JPH09194494A - 新規な生理活性物質ｋ９３−０７１１ ｉ−１及びｉ−２並びにそれらの製造法 - Google Patents
新規な生理活性物質ｋ９３−０７１１ ｉ−１及びｉ−２並びにそれらの製造法Info
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- JPH09194494A JPH09194494A JP8007521A JP752196A JPH09194494A JP H09194494 A JPH09194494 A JP H09194494A JP 8007521 A JP8007521 A JP 8007521A JP 752196 A JP752196 A JP 752196A JP H09194494 A JPH09194494 A JP H09194494A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 サイトカインの１つであるＩＬ−６活性阻害
作用という新たな作用機序を有する生理活性物質Ｋ９３
−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２並びにそれらの製造法を
得るものである。 【解決手段】 ストレプトマイセス属に属する生理活性
物質Ｋ９３−０７１１Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力
を有する微生物を培地に培養して培養物中に生理活性物
質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を蓄積せしめ、
該培養物から生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及
びＩ−２採取する。 【効果】 ＩＬ−６が関与する疾患、例えば癌悪液質の
改善、あるいは多発性骨髄腫や関節リウマチ等の疾患に
対して効果が期待される。
作用という新たな作用機序を有する生理活性物質Ｋ９３
−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２並びにそれらの製造法を
得るものである。 【解決手段】 ストレプトマイセス属に属する生理活性
物質Ｋ９３−０７１１Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力
を有する微生物を培地に培養して培養物中に生理活性物
質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を蓄積せしめ、
該培養物から生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及
びＩ−２採取する。 【効果】 ＩＬ−６が関与する疾患、例えば癌悪液質の
改善、あるいは多発性骨髄腫や関節リウマチ等の疾患に
対して効果が期待される。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は新規な生理活性物質
Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２、並びに微生物生
産菌の培養によって産生され、マウス骨髄細胞由来のＩ
Ｌ−６依存性ＭＨ−６０（以下、ＭＨ−６０と呼称す
る）細胞の増殖を抑制する生理活性物質Ｋ９３−０７１
１ Ｉ−１及びＩ−２の製造法に関する。
Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２、並びに微生物生
産菌の培養によって産生され、マウス骨髄細胞由来のＩ
Ｌ−６依存性ＭＨ−６０（以下、ＭＨ−６０と呼称す
る）細胞の増殖を抑制する生理活性物質Ｋ９３−０７１
１ Ｉ−１及びＩ−２の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】癌治療の方法は、主として外科療法、放
射線療法、化学療法に大別される。今日におけるこれら
の方法の技術の向上あるいは新たな制癌剤の開発によ
り、癌の治療率は５０％ほどにも達している。特に胃癌
や子宮癌などは集団検診や定期検診等も整備されてきて
おり、死亡率は減少している一方、最近、食生活や生活
習慣の変化あるいは高齢化により、肺癌、肝臓癌、大腸
癌、前立腺癌などが増加しているのが現状である。これ
らの癌は悪性化を伴う傾向があり、悪液質を引き起こ
す。しかしながら、癌性悪液質に対する有効な化学療法
剤は未だ開発されていない。
射線療法、化学療法に大別される。今日におけるこれら
の方法の技術の向上あるいは新たな制癌剤の開発によ
り、癌の治療率は５０％ほどにも達している。特に胃癌
や子宮癌などは集団検診や定期検診等も整備されてきて
おり、死亡率は減少している一方、最近、食生活や生活
習慣の変化あるいは高齢化により、肺癌、肝臓癌、大腸
癌、前立腺癌などが増加しているのが現状である。これ
らの癌は悪性化を伴う傾向があり、悪液質を引き起こ
す。しかしながら、癌性悪液質に対する有効な化学療法
剤は未だ開発されていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】このように、癌の治療
率が５０％を越えた現在、患者のクオリティ・オブ・ラ
イフ（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ；以下、ＱＯＬ
と呼称する）の重要性が注目されている。例えば、癌性
悪液質は癌患者にしばしば見られる恒常性機能障害（代
謝系、内分泌系、免疫系等の異常）であり、体重減少、
脂肪筋組織重量減少、高カルシウム血症等の症状が観察
される。
率が５０％を越えた現在、患者のクオリティ・オブ・ラ
イフ（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ；以下、ＱＯＬ
と呼称する）の重要性が注目されている。例えば、癌性
悪液質は癌患者にしばしば見られる恒常性機能障害（代
謝系、内分泌系、免疫系等の異常）であり、体重減少、
脂肪筋組織重量減少、高カルシウム血症等の症状が観察
される。
【０００４】悪液質は患者のＱＯＬを低下せしめ、生存
期間の短縮、再発率の上昇、抗癌剤に対する応答性の低
下等を引き起こし、患者の予後を不良にする。そこで、
治療は勿論のこと、術後の再発や予後不良を防止するた
め、癌悪液質改善作用を持った化学療法剤の開発が強く
望まれていた。
期間の短縮、再発率の上昇、抗癌剤に対する応答性の低
下等を引き起こし、患者の予後を不良にする。そこで、
治療は勿論のこと、術後の再発や予後不良を防止するた
め、癌悪液質改善作用を持った化学療法剤の開発が強く
望まれていた。
【０００５】このような癌性悪液質を引き起こす本体は
未だ不明であるが、しかし最近において、サイトカイン
の一つであるインターロイキン−６（以下、ＩＬ−６と
呼称する）の過剰産生が深く関与していることが報告さ
れている。従って、過剰に産生されたＩＬ−６の作用を
阻害する、或いは産生を抑制する化合物は、癌性悪液質
を改善する作用を持つと考えられる。
未だ不明であるが、しかし最近において、サイトカイン
の一つであるインターロイキン−６（以下、ＩＬ−６と
呼称する）の過剰産生が深く関与していることが報告さ
れている。従って、過剰に産生されたＩＬ−６の作用を
阻害する、或いは産生を抑制する化合物は、癌性悪液質
を改善する作用を持つと考えられる。
【０００６】本発明はＩＬ−６活性阻害と言う新たな作
用機序を有する新規物質であるＫ９３−０７１１ Ｉ−
