JPH09157182A - 新規な潰瘍性大腸炎治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 哺乳動物のＩＬ−１受容体、その細胞外部分
からなる可溶性断片またはその断片を有効成分とする潰
瘍性大腸炎治療剤を提供する。 【解決手段】 本発明は、哺乳動物のＩＬ−１受容体、
その細胞外部分からなる可溶性断片またはその断片を有
効成分とする潰瘍性大腸炎治療剤に関する。本発明の潰
瘍性大腸炎治療剤は、大腸炎に伴う腸管の短縮に対して
抑制作用があり、潰瘍性大腸炎患者の病状の改善に有効
である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、潰瘍性大腸炎を予
防及び治療する薬剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】潰瘍性大腸炎は、下痢、下血、病変部位
のびらん及び腸管の収縮などの症状によって特徴づけら
れる原因不明の特発性炎症性腸疾患である。また、本疾
病においては、症例の多くが慢性化し、血便などの臨床
症状が認められる活動期と臨床症状が一見消失する非活
動期とを繰り返す事が知られている。本疾病は、近年の
食生活を始めとする生活環境の欧米化に伴い、年々増加
する傾向にある。しかしながら、今までのところ充分な
治療法は確立しておらず、重症例では最終的に外科的療
法に頼らざるを得ないのが現状であり、本邦では厚生省
により難病の指定を受けている。保存的療法としては、
軽症、中等症ではサラゾスルファピリジンとステロイド
剤をそれぞれ経口剤、坐剤あるいは注腸剤として投与す
る方法がある。重症例では適切な全身管理のもとにステ
ロイドを静脈内に大量投与する方法が行われている（佐
々木巌ら，医薬ジャーナル，ｖｏｌ．２８，ｐ３７−４
１，（１９９２））。

【０００３】しかしながら、サラゾスルファピリジンに
は悪心、頭痛、発熱、発疹、溶血性貧血、表皮剥脱、顆
粒球減少、線維性肺胞炎、頭痛、膵炎及び男子不妊症な
どの副作用があり（Ａｌｌｅｇａｙｅｒら，Ｇａｓｔｒ
ｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，
ｖｏｌ．２１，ｐ６４３−６５８，（１９９２））、ス
テロイド剤についても様々な重篤な副作用が知られてい
る（柏崎禎夫ら，総合臨床，ｖｏｌ．４３，ｐ１７２５
−１７２９，（１９９４））。既存の療法は潰瘍性大腸
炎の治療剤として充分とはいえず、従来の治療薬よりも
さらに効果が優れ、かつ、安全性の高い治療薬が求めら
れている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の課題
は潰瘍性大腸炎治療に対して優れた効果を有し、安全性
の高い新たな治療薬として用いることのできるタンパク
質を提供することである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は哺乳動物のイン
ターロイキン１受容体又は生理活性部分を包含するその
断片を有効成分とする潰瘍性大腸炎治療剤に関する。本
発明は、インターロイキン１受容体の断片が可溶性断片
である潰瘍性大腸炎治療剤に関する。本発明は、インタ
ーロイキン１受容体又は生理活性部分を包含するその断
片がヒトのインターロイキン１受容体又はその断片であ
る潰瘍性大腸炎治療剤に関する。本発明は、ヒトのイン
ターロイキン１受容体の可溶性断片がヒトのＩ型インタ
ーロイキン１受容体の可溶性断片である潰瘍性大腸炎治
療剤に関する。発発明は、ヒトＩ型インターロイキン１
受容体の可溶性断片が配列表配列番号１の１番目から３
１２番目のアミノ酸よりなるタンパク質である潰瘍性大
腸炎治療剤に関する。また、本発明は、哺乳動物のイン
ターロイキン１受容体又は生理活性部分を包含するその
断片を有効成分とする潰瘍性大腸炎治療剤を製造するた
めの、哺乳動物のインターロイキン１受容体又は生理活
性部分を包含するその断片の使用に関する。さらに、本
発明は哺乳動物のインターロイキン１受容体又は生理活
性部分を包含するその断片の有効量を潰瘍性大腸炎患者
に投与することからなる潰瘍性大腸炎を治療する方法に
も関する。

