JPH09110896A - 牛乳プロテオースペプトンのコンポーネント３の精製法 - Google Patents
牛乳プロテオースペプトンのコンポーネント３の精製法Info
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- JPH09110896A JPH09110896A JP29055195A JP29055195A JPH09110896A JP H09110896 A JPH09110896 A JP H09110896A JP 29055195 A JP29055195 A JP 29055195A JP 29055195 A JP29055195 A JP 29055195A JP H09110896 A JPH09110896 A JP H09110896A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ホエー中のコンポーネント３を簡便な方法で
高度に精製する実用的な方法を提供すること。 【解決手段】 牛乳プロテオースペプトンのコンポーネ
ント３を透過せず、他のホエータンパク質を透過する分
画分子量の限外濾過膜を用いてホエーを濃縮及び透析す
ることを特徴とする牛乳プロテオースペプトンのコンポ
ーネント３の精製法。
高度に精製する実用的な方法を提供すること。 【解決手段】 牛乳プロテオースペプトンのコンポーネ
ント３を透過せず、他のホエータンパク質を透過する分
画分子量の限外濾過膜を用いてホエーを濃縮及び透析す
ることを特徴とする牛乳プロテオースペプトンのコンポ
ーネント３の精製法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、牛乳プロテオース
ペプトンのコンポーネント３の精製法に関し、詳しくは
牛乳に含まれるタンパク質のうちプロテオースペプトン
と総称される画分からコンポーネント３を主要成分とす
る画分を乳清（ホエー）から経済的に、しかも高い純度
で精製する方法に関するものである。本発明によって得
られるコンポーネント３画分は高い界面活性力をもち、
食品や化粧品、医薬品用の界面活性剤あるいは乳化剤、
安定剤として利用することが可能である。
ペプトンのコンポーネント３の精製法に関し、詳しくは
牛乳に含まれるタンパク質のうちプロテオースペプトン
と総称される画分からコンポーネント３を主要成分とす
る画分を乳清（ホエー）から経済的に、しかも高い純度
で精製する方法に関するものである。本発明によって得
られるコンポーネント３画分は高い界面活性力をもち、
食品や化粧品、医薬品用の界面活性剤あるいは乳化剤、
安定剤として利用することが可能である。
【０００２】
【従来の技術】牛乳中のプロテオースペプトンは、牛乳
タンパク質のうちホエーを９５℃から１００℃で２０分
加熱後、ｐＨ４．６に調整しても沈殿せず、１２％トリ
クロル酢酸で沈殿する成分として定義されている(Thomp
son, M. P., Tarassuk, N. P.,Jenness, R., Lillevik,
H. A., Ashworth, U. S.and Rose, D.: Journal of Da
iry Science 48, 159 (1965))。このプロテオースペプ
トンは、均一な化学組成をもつものではなく、主にコン
ポーネント３、５及び８と呼ばれる複数のタンパク質画
分から構成されている(Larson, B. L., and G. R. Roll
eri. : Journal of Dairy Science 38, 351(1955))。そ
の後、さらにコンポーネント３、５、８-slow,８-fast
の４種の成分があると認識されている(Kolar, C. W., a
nd Brunner, J. R., Journal of Dairy Science 53, 99
7 (1970)) 。このように不均一な成分から構成されてい
るため、今日プロテオースペプトンという用語は単一の
成分を示す物質名ではなく、一つの画分名として慣用的
に用いられている。
タンパク質のうちホエーを９５℃から１００℃で２０分
加熱後、ｐＨ４．６に調整しても沈殿せず、１２％トリ
クロル酢酸で沈殿する成分として定義されている(Thomp
son, M. P., Tarassuk, N. P.,Jenness, R., Lillevik,
H. A., Ashworth, U. S.and Rose, D.: Journal of Da
iry Science 48, 159 (1965))。このプロテオースペプ
トンは、均一な化学組成をもつものではなく、主にコン
ポーネント３、５及び８と呼ばれる複数のタンパク質画
分から構成されている(Larson, B. L., and G. R. Roll
eri. : Journal of Dairy Science 38, 351(1955))。そ
の後、さらにコンポーネント３、５、８-slow,８-fast
の４種の成分があると認識されている(Kolar, C. W., a
nd Brunner, J. R., Journal of Dairy Science 53, 99
7 (1970)) 。このように不均一な成分から構成されてい
るため、今日プロテオースペプトンという用語は単一の
成分を示す物質名ではなく、一つの画分名として慣用的
に用いられている。
【０００３】このうちコンポーネント３は脂肪球膜を構
成する糖タンパク質と抗原性を同じくする成分を多く含
み、菅野は、これをラクトフォリンと命名している(Kan
no,C.: Journal of Dairy Science 72, 883(1989)) 。
最近、本発明者らは、ラクトフォリンを構成する主要糖
タンパク質をコードするｃＤＮＡの配列を決定すること
に成功し(Tsukasaki, F., Motoshima, H., Kuriki, H.,
Minagawa, E. and Kanno, C. 24th In ternational Da
iry Congress: Melbourne, Australia, 18th-22nd Sept
ember,1994, Brief communications and abstracts of
posters and invited papers, page 190, Gb21p,1994)
、その配列から推定されるアミノ酸配列が、別の研究
者が決定したコンポーネント３の主要糖タンパク質の一
次構造(Sorensen, E. S and Petersen, T. E. Journal
of Dairy Research 60, 535 (1993)) と完全に一致する
ことを明らかにした。すなわち、プロテオースペプトン
のコンポーネント３とラクトフォリンは定義がやや異な
るが、物質としては事実上同一の成分を示した用語であ
るため、本発明ではコンポーネント３とラクトフォリン
は同一のものを意味するものとして用いる。
成する糖タンパク質と抗原性を同じくする成分を多く含
み、菅野は、これをラクトフォリンと命名している(Kan
no,C.: Journal of Dairy Science 72, 883(1989)) 。
最近、本発明者らは、ラクトフォリンを構成する主要糖
タンパク質をコードするｃＤＮＡの配列を決定すること
に成功し(Tsukasaki, F., Motoshima, H., Kuriki, H.,
Minagawa, E. and Kanno, C. 24th In ternational Da
iry Congress: Melbourne, Australia, 18th-22nd Sept
