JPH09187294A - 抗菌力測定法及び測定キット - Google Patents
抗菌力測定法及び測定キットInfo
- Publication number
- JPH09187294A JPH09187294A JP1927596A JP1927596A JPH09187294A JP H09187294 A JPH09187294 A JP H09187294A JP 1927596 A JP1927596 A JP 1927596A JP 1927596 A JP1927596 A JP 1927596A JP H09187294 A JPH09187294 A JP H09187294A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydrophobic compound
- compound
- solution
- antibacterial activity
- hydrophobic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 49
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 53
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 45
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims abstract description 19
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 32
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 25
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 abstract description 16
- 239000008272 agar Substances 0.000 abstract description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 5
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 abstract description 4
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 abstract description 3
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 abstract description 3
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 abstract description 3
- -1 cyclodextrin) Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 34
- 102100033830 Amphiphysin Human genes 0.000 description 24
- 101000779845 Homo sapiens Amphiphysin Proteins 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 4
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 2
- 241000079253 Byssochlamys spectabilis Species 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N UNPD130147 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(OC4C(OC(O)C(O)C4O)CO)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 description 2
- OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N alpha-maltohexaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N malto-hexaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N malto-pentaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N maltopentaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- OCAPBUJLXMYKEJ-UHFFFAOYSA-N 1-[biphenyl-4-yl(phenyl)methyl]imidazole Chemical compound C1=NC=CN1C(C=1C=CC(=CC=1)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OCAPBUJLXMYKEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 2-[(2r)-butan-2-yl]-4-[4-[4-[4-[[(2r,4s)-2-(2,4-dichlorophenyl)-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]phenyl]piperazin-1-yl]phenyl]-1,2,4-triazol-3-one Chemical compound O=C1N([C@H](C)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@@H]3O[C@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)Cl)=CC=2)C=C1 VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 244000197813 Camelina sativa Species 0.000 description 1
