JPH0920638A - 抗菌性組成物 - Google Patents

抗菌性組成物

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Abstract

(57)【要約】 【目的】皮膚にやさしい皮膚の有害菌を特異的に排除す
る皮膚由来バクテリア、プロピオニバクテリウム・グラ
ニュローサム菌から得られた抗菌性組成物を提供するこ
とを目的とした。 【構成】本発明の抗菌性組成物は、健康な肌から採取さ
れ選択されたプロピオニバクテリウム・グラニュローサ
ム菌を培養し、培養上清に見いだされるもので、健康な
皮膚の常在細菌叢の代表菌である、プロピオニバクテリ
ウム・アクネス菌あるいはスタフィロコッカス・エピデ
ルミデス菌の生育よりも、病害菌として注目されている
スタフィロコッカス・アウレウス菌、マイクロコッカス
菌属の生育を選択的に阻害する物質を構成するもので、
皮膚の健康的な状態維持及び回復の為に活用することを
示すものである。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗菌性組成物及びその用
途に関し、更には皮膚有害菌に対して特異的又は選択的
に抗菌作用を示す抗菌性組成物、これを含有する化粧
料、アトピー性皮膚炎及び該抗菌性成分を産生する微生
物に関する。
【０００２】
【従来の技術】アトピー性皮膚炎の原因については十分
に解明されていないが、アトピー性皮膚病変部の常在菌
分析からスタフィロコッカス・アウレウス菌(Staphyloc
occus aureus)が高頻度に検出されることが知られてお
り、皮膚病変の憎悪因子の一つと考えられている。故に
治療剤としては抗菌剤（テトラサイクリン、セファロス
ポリン系、ニューキノロン系），ステロイド剤（プレド
ニン、コルチコステロン）などが用いられている。他
方、健康な肌の人の皮膚の常在細菌叢（マイクロフロー
ラ）をみると、スタフィロコッカス・エピデルミディス
菌(Staphylococcus epidermidis)が好気性マイクロフロ
ーラのほとんどを占めているのに対し、肌荒れしている
人の肌荒れ部位では前者に比べてスタフィロコッカス・
エピデルミディス菌の数は著しく減少しており、皮脂量
の多い肌荒れタイプの肌にはマイクロコッカス菌（Micr
ococcus)属やスタフィロコッカス・アウレウス等のマイ
クロフローラが大半を占め、これらは、皮膚へ悪い物質
を分泌しているとして有害菌と言われている。従来から
肌荒れ防止及び改善には天然抽出物（プラセンタエキ
ス、へチマエキスなど）、皮膚賦活剤（アミノ酸類、ビ
タミン類など）あるいは保湿剤（グリセリン、尿素、な
ど）が用いられている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ところが、抗菌剤は抗
菌スペクトルが広すぎる為に、皮膚有害菌以外の有用常
在菌まで殺し正常なマイクロフローラの形成を妨げてし
まう。また、服用によるアレルギー、胃腸障害などの副
作用がある。従って、確実な治療効果を発揮しかつ副作
用の少ない抗菌剤、例えばスタフィロコッカス・アウレ
ウス菌やマイクロコッカス属菌に対して抗菌作用を示す
皮膚に優しい低刺激性の抗菌性組成物が望まれた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで本発明は、正常な
状態の皮膚に存在する細菌を培養し、その培養液よりマ
イクロコッカス属及びスタフィロコッカス・アウレウス
に対して抗菌作用を示す物質の検索を目的として鋭意研
究を重ねた結果、プロピオニバクテリウム・グラニユロ
ーサムに属する菌の培養液中に皮膚有害菌に対して特異
的に抗菌活性を示す成分があること、さらにこれを含有
する化粧料がアトピー性皮膚炎の治療に有用であること
を見いだし、本発明を完成した。即ち、本発明はプロピ
オニバクテリウム・グラニュローサムに属し、皮膚有害
菌に対して特異的に抗菌作用を示す成分を産生する菌を
培養して得られる培養液、または該培養液を除菌して得
られる培養上清を含有することを特徴とする、皮膚有害
菌に対して特異的に抗菌作用を示す抗菌性組成物並びに
これを含有する化粧料及びアトピー性皮膚炎、並びに当
該抗菌作用を示す成分を産出する微生物を提供するもの
である。
【０００５】本発明において、皮膚有害菌に対して特異
的に抗菌作用を示す成分を産生する菌としては、例えば
ＡＤ３０００１株（以下本菌株という）が挙げられる。
本菌株の菌学的性質は以下の通りである。 ａ） 菌の形状 ： 桿菌 ｂ） 運動性 ： 無 ｃ） 胞子形成 ： 観察されず ｄ） グラム染色性 ： 陽性 ｅ） ゼラチン ： 液化能なし ｆ） インドール生成 ： なし ｇ） 硝酸還元反応 ： 陰性 ｈ） カタラーゼ反応 ： 陽性 ｉ） リパーゼ活性 ： あり ｊ） ガス生成 ： なし ｋ） ウレアーゼ反応 ： 陰性 ｌ） ヒアルロニダーゼ反応 ： 陰性 ｍ） 生育範囲 ： ｐＨ５−９， 温度２０−４０℃ 最適生育温度 ３２ −４０℃ ｎ） 酸素要求性 ： 偏性嫌気性。但し菌数の多い場合酸 素耐性が認められる。 ｏ） 嫌気条件下での酸の産生能 ：マルトース ＋ アドニトール − エリトリトール − ｐ） エスクリン加水分解 ： なし 以上の性質をもとに、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ ｍａｎｕａｌ
ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ第８版（１９７４年）の記載から、本菌株を
プロピオニバクテリウム・グラニュローサム ＡＤ３０
００１と命名し、工業技術院生命工学工業技術研究所に
寄託した。（平成７年６月３０日寄託）（受託番号FERM
P-15018）。
【０００６】本発明に用いる皮膚有害菌に対して特異的
に抗菌作用を示す成分は、上記菌株を栄養源含有培地に
接種し嫌気的に培養すれば、培養液中に生産される。か
かる菌株としては、上記ＡＤ３０００１株はもとより、
その人工変異株あるいは自然変異株であっても上記成分
を産生する能力を有するものであれば、全て本発明に使
用することができる。
【０００７】
【実施例】以下、実施例を例示して本発明の効果をより
一層具体的明瞭に説明するが、本発明はこれにより限定
されるものではない。 実施例 1 本菌株プロピオニバクテリウム・グラニュローサムＡＤ
３０００１をＧＡＭ液体培地 300ml（0.5v/v%)に接種
し、37℃、5日間嫌気的に静置培養して生菌数１０9個 /
ｍｌの培養液を作り、得られた培養液を12,000 rpmの連
続遠心分離に付し、菌体上清を0.22マイクロンのフィル
ターを用いて無菌濾過し培養上清液を得た。 ＧＡＭ液体培地の組成（１ｌ当たり）ヘ゜フ゜トン 10.0 g 大豆ヘ゜フ゜トン 3.0 gフ゜ロテオーセ゛ヘ゜フ゜トン 10.0 g 消化血清末 13.5 g 酵母エキス 5.0 g 肉エキス 2.2 g 肝臓エキス末 1.2 gフ゛ト゛ウ 糖 3.0 gリン 酸二水素カリウム 2.5 g 塩化ナトリウム 3.0 g 溶性テ゛ンフ゜ン 5.0 g L-システイン塩酸塩 0.3 gチオク゛リコール 酸 0.3 g pH 7.3±0,1
【０００８】上記実施例 1で得られた培養上清 0.02 ml
を直径６mmのペーパディスクに含ませ、予め純粋培養し
たマイクロコッカス属の菌株を接種した標準寒天培地に
置いて好気的に３７℃、２４時間培養し、そのテ゛ィス
クの周囲に透明な発育阻止帯が形成されているか否かを
観察し、阻止円の径を測定した結果を表１に示す。な
お、菌体を接種しなかったＧＡＭ培地上清には発育阻止
帯の形成は認められなかった。
【表１】
【０００９】上記、実施例 1で得られた培養上清を減圧
濃縮し凍結乾燥して粗抗菌粉末を得た。得られた抗菌粉
末の皮膚有害菌を含む皮膚常在菌に対する抗菌作用は96
穴のマルチトレイを使用するマイクロブロス希釈法常法
により測定した。サンプルは滅菌精製水に溶かした連続
濃度希釈溶液（０．１ml)をマルチトレイの穴に加え、
更に２倍濃度のGAM培地に試験菌を加えた懸濁液(１０5
cells/ml)を０．１mlずつ加えた。マルチトレイを好気
中で３７℃,４８時間（嫌気性菌は嫌気中で７２時間）
培養した。得られた最小阻止濃度（ＭＩＣ）の試験結果
を表 ２に示す。
【表２】 上記のごとく、培養上清乾燥粉末の水溶液は皮膚有害菌
といわれるスタフィロコッカス・アウレウス菌、マイク
ロコッカス菌属、バチルス菌属、大腸菌属の試験菌に対
して顕著な生育阻止効果が認められた。一方、健康な皮
膚に常在するプロピオニバクテリウム・アクネス、ある
いは、スタフィロコッカス・エピデルミデスは、ほとん
ど阻害効果が認められなかった。
【００１０】安全性 上記実施例１で得られた培養上清にジクロロメタン：メ
タノール（２：１）を加え脂質成分を除去した水溶性画
分をボランテイア５人の前腕曲内側皮膚に貼付し、２４
時間後の皮膚刺激性についての観察を行い表 ３に示す
結果を得た。
【表３】 上記のように、安全性についてはなんら問題はなかっ
た。
【００１１】実施例 ２ （化粧料） 上記実施例１で得られた培養上清液にジクロロメタン：
メタノール（２：１）を加え脂質成分を除去した水溶性
画分を凍結乾燥して得られた乾燥粉体１０ｇを精製水９
０ｇに溶かしたものを用意し、種々のスキンケア化粧品
基材と１：１までの比率で使用時手のひらで混合し、皮
膚に適用することにより、有用菌の優勢な皮膚常在菌叢
を形成維持することができる化粧料が得られた。
【００１２】実施例 ３ (肌荒れ及びアトヒ゜ー性皮膚炎用
化粧水） 上記実施例１で得られた培養上清液にジクロロメタン：
メタノール（２：１）を加え脂質成分を除去した水溶性
画分を凍結乾燥して得られた乾燥粉体５ｇを精製水７７
ｇにとき、ついでグリセリン５ｇを混合し、さらに予め
９５％エチルアルコール１０ｇにオレイルアルコール
０．１ｇ、ポリオキシエチレンモノオレエート１．０
ｇ、パラオキシ安息香酸メチルエステル０．１ｇ、少量
の酸化防止剤、香料及び色素を混合溶解させたものを攪
拌添加して化粧水を得た。対象化粧水として培養上清液
を含まないものを調製し、肌荒れとアトピー性皮膚炎を
もつ男子ボランテア（１４歳）の炎症部に塗布テストし
たところ、使用感は良好であり、スタフィロコッカス・
アウレウスとマイクロコッカスは本試験では、検出限界
以下となり、使用前のレベルから激減しており正常な皮
膚常在菌叢を形成する上でプラスに働くことが示され
た。
【００１３】実施例 ４ (クリーム） 上記実施例１で得られた培養上清液にジクロロメタン：
メタノール（２：１）を加え脂質成分を除去した水溶性
画分を凍結乾燥して得られた乾燥粉体５ｇ、グリセリン
５ｇ，ポリエチレングリコール400を２ｇ及び精製水７
０ｇを７０℃加熱混合溶解したもの中へ、予めセタノー
ル４ｇ，スクワラン５ｇ，ステアリン酸１ｇ，ミツロウ
１ｇ，ワセリン２ｇ，グリセリンモノステアレート２
ｇ，パラオキシ安息香酸エチルエステル０．１ｇ、少量
の香料を加熱混合溶解させたものを攪拌混合して、ホモ
ジナイザーで乳化し室温まで冷却してクリームを得た。
（配合量は重量％）
【００１４】実施例 ５ (ローシヨン） 上記実施例１で得られた培養上清液にジクロロメタン：
メタノール（２：１）を加え脂質成分を除去した水溶性
画分を凍結乾燥して得られた乾燥粉体５ｇ、グリセリン
８ｇ及び精製水４６ｇを７０℃で加熱混合溶解したもの
を、予めマイクロクリスタリンワックス１ｇ、ミツロウ
２ｇ，ラノリン２ｇ，流動パラフィン３０ｇ、ソルビタ
ンセスキオレイン酸エステル４ｇ，ポリオキシエチレン
ソルビタンモノオレイン酸エステル（２０ E.O）１ｇ，
ステアリン酸アルミニウム０.２ｇ，パラオキシ安息香
酸エチルエステル０.１ｇ，及び少量の香料を加熱混合
溶解させたものへ攪拌混合して、ホモジナイザーで乳化
し室温まで冷却してクリームを得た。（配合量は重量
％）
【００１５】
【発明の効果】本発明の抗菌性組成物には皮膚有害菌に
対して特異的に抗菌活性を有する。従ってこれを含有す
る化粧料は、皮膚上に常在する他の有用微生物に影響を
与えず、正常な皮膚常在菌叢に戻し、肌荒れ及びアトピ
ー性皮膚炎を有効に治癒させることが期待できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/74 ＡＤＡ Ａ６１Ｋ 35/74 ＡＤＡＡ

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】プロピオニバクテリウム・グラニュローサ
    ム(Propionibacteriumgranulosum)に属する菌体、その
    菌体を培養して得られる培養物、又は該培養物を除菌し
    て得られる培養上清物、の内のひとつ又はふたつ以上を
    含有する抗菌性組成物。
  2. 【請求項２】プロピオニバクテリウム・グラニュローサ
    ム(Propionibacteriumgranulosum)に属し、皮膚有害菌
    に対して選択的に抗菌作用を示す成分を産生する菌、そ
    の菌を培養して得られる培養液、又は該培養液を除菌し
    て得られる培養上清を含有することを特徴とする、皮膚
    有害菌に対して選択的に抗菌作用を示す抗菌性組成物。
  3. 【請求項３】プロピオニバクテリウム・グラニュローサ
    ムに属し皮膚有害菌に対して選択的に抗菌作用を示す成
    分を生産する菌が、プロピオニバクテリウム・グラニュ
    ローサム ＡＤ３０００１ 生工研菌寄（番号 FERM P-
    15018）である請求項１、２記載の抗菌性組成物。
  4. 【請求項４】請求項１、２または３記載の抗菌性組成物
    を含有する化粧料。
  5. 【請求項５】請求項１、２または３記載の抗菌性組成物
    を含有するアトピー性皮膚炎用化粧水。
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