ember,1994, Brief communications and abstracts of
posters and invited papers, page 190, Gb21p,1994)
、その配列から推定されるアミノ酸配列が、別の研究
者が決定したコンポーネント３の主要糖タンパク質の一
次構造(Sorensen, E. S and Petersen, T. E. Journal
of Dairy Research 60, 535 (1993)) と完全に一致する
ことを明らかにした。すなわち、プロテオースペプトン
のコンポーネント３とラクトフォリンは定義がやや異な
るが、物質としては事実上同一の成分を示した用語であ
るため、本発明ではコンポーネント３とラクトフォリン
は同一のものを意味するものとして用いる。
【０００４】本発明のプロテオースペプトン画分からの
コンポーネント３の精製法は、ラクトフォリンの精製法
と同義として扱う。我々は、すでにこのラクトフォリン
画分が極めて高い界面活性力を有し天然の界面活性剤と
して利用価値が高いことを見出している（特開平４−１
０４８３０号）。コンポーネント３の従来的な分画方法
は、文献（例えば、Ng, W. C., Brunner, J. R. And Rh
ee K. C. Journal of Dairy Science 53,987 (1969))に
すでに詳しく説明されている。しかし、従来このコンポ
ーネント３を主成分とした画分を脱脂乳やホエーから精
製する方法は硫安分画等の煩雑な工程を必要とし、経済
的にも非常に不利で、事実上、界面活性剤や乳化剤とし
て利用するには問題があった。また、複雑な精製法を用
いると、精製過程で不純物が混入するおそれもあり、よ
り簡便なコンポーネント３の精製法の開発が求められて
いる。なお、本発明のような膜処理による精製法はいま
だ報告されていない。その理由は、コンポーネント３の
主要な構成タンパク質の分子量が変性下で約２７０００
と１７０００の分子量の糖タンパク質からなり、他の混
在するα−ラクトアルブミンやβ−ラクトグロブリンと
あまり大きさに差がないことから、事実上分画は困難で
あると考えられていたためである。
コンポーネント３の精製法は、ラクトフォリンの精製法
と同義として扱う。我々は、すでにこのラクトフォリン
画分が極めて高い界面活性力を有し天然の界面活性剤と
して利用価値が高いことを見出している（特開平４−１
０４８３０号）。コンポーネント３の従来的な分画方法
は、文献（例えば、Ng, W. C., Brunner, J. R. And Rh
ee K. C. Journal of Dairy Science 53,987 (1969))に
すでに詳しく説明されている。しかし、従来このコンポ
ーネント３を主成分とした画分を脱脂乳やホエーから精
製する方法は硫安分画等の煩雑な工程を必要とし、経済
的にも非常に不利で、事実上、界面活性剤や乳化剤とし
て利用するには問題があった。また、複雑な精製法を用
いると、精製過程で不純物が混入するおそれもあり、よ
り簡便なコンポーネント３の精製法の開発が求められて
いる。なお、本発明のような膜処理による精製法はいま
だ報告されていない。その理由は、コンポーネント３の
主要な構成タンパク質の分子量が変性下で約２７０００
と１７０００の分子量の糖タンパク質からなり、他の混
在するα−ラクトアルブミンやβ−ラクトグロブリンと
あまり大きさに差がないことから、事実上分画は困難で
あると考えられていたためである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】これまで、コンポーネ
ント３あるいはラクトフォリンを効率的に精製する方法
は未だ報告されていなかった。本発明は、従来報告され
ている方法のように硫安沈殿やカラムクロマトグラフィ
ーなどの方法を用いずに、ホエーから特にコンポーネン
ト３を多く含む画分を精製する方法を開発することを目
的とする。なお、本発明において原料として用いるホエ
ーには制限がなく、例えば酸性ホエーや中性ホエーのみ
ならず、ホエーを粉末化したホエーパウダー、ホエータ
ンパク質を濃縮したホエータンパク質の濃縮物（ＷＰ
Ｃ）、ホエータンパク質の単離物（ＷＰＩ）なども使用
できる。これらは、すべて市販されており、容易に入手
が可能である。これらは、いずれもコンポーネント３成
分をホエーと同様に含んでおり、適当に水などで還元す
れば、ホエーと同じく原料として利用することができ
る。したがって、本明細書において「ホエー」とは特に
断わらない限り、これらを含んだものを意味する。
ント３あるいはラクトフォリンを効率的に精製する方法
は未だ報告されていなかった。本発明は、従来報告され
ている方法のように硫安沈殿やカラムクロマトグラフィ
ーなどの方法を用いずに、ホエーから特にコンポーネン
ト３を多く含む画分を精製する方法を開発することを目
的とする。なお、本発明において原料として用いるホエ
ーには制限がなく、例えば酸性ホエーや中性ホエーのみ
ならず、ホエーを粉末化したホエーパウダー、ホエータ
ンパク質を濃縮したホエータンパク質の濃縮物（ＷＰ
Ｃ）、ホエータンパク質の単離物（ＷＰＩ）なども使用
できる。これらは、すべて市販されており、容易に入手
が可能である。これらは、いずれもコンポーネント３成
分をホエーと同様に含んでおり、適当に水などで還元す
れば、ホエーと同じく原料として利用することができ
る。したがって、本明細書において「ホエー」とは特に
断わらない限り、これらを含んだものを意味する。
【０００６】
【課題を解決するための手段】牛乳やホエーをｐＨ４か
ら５の範囲で加熱（約９０℃) した後、遠心分離により
凝集物を除去しても、単にプロテオースペプトンを多く
含む画分が得られるのみで、コンポーネント３のみを精
製することができない。しかし、本発明者らは鋭意努力
の結果、単にホエーを限外濾過濃縮装置で濃縮後（タン
パク質含量として０．０５％（重量／容量）以上）に、
９０℃前後の加熱をすることによって、コンポーネント
３以外の大部分のタンパク質を凝集させて除去し、上清
にはコンポーネント３が主要な成分として残り、精製す
ることが可能であることを見出した。本発明は、かかる
知見に基づいて完成されたものである。
ら５の範囲で加熱（約９０℃) した後、遠心分離により
凝集物を除去しても、単にプロテオースペプトンを多く
含む画分が得られるのみで、コンポーネント３のみを精
製することができない。しかし、本発明者らは鋭意努力
の結果、単にホエーを限外濾過濃縮装置で濃縮後（タン
パク質含量として０．０５％（重量／容量）以上）に、
９０℃前後の加熱をすることによって、コンポーネント
３以外の大部分のタンパク質を凝集させて除去し、上清
にはコンポーネント３が主要な成分として残り、精製す
ることが可能であることを見出した。本発明は、かかる
知見に基づいて完成されたものである。
【０００７】すなわち、請求項１に記載の本発明は、牛
乳プロテオースペプトンのコンポーネント３を透過せ
ず、他のホエータンパク質を透過する分画分子量の限外
濾過膜を用いてホエーを濃縮及び透析することを特徴と
する牛乳プロテオースペプトンのコンポーネント３の精
製法であり、請求項３に記載の本発明は、分画分子量１
万以上１００万以下の限外濾過膜を用いてホエーを濃縮
及び透析した後、濃縮液を７０〜１００℃の温度で１０
〜６０分間あるいはこれと同等の加熱変性を引き起こ
す、より高温で短時間の加熱処理を実施し、牛乳プロテ
オースペプトンのコンポーネント３以外のホエータンパ
ク質を凝集させ、除去することを特徴とする牛乳プロテ
オースペプトンのコンポーネント３の精製法である。
