JPH09173061A - ベクターウイルスを用いた哺乳動物細胞、腫瘍特異的蛋白質、蛋白質の製造方法および薬用組成物 - Google Patents

ベクターウイルスを用いた哺乳動物細胞、腫瘍特異的蛋白質、蛋白質の製造方法および薬用組成物

Info

Publication number
JPH09173061A
JPH09173061A JP8273666A JP27366696A JPH09173061A JP H09173061 A JPH09173061 A JP H09173061A JP 8273666 A JP8273666 A JP 8273666A JP 27366696 A JP27366696 A JP 27366696A JP H09173061 A JPH09173061 A JP H09173061A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
tumor
specific protein
antigen
virus
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP8273666A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard Lathe
レイズ リチャード
Marie-Paule Kieny
キエニー マリーポール
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Transgene SA
Original Assignee
Transgene SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Transgene SA filed Critical Transgene SA
Publication of JPH09173061A publication Critical patent/JPH09173061A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2770/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【課題】 人間もしくは動物の腫瘍を予防もしくは治療
するための薬用組成物を製造する。 【解決手段】 腫瘍特異抗原配列の全部または一部を有
するベクターウイルスを構築し、ほ乳類細胞に感染させ
て、腫瘍に対する細胞性免疫を誘導可能である腫瘍抗原
特異蛋白質を生産、回収し、薬用組成物とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は腫瘍特異抗原のため
の配列の全てもしくは一部を有する組換体ベクターウイ
ルスと、人間もしくは動物における前記腫瘍の予防もし
くは治療におけるその利用、さらに詳しくはベクターウ
イルス、これに感染した哺乳動物細胞、これに由来する
腫瘍特異蛋白質およびその製造法、これらを利用した薬
用組成物ならびにこれらに対応する抗体に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】腫瘍細胞は、自然のものであるかウイル
スによって誘発されたものであるかに関係なく、それら
の表面に新しい抗原を有することがある（１）。腫瘍特
異抗原（Ｔ抗原）は既にヒト癌腫を診断（２）および視
覚化（３）するために用いられている。
【０００３】より新しくは特定の抗腫瘍療法における標
的としてのこれらの使用が着想された。抗Ｔ抗体の投与
は、自由型でも毒素もしくは放射性同位元素に結合した
型でも、いくつかの臨床例の治療において既に望みのあ
る結果をもたらしている（４）。
【０００４】さらに、Ｔ抗原を発現する死細胞の接種(5
-7) 、抗Ｔ免疫グロブリンの可変部に対する抗イディオ
タイプ抗体の誘発(8-9) もしくはＴ抗原自体の注入(10)
等の異なったアプローチに従って、Ｔ抗原に対する宿主
特異性免疫反応を刺激するのを試みることも可能であ
る。これらの実験は、入手可能な抗原の量により制限さ
れ、また抗腫瘍免疫において特に重要な細胞型免疫反応
には抗原と宿主の組織適合性決定基とを同時に供給する
ことが要求されるという事実によって制限される(11)。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は生きた組換体
ウイルスによる、生体内で抗腫瘍免疫を誘発することの
できるＴ抗原もしくはその重要部分の発現に関するもの
である。実験モデルとして使用され、実施例において詳
述されるＴ抗原はポリオーマウイルス（ＰＹ）によって
形質転換されたラット細胞表面上に出現するものである
(12-14) 。
【０００６】ポリオーマウイルスは齧歯類に数タイプの
腫瘍を誘発する。腫瘍の誘発はウイルスＤＮＡの宿主ゲ
ノム内への組込みおよびウイルスの初期遺伝子の発現を
伴なう(15-17) 。ＰＹで形質転換された死細胞を齧歯類
に接種すると、ＰＹにより誘発された腫瘍細胞の試験接
種に対して免疫を誘発させることが可能となる(12-13)
。しかしながら、腫瘍特異移植抗原の存在と、ＰＹウ
イルスゲノムの初期領域によってその合成が制御される
Ｔ抗原と腫瘍特異移植抗原との関係はまだ明確に立証さ
れていない。この研究は、ＰＹゲノムの初期領域が分子
量によって「ラージＴ：ＬＴ」、「ミドルＴ：ＭＴ」お
よび「スモールＴ：ＳＴ」と呼ばれる３つの別の蛋白質
を同時にコードするものであり(17)、これら３つの抗原
は同一のＮ末端配列を有し、同一のポリクローナル抗体
によって認識されるという事実によって複雑化されてい
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】実施例に記載されるよう
に、これら３つのＴ抗原はそれらの役割および個々の能
力を正確に把握するために、個別にクローン化し発現さ
せた。
【０００８】外来抗原のためのクローニングおよび発現
ベクターとしてのワクシニアウイルスの使用は既に記載
されている(18-19) 。非定型(heterologous)ウイルスも