【０００６】インターロイキン１（以下、ｉｎｔｅｒｌ
ｅｕｋｉｎ−１：ＩＬ−１と略すこともある。）は、非
常に多くの細胞に対して様々な活性を示し、急性炎症反
応以外にも生体の恒常性を含む種々の反応において重要
な役割を果たしていることが明らかにされている（Ｏｐ
ｐｅｎｈｅｉｍ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ Ｔｏｄａｙ ｖｏｌ．７，ｐ．４５−５６，１９８
６）。

【０００７】１９８４年、マウスのＩＬ−１のｃＤＮＡ
がクローニングされて以来（Ｌｏｍｅｄｉｃｏ，Ｐ．
Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ， ｖｏｌ．３１２，
ｐ．４５８−４６７，１９８４）、ヒト、ウサギ、ラッ
ト ＩＬ−１のｃＤＮＡがクローニングされ、その構造
が明らかにされた。ＩＬ−１は、約２５０個のアミノ酸
から成り、成熟分子の分子量は、１７．５ｋＤ、糖が付
いていない単純蛋白質である。ＩＬ−１は、通常の分泌
蛋白質とは異なり、シグナルペプチドを欠いているた
め、細胞外への放出機構は、十分に明らかにされていな
い。いずれの動物種においてもＩＬ−１には二つの分子
種が存在することが明らかになり、アルファー型（α
型）及びベータ型（β型）に分類される。ＩＬ−１ α
とＩＬ−１ β間でのアミノ酸配列における相同性は約
２５％しかないが、動物種が異なっていても、同型のＩ
Ｌ−１間では、６０−７０％と相同性が高い。ＩＬ−１
αとＩＬ−１ βは、同じレセプターに結合し、ほぼ
同じような生物活性を示す。

【０００８】ＩＬ−１は、単球、マクロファージ及びそ
の類縁細胞（ランゲルハンス細胞等）が細菌、エンドト
キシン（ＬＰＳ）、補体結合免疫複合体、補体成分（Ｃ
３ａ，Ｃ５ａ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、腫瘍壊
死因子（ＴＮＦ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、トラ
ンスフォーミング増殖因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ
ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ−ｂ（ＴＧＦ−ｂ））、
ウイルスなど様々な刺激により産生される。また、ケラ
チノサイト（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）、ＮＫ細胞、
Ｔ細胞、Ｂ細胞、血管内皮細胞、メサンギウム（ｍｅｓ
ａｎｇｉｕｍ）細胞、滑膜細胞、アストログリア（ａｓ
ｔｒｏｇｌｉａ）、好中球、繊維芽細胞等もＩＬ−１を
産生する。従って、きわめて多くの細胞がＩＬ−１を産
生しており、炎症時と非炎症時におけるＩＬ−１産生細
胞も異なっている。