乳プロテオースペプトンのコンポーネント３を透過せ
ず、他のホエータンパク質を透過する分画分子量の限外
濾過膜を用いてホエーを濃縮及び透析することを特徴と
する牛乳プロテオースペプトンのコンポーネント３の精
製法であり、請求項３に記載の本発明は、分画分子量１
万以上１００万以下の限外濾過膜を用いてホエーを濃縮
及び透析した後、濃縮液を７０〜１００℃の温度で１０
〜６０分間あるいはこれと同等の加熱変性を引き起こ
す、より高温で短時間の加熱処理を実施し、牛乳プロテ
オースペプトンのコンポーネント３以外のホエータンパ
ク質を凝集させ、除去することを特徴とする牛乳プロテ
オースペプトンのコンポーネント３の精製法である。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明は、ホエーから効率よく牛
乳プロテオースペプトンのコンポーネント３を精製する
方法である。ホエーは、チーズ製造やカゼイン製造など
の副産物として得られるものであるが、ホエー（狭義）
には大きく分けて酸性ホエーと甘性ホエー（あるいは中
性ホエー）の２種類がある。酸性ホエーは主にクワル
ク、カッテージチーズなどの製造やカゼインの製造によ
り生じ、ホエーのｐＨが低い（通常、ｐＨ４〜５）とい
う特徴がある。一方、甘性ホエーはゴーダチーズやチェ
ダーチーズあるいはカマンベールチーズなどの製造によ
って生じ、ホエーのｐＨが高い（通常ｐＨ６前後）とい
う特徴がある。本発明のコンポーネント３の精製方法に
は、これら狭義のホエーのいずれをも用いることがで
き、同様に前記したホエーパウダー，ＷＰＣ，ＷＰＩな
ども用いられ、これらの２種以上を併用することも可能
である。
乳プロテオースペプトンのコンポーネント３を精製する
方法である。ホエーは、チーズ製造やカゼイン製造など
の副産物として得られるものであるが、ホエー（狭義）
には大きく分けて酸性ホエーと甘性ホエー（あるいは中
性ホエー）の２種類がある。酸性ホエーは主にクワル
ク、カッテージチーズなどの製造やカゼインの製造によ
り生じ、ホエーのｐＨが低い（通常、ｐＨ４〜５）とい
う特徴がある。一方、甘性ホエーはゴーダチーズやチェ
ダーチーズあるいはカマンベールチーズなどの製造によ
って生じ、ホエーのｐＨが高い（通常ｐＨ６前後）とい
う特徴がある。本発明のコンポーネント３の精製方法に
は、これら狭義のホエーのいずれをも用いることがで
き、同様に前記したホエーパウダー，ＷＰＣ，ＷＰＩな
ども用いられ、これらの２種以上を併用することも可能
である。
【０００９】ホエーの濃縮に際して限外濾過膜を使用す
るが、分画分子量が１万以上の膜を使用すれば、膜透析
を行うことによって、ホエー中に存在する乳糖や低分子
量物質を効果的に除去して、高純度のコンポーネント３
画分を得ることができる。分画分子量の上限は１００万
である。それ以上の分画分子量のときは、コンポーネン
ト３も透過してしまい、濃縮は困難となる。さらに、分
画分子量が５万以上の膜、好ましくは１０万〜５０万の
膜を用いて膜透析を行うことによって、コンポーネント
３以外のカゼイン分解物やαラクトアルブミンやβラク
トグロブリンなどの主要な共存タンパク質成分を効果的
に除去し、濃縮液側にコンポーネント３を主に含む画分
を蓄積させることができる。この場合は、以下に述べる
加熱処理は必ずしも必要としない。分画分子量が１万以
上１００万以下の膜を使用して膜透析を行った場合は、
得られた濃縮液を加熱処理することによって、コンポー
ネント３以外のタンパク質成分を凝集させ、除くことが
できる。その結果、より効果的にコンポーネント３を精
製することが可能である。加熱温度は７０℃以上、通常
は７０〜１００℃である。加熱処理の時間は、通常１０
〜６０分が適当であり、加熱温度が８０℃では２０分以
上、９０℃では１０分以上が目安とされる。しかし、こ
の加熱処理はタンパク質を熱変性させて凝集化させるこ
とが目的であるから、これと同等の加熱変性を引き起こ
す、より高温で短時間の加熱処理、例えば１２１℃で数
秒程度の加熱処理でもよい。この方法としては、例えば
プレート式熱交換器を用いた加熱法等が挙げられる。な
お、加熱処理時にｐＨを３〜１０、好ましくは３．０以
上５．０未満に調整することが望ましい。このｐＨ調整
は、加熱後に行い、その後で遠心等により凝集物を除去
することによっても同様の結果が得られる。また、濃縮
液のタンパク質濃度が０．０５（重量／容量）以上とな
るように濃縮を行う。
るが、分画分子量が１万以上の膜を使用すれば、膜透析
を行うことによって、ホエー中に存在する乳糖や低分子
量物質を効果的に除去して、高純度のコンポーネント３
画分を得ることができる。分画分子量の上限は１００万
である。それ以上の分画分子量のときは、コンポーネン
ト３も透過してしまい、濃縮は困難となる。さらに、分
画分子量が５万以上の膜、好ましくは１０万〜５０万の
膜を用いて膜透析を行うことによって、コンポーネント
３以外のカゼイン分解物やαラクトアルブミンやβラク
トグロブリンなどの主要な共存タンパク質成分を効果的
に除去し、濃縮液側にコンポーネント３を主に含む画分
を蓄積させることができる。この場合は、以下に述べる
加熱処理は必ずしも必要としない。分画分子量が１万以
上１００万以下の膜を使用して膜透析を行った場合は、
得られた濃縮液を加熱処理することによって、コンポー
ネント３以外のタンパク質成分を凝集させ、除くことが
できる。その結果、より効果的にコンポーネント３を精
製することが可能である。加熱温度は７０℃以上、通常
は７０〜１００℃である。加熱処理の時間は、通常１０
〜６０分が適当であり、加熱温度が８０℃では２０分以
上、９０℃では１０分以上が目安とされる。しかし、こ
の加熱処理はタンパク質を熱変性させて凝集化させるこ
とが目的であるから、これと同等の加熱変性を引き起こ
す、より高温で短時間の加熱処理、例えば１２１℃で数
秒程度の加熱処理でもよい。この方法としては、例えば
プレート式熱交換器を用いた加熱法等が挙げられる。な
お、加熱処理時にｐＨを３〜１０、好ましくは３．０以
上５．０未満に調整することが望ましい。このｐＨ調整
は、加熱後に行い、その後で遠心等により凝集物を除去
することによっても同様の結果が得られる。また、濃縮
液のタンパク質濃度が０．０５（重量／容量）以上とな
るように濃縮を行う。
【００１０】コンポーネント３の主要成分は変性下での
分子量は３万未満程度であり、ゲル濾過での分子量は１
３万程度であることが明らかにされている。しかし、ホ
エー中の天然条件下の存在形態では３０万以上の分子量
を有していると考えられる。実際に、分画分子量が５０
万あるいは１００万の膜を用いても、コンポーネント３
は濃縮液側に蓄積される。
分子量は３万未満程度であり、ゲル濾過での分子量は１
３万程度であることが明らかにされている。しかし、ホ
エー中の天然条件下の存在形態では３０万以上の分子量
を有していると考えられる。実際に、分画分子量が５０
万あるいは１００万の膜を用いても、コンポーネント３
は濃縮液側に蓄積される。
【００１１】
【実施例】次に、本発明を実施例により説明するが、本
発明はこれらによって制限されるものではない。 実施例１ ＜コンポーネント３の同定＞チーズ製造、例えばクワル
ク製造で生じた酸性ホエーを分画分子量５万の膜を使用
して濃縮し、濃縮液を非変性下でポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動（ＰＡＧＥ）し、クマーシーブリリアントブ
ルーＲ２５０で染色してコンポーネント３の存在を確認
した。なお、ゲルの濃度は１２．５％であった。図１は
その電気泳動写真を示したものである。なお、電気泳動