しくは寄生体(parasites) の抗体を発現する組換体ウイ
ルスは対応する病原体に対して動物を免疫するために使
用されている（参考文献20の概論参照）。組換体ワクシ
ニアウイルスによって発現された抗原は感染した細胞の
表面上に適当な方法で表出され、細胞型免疫反応の誘発
を可能にする(21-24) 。このことは、腫瘍細胞の除去が
細胞免疫を伴うということが知られている(25,26) た
め、特に有利である。
【０００９】本発明はＴ抗原と称される腫瘍特異蛋白質
の必須領域をコードするＤＮＡ配列のための発現ベクタ
ーとしてのウイルスの使用に関するものである。
【００１０】「腫瘍特異蛋白質」とは自然腫瘍に特異的
であって正常成体組織には不在の抗原もしくは腫瘍ウイ
ルスによってコードされる抗原であって、前記腫瘍の原
因であるものを意味する。
【００１１】前記蛋白質の「必須領域」とは抗腫瘍免疫
の誘発もしくは前記腫瘍を退行させることのできる機構
の誘発を可能にする蛋白質配列部分を意味する。
【００１２】ベクターウイルスとしてはワクシニアウイ
ルスが好ましいが、特にヘルペス科のウイルスやアデノ
ウイルスのような他のウイルスを使用することもでき
る。
【００１３】このウイルスはより高級な細胞中おけるＴ
蛋白質の発現に必要な全ての範囲の要素を含むことがで
きる。これには特にベクターウイルスのためのプロモー
ターを含ませることができる。例えばワクシニアの場合
には7.5 Ｋd の蛋白質が使用される。プロモーター／Ｔ
コーディング配列アセンブリはウイルスの非必須遺伝子
内に挿入することができる。例えば、ワクチンの場合に
はチミジンキナーゼ（ＴＫ）のための遺伝子内に挿入す
ることによって、ＴＫ- 組換体ウイルスが容易に選択で
きるようになる。
【００１４】本発明はまた上述のウイルスに感染したよ
り高級な細胞に関し、さらにこれらの細胞を原料とす
る、腫瘍特異蛋白質の必須領域を有することを特徴とす
るＴ抗原の製造法に関する。
【００１５】細胞およびウイルスを培養するための条件
は当業者に知られており、使用される細胞およびウイル
スによって変化する。蛋白質を分離するための方法につ
いても同様である。蛋白質の分離は様々な精製度で行な
うことができる。
【００１６】さらに、本発明は活性成分として本発明の
ウイルスもしくは上述の特異蛋白質を含んだ、Ｔ抗原を
用いて腫瘍を予防もしくは治療するための薬用組成物に
関する。
【００１７】
【発明の実施の形態】本発明の一実施態様によれば、Ｔ
抗原を発現する生きたウイルスが人間もしくは動物に接
種される。
【００１８】本発明の別の実施態様によれば、組換体ウ
イルスに感染した細胞の抽出物もしくはこれらの抽出物
から得た完全に精製されたＴ抗原あるいは表面にＴ抗原
分子を有する死んだ組換体ウイルス自身を含む薬用組成
物が人間もしくは動物に注射される。
【００１９】本発明の薬用組成物は人間もしくは動物に
注射できるような形状とすることが好ましい。
【００２０】これらの薬用組成物はワクチンおよび蛋白
質治療の分野において公知の方法で製造することができ
る。
【００２１】投与できる量は広範囲で変化し、特に予防
もしくは治療すべき腫瘍、患者の状態および医師によっ
て査定される他のパラメーターに依存する。
【００２２】また、本発明はＴ抗原もしくはその実質的
な部分に対応する抗体に関し、さらにこれらの抗体もし
くはＴ抗原自体の診断剤としての使用に関する。これら
の分子は当業者に公知の方法に従って標識することがで
きる。
【００２３】
【実施例】以下の実施例は、ラット腫瘍細胞と腫瘍産性
の原因となるポリオーマウイルスＰＹによってコードさ
れたＴ抗原とからなる動物モデルにおいて本発明の基体
概念を説明するものである。しかしながら、正常成体組
織に不在の他のいかなる腫瘍特異抗原を用いても同様の
結果が得られること、およびこれらの異なったＴ抗原も
本発明の一部を形成することは明らかである。
【００２４】本発明のプロセスにおいて標的として用い
ることのできる他のＴ抗原としては結腸直腸癌腫，黒
腫，腎臓癌，神経芽細胞腫，膀胱癌腫，乳癌腫，リンパ
腫および内分泌腺腫に特異的なＴ抗原を挙げることがで
きる。
【００２５】本発明において標的として用いることので
きる腫瘍抗原は発現が腫瘍素質内において変化する宿主
成分もしくは、より一般的には、細胞を癌細胞に形質転
換する役割を果たす、特にパピローマもしくはポリオー
マ等のレトロウイルスもしくはパポーバウイルスのよう
なウイルスによってコードされた抗原とすることができ
る。
【００２６】実施例１ 各々ＰＹウイルスのＴ抗原のうちの１つを発現する３つ
の組換体ワクシニアウイルスの形成。
【００２７】第１図（参考文献17に基づいて補正したも
の）はPYDNA の初期領域の構造を示し、重複する３つの
遺伝子ＬＴ，ＭＴ，およびＳＴと特にそれらに共通なＮ
ー末端領域の対応部分を表わすものである。ＰＹ中の転
写開始位はTATAで示され、翻訳開始および終了信号はＡ
ＴＧおよびＴＧＡでそれぞれ示され。イントロンおよび
ポリアデニル化位の位置も示されている。
【００２８】ＰＹウイルスの３つのＴ抗原のためのコー
ディング配列は既にインビトロにおける切除によってイ
ントロンを除去した後にクローン化されており(27-28)
、プラスミドp ＰＹーＬＴ１，p ＰＹーＭＴ１，p Ｔ
ＹーＳＴ１が得られている(28)。これらのコーディング
配列は一端をＢglＩ、他端をＬＴにおいてはＨind Ｉ
Ｉ、ＭＴにおいてはＥcoＲＩ、ＳＴにおいてはＰvuＩＩ
で消化させることによって回収した。ＢglＩ端は一重鎖
合成アダプター(42)： ５′ーd.GATCTGG ー３′ を用いてＢamＨＩ位に適合するようにした。このように
処理した３つのＤＮＡセグメントをp ＴＧ186 ポリベク
ターのＢamＨＩーＳmaＩ位間、ＢamＨＩーＥcoＲＩ位間
およびＢamＨＩーＳmaＩ位間にそれぞれ導入した（第２
図）。このp ＴＧ186 ポリベクターは、ワクチンのＴＫ
遺伝子内に挿入されるワクシニアウイルスの7.5 Ｋ遺伝
子のためのプロモーターの下流のp ＴＧ１ＨーＴＫー7.
