認識するマウス抗体のＨ鎖及びＬ鎖Ｖ領域蛋白質を
コ−ドする遺伝子、これら遺伝子断片によりコ−ドされ
る蛋白質、これら遺伝子断片を含むベクタ−、該ベクタ
−により形質転換された細胞、当該細胞を培養すること
を特徴とするＨ鎖Ｖ領域蛋白質等の製造方法に関するも
のである。
する抗体の遺伝子断片等に関し、詳しくは甲状腺ホルモ
ンを認識するマウス抗体のＨ鎖及びＬ鎖Ｖ領域蛋白質を
コ−ドする遺伝子、これら遺伝子断片によりコ−ドされ
る蛋白質、これら遺伝子断片を含むベクタ−、該ベクタ
−により形質転換された細胞、当該細胞を培養すること
を特徴とするＨ鎖Ｖ領域蛋白質等の製造方法に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】甲状腺ホルモンには、それぞれ図１
（ａ）（ｂ）に示した様にトリヨ−ドチロニン（Ｔ３）
とチロキシン（Ｔ４）の２種類がある。これらホルモン
の血清中の濃度は甲状腺疾患を検知するための手掛かり
であり、ＥＩＡ（酵素免疫測定）によるＴ３又はＴ４の
測定が広く実施されている。
（ａ）（ｂ）に示した様にトリヨ−ドチロニン（Ｔ３）
とチロキシン（Ｔ４）の２種類がある。これらホルモン
の血清中の濃度は甲状腺疾患を検知するための手掛かり
であり、ＥＩＡ（酵素免疫測定）によるＴ３又はＴ４の
測定が広く実施されている。
【０００３】Ｔ３やＴ４はいずれも低分子であるため、
甲状腺ホルモンを認識する２種類の抗体を用いる、いわ
ゆるサンドイッチＥＩＡの実施が困難である。このた
め、現在広く実施されているＥＩＡは、Ｔ３又はＴ４を
認識する抗体に対し、血清中のＴ３（Ｔ４）と酵素標識
したＴ３（Ｔ４）を競合的に結合させる競合法である。
甲状腺ホルモンを認識する２種類の抗体を用いる、いわ
ゆるサンドイッチＥＩＡの実施が困難である。このた
め、現在広く実施されているＥＩＡは、Ｔ３又はＴ４を
認識する抗体に対し、血清中のＴ３（Ｔ４）と酵素標識
したＴ３（Ｔ４）を競合的に結合させる競合法である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】Ｔ３とＴ４は互いに類
似しているため、Ｔ３又はＴ４の測定系において交差反
応が問題となることがある。近年の遺伝子工学の進歩に
より、抗体の立体構造を予想し、抗原との結合様式を推
定することが可能になっている（抗体の立体構造予測シ
ステムＡｂＭ、東レリサ−チセンタ−）。更に、この様
な知見に基づき、部位特異的変異を導入することにより
抗体の抗原との親和性を高めたり、交差反応を減少させ
ることも可能となった。しかし、このような抗体の改良
を実施するためには、甲状腺ホルモンを認識する抗体の
遺伝子が出発材料として不可欠である。
似しているため、Ｔ３又はＴ４の測定系において交差反
応が問題となることがある。近年の遺伝子工学の進歩に
より、抗体の立体構造を予想し、抗原との結合様式を推
定することが可能になっている（抗体の立体構造予測シ
ステムＡｂＭ、東レリサ−チセンタ−）。更に、この様
な知見に基づき、部位特異的変異を導入することにより
抗体の抗原との親和性を高めたり、交差反応を減少させ
ることも可能となった。しかし、このような抗体の改良
を実施するためには、甲状腺ホルモンを認識する抗体の
遺伝子が出発材料として不可欠である。
【０００５】一方、ＥＩＡにおいては一般的にマウス由
来の抗体が使用されているが、測定試料であるヒト血清
中の抗マウス由来蛋白質抗体により測定結果が変動する
ことが知られている。これを避けるにはマウス−ヒトキ
メラ抗体（ヒト以外の動物種由来の抗原結合領域即ち可
変領域（Ｖ領域）とヒト由来の不変領域（Ｃ領域）から
成る抗体、Oi and Morrison 、Biotechnology ４巻、
p214、1986年参照）を用いる等すれば良いことが報告さ
れている（特願平６−４８４４２号）。しかしこの場合
にも、甲状腺ホルモンを認識する抗体の遺伝子が出発材
料として不可欠である。
来の抗体が使用されているが、測定試料であるヒト血清
中の抗マウス由来蛋白質抗体により測定結果が変動する
ことが知られている。これを避けるにはマウス−ヒトキ
メラ抗体（ヒト以外の動物種由来の抗原結合領域即ち可
変領域（Ｖ領域）とヒト由来の不変領域（Ｃ領域）から
成る抗体、Oi and Morrison 、Biotechnology ４巻、
p214、1986年参照）を用いる等すれば良いことが報告さ
れている（特願平６−４８４４２号）。しかしこの場合
にも、甲状腺ホルモンを認識する抗体の遺伝子が出発材
料として不可欠である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】従って本発明者らは、前
記課題に鑑みて甲状腺ホルモンのＨ鎖及びＬ鎖の遺伝子
について鋭意研究した結果、そのＶ領域の遺伝子を見出
し、前記課題を解決するに至った。即ち本発明は、図１
に示された（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺ホルモン
を認識し得る抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドする、配
列番号１で表される遺伝子断片、及び、図１に示された
（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺ホルモンを認識し得
る抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドする、配列番号２で
表される遺伝子断片である。
記課題に鑑みて甲状腺ホルモンのＨ鎖及びＬ鎖の遺伝子
について鋭意研究した結果、そのＶ領域の遺伝子を見出
し、前記課題を解決するに至った。即ち本発明は、図１
に示された（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺ホルモン
を認識し得る抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドする、配
列番号１で表される遺伝子断片、及び、図１に示された
（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺ホルモンを認識し得
る抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドする、配列番号２で
表される遺伝子断片である。