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001496375 Iris albicans Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001236817 Paecilomyces <Clavicipitaceae> Species 0.000 description 1
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 1
- 241000748245 Villanova Species 0.000 description 1
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960002206 bifonazole Drugs 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229960004130 itraconazole Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 疎水性化合物を有機溶媒（ＤＭＳＯ等）
に溶解し、更に該溶解物を包接性化合物（サイクロデキ
ストリン等）含有溶液にて希釈後、拡散法（ペーパーデ
ィスク法等）により、抗菌力を測定することを特徴とす
る疎水性化合物の抗菌力測定法。 【効果】 従来実用化できなかった疎水性化合物の拡散
法による抗菌力の測定が可能となり、疎水性化合物の抗
菌力評価を簡便に且つ再現性よくしかも正確に行うこと
ができ、ＭＩＣの算出も簡単に行うことができる。
に溶解し、更に該溶解物を包接性化合物（サイクロデキ
ストリン等）含有溶液にて希釈後、拡散法（ペーパーデ
ィスク法等）により、抗菌力を測定することを特徴とす
る疎水性化合物の抗菌力測定法。 【効果】 従来実用化できなかった疎水性化合物の拡散
法による抗菌力の測定が可能となり、疎水性化合物の抗
菌力評価を簡便に且つ再現性よくしかも正確に行うこと
ができ、ＭＩＣの算出も簡単に行うことができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、水にほとんど溶解
しない疎水性化合物の抗菌力の評価を再現性よく行うこ
とが可能な新規な抗菌力測定法及び測定キット及び最小
発育阻止濃度（ＭＩＣ）算出方法に関するものである。
しない疎水性化合物の抗菌力の評価を再現性よく行うこ
とが可能な新規な抗菌力測定法及び測定キット及び最小
発育阻止濃度（ＭＩＣ）算出方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び課題】抗菌性を有する化合物の中には
水に対し難溶性の疎水性化合物が多く発見されている。
難溶性物質の抗菌力の評価方法も生物学的評価法による
ことが一般的である。
水に対し難溶性の疎水性化合物が多く発見されている。
難溶性物質の抗菌力の評価方法も生物学的評価法による
ことが一般的である。
【０００３】生物学的評価法として種々の方法が開発さ
れているが、例えば一般的には、拡散法である円筒平板
法、濾紙法（ペーパーディスク法）及び希釈法である感
受性ディスク法、重層法、最小発育阻止濃度法、比濁法
等（抗生物質大要 第４版東京大学出版会 １９９２）
が用いられ、また、真菌類に関してはアメリカで開発さ
れたＮＣＣＬＳ法（National Committee for Clinical
Laboratory Standard, Villanova, Pa. 1992）及び日本
医真菌学会が提案している液体希釈法（Jpn,J. Med. My
col., Vol. 36, 61-86, 1995）等が挙げられるが、各々
一長一短がある。評価法として再現性があり、簡便性が
高く、多数の試料の評価が短時間で安価に出来る方法が
望まれている。拡散法は、簡便法として一次スクリーニ
ングによく用いられる方法である。
れているが、例えば一般的には、拡散法である円筒平板
法、濾紙法（ペーパーディスク法）及び希釈法である感
受性ディスク法、重層法、最小発育阻止濃度法、比濁法
等（抗生物質大要 第４版東京大学出版会 １９９２）
が用いられ、また、真菌類に関してはアメリカで開発さ
れたＮＣＣＬＳ法（National Committee for Clinical
Laboratory Standard, Villanova, Pa. 1992）及び日本
医真菌学会が提案している液体希釈法（Jpn,J. Med. My
col., Vol. 36, 61-86, 1995）等が挙げられるが、各々
一長一短がある。評価法として再現性があり、簡便性が
高く、多数の試料の評価が短時間で安価に出来る方法が
望まれている。拡散法は、簡便法として一次スクリーニ
ングによく用いられる方法である。
【０００４】ペーパーディスク法は、非常に簡便で多数
の試料を同時に安価で評価できる方法として古くから知
られているが、疎水性化合物の評価方法としては大きな
問題が指摘されていた。即ち、疎水性化合物は溶液に対
する溶解性が低い為、拡散、浸透性を利用した系での評
価が出来にくく、例えばペーパーディスク法を疎水性化
合物に適用した場合、疎水性化合物のペーパーディスク
内及び寒天培地での拡散性が乏しい為、抗菌ゾーンがペ
ーパーディスク近傍に止まり、本来疎水性化合物が有し
ている抗菌力が表示されず、再現性のよい評価方法とは
いい難かった。また、有機溶媒等で溶解すると、溶解
性、拡散性は向上するのであるが、生物学的評価法であ
るが故、溶媒自体が被検微生物に影響し、この方法にお
いても再現性のよい評価を行うことは難しかった。
の試料を同時に安価で評価できる方法として古くから知
られているが、疎水性化合物の評価方法としては大きな
問題が指摘されていた。即ち、疎水性化合物は溶液に対
する溶解性が低い為、拡散、浸透性を利用した系での評