は文献(Davis, B. J. Ann. N. Y. Acad. Sci. 121,404
(1964))記載の方法により実施した。目的とするコンポ
ーネント３は、この泳動方法では移動度の比較的小さい
位置に容易に確認することができる。この画分は、前記
したように、菅野によりラクトフォリンと命名されてい
る。本発明のポリアクリルアミドゲル電気泳動は、すべ
てこの条件で実施した。
発明はこれらによって制限されるものではない。 実施例１ ＜コンポーネント３の同定＞チーズ製造、例えばクワル
ク製造で生じた酸性ホエーを分画分子量５万の膜を使用
して濃縮し、濃縮液を非変性下でポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動（ＰＡＧＥ）し、クマーシーブリリアントブ
ルーＲ２５０で染色してコンポーネント３の存在を確認
した。なお、ゲルの濃度は１２．５％であった。図１は
その電気泳動写真を示したものである。なお、電気泳動
は文献(Davis, B. J. Ann. N. Y. Acad. Sci. 121,404
(1964))記載の方法により実施した。目的とするコンポ
ーネント３は、この泳動方法では移動度の比較的小さい
位置に容易に確認することができる。この画分は、前記
したように、菅野によりラクトフォリンと命名されてい
る。本発明のポリアクリルアミドゲル電気泳動は、すべ
てこの条件で実施した。
【００１２】実施例２ ＜限外濾過によるコンポーネント３の選択的濃縮＞クワ
ルク製造で生じた酸性ホエーからの限外濾過によるコン
ポーネント３の濃縮の例を示す。この酸性ホエーはｐＨ
４．２３であった。これをさらにイオン交換樹脂法でｐ
Ｈを８．３０に置換したｐＨ調整ホエーを準備した。こ
れら２種類のｐＨのホエーを平膜型の限外濾過装置で濃
縮した結果を図２に示した。なお、実験装置は東洋ソー
ダ（株）製ＵＦ−ＬＭＳ型ＵＦモジュールであり、分画
分子量３０万の膜（ＵＦ−３００ＰＳ）を用いた。それ
ぞれのサンプル２００ｍｌを流速２．５ｍｌ／分で通液
し、濃縮液４０ｍｌと透過液１６０ｍｌを得た。
ルク製造で生じた酸性ホエーからの限外濾過によるコン
ポーネント３の濃縮の例を示す。この酸性ホエーはｐＨ
４．２３であった。これをさらにイオン交換樹脂法でｐ
Ｈを８．３０に置換したｐＨ調整ホエーを準備した。こ
れら２種類のｐＨのホエーを平膜型の限外濾過装置で濃
縮した結果を図２に示した。なお、実験装置は東洋ソー
ダ（株）製ＵＦ−ＬＭＳ型ＵＦモジュールであり、分画
分子量３０万の膜（ＵＦ−３００ＰＳ）を用いた。それ
ぞれのサンプル２００ｍｌを流速２．５ｍｌ／分で通液
し、濃縮液４０ｍｌと透過液１６０ｍｌを得た。
【００１３】得られた透過液は凍結乾燥した。濃縮液は
さらに水６０ｍｌを加えた後、４０ｍｌになるまで濃縮
し、凍結乾燥した。得られたそれぞれの凍結乾燥物を電
気泳動で比較した（図２）。その結果、ｐＨ調整してい
ないホエーでもｐＨ調整後のホエーでも、濃縮液にはコ
ンポーネント３が濃縮されていること、透過液側にはコ
ンポーネント３のバンドが見られないことが明らかとな
った。また、コンポーネント３以外の移動度の大きいα
ラクトアルブミンやβラクトグロブリンなどのホエータ
ンパク質は濃縮液と透過液の両方に存在することが明ら
かとなった。この結果から、ホエーを限外濾過膜で濃縮
するときにαラクトアルブミンやβラクトグロブリンは
透過し、かつコンポーネント３は透過できない分画分子
量の限外濾過膜を利用すれば、コンポーネント３を効率
的に濃縮できることが容易に理解できる。図２におい
て、レーン１はｐＨを調整していない酸性ホエー原液
（ｐＨ４．２）、レーン２は該酸性ホエーを限外濾過装
置で濃縮した時の濃縮液、レーン３は該酸性ホエーを限
外濾過装置で濃縮した時の透過液、レーン４はイオン交
換法でｐＨを調整した酸性ホエー（ｐＨ８．３）、レー
ン５は該ｐＨ調整酸性ホエーを限外濾過装置で濃縮した
時の濃縮液、レーン６は該ｐＨ調整酸性ホエーを限外濾
過装置で濃縮した時の透過液を示す。レーン３とレーン
６の透過液ではコンポーネント３のバンドが見られない
ことが分かる。
さらに水６０ｍｌを加えた後、４０ｍｌになるまで濃縮
し、凍結乾燥した。得られたそれぞれの凍結乾燥物を電
気泳動で比較した（図２）。その結果、ｐＨ調整してい
ないホエーでもｐＨ調整後のホエーでも、濃縮液にはコ
ンポーネント３が濃縮されていること、透過液側にはコ
ンポーネント３のバンドが見られないことが明らかとな
った。また、コンポーネント３以外の移動度の大きいα
ラクトアルブミンやβラクトグロブリンなどのホエータ
ンパク質は濃縮液と透過液の両方に存在することが明ら
かとなった。この結果から、ホエーを限外濾過膜で濃縮
するときにαラクトアルブミンやβラクトグロブリンは
透過し、かつコンポーネント３は透過できない分画分子
量の限外濾過膜を利用すれば、コンポーネント３を効率
的に濃縮できることが容易に理解できる。図２におい
て、レーン１はｐＨを調整していない酸性ホエー原液
（ｐＨ４．２）、レーン２は該酸性ホエーを限外濾過装
置で濃縮した時の濃縮液、レーン３は該酸性ホエーを限
外濾過装置で濃縮した時の透過液、レーン４はイオン交
換法でｐＨを調整した酸性ホエー（ｐＨ８．３）、レー
ン５は該ｐＨ調整酸性ホエーを限外濾過装置で濃縮した
時の濃縮液、レーン６は該ｐＨ調整酸性ホエーを限外濾
過装置で濃縮した時の透過液を示す。レーン３とレーン
６の透過液ではコンポーネント３のバンドが見られない
ことが分かる。
【００１４】実施例３ ＜コンポーネント３の回収に対する加熱の影響＞実施例
２に示したように、コンポーネント３は限外濾過によっ
て効率よく選択的に濃縮できることが明らかとなった。
しかし、αラクトアルブミンとβラクトグロブリンを主
成分とするコンポーネント３以外のタンパク質も、特に
分画分子量の小さい膜を使用して膜透析を行った場合に
はやや濃縮されるか、または濃縮されない場合でも平衡
状態となり、濃縮液中に混在していることが判明した。
そこで、さらにコンポーネント３の純度を高めるため
に、濃縮後に９０℃、３０分の加熱処理を実施し、混在
するコンポーネント３以外の成分を変性させ、凝集させ
た後、それらを遠心分離により分離することでコンポー
ネント３以外の成分を除去すべく検討した。
２に示したように、コンポーネント３は限外濾過によっ
て効率よく選択的に濃縮できることが明らかとなった。
しかし、αラクトアルブミンとβラクトグロブリンを主
成分とするコンポーネント３以外のタンパク質も、特に
分画分子量の小さい膜を使用して膜透析を行った場合に
はやや濃縮されるか、または濃縮されない場合でも平衡
状態となり、濃縮液中に混在していることが判明した。
そこで、さらにコンポーネント３の純度を高めるため
に、濃縮後に９０℃、３０分の加熱処理を実施し、混在
するコンポーネント３以外の成分を変性させ、凝集させ
た後、それらを遠心分離により分離することでコンポー
ネント３以外の成分を除去すべく検討した。
【００１５】その結果、分画分子量１０万あるいは５０
万の膜を用いて酸性ホエーを濃縮した後に、濃縮液を９
０℃で３０分加熱し、遠心分離したとき、どちらの膜を
用いても加熱処理によって効率よくコンポーネント３以
外の画分を除去できることが明らかとなった。電気泳動
で求めた結果を図３に示す。図３において、レーン１は
酸性ホエーを分画分子量５０万の膜で濃縮後、加熱し、
遠心分離後の上澄液、レーン２はレーン１と同様なサン
プルの加熱していないもの、レーン３は酸性ホエーを分
画分子量１０万の膜で濃縮し、加熱していないもの、レ
ーン４はレーン３と同じサンプルを加熱し、遠心分離し
た上澄液を示す。これらの電気泳動により加熱後、遠心
