JPH09211000A - 黄色ブドウ球菌の検出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 ニワトリ免疫グロブリンを抗体として用
いることを特徴とする黄色ブドウ球菌の検出方法、及び
黄色ブドウ球菌と特異的に反応するニワトリ免疫グロブ
リンを含む黄色ブドウ球菌の検出用試薬。 【効果】 本発明により、簡単で迅速且つ高精度な黄色
ブドウ球菌の検出法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、黄色ブドウ球菌の
検出方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureu
s)は、ヒトや動物に種々の疾患を惹起する病原性細菌の
一種である。黄色ブドウ球菌が食物を汚染し、そこで増
殖すると、菌体外毒素（エンテロトキシン）が産生され
る。エンテロトキシンを含有する食物を摂取すると、２
〜６時間後に急性胃腸炎の症状が現れ、その後、嘔吐、
腹痛、下痢を起こす。重症の場合には微熱を伴い、血圧
の低下、胸内苦悶、意識混濁、脈拍数の減少などの著明
な中毒症状を起こし、緊急入院を必要とする場合もあ
る。又、黄色ブドウ球菌の一種であるＭＲＳＡ（メシチ
リン耐性黄色ブドウ球菌）は、大きな社会問題となって
いる病院内感染症の原因菌である。

【０００３】黄色ブドウ球菌は、食品衛生上及び医学
上、ヒトと深く関わっているため、これを、簡単で迅速
且つ高精度に検出する方法の確立が求められている。黄
色ブドウ球菌の検出法は、これまで、選択分離培地を用
いる培養法が中心であった。培養法では、まず、マンニ
ット食塩培地等を用いて48時間の前培養を行う。次い
で、24時間の純培養を行って菌を鑑別し、更にウサギプ
ラズマ、ＰＳラテックスを用いて菌の同定作業を行って
いる（食品衛生検査指針、微生物編）。培養法において
は、選択分離培地の保存性及び培地作製の煩雑さが問題
となっており、また、培養に多くの時間がかかる点も問
題となっている。

【０００４】培養法以外の検出法としては、黄色ブドウ
球菌に特異的なリボゾームＲＮＡ遺伝子に対するＤＮＡ
プローブを用いる方法（特開平5-49477号公報）が知ら
れているが、この方法は日常検査法としては、煩雑なＤ
ＮＡ抽出操作が必要である点で簡便ではなく、培養法と
比べてコストが高いという点が問題となっていた。

【０００５】上記以外の検出法として、黄色ブドウ球菌
が産生するサーモヌクレアーゼ或いはエンテロトキシン
に対する抗体を利用した酵素免疫測定法（Enzyme-linke
d immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ法）を用いる方法
〔Archiv fur Lebensmittelhygiene.35,97(1984)、特開
平6-88824号公報〕、ヒトフィブリノーゲン及び免疫グ
ロブリンＧ（以下「ＩｇＧ」という）で感作したポリス
チレンラテックス粒子が、黄色ブドウ球菌の産生するプ
ロテインＡと特異的に反応して凝集反応を起こすことを
利用する方法（特表平2-502942号公報）等が知られてい
る。

【０００６】上記の凝集反応法やＥＬＩＳＡ法におい
て、抗体としては、哺乳動物（例えば、マウス、ウサギ
等）由来のＩｇＧが用いられている。しかし、哺乳動物
由来のＩｇＧを用いる方法では、該ＩｇＧが、黄色ブド
ウ球菌の産生するプロテインＡと非免疫学的に結合する
という問題があった。プロテインＡは、黄色ブドウ球菌
の大多数（85〜95％）が産生し、細胞壁成分の５％を占
めるタンパク質である。プロテインＡは、哺乳動物（例
えば、ヒト、マウス、ウサギ等）のＩｇＧのＦｃフラグ
メントと非免疫学的に結合する。