１及びＩ−２を提供するものである。更に本発明は、ス
トレプトマイセス属に属する生理活性物質Ｋ９３−０７
１１ Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力を有する微生物
を培地に培養して培養物中に生理活性物質Ｋ９３−０７
１１ Ｉ−１及びＩ−２を蓄積せしめ、該培養物から生
理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を採取
することを特徴とする新規な生理活性物質Ｋ９３−０７
１１ Ｉ−１及びＩ−２の製造法を提供するものであ
る。
用機序を有する新規物質であるＫ９３−０７１１ Ｉ−
１及びＩ−２を提供するものである。更に本発明は、ス
トレプトマイセス属に属する生理活性物質Ｋ９３−０７
１１ Ｉ−１及びＩ−２を生産する能力を有する微生物
を培地に培養して培養物中に生理活性物質Ｋ９３−０７
１１ Ｉ−１及びＩ−２を蓄積せしめ、該培養物から生
理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を採取
することを特徴とする新規な生理活性物質Ｋ９３−０７
１１ Ｉ−１及びＩ−２の製造法を提供するものであ
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは、新
規な生理活性物質の探索を目的として種々の土壌から菌
株を分離し、その生産する代謝産物について研究を続け
た結果、新たに採取された土壌から分離した菌株Ｋ９３
−０７１１の培養物中に、ＭＨ−６０細胞の増殖を抑制
する物質が産生されることを見出し、次いで、培養物か
ら該有効物質を分離、精製し、その理化学的性質を有す
る物質は、他に見当たらないことから、この物質をＫ９
３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２と呼称することにし
た。
規な生理活性物質の探索を目的として種々の土壌から菌
株を分離し、その生産する代謝産物について研究を続け
た結果、新たに採取された土壌から分離した菌株Ｋ９３
−０７１１の培養物中に、ＭＨ−６０細胞の増殖を抑制
する物質が産生されることを見出し、次いで、培養物か
ら該有効物質を分離、精製し、その理化学的性質を有す
る物質は、他に見当たらないことから、この物質をＫ９
３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２と呼称することにし
た。
【０００８】本発明はかかる知見に基づいて完成された
ものであり、本発明の生理活性物質Ｋ９３−０７１１
Ｉ−１及びＩ−２を生産するために使用される菌株とし
ては、例えば本発明者らが土壌から分離したストレプト
マイセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓ
ｐ．）Ｋ９３−０７１１株は、本発明に最も有効に使用
される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性状を示す
と下記の通りである。
ものであり、本発明の生理活性物質Ｋ９３−０７１１
Ｉ−１及びＩ−２を生産するために使用される菌株とし
ては、例えば本発明者らが土壌から分離したストレプト
マイセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓ
ｐ．）Ｋ９３−０７１１株は、本発明に最も有効に使用
される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性状を示す
と下記の通りである。
【０００９】Ｉ．形態的性質 栄養菌糸は各種寒天培地上で良く発達し、分断が観察さ
れない。気菌糸はオートミール寒天培地、グリセロール
・アスパラギン寒天培地等で豊富に着生し、白色から灰
色を呈する。顕微鏡下の観察では、気菌糸は直線状を呈
し、２０ケ以上の胞子の連鎖が認められる。胞子の形は
円柱状であり、その大きさは１．４×０．７μｍであ
る。胞子の表面は平滑である。菌核、胞子のう及び遊走
子は見出されない。
れない。気菌糸はオートミール寒天培地、グリセロール
・アスパラギン寒天培地等で豊富に着生し、白色から灰
色を呈する。顕微鏡下の観察では、気菌糸は直線状を呈
し、２０ケ以上の胞子の連鎖が認められる。胞子の形は
円柱状であり、その大きさは１．４×０．７μｍであ
る。胞子の表面は平滑である。菌核、胞子のう及び遊走
子は見出されない。
【００１０】II．各種培地上での培養性状 イー・ビー・シャーリング（Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎ
ｇ）とデー・ゴットリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の
方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
マティック・バクテリオロジー、第１６巻、第３１３
頁、１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性状を
下記の表１に示す。
ｇ）とデー・ゴットリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の
方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
マティック・バクテリオロジー、第１６巻、第３１３
頁、１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性状を
下記の表１に示す。
【００１１】色調は標準色として、カラー・ハーモニー
・マニュアル第４版（コンテナー・コーポレーション・
オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を用いて決定
し、色標名とともに括弧内にそのコードを併せて記し
た。以下は特記しない限り、２７℃、２週間目の各培地
における観察の結果である。
・マニュアル第４版（コンテナー・コーポレーション・
オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を用いて決定
し、色標名とともに括弧内にそのコードを併せて記し
た。以下は特記しない限り、２７℃、２週間目の各培地
における観察の結果である。
【００１２】
【表１】
【００１３】III ．生理学的諸性質 （１）メラニン色素の生成 （イ）チロシン寒天 陰性 （ロ）ペプトン・イースト鉄寒天 陰性 （ハ）トリプトン・イースト液 陰性 （２）チロシナーゼ反応 陰性 （３）硫化水素の生産 陰性 （４）硝酸塩の還元 陽性
【００１４】 （５）ゼラチンの液化（２１〜２３℃） 陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （６）スターチの加水分解 陽性 （７）脱脂乳の凝固（３７℃） 陰性 （８）脱脂乳のペプトン化（３７℃） 陽性 （９）生育温度範囲 １５〜３９℃ （１０）炭素源の利用性（プリーダム・ゴトリーブ寒天培地） 利用する；グルコース、アラビノース、キシロース、ラムノース （１１）セルロースの分解 陰性
【００１５】ＩＶ．細胞壁組成 細胞壁のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。以上、本
菌の菌学的性状を要約すると次のとおりである。細胞壁
中のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。栄養菌糸は各
種寒天培地上でよく発達し、分断が観察された。気菌糸
の形態は直線状で長い胞子鎖を形成する。胞子の表面は
平滑である。培養上の諸性質としては、栄養菌糸はブラ
ウン系の色調を呈し、気菌糸はホワイト〜グレイ系の色
調を呈する。
菌の菌学的性状を要約すると次のとおりである。細胞壁
中のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。栄養菌糸は各
種寒天培地上でよく発達し、分断が観察された。気菌糸
の形態は直線状で長い胞子鎖を形成する。胞子の表面は
平滑である。培養上の諸性質としては、栄養菌糸はブラ
ウン系の色調を呈し、気菌糸はホワイト〜グレイ系の色
調を呈する。
【００１６】可溶性色素は、チロシン寒天とペプトン・
酵母エキス鉄寒天でブラウン系の色素を僅かに産生す
る。これらの結果から、本菌株はストレプトマイセス属
に属する一菌種と判断され、本菌株をストレプトマイセ
ス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｋ
９３−０７１１と命名した。本菌株は、ストレプトマイ
セス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）
Ｋ９３−０７１１として工業技術院生命工学工業技術研
究所に寄託されている。受託番号はＦＥＲＭ Ｐ−１５
２５３である。
酵母エキス鉄寒天でブラウン系の色素を僅かに産生す
る。これらの結果から、本菌株はストレプトマイセス属
に属する一菌種と判断され、本菌株をストレプトマイセ
ス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｋ
９３−０７１１と命名した。本菌株は、ストレプトマイ
セス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）
Ｋ９３−０７１１として工業技術院生命工学工業技術研
究所に寄託されている。受託番号はＦＥＲＭ Ｐ−１５
２５３である。
【００１７】本発明の好ましい菌株として、Ｋ９３−０
７１１ Ｉ−１及びＩ−２生産菌について説明したが、
放線菌の一般的性状としての菌学上の性状はきわめて変
異し易く、一定したものではなく、自然的にあるいは通
常行われる紫外線照射、Ｘ線照射または変異誘導体剤、
例えばＮ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン、エチルメタンスルホネートなどを用いる人工的変異
手段により変異することは周知の事実であり、このよう
な人工的変異株は勿論、自然変異株も含め、ストレプト
マイセス属に属し、Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−
２を生産する能力を有する菌株は，すべて本発明に使用
することができる。
７１１ Ｉ−１及びＩ−２生産菌について説明したが、
放線菌の一般的性状としての菌学上の性状はきわめて変
異し易く、一定したものではなく、自然的にあるいは通
常行われる紫外線照射、Ｘ線照射または変異誘導体剤、
例えばＮ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン、エチルメタンスルホネートなどを用いる人工的変異
手段により変異することは周知の事実であり、このよう
な人工的変異株は勿論、自然変異株も含め、ストレプト
マイセス属に属し、Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−
２を生産する能力を有する菌株は，すべて本発明に使用
することができる。
【００１８】本発明においては、先ずストレプトマイセ
ス属に属するＫ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２生産
菌が、適当な培地に培養される。本菌の培養において
は、通常の放線菌の培養方法が一般に適用される。培地
としては微生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒素
源、さらに必要に応じ無機塩などを含有させた栄養培地
が用いられる。
ス属に属するＫ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２生産
菌が、適当な培地に培養される。本菌の培養において
は、通常の放線菌の培養方法が一般に適用される。培地
としては微生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒素
源、さらに必要に応じ無機塩などを含有させた栄養培地
が用いられる。
【００１９】上記の同化し得る炭素源としては、ブドウ
糖、糖密、澱粉、デキストリン、セルロース、コーン・
スティープ・リカー、グリセリン、有機酸などが単独ま
たは組み合わせて用いられる。消化し得る窒素源として
は、例えば市販されているペプトン、肉エキス、酵母エ
キス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スティープ・リカ
ー、綿実粉、カゼイン、大豆蛋白分解物、アミノ酸、尿
素などの有機窒素源、硝酸塩、アンモニウム塩などの無
機窒素化合物が単独または組み合わせて用いられる。
糖、糖密、澱粉、デキストリン、セルロース、コーン・
スティープ・リカー、グリセリン、有機酸などが単独ま
たは組み合わせて用いられる。消化し得る窒素源として
は、例えば市販されているペプトン、肉エキス、酵母エ
キス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スティープ・リカ
ー、綿実粉、カゼイン、大豆蛋白分解物、アミノ酸、尿
素などの有機窒素源、硝酸塩、アンモニウム塩などの無
機窒素化合物が単独または組み合わせて用いられる。
【００２０】更に、必要に応じてナトリウム塩、カリウ
ム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩などの
無機塩類が添加される。更に、培地には、必要に応じ
て、本菌の生育やＫ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２
の生産を促進する微量栄養素、発育促進物質、前駆物質
を適当に添加してもよい。
ム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩などの
無機塩類が添加される。更に、培地には、必要に応じ
て、本菌の生育やＫ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２
の生産を促進する微量栄養素、発育促進物質、前駆物質
を適当に添加してもよい。
【００２１】培養は通常振とうまたは通気攪拌培養など
の好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気攪
拌培養が好ましい。培地のｐＨは中性付近で培養を行う
のが好ましい。培養温度は２０〜３７℃でも行い得る
が、通常は２４〜３０℃、好ましくは２７℃付近に保つ
のがよい。培養時間は、液体培養の場合、通常３〜６日
培養を行うと、本化合物類が生成蓄積される。好ましく
は培養中の蓄積量が最大に達したときに培養を終了すれ
ばよい。
の好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気攪