価が出来にくく、例えばペーパーディスク法を疎水性化
合物に適用した場合、疎水性化合物のペーパーディスク
内及び寒天培地での拡散性が乏しい為、抗菌ゾーンがペ
ーパーディスク近傍に止まり、本来疎水性化合物が有し
ている抗菌力が表示されず、再現性のよい評価方法とは
いい難かった。また、有機溶媒等で溶解すると、溶解
性、拡散性は向上するのであるが、生物学的評価法であ
るが故、溶媒自体が被検微生物に影響し、この方法にお
いても再現性のよい評価を行うことは難しかった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ペーパー
ディスク法が簡便法として抗菌性物質の特に一次スクリ
ーニングを行ううえでの重要性に鑑み、従来使用できな
かった疎水性化合物にも充分に適用できる方法を新たに
開発するため、各方面から鋭意研究を行った。そして、
本発明者らは、疎水性化合物を溶解する際一旦少量の有
機溶媒に溶かした後、大容量の包接性物質を含有する溶
液で希釈し、更に該希釈液を疎水性化合物が一定量にな
る様にペーパーディスクに吸着、濃縮させ、ペーパーデ
ィスク法で評価すると、標準法と比べて再現性よく安定
した方法となることを見い出し、これらの有用な新知見
に基づき、本発明を完成した。
ディスク法が簡便法として抗菌性物質の特に一次スクリ
ーニングを行ううえでの重要性に鑑み、従来使用できな
かった疎水性化合物にも充分に適用できる方法を新たに
開発するため、各方面から鋭意研究を行った。そして、
本発明者らは、疎水性化合物を溶解する際一旦少量の有
機溶媒に溶かした後、大容量の包接性物質を含有する溶
液で希釈し、更に該希釈液を疎水性化合物が一定量にな
る様にペーパーディスクに吸着、濃縮させ、ペーパーデ
ィスク法で評価すると、標準法と比べて再現性よく安定
した方法となることを見い出し、これらの有用な新知見
に基づき、本発明を完成した。
【０００６】即ち、本発明は疎水性化合物を少量の有機
溶媒で溶解の後、包接性化合物を含む溶液で希釈し、該
溶液にペーパーディスク法を適用する新規な抗菌力評価
法を提供するものである。また、本発明は、当該方法を
用いた新規な抗菌力測定キットを提供するものである。
また、当該測定法及びキットを使用したＭＩＣの算出方
法に関するものである。
溶媒で溶解の後、包接性化合物を含む溶液で希釈し、該
溶液にペーパーディスク法を適用する新規な抗菌力評価
法を提供するものである。また、本発明は、当該方法を
用いた新規な抗菌力測定キットを提供するものである。
また、当該測定法及びキットを使用したＭＩＣの算出方
法に関するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明が適用出来る疎水性化合物
としては、動物、植物の生産物または抽出物、微生物を
培養して得られる生産物及び有機合成によって得られる
物質等あらゆる物質が対象となる。具体的には、アンホ
テリシンＢ、イトラコナゾール、ビフォナゾール、等が
挙げられる。
としては、動物、植物の生産物または抽出物、微生物を
培養して得られる生産物及び有機合成によって得られる
物質等あらゆる物質が対象となる。具体的には、アンホ
テリシンＢ、イトラコナゾール、ビフォナゾール、等が
挙げられる。
【０００８】これ等の疎水性の化合物を溶解する有機溶
媒としては、一般的にはメタノール、エタノール、ジメ
チルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）等が使用出来る。これ
らの有機溶媒は、生物学的評価法において被検生物に直
接的な影響を及ぼす場合もあるので、評価対象物である
疎水性化合物が溶解できる最少量で使用することが望ま
しい。
媒としては、一般的にはメタノール、エタノール、ジメ
チルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）等が使用出来る。これ
らの有機溶媒は、生物学的評価法において被検生物に直
接的な影響を及ぼす場合もあるので、評価対象物である
疎水性化合物が溶解できる最少量で使用することが望ま
しい。
【０００９】包接性化合物としては、包接能のあるもの
であれば何でもよいが、ＣＤ、マルトペンタオース、マ
ルトヘキサオース、サイクロデキストラン等が用いるこ
とが出来る。ペーパーディスクは常法で使用される円形
濾紙でよい。ペーパーディスクを置床する培地は、被検
生物に適合した培地を用ればよいが、被検菌が微生物の
場合、イースト・モルホロジー寒天培地（DIFCO MANUAL
10th Edition, DIFCOLABORATORIES (1984)）、ブイヨ
ン寒天培地、ミューラーヒントン寒天培地、サブローデ
キストロース寒天培地、ＲＰＭＩ１６４０寒天培地
（Ｊ．Ａ．Ｍ．Ａ．，199,519(1967)）等が用いられ
る。
であれば何でもよいが、ＣＤ、マルトペンタオース、マ
ルトヘキサオース、サイクロデキストラン等が用いるこ
とが出来る。ペーパーディスクは常法で使用される円形
濾紙でよい。ペーパーディスクを置床する培地は、被検
生物に適合した培地を用ればよいが、被検菌が微生物の
場合、イースト・モルホロジー寒天培地（DIFCO MANUAL
10th Edition, DIFCOLABORATORIES (1984)）、ブイヨ
ン寒天培地、ミューラーヒントン寒天培地、サブローデ
キストロース寒天培地、ＲＰＭＩ１６４０寒天培地
（Ｊ．Ａ．Ｍ．Ａ．，199,519(1967)）等が用いられ
る。
【００１０】具体的には、疎水性抗真菌剤を例にとって
説明すると、抗真菌剤のｉｎ ｖｉｔｒｏの評価試験法
としては、アメリカの基準法の１つとしてＮＣＣＬＳ法
が提案されているし、また、日本医真菌学会より抗真菌
剤感受性試験法等が提案されている。これ等はいずれも
液体希釈法である為簡便性を欠いていることについては
前述した通りである。
説明すると、抗真菌剤のｉｎ ｖｉｔｒｏの評価試験法
としては、アメリカの基準法の１つとしてＮＣＣＬＳ法
が提案されているし、また、日本医真菌学会より抗真菌
剤感受性試験法等が提案されている。これ等はいずれも
液体希釈法である為簡便性を欠いていることについては
前述した通りである。
【００１１】本発明者らは、代表的な疎水性真菌剤であ