5 Ｋベクター(29)にいくつかの制限位を与えるＭ13ＴＧ
131 ポリリンカー(41)の挿入によって得られる。Ｔ抗原
のための３つのコーディング配列およびそれらの翻訳開
始および終了信号は、ワクシニアウイルスのためのプロ
モーターの下流に位置させた後、それぞれワクチンウイ
ルスの非必須遺伝子内に挿入した。以前に記載されたと
おり（２９）、組換えプラスミドを形質導入し、かつ野
生型ウイルスを感染させた細胞における二重組換えを行
った後、Ｔ抗原をコードしている配列がワクシニアウイ
ルスのゲノムに組み込まれていることが発見された。外
来遺伝子を担持する組換体ウイルスは５ーブロモデオキ
シウリジンの存在下でＴＫ- 143 Ｂ細胞中における増殖
により、ＴＫ- 特性によって選択する。
【００２９】Ｔ抗原のためのコーディング配列を組込ん
だ組換体ウイルスはサザン法で同定し、３つの代表的な
ウイルス：VV.PY.LT-H，VV.PY.MT-IおよびVV.PY.ST-Jを
選択した。
【００３０】実施例２ VV-PY 組換体ウイルスによって合成されたＴ抗原の特性
のインビトロ研究。
【００３１】組換体ワクシニアウイルスによって発現さ
れた３つのＴ抗原は生のＰＹＴ抗原に対応する抗体によ
って認識される。
【００３２】螢光抗体を用いて抗原の細胞内局在を調べ
た。すなわち、VV.PY.T 組換体ウイルスに半集密的ハム
スター(BHK 21)細胞を個別に感染させ（0.1 pfu ／細
胞；一晩のインキュベーション）、高度免疫ラット抗血
清、抗Ｔ（RAF no.4 CNRS-Nice(43);1/50 PBS+1%ウシ
血清アルブミン）を続けて適用し、次いで螢光抗ラット
抗体（ヤギ免疫グロブリン、Miles 供給、1/100PBS+1%
ウシ血清アルブミン）を適用したところ、アセトン( 濃
度80%)で固定した細胞中にＴ抗原が認められた。２つの
抗体は各々20分間37℃において吸収させ、次いで未結合
の抗体を除去するために洗浄した。第３図はVV.PY.LT
(A),VV.PY.MT(B),VV.PY.ST(C) に感染した細胞および未
感染の細胞(D) の免疫螢光を示すものである。
【００３３】第３図から明らかなように、予想通り(30,
16) ＬＴ蛋白質は核内のみに位置し、ＳＴ蛋白質は主と
して細胞質内に位置し（第３図Ｃ）、報告されたように
(15,31) ＭＴ蛋白質は主として細胞質内に位置し（第３
図Ｂ）、表面上には位置しない。核周囲領域におけるそ
の弱い、しかし再現可能な検出は他の最近の研究によっ
て示されるように(32-33) ゴルジ装置および他の細胞内
膜との関係を示唆するものである。
【００３４】実施例３ 組換体ウイルスを皮下接種した動物に誘発された免疫反
応の研究。
【００３５】３つのVV-PY 組換体の予防接種能力を査定
するために、これらが抗腫瘍反応を誘発する能力をイン
ビボで測定した。
【００３６】ＰＹで形質転換された同系細胞を皮下接種
したラットでは移植位において急速に腫瘍が発達するこ
とが知られている。この実験モデルは腫瘍の発達を阻止
することのできる免疫反応の誘発を証明することができ
るに違いない。
【００３７】４週齢の雌ラット(Fischer) 群に異なった
組換体ウイルスを皮下接種し（100μｌ中107 pfu の投
与）、12日後に同じ投与量で再接種し、次いで16日目に
完成ＰＹで形質転換した3T3 ラット細胞(PYT-12)を100
μｌ中２×104 個の投与量で試験接種した。既に示唆さ
れたように(28)、３つのＴ抗原の累積効果を証明するた
めに、１つのラット群に対しては３つの組換体ウイルス
を同時に接種した。
【００３８】その結果を表１に示す。
【００３９】観察したワクチン未接種の動物では全て、
形質転換細胞の接種14日以内に腫瘍の発達が検出される
一方、実験期間(42 日間）内には自然退行は認められな
かった。
【００４０】VV.PY.LTおよびVV.PY.MTを予防接種した動
物では小さな腫瘍（直径＞５mm）が発達したが、これら
は急速に退行し、50〜60％の動物においては完全に消滅
した。したがって、VV.PY.LTおよびMTにおいて観察され
た効果は極めて特異的であって、ＢＣＧのそれと類似し
た活動様式を持ち得た(34)極めて良好な免疫源であるワ
クチンウイルスによる免疫系の非特異的な刺激に起因さ
れることはできない。
【００４１】３つの組換体の当時接種は有意な効果をも
たらさなかった。
【００４２】表１ ：VV.PY.T 組換え皮下接種したラットによる腫瘍の拒絶 ワクチン 腫瘍拒絶動物数／接種動物総数 ウイルス 投与後の日数 18日 21日 27日 35日 0/4 0/4 0/4 0/4 VV.PY.ST 0/7 0/7 0/7 0/7 VV.PY.MT 0/10 1/10 3/10 6/10 VV.PY.LT 0/10 0/10 2/10 5/10 VV.PY.LT 2/4 2/4 1/4 1/4* +VV.PY.MT +VV.PY.ST 注：＊１サンプルにおいては挑戦後35日までい かなる腫瘍の発達も検出できなかった。
【００４３】42日後、被験動物を屠殺し、それらの血清
を分析した（表２）。予防接種を行なった全ての動物
は、腫瘍を拒絶することができるか否かに関係なく、ワ
クチンウイルスに対して、およびＰＹによって形質転換
された細胞に対して高い抗体価を有している。
【００４４】したがって、腫瘍の拒絶は循環している抗
体に起因し得るものではなく、他の免疫機構の関与を必
要とするようである。
【００４５】表２ ：予防接種し、投与し、42日後に屠殺した動物の抗体価 ワクチン 腫瘍の直径 抗 体 価＊ ウイルス （mm） ワクチンに対する値 PYで形質転換された 細胞に対する値 （平均） （平均） 15 1.8 13.7 20 6.9 (7.9) 10.2 (12.3) 15 15.9 7.3 5 6.7 18.0 VV.PY.ST 15 253 56.5 10 220 (224) 26.1 (37.0) 15 218 31.6 20 203 33.8 VV.PY.MT ー 227 35.9 ー 258 (243) 32.6 (30.7) ー 266 28.4 10 222 25.9 VV.PY.LT ー 226 11.8 14 226 (243) 21.2 (37.9) ー 227 30.9 ー 295 87.8 VV.PY.LT ー 180 16.0 +VV.PY.MT 15 300 (247) 23.4 (22.8) +VV.PY.ST 3 252 33.9 8 255 17.9 ＊抗体はマイクロタイタープレート上で精製ワクチンウ
イルス（100 μｌ中106pfu ）もしくはPYT ー21細胞懸
濁液(100μｌ中105 細胞）を用いて測定した。結合抗体
はビオチン（Amersham）で標識したヒツジ抗ラットＩg
Ｇ、ストレプタビジンペルオキシダーゼ（streptavidin
e peroxidase）（Amersham）、ELAVIAーR9試薬(Pasteur
-Diagnostic)をこの順に添加することによって検出し
た。492nm の吸収をタイターテックユニスキャンプレー
トリーダー(Titertec-uniscan platereader) を用いて
測定した。抗体価は測定された光学濃度と使用された抗
血清の希釈度との積として得られる。結果は各々３つの
希釈度(1/50,1/250 および1/1250) の平均値である。
【００４６】実施例４ 組換体を皮内予防接触した動物における腫瘍の拒絶。
【００４７】ワクチンウイルスを接種するための他の経
路を試験した。
【００４８】尾の根元を小刀で乱切することによって４
週齢の雌ラット（Fischer ）に精製ウイルス(10 μｌの
２×109 pfu/mlストック）を皮内予防接種した。15日後
に第２の接種を行なった。その４日後、100 μｌ中２×
104 個のPYT ー21細胞を皮下注射することにより、動物
に体する試験接種を行なった。
【００４９】その結果を表３に示す。
【００５０】表３ ：VV.PY.T 組換体を皮内接種したラットによる腫瘍の拒絶 ワクチン 腫瘍拒絶動物数／接種動物総数 ウイルス 投与後の日数 22日 29日 39日 0/4 0/4 0/4 VV.PY.ST 0/4 0/4 0/4 VV.PY.MT 2/8 7/8 8/8 VV.PY.LT 0/8 0/8 5/8 実施例５ 腫瘍にかかった動物のVV.PY.T 組換体ウイルスによる治
療。
【００５１】腫瘍治療用に組換体ウイルスの投与を試み
た。 ＰＹで形質転換した細胞を接種し、腫瘍を発達さ
せた10匹のラットに、12〜16日後、VV.PY.LT組換体を接
種した。腫瘍は第１回目の接種時において２〜３mmの大
きさであった。
【００５２】全ての動物において、腫瘍は直径15mmにな
るまで成長し続けた。次いで２匹の動物においては腫瘍
はかなり退行し（35日目における観察）、完全に消滅し
た。VV.PY.MTおよびVV.PY.STにおいては同様の結果は認
められなかった。これは３タイプのＴ抗原の間の免疫原
性の違いを示唆するものである。
【００５３】本発明の代表的な株の寄託 後にワクシニアウイルス中において組換えることができ
るようにＴ抗原のためのいかなるコーディング配列をも
組込むことのできるベクタープラスミドを1985年6 月20
日に国立微生物培養物収集館(Collection Nationale de
Cultures desMicrobial Cultures）に寄託番号Ｉ458
の下に寄託した。 このp ＭＬ２由来のＥ．コリ（col
i）プラスミドはＥ．コリ中の複製源，βーラクタマー
ゼ遺伝子、およびワクシニアの7.5 Ｋプロモーターとそ
れに続く、Ｔ抗原をコードする配列と交換可能なコーデ
ィング配列（ヒトＩＬ２配列）とによって中断されたワ
クシニアＴＫ遺伝子からなる。
【００５４】参考文献 1. Hellstrom,K.E.,Hellstrom,I.& Brown,J.P.Springer
Semin.Immunopathol.5,127-146(1982).2. Herlyn,M.,B
laszczyk,M.& Koprowski,H.Contr. Oncol.19,160-170
(1984). 3. Begent,R.H.J.Biochim.Biophys.Acta 780,151-166
(1985). 4. Miller,R.A.,Maloney,D.,Warnke,R.,McDougall,R.,W
ood,G.,Kawakami,T.,Dilley,J.,Goris,M.I.& Levi,R.I
n:Hybridomas in Cancer Diagnosis and Treatment,Mit
chell,M.S.& Oettgen,H.F.(eds.),Raven Press,New Yor
k (1982). 5. Gross,L.Cancer Res.3,326-333 (1943). 6. Foley,E.J.Cancer Res.13,835-837 (1953). 7. Prehn,R.T.& Main,J.M.J.Natl.Cancer Inst.18,769-
778 (1957). 8. Lee,V.K.,Harriott,T.G.,Kuchroo,V.K.,Halliday,W.
J.,Hellstrom,I.& Hellstrom,K.E.Proc.Natl.Acad.Sci.
USA 82,6286-6290 (1985). 9. Herlyn,D.,Ross,A.H.& Koprowski,H.Science 232,10
0-102 (1986). 10.Teventhia,S.S.,Flyer,D.C.& Tijan,R.Virology 10
7,13-23 (1980). 11. Zinkernagel,R.M.& Doherty,P.C.Adv.Immunol.27,5
1-177 (1979). 12. Sjogren,H.O.,Hellstrom,I.& Klein,I.Cancer Res.
21,329-337 (1961). 13. Habel,K.proc.Soc.Exp.Biol.Med.106,722-725 (196
1). 14. Ito,Y.,Brocklehurst,J.R.& Dulbecco,R.Proc.Nat
l.Acad.Sci.USA 74,4666-4670 (1977). 15. Basilico,C.Pharmac.Ther.26,235-272 (1984). 16. Griffin.B.E.& Dilworth,S.M.Adv.Cancer Res.39,1
83-268 (1983). 17. Tooze,J.DNA Tumor Viruses,Cold Spring Harbor P
ress,New York (1981). 18. Panicali,D.& Paoletti,E.Proc.Natl.Acad.Sci.USA
79,4927-4931 (1982). 19. Mackett.M.,Smith,G.L.& Moss,B.Proc.Natl.Acad.S
ci.USA 79,7415-7419 (1982). 20. Smith,G.L.,Mackett,M.& Moss,B.Biotechnol.Gene
t.Eng.Rev.2,393-407 (1984). 21. Wiktor,T.J.,MacFarlan,R.I.,Reagan,K.J.,Dietzsc
hold,B.,Curtis,P.J.,Wunner,W.H.,Kieny,M.P.,Lathe,
R.,Lecocq,J.P.,Mackett,M.,Moss,B.& Koprowski,H.Pro
c.Natl.Acad.Sci.USA 81,7194-7198 (1984). 22. Wiktor,T.J.,Kieny,M.P.& Lathe,R.Appl.Virol.2,i
n press (1986). 23. Bennink,J.R.,Yewdell,J.W.,Smith,G.L.,Moller,C.
& Moss,B.Nature 311,578-579 (1984). 24. McMichael,
A.J.,Michie,C.A.,Gotch,F.M.,Smith,G.L.& Moss,B.J.G
en.Virol.67,719-726 (1986). 25. Hellstrom,K.E.& Hellstrom,I.Adv.Cancer Res.12,
167-223 (1969). 26. Heberman,R.B.Adv.Cancer Res.19,207-263 (1974). 27. Treisman,R.,Novak,U.,Favaloro,J.& Kamen,R.Natu
re 292,595-600 (1981). 28. Rassoulzadegan,M.,Cowie,A.,Carr,A.,Glaichenhau
s,N.,Kamen,R.& Cuzin,F.Nature 300,713-718 (1982). 29. Kieny,M.P.,Lathe,R.,Drillien,R.,Spehner,D.,Sko
ry,S.,Schmitt,D.,Wiktor,T.J.,Koprows ki,H.& Lecoc
q,J.P.Nature 213,163-166 (1984). 30. Takemoto,K.K.,Malmgren,R.A.& Habel,K.Virology
28,485-488 (1966). 31. Schaffhausen,B.S.,Dorai,H.,Arakere,G.& Benjami
n,T.L.Molec.Cell.Biol.2,1187-1198 (1982). 32. Zhu,Z.,Veldman,G.M.,Cowie,A.,Carr,A.,Schaffhau
sen,B.& Kamen,R.J.Virol.51,170-180 (1984). 33. Dilworth,S.M.,Hansson,H.A.,Darnfors,C.,Bjursel
l,G.,Streuli,C.H.& Griffin,B.E.EMBO J.5,491-499 (1
986). 34. Old,L.J.,Clarke,D.A.& Benacerraf,B.Nature 184,
291-292 (1959). 35. Dalianis,T.,Ramqvist,T.& Klein,G.Int.J.Cancer
34,403-406 (1984). 36. Sharma,S.,Rodgers,L.,Brandsma,J.,Gething,M.J.&
Sambrook,J.EMBO J.4,1479-1589 (1985). 37. Koprowski,H.,Herlyn,M.,Steplewski,Z.& Sears,H.
F.Science 212,53-56 (1981). 38. Real,F.X.,Mattes,M.J.,Houghton,A.N.,Oettgen,H.
F.,Lloyd,K.O.& Old,L.J.J.Exp.Mde.160,1219-1233 (19
84). 39. Ueda,R.,Shiku,H.,Pfreudschuh,M.,Takahashi,L.,L
i,C.,Whitmore,W.F.,Oettgen,H.F.& Old,L.J.J.Exp.Me
d.150,564-572 (1979). 40. Drebin,J.A.,Stern,D.F.,Link,V.C.,Weinberg,R.A.
& Greene,M.I.Nature 312,545-548 (1984). 41. Kieny,M.P.,Lathe,R.& Lecocq,J.P.Gene 26,91-99
(1983). 42. Lathe,R.,Balland,A.,Kohli,V.& Lecocq,J.P.Gene
20,187-195 (1982). 43. Clertant,P.,Gaudray,P.,May,E.& Cuzin,F.J.Biol.
Chem.259,15196-15203 (1984).
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に用いられるPY DNAの初期領域の構造を
示す模式図
【図２】本発明による組換体ウイルスの製造法を示す模
式図
【図３】本発明による組換体ウイルスに感染した細胞お
よび未感染の細胞の免疫螢光を示す模式図
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/00 9282−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ //(Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 Ｔ抗原と称される腫瘍特異蛋白質の必須
    領域とより高級な細胞中における該蛋白質の発現に必要
    とされる要素とを少なくともコードする非定型ＤＮＡ配
    列を有するポックスウイルス，アデノウイルスおよびヘ
    ルペス科のウイルスからなる群より選ばれたベクターウ
    イルスに感染した哺乳動物細胞。
  2. 【請求項２】 Ｔ抗原と称される腫瘍特異蛋白質の必須
    領域とより高級な細胞中における該蛋白質の発現に必要
    とされる要素とを少なくともコードする非定型ＤＮＡ配
    列を有するポックスウイルス，アデノウイルスおよびヘ
    ルペス科のウイルスからなる群より選ばれたベクターウ
    イルスに感染した哺乳動物細胞を培養し、その細胞抽出
    物から前記蛋白質を回収することからなる腫瘍特異蛋白
    質の製造法。
  3. 【請求項３】 Ｔ抗原と称される腫瘍特異蛋白質の必須
    領域とより高級な細胞中における該蛋白質の発現に必要
    とされる要素とを少なくともコードする非定型ＤＮＡ配
    列を有するポックスウイルス，アデノウイルスおよびヘ
    ルペス科のウイルスからなる群より選ばれたベクターウ
    イルスに感染した哺乳動物細胞を培養して得た細胞抽出
    物から回収された腫瘍特異蛋白質。
  4. 【請求項４】 診断用に用いられることを特徴とする請
    求項３項記載の腫瘍特異蛋白質。
  5. 【請求項５】 標識されていることを特徴とする請求項
    ４記載の腫瘍特異蛋白質。
  6. 【請求項６】 標識されていないことを特徴とする請求
    項４記載の腫瘍特異蛋白質。
  7. 【請求項７】 Ｔ抗原と称される腫瘍特異蛋白質の必須
    領域とより高級な細胞中における該蛋白質の発現に必要
    とされる要素とを少なくともコードする非定型ＤＮＡ配
    列を有するポックスウイルス，アデノウイルスおよびヘ
    ルペス科ウイルスからなる群より選ばれたベクターウイ
    ルスに感染した哺乳動物細胞を培養して得た細胞抽出物
    から回収された少なくとも１つの腫瘍特異蛋白質を治療
    用もしくは予防用活性成分として含む薬用組成物。
  8. 【請求項８】 人間もしくは動物に対する注射による投
    与を可能にするような薬学上許容できるビヒクルを有し
    ていることを特徴とする請求項７記載の薬用組成物。
JP8273666A 1986-08-13 1996-10-16 ベクターウイルスを用いた哺乳動物細胞、腫瘍特異的蛋白質、蛋白質の製造方法および薬用組成物 Pending JPH09173061A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR8611700 1986-08-13
FR8611700A FR2602790B1 (fr) 1986-08-13 1986-08-13 Expression d'un antigene specifique de tumeur par un virus vecteur recombinant et utilisation de celui-ci pour le traitement preventif ou curatif de la tumeur correspondante

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62202579A Division JP2852515B2 (ja) 1986-08-13 1987-08-13 ベクターウイルスおよびベクターウイルスを含む薬用組成物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH09173061A true JPH09173061A (ja) 1997-07-08