拌培養が好ましい。培地のｐＨは中性付近で培養を行う
のが好ましい。培養温度は２０〜３７℃でも行い得る
が、通常は２４〜３０℃、好ましくは２７℃付近に保つ
のがよい。培養時間は、液体培養の場合、通常３〜６日
培養を行うと、本化合物類が生成蓄積される。好ましく
は培養中の蓄積量が最大に達したときに培養を終了すれ
ばよい。
【００２２】これらの培養組成、培地の液性、培養温
度、攪拌速度、通気量などの培養条件は使用する菌株の
種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節、選択されることはいうまでもない。液
体培養において発泡があるときは、シリコン油、植物
油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用してもよい。
度、攪拌速度、通気量などの培養条件は使用する菌株の
種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節、選択されることはいうまでもない。液
体培養において発泡があるときは、シリコン油、植物
油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用してもよい。
【００２３】このようにして得られた培養物中に蓄積さ
れた抗生物質は培養濾液または培養菌体中に含まれてい
るので、培養濾液を必要に応じて濾過補助剤、例えばセ
ライト、ハイフロースーパーセル等を加えて濾過する
か、または遠心分離して培養濾液と菌体とに分離し、培
養濾液と菌体との有機溶媒抽出物を濃縮したものの混合
物からＫ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を採取する
のが有利である。
れた抗生物質は培養濾液または培養菌体中に含まれてい
るので、培養濾液を必要に応じて濾過補助剤、例えばセ
ライト、ハイフロースーパーセル等を加えて濾過する
か、または遠心分離して培養濾液と菌体とに分離し、培
養濾液と菌体との有機溶媒抽出物を濃縮したものの混合
物からＫ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を採取する
のが有利である。
【００２４】また、培養濾液及び菌体を分離しないで、
そのまま非親水性有機溶媒により抽出することができ
る。また、Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２の含有
量が培養濾液と菌体のどちらかに極端に多いときはその
多いほうから抽出してもよい。培養菌体からＫ９３−０
７１１ Ｉ−１及びＩ−２を分離精製するためには、通
常、培養濾液と菌体の有機溶媒抽出物を濃縮した物の混
合物またはそれぞれを非浸水性溶媒、例えば酢酸エチ
ル、クロロホルムで抽出することにより、Ｋ９３−０７
１１ Ｉ−１及びＩ−２が有機溶媒に転溶される。
そのまま非親水性有機溶媒により抽出することができ
る。また、Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２の含有
量が培養濾液と菌体のどちらかに極端に多いときはその
多いほうから抽出してもよい。培養菌体からＫ９３−０
７１１ Ｉ−１及びＩ−２を分離精製するためには、通
常、培養濾液と菌体の有機溶媒抽出物を濃縮した物の混
合物またはそれぞれを非浸水性溶媒、例えば酢酸エチ
ル、クロロホルムで抽出することにより、Ｋ９３−０７
１１ Ｉ−１及びＩ−２が有機溶媒に転溶される。
【００２５】このようにして得られた有機溶媒層は、必
要に応じ種々の脱水剤、たとえば無水硫酸ナトリウム、
ビーズゲルなどを加えて脱水された後、減圧下で有機溶
媒が留去される。この濃縮操作においてＫ９３−０７１
１ Ｉ−１及びＩ−２は、安定な物質であるが、通常、
加熱温度を５０℃以下となるように行うことが好まし
い。残渣にヘキサン、石油エーテルなどの有機溶媒を加
えてＫ９３−０７１１Ｉ−１及びＩ−２を沈澱させるこ
とができる。
要に応じ種々の脱水剤、たとえば無水硫酸ナトリウム、
ビーズゲルなどを加えて脱水された後、減圧下で有機溶
媒が留去される。この濃縮操作においてＫ９３−０７１
１ Ｉ−１及びＩ−２は、安定な物質であるが、通常、
加熱温度を５０℃以下となるように行うことが好まし
い。残渣にヘキサン、石油エーテルなどの有機溶媒を加
えてＫ９３−０７１１Ｉ−１及びＩ−２を沈澱させるこ
とができる。
【００２６】得られた沈澱物は数回ヘキサンなどで洗浄
後、吸引濾過または遠心分離によりＫ９３−０７１１
Ｉ−１及びＩ−２の粗製物を採取することができる。こ
の粗製物をさらに精製するためには、Ｋ９３−０７１１
Ｉ−１及びＩ−２と混雑物との溶解度の差や混じり合
わない二液相関の分配の差や各種吸着担体に対する吸着
力の差を利用した多くの手段が可能であるが、特にクロ
マトグラフィーはＫ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２
の精製に有効な方法である。
後、吸引濾過または遠心分離によりＫ９３−０７１１
Ｉ−１及びＩ−２の粗製物を採取することができる。こ
の粗製物をさらに精製するためには、Ｋ９３−０７１１
Ｉ−１及びＩ−２と混雑物との溶解度の差や混じり合
わない二液相関の分配の差や各種吸着担体に対する吸着
力の差を利用した多くの手段が可能であるが、特にクロ
マトグラフィーはＫ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２
の精製に有効な方法である。
【００２７】Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２の精
製に有効なクロマトグラフィーとしては、シリカゲル、
アルミナ、活性炭セルロース、ヒドロキシアパタイトＨ
Ｐ−２０などの吸着樹脂などによる吸着クロマトグラフ
ィー、シラン化シリカゲル、オクタデシルシラン化シリ
カゲルなどを用いる逆相分配クロマトグラフィー、セフ
ァデックスＬＨ−２０、トヨパール（商品名、東ソー社
製）などを用いる分子ふるいにもとずくゲル濾過クロマ
トグラフィーなどがを用いるイオン交換クロマトグラフ
イーなどが挙げられる。
製に有効なクロマトグラフィーとしては、シリカゲル、
アルミナ、活性炭セルロース、ヒドロキシアパタイトＨ
Ｐ−２０などの吸着樹脂などによる吸着クロマトグラフ
ィー、シラン化シリカゲル、オクタデシルシラン化シリ
カゲルなどを用いる逆相分配クロマトグラフィー、セフ
ァデックスＬＨ−２０、トヨパール（商品名、東ソー社
製）などを用いる分子ふるいにもとずくゲル濾過クロマ
トグラフィーなどがを用いるイオン交換クロマトグラフ
イーなどが挙げられる。
【００２８】Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２は、
これらのクロマトグラフィーや電気泳動、向流分配、限
外濾過などの手段を、単独あるいは任意の順序にて組み
合わせ、または反復して用いることにより、分離精製す
ることができる。例えば上記の粗製物を少量のクロロホ
ルムに溶かし、シリカゲルに吸着させ、クロロホルム−
アセトン系混合溶液を用いてカラムクロマトグラフィー
を行い、その活性画分を減圧濃縮後、少量のメタノール
に溶かし、これをメタノールで分子ふるいにもとずくゲ
ル濾過クロマトグラフィーを行うことによりＫ９３−０
７１１ Ｉ−１及びＩ−２を分離精製することができ
る。
これらのクロマトグラフィーや電気泳動、向流分配、限