【０００７】尚、「非免疫学的な結合」とは、抗体の抗
原結合部位であるＶ領域以外の領域と、抗原との結合を
意味する。又、哺乳動物由来のＩｇＧは、Group G Stre
ptococciの産生するプロテインＧとも非免疫学的に結合
する（新生化学実験講座 分子免疫学III）。このた
め、哺乳動物由来のＩｇＧを用いる方法では、検体中に
Group G Streptococciの菌体やプロテインＧが混入して
いた場合、該抗体が、これらの混入物との交差反応性を
示し、黄色ブドウ球菌の特異的な検出が困難であるとい
う問題があった。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、簡単で迅速
且つ高精度な黄色ブドウ球菌の検出方法を提供すること
を目的とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題に
基づいて鋭意研究を行った結果、黄色ブドウ球菌の検出
法において、抗体としてニワトリ免疫グロブリンを使用
することにより、特異的に黄色ブドウ球菌を検出できる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、
本発明は、ニワトリ免疫グロブリンを抗体として用いる
ことを特徴とする黄色ブドウ球菌の検出方法である。

【００１０】ここで、免疫測定法としては、サンドイッ
チＥＬＩＳＡ法が挙げられ、抗体としては１次及び／又
は２次抗体が挙げられる。また、ニワトリ免疫グロブリ
ンとしては、黄色ブドウ球菌、具体的にはプロテインＡ
と特異的に反応するものが挙げられる。さらに、本発明
は、黄色ブドウ球菌と特異的に反応するニワトリ免疫グ
ロブリンを含む黄色ブドウ球菌の検出用試薬である。

【００１１】以下、本発明を詳細に説明する。本発明
は、黄色ブドウ球菌の検出法において、抗体としてニワ
トリ免疫グロブリン（以下「ＩｇＹ」ともいう）を用い
ることを特徴としている。ＩｇＹは、哺乳動物から得ら
れる抗体と異なり、黄色ブドウ球菌の産生するプロテイ
ンＡ及びGroup G Streptococciの産生するプロテインＧ
と非免疫学的な結合をしないことが知られている。

【００１２】従って、ＩｇＹを用いることにより、哺乳
動物由来の抗体と非免疫学的に結合する物質や、それを
生産する微生物等が混在している検体であっても、黄色
ブドウ球菌を特異的に且つ高感度で検出することが可能
となる。本発明のＩｇＹとしては、ポリクローナル抗
体、モノクローナル抗体のいずれをも使用することがで
きる。

【００１３】ポリクローナルＩｇＹの作製は、常法に従
って行うことができる。例えば、抗原をフロインドのア
ジュバンド中に懸濁するか、或いはそのままをニワトリ
に投与して、免疫および追加免疫を行う。最終追加免疫
後、一定期間をおいて採血し、常法に従って血清を得
る。得られた血清に硫酸アンモニウム等を加えて塩析を
行い、タンパク質画分を得る。タンパク質画分を担体結
合プロテインＧカラムに供し、ポリクローナル抗体をカ
ラムに吸着させる。吸着画分を常法に従って溶出し、ポ
リクローナル抗体を得る。

【００１４】ポリクローナルＩｇＹを効率よく調製する
方法として、抗原を投与したニワトリが産出した鶏卵よ
りポリクローナル抗体を精製する方法を使用することが
できる（〔J. Vet. Med. B33, 609(1986) 〕。具体的な
調製法は実施例４に記載する。尚、鶏卵からのポリクロ
ーナル抗体の精製は、市販の精製キット（ファルマシア
製）を用いて行うこともできる。

【００１５】モノクローナルＩｇＹの作製も、常法に従
って行うことができる。例えば、ニワトリＢリンパ芽細
胞由来のチミジンキナーゼ欠損株と免疫したニワトリ脾
細胞との融合細胞（ハイブリドーマ）より、モノクロー
ナル抗体を精製する方法を使用することができる（特開
平2-186980号公報）。

【００１６】本発明の黄色ブドウ球菌の検出法として
は、抗原抗体反応を利用するものであれば、公知の免疫
学的測定手法を用いることができる。例えば、凝集反応
法、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、放射能免疫測定法
（ＲＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）等が挙げら
れる。この中でもＥＩＡ法、特にサンドイッチＥＬＩＳ
Ａ法（Enzyme-linked immunosorbent assay)は、感度が
極めて良い点で好ましい方法である。サイドイッチＥＬ
ＩＳＡ法を用いた本発明の検出方法を以下に示す。