るアンホテリシンＢ（ＡＭＰＨ Ｂ）を評価対象例とし
て用い、種々の方法について検討したが、評価方法とし
ての利点を考慮した上、簡便法として多用されている拡
散法の欠点、具体的にはペーパーディスク法の欠点を改
善することを試みた。鋭意検討した結果、ＡＭＰＨ Ｂ
を先ず少量のＤＭＳＯ、メタノール、エタノール等の有
機溶媒に溶解し更にそれに抗真菌剤の溶解剤として使用
されている硬化ヒマシ油であるＨＣＯ−６０や包接物質
であるサイクロデキストリン等の媒体を用いることによ
り大幅に溶解性の向上がはかれることを見い出した。
るアンホテリシンＢ（ＡＭＰＨ Ｂ）を評価対象例とし
て用い、種々の方法について検討したが、評価方法とし
ての利点を考慮した上、簡便法として多用されている拡
散法の欠点、具体的にはペーパーディスク法の欠点を改
善することを試みた。鋭意検討した結果、ＡＭＰＨ Ｂ
を先ず少量のＤＭＳＯ、メタノール、エタノール等の有
機溶媒に溶解し更にそれに抗真菌剤の溶解剤として使用
されている硬化ヒマシ油であるＨＣＯ−６０や包接物質
であるサイクロデキストリン等の媒体を用いることによ
り大幅に溶解性の向上がはかれることを見い出した。
【００１２】特にサイクロデキストリンがペーパーディ
スク中及び寒天ゲル中でのＡＭＰＨＢの浸透・拡散速度
の増大を促進させることに着目し、検討を行ったとこ
ろ、少量のＤＭＳＯに溶解後、大量のサイクロデキスト
リン溶液で希釈することにより該物質の溶解性及び浸
透、拡散が著しく改善されることを見い出した。包接化
合物にも色々ありサイクロデキストリンの他にもマルト
ペンタオース、マルトヘキサオース、サイクロデキスト
ラン等を使用しても同様の効果が期待できるが、対象と
する疎水性化合物によって適時選択することでよりよい
条件設定が可能である。
スク中及び寒天ゲル中でのＡＭＰＨＢの浸透・拡散速度
の増大を促進させることに着目し、検討を行ったとこ
ろ、少量のＤＭＳＯに溶解後、大量のサイクロデキスト
リン溶液で希釈することにより該物質の溶解性及び浸
透、拡散が著しく改善されることを見い出した。包接化
合物にも色々ありサイクロデキストリンの他にもマルト
ペンタオース、マルトヘキサオース、サイクロデキスト
ラン等を使用しても同様の効果が期待できるが、対象と
する疎水性化合物によって適時選択することでよりよい
条件設定が可能である。
【００１３】本発明において、サイクロデキストリン
（ＣＤ）としては、α−ＣＤ（α）、β−ＣＤ（β）、
γ−ＣＤ（γ）のほか、各種誘導体が適宜使用できる。
それらの誘導体の非限定例としては次のものが挙げられ
る：ヒドロキシプロピル−α−ＣＤ（ＨＰα）、ヒドロ
キシプロピル−β−ＣＤ（ＨＰβ）、ヒドロキシプロピ
ル−γ−ＣＤ（ＨＰγ）、Ｏ−ジメチル−α−ＣＤ（Ｏ
−ｄｉｍｅα）、Ｏ−ジメチル−β−ＣＤ（Ｏ−ｄｉｍ
ｅβ）、Ｌ−ポリβ−ＣＤ（Ｌ−ｐｏｌｙβ）、Ｏ−ト
リメチルβ−ＣＤ（Ｏ−ｔｒｉｍｅβ）その他。これら
のＣＤの内、疎水性化合物との相性により適宜好適なも
のを選択、使用する。
（ＣＤ）としては、α−ＣＤ（α）、β−ＣＤ（β）、
γ−ＣＤ（γ）のほか、各種誘導体が適宜使用できる。
それらの誘導体の非限定例としては次のものが挙げられ
る：ヒドロキシプロピル−α−ＣＤ（ＨＰα）、ヒドロ
キシプロピル−β−ＣＤ（ＨＰβ）、ヒドロキシプロピ
ル−γ−ＣＤ（ＨＰγ）、Ｏ−ジメチル−α−ＣＤ（Ｏ
−ｄｉｍｅα）、Ｏ−ジメチル−β−ＣＤ（Ｏ−ｄｉｍ
ｅβ）、Ｌ−ポリβ−ＣＤ（Ｌ−ｐｏｌｙβ）、Ｏ−ト
リメチルβ−ＣＤ（Ｏ−ｔｒｉｍｅβ）その他。これら
のＣＤの内、疎水性化合物との相性により適宜好適なも
のを選択、使用する。
【００１４】ＡＭＰＨ Ｂの場合、該物質を数ｍｇ／ｍ
ｌになる様ＤＭＳＯに溶解し、２〜２０％のＣＤ水溶液
で２〜１５倍に希釈し、該希釈液をペーパーディスク上
に塗抹濃縮し、一定量をペーパーディスクに吸着させ、
このペーパーディスクを糸状菌、酵母等の力価測定用の
標準菌株を被検菌とし評価をすることにより良好な結果
を得ることが出来る。培地は、被検菌が生育可能な組成
の寒天培地とし、ペーパーディスクを置床し、例えば３
０℃で１〜２日間程度培養し、生じた阻止円を測定すれ
ばよい。
ｌになる様ＤＭＳＯに溶解し、２〜２０％のＣＤ水溶液
で２〜１５倍に希釈し、該希釈液をペーパーディスク上
に塗抹濃縮し、一定量をペーパーディスクに吸着させ、
このペーパーディスクを糸状菌、酵母等の力価測定用の
標準菌株を被検菌とし評価をすることにより良好な結果
を得ることが出来る。培地は、被検菌が生育可能な組成
の寒天培地とし、ペーパーディスクを置床し、例えば３
０℃で１〜２日間程度培養し、生じた阻止円を測定すれ
ばよい。
【００１５】例えばＣＤ溶液としては、ＨＰ−γ−ＣＤ
を１５％（重量／容量）等所定濃度になるように蒸留水
に溶解し、濾過、滅菌してＣＤ溶液を調製する。一方、
ＡＭＰＨ Ｂを例えば１０ｍｇ秤量しＤＭＳＯを１ｍｌ
加え、ｖｏｒｔｅｘして溶解し、ＡＭＰＨ ＢのＤＭＳ
Ｏ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ ＤＭＳＯ）を調製する。この
ようにして調製したＣＤ液（９容量部）にＡＭＰＨ液
（１容量部）を少量ずつ滴下し、ｖｏｒｔｅｘすること
により、ＡＭＰＨのＣＤ溶液を調製する。この溶液１ｍ
ｌに水１ｍｌを加えて２倍希釈液とし、順次希釈液を調
製することができる。
を１５％（重量／容量）等所定濃度になるように蒸留水
に溶解し、濾過、滅菌してＣＤ溶液を調製する。一方、
ＡＭＰＨ Ｂを例えば１０ｍｇ秤量しＤＭＳＯを１ｍｌ
加え、ｖｏｒｔｅｘして溶解し、ＡＭＰＨ ＢのＤＭＳ
Ｏ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ ＤＭＳＯ）を調製する。この
ようにして調製したＣＤ液（９容量部）にＡＭＰＨ液
（１容量部）を少量ずつ滴下し、ｖｏｒｔｅｘすること
により、ＡＭＰＨのＣＤ溶液を調製する。この溶液１ｍ
ｌに水１ｍｌを加えて２倍希釈液とし、順次希釈液を調
製することができる。
【００１６】被検菌プレートは、例えば、サブローデキ
ストロース寒天培地等の培地をオートクレーブした後、
４５℃程度にまで冷却し、被検菌懸濁液（例えば、生理