【０００９】一方、潰瘍性大腸炎の病態の増悪化にＩＬ
−１が深く関与していると考えられている。活動期の潰
瘍性大腸炎患者の生検粘膜組織においては、非活動期の
生検粘膜組織と比較して、ＩＬ−１のｍＲＮＡの検出率
が有意に高いことが報告されている（Ｉｓａａｃｓら，
Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１０３，
ｐ１５８７−１５９５，（１９９２））。また、活動期
の潰瘍性大腸炎患者の生検粘膜組織から得たマクロファ
ージを培養した場合、非活動期の組織から得たマクロフ
ァージを培養した場合と比較して、培養液中へのＩＬ−
１の放出量が高いことが固相酵素免疫測定法を用いた検
討により明らかとなっており、活動期の潰瘍性大腸炎患
者のマクロファージのＩＬ−１産生能が亢進しているこ
とが示されている（Ｍａｈｉｄａら，Ｇｕｔ，ｖｏｌ．
３０，ｐ８３５−８３８，（１９８９））。すなわち、
ＩＬ−１が免疫応答に加え、炎症反応に密接に関与して
いることから、このような活動期の潰瘍性大腸炎患者に
おけるＩＬ−１産生能の亢進が、潰瘍性大腸炎の病態の
増悪化に深く関与していると考えられおり、過剰に産生
されたＩＬ−１の活性を阻害することで潰瘍性大腸炎を
治療できる可能性が示唆されている（Ｄｉｎａｒｅｌｌ
ｏら，ＴｉＰＳ，ｖｏｌ．１４，ｐ１５５−１５９，
（１９９３））。

【００１０】ＩＬ−１の活性阻害剤としてはＩＬ−１受
容体アンタゴニスト（以下、ＩＬ−１ＲＡと略記するこ
ともある。）、抗ＩＬ−１抗体及びＩＬ−１受容体（以
下、ＩＬ−１Ｒと略記することもある。）などが候補に
挙げられる。このうちＩＬ−１ＲＡに関しては、Ｃｏｍ
ｉｎｅｌｌｉら（Ｇａｓ ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇ
ｙ，ｖｏｌ．１０３，ｐ５−７１，（１９９２））、Ｔ
ｈｏｍａｓら（Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ ａｃｔｉｏｎ
ｓ，ｖｏｌ．３４，ｐ１８７−１９０，（１９９
１））、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（Ｅｉｃｏｓａｎｏｉ
ｄｓ，ｖｏｌ．５，ｐ１２１−１２５，（１９９２））
及びＭｃＣａｌｌら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇ
ｙ，ｖｏｌ．１０６，ｐ９６０−９７２，（１９９
４））により、潰瘍性大腸炎動物モデルに対する治療効
果が報告されている。一方、抗ＩＬ−１抗体及びＩＬ−
１Ｒについては、ＩＬ−１を特異的に阻害することより
ＩＬ−１を原因と考えられる潰瘍性大腸炎に対し有効に
作用するであろうと仮定されてはいたものの、未だかつ
て実際には確認されていない（Ｓａｒｔｏｒ，Ｇａｓｔ
ｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１０６，ｐ．５３
３−５３９，（１９９４））。

【００１１】このＩＬ−１ＲＡ、抗ＩＬ−１抗体及びＩ
Ｌ−１Ｒの３者のうち、ＩＬ−１ＲＡは生体内の組織中
の細胞表面上のＩＬ−１ＲにＩＬ−１と競合的に結合す
ることで、ＩＬ−１の活性を阻害するが、抗ＩＬ−１抗
体及びＩＬ−１Ｒは組織中のＩＬ−１と直接結合するこ
とで、ＩＬ−１の活性を阻害する（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ
ら，Ｂｌｏｏｄ Ｐｕｒｉｆ，ｖｏｌ．１１，ｐ１１８
−１２７，（１９９３））。細胞表面のＩＬ−１Ｒは生
体中のほとんどの臓器に存在することから（Ｄｉｎａｒ
ｅｌｌｏ，Ｂｌｏｏｄ，ｖｏｌ．７７，ｐ１６２７−１
６５２，（１９９１））、ＩＬ−１ＲＡを投与した場合
に、他の臓器に捕獲されて、疾患部位に到達し得ない可
能性が考えられる。さらに、このことから他の臓器に対
する副作用等の影響があると考えられる。一方、ＩＬ−
１などのサイトカインは局所で作用することが特徴とさ
れており、この特徴がホルモンと大きく異なる性質であ
ると考えられている（西田淳二，分子血液学，ｐ１６７
−２２７，高久史麿編集，南江堂，（１９９１））。従
って、ＩＬ−１産生能が亢進している部位は疾患部位に
限定されているものと考えられる。このため、抗ＩＬ−
１抗体及びＩＬ−１Ｒを投与した場合には疾患部位に特
異的に作用する事が考えられ、この両者はＩＬ−１ＲＡ
よりも有用性が高いものと考えられる。このうち、抗Ｉ
Ｌ−１抗体には、その由来に関わらず、投与に際して常
に抗原性の問題が生ずるのに対して、ＩＬ−１Ｒはもと
もとヒトの体内に存在しているものであり、抗原性の問
題はほとんどないものと考えられる。