【００１７】サンドイッチＥＬＩＳＡ法においては、先
ず、抗体（１次抗体）を固体担体に固定する。固定化さ
れた１次抗体を固相化抗体という。次いで、検体中の抗
原を固相化抗体に結合させた後、結合しなかった抗原を
除去する。次いで、適当な酵素で標識した抗体（２次抗
体) を加え、固相化抗体上の抗原に結合させる。別法と
して、２次抗体を標識せず、２次抗体に対する抗体（３
次抗体）を標識する方法もある。最後に、固相化抗体に
結合した標識物質の活性を測定して抗原の有無やその量
を求める。

【００１８】本発明でサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用い
る場合、１次抗体と２次抗体は、一方のみがＩｇＹであ
ってもよく、又、両者ともＩｇＹであってもよい。１次
抗体としてＩｇＹを用いる場合、２次抗体はＩｇＹであ
ってもよく、非ニワトリ動物由来の抗体（例えば、ウサ
ギ、マウス、ヤギ等の哺乳類のＩｇＧ）であってもよ
い。１次抗体として非ニワトリ動物由来の抗体を用いる
場合は、２次抗体としてＩｇＹを用いる。非ニワトリ動
物由来の抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクロ
ーナル抗体のいずれをも使用することができる。

【００１９】非ニワトリ動物由来のポリクローナル抗体
の作製は、常法に従って行うことができる。例えば、抗
原を用いて免疫した動物（例えば、ウサギ、マウス、ヤ
ギ等）の血清より、ポリクローナル抗体ＩｇＹを得る場
合と同様の方法を用いてポリクローナル抗体を得る。具
体的な方法は実施例１に記載する。

【００２０】モノクローナル抗体の調製も、常法に従っ
て行うことができる。例えば、抗原で免疫した非ニワト
リ動物の脾細胞とミエローマ細胞とを融合してハイブリ
ドーマを得、これをBALB/cマウス等の動物の腹腔に接種
し、該動物から腹水を回収する。得られた腹水を遠心分
離等により清澄にした後、プロテインＧを固定化したカ
ラムに供して抗体を吸着させる。吸着した抗体を常法に
従って溶出することにより、モノクローナル抗体を精製
することができる。具体的な方法は実施例３に記載す
る。この他、ハイブリドーマを常用の培養液で培養し、
培養液中に分泌されるモノクローナル抗体を精製する方
法を用いることもできる。

【００２１】本発明の抗体が特異的に反応する抗原とし
ては、黄色ブドウ球菌の生体成分であれば如何なるもの
でもよく、例えば、タンパク質（プロテインＡ、サーモ
ヌクレアーゼ、エンテロトキシン等）、核酸、多糖類、
脂質、その他の細胞表層成分等が使用できる。抗体産生
能を有する動物を免疫して本発明の抗体を得る場合、投
与する抗原は、上記の生体成分の精製物の他、菌体全体
（例えば菌体熱処理物、菌体ホルマリン処理物等）であ
ってもよい。

【００２２】黄色ブドウ球菌の高精度な検出・定量のた
めには、黄色ブドウ球菌に特異的な生体成分を抗原とし
て選択することが好ましいが、上記の生体成分のうち、
特にプロテインＡは、黄色ブドウ球菌の大多数（85〜95
％）が産生する細胞壁タンパク質であり、抗原として好
適である。

【００２３】サンドイッチＥＬＩＳＡ法においては、ま
ず、１次抗体を固体担体に固定して固相化抗体を調製す
る。固体担体としては、例えば、各種マイクロタイター
プレート、マイクロタイターチューブ、磁気粒子等が使
用できる。１次抗体を適当な緩衝液（例えば、炭酸緩衝
液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等）で希釈した後、固
体担体と接触させ、4〜37℃で30分間以上インキュベー
トすれば、１次抗体が固体担体に固定される。

【００２４】次に、固体担体を、界面活性剤〔Tween20
（バイオラッド社製）等〕を含有する緩衝液（例えば、
リン酸緩衝液、トリス緩衝液、ホウ酸緩衝液等）により
数回洗浄して、未吸着の抗体を除去する。