外濾過などの手段を、単独あるいは任意の順序にて組み
合わせ、または反復して用いることにより、分離精製す
ることができる。例えば上記の粗製物を少量のクロロホ
ルムに溶かし、シリカゲルに吸着させ、クロロホルム−
アセトン系混合溶液を用いてカラムクロマトグラフィー
を行い、その活性画分を減圧濃縮後、少量のメタノール
に溶かし、これをメタノールで分子ふるいにもとずくゲ
ル濾過クロマトグラフィーを行うことによりＫ９３−０
７１１ Ｉ−１及びＩ−２を分離精製することができ
る。
【００２９】次に、本発明Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及
びＩ−２の理化学的性質および生物学的性質について以
下に述べる。 理化学的性質
びＩ−２の理化学的性質および生物学的性質について以
下に述べる。 理化学的性質
【００３０】Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１ （１）性状 ：淡黄色油 （２）元素組成：Ｃ22Ｈ27Ｏ4 Ｎ（高分解能高速原子衝
撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる） （３）比旋光度：〔α〕D 24＋４４．４°（ｃ．０．
３，ＭｅＯＨ） （４）分子量 ：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マス
スペクトルによる） （５）高分解能スペクトル：ＦＡＢ−ＭＳ ３７０（Ｍ
＋Ｈ）+
撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる） （３）比旋光度：〔α〕D 24＋４４．４°（ｃ．０．
３，ＭｅＯＨ） （４）分子量 ：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マス
スペクトルによる） （５）高分解能スペクトル：ＦＡＢ−ＭＳ ３７０（Ｍ
＋Ｈ）+
【００３１】（６）紫外・可視部吸収スペクトル：メタ
ノール中で測定した紫外・可視吸収スペクトルは図１に
示すとおりであり、２９９（ｌｏｇε ３．２８）、２
４５（ｌｏｇε ４．２６）、２０７（ｌｏｇε ４．
３８）ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示す （７）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム法で測定し
た赤外線吸収スペクトルは図２に示すとおりであり、３
３９０、２９２７、１７４１、１６９５、１６０３、１
４８７、１３８１、１２８１、７５６ｃｍ-1に吸収帯を
有する
ノール中で測定した紫外・可視吸収スペクトルは図１に
示すとおりであり、２９９（ｌｏｇε ３．２８）、２
４５（ｌｏｇε ４．２６）、２０７（ｌｏｇε ４．
３８）ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示す （７）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム法で測定し
た赤外線吸収スペクトルは図２に示すとおりであり、３
３９０、２９２７、１７４１、１６９５、１６０３、１
４８７、１３８１、１２８１、７５６ｃｍ-1に吸収帯を
有する
【００３２】（８）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢
酸エチル、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、エ
タノール、クロロホルム及びベンゼンに可溶であり、水
に難溶である （９）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性 （１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアン ジャパン
（Ｖａｒｉａｎ Ｊａｐａｎ）社製、ＸＬ−４００型Ｎ
ＭＲスペクトロメータを用いて測定した 1Ｈ−ＮＭＲス
ペクトル（重クロロホルム溶液中、４００ＭＨｚ）およ
び13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中、１
００．５８ＭＨｚ）はそれぞれ図３及び図４に示すとお
りである。また、水素および炭素の化学シフトは下記表
２に示す通りである。
酸エチル、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、エ
タノール、クロロホルム及びベンゼンに可溶であり、水
に難溶である （９）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性 （１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアン ジャパン
（Ｖａｒｉａｎ Ｊａｐａｎ）社製、ＸＬ−４００型Ｎ
ＭＲスペクトロメータを用いて測定した 1Ｈ−ＮＭＲス
ペクトル（重クロロホルム溶液中、４００ＭＨｚ）およ
び13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中、１
００．５８ＭＨｚ）はそれぞれ図３及び図４に示すとお
りである。また、水素および炭素の化学シフトは下記表
２に示す通りである。
【００３３】
【表２】
【００３４】Ｋ９３−０７１１ Ｉ−２ （１）性状 ：淡黄色油 （２）元素組成：Ｃ22Ｈ27Ｏ4 Ｎ（高分解能高速原子衝
撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる） （３）比旋光度：〔α〕D 24＋２５．６°（ｃ．０．
３，ＭｅＯＨ） （４）分子量 ：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マス
スペクトルによる） （５）紫外・可視部吸収スペクトル：メタノール中で測
定した紫外・可視吸収スペクトルは図５に示すとおりで
あり、２０８（ｌｏｇε ４．４０）、２４６（ｌｏｇ
ε ４．２９）、３０４（ｌｏｇε ３．２８）ｎｍ付
近に特徴的な吸収極大を示す
撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる） （３）比旋光度：〔α〕D 24＋２５．６°（ｃ．０．
３，ＭｅＯＨ） （４）分子量 ：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マス
スペクトルによる） （５）紫外・可視部吸収スペクトル：メタノール中で測
定した紫外・可視吸収スペクトルは図５に示すとおりで
あり、２０８（ｌｏｇε ４．４０）、２４６（ｌｏｇ
ε ４．２９）、３０４（ｌｏｇε ３．２８）ｎｍ付
近に特徴的な吸収極大を示す
【００３５】（６）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウ
ム法で測定した赤外線吸収スペクトルは図６に示すとお
りであり、３４１０、２９２７、１７３８、１６９３、
１５９７、１４８９、１３８０、１２８２、７５６ｃｍ
-1に吸収帯を有する （７）高分解能マススペクトル ＦＡＢ−ＭＳ ３７０（Ｍ＋Ｈ）+ （８）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢酸エチル、エ
チルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、ク