Family

ID=9338277

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62202579A Expired - Lifetime JP2852515B2 (ja) 1986-08-13 1987-08-13 ベクターウイルスおよびベクターウイルスを含む薬用組成物
JP8273666A Pending JPH09173061A (ja) 1986-08-13 1996-10-16 ベクターウイルスを用いた哺乳動物細胞、腫瘍特異的蛋白質、蛋白質の製造方法および薬用組成物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62202579A Expired - Lifetime JP2852515B2 (ja) 1986-08-13 1987-08-13 ベクターウイルスおよびベクターウイルスを含む薬用組成物

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP0259212B1 (ja)
JP (2) JP2852515B2 (ja)
AT (1) ATE101648T1 (ja)
AU (1) AU619448B2 (ja)
CA (1) CA1341241C (ja)
DE (1) DE3789082T2 (ja)
DK (1) DK173755B1 (ja)
ES (1) ES2061520T3 (ja)
FR (1) FR2602790B1 (ja)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2222165B (en) * 1988-08-20 1992-06-17 Animal Health Inst Recombinant capripoxvirus
US6465253B1 (en) 1994-09-08 2002-10-15 Genvec, Inc. Vectors and methods for gene transfer to cells
US5846782A (en) 1995-11-28 1998-12-08 Genvec, Inc. Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs
FR2730637B1 (fr) 1995-02-17 1997-03-28 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations
US5770442A (en) * 1995-02-21 1998-06-23 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same
US6127525A (en) * 1995-02-21 2000-10-03 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same
US6783980B2 (en) 1995-06-15 2004-08-31 Crucell Holland B.V. Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy
US6344445B1 (en) 1995-10-19 2002-02-05 Cantab Pharmaceutical Research Limited Herpes virus vectors and their uses
US6884430B1 (en) 1997-02-10 2005-04-26 Aventis Pharma S.A. Formulation of stabilized cationic transfection agent(s) /nucleic acid particles
AU8444798A (en) 1997-06-30 1999-01-25 Centre National De La Recherche Scientifique Improved method for transferring nucleic acid into the striped muscle and combination therefor
US20030017138A1 (en) 1998-07-08 2003-01-23 Menzo Havenga Chimeric adenoviruses
US6929946B1 (en) 1998-11-20 2005-08-16 Crucell Holland B.V. Gene delivery vectors provided with a tissue tropism for smooth muscle cells, and/or endothelial cells
US6913922B1 (en) 1999-05-18 2005-07-05 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US6492169B1 (en) 1999-05-18 2002-12-10 Crucell Holland, B.V. Complementing cell lines
WO2003104467A1 (en) 2002-04-25 2003-12-18 Crucell Holland B.V. Means and methods for the production of adenovirus vectors
FR2799472B1 (fr) 1999-10-07 2004-07-16 Aventis Pharma Sa Preparation d'adenovirus recombinants et de banques adenovirales
JP5610659B2 (ja) 2000-07-21 2014-10-22 ルバンス セラピュティックス インク．Ｒｅｖａｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 多成分生物学的輸送システム
DE60138403D1 (de) 2000-09-26 2009-05-28 Crucell Holland Bv Adenovirale vektoren für die übertragung von genen in zellen der skelettmuskulatur oder myoblasten
FR2829136B1 (fr) 2001-08-29 2006-11-17 Aventis Pharma Sa Derives lipidiques d'aminoglycosides
PT1479985T (pt) 2002-01-17 2017-08-03 Alfa Laval Corp Ab Evaporador submerso compreendendo um permutador de calor de placas e um compartimento cilíndrico onde está disposto o permutador de calor de placas
US7432371B2 (en) 2002-02-07 2008-10-07 Covalent Partners, Llc Nanofilm and membrane compositions
WO2010026537A1 (en) 2008-09-05 2010-03-11 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Novel multimodular assembly useful for intracellular delivery
AU2010206195B2 (en) * 2009-01-20 2016-03-10 Transgene Sa Soluble ICAM-1 as biomarker for prediction of therapeutic response
WO2016075314A1 (fr) 2014-11-13 2016-05-19 Institut National De La Recherche Agronomique Identification de facteurs de transcription de yarrowia lipolytica affectant la production de proteines
FR3028527A1 (fr) 2014-11-13 2016-05-20 Pivert Identification de facteurs de transcription de yarrowia lipolytica