【００２５】次に、固体担体表面上の遊離結合基をブロ
ックするため、ブロッキング緩衝液により固体担体をブ
ロッキング緩衝液と接触させる。ブロッキング緩衝液と
しては、ウシ血清アルブミン（BSA)、卵白アルブミン
(OVA)、スキムミルク等を含有する緩衝液（例えばリン
酸緩衝液、トリス緩衝液、ホウ酸緩衝液等）を用いるこ
とができる。ブロッキング処理は、４〜37℃で30分以上
行うことが好ましい。

【００２６】次に、固体担体を、界面活性剤を含有する
緩衝液で洗浄して、ブロッキング緩衝液を除去する。こ
の洗浄は、前記のモノクローナル抗体或いはポリクロー
ナル抗体の固定後の洗浄と同様に行うことができる。こ
うして、固相化抗体が調製される。

【００２７】次に、固相化抗体を、黄色ブドウ球菌が含
まれると思われる検体と接触させる。これにより、検体
中の黄色ブドウ球菌が、固相化抗体と特異的に結合す
る。この接触は、４〜37℃で30分間以上行うことが好ま
しい。検体を希釈する場合は、リン酸緩衝液、トリス緩
衝液、ホウ酸緩衝液、生理食塩水等が使用できる。次
に、固相化抗体を前記のようにして洗浄する。

【００２８】次に、固相化抗体を、２次抗体を含有する
緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、ホウ酸
緩衝液等）と接触させる。この接触は、４〜37℃で30分
間以上行うことが好ましい。これにより、２次抗体が、
固相化抗体に固定された黄色ブドウ球菌と特異的に結合
する。次に、前記のようにして洗浄し、結合しなかった
２次抗体を除去する。

【００２９】固相化抗体に固定された２次抗体を検出す
るために、２次抗体を適当な酵素により標識する。酵素
としては、例えば、西洋わさびパーオキシダーゼ、アル
カリフォスフォターゼ、β−ガラクトシターゼ、ウレア
ーゼ、ルシフェラーゼ、アセテートカイネース等が使用
できる。

【００３０】酵素としてパーオキシダーゼを使用する場
合、基質としては過酸化水素が、発色試薬としては２，
２’−アジノジ−（３−エチルベンズチアゾリン−６−
スルホン酸）（ＡＢＴＳ）、３，３’，５，５’−テト
ラメチルベンジジン等が用いられる。具体的な方法を実
施例６に記載した。

【００３１】サンドイッチＥＬＩＳＡ法においては、２
次抗体の固定量が、固定されている黄色ブドウ球菌の菌
数、すなわち検体中の黄色ブドウ球菌の菌数を反映す
る。従って、２次抗体の固定量を測定することにより、
検体中の黄色ブドウ球菌の量を予測することができる。

【００３２】サンドイッチＥＬＩＳＡ法の別法として、
２次抗体を酵素標識せず、２次抗体に対する抗体（３次
抗体）を酵素標識する方法もある。３次抗体としては、
２次抗体の調製に用いる動物と別種の動物の抗体であっ
て、２次抗体の調製に用いる動物種の免疫グロブリンに
対する抗体、又はその断片が用いられる。例えば、２次
抗体がＩｇＹである場合は、３次抗体としてＩｇＹと特
異的に反応するヤギＩｇＧを用いればよい。３次抗体の
標識は、２次抗体を標識する場合と同様の方法が使用で
きる。

【００３３】

【発明の実施の形態】以下、実施例により本発明をさら
に具体的に説明する。但し、本発明はこれら実施例に限
定されない。本実施例では、サンドイッチＥＬＩＳＡ法
により黄色ブドウ球菌の検出を行った。１次抗体として
はウサギ免疫グロブリン（ポリクローナル抗体）を、２
次抗体としてはＩｇＹ（ポリクローナル抗体）を使用し
た。尚、２次抗体の標識は、パーオキシダーゼを用いて
行った。