【０００７】また本発明は、前記の遺伝子断片によりコ
−ドされ、図１に示された（ａ）及び（ｂ）の２種類の
甲状腺ホルモンを認識し得る抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質、
及び、前記の遺伝子断片によりコ−ドされ、図１に示さ
れた（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺ホルモンを認識
し得る抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質である。
−ドされ、図１に示された（ａ）及び（ｂ）の２種類の
甲状腺ホルモンを認識し得る抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質、
及び、前記の遺伝子断片によりコ−ドされ、図１に示さ
れた（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺ホルモンを認識
し得る抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質である。
【０００８】また本発明は、前記の遺伝子断片の全部又
は一部を含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を発現させる
ことができるベクタ−である。
は一部を含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を発現させる
ことができるベクタ−である。
【０００９】また本発明は、前記遺伝子断片に加え、更
にヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質又はヒト抗体のＬ鎖Ｃ領
域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を含むベクタ−であ
る。
にヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質又はヒト抗体のＬ鎖Ｃ領
域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を含むベクタ−であ
る。
【００１０】また本発明は、前記２種類の遺伝子断片の
全部又は一部とヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域及びＬ鎖Ｃ領域蛋
白質をコ−ドする遺伝子断片を含み、宿主細胞中でこれ
ら遺伝子断片を発現させることができるベクタ−であ
る。
全部又は一部とヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域及びＬ鎖Ｃ領域蛋
白質をコ−ドする遺伝子断片を含み、宿主細胞中でこれ
ら遺伝子断片を発現させることができるベクタ−であ
る。
【００１１】また本発明は、前述のいずれかのベクタ−
で形質転換された宿主細胞である。そして本発明は、前
記宿主細胞を培養することを特徴とする、図１に示され
た（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺ホルモンを認識し
得る抗体の、Ｈ鎖Ｖ領域蛋白質、Ｌ鎖Ｖ領域蛋白質、Ｈ
鎖Ｖ領域とヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域のキメラ蛋白質、Ｌ鎖
Ｖ領域とヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域のキメラ蛋白質又は、Ｈ
鎖とＬ鎖のＶ領域蛋白質及びヒト抗体のＨ鎖とＬ鎖のＣ
領域蛋白質とのキメラ蛋白質の製造方法である。以下本
発明を詳細に説明する。
で形質転換された宿主細胞である。そして本発明は、前
記宿主細胞を培養することを特徴とする、図１に示され
た（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺ホルモンを認識し
得る抗体の、Ｈ鎖Ｖ領域蛋白質、Ｌ鎖Ｖ領域蛋白質、Ｈ
鎖Ｖ領域とヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域のキメラ蛋白質、Ｌ鎖
Ｖ領域とヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域のキメラ蛋白質又は、Ｈ
鎖とＬ鎖のＶ領域蛋白質及びヒト抗体のＨ鎖とＬ鎖のＣ
領域蛋白質とのキメラ蛋白質の製造方法である。以下本
発明を詳細に説明する。
【００１２】本発明の甲状腺ホルモンを認識する抗体の
遺伝子断片は、甲状腺ホルモンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ
領域蛋白質をコ−ドする遺伝子又はＬ鎖Ｖ領域蛋白質を
コ−ドする遺伝子であり、具体的に配列番号１又は配列
番号２で示される塩基配列を有する。
遺伝子断片は、甲状腺ホルモンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ
領域蛋白質をコ−ドする遺伝子又はＬ鎖Ｖ領域蛋白質を
コ−ドする遺伝子であり、具体的に配列番号１又は配列
番号２で示される塩基配列を有する。
【００１３】これら遺伝子断片は、図１の（ａ）及び
（ｂ）で示された甲状腺ホルモンを認識する抗体を産生
するハイブリド−マを出発材料にして、例えば実施例１
に示す方法で単離することができる。また、本発明の開
示に従って、配列番号１又は配列番号２の塩基配列を例
えばＤＮＡ合成機を使用して直接調製しても良い。なお
本発明の遺伝子断片は、配列番号１又は配列番号２で示
された塩基配列に１個又は複数個の塩基が付加されてい
ても良いし、その塩基配列中の１個又は複数個の塩基が
削除されていても良いし、更にその塩基配列中の１個又
は複数個の塩基が他の塩基に置換されていても良い。
（ｂ）で示された甲状腺ホルモンを認識する抗体を産生
するハイブリド−マを出発材料にして、例えば実施例１
に示す方法で単離することができる。また、本発明の開
示に従って、配列番号１又は配列番号２の塩基配列を例
えばＤＮＡ合成機を使用して直接調製しても良い。なお
本発明の遺伝子断片は、配列番号１又は配列番号２で示
された塩基配列に１個又は複数個の塩基が付加されてい
ても良いし、その塩基配列中の１個又は複数個の塩基が
削除されていても良いし、更にその塩基配列中の１個又
は複数個の塩基が他の塩基に置換されていても良い。