ロロホルム及びベンゼンに可溶であり、水に難溶である （９）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性
ム法で測定した赤外線吸収スペクトルは図６に示すとお
りであり、３４１０、２９２７、１７３８、１６９３、
１５９７、１４８９、１３８０、１２８２、７５６ｃｍ
-1に吸収帯を有する （７）高分解能マススペクトル ＦＡＢ−ＭＳ ３７０（Ｍ＋Ｈ）+ （８）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢酸エチル、エ
チルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、ク
ロロホルム及びベンゼンに可溶であり、水に難溶である （９）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性
【００３６】（１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアン
ジャパン（Ｖａｒｉａｎ Ｊａｐａｎ）社製、ＸＬ−
４００型ＮＭＲスペクトロメータを用いて測定した 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中、１００．
５８ＭＨｚ）および13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重クロロ
ホルム溶液中、４００ＭＨｚ）はそれぞれ図７及び図８
に示すとおりである。また、水素および炭素の化学シフ
トは下記表３に示す通りである。
ジャパン（Ｖａｒｉａｎ Ｊａｐａｎ）社製、ＸＬ−
４００型ＮＭＲスペクトロメータを用いて測定した 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトル（重クロロホルム溶液中、１００．
５８ＭＨｚ）および13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重クロロ
ホルム溶液中、４００ＭＨｚ）はそれぞれ図７及び図８
に示すとおりである。また、水素および炭素の化学シフ
トは下記表３に示す通りである。
【００３７】
【表３】
【００３８】生物学的性質 ＭＨ−６０細胞によるＩＬ−６活性修飾作用の評価 ＩＬ−６依存性増殖能を有するマウス骨髄由来ＭＨ−６
０．ＢＳＦ２（以下、ＭＨ−６０と呼称する）を用い、
０．２Ｕ／ｍl のＩＬ−６に対する細胞増殖活性を指標
としてＩＬ−６修飾活性を試験した。１０％ウシ胎児血
清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ １６４０培地に懸濁した
ＭＨ−６０細胞の５×１０3 ／１００μl 個を９６穴の
マイクロプレートの各穴に播き、次いで、各濃度のＫ９
３−０７１１ Ｉ−１およびＩ−２ ５μl を加え、更
に０．２Ｕ／ｍl のＩＬ−６溶液１００μl を添加し、
ＣＯ2 インキュベーター内で３７℃で７２時間培養す
る。
０．ＢＳＦ２（以下、ＭＨ−６０と呼称する）を用い、
０．２Ｕ／ｍl のＩＬ−６に対する細胞増殖活性を指標
としてＩＬ−６修飾活性を試験した。１０％ウシ胎児血
清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ １６４０培地に懸濁した
ＭＨ−６０細胞の５×１０3 ／１００μl 個を９６穴の
マイクロプレートの各穴に播き、次いで、各濃度のＫ９
３−０７１１ Ｉ−１およびＩ−２ ５μl を加え、更
に０．２Ｕ／ｍl のＩＬ−６溶液１００μl を添加し、
ＣＯ2 インキュベーター内で３７℃で７２時間培養す
る。
【００３９】次いで、ＭＴＴ法〔３−（４，５−ｄｉｍ
ｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉ
ｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｂｒｏ
ｍｉｄｅ〕により細胞を染色し、測定波長４９２ｎｍ、
対照波長６３０ｎｍで比色定量し、細胞増殖率を算定し
た。また、クローニングによって株化したＩＬ−６非依
存性増殖能を有するＭＨ−６０細胞に対する細胞増殖率
も同時に測定した。その結果は表４および表５に示すと
おりである。
ｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２−ｙｌ）−２，５−ｄｉ
ｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｂｒｏ
ｍｉｄｅ〕により細胞を染色し、測定波長４９２ｎｍ、
対照波長６３０ｎｍで比色定量し、細胞増殖率を算定し
た。また、クローニングによって株化したＩＬ−６非依
存性増殖能を有するＭＨ−６０細胞に対する細胞増殖率
も同時に測定した。その結果は表４および表５に示すと
おりである。
【００４０】
【表４】
【００４１】
【表５】
【００４２】
【発明の効果】以上の如く、表４および表５の結果から
明らかなように、本発明の生理活性物質Ｋ９３−０７１
１ Ｉ−１及びＩ−２はともにＩＬ−６作用を選択的に
抑制することが認められた。したがって、ＩＬ−６が深
く関与すると考えられる疾患、例えば癌性悪液質の改
善、あるいは多発性骨髄腫や関節リウマチなどの疾患等
に対しての効果が期待される。
明らかなように、本発明の生理活性物質Ｋ９３−０７１
１ Ｉ−１及びＩ−２はともにＩＬ−６作用を選択的に
抑制することが認められた。したがって、ＩＬ−６が深
く関与すると考えられる疾患、例えば癌性悪液質の改
善、あるいは多発性骨髄腫や関節リウマチなどの疾患等
に対しての効果が期待される。
【００４３】
【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれのみに限定されるものではない。
試験管（φ２×２０ｃｍ）にグルコース０．１％、澱粉
２．４％、ペプトン０．３％、酵母エキス０．５％、肉
エキス０．３％、炭酸カルシウム０．４％を含む液体培
地（ｐＨ７．０）１０ｍl を滅菌し、これに澱粉１．０
％、ＮＺアミン０．３％、酵母エキス０．１％、肉エキ
ス０．１％、炭酸カルシウム０．３％、寒天１．０％を
含む寒天斜面培地上に２７℃、６日間培養したストレプ
トマイセス・エスピーＫ９３−０７１１（ＦＥＲＭ Ｐ
−１５２５３）の斜面培養から一白金を接種し、毎分２
２０回転するロータリシェーカーで２７℃、７２時間振
とう培養して種母を得た。次に、５００ｍl 容三角フラ
スコに試験管と同様の液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍ
l を滅菌し、これに先に得た種母を２ｍl （２％）無菌
的に移植した。
するが、本発明はこれのみに限定されるものではない。
試験管（φ２×２０ｃｍ）にグルコース０．１％、澱粉
２．４％、ペプトン０．３％、酵母エキス０．５％、肉
エキス０．３％、炭酸カルシウム０．４％を含む液体培
地（ｐＨ７．０）１０ｍl を滅菌し、これに澱粉１．０
％、ＮＺアミン０．３％、酵母エキス０．１％、肉エキ
ス０．１％、炭酸カルシウム０．３％、寒天１．０％を
含む寒天斜面培地上に２７℃、６日間培養したストレプ
トマイセス・エスピーＫ９３−０７１１（ＦＥＲＭ Ｐ
−１５２５３）の斜面培養から一白金を接種し、毎分２
２０回転するロータリシェーカーで２７℃、７２時間振
とう培養して種母を得た。次に、５００ｍl 容三角フラ