分離を行うことによってコンポーネント３以外のバンド
が減少していることが明らかである。
万の膜を用いて酸性ホエーを濃縮した後に、濃縮液を９
０℃で３０分加熱し、遠心分離したとき、どちらの膜を
用いても加熱処理によって効率よくコンポーネント３以
外の画分を除去できることが明らかとなった。電気泳動
で求めた結果を図３に示す。図３において、レーン１は
酸性ホエーを分画分子量５０万の膜で濃縮後、加熱し、
遠心分離後の上澄液、レーン２はレーン１と同様なサン
プルの加熱していないもの、レーン３は酸性ホエーを分
画分子量１０万の膜で濃縮し、加熱していないもの、レ
ーン４はレーン３と同じサンプルを加熱し、遠心分離し
た上澄液を示す。これらの電気泳動により加熱後、遠心
分離を行うことによってコンポーネント３以外のバンド
が減少していることが明らかである。
【００１６】実施例４ ＜コンポーネント３の回収に対する限外濾過膜の分画分
子量の影響＞コンポーネント３は、前記したように、変
性下で電気泳動すると、分子量は主に２７０００と１７
０００の比較的小さな分子が主要構成分であること、ま
たゲル濾過では約１３万前後の分子量であることが分か
っているが、ホエー中の天然状態ではさらに大きな分子
量で存在していると考えられ、分画分子量が１万以上１
００万までの限外濾過膜を使用して濃縮を行ったとき、
コンポーネント３は濃縮液側に蓄積することが分かっ
た。すなわち、従来はコンポーネント３は分子量がカゼ
インやαラクトアルブミンやβラクトグロブリン等と比
較的近いものであると考えられていたため、膜による効
率的な分画は不可能と考えられていたが、実際には、本
実施例で示したように、分画分子量が５万から５０万と
いう非常に大きい膜でも、コンポーネント３は膜を透過
できずに濃縮できることが明らかとなった。
子量の影響＞コンポーネント３は、前記したように、変
性下で電気泳動すると、分子量は主に２７０００と１７
０００の比較的小さな分子が主要構成分であること、ま
たゲル濾過では約１３万前後の分子量であることが分か
っているが、ホエー中の天然状態ではさらに大きな分子
量で存在していると考えられ、分画分子量が１万以上１
００万までの限外濾過膜を使用して濃縮を行ったとき、
コンポーネント３は濃縮液側に蓄積することが分かっ
た。すなわち、従来はコンポーネント３は分子量がカゼ
インやαラクトアルブミンやβラクトグロブリン等と比
較的近いものであると考えられていたため、膜による効
率的な分画は不可能と考えられていたが、実際には、本
実施例で示したように、分画分子量が５万から５０万と
いう非常に大きい膜でも、コンポーネント３は膜を透過
できずに濃縮できることが明らかとなった。
【００１７】図４は、分画分子量１万、５万、１０万、
５０万、１００万の限外濾過膜を使用して濃縮して得た
ものを加熱処理（９０〜９５℃で１０〜３０分間）し、
遠心分離して得た上清を電気泳動により分析した結果を
示したものである。図中、レーン１は分画分子量１万の
膜で濃縮したのち、加熱し、遠心分離して得た上澄液の
ポリアクリルアミドゲル電気泳動の結果、レーン２は分
画分子量５万の膜で濃縮したのち、加熱し、遠心分離し
て得た上澄液のポリアクリルアミドゲル電気泳動の結
果、レーン３は分画分子量１０万の膜で濃縮したのち、
加熱し、遠心分離して得た上澄液のポリアクリルアミド
ゲル電気泳動の結果、レーン４は分画分子量５０万の膜
で濃縮したのち、加熱し、遠心分離して得た上澄液のポ
リアクリルアミドゲル電気泳動の結果、レーン５は分画
分子量１００万の膜で濃縮したのち、加熱し、遠心分離
して得た上澄液のポリアクリルアミドゲル電気泳動の結
果をそれぞれ示す。この結果から明らかなように、１万
から５０万までの分画分子量の膜では濃縮液側に濃縮さ
せることが可能で、透過液側にコンポーネント３は出て
こなかった。しかし、分画分子量１００万の膜では、コ
ンポーネント３は透過液側にも漏洩したが、ある程度濃
縮された。したがって、効率よくコンポーネント３を限
外濾過法で濃縮、精製するには、コンポーネント３が通
過できないぎりぎりの分画分子量の膜（例えば、５万か
ら５０万の膜）を用いれば、膜透析によって効率よく夾
雑物を減少させることが可能であり、しかも膜の詰まり
が起こりにくくなり経済的である。
５０万、１００万の限外濾過膜を使用して濃縮して得た
ものを加熱処理（９０〜９５℃で１０〜３０分間）し、
遠心分離して得た上清を電気泳動により分析した結果を
示したものである。図中、レーン１は分画分子量１万の
膜で濃縮したのち、加熱し、遠心分離して得た上澄液の
ポリアクリルアミドゲル電気泳動の結果、レーン２は分
画分子量５万の膜で濃縮したのち、加熱し、遠心分離し
て得た上澄液のポリアクリルアミドゲル電気泳動の結
果、レーン３は分画分子量１０万の膜で濃縮したのち、
加熱し、遠心分離して得た上澄液のポリアクリルアミド
ゲル電気泳動の結果、レーン４は分画分子量５０万の膜
で濃縮したのち、加熱し、遠心分離して得た上澄液のポ
リアクリルアミドゲル電気泳動の結果、レーン５は分画
分子量１００万の膜で濃縮したのち、加熱し、遠心分離
して得た上澄液のポリアクリルアミドゲル電気泳動の結
果をそれぞれ示す。この結果から明らかなように、１万
から５０万までの分画分子量の膜では濃縮液側に濃縮さ
せることが可能で、透過液側にコンポーネント３は出て
こなかった。しかし、分画分子量１００万の膜では、コ
ンポーネント３は透過液側にも漏洩したが、ある程度濃
縮された。したがって、効率よくコンポーネント３を限
外濾過法で濃縮、精製するには、コンポーネント３が通
過できないぎりぎりの分画分子量の膜（例えば、５万か
ら５０万の膜）を用いれば、膜透析によって効率よく夾
雑物を減少させることが可能であり、しかも膜の詰まり
が起こりにくくなり経済的である。
【００１８】実施例５ ＜加熱時のタンパク質濃度の影響＞クワルク製造で生じ
た酸性ホエーを濃縮前に加熱しても、凝集物や沈殿物は
生成せず、遠心分離を行ってもαラクトアルブミンやβ
ラクトグロブリンは殆ど除去できない。それ故、効率よ
くコンポーネント３を限外濾過法で精製するには膜透析
で濃縮後に加熱処理を行うことが必要である。このと
き、どの程度のタンパク質濃度で加熱処理すれば、コン
ポーネント３成分以外の成分を除去できるかについて検
討した。分画分子量５０万の膜を使用して得た酸性ホエ
ー濃縮物を凍結乾燥した。これをタンパク質濃度として
０．０５、０．１、０．３、０．５、０．７、１．０、
２．０％（Ｗ／Ｖ）になるように水で還元し調製した。
なお、タンパク質含量はウシ血清アルブミンを標準タン
パク質として色素法によって決定した。これらの濃度に
調製した濃縮液を９５℃で２０分間加熱処理した後、１
５０００ｒｐｍで遠心分離後、上澄液を各レーンのタン
パク質量がほぼ同じになるようにして、電気泳動で分析
した。結果を図５に示す。各レーンのサンプルのタンパ
ク質濃度は次の通りである。 レーン１：加熱前の濃縮液（対照）、レーン２：０．０
５％（Ｗ／Ｖ）、レーン３：０．１％（Ｗ／Ｖ）、レー
ン４：０．３％（Ｗ／Ｖ）、レーン５：０．５％（Ｗ／
Ｖ）、レーン６：０．７％（Ｗ／Ｖ）、レーン７：１．
０％（Ｗ／Ｖ）、レーン８：２．０％（Ｗ／Ｖ） 図から明らかなように、タンパク質濃度が０．０５％以
上の濃縮液を加熱処理した場合に、特にβラクトグロブ
リンを除去できることが分かった。また、０．１％以上
のタンパク質濃度では、αラクトアルブミンも除去でき
ることが分かった。
た酸性ホエーを濃縮前に加熱しても、凝集物や沈殿物は
生成せず、遠心分離を行ってもαラクトアルブミンやβ
ラクトグロブリンは殆ど除去できない。それ故、効率よ