【００１２】このため本発明者らは、ＩＬ−１活性阻害
剤の内、ＩＬ−１Ｒが潰瘍性大腸炎に対して最も治療効
果を有すると考え、鋭意研究した結果、ＩＬ−１Ｒ，そ
の細胞外部分からなるタンパク質である可溶性ＩＬ−１
Ｒ及びＩＬ−１Ｒの少なくとも生理活性を保持する断片
が、潰瘍性大腸炎に対して治療効果を有することを発見
し、本発明を完成した。

【００１３】本発明のＩＬ−１Ｒは、ヒト、サル、マウ
ス等の哺乳動物の体内に存在するものである。特に好ま
しいヒトＩＬ−１Ｒは、配列表配列番号１に示される５
６９個のアミノ酸より成る。好ましくは、その生理活性
を保持する可溶性の断片である。可溶性の断片として
は、ＩＬ−１Ｒの細胞外部分が挙げられる。好ましい可
溶性断片の例は、配列表配列番号１において１番目から
３１９番目のアミノ酸よりなるタンパク質である。更に
好ましくは、１番目から３１２番目のアミノ酸よりなる
可溶性のタンパク質である（以下、ｓｈｕＩＬ−１Ｒと
略記）。このｓｈｕＩＬ−１Ｒは、公知のタンパク質で
あり、特開平５−３３９２９４号に記載されている。Ｉ
Ｌ−１受容体には、分子量約８０，０００のＩ型と、分
子量約６８，０００のＩＩ型の２種類が知られている。
活性型のＩＬ−１のα型、β型のいずれのもの、親和性
の差はあるものの、Ｉ型、ＩＩ型のいずれの受容体にも
結合できることも知られている。Ｉ型ＩＬ−１Ｒ及びそ
の可溶性断片は、哺乳動物の白血球から精製することも
できるが、遺伝子工学的に生産することが適当である。
遺伝子工学的製造法は前記の特許公報に記載されてい
る。本発明のＩＬ−１Ｒは具体的には動物細胞（チャイ
ニーズハムスター卵巣細胞：ＣＨＯ細胞）により産生さ
れているため、生体内と同様に糖鎖を有することから、
抗原性を原因とする副作用がないうえ、薬物量や投与方
法をコントロールし易い。

【００１４】本発明のタンパク質は、潰瘍性大腸炎治療
剤として有用であり、その投与方法としては静脈内及び
筋肉内投与が可能であり、静脈内投与の場合は通常の静
脈内注射の他点滴静注が可能である。本発明の潰瘍性大
腸炎治療剤には、製薬上許容される担体を配合すること
ができる。注射用製剤としては、例えば注射用粉末製剤
とすることができる。その場合は適当な水溶性賦形剤例
えばマンニトール、ショ糖、乳糖、マルトース、ブドウ
糖、フルクトース等の１種または２種以上を加えて水で
溶解し、バイアルまたはアンプルに分注した後凍結乾燥
し密封して製剤とすることができる。臨床における成人
１日当りの投与量は、投与法、患者の年令、体重、症状
等によって異なるが、通常はｓｈｕＩＬ−１Ｒとして１
〜１５ｍｇの範囲である。