食塩水に懸濁した被検菌を１×１０4ｃｅｌｌｓ／ｍｌ
となるように調整）を加え、角型シャーレに４０ｍｌ
（１０ｃｍ丸シャーレの場合は２０ｍｌ）ずつ分注して
作製する。あるいは、オートクレーブ処理した培地をシ
ャーレに分注し、冷却、固化した後、例えば被検菌懸濁
液（例えばＯＤ ０．５程度に懸濁したもの）を角型シ
ャーレに１００μｌ（１０ｃｍ丸シャーレの場合は５０
μｌ）塗抹して作製すればよい。
ストロース寒天培地等の培地をオートクレーブした後、
４５℃程度にまで冷却し、被検菌懸濁液（例えば、生理
食塩水に懸濁した被検菌を１×１０4ｃｅｌｌｓ／ｍｌ
となるように調整）を加え、角型シャーレに４０ｍｌ
（１０ｃｍ丸シャーレの場合は２０ｍｌ）ずつ分注して
作製する。あるいは、オートクレーブ処理した培地をシ
ャーレに分注し、冷却、固化した後、例えば被検菌懸濁
液（例えばＯＤ ０．５程度に懸濁したもの）を角型シ
ャーレに１００μｌ（１０ｃｍ丸シャーレの場合は５０
μｌ）塗抹して作製すればよい。
【００１７】一般的に真菌類ではサブローデキストロー
ス寒天培地、ＲＰＭＩ１６４０寒天培地、イースト・モ
ルホロジー寒天培地等が使用されるが、被検菌によって
最適な培地を選択すればよい。培養後の被検菌の阻止円
をノギス等によって測定することにより、被検物質であ
るＡＭＰＨ Ｂの抗菌力を示すことが可能となる。以
下、本発明を実施例によって詳しく説明するが、これは
例示的なものであり、本発明はこれに限定されるもので
はない。
ス寒天培地、ＲＰＭＩ１６４０寒天培地、イースト・モ
ルホロジー寒天培地等が使用されるが、被検菌によって
最適な培地を選択すればよい。培養後の被検菌の阻止円
をノギス等によって測定することにより、被検物質であ
るＡＭＰＨ Ｂの抗菌力を示すことが可能となる。以
下、本発明を実施例によって詳しく説明するが、これは
例示的なものであり、本発明はこれに限定されるもので
はない。
【００１８】
【実施例１：各種ＣＤで各種疎水性化合物を溶解したと
きの阻止円の比較】第１表に示した疎水性化合物のう
ち、アゾールは２ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、そ
の他の疎水性化合物は１ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解
した後、４％の各種ＣＤ水溶液９ｍｌで希釈した。各々
の希釈液５０μｌを１ペーパーディスクに吸着させ、ア
ゾールは１０μｇ／ｄｉｓｋ、その他の化合物は５μｇ
／ｄｉｓｋとした。被検菌はAspergillus fumigatus IF
M41944を用いた。抗菌力測定培地はサブローデキストロ
ース寒天培地（デキストロースブロス（Difco）に１．
５％になる様に寒天を加える）を使用した。
きの阻止円の比較】第１表に示した疎水性化合物のう
ち、アゾールは２ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、そ
の他の疎水性化合物は１ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解
した後、４％の各種ＣＤ水溶液９ｍｌで希釈した。各々
の希釈液５０μｌを１ペーパーディスクに吸着させ、ア
ゾールは１０μｇ／ｄｉｓｋ、その他の化合物は５μｇ
／ｄｉｓｋとした。被検菌はAspergillus fumigatus IF
M41944を用いた。抗菌力測定培地はサブローデキストロ
ース寒天培地（デキストロースブロス（Difco）に１．
５％になる様に寒天を加える）を使用した。
【００１９】１〜３日前に植え継いだスラントからかき
とった胞子をＯＤ ０．５〜１．０になる様に調整し、
滅菌済みの力価評価用の寒天培地表面に１０4〜１０5／
ｃｍ2になる様に塗布し、この上に各々の疎水性化合物
を吸着させたｄｉｓｋを置床し、３０℃、２日間培養
後、生じた阻止円をノギスで計測した。対照は疎水性化
合物をＤＭＳＯに溶解した後、ＣＤ溶液の代わりに水で
希釈すること以外は全て同じ条件で行った。
とった胞子をＯＤ ０．５〜１．０になる様に調整し、
滅菌済みの力価評価用の寒天培地表面に１０4〜１０5／
ｃｍ2になる様に塗布し、この上に各々の疎水性化合物
を吸着させたｄｉｓｋを置床し、３０℃、２日間培養
後、生じた阻止円をノギスで計測した。対照は疎水性化
合物をＤＭＳＯに溶解した後、ＣＤ溶液の代わりに水で
希釈すること以外は全て同じ条件で行った。
【００２０】得られた結果を下記表１（阻止円の大きさ
はｍｍで表示）に示した。この結果から、本発明の効果
は第１表より明らかであり、阻止円が対照より大きい程
有効な系が出来ることが判った。
はｍｍで表示）に示した。この結果から、本発明の効果
は第１表より明らかであり、阻止円が対照より大きい程
有効な系が出来ることが判った。
【００２１】
【表１】
【００２２】
【実施例２：ＣＤ濃度とＡＭＰＨ Ｂの溶解性】疎水性
化合物であるＡＭＰＨ Ｂ １０ｍｇを１ｍｌのＤＭＳ
Ｏに溶解し、各々１０、５、２．５％のＨＰ−γ−ＣＤ
水溶液９ｍｌで希釈し、また対照として９ｍｌの水で希
釈し、ポアサイズ０．２２μｍのメンブランフィルター
で濾過した後、濾過液中のＡＭＰＨ Ｂの濃度を比色法
（濾過液をメタノールで１００倍希釈後４０７ｎｍの吸
光度を測定する）で測定した。結果は図１に示したが、
ＨＰ−γ−ＣＤの濃度に比例し水には溶解しないＡＭＰ
Ｈ Ｂが溶けていることが判る。従って、ＨＰ−γ−Ｃ
Ｄは疎水性化合物の溶解性向上に著しい効果があること
が明らかである。
化合物であるＡＭＰＨ Ｂ １０ｍｇを１ｍｌのＤＭＳ
Ｏに溶解し、各々１０、５、２．５％のＨＰ−γ−ＣＤ
水溶液９ｍｌで希釈し、また対照として９ｍｌの水で希
釈し、ポアサイズ０．２２μｍのメンブランフィルター
で濾過した後、濾過液中のＡＭＰＨ Ｂの濃度を比色法
（濾過液をメタノールで１００倍希釈後４０７ｎｍの吸
光度を測定する）で測定した。結果は図１に示したが、
ＨＰ−γ−ＣＤの濃度に比例し水には溶解しないＡＭＰ
Ｈ Ｂが溶けていることが判る。従って、ＨＰ−γ−Ｃ
Ｄは疎水性化合物の溶解性向上に著しい効果があること
が明らかである。
【００２３】