くコンポーネント３を限外濾過法で精製するには膜透析
で濃縮後に加熱処理を行うことが必要である。このと
き、どの程度のタンパク質濃度で加熱処理すれば、コン
ポーネント３成分以外の成分を除去できるかについて検
討した。分画分子量５０万の膜を使用して得た酸性ホエ
ー濃縮物を凍結乾燥した。これをタンパク質濃度として
０．０５、０．１、０．３、０．５、０．７、１．０、
２．０％（Ｗ／Ｖ）になるように水で還元し調製した。
なお、タンパク質含量はウシ血清アルブミンを標準タン
パク質として色素法によって決定した。これらの濃度に
調製した濃縮液を９５℃で２０分間加熱処理した後、１
５０００ｒｐｍで遠心分離後、上澄液を各レーンのタン
パク質量がほぼ同じになるようにして、電気泳動で分析
した。結果を図５に示す。各レーンのサンプルのタンパ
ク質濃度は次の通りである。 レーン１：加熱前の濃縮液（対照）、レーン２：０．０
５％（Ｗ／Ｖ）、レーン３：０．１％（Ｗ／Ｖ）、レー
ン４：０．３％（Ｗ／Ｖ）、レーン５：０．５％（Ｗ／
Ｖ）、レーン６：０．７％（Ｗ／Ｖ）、レーン７：１．
０％（Ｗ／Ｖ）、レーン８：２．０％（Ｗ／Ｖ） 図から明らかなように、タンパク質濃度が０．０５％以
上の濃縮液を加熱処理した場合に、特にβラクトグロブ
リンを除去できることが分かった。また、０．１％以上
のタンパク質濃度では、αラクトアルブミンも除去でき
ることが分かった。
【００１９】実施例６ ＜濃縮液のｐＨの影響＞コンポーネント３成分以外の成
分を効果的に除去してコンポーネント３を効率よく精製
するためには、濃縮液のｐＨをどのように調整すればよ
いかを調べるため、濃縮液のｐＨの影響について検討し
た。すなわち、分画分子量５０万の膜を使用して得た酸
性ホエー濃縮物を凍結乾燥した。この酸性ホエー濃縮物
は水で膜透析を続けると、アルカリ性（ｐＨ８．３）に
なった。これをタンパク質濃度０．５％（Ｗ/ Ｖ）にな
るように各種緩衝液で調製し、これらの濃縮液を煮沸
（９５〜１００℃）で２０分間加熱処理し、１５０００
ｒｐｍで遠心分離後、上澄液をタンパク質量として同じ
になるようにしてから、電気泳動で分析した。結果を図
６に示す。図中、各レーンのサンプルのｐＨは次のとお
りである。 レーン１：ｐＨ３、レーン２：ｐＨ４、レーン３：ｐＨ
５、レーン４：ｐＨ６、レーン５：ｐＨ７、レーン６：
ｐＨ８、レーン７：ｐＨ９、レーン８：ｐＨ１０ 図から明らかなように、どのｐＨ値においてもαラクト
アルブミンやβラクトグロブリンなどは除去可能である
と考えられる。さらに、よく観察すると、コンポーネン
ト３よりも移動度の小さい高分子の糖タンパク質は酸性
下での加熱処理によって除去することができることが分
かる。遠心分離後の上澄液は、ｐＨが３．０以上５．０
未満のとき透明度が高かったが、アルカリ側で加熱処理
すると、上澄液が白濁し、変性したタンパク質が多くな
ったものと考えられる。それ故、加熱時のｐＨは３．０
以上５．０未満が望ましい。なお、加熱後にｐＨ調整を
行い、その後で遠心分離等により凝集物を除去しても同
様の結果が得られる。
分を効果的に除去してコンポーネント３を効率よく精製
するためには、濃縮液のｐＨをどのように調整すればよ
いかを調べるため、濃縮液のｐＨの影響について検討し
た。すなわち、分画分子量５０万の膜を使用して得た酸
性ホエー濃縮物を凍結乾燥した。この酸性ホエー濃縮物
は水で膜透析を続けると、アルカリ性（ｐＨ８．３）に
なった。これをタンパク質濃度０．５％（Ｗ/ Ｖ）にな
るように各種緩衝液で調製し、これらの濃縮液を煮沸
（９５〜１００℃）で２０分間加熱処理し、１５０００
ｒｐｍで遠心分離後、上澄液をタンパク質量として同じ
になるようにしてから、電気泳動で分析した。結果を図
６に示す。図中、各レーンのサンプルのｐＨは次のとお
りである。 レーン１：ｐＨ３、レーン２：ｐＨ４、レーン３：ｐＨ
５、レーン４：ｐＨ６、レーン５：ｐＨ７、レーン６：
ｐＨ８、レーン７：ｐＨ９、レーン８：ｐＨ１０ 図から明らかなように、どのｐＨ値においてもαラクト
アルブミンやβラクトグロブリンなどは除去可能である
と考えられる。さらに、よく観察すると、コンポーネン
ト３よりも移動度の小さい高分子の糖タンパク質は酸性
下での加熱処理によって除去することができることが分
かる。遠心分離後の上澄液は、ｐＨが３．０以上５．０
未満のとき透明度が高かったが、アルカリ側で加熱処理
すると、上澄液が白濁し、変性したタンパク質が多くな
ったものと考えられる。それ故、加熱時のｐＨは３．０
以上５．０未満が望ましい。なお、加熱後にｐＨ調整を
行い、その後で遠心分離等により凝集物を除去しても同
様の結果が得られる。
【００２０】実施例７ ＜加熱温度の影響＞コンポーネント３を効率よく精製す
るためには、加熱処理の温度をどの程度にすればよいか
検討した。そこで、分画分子量５０万の膜を使用して得
た酸性ホエー濃縮物を凍結乾燥した。これをタンパク質
濃度０．５％（Ｗ／Ｖ）になるように調製した（ＨＣｌ
を用いてｐＨ４．０に調整した。）次いで、濃縮液を４
０℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃または
煮沸（９５〜１００℃）の温度で２０分間加熱処理した
後、１５０００ｐｐｍで遠心分離後、上澄液をタンパク
質量として同じになるように調整後、電気泳動で分析し
た。その結果を図７に示す。なお、対照として加熱処理
をしないものを用いた。図中、各レーンのサンプルの加
熱温度は次の通りである。 レーン１：加熱前の濃縮液（対照）：レーン２：４０
℃、レーン３：５０℃、レーン４：６０℃、レーン５：
７０℃、レーン６：８０℃、レーン７：９０℃、レーン
８：煮沸（９５〜１００℃） その結果、９０℃で２０分に相当する加熱処理でかなり
の除去が可能であると考えられた。しかし、加熱処理温
度が９５〜１００℃であれば、さらに効率よくコンポー
ネント３以外の成分を除去できることが明らかとなっ
た。
るためには、加熱処理の温度をどの程度にすればよいか
検討した。そこで、分画分子量５０万の膜を使用して得
た酸性ホエー濃縮物を凍結乾燥した。これをタンパク質
濃度０．５％（Ｗ／Ｖ）になるように調製した（ＨＣｌ
を用いてｐＨ４．０に調整した。）次いで、濃縮液を４
０℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃または
煮沸（９５〜１００℃）の温度で２０分間加熱処理した
後、１５０００ｐｐｍで遠心分離後、上澄液をタンパク
質量として同じになるように調整後、電気泳動で分析し
た。その結果を図７に示す。なお、対照として加熱処理
をしないものを用いた。図中、各レーンのサンプルの加
熱温度は次の通りである。 レーン１：加熱前の濃縮液（対照）：レーン２：４０
℃、レーン３：５０℃、レーン４：６０℃、レーン５：
７０℃、レーン６：８０℃、レーン７：９０℃、レーン
８：煮沸（９５〜１００℃） その結果、９０℃で２０分に相当する加熱処理でかなり
の除去が可能であると考えられた。しかし、加熱処理温
度が９５〜１００℃であれば、さらに効率よくコンポー
ネント３以外の成分を除去できることが明らかとなっ
た。
【００２１】実施例８ ＜加熱時間の影響＞コンポーネント３を効率よく精製す
るためには、加熱処理の時間をどの程度とすればよいか
検討した。実施例７と同様な濃縮液を煮沸（９５〜１０
０℃）で１分から６０分加熱した。次いで、１５０００
ｒｐｍで遠心分離後、得られた上澄液を各レーンのタン
パク質量が同じになるようにして、電気泳動で分析し
た。その結果を図８に示した。各レーンのサンプルの煮
沸（９５〜１００℃）での加熱時間はレーン１：未加熱
（０分間）、レーン２：１分間、レーン３：５分間、レ