【００１５】潰瘍性大腸炎に対する本タンパク質の治療
効果は、デキストラン硫酸誘導マウス潰瘍性大腸炎モデ
ルに対する本タンパク質の治療効果を調べることによっ
て立証される。潰瘍性大腸炎に対する動物モデルには、
ラットの直腸に酢酸やトリニトロベンゼンスルホン酸を
注入して誘発する大腸炎モデル、ウサギに免疫複合体を
静脈内投与させて誘発する大腸炎モデルあるいは本発明
で用いたデキストラン硫酸誘導マウスモデルなどが知ら
れている（黒江清朗ら，医学のあゆみ，ｖｏｌ．１６
６，ｐ６３−６６（１９９３））。このうち、本発明で
用いたデキストラン硫酸誘導マウスモデルはヒトの病態
を反映した最も優れた動物モデルであるとみなされてい
る（Ｏｋａｙａｓｕら，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ
ｇｙ，ｖｏｌ．９８，ｐ６９４−７０２（１９９
２））。

【００１６】ヒトの慢性の潰瘍性大腸炎においては、炎
症、浮腫、筋肉性肥大、線維性組織及び脂質の沈着など
の原因により、結腸が短縮することが知られている（Ｓ
ｕｍｎｅｒら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅ
ａｓｅ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｌｉｔｔｌ
ｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｂｏｓｔｏ
ｎ，ｖｏｌ．ＩＩ，ｐ１３４６−１３６６（１９７
１））。実際の臨床で行われるＸ線検査においても、大
腸の短縮が認められており、診断の重要な指標として用
いられている（白鳥常男ら，潰瘍性大腸炎，南江堂，ｐ
１１９−１４６（１９８４））。また、潰瘍性大腸炎の
病態生理において重要な役割を果たす事が知られている
ロイコトリエンの作用の一つに、平滑筋の収縮があげら
れており、この作用の結果、腸管の短縮が生じ、腸内の
内容物が腸中を移行する時間が短くなることにより、下
痢の症状が増悪すると考えられている（Ｃｉａｎｃｉｏ
ら，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．，ｖｏｌ．６
６４，ｐ２１０−２２１（１９９２））。

【００１７】本発明のタンパク質は種特異性を示し、ヒ
トの可溶性ＩＬ−１Ｒはマウス等の齧歯類では作用しな
いことが明らかとなっている。このため本発明では組換
え型マウス可溶性ＩＬ−１レセプター（タイプＩ）（以
下ｒｍｕＩＬ−１Ｒと略記）を投与して抑制効果を検討
した。その結果から、本タンパク質は、潰瘍性大腸炎発
症抑制効果の１つの指針である腸管の長さの短縮を有意
に抑制した。なお、本発明で用いたデキストラン硫酸誘
導マウスモデルは、潰瘍性大腸炎に対してだけでなく、
同じ炎症性腸疾患に分類されているクローン病に対して
も、その病態を反映した動物モデルであるといわれてい
る（黒江清朗ら，医学のあみ，ｖｏｌ．１６６，ｐ６３
−６６（１９９３））。従って今回得られた成績から、
本発明のタンパク質はクローン病の治療剤としても有効
であると考えられる。従って、本発明は哺乳動物のイン
ターロイキン１受容体又は生理活性部分を包含するその
断片を有効成分とするクローン病治療剤に関する。ま
た、本発明は哺乳動物のインターロイキン１受容体又は
生理活性部分を包含するその断片の有効量をクローン病
患者に投与することからなるクローン病を治療する方法
にも関する。