スコに試験管と同様の液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍ
l を滅菌し、これに先に得た種母を２ｍl （２％）無菌
的に移植した。
【００４４】１００リットル容ジャーファーメンターに
澱粉２．４％、グルコース０．１％、ペプトン０．３
％、酵母エキス０．５％、肉エキス０．３％、炭酸カル
シウム０．４％、セカード（１００メッシュ）０．５
％、微量金属の適量を含む培地７０リットルを仕込み、
滅菌した後、上記の方法で得られた種母１４００ｍl
（２％）を無菌的に移植し、２７℃、８日間通気攪拌培
養して培養液約７０リットルを得た。この培養液に酢酸
エチル４０リットルを加えて充分攪拌した後、遠心分離
により酢酸エチル抽出液を分離した。
澱粉２．４％、グルコース０．１％、ペプトン０．３
％、酵母エキス０．５％、肉エキス０．３％、炭酸カル
シウム０．４％、セカード（１００メッシュ）０．５
％、微量金属の適量を含む培地７０リットルを仕込み、
滅菌した後、上記の方法で得られた種母１４００ｍl
（２％）を無菌的に移植し、２７℃、８日間通気攪拌培
養して培養液約７０リットルを得た。この培養液に酢酸
エチル４０リットルを加えて充分攪拌した後、遠心分離
により酢酸エチル抽出液を分離した。
【００４５】この酢酸エチル層をロータリーエバポレー
ターにて濃縮し、１１．５ｇの粗エキスを得た。この粗
エキスについて、あらかじめクロロホルムで充填された
内径８０ｍｍ、長さ２６０ｍｍのシリカゲル（７０〜２
３０メッシュ、メルク社製）カラムに吸着せしめ、クロ
ロホルム１リットルで洗浄した後、クロロホルム−メタ
ノール（１００：１）混合溶媒で溶出することにより、
Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を含む活性画分を
７１７．７ｍｇ得た。
ターにて濃縮し、１１．５ｇの粗エキスを得た。この粗
エキスについて、あらかじめクロロホルムで充填された
内径８０ｍｍ、長さ２６０ｍｍのシリカゲル（７０〜２
３０メッシュ、メルク社製）カラムに吸着せしめ、クロ
ロホルム１リットルで洗浄した後、クロロホルム−メタ
ノール（１００：１）混合溶媒で溶出することにより、
Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を含む活性画分を
７１７．７ｍｇ得た。
【００４６】さらにこの活性画分を少量のメターノール
に溶解し、高速液体クロマトグラフイー（センシューパ
ック・ペガシル、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）にか
け、５０％アセトニトリル−Ｈ2 Ｏ溶液を移動相として
分取することにより、Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１を１
１．８ｍｇ、Ｋ９３−０７１１ Ｉ−２を２０．８ｍｇ
の純品をそれぞれ得た。
に溶解し、高速液体クロマトグラフイー（センシューパ
ック・ペガシル、内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）にか
け、５０％アセトニトリル−Ｈ2 Ｏ溶液を移動相として
分取することにより、Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１を１
１．８ｍｇ、Ｋ９３−０７１１ Ｉ−２を２０．８ｍｇ
の純品をそれぞれ得た。
【００４７】
１．Gideon Strassmann, Yoshihiro Masui, Richard Ch
izzonite, and MirandaFong, "Mechanism of Experimen
tal Cancer Cachexia. Local Involvementof IL-1 in C
olon-26 Tumor", The Journal of Immunology, 150, 23
41-2345 (1993). ２．Gideon Strassmann, Miranda Fong, John S. Kenne
y, and Chaim O. Jacob,"Evidence for the Involvemen
t of Interleukin 6 in ExperimentalCancer Cachexi
a", Journal of Clinical Investigation, 89, 1681-16
84(1992). ３．R. S. Kerbel, "Expression of Multi-cytokine Re
sistance and Multi-growth Factor Independence in A
dvanced Stage Metastatic Cancer",American Journal
of Pathology, 141, 519-524 (1992). ４．Gideon Strassmann, Chaim O. Jacob, Rovert Evan
s, Dawson Beall, andMiranda Fong, "Mechanism of Ex
perimental Cancer Cachexia.Interaction between Mon
onuclear Phagocytes and Colon-26 Carcinomaand Its
Relevance to IL-6-Mediated Cancer Cachexia", The J
ournal ofImmunology, 148, 3674-3678 (1992).
izzonite, and MirandaFong, "Mechanism of Experimen
tal Cancer Cachexia. Local Involvementof IL-1 in C
olon-26 Tumor", The Journal of Immunology, 150, 23
41-2345 (1993). ２．Gideon Strassmann, Miranda Fong, John S. Kenne
y, and Chaim O. Jacob,"Evidence for the Involvemen
t of Interleukin 6 in ExperimentalCancer Cachexi
a", Journal of Clinical Investigation, 89, 1681-16
84(1992). ３．R. S. Kerbel, "Expression of Multi-cytokine Re
sistance and Multi-growth Factor Independence in A
dvanced Stage Metastatic Cancer",American Journal
of Pathology, 141, 519-524 (1992). ４．Gideon Strassmann, Chaim O. Jacob, Rovert Evan
s, Dawson Beall, andMiranda Fong, "Mechanism of Ex
perimental Cancer Cachexia.Interaction between Mon
onuclear Phagocytes and Colon-26 Carcinomaand Its
Relevance to IL-6-Mediated Cancer Cachexia", The J
ournal ofImmunology, 148, 3674-3678 (1992).
【図１】生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１の紫外
線吸収スペクトル（メタノール中）である。
線吸収スペクトル（メタノール中）である。
【図２】生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１の赤外
線吸収スペクトル（臭化カリウム法）である。
線吸収スペクトル（臭化カリウム法）である。
【図３】生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１の 1Ｈ
−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、４００Ｍ
Ｈｚ）である。
−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、４００Ｍ
Ｈｚ）である。
【図４】生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１の13Ｃ
−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、１００．
５８ＭＨｚ）である。
−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、１００．
５８ＭＨｚ）である。
【図５】生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−２の紫外
線吸収スペクトル（メタノール中）である。
線吸収スペクトル（メタノール中）である。
【図６】生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−２の赤外
線吸収スペクトル（臭化カリウム法）である。
線吸収スペクトル（臭化カリウム法）である。
【図７】生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−２の 1Ｈ
−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、４００Ｍ
Ｈｚ）である。
−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、４００Ｍ
Ｈｚ）である。
【図８】生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−２の13Ｃ
−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、１００．
５８ＭＨｚ）である。
−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中、１００．
５８ＭＨｚ）である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【書類名】 受託番号変更届
【提出日】 平成８年１２月２６日
【旧寄託期間の名称】 工業技術院生命工学技術研
究所
究所
【旧寄託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１５２５３
【新寄託期間の名称】 通商産業省工業技術院生命
工学工業技術研究所
工学工業技術研究所
【新寄託番号】 ＦＥＲＭ ＢＰ−５７６４
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 1/06 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 高松 智 東京都港区白金５丁目９番１号 社団法人 北里研究所内
Claims (5)
- 【請求項１】 次の理化学的性質を有する生理活性物質
Ｋ９３−０７１１Ｉ−１及びＩ−２。 〔１〕生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１ （１）性状 ：淡黄色油 （２）元素組成：Ｃ22Ｈ27Ｏ4 Ｎ（高分解能高速原子衝
撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる） （３）分子量：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マスス
ペクトルによる） （４）紫外・可視部吸収スペクトル：メタノール中で測
定した紫外部吸収スペクトルは図１に示すとおりであ
り、２９９（ｌｏｇε ３．２８）、２４５（ｌｏｇε
４．２６）、２０７（ｌｏｇε ４．３８）ｎｍ付近
に特徴的な吸収極大を示す （５）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム法で測定し
た赤外線吸収スペクトルは図２に示すとおりであり、３
３９０、２９２７、１７４１、１６９５、１６０３、１
４８７、１３８１、１２８１、７５６ｃｍ-1に吸収帯を
有する （６）比旋光度〔α〕D 24＋４４．４゜（ｃ．０．３，
ＭｅＯＨ） （７）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢酸エチル、エ
チルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、ク
ロロホルム及びベンゼンに可溶、水に難溶 （８） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中
で測定）：図３に示すとおり （９）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中
で測定）：図４に示すとおり （１０）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性 〔２〕生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−２ （１）性状 ：淡黄色油 （２）元素組成：Ｃ22Ｈ27Ｏ4 Ｎ（高分解能高速原子衝
撃（ＦＡＢ）マススペクトルによる） （３）分子量：３６９（高速原子衝撃（ＦＡＢ）マスス
ペクトルによる） （４）紫外・可視部吸収スペクトル：メタノール中で測
定した紫外部吸収スペクトルは図５に示すとおりであ
り、３０４（ｌｏｇε ３．２８）、２４６（ｌｏｇε
４．２９）、２０８（ｌｏｇε ４．４０）ｎｍ付近
に特徴的な吸収極大を示す （５）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム法で測定し
た赤外線吸収スペクトルは図６に示すとおりであり、３
４１０、２９２７、１７３８、１６９３、１５９７、１
４８９、１３８０、１２８２、７５６ｃｍ-1に吸収帯を
有する （６）比旋光度〔α〕D 24＋２５．６゜（ｃ．０．３，
ＭｅＯＨ） （７）溶剤に対する溶解性：アセトン、酢酸エチル、エ
チルエーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、ク
ロロホルム及びベンゼンに可溶、水に難溶 （８） 1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中
で測定）：図７に示すとおり （９）13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中
で測定）：図８に示すとおり （１０）呈色反応：硫酸、エールリッヒ、ヨウ素に陽性 - 【請求項２】 ストレプトマイセス属に属する生理活性
物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を生産する能
力を有する微生物を培地に培養して培養物中に生理活性
物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を蓄積せし
め、該培養物から生理活性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−
１及びＩ−２を採取することを特徴とする新規な生理活
性物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２の製造法。 - 【請求項３】 ストレプトマイセス属に属し、生理活性
物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を生産する能
力を有する微生物が、ストレプトマイセスエスピー（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｋ９３−０７１１で
ある請求項２記載の製造法。 - 【請求項４】 ストレプトマイセス属に属し、生理活性
物質Ｋ９３−０７１１ Ｉ−１及びＩ−２を生産する能
力を有する微生物。 - 【請求項５】 微生物がストレプトマイセス エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）Ｋ９３−０７１
１（ＦＥＲＭ Ｐ−１５２５３）である請求項４記載の
微生物。
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