【実施例３：被検菌をCandida属酵母とした時の疎水性
化合物の濃度と阻止円の大きさの関係】疎水性化合物Ａ
ＭＰＨ Ｂ １０ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、１
５％のＨＰ−γ−ＣＤ ９ｍｌで希釈し、その後必要濃
度になるよう水で希釈後各１ペーパーディスクに５０μ
ｌ吸着させた。比較の為、対照としてＡＭＰＨ Ｂ １
０ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、これを水９ｍｌで
希釈し、以下同様の量を１ペーパーディスク当りに吸着
させた。ＨＰ−γ−ＣＤで希釈画分と水で希釈した画分
のディスクをサブローデキストロース寒天培地に１０4
〜１０5／ｃｍ2になる様に各々Candida albicans IFM40
007とCandida glabrata IFM40216を塗布したシャーレに
置床し、３０℃、２日間培養し、生じた阻止円をノギス
で測定した。
化合物の濃度と阻止円の大きさの関係】疎水性化合物Ａ
ＭＰＨ Ｂ １０ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、１
５％のＨＰ−γ−ＣＤ ９ｍｌで希釈し、その後必要濃
度になるよう水で希釈後各１ペーパーディスクに５０μ
ｌ吸着させた。比較の為、対照としてＡＭＰＨ Ｂ １
０ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、これを水９ｍｌで
希釈し、以下同様の量を１ペーパーディスク当りに吸着
させた。ＨＰ−γ−ＣＤで希釈画分と水で希釈した画分
のディスクをサブローデキストロース寒天培地に１０4
〜１０5／ｃｍ2になる様に各々Candida albicans IFM40
007とCandida glabrata IFM40216を塗布したシャーレに
置床し、３０℃、２日間培養し、生じた阻止円をノギス
で測定した。
【００２４】得られた結果を図２（図中、黒丸は本実施
例、白丸は対照を示す）に示した。この結果からわかる
とおり、ＡＭＰＨ Ｂを水で希釈した対照画分の阻止円
の大きさはＡＭＰＨ Ｂに対し濃度依存性が明確でない
のに対し、ＨＰ−γ−ＣＤで希釈した画分は濃度依存性
が高く、ＡＭＰＨ Ｂと阻止円との間に直線関係がある
ことが明瞭であり、本発明の適用の効果が明らかであ
る。
例、白丸は対照を示す）に示した。この結果からわかる
とおり、ＡＭＰＨ Ｂを水で希釈した対照画分の阻止円
の大きさはＡＭＰＨ Ｂに対し濃度依存性が明確でない
のに対し、ＨＰ−γ−ＣＤで希釈した画分は濃度依存性
が高く、ＡＭＰＨ Ｂと阻止円との間に直線関係がある
ことが明瞭であり、本発明の適用の効果が明らかであ
る。
【００２５】
【実施例４：被検菌をAspergillus fumiga
tus TK-12とPaecilomyces variotiiとした場合の疎水性
化合物の濃度と阻止円との関係】疎水性化合物をＡＭＰ
Ｈ Ｂ、包接性化合物をＨＰ−γ−ＣＤ、それに被検菌
をA. fumigatus TK-12、 P. variotiiとし、実施例３と
同じ条件で実施した。結果は図３（図中、黒丸は本実施
例、白丸は対照を示す）に示した。この結果からわかる
ように、本実施例においても、水で希釈した対照と比
べ、ＨＰ−γ−ＣＤで希釈した画分は、阻止円の大きさ
はＡＭＰＨ Ｂについて濃度依存性が高く、濃度と阻止
円との間に直線関係があり、糸状菌においても本発明の
適用の効果が明らかである。
tus TK-12とPaecilomyces variotiiとした場合の疎水性
化合物の濃度と阻止円との関係】疎水性化合物をＡＭＰ
Ｈ Ｂ、包接性化合物をＨＰ−γ−ＣＤ、それに被検菌
をA. fumigatus TK-12、 P. variotiiとし、実施例３と
同じ条件で実施した。結果は図３（図中、黒丸は本実施
例、白丸は対照を示す）に示した。この結果からわかる
ように、本実施例においても、水で希釈した対照と比
べ、ＨＰ−γ−ＣＤで希釈した画分は、阻止円の大きさ
はＡＭＰＨ Ｂについて濃度依存性が高く、濃度と阻止
円との間に直線関係があり、糸状菌においても本発明の
適用の効果が明らかである。
【００２６】
【実施例５：Aspergillus fumigatus及びC
andida albicansを被検菌としたときの各種培地での疎
水性化合物の濃度と阻止円との関係】被検菌をAspergil
lus fumigatus １１株、C．albicans １２株とし、疎
水性化合物をＡＭＰＨ Ｂとし、抗菌力測定培地をサブ
ローデキストロース培地、イースト・モルホロジー寒天
培地、ＲＰＭＩ−１６４０寒天培地を用い、本発明の各
培地での適用の可否を検討した。ＡＭＰＨ Ｂは１０ｍ
ｇを１ｍｌ ＤＭＳＯに溶解し、１５％ＨＰ−γ−ＣＤ
９ｍｌで稀釈し、更に最終５０μｌを１ペーパーディス
クに吸着させたとき各濃度となる様に水で稀釈し、各濃
度の液を５０μ１ペーパーディスクに吸着させた。被検
菌は前培養の後抗菌力測定培地に１０4〜１０5／ｃｍ2
になる様塗抹した。２日間培養後、各菌株の阻止円をノ
ギスで測定した。各培地でのA. fumigatus １１株、C.
albicans １２株の阻止円の平均値を阻止円の大きさ
（ｍｍ）とし、プロットした。結果は図４に示した。
andida albicansを被検菌としたときの各種培地での疎
水性化合物の濃度と阻止円との関係】被検菌をAspergil
lus fumigatus １１株、C．albicans １２株とし、疎
水性化合物をＡＭＰＨ Ｂとし、抗菌力測定培地をサブ
ローデキストロース培地、イースト・モルホロジー寒天
培地、ＲＰＭＩ−１６４０寒天培地を用い、本発明の各
培地での適用の可否を検討した。ＡＭＰＨ Ｂは１０ｍ
ｇを１ｍｌ ＤＭＳＯに溶解し、１５％ＨＰ−γ−ＣＤ
９ｍｌで稀釈し、更に最終５０μｌを１ペーパーディス
クに吸着させたとき各濃度となる様に水で稀釈し、各濃
度の液を５０μ１ペーパーディスクに吸着させた。被検
菌は前培養の後抗菌力測定培地に１０4〜１０5／ｃｍ2
になる様塗抹した。２日間培養後、各菌株の阻止円をノ
ギスで測定した。各培地でのA. fumigatus １１株、C.