【００１８】以下に、本発明の効果を、実施例を示して
具体的に説明する。

【実施例】

【００１９】実施例１ デキストラン硫酸誘導マウス潰
瘍性大腸炎モデルによる試験 ９週齢雌性ＣＢＡ／Ｊマウス（日本チャールスリバー社
より購入）に３％デキストラン硫酸（以下ＤＳＳと略
記，分子量：５４，０００，塩水港精糖社より購入）溶
液を飲料水として１０日間自由に摂取させ、潰瘍性大腸
炎モデルを作製した。ＤＳＳ摂取開始から１０日間にわ
たり、１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ及び０．２ｍｇ／ｋｇ／ｄ
ａｙのマウスの可溶性ＩＬ−１Ｒを静脈内に投与した
（以下ＤＳＳ＋ｒｍｕＩＬ−１群と表記）。なお、ｒｍ
ｕＩＬ−１Ｒは特開平５−３３９２９４に記載されてい
る方法に従い、同タンパク質をコードするＤＮＡ配列
（特開平５−３３９２９４の配列表配列番号３）をＣＨ
Ｏ細胞において発現させることにより調製した。なお、
マウスの病態モデルを用いたため、種特異性の関係か
ら、マウスのＩＬ−１Ｒを用いた。ｒｍｕＩＬ−１Ｒを
必要濃度に希釈する際にはリン酸塩緩衝液（以下ＰＢＳ
と略記）を用いた。また、ＤＳＳを摂取させ、ＰＢＳの
みを静脈内に投与したマウス（以下、ＤＳＳ＋ＰＢＳ群
と表記）を疾病発症対照群とし、ＤＳＳを含まない蒸留
水を飲料水として自由に摂取させ、ＰＢＳのみを連日静
脈内投与したマウス（以下、蒸留水＋ＰＢＳ群と表記）
を疾病未発症対照群とした。なお、１群あたり１０匹と
してこの実験を行った。ＤＳＳ飲水開始後１０日目にマ
ウスを屠殺し、大腸の腸管の長さを測定し、大腸炎に伴
って生じる腸管の短縮に対する抑制効果を観察した。結
果を表１に示した。なお、表中の＊＊印は対象のＤＳＳ
＋ＰＢＳ群に対してｐ＜０．０１であることを示す。

【００２０】

【表１】

【００２１】ダネットの多重比較検定法（Ｄｕｎｎｅｔ
ｔｅ ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ ｍｅｔｈｏｄ）（両側検
定）を用いた統計学的処理による評価では、疾病発症対
照群（ＤＳＳ＋ＰＢＳ群）では、疾病未発症群（蒸留水
＋ＰＢＳ群）と比較して腸管の著しい短縮が認められ
た。ＤＳＳ＋ＰＢＳ群と比較してＤＳＳ＋ｒｍｕＩＬ−
１Ｒ群ではこの腸管短縮に対する有意な抑制が認められ
た（Ｐ＜０．０１）。すなわち、ｒｍｕＩＬ−１Ｒの１
ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ，０．２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで大腸
炎に伴う腸管短縮に対する有意な抑制効果が認められ
た。

【００２２】

【発明の効果】本発明は潰瘍性大腸炎の新規な治療剤を
提供するものである。これにより有効かつ副作用の少な
い潰瘍性大腸炎治療方法が可能となる。

【００２３】

【配列表】

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 哺乳動物のインターロイキン１受容体
   又は生理活性部分を包含するその断片を有効成分とする
   潰瘍性大腸炎治療剤。
2. 【請求項２】 インターロイキン１受容体の断片が可
   溶性断片である請求項１に記載の潰瘍性大腸炎治療剤。
3. 【請求項３】 インターロイキン１受容体又は生理活
   性部分を包含するその断片がヒトのインターロイキン１
   受容体又はその断片である請求項１又は２に記載の潰瘍
   性大腸炎治療剤。
4. 【請求項４】 ヒトのインターロイキン１受容体の可
   溶性断片がヒトのＩ型インターロイキン１受容体の可溶
   性断片である請求項３に記載の潰瘍性大腸炎治療剤。
5. 【請求項５】 ヒトのＩ型インターロイキン１受容体
   の可溶性断片が配列表配列番号１の１番目から３１２番
   目のアミノ酸よりなるタンパク質である請求項４に記載
   の潰瘍性大腸炎治療剤。