【００３４】〔実施例１〕１次抗体（ウサギ由来のポリ
クローナル抗体）の調製 黄色ブドウ球菌〔Staphylococcus aureus 494(9-16)
株；国立予防衛生研究所、食品衛生微生物部より分与〕
の一夜培養液を、100℃で15分間加熱処理した後、遠心
分離により集菌した。菌体を生理食塩水に懸濁し、10mg
/ml濃度とした。菌体懸濁液に、フロインドの完全、不
完全アジュバントを加えて乳化した。該乳化液をウサギ
の腹腔内に３週間毎に３回注射し、免疫および追加免疫
を行った。最終免疫の６日後に採血し、定法に従って血
清を得た。得られた血清に、33％飽和となるように硫酸
アンモニウムを加え、遠心分離により塩析物を集めた。
塩析物を生理的リン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解した後、
溶解液をＰＢＳに対して透析し、硫酸アンモニウムを除
去した。透析後の溶解液を、ハイトラッププロテインＧ
カラム（ファルマシア製）に供し、免疫グロブリンをカ
ラムに吸着させた。カラムを中性のＰＢＳで洗浄した
後、カラムに吸着した免疫グロブリンをグリシン塩酸緩
衝液（pH2.7）により溶出し、ポリクローナル抗体を得
た。

【００３５】〔実施例２〕２次抗体の調製 ２次抗体としてニワトリ由来の抗プロテインＡ抗体（ポ
リクローナル抗体）を用いた。２次抗体の調製は、Lsch
らの方法〔J. Vet. Med. B33, 609(1986) 〕に従って行
った。

【００３６】プロテインＡ（ファルマシア製）溶液に、
フロインドの完全アジュバントを加えて乳化した。該乳
化液をニワトリ（白色レグホン）に10日毎に合計４回注
射して、免疫および追加免疫を行った。最終免疫の５日
後より採卵を行い、卵黄を分離した。卵黄を４倍量の0.
１M NaClを含む0.01M リン酸緩衝液（pH7.６）で希釈し
た後、ポリエチレングリコール（Mw.8000)を3.５％にな
るように加えた。これを14,000×ｇで20分間遠心分離し
た。遠心上清に最終濃度が12％になるようにポリエチレ
ングリコール（Mw.8000)を加えた。沈澱画分をDEAE-セ
ルロースを充填したカラムに供し、250mM リン酸カリウ
ム（pH8.０）溶液で溶出される画分を得た。溶出画分
に、50％飽和となるように硫酸アンモニウムを加え、塩
析物を遠心分離により集めた。塩析物を生理食塩水に溶
解した後、ＰＢＳに対して透析し、２次抗体画分とし
た。

【００３７】〔実施例３〕２次抗体の酵素標識 ２次抗体の標識は、標識酵素としてパーオキシダーゼを
用い、Nakane等の方法（J. Histochem. Cytochem. 22,
1974) に従って行った。先ず、パーオキシダーゼを過ヨ
ウ素酸で酸化した後、２次抗体と結合させ、次いで、Ｎ
ａＢＨ₄ で還元し安定化させた。反応液をＰＢＳに対し
て透析し、沈澱を除去した後、ゲル濾過法による精製を
行い、標識２次抗体を得た。

【００３８】〔実施例４〕ＥＬＩＳＡ法による黄色ブド
ウ球菌の検出 (1) 96ウエルのマイクロプレート（住友ベークライト社
製）の各ウエルに、１次抗体溶液〔10μg/ml１次抗体、
0.１％炭酸緩衝液（pH9.0)〕100μl を注入し、室温で
２時間インキュベートした。ウエルから１次抗体溶液を
除いた後、各ウエルに 200μl の洗浄液（Tween20 を含
有するリン酸緩衝液）を加え、３分後に洗浄液を除去し
た。この洗浄操作を更に３回繰り返す事により、ウエル
を洗浄した。

【００３９】次に、ブロッキング液（スキムミルクを含
有するリン酸緩衝液）をそれぞれのウエルに 200μl ず
つ加え、37℃で１時間インキュベートする事により、ウ
エルの非特異的結合部位のブロッキングを行った。ウエ
ルからブロッキング液を除いた後、前記の洗浄液にて３
回洗浄を行った。

【００４０】(2) 検体溶液として、黄色ブドウ球菌〔St
aphylococcus aureus 494(9-16) 株〕の24時間培養液及
び生理食塩水による希釈液を調製した。検体溶液を 100
μlずつ各ウエルに加え、37℃で１時間インキュベート
した。ウエルから検体溶液を除いた後、前記の洗浄液に
て３回洗浄を行った。