albicans １２株の阻止円の平均値を阻止円の大きさ
（ｍｍ）とし、プロットした。結果は図４に示した。
【００２７】この結果からわかるように、各培地での阻
止円の大きさには多少の差はあるものの、各々濃度との
間には直線関係があり、各直線が平行しており、本発明
方法はどの培地においても問題なく良好な結果を与える
ことがわかる。従って、本発明方法は培地によらず適用
することが可能であることが明かである。
止円の大きさには多少の差はあるものの、各々濃度との
間には直線関係があり、各直線が平行しており、本発明
方法はどの培地においても問題なく良好な結果を与える
ことがわかる。従って、本発明方法は培地によらず適用
することが可能であることが明かである。
【００２８】
【実施例６：本発明方法による阻止円とＭＩＣとの相関
について】疎水性化合物をＡＭＰＨ Ｂとした。被検菌
はC. albicans ２株、Aspergillus fumigatus ２株、
C. glabrata、C. krusei、Aspergillus niger、Paecilo
myces variotiiの合計８株とした。本発明方法において
はＡＭＰＨ Ｂ １０ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解
し、１５％ＨＰ−γ−ＣＤ ９ｍｌで希釈し、更に稀釈
液を水で８倍に稀釈し５０μｌを１ペーパーディスクに
吸着させ、６．２５μｇ／ｄｉｓｋとした。又、対照と
して１５％ＨＰ−γ−ＣＤで希釈する代わりに水で希釈
し、以下、同様に調整し、６．２５μｇ／ｄｉｓｋとし
た群も設けた。
について】疎水性化合物をＡＭＰＨ Ｂとした。被検菌
はC. albicans ２株、Aspergillus fumigatus ２株、
C. glabrata、C. krusei、Aspergillus niger、Paecilo
myces variotiiの合計８株とした。本発明方法において
はＡＭＰＨ Ｂ １０ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解
し、１５％ＨＰ−γ−ＣＤ ９ｍｌで希釈し、更に稀釈
液を水で８倍に稀釈し５０μｌを１ペーパーディスクに
吸着させ、６．２５μｇ／ｄｉｓｋとした。又、対照と
して１５％ＨＰ−γ−ＣＤで希釈する代わりに水で希釈
し、以下、同様に調整し、６．２５μｇ／ｄｉｓｋとし
た群も設けた。
【００２９】前培養した各々の被検菌を１０4〜１０5／
ｃｍ2になる様に塗抹したプレートにペーパーディスク
を置床し３０℃、２日間培養後阻止円の直径をノギスで
測定した。また、ＭＩＣは、ＡＭＰＨ Ｂの場合、ＡＭ
ＰＨ Ｂ １０ｍｇ／ｍｌになる様にＤＭＳＯに溶解
し、サブローデキストロース寒天培地に１００μｇ／ｍ
ｌから倍々稀釈することにより０．０９８μｇ／ｍｌま
でのＡＭＰＨ Ｂ含有培地を用意し、培地表面に各々の
被検菌を塗抹し、３０℃、２日間培養後菌の生育が全く
見られない濃度をＭＩＣとして判定した。結果は図５に
示した。
ｃｍ2になる様に塗抹したプレートにペーパーディスク
を置床し３０℃、２日間培養後阻止円の直径をノギスで
測定した。また、ＭＩＣは、ＡＭＰＨ Ｂの場合、ＡＭ
ＰＨ Ｂ １０ｍｇ／ｍｌになる様にＤＭＳＯに溶解
し、サブローデキストロース寒天培地に１００μｇ／ｍ
ｌから倍々稀釈することにより０．０９８μｇ／ｍｌま
でのＡＭＰＨ Ｂ含有培地を用意し、培地表面に各々の
被検菌を塗抹し、３０℃、２日間培養後菌の生育が全く
見られない濃度をＭＩＣとして判定した。結果は図５に
示した。
【００３０】各々の菌株の阻止円とＭＩＣをプロットし
回帰分析を行った結果、例えばＨＰ−γ−ＣＤ使用時の
ＡＭＰＨ Ｂに関しては、Ｙ＝−１５．６ｌｏｇｘ＋１
３．１、 ｒ＝０．９４４と非常に精度の高い回帰式が
得られた。従って、疎水性化合物各々についてこの様な
回帰式を求めておくことにより、特定の被検菌について
本発明方法による包接化合物を用いたペーパーディスク
法による１点の濃度での阻止円を測定することによりＭ
ＩＣを回帰式より求めることが可能である。従って、こ
の回帰式を疎水性化合物について求めておくことで、被
検菌のＭＩＣを、１点の濃度の疎水性化合物のＣＤ稀釈
液を吸着させたペーパーディスクと（被検菌塗抹）寒天
培地セットを用意しておくことで算出することが出来
る。
回帰分析を行った結果、例えばＨＰ−γ−ＣＤ使用時の
ＡＭＰＨ Ｂに関しては、Ｙ＝−１５．６ｌｏｇｘ＋１
３．１、 ｒ＝０．９４４と非常に精度の高い回帰式が
得られた。従って、疎水性化合物各々についてこの様な
回帰式を求めておくことにより、特定の被検菌について
本発明方法による包接化合物を用いたペーパーディスク
法による１点の濃度での阻止円を測定することによりＭ
ＩＣを回帰式より求めることが可能である。従って、こ
の回帰式を疎水性化合物について求めておくことで、被
検菌のＭＩＣを、１点の濃度の疎水性化合物のＣＤ稀釈
液を吸着させたペーパーディスクと（被検菌塗抹）寒天
培地セットを用意しておくことで算出することが出来
る。
【００３１】
【発明の効果】本発明により疎水性化合物の抗菌力評価
を簡便にかつ再現性よく正確に評価出来る様になった。
また、本発明を使って最小発育阻止濃度の算出を簡単に
行うことが出来る。
を簡便にかつ再現性よく正確に評価出来る様になった。
また、本発明を使って最小発育阻止濃度の算出を簡単に
行うことが出来る。
【図１】ＨＰ−γ−ＣＤ濃度とＡＭＰＨ Ｂの溶解性と
の関係を示す。
の関係を示す。
【図２】酵母（Candida属菌)における阻止円に対するＨ
Ｐ−γ−ＣＤの効果を示す。
Ｐ−γ−ＣＤの効果を示す。
【図３】糸状菌（Aspergillus属菌、Paecilomyces属
菌）における阻止円に対するＨＰ−γ−ＣＤの効果を示
す。
菌）における阻止円に対するＨＰ−γ−ＣＤの効果を示
す。
【図４】糸状菌及び酵母における、各種培地でのＡＭＰ
Ｈ Ｂ濃度と阻止円との関係を示す。
Ｈ Ｂ濃度と阻止円との関係を示す。
【図５】阻止円とＭＩＣとの相関を示す。
Claims (5)
- 【請求項１】 疎水性化合物を有機溶媒に溶解し、更に
該溶解物を包接性化合物含有溶液にて希釈後、拡散法に
より抗菌力を測定することを特徴とする疎水性化合物の
抗菌力測定法。 - 【請求項２】 包接性化合物がサイクロデキストリン
（ＣＤ）であることを特徴とする請求項１の抗菌力測定
法。 - 【請求項３】 拡散法がペーパーディスク法であること
を特徴とする請求項１又は請求項２の抗菌力測定法。 - 【請求項４】 疎水性化合物を有機溶媒に溶解後、包接
性化合物含有溶液にて希釈し、拡散法によって抗菌力を
測定するようにしてなること、を特徴とする疎水性化合
物の抗菌力測定キット。 - 【請求項５】 請求項１〜請求項４のいずれか１項に記
載の疎水性化合物の抗菌力測定法及びキットを用い阻止
円を測定し、該数値より該当被検菌株の最小発育阻止濃
度を求めることを特徴とする最小発育阻止濃度の算出方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1927596A JPH09187294A (ja) | 1996-01-11 | 1996-01-11 | 抗菌力測定法及び測定キット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1927596A JPH09187294A (ja) | 1996-01-11 | 1996-01-11 | 抗菌力測定法及び測定キット |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09187294A true JPH09187294A (ja) | 1997-07-22 |
Family
ID=11994906