ーン４：１０分間、レーン５：１５分間、レーン６：２
０分間、レーン７：２５分間、レーン８：３０分間、レ
ーン９：４０分間、レーン１０：５０分間、レーン１
１：６０分間である。図から明らかなように、９５〜１
００℃で５分間以上加熱すれば、コンポーネント３を効
率的に精製できることが分かる。この結果と実施例７の
結果とを併せて判断すると、９０℃で１０分程度の加熱
処理が適当である。なお、当然のことながら、この加熱
処理はタンパク質を熱変性させるためであるから、これ
と同等な変性を引き起こすことができる、より高温で短
時間の加熱（例えば１２１℃、数秒間）でも同様の結果
が得られることは明白である。
るためには、加熱処理の時間をどの程度とすればよいか
検討した。実施例７と同様な濃縮液を煮沸（９５〜１０
０℃）で１分から６０分加熱した。次いで、１５０００
ｒｐｍで遠心分離後、得られた上澄液を各レーンのタン
パク質量が同じになるようにして、電気泳動で分析し
た。その結果を図８に示した。各レーンのサンプルの煮
沸（９５〜１００℃）での加熱時間はレーン１：未加熱
（０分間）、レーン２：１分間、レーン３：５分間、レ
ーン４：１０分間、レーン５：１５分間、レーン６：２
０分間、レーン７：２５分間、レーン８：３０分間、レ
ーン９：４０分間、レーン１０：５０分間、レーン１
１：６０分間である。図から明らかなように、９５〜１
００℃で５分間以上加熱すれば、コンポーネント３を効
率的に精製できることが分かる。この結果と実施例７の
結果とを併せて判断すると、９０℃で１０分程度の加熱
処理が適当である。なお、当然のことながら、この加熱
処理はタンパク質を熱変性させるためであるから、これ
と同等な変性を引き起こすことができる、より高温で短
時間の加熱（例えば１２１℃、数秒間）でも同様の結果
が得られることは明白である。
【００２２】実施例９ ＜酸性ホエーからのコンポーネント３画分の生産＞上記
の各実施例の結果に基づいて、実際にホエーからコンポ
ーネント３を精製した。すなわち、クワルク製造で生じ
た酸性ホエー２７０ｋｇ（ｐＨ４．３）を５０〜５５℃
に加温し、これを限外濾過装置（α−ラバルＵＦＲ１／
２、フォローファイバーＰＭ１００、分画分子量１０
万）で濃縮、加水による膜透析を行い、総量３６ｋｇま
で濃縮した。次いで、逆浸透膜(Reverse Osmosis、Ｒ
Ｏ）（ＤＤＳ，ＨＲ９５) で５ｋｇまで濃縮した後、煮
沸（９５〜１００℃）で３０分間加熱処理し、３０００
ｒｐｍで１５分間遠心分離して沈殿物を除去した。な
お、加熱処理時の濃縮液のｐＨは８．３に調整した。得
られた上清を凍結乾燥してコンポーネント３画分を６４
ｇ得た。
の各実施例の結果に基づいて、実際にホエーからコンポ
ーネント３を精製した。すなわち、クワルク製造で生じ
た酸性ホエー２７０ｋｇ（ｐＨ４．３）を５０〜５５℃
に加温し、これを限外濾過装置（α−ラバルＵＦＲ１／
２、フォローファイバーＰＭ１００、分画分子量１０
万）で濃縮、加水による膜透析を行い、総量３６ｋｇま
で濃縮した。次いで、逆浸透膜(Reverse Osmosis、Ｒ
Ｏ）（ＤＤＳ，ＨＲ９５) で５ｋｇまで濃縮した後、煮
沸（９５〜１００℃）で３０分間加熱処理し、３０００
ｒｐｍで１５分間遠心分離して沈殿物を除去した。な
お、加熱処理時の濃縮液のｐＨは８．３に調整した。得
られた上清を凍結乾燥してコンポーネント３画分を６４
ｇ得た。
【００２３】実施例１０ ＜酸性ホエーからの透明度の高いコンポーネント３画分
の生産＞実施例９で得られたコンポーネント３は水に溶
解したとき白濁しているので、この例では透明度の高い
コンポーネント３の製造例を示す。酸性ホエー３６３ｋ
ｇを５０〜５５℃に加温して限外濾過装置（α−ラバル
ＵＦＲ１／２、フォローファイバーＰＭ５００、分画分
子量５０万）で濃縮、加水による膜透析を行い、総量２
２ｋｇまで濃縮した。次いで、逆浸透膜（ＲＯ）（ＤＤ
Ｓ，ＨＲ９５）で５ｋｇまで濃縮した後、撹拌しながら
６規定塩酸を用いてｐＨ４．０に調整した。それから煮
沸（９５〜１００℃）で３０分間加熱処理し、３０００
ｒｐｍで１５分間遠心分離して沈殿物を除去した。得ら
れた上清を凍結乾燥して透明度の高いコンポーネント３
画分を５４ｇ得た。
の生産＞実施例９で得られたコンポーネント３は水に溶
解したとき白濁しているので、この例では透明度の高い
コンポーネント３の製造例を示す。酸性ホエー３６３ｋ
ｇを５０〜５５℃に加温して限外濾過装置（α−ラバル
ＵＦＲ１／２、フォローファイバーＰＭ５００、分画分
子量５０万）で濃縮、加水による膜透析を行い、総量２
２ｋｇまで濃縮した。次いで、逆浸透膜（ＲＯ）（ＤＤ
Ｓ，ＨＲ９５）で５ｋｇまで濃縮した後、撹拌しながら
６規定塩酸を用いてｐＨ４．０に調整した。それから煮
沸（９５〜１００℃）で３０分間加熱処理し、３０００
ｒｐｍで１５分間遠心分離して沈殿物を除去した。得ら
れた上清を凍結乾燥して透明度の高いコンポーネント３
画分を５４ｇ得た。
【００２４】実施例１１ ＜実施例９および実施例１０で得たコンポーネント３画
分の分析＞実施例９および１０で製造したコンポーネン
ト３画分をポリアクリルアミド電気泳動で分析した結果
を図９に示した。図中、レーン１が実施例９で得たコン
ポーネント３画分であり、レーン２が実施例１０で得た
コンポーネント３画分である。
分の分析＞実施例９および１０で製造したコンポーネン
ト３画分をポリアクリルアミド電気泳動で分析した結果
を図９に示した。図中、レーン１が実施例９で得たコン
ポーネント３画分であり、レーン２が実施例１０で得た
コンポーネント３画分である。
【００２５】実施例１２ ＜中性ホエーからのコンポーネント３の精製例＞これま
での実施例では酸性ホエーからのコンポーネント３の精
製例のみを示したが、この例では中性ホエーからも同様
な方法でコンポーネント３を精製できることを示す。中
性ホエーを用い実施例９と同様な方法で処理して得たコ
ンポーネント３画分のポリアクリルアミドゲル電気泳動
での分析結果を図１０に示す。図から明らかなように、
得られたコンポーネント３画分の純度は、中性ホエーか
らの場合も酸性ホエーからの場合とほぼ同様であった。
での実施例では酸性ホエーからのコンポーネント３の精
製例のみを示したが、この例では中性ホエーからも同様
な方法でコンポーネント３を精製できることを示す。中
性ホエーを用い実施例９と同様な方法で処理して得たコ
ンポーネント３画分のポリアクリルアミドゲル電気泳動
での分析結果を図１０に示す。図から明らかなように、
得られたコンポーネント３画分の純度は、中性ホエーか
らの場合も酸性ホエーからの場合とほぼ同様であった。
【００２６】
【発明の効果】本発明によって、ホエー中のコンポーネ
ント３を主要成分とする画分を試薬等を殆ど用いずに、
物理的な方法のみで高度に精製する実用的な方法が提供
される。コンポーネント３、すなわちラクトフォリンは
非常に高い乳化性があることがすでに分かっているが、
このものを本発明によって初めて経済的に製造すること
が可能となった。
ント３を主要成分とする画分を試薬等を殆ど用いずに、
物理的な方法のみで高度に精製する実用的な方法が提供
される。コンポーネント３、すなわちラクトフォリンは
非常に高い乳化性があることがすでに分かっているが、
このものを本発明によって初めて経済的に製造すること
が可能となった。
【図１】 実施例１の結果を示す電気泳動写真である。
【図２】 実施例２の結果を示す電気泳動写真である。
【図３】 実施例３の結果を示す電気泳動写真である。
【図４】 実施例４の結果を示す電気泳動写真である。
【図５】 実施例５の結果を示す電気泳動写真である。
【図６】 実施例６の結果を示す電気泳動写真である。
【図７】 実施例７の結果を示す電気泳動写真である。
【図８】 実施例８の結果を示す電気泳動写真である。
【図９】 実施例１１の結果を示す電気泳動写真であ
る。
る。
【図１０】 実施例１２の結果を示す電気泳動写真であ
る。
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 菅野 長右エ門 栃木県宇都宮市下平出町1023−２ (72)発明者 司城 不二 北海道札幌郡広島町輪厚465−１番地 よ つ葉乳業株式会社リサーチセンター内
Claims (4)
- 【請求項１】 牛乳プロテオースペプトンのコンポーネ
ント３を透過せず、他のホエータンパク質を透過する分
画分子量の限外濾過膜を用いてホエーを濃縮及び透析す
ることを特徴とする牛乳プロテオースペプトンのコンポ
ーネント３の精製法。 - 【請求項２】 限外濾過膜が分画分子量５万以上５０万
以下のものである請求項１記載の精製法。 - 【請求項３】 分画分子量１万以上１００万以下の限外
濾過膜を用いてホエーを透析した後、濃縮液を７０〜１
００℃の温度で１０〜６０分間加熱処理し、あるいはこ
れと同等の加熱変性を引き起こす、より高温で短時間の
加熱処理を実施し、牛乳プロテオースペプトンのコンポ
ーネント３以外のホエータンパク質を凝集させ、除去す
ることを特徴とする牛乳プロテオースペプトンのコンポ
ーネント３の精製法。 - 【請求項４】 加熱処理の前または後にｐＨを３．０以
上５．０未満に調整した後、コンポーネント３以外のホ
エータンパク質を凝集させる請求項３記載の精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29055195A JP3759984B2 (ja) | 1995-10-13 | 1995-10-13 | 牛乳プロテオースペプトンのコンポーネント３の精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29055195A JP3759984B2 (ja) | 1995-10-13 | 1995-10-13 | 牛乳プロテオースペプトンのコンポーネント３の精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09110896A true JPH09110896A (ja) | 1997-04-28 |
| JP3759984B2 JP3759984B2 (ja) | 2006-03-29 |
Family
ID=17757501
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29055195A Expired - Lifetime JP3759984B2 (ja) | 1995-10-13 | 1995-10-13 | 牛乳プロテオースペプトンのコンポーネント３の精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3759984B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002028413A1 (en) * | 2000-10-05 | 2002-04-11 | New Zealand Dairy Board | Bone health compositions derived from milk |
| JP2005506316A (ja) * | 2001-07-13 | 2005-03-03 | ピエール ジュアン バイオテクノロジーズ エス．エー | 活性型ＴＧＦ−βが濃縮されたタンパク質画分を得る方法、タンパク質画分および治療的適用 |
| EP1690551A3 (en) * | 2005-02-10 | 2006-10-18 | Sindan Pharma Srl | Method of purifying a surfactant by ultrafiltration |
| WO2006084902A3 (en) * | 2005-02-10 | 2006-10-26 | Sindan Pharma Srl | Method of purifying a surfactant by ultrafiltration |
| CN108982869A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-12-11 | 山西大学 | 一种检测舒血宁注射液中痕量蛋白质的方法 |
| WO2020090357A1 (ja) * | 2018-10-31 | 2020-05-07 | 公益財団法人野口研究所 | Ｏ結合型糖ペプチドの製造方法 |
| CN113260260A (zh) * | 2018-12-20 | 2021-08-13 | 雀巢产品有限公司 | 确定和量化䏡蛋白胨含量和/或β-酪蛋白含量以及具有降低的β-酪蛋白衍生的䏡蛋白胨含量的营养组合物 |
-
1995
- 1995-10-13 JP JP29055195A patent/JP3759984B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002028413A1 (en) * | 2000-10-05 | 2002-04-11 | New Zealand Dairy Board | Bone health compositions derived from milk |
| JP2004510742A (ja) * | 2000-10-05 | 2004-04-08 | ニュージーランド デアリー ボード | 乳汁から誘導された骨の健康用組成物 |
| JP2005506316A (ja) * | 2001-07-13 | 2005-03-03 | ピエール ジュアン バイオテクノロジーズ エス．エー | 活性型ＴＧＦ−βが濃縮されたタンパク質画分を得る方法、タンパク質画分および治療的適用 |
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| WO2006084902A3 (en) * | 2005-02-10 | 2006-10-26 | Sindan Pharma Srl | Method of purifying a surfactant by ultrafiltration |
| US8398860B2 (en) | 2005-02-10 | 2013-03-19 | Sindan Pharma Srl | Method of purifying a surfactant by ultrafiltration |
| CN108982869A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-12-11 | 山西大学 | 一种检测舒血宁注射液中痕量蛋白质的方法 |
| WO2020090357A1 (ja) * | 2018-10-31 | 2020-05-07 | 公益財団法人野口研究所 | Ｏ結合型糖ペプチドの製造方法 |
| CN113260260A (zh) * | 2018-12-20 | 2021-08-13 | 雀巢产品有限公司 | 确定和量化䏡蛋白胨含量和/或β-酪蛋白含量以及具有降低的β-酪蛋白衍生的䏡蛋白胨含量的营养组合物 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3759984B2 (ja) | 2006-03-29 |
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