【００４１】(3) 標識２次抗体を、上記のブロッキング
液にて１μg/ml濃度となるように希釈した後、各ウエル
に 100μl ずつ加え、37℃で１時間インキュベートし
た。ウエルから標識２次抗体溶液を除いた後、前記の洗
浄液にて３回洗浄を行った。

【００４２】(4) 各ウエルに、基質溶液（0.003 ％、過
酸化水素、0.04％、ＡＢＴＳ）100μl を加え、37℃で1
5分間インキュベートして酵素反応させた後、停止液
（１％ラウリル硫酸ナトリウム）100μl を加え、反応
を停止させた。マイクロプレートをプレートリーダー
（ラボシステムズ社製）に装着し、 405nmでの吸光度を
測定した。検体溶液中の黄色ブドウ球菌の濃度と、 405
nmにおける吸光度との関係を図１に示す。

【００４３】図１より明らかな通り、本発明の測定法に
おいて、黄色ブドウ球菌の24時間培養物の濃度と、 405
nmにおける吸光度との間に容量依存関係が確認された。
従って、本発明の方法により、黄色ブドウ球菌が簡単で
迅速且つ高精度に検出できることがわかる。

【００４４】〔実施例５〕実施例４と同様の方法を用
い、黄色ブドウ球菌を含む各種ブドウ球菌の濃度と、 4
05nmにおける吸光度との関係を調べた。使用した菌株
は、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus 494株）、
ブドウ球菌（Staphylococcus capitis T13株）、ブドウ
球菌（Staphylococcus epidermidis T6 株）である（い
ずれの株も国立予防衛生研究所、食品衛生微生物部より
分与）。

【００４５】結果を図２に示す。図２より明らかな通
り、本発明の測定法では、黄色ブドウ球菌とは異なるブ
ドウ球菌の菌株の24時間培養物の濃度は、 405nmにおけ
る吸光度の間の容量依存関係を示さなかった。すなわ
ち、本発明の測定法は、黄色ブドウ球菌以外のブドウ球
菌に対して交差反応性を示さないことが確認された。

【００４６】〔実施例６〕実施例４と同様の方法を用
い、ブドウ球菌とは異なる種類の細菌に対する特異性を
調べた。使用した菌株は、大腸菌（Escherichia coli W
P2株）、サルモネラ菌（Salmonella typhimurium TA100
株）である（いずれの株も国立衛生試験所、変異遺伝部
から分与）。結果を図３に示す。図３より明らかな通
り、本発明の測定法は、黄色ブドウ球菌とは異なる種類
の細菌に対して交差反応性を示さないことが確認され
た。

【００４７】

【発明の効果】本発明により、簡単で迅速且つ高精度な
黄色ブドウ球菌の検出法が提供される。

【図面の簡単な説明】

【図１】黄色ブドウ球菌の濃度と吸光度との関係を示す
図である。

【図２】各種ブドウ球菌の濃度と吸光度との関係を示す
図である。

【図３】各種ブドウ球菌以外の細菌の濃度と吸光度との
関係を示す図である。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ニワトリ免疫グロブリンを抗体として用
   いることを特徴とする黄色ブドウ球菌の検出方法。
2. 【請求項２】 検出方法がサンドイッチＥＬＩＳＡ法に
   よるものである請求項１記載の黄色ブドウ球菌の検出方
   法。
3. 【請求項３】 抗体が１次及び／又は２次抗体である請
   求項１又は２記載の黄色ブドウ球菌の検出方法。
4. 【請求項４】 ニワトリ免疫グロブリンが黄色ブドウ球
   菌と特異的に反応するものである請求項１〜３のいずれ
   か１項に記載の黄色ブドウ球菌の検出方法。
5. 【請求項５】 ニワトリ免疫グロブリンがプロテインＡ
   と特異的に反応するものである請求項１〜３のいずれか
   １項に記載の黄色ブドウ球菌の検出方法。
6. 【請求項６】 黄色ブドウ球菌と特異的に反応するニワ
   トリ免疫グロブリンを含む黄色ブドウ球菌の検出用試
   薬。