【００１４】本発明の甲状腺ホルモンを認識する抗体の
Ｖ領域蛋白質は、前記した遺伝子断片でコ−ドされたも
のであり、具体的に配列番号１又は配列番号２の遺伝子
断片でコ−ドされたものである。なお当該蛋白質は、配
列番号１又は配列番号２の遺伝子断片でコ−ドされた蛋
白質に１個又は複数個のアミノ酸残基が付加されていて
も良いし、その蛋白質中の１個又は複数個のアミノ酸残
基が削除されていても良いし、更にその蛋白質中の１個
又は複数個のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換さ
れていても良い。
Ｖ領域蛋白質は、前記した遺伝子断片でコ−ドされたも
のであり、具体的に配列番号１又は配列番号２の遺伝子
断片でコ−ドされたものである。なお当該蛋白質は、配
列番号１又は配列番号２の遺伝子断片でコ−ドされた蛋
白質に１個又は複数個のアミノ酸残基が付加されていて
も良いし、その蛋白質中の１個又は複数個のアミノ酸残
基が削除されていても良いし、更にその蛋白質中の１個
又は複数個のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換さ
れていても良い。
【００１５】本発明の甲状腺ホルモンを認識する抗体の
Ｖ領域蛋白質を製造するには、これをコ−ドする遺伝子
を含むベクタ−を使用する。本発明のベクタ−は、前記
遺伝子断片、即ち配列番号１又は配列番号２の遺伝子断
片の全部又は一部を含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を
発現させることができるものである。
Ｖ領域蛋白質を製造するには、これをコ−ドする遺伝子
を含むベクタ−を使用する。本発明のベクタ−は、前記
遺伝子断片、即ち配列番号１又は配列番号２の遺伝子断
片の全部又は一部を含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を
発現させることができるものである。
【００１６】本発明の遺伝子断片を宿主細胞中で発現さ
せるため本発明のベクタ−は、当該遺伝子断片以外に遺
伝子断片を発現（転写）させるためのプロモ−タ−／オ
ペレ−タ−、遺伝子断片の発現（転写）を終了させるた
めのタ−ミネ−タ−、宿主細胞中での複製のための遺伝
子等、公知の遺伝子配列を含んでいても良い。ここでベ
クタ−にヒト抗体のＣ領域をコ−ドする遺伝子断片を導
入することにより、マウス−ヒトキメラ抗体のＨ鎖及び
／又はＬ鎖を製造するためのベクタ−を得ることができ
る。
せるため本発明のベクタ−は、当該遺伝子断片以外に遺
伝子断片を発現（転写）させるためのプロモ−タ−／オ
ペレ−タ−、遺伝子断片の発現（転写）を終了させるた
めのタ−ミネ−タ−、宿主細胞中での複製のための遺伝
子等、公知の遺伝子配列を含んでいても良い。ここでベ
クタ−にヒト抗体のＣ領域をコ−ドする遺伝子断片を導
入することにより、マウス−ヒトキメラ抗体のＨ鎖及び
／又はＬ鎖を製造するためのベクタ−を得ることができ
る。
【００１７】本発明のベクタ−は、甲状腺ホルモンを認
識する抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質を製造するためのもの、
甲状腺ホルモンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質を製
造するためのもの、甲状腺ホルモンを認識する抗体のＨ
鎖Ｖ領域蛋白質とヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質のキメラ
蛋白質を製造するためのもの、甲状腺ホルモンを認識す
る抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質とヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域蛋白
質のキメラ蛋白質を製造するためのもの、及び、甲状腺
ホルモンを認識する抗体のＬ鎖及びＨ鎖Ｖ領域蛋白質
と、ヒト抗体のＬ鎖及びＨ鎖Ｃ領域蛋白質のキメラ蛋白
質を製造するためのものからなる。
識する抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質を製造するためのもの、
甲状腺ホルモンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質を製
造するためのもの、甲状腺ホルモンを認識する抗体のＨ
鎖Ｖ領域蛋白質とヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質のキメラ
蛋白質を製造するためのもの、甲状腺ホルモンを認識す
る抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質とヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域蛋白
質のキメラ蛋白質を製造するためのもの、及び、甲状腺
ホルモンを認識する抗体のＬ鎖及びＨ鎖Ｖ領域蛋白質
と、ヒト抗体のＬ鎖及びＨ鎖Ｃ領域蛋白質のキメラ蛋白
質を製造するためのものからなる。
【００１８】このうち、甲状腺ホルモンを認識するマウ
ス−ヒトキメラ抗体、即ち甲状腺ホルモンを認識する抗
体のＶ領域蛋白質とヒト抗体のＣ領域蛋白質のキメラ蛋
白質を製造するためのベクタ−は、配列番号１の遺伝子
断片の全部又は一部及びヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質を
コ−ドする遺伝子断片を含むもの、配列番号２の遺伝子
断片の全部又は一部及びヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域蛋白質を
コ−ドする遺伝子断片を含むもの、そして配列番号１及
び配列番号２の遺伝子断片の全部又は一部とヒト抗体の
Ｈ鎖及びＬ鎖領域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を含む
ものの３種類である。この場合、ヒト抗体の遺伝子断片
については、Ｈ鎖Ｃ領域は本発明のＨ鎖Ｖ領域のフレ−
ムと一致した状態となるように、Ｌ鎖Ｃ領域は本発明の
Ｌ鎖Ｖ領域のフレ−ムと一致した状態となるようにベク
タ−は構築する。
ス−ヒトキメラ抗体、即ち甲状腺ホルモンを認識する抗
体のＶ領域蛋白質とヒト抗体のＣ領域蛋白質のキメラ蛋
白質を製造するためのベクタ−は、配列番号１の遺伝子
断片の全部又は一部及びヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質を
コ−ドする遺伝子断片を含むもの、配列番号２の遺伝子
断片の全部又は一部及びヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域蛋白質を
コ−ドする遺伝子断片を含むもの、そして配列番号１及
び配列番号２の遺伝子断片の全部又は一部とヒト抗体の
Ｈ鎖及びＬ鎖領域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を含む
ものの３種類である。この場合、ヒト抗体の遺伝子断片
については、Ｈ鎖Ｃ領域は本発明のＨ鎖Ｖ領域のフレ−
ムと一致した状態となるように、Ｌ鎖Ｃ領域は本発明の
Ｌ鎖Ｖ領域のフレ−ムと一致した状態となるようにベク
タ−は構築する。
【００１９】なお、ヒト抗体のＨ鎖又はＬ鎖Ｃ領域をコ
−ドする遺伝子断片は公知である（例えばKameyamaら、
FEBS Lett.、、244 巻、p301、1989年）。
−ドする遺伝子断片は公知である（例えばKameyamaら、
FEBS Lett.、、244 巻、p301、1989年）。
【００２０】本発明の他のベクタ−は、本発明の甲状腺
ホルモンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドす
る遺伝子断片及び／又はＬ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドする
遺伝子断片を含むベクタ−である。このベクタ−、特に
Ｈ鎖及びＬ鎖のＶ領域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を
含むベクタ−によれば、Ｃ領域を含まない、Ｖ領域のみ
から成る甲状腺ホルモンを認識する抗体（Ｆｖ抗体）が
製造できる。Ｌ鎖に関する遺伝子断片とＨ鎖に関する遺
伝子断片を同一のベクタ−に導入する場合には実施例で
示したようにそれぞれＨ鎖に関する遺伝子群とＬ鎖に関
する遺伝子群を含む２以上のベクタ−を構築し、これら
ベクタ−で同一又は異なる細胞を形質転換しても良い。
ホルモンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドす
る遺伝子断片及び／又はＬ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドする
遺伝子断片を含むベクタ−である。このベクタ−、特に
Ｈ鎖及びＬ鎖のＶ領域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を
含むベクタ−によれば、Ｃ領域を含まない、Ｖ領域のみ
から成る甲状腺ホルモンを認識する抗体（Ｆｖ抗体）が
製造できる。Ｌ鎖に関する遺伝子断片とＨ鎖に関する遺
伝子断片を同一のベクタ−に導入する場合には実施例で
示したようにそれぞれＨ鎖に関する遺伝子群とＬ鎖に関
する遺伝子群を含む２以上のベクタ−を構築し、これら
ベクタ−で同一又は異なる細胞を形質転換しても良い。
【００２１】本発明は、以上に説明したベクタ−で形質
転換した宿主細胞をも提供する。前述した各種ベクタ−
による宿主細胞の形質転換は通常の方法に従えば良く、
特に制限はない。例えばベクタ−が大腸菌を対象とする
ものであれば大腸菌を宿主として使用すれば良く、酵母
を対象とするものであれば酵母を宿主として使用すれば
良い。
転換した宿主細胞をも提供する。前述した各種ベクタ−
による宿主細胞の形質転換は通常の方法に従えば良く、
特に制限はない。例えばベクタ−が大腸菌を対象とする
ものであれば大腸菌を宿主として使用すれば良く、酵母
を対象とするものであれば酵母を宿主として使用すれば
良い。
【００２２】形質転換した宿主細胞を適当な条件下で培
養することで種々の形態の甲状腺ホルモンを認識する抗
体蛋白質を製造することができる。本発明では使用した
ベクタ−に応じて種々の形態の抗体、例えば甲状腺ホル
モンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質、甲状腺ホルモ
ンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質、甲状腺ホルモン
を認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域とヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域の
キメラ蛋白質、甲状腺ホルモンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ
領域とヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域のキメラ蛋白質、甲状腺ホ
ルモンを認識する抗体のＶ領域とヒト抗体のＣ領域のキ
メラ抗体、そして更には甲状腺ホルモンを認識する抗体
のＨ鎖及びＬ鎖Ｖ領域から成る抗体蛋白質をも製造でき
る。
養することで種々の形態の甲状腺ホルモンを認識する抗
体蛋白質を製造することができる。本発明では使用した
ベクタ−に応じて種々の形態の抗体、例えば甲状腺ホル
モンを認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質、甲状腺ホルモ
ンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質、甲状腺ホルモン
を認識する抗体のＨ鎖Ｖ領域とヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域の
キメラ蛋白質、甲状腺ホルモンを認識する抗体のＬ鎖Ｖ
領域とヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域のキメラ蛋白質、甲状腺ホ
ルモンを認識する抗体のＶ領域とヒト抗体のＣ領域のキ
メラ抗体、そして更には甲状腺ホルモンを認識する抗体
のＨ鎖及びＬ鎖Ｖ領域から成る抗体蛋白質をも製造でき
る。
【００２３】なお前述の通り、Ｈ鎖に関する遺伝子群と
Ｌ鎖に関する遺伝子群を含む２以上のベクタ−を構築し
た場合、実施例に示した様にこれらベクタ−で形質転換
された宿主細胞を培養したり、Ｈ鎖に関する遺伝子群を
含むベクタ−とＬ鎖に関する遺伝子群を含むベクタ−で
別個に形質転換された複数の細胞を同一培地中で培養す
る等することでＨ鎖及びＬ鎖領域を含む蛋白質を得るこ
とが可能である。
Ｌ鎖に関する遺伝子群を含む２以上のベクタ−を構築し
た場合、実施例に示した様にこれらベクタ−で形質転換
された宿主細胞を培養したり、Ｈ鎖に関する遺伝子群を
含むベクタ−とＬ鎖に関する遺伝子群を含むベクタ−で
別個に形質転換された複数の細胞を同一培地中で培養す
る等することでＨ鎖及びＬ鎖領域を含む蛋白質を得るこ
とが可能である。
【００２４】
【実施例】以下本発明を更に詳細に説明するために実施
例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。
例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。
【００２５】実施例 １ 実施例１．甲状腺ホルモンを
認識する抗体を産生するハイブリド−マの樹立 Ｔ３をＢＳＡに結合させたものをＢＡＬＢ／ｃマウスに
免疫して得たひ臓細胞を、ミエロ−マ細胞とポリエチレ
ングリコ−ルを用いる通常の方法で細胞融合させ、ＨＡ
Ｔ培地選択及び抗原への反応性を確認した後に限界希釈
法によりクロ−ニングを行い、抗Ｔ３モノクロ−ナル抗
体ＴＴ１（ＩｇＧクラス）産生ハイブリド−マを作製し
た。ＴＴ１は、Ｔ３だけではなく、Ｔ４にも交差反応に
より結合した。
認識する抗体を産生するハイブリド−マの樹立 Ｔ３をＢＳＡに結合させたものをＢＡＬＢ／ｃマウスに
免疫して得たひ臓細胞を、ミエロ−マ細胞とポリエチレ
ングリコ−ルを用いる通常の方法で細胞融合させ、ＨＡ
Ｔ培地選択及び抗原への反応性を確認した後に限界希釈
法によりクロ−ニングを行い、抗Ｔ３モノクロ−ナル抗
体ＴＴ１（ＩｇＧクラス）産生ハイブリド−マを作製し
た。ＴＴ１は、Ｔ３だけではなく、Ｔ４にも交差反応に
より結合した。
【００２６】実施例 ２ ＴＴ１の抗体可変領域（Ｖ領
域）遺伝子の単離 ＲＰＭＩ１６４０で培養した１×106 個のＴＴ１ハイブ
リド−マから、ｍＲＮＡ抽出キット（ファルマシア製）
によりｍＲＮＡを抽出し、常法に従ってｃＤＮＡを調製
した。
域）遺伝子の単離 ＲＰＭＩ１６４０で培養した１×106 個のＴＴ１ハイブ
リド−マから、ｍＲＮＡ抽出キット（ファルマシア製）
によりｍＲＮＡを抽出し、常法に従ってｃＤＮＡを調製
した。
【００２７】次にこのｃＤＮＡを鋳型とし、下記のオリ
ゴヌクレオチドプライマ−ＶＨ１ＢＡＣＫ及びＶＨＦＯ
ＲＳＡＬ１を用いてＰＣＲ（ポリメレ−スチェインリア
クション）を行って抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドす
るＤＮＡ断片を増幅した。
ゴヌクレオチドプライマ−ＶＨ１ＢＡＣＫ及びＶＨＦＯ
ＲＳＡＬ１を用いてＰＣＲ（ポリメレ−スチェインリア
クション）を行って抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドす
るＤＮＡ断片を増幅した。
【００２８】増幅したＤＮＡ断片を制限酵素ＰｓｔＩ及
びＳａｌＩで消化した後、更に制限酵素Ｓｓｅ８３８７
Ｉ及びＳａｌＩで消化し、ｐＥｄＨＣＧ１（Ｉｂａら、
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ、１７
巻、１３５頁、１９９５年参照、制限酵素Ｓａｌ Ｉに
よる制限部位の３´側に、ヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質
をコ−ドする遺伝子断片を有する）に挿入してｐＥｄＨ
ＣＧ１−ＴＴ１を構築した。
びＳａｌＩで消化した後、更に制限酵素Ｓｓｅ８３８７
Ｉ及びＳａｌＩで消化し、ｐＥｄＨＣＧ１（Ｉｂａら、
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ、１７
巻、１３５頁、１９９５年参照、制限酵素Ｓａｌ Ｉに
よる制限部位の３´側に、ヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質
をコ−ドする遺伝子断片を有する）に挿入してｐＥｄＨ
ＣＧ１−ＴＴ１を構築した。
【００２９】 ＶＨ１ＢＡＣＫ； ５´ ＡＧＧＴ（Ｃ／Ｇ）（Ａ／Ｃ）Ａ（Ａ／Ｇ）ＣＴＧＣＡＧ（Ｃ／Ｇ）ＡＧ ＴＣ（Ａ／Ｔ）ＧＧ ３´ ＶＨＦＯＲＳＡＬ１； ５´ ＧＧＧＧＧＴＣＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＣＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＴ ＣＣＣＴＴＧＧＣＣＣＣＡＧ ３´ なお上記オリゴヌクレオチドプライマ−ＶＨ１ＢＡＣＫ
において、（ ）内に記載した塩基は
であることを意味す
る。
において、（ ）内に記載した塩基は
であることを意味す
る。
【００３０】一方、同ｃＤＮＡを鋳型とし、下記のオリ
ゴヌクレオチドプライマ−Ｖκ１ＢＡＣＫ及びＶκ１Ｆ
ＯＲを用いてＰＣＲを行って、抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質
をコ−ドするＤＮＡ断片を増幅し、増幅したＤＮＡ断片
を制限酵素ＰｖｕＩＩ及びＢｇｌＩＩで消化した後、更
に制限酵素ＰｖｕＩＩ及びＢｇｌＩＩで消化し、ｐＥｄ
ＨＣκ（Ｉｂａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅ
ｔｔｅｒｓ、１７巻、１３５頁、１９９５年参照、制限
酵素Ｂｇｌ ＩＩによる制限部位の３´側に、ヒト抗体
のＬ鎖Ｃ領域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を有する）
に挿入してｐＥｄＨＣκ−ＴＴ１を構築した。
ゴヌクレオチドプライマ−Ｖκ１ＢＡＣＫ及びＶκ１Ｆ
ＯＲを用いてＰＣＲを行って、抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質
をコ−ドするＤＮＡ断片を増幅し、増幅したＤＮＡ断片
を制限酵素ＰｖｕＩＩ及びＢｇｌＩＩで消化した後、更
に制限酵素ＰｖｕＩＩ及びＢｇｌＩＩで消化し、ｐＥｄ
ＨＣκ（Ｉｂａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅ
ｔｔｅｒｓ、１７巻、１３５頁、１９９５年参照、制限
酵素Ｂｇｌ ＩＩによる制限部位の３´側に、ヒト抗体
のＬ鎖Ｃ領域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を有する）
に挿入してｐＥｄＨＣκ−ＴＴ１を構築した。
【００３１】 Ｖκ１ＢＡＣＫ； ５´ ＧＡＣＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡ ３´ Ｖκ１ＦＯＲ； ５´ ＧＴＴＡＧＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＧＧＴＣＣＣ ３´ 実施例 ３ ＴＴ１抗体遺伝子の塩基配列の決定 実施例２で単離したＴＴ１のＨ鎖Ｖ領域及びＬ鎖Ｖ領域
蛋白質をコ−ドする遺伝子断片の塩基配列を常法により
決定した。その結果、これら遺伝子断片は配列番号１及
び２に示された塩基配列を有するものであった。
蛋白質をコ−ドする遺伝子断片の塩基配列を常法により
決定した。その結果、これら遺伝子断片は配列番号１及
び２に示された塩基配列を有するものであった。
【００３２】実施例 ４ ＴＴ１マウス・ヒトキメラ抗
体の作製（ＣＯＳ細胞での一過性発現の確認） １５ｃｍディッシュ４枚にＣＯＳ１細胞をコンフルエン
ト状態となるように培養した。ｐＥｄＨＣＧ１−ＴＴ１
及びｐＥｄＨＣκ−ＴＴ１をプレ−ト１枚につき４０μ
ｇずつ加え、リン酸カルシウム法によりＣＯＳ細胞中に
導入した。ベクタ−を導入した翌日、培養液を無血清培
地に交換し、３日後に培養上清を回収した。
体の作製（ＣＯＳ細胞での一過性発現の確認） １５ｃｍディッシュ４枚にＣＯＳ１細胞をコンフルエン
ト状態となるように培養した。ｐＥｄＨＣＧ１−ＴＴ１
及びｐＥｄＨＣκ−ＴＴ１をプレ−ト１枚につき４０μ
ｇずつ加え、リン酸カルシウム法によりＣＯＳ細胞中に
導入した。ベクタ−を導入した翌日、培養液を無血清培
地に交換し、３日後に培養上清を回収した。
【００３３】培養上清中のキメラ抗体価の測定を行なっ
た。９６穴イムノプレ−トに抗ヒトＩｇＧ1 抗血清を固
相化した後、０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳでブロッキン
グを行った。ＰＢＳでプレ−トを洗浄後、培養上清を加
え１時間室温で放置した。
た。９６穴イムノプレ−トに抗ヒトＩｇＧ1 抗血清を固
相化した後、０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳでブロッキン
グを行った。ＰＢＳでプレ−トを洗浄後、培養上清を加
え１時間室温で放置した。
【００３４】ＰＢＳでプレ−トを洗浄後、ＨＲＰ（西洋
ワサビペルオキシダ−ゼ）で標識した抗ヒトＩｇκ抗体
を加え１時間室温で放置した。その後プレ−トを洗浄
し、発色試薬（ＡＢＴＳ、和光純薬工業（株）製）を加
え、発色の程度を市販の吸光測定装置（イムノリ−ダ
−、ＭＰＲ−Ａ４、東ソ−（株）製）で測定した。
ワサビペルオキシダ−ゼ）で標識した抗ヒトＩｇκ抗体
を加え１時間室温で放置した。その後プレ−トを洗浄
し、発色試薬（ＡＢＴＳ、和光純薬工業（株）製）を加
え、発色の程度を市販の吸光測定装置（イムノリ−ダ
−、ＭＰＲ−Ａ４、東ソ−（株）製）で測定した。
【００３５】その結果、培養上清中に約０．１μｇ／ｍ
ｌのキメラ抗体が産生されていることがわかった。
ｌのキメラ抗体が産生されていることがわかった。
【００３６】実施例 ５ Ｔ３及びＴ４との結合定数の
測定 市販のプラズマ共鳴測定器（ＢＩＡｃｏｒｅ、ファルマ
シア社製）を用いて、調製されたキメラ抗体のＴ３及び
Ｔ４との結合定数を測定した。
測定 市販のプラズマ共鳴測定器（ＢＩＡｃｏｒｅ、ファルマ
シア社製）を用いて、調製されたキメラ抗体のＴ３及び
Ｔ４との結合定数を測定した。
【００３７】センサ−チップにラビット抗ヒトＩｇＧ−
Ｆｃ抗体（３０μｇ／ｍｌ、３５μｌ）をアミノカップ
リングキットで固定化した。次に実施例４で得られた培
養上清（簡易遠心膜濃縮機を用いて容積比で２８倍に濃
縮したもの）を３５μｌずつ２回インジェクトした。次
にＴ３及びＴ４にアルカリフォスファタ−ゼ（ＡＰ）を
結合させたもの（Ｔ３−ＡＰ、Ｔ４−ＡＰ）を抗原とし
て２．５〜２０μｇ／ｍｌの濃度範囲で２０μｌインジ
ェクトした。センサ−チップは、１０ｍＭグリシン塩酸
（ｐＨ１．５）を１５μｌインジェクトして再生した。
またランニングバッファ−はＨＢＳを用い、５μｌ／分
で流した。
Ｆｃ抗体（３０μｇ／ｍｌ、３５μｌ）をアミノカップ
リングキットで固定化した。次に実施例４で得られた培
養上清（簡易遠心膜濃縮機を用いて容積比で２８倍に濃
縮したもの）を３５μｌずつ２回インジェクトした。次
にＴ３及びＴ４にアルカリフォスファタ−ゼ（ＡＰ）を
結合させたもの（Ｔ３−ＡＰ、Ｔ４−ＡＰ）を抗原とし
て２．５〜２０μｇ／ｍｌの濃度範囲で２０μｌインジ
ェクトした。センサ−チップは、１０ｍＭグリシン塩酸
（ｐＨ１．５）を１５μｌインジェクトして再生した。
またランニングバッファ−はＨＢＳを用い、５μｌ／分
で流した。
【００３８】Ｔ３−ＡＰをインジェクトしてからのレゾ
ナンスの変化を図２に示す。図２を解析した結果、Ｋａ
ｓｓ＝１．７×１０6 Ｍ-1ｓ-1、Ｋｄｉｓｓ＝３．３×
１０-4ｓ-1、Ｋａ＝５．２×１０9 Ｍ-1であった。
ナンスの変化を図２に示す。図２を解析した結果、Ｋａ
ｓｓ＝１．７×１０6 Ｍ-1ｓ-1、Ｋｄｉｓｓ＝３．３×
１０-4ｓ-1、Ｋａ＝５．２×１０9 Ｍ-1であった。
【００３９】同様にＴ４−ＡＰをインジェクトしてから
のレゾナンスの変化を解析したところ、Ｋａｓｓ＝７．
４×１０5 Ｍ-1ｓ-1、Ｋｄｉｓｓ＝２．６×１０
-4ｓ-1、Ｋａ＝２．８×１０9 Ｍ-1であった。
のレゾナンスの変化を解析したところ、Ｋａｓｓ＝７．
４×１０5 Ｍ-1ｓ-1、Ｋｄｉｓｓ＝２．６×１０
-4ｓ-1、Ｋａ＝２．８×１０9 Ｍ-1であった。
【００４０】以上の結果は、実施例４で得られたキメラ
抗体が甲状腺ホルモンと高い親和性を有することを示
す。
抗体が甲状腺ホルモンと高い親和性を有することを示
す。
【００４１】
【発明の効果】本発明で提供される甲状腺ホルモンを認
識する抗体のＨ鎖及びＬ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドする遺
伝子やこれを含むベクタ−等を利用することにより、種
々の付加機能を有した該抗体を大量に生産することが可
能である。従って、これら遺伝子断片、ベクタ−、抗体
の製造方法を使用することにより甲状腺ホルモンを認識
する抗体に関する研究を更に進展でき、従来と比較して
血清中の抗マウス由来物質抗体の影響を受けにくい、甲
状腺疾患の診断のための臨床試薬の開発が可能となる。
識する抗体のＨ鎖及びＬ鎖Ｖ領域蛋白質をコ−ドする遺
伝子やこれを含むベクタ−等を利用することにより、種
々の付加機能を有した該抗体を大量に生産することが可
能である。従って、これら遺伝子断片、ベクタ−、抗体
の製造方法を使用することにより甲状腺ホルモンを認識
する抗体に関する研究を更に進展でき、従来と比較して
血清中の抗マウス由来物質抗体の影響を受けにくい、甲
状腺疾患の診断のための臨床試薬の開発が可能となる。
【００４２】
配列番号：１ 配列の長さ： 配列の型：核酸 配列の数：２本鎖 トポロジ−：直線状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 セルライン：ハイブリド−マＴＴ１ 配列 CAG GTC AAG CTG CAG GAG TCT GGG GGA GGC TTA GTG AAG CTT GGC GGG 48 Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Leu Gly Gly TCC CTG AAA CTC TCC TGT GAA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGT AGT TAT 96 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr TAC ATG TCT TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AGG CTG GAG TTG GTC 144 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val GCA GCC ATT AAT AGT AAT GGT GGT ACC ACC TAC TAT TCA GAC ACT GTG 192 Ala Ala Ile Asn Ser Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Ser Asp Thr Val AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC AAG AAC ACC CTG TAC 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr CTG CAA ATG AGC AGT CTG AAG TCT GAG GAC ACA GCC TTG TAT TAC TGT 288 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys GCA AGC CCG GTC TCC TAT TAT TAC CTC TAT GTC ATG TAC TAC TGG GGC 336 Ala Ser Pro Val Ser Tyr Tyr Tyr Leu Tyr Val Met Tyr Tyr Trp Gly CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 357 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 配列番号：２ 配列の長さ： 配列の型：核酸 配列の数：２本鎖 トポロジ−：直線状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 セルライン：ハイブリド−マＴＴ１ 配列 GAC ATT CAG CTG ACC CAG TCT CCA ACC ACC ATG GTT GCA TCT CCC GGG 48 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Thr Thr Met Val Ala Ser Pro Gly GAG AAG ATC ACT ATC ACC TGC AGT GCC AGC TCA AGT ATA AGT TCC AAT 96 Glu Lys Ile Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn TAC TTG CAT TGG TAT CAG CAG AAG CCA GGA TTC TCC CCT AAA CTC TTG 144 Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Phe Ser Pro Lys Leu Leu ATT TAT AGG ACA TCC AAT CTG GCT TCT GGT GTC CCA ACT CGC TTC AGT 192 Ile Tyr Arg Tyr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser GGC AGT GGG TCT GGG ACC TCT TAC TCT CTC ACA ATT GGC ACC ATG GAG 240 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Gly Thr Met Glu GCT GAA GAT GTT GCC ACT TAC TAC TGC CAG CAG GGT AGT AGT ATA CCG 288 Ala Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ser Ile Pro CTC ACG TTC GGT GCT GGG ACC AAG CTG GAG ATC AAA CGG 327 Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｒｇ
Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｒｇ
【図１】甲状腺ホルモンの構造を示す図である。図中、
（ａ）はＴ３の構造を、（ｂ）はＴ４の構造を示す。
（ａ）はＴ３の構造を、（ｂ）はＴ４の構造を示す。
【図２】実施例５の結果を示す図である。実施例４で得
られた甲状腺ホルモンを認識するキメラ抗体（リコンビ
ナントＴＴ１）のＴ３−ＡＰに対する結合定数の解析セ
ンサ−グラムを示す。図中の矢印は（ａ）濃縮培養上
清、（ｂ）濃縮培養上清、（ｃ）Ｔ３−ＡＰ、（ｄ）グ
リシン塩酸、をそれぞれインジェクトした位置を示す。
られた甲状腺ホルモンを認識するキメラ抗体（リコンビ
ナントＴＴ１）のＴ３−ＡＰに対する結合定数の解析セ
ンサ−グラムを示す。図中の矢印は（ａ）濃縮培養上
清、（ｂ）濃縮培養上清、（ｃ）Ｔ３−ＡＰ、（ｄ）グ
リシン塩酸、をそれぞれインジェクトした位置を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 21/08 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｅ //(Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (11)
- 【請求項１】 図１に示された（ａ）及び（ｂ）の２種
類の甲状腺ホルモンを認識し得る抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白
質をコ−ドする、配列番号１で表される遺伝子断片。 - 【請求項２】 図１に示された（ａ）及び（ｂ）の２種
類の甲状腺ホルモンを認識し得る抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白
質をコ−ドする、配列番号２で表される遺伝子断片。 - 【請求項３】 請求項１の遺伝子断片によりコ−ドさ
れ、図１に示された（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺
ホルモンを認識し得る抗体のＨ鎖Ｖ領域蛋白質。 - 【請求項４】 請求項２の遺伝子断片によりコ−ドさ
れ、図１に示された（ａ）及び（ｂ）の２種類の甲状腺
ホルモンを認識し得る抗体のＬ鎖Ｖ領域蛋白質。 - 【請求項５】 請求項１の遺伝子断片の全部又は一部を
含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を発現させることがで
きるベクタ−。 - 【請求項６】 請求項２の遺伝子断片の全部又は一部を
含み、宿主細胞中で該遺伝子断片を発現させることがで
きるベクタ−。 - 【請求項７】 更に、ヒト抗体のＨ鎖Ｃ領域蛋白質をコ
−ドする遺伝子断片を含む請求項５に記載のベクタ−。 - 【請求項８】 更に、ヒト抗体のＬ鎖Ｃ領域蛋白質をコ
−ドする遺伝子断片を含む請求項６に記載のベクタ−。 - 【請求項９】 請求項１の遺伝子断片の全部又は一部、
請求項２の遺伝子断片の全部又は一部、ヒト抗体のＨ鎖
Ｃ領域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片及びヒト抗体のＬ
鎖Ｃ領域蛋白質をコ−ドする遺伝子断片を含み、宿主細
胞中でこれら遺伝子断片を発現させることができるベク
タ−。 - 【請求項１０】 請求項５〜９のいずれかに記載のベク
タ−で形質転換された宿主細胞。 - 【請求項１１】 請求項１０に記載の宿主細胞を培養す
ることを特徴とする、図１に示された（ａ）及び（ｂ）
の２種類の甲状腺ホルモンを認識し得る抗体の、Ｈ鎖Ｖ
領域蛋白質、Ｌ鎖Ｖ領域蛋白質、Ｈ鎖Ｖ領域とヒト抗体
のＨ鎖Ｃ領域のキメラ蛋白質、Ｌ鎖Ｖ領域とヒト抗体の
Ｌ鎖Ｃ領域のキメラ蛋白質又は、Ｈ鎖とＬ鎖のＶ領域蛋
白質及びヒト抗体のＨ鎖とＬ鎖のＣ領域蛋白質とのキメ
ラ蛋白質の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7274012A JPH09107972A (ja) | 1995-10-23 | 1995-10-23 | 甲状腺ホルモンを認識する抗体の遺伝子断片等 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7274012A JPH09107972A (ja) | 1995-10-23 | 1995-10-23 | 甲状腺ホルモンを認識する抗体の遺伝子断片等 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09107972A true JPH09107972A (ja) | 1997-04-28 |
Family
ID=17535732
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7274012A Pending JPH09107972A (ja) | 1995-10-23 | 1995-10-23 | 甲状腺ホルモンを認識する抗体の遺伝子断片等 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09107972A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010178649A (ja) * | 2009-02-04 | 2010-08-19 | Fujifilm Corp | 抗チロキシン抗体及びそれを用いた免疫測定方法 |
| CN118063608A (zh) * | 2023-11-30 | 2024-05-24 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 针对三碘甲状腺原氨酸的单克隆抗体、基于其的检测试剂及其应用 |
-
1995
- 1995-10-23 JP JP7274012A patent/JPH09107972A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010178649A (ja) * | 2009-02-04 | 2010-08-19 | Fujifilm Corp | 抗チロキシン抗体及びそれを用いた免疫測定方法 |
| CN118063608A (zh) * | 2023-11-30 | 2024-05-24 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 针对三碘甲状腺原氨酸的单克隆抗体、基于其的检测试剂及其应用 |
| CN118063608B (zh) * | 2023-11-30 | 2024-11-19 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 针对三碘甲状腺原氨酸的单克隆抗体、基于其的检测试剂及其应用 |
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