FR3081169B1 (fr) 2018-05-15 2020-06-19 Messenger Biopharma Substitution de la coiffe des arn messagers par deux sequences d'arn introduites a leur extremite 5'

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU570940B2 (en) * 1982-11-30 1988-03-31 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The Process for producing poxvirus recombinants for expression offoreign genes
CA1282721C (en) * 1984-06-04 1991-04-09 Bernard Roizman Herpes simplex virus as a vector
AU623333B2 (en) * 1986-01-27 1992-05-14 Syntro Corporation Attenuated herpesviruses, herpesviruses which include foreign dna encoding an amino acid sequence and vaccine containing same

Also Published As

Publication number Publication date
ATE101648T1 (de) 1994-03-15
DK421687D0 (da) 1987-08-12
DE3789082D1 (de) 1994-03-24
AU7679787A (en) 1988-02-18
ES2061520T3 (es) 1994-12-16
EP0259212A1 (fr) 1988-03-09
CA1341241C (fr) 2001-06-05
FR2602790A1 (fr) 1988-02-19
AU619448B2 (en) 1992-01-30
DK173755B1 (da) 2001-09-10
DK421687A (da) 1988-02-14
DE3789082T2 (de) 1994-09-01
EP0259212B1 (fr) 1994-02-16
JP2852515B2 (ja) 1999-02-03
JPS6349077A (ja) 1988-03-01
FR2602790B1 (fr) 1990-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2852515B2 (ja) ベクターウイルスおよびベクターウイルスを含む薬用組成物
US6007806A (en) Expression of a tumor-specific antigen by a recombinant vector virus and use thereof in preventive or curative treatment of the corresponding tumor
US5744133A (en) Expression of a tumor-specific antigen by a recombinant vector virus and use thereof in preventitive or curative treatment of the corresponding tumor
CA1341435C (en) Recombinant pox virus for immunization against tumor-associated antigens
AU606046B2 (en) Vaccines against melanoma
Bernards et al. Effective tumor immunotherapy directed against an oncogene-encoded product using a vaccinia virus vector.
DE69826661T2 (de) Antitumorale zusammenstellung von immunogene polypetiden mit veränderter zellokalisierung
JP2599350B2 (ja) 膜結合性タンパク質を含有するワクチン類
CA2050304C (fr) Composition pharmaceutique, utile a titre preventif ou curatif contre les tumeurs induites par les papillomavirus
US5770210A (en) Recombinant vaccinia virus expressing human retrovirus gene
Banerjea et al. High-level synthesis of biologically active reovirus protein σ1 in a mammalian expression vector system
JPH06500232A (ja) 自己集合性複製欠陥型ハイブリッドウイルス粒子
HU229051B1 (en) Porcine circovirus vaccine in reconbinant poxvirus
HU220747B1 (hu) Polinukleotid vakcina papillómavírus ellen
JPH11512297A (ja) 免疫化または遺伝子療法用の筋肉特異的調節要素を含有してなるｄｎａ構築物
Tanaka et al. Clustering of antigenic sites recognized by cytotoxic T lymphocyte clones in the amino terminal half of SV40 T antigen
JPH06502989A (ja) 単純ヘルペスウィルスのｖｐ１６のワクチン
PT99313B (pt) Processo para a preparacao de proteinas, de viros recombinantes e de vectores de transferencia uteis para a expressao dessas proteinas
JPH01500161A (ja) Ａｉｄｓの原因ウィルスの糖蛋白質、該糖蛋白質の製造方法及びワクチン
WO1994012617A1 (en) Hepatitis b virus vaccines
CA2067469C (en) Recombinant vaccine against marek's disease
Wang et al. Targeted gene transfer to nigrostriatal neurons in the rat brain by helper virus-free HSV-1 vector particles that contain either a chimeric HSV-1 glycoprotein C-GDNF or a gC-BDNF protein
Dalianis Studies on the polyoma virus tumor-specific transplantation antigen (TSTA)
FI94836C (fi) Menetelmä melanoomaan liittyvän p97-antigeenin antigeenisen sukulaispeptidin tai -proteiinin valmistamiseksi, sekä siinä käyttökelpoiset yhdistelmävirukset, yhdistelmävektorit ja isäntäsolut
Clertant et al. Recombinant polyoma—vaccinia viruses: T antigen expression vectors and anti-tumor immunization agents

Legal Events

Date Code Title Description
A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 19990622