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1927596A Pending JPH09187294A (ja) | 1996-01-11 | 1996-01-11 | 抗菌力測定法及び測定キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09187294A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008092938A (ja) * | 2006-09-12 | 2008-04-24 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 真核微生物の活性測定法 |
| KR101439918B1 (ko) * | 2013-09-26 | 2014-09-15 | 연세대학교 산학협력단 | 디스크 확산법을 이용한 항균 시편의 정량적 항균 평가 방법 및 그 방법을 이용한 측정 장치 |
| CN108398496A (zh) * | 2018-02-09 | 2018-08-14 | 中国科学院武汉植物园 | 一种天然产物抗菌活性测定方法 |
-
1996
- 1996-01-11 JP JP1927596A patent/JPH09187294A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008092938A (ja) * | 2006-09-12 | 2008-04-24 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 真核微生物の活性測定法 |
| KR101439918B1 (ko) * | 2013-09-26 | 2014-09-15 | 연세대학교 산학협력단 | 디스크 확산법을 이용한 항균 시편의 정량적 항균 평가 방법 및 그 방법을 이용한 측정 장치 |
| CN108398496A (zh) * | 2018-02-09 | 2018-08-14 | 中国科学院武汉植物园 | 一种天然产物抗菌活性测定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wu et al. | Streptococcus mutans membrane vesicles harboring glucosyltransferases augment Candida albicans biofilm development | |
| Villalonga et al. | Disposable electrochemical biosensors for Brettanomyces bruxellensis and total yeast content in wine based on core-shell magnetic nanoparticles | |
| JPH07505788A (ja) | 液体中の抗菌性化合物の残留物検出用ユニット | |
| Brush et al. | Invasive hyphal growth in Wangiella dermatitidis is induced by stab inoculation and shows dependence upon melanin biosynthesis | |
| KR20160048830A (ko) | 미생물 검출 방법 | |
| EP2646565B1 (fr) | Procede de detection et de quantification de microorganismes | |
| Culha et al. | Rapid identification of bacteria and yeast using surface‐enhanced Raman scattering | |
| Zhang et al. | Acute heavy metal toxicity test based on bacteria-hydrogel | |
| FR2829499A1 (fr) | Procede de detection de micro-organismes et kit de detection | |
| Dorward et al. | Acute toxicity screening of water pollutants using a bacterial electrode | |
| Xu et al. | Glucosyltransferase activity-based screening identifies tannic acid as an inhibitor of Streptococcus mutans biofilm | |
| Sheet et al. | Antibiotic susceptibility and biofilm formation of Pseudomonas aeruginosa isolated from clinical and environmental hospital samples | |
| JPH09187294A (ja) | 抗菌力測定法及び測定キット | |
| Chakravarty et al. | Mycofabrication of gold nanoparticles and evaluation of their antioxidant activities | |
| JP2003501048A (ja) | デケラ及びブレタノミセス検出用培地 | |
| KR102189833B1 (ko) | 항생제 감수성을 평가하기 위한 디스크 확산용 배지 | |
| CN114410732A (zh) | 一种高通量测定抗菌活性的方法 | |
| Galedari et al. | Study of the physicochemical properties and anti-biofilm effects of synthesized zinc oxide nanoparticles using Artemisia plant | |
| Xiao et al. | Activity of Nidus Vespae extract and chemical fractions against Streptococcus mutans biofilms | |
| Sandin et al. | Variations in affinity to Candida albicans in vitro among human buccal epithelial cells | |
| Tomaselli et al. | Bacteria as sensors: Real-time NMR analysis of extracellular metabolites detects sub-lethal amounts of bactericidal molecules released from functionalized materials | |
| CN118272483A (zh) | 一种肉桂醛纳米乳抑菌剂亚抑菌浓度的检测方法 | |
| CN109463402A (zh) | 一种香樟精油细菌群体感应抑制剂的制备方法及应用 | |
| Xiao et al. | Use of 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide for rapid detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by resonance light scattering | |
| JPH078293A (ja) | 微生物検出方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051213 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20060509 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |