JPH0921807A - 乾式免疫分析要素及び免疫学的に反応性のリガンドの分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 乾式免疫分析要素における分析スライド間の
変動を縮小すること。 【解決手段】 （ａ）酵素標識リガンド又は酵素標識レ
セプターの帯域、（ｂ）展開帯域、並びに（ｃ）リガン
ドに対する固定化レセプター及び場合により存在する標
識リガンドを一定濃度で含有し、その際前記レセプター
は直径０．１〜５μｍのポリマービーズに共有結合され
ているレセプター帯域を担持する支持体を含むリガンド
分析用の乾式免疫分析要素であって、該要素がジアリー
ルテルリド系化合物を含有し且つ前記複数の帯域が同じ
層内に存在しても又は別々の層に存在してもよいことを
特徴とする乾式免疫分析要素。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は免疫分析要素とその
免疫分析における使用に関する。

【０００２】

【従来の技術】自然の免疫反応を利用する免疫分析（イ
ムノアッセイ）は、臨床化学分野における分析技法とし
て幅広く使用されている。反応の特異性故、免疫分析は
生物学的流体中に極低濃度で存在する生物学的アナライ
トを定量するのに特に有利である。このようなアナライ
トとして、例えば、抗原、抗体、治療薬、麻酔薬、酵
素、ホルモン、タンパク質、等が挙げられる。分析のタ
ーゲットとなるアナライトを本明細書では「リガンド」
と称する。このリガンドを特異的に認識し且つこれと反
応して複合体を形成する化合物を本明細書では「レセプ
ター」と称する。このレセプターとリガンドは複合対
（コンジュゲートペア：conjugate pair）を形成する。
この対のいずれの成分もレセプター又はリガンドとして
機能しうる。

【０００３】競合型アッセイの場合、標識化された免疫
成分誘導体及びアナログをはじめとする標識アナライト
がアッセイの必須成分であり、また、サンドイッチアッ
セイの場合、アナライトに対する標識レセプターを使用
する必要がある。本明細書ではこれらをそれぞれ標識リ
ガンド及び標識レセプターと称する。競合型結合免疫分
析では、一定量の適当なレセプターと反応させる際、標
識リガンドを未標識リガンドと競合するように配置す
る。未知濃度のリガンドは、結合した又は結合していな
い（すなわち、遊離の）標識リガンドのシグナル測定値
から定量することができる。以下のように反応は進行す
る。 リガンド＋標識リガンド＋レセプター−基質 ＜−−＞ リガンド−レセプター＋標識リガンド−レセプター−基質

【０００４】「サンドイッチ」イムノアッセイ又はイム
ノメトリックアッセイとして知られている別の免疫分析
では、リガンドの別々のエピトープ部位に結合する２種
以上のレセプター分子にリガンドを接触させる。レセプ
ターの一方を適当に標識化しておき、その他方を固体支
持体上に固定化しておくか又はこれに固定化できる。リ
ガンドの量は、リガンドと２種のレセプターとの中で結
合された複合体の量に直接比例する。これは以下のよう
に説明される。 基質−レセプター₁ ＋リガンド＋レセプター₂ −標識 ＜−−＞ 基質−レセプター₁ −リガンド−レセプター₂ −標識

【０００５】常用されている標識として放射性標識、酵
素、発色団、蛍光団、安定ラジカル並びに酵素補助因
子、阻害剤及びアロステリック作働子が挙げられる。免
疫分析要素は米国特許第４，５１７，２８８号及び同第
４，２５８，００１号明細書からも周知である。一般
に、このような要素には、粒状層内に固定化されたレセ
プター（例、リガンドに対する抗体）が含まれる。さら
に、免疫分析要素は、結合された又は結合されていない
種との相互作用を通して、試料中のリガンド濃度と相関
関係をもちうるシグナルを発生させる試薬系を通常は含
有する。使用に際しては、試料を酵素標識リガンドと手
動で混合し、そして要素へ適用する。その後、標識リガ
ンドに対する基質を含有する溶液を特定の層に適用す
る。基質との反応は、酵素によって触媒され、最終的に
シグナルの発色を引き起こす反応生成物を形成させる。
この色の反射濃度は試料中のリガンド濃度に相関させる
ことができる。同様なシグナル発生系が、その他の既知
の常用標識、例えば、放射性標識、発色団、蛍光団、安
定ラジカル並びに酵素補助因子、阻害剤及びアロステリ
ック作働子についても周知である。

【０００６】多層免疫分析要素は、上記の免疫分析原理
を利用して流体試料中のアナライトを測定する薄層要素
である。競合型アッセイ要素では、発色速度がアナライ
ト存在量に反比例し、またサンドイッチアッセイ要素で
は、発色速度がアナライト存在量に直接比例する。さら
に、発色速度は、固定化レセプターに結合された酵素標
識アナライト（例、薬物）又は酵素標識レセプターの活
性にも直接比例する。免疫分析が安定な検量を維持する
ためには、その特定の検量期間中はいずれのスライドに
おいても酵素活性（測定速度）が失われてはならない。

【０００７】免疫分析要素は、必要な時に１個の要素を
取り出すことができる５０個の要素を含むプラスチック
製「カートリッジ」として顧客に供給される場合が多
い。これらの要素は互いの上部に積み重ねられており、
カートリッジ内の下側４９個の要素はいずれもその上面
が上側の要素によって覆われている。しかしながら、こ
の積重ね体の最上部に位置する要素にはこのような覆い
がないため、その要素の表面はその他の４９個の要素は
受けることのない環境因子に晒される。例えば、最上部
（又は第一）の要素は、カートリッジが製造中に取り扱
われている時や、カートリッジが臨床分析装置の要素供
給部に配置されている時には、残りの要素よりも空気流
や光に晒されやすい。使用前の保存中には、封止された
フィルムでライニングされた袋の中にカートリッジ自体
が保存されている。しかしながら、最上部の要素はその
他の４９個の要素よりも封止袋内の残留空気や湿度に晒
されている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】カートリッジ内の要素
に共通の試験流体を反応させた場合、最上部（又は第
一）の要素で観測される発色速度は、同じカートリッジ
に含まれる最上部の要素の下方に位置する要素に同じ試
験流体を適用した場合に観測される発色速度よりも常に
低くなることがわかった。この事象を「第一スライドバ
イアス」と称する。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明の一つの態様によ
ると、（ａ）酵素標識リガンド又は酵素標識レセプター
の帯域、（ｂ）展開帯域、並びに（ｃ）リガンドに対す
る固定化レセプター及び場合により存在する標識リガン
ドを一定濃度で含有し、その際前記レセプターは直径
０．１〜５μｍのポリマービーズに共有結合されている
レセプター帯域を担持する支持体を含むリガンド分析用
の乾式免疫分析要素であって、該要素がジアリールテル
リド系（ＤＡＴ）化合物を含有し且つ前記複数の帯域が
同じ層内に存在しても又は別々の層に存在してもよいこ
とを特徴とする乾式免疫分析要素が提供される。

【００１０】上記の要素によると、第一スライドバイア
ス、すなわちカートリッジ内の最上部要素の発色速度が
同じカートリッジ内のその他の要素の発色速度と差異が
あること、が低減される。その上、カートリッジ内のす
べての要素がより長期間の保存性を示す。本発明の実施
例は、いずれのジアリールテルリド（ＤＡＴ）化合物で
もこれらの利点が得られることを確立するものである。
さらに、このＤＡＴ化合物は、一般に酵素組成物、特に
西洋ワサビペルオキシダーゼ及びこのような酵素が標識
として用いられている複合体（コンジュゲート）を安定
化する上でも有用である。例えば、該化合物は、本発明
の乾式要素における場合と同様に溶液アッセイにおいて
も使用することができる。

【００１１】本発明はさらに、水性液体試料中に含まれ
る免疫学的に反応性のリガンドの分析方法であって、
（Ａ）本発明による乾式免疫分析要素を準備し、（Ｂ）
前記要素の最上部の帯域又は層の有限領域に前記液体試
料を接触させて（１）固定化リガンド−レセプター複合
体、（２）固定化酵素標識リガンド−レセプター複合体
もしくは（３）前記（１）と（２）の混合物又は固定化
レセプター−リガンド−標識レセプター複合体を形成さ
せ、（Ｃ）前記有限領域に基質溶液を接触させて発色反
応を触媒し、そして（Ｄ）前記リガンドの濃度を比色測
定する工程を含む分析方法を提供する。

【００１２】上記の方法では、標識レセプター又は標識
リガンドが、固定化標識リガンド又は固定化標識レセプ
ターから分離されている。このような分離は、当該技術
分野で知られている手段、例えば、過酸化水素溶液など
の基質溶液を添加する方法によって行うことができる。発明の詳細な説明 本発明の要素は、標識リガンド又は標識レセプター、展
開帯域及びレセプター帯域を含む。これら各種帯域は一
つの塗布層に存在してもよいし、また別々の塗布層に存
在してもよい。例えば、展開帯域とレセプター帯域が単
一層内にあっても、或いはそれらが別々の層にあっても
よい。別々の層の場合、それらは支持体上で任意の順序
で配置されることができる。また、別々の層を、支持体
上にレセプター層が直接位置し、そのレセプター層の上
に展開層が直接位置し、そしてその展開層の上に標識リ
ガンド又は標識レセプター帯域が位置するように配置す
ることができる。レセプター帯域が完全に分離された層
を形成する場合、該層は下記のタイプのバインダーをさ
らに含む。本発明の要素は以下に記載するようなさらに
別の層を含むことができる。このような層はいずれも当
該技術分野で周知の塗布技法によって塗布することがで
き、これについては以下、簡単に説明する。

【００１３】展開層又は展開帯域は多孔質である。それ
は必須成分としてジアリールテルリドを含有する。代表
的な化合物である下式： Ａｒ¹ −Ｔｅ−Ａｒ² で示されるジアリールテルリドは、以下に記載するＨＣ
Ｇ又はＣＲＰアッセイ用スライドに内蔵された場合、第
一スライドバイアスを著しく低減させる。これらの化合
物群はまた、化合物又はそれらの第一スライドバイアス
防止能を評価するために設計されたモデル系においてＨ
ＲＰ活性を維持する。有用なジオルガノテルリドとし
て、Ａｒ¹ 及びＡｒ² が、置換されていてもいなくても
よい同じ又は異なるアリール基又はヘテロアリール基で
ある物質が挙げられる。その置換基を下記に定義する。

【００１４】

【化８】

【００１５】上式中、ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＴｅであ
り、Ｒ¹¹、Ｒ¹²、Ｒ¹³、Ｒ²¹、Ｒ²²、Ｒ²³、Ｒ³¹、
Ｒ³²、Ｒ³³、Ｒ⁴¹、Ｒ⁴²及びＲ⁴³は同じであるか又は異
なり且つ水素、炭素原子数１〜５個のアルキル、ＯＨ、
ＯＲ¹ 、ＳＨ、ＮＨ₂ 、ＮＨＲ¹ 、ＮＨＲ¹ ₂、ＮＲ¹ Ｒ
² 、ＣＯ₂ Ｈ及びその塩、ＣＯ₂ Ｒ¹ 、ＳＯ₃ Ｈ及びそ
の塩、ＰＯ₃ Ｈ₂ 及びその塩並びにＳＲ¹ から成る群よ
り各々選ばれ、その際、Ｒ¹とＲ² は異なり且つ必要に
応じて１個又は数個の親水性基、フェニル又は置換フェ
ニルを有する炭素原子数１〜１４個の炭素鎖を有するア
ルキルから成る群より各々選ばれ、Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ²⁴及
びＲ²⁵は同じであるか又は異なり且つ水素、炭素原子数
１〜５個のアルキル、炭素原子数１〜５個のアルコキ
シ、ＣＯ₂ Ｈ及びその塩、ＣＯ₂ Ｒ¹ （Ｒ¹ は上記した
通り）、ＳＯ₃ Ｈ及びその塩、ＰＯ₃ Ｈ₂ 及びその塩か
ら成る群より各々選ばれる。

【００１６】上記において、「アルキル」とは、メチ
ル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ
ｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、アミル、イソアミル
又はネオペンチルのような基を意味する。「炭素原子数
１〜５個の炭素鎖」とは、メチル、エチル、プロピル、
イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ
−ブチル、アミル、イソアミル又はネオペンチルのよう
な直鎖又は分岐鎖の炭素鎖を意味する。「炭素原子数１
〜１４個の炭素鎖」には、メチル、エチル、プロピル、
イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ
−ブチル、アミル、イソアミル、ネオペンチル、ヘキシ
ル、オクチル、デシル、テトラデシル、等が含まれる
が、これらに限定はされない。

【００１７】「親水性基」とは、スルホン酸、ホスホン
酸、カルボン酸、ヒドロキシル及びアミノ基のような基
を意味する。これらの化合物の一部は酸又は塩基のいず
れかと塩を形成することができる。ナトリウム、カリウ
ム、アンモニウム、カルシウム及びマグネシウムの塩、
塩酸、臭化水素酸、リン酸及び硫酸との塩、並びにシュ
ウ酸、フマル酸、酒石酸、マロン酸、酢酸、クエン酸及
びコハク酸との塩が好適である。好ましいＤＡＴは、水
溶性を付与する基、例えば、限定するものではないが、
ヒドロキシル基、アミン及びその塩並びにカルボン酸及
びその塩、を含有する置換基を芳香族環上に有する化合
物である。具体的に、単独で又はバナジル化合物との協
同においてＨＲＰ活性を保護する水溶性化合物を以下に
挙げる。

【００１８】

【化９】

【００１９】展開層に用いられる他の材料については、
例えば米国特許第４，２５８，００１号明細書に開示さ
れている乾式分析要素の製造技術においてよく知られて
いる。このような層は、布、紙、等から製造されたマク
ロ多孔質層を含む。好ましい粒状層はビーズ展開層（Ｂ
ＳＬ）である。この層は、希釈された又は希釈されてい
ない検査試料（例、１〜１００μＬ）を収容する本発明
の要素において使用するのに適した多孔性を有するよう
に簡単に構築することができる。展開層は等方性多孔質
であることが好ましく、この特性は、帯域を構成する粒
子間の連続空間によって得られる。「等方性多孔質」と
は、適用された流体が展開層内部のすべての方向に均一
に展開される展開層を意味する。

【００２０】ビーズ展開層をはじめとする有用な展開層
が米国特許第４，６７０，３８１号、同第４，２５８，
００１号及び同第４，４３０，４３６号明細書に記載さ
れている。特に有用な展開層は、米国特許第４，２５
８，００１号明細書に記載されている有機ポリマー粒子
とそれ用の高分子接着剤とから形成された粒状構造を有
する展開層である。展開層に有用な有機ポリマー粒子
は、一般に熱安定性の高い粒径約１０〜４０μｍの又は
これより小さい球形ビーズである。これらの粒子は、必
要な特性を有する、天然及び合成の両方のポリマーをは
じめとする多種多様な有機ポリマーから構成されること
ができる。しかしながら、上記特許明細書に記載されて
いる一種又は二種以上の付加ポリマーから構成されるこ
とが好ましい。

【００２１】レセプター層は、別の層である場合には、
支持体の上で、又は支持体上の試薬層もしくは下塗層の
上で、調製され且つ塗布される。レセプターは、その表
面の反応性基（求核性遊離アミノ基やスルフヒドリル
基）を介してポリマー粒子に共有結合される。レセプタ
ーを小さなポリマービーズに結合させる一般的手順とし
て、特定のレセプターを一般に知られている反応によっ
てビーズに共有結合させる方法がある。多くの側基、例
えば、ハロアルキル、２−置換活性化エチルスルホニル
及びビニルスルホニルによって、レセプターをビーズに
直接結合させることができる。一般に、ビーズとレセプ
ターの混合は、水性緩衝液（ｐＨは一般に約５〜約１０
である）において約０．１〜約４０重量％（好ましくは
約０．１〜約１０重量％）のポリマー粒子濃度で行われ
る。レセプターの量は、ポリマーに対する比率として約
０．１：１０００〜約１：１０、好ましくは約１：１０
０〜約１：１０の範囲とする。混合は、約５〜約５０
℃、好ましくは約５〜約４０℃の温度範囲において約
０．５〜約４８時間実施される。適当ないずれの緩衝液
でも使用可能である。

【００２２】場合によっては、外表面の反応性側基を、
リガンドを共有結合させるために修飾又は活性化する必
要がある。例えば、カルボキシル基は、１９９２年７月
２２日発行の欧州特許出願公開第３０８２３５号公報や
米国特許第５，１５５，１６６号明細書に記載されてい
る既知のカルボジイミド又はカルバモイロニウム化学法
によって活性化しなければならない。

【００２３】しかしながら、カルボキシル基含有単分散
ポリマービーズへのレセプターの結合は２段階で行わ
れ、その第一段階は、粒子の水性懸濁液にカルボジイミ
ド又はカルバモイロニウム化合物を接触させて、カルボ
キシル基の代わりに中間体反応性基を有する反応性の中
間体ポリマー粒子を生成させる段階である。この段階
は、所望のｐＨを提供するために適した酸又は緩衝剤を
用いて適当なｐＨにおいて実施される。一般に、望まし
いｐＨは６未満であるが、反応が進行できる限り重要で
はない。より好ましくは、ｐＨは約３．５〜約７であ
る。粒子表面のカルボキシル基に対するカルボジイミド
又はカルバモイロニウム化合物のモル比率は約１０：１
〜５００：１である。

【００２４】本発明の方法の第二段階では、第一段階で
形成された反応性中間体に反応性アミン基又はスルフヒ
ドリル基含有レセプターを接触させる。これにより粒子
とレセプターの間に共有結合が形成される。ポリマー粒
子に対するレセプターの重量比は、一般に約１：１００
０〜約１：１、好ましくは約１：１００〜約１：１０で
ある。別の場合として、外表面のエポキシ基を加水分解
して、免疫学的種に含まれるアミン基に対してカップリ
ング剤として作用しうる臭化シアンと反応できるジオー
ル化合物を生成させることができる。アルデヒドをアミ
ンと直接反応させてシッフ塩基を生成させ、続いてこれ
を還元することにより共有結合を形成させてもよい。別
法として、アルデヒドを酸化して酸にし、そして先にカ
ルボキシル基について記載した方法によってアミド結合
を形成させることもできる。

【００２５】ポリマーが反応性カルボキシル基を有する
場合の粒子表面のカルボキシル基とカルボジイミドもし
くはカルバモイロニウム化合物との反応により生成した
中間体と反応する又はポリマー表面の反応性基と反応す
る反応性アミン又はスルフヒドリル基をそれぞれ含有す
る限り、いずれの反応性アミン又はスルフヒドリル含有
レセプターでも単分散ポリマービーズに結合させること
ができる。レセプター表面のアミン又はスルフヒドリル
基と直接に反応しやすい反応性基を有する小さなポリマ
ービーズを、必要があれば適当な緩衝液中で、レセプタ
ーと単に混合して反応させる。

【００２６】レセプター用のビーズを選定することがで
きるポリマーとして、ポリ（ｍ−及びｐ−クロロメチル
スチレン）、ポリ（スチレン−コ−ｍ−及びｐ−クロロ
メチルスチレン−コ−２−ヒドロキシエチルアクリレー
ト）〔モル比６７：３０：３〕、ポリ（スチレン−コ−
ｍ−及びｐ−クロロエチルスルホニルメチルスチレン）
〔モル比９５．５：４．５〕、ポリ｛スチレン−コ−Ｎ
−〔ｍ−及びｐ−（２−クロロエチルスルホニルメチ
ル）フェニル〕アクリルアミド｝〔モル比９９．３：
０．７〕、ポリ（ｍ−及びｐ−クロロメチルスチレン−
コ−メタクリル酸）〔モル比９５：５、９８：２及び９
９．８：０．２〕、ポリ（スチレン−コ−ｍ−及びｐ−
クロロエチルスルホニルメチルスチレン−コ−メタクリ
ル酸）〔モル比９３．５：４．５：２〕、ポリ｛スチレ
ン−コ−Ｎ−〔ｍ−及びｐ−（２−クロロエチルスルホ
ニルメチル）フェニル〕アクリルアミド−コ−メタクリ
ル酸｝〔モル比９７．３：０．７：２〕、ポリ（スチレ
ン−コ−ｍ−及びｐ−クロロメチルスチレン）〔モル比
７０：３０〕、ポリ〔スチレン−コ−３−（ｐ−ビニル
ベンジルチオ）プロピオン酸〕〔モル比９７．６：２．
４〕、ポリ（スチレン−コ−ビニルベンジルクロリド−
コ−アクリル酸）〔モル比８５：１０：５〕、ポリ（ス
チレン−コ−アクリル酸）〔モル比９９：１〕、ポリ
（スチレン−コ−メタクリル酸）〔モル比９０：１
０〕、ポリ（スチレン−コ−アクリル酸−コ−ｍ−及び
ｐ−ジビニルベンゼン）〔モル比８９：１０：１〕、ポ
リ（スチレン−コ−２−カルボキシエチルアクリレー
ト）〔モル比９０：１０〕、ポリ（メチルメタクリレー
ト−コ−アクリル酸）〔モル比７０：３０〕、ポリ（ス
チレン−コ−ｍ−及びｐ−ビニルベンズアルデヒド）
〔モル比９５：５〕及びポリ（スチレン−コ−ｍ−及び
ｐ−ビニルベンズアルデヒド−コ−メタクリル酸）〔モ
ル比９３：５：２〕が挙げられる。

【００２７】要素の層は適当な支持体の上に担持され
る。レセプター層は支持体上に塗布されるが、支持体と
レセプター層の間にゼラチン／緩衝剤層のような中間介
在層が存在してもよい。支持体は、寸法安定性がよく、
好ましくは非多孔性で波長約２００〜約９００ｎｍの電
磁輻射線を透過する透明な（すなわち、輻射線透過性）
材料であればいずれの適当な材料であってもよい。個々
の要素について、所期の検出様式（反射、透過又は蛍光
分光分析法）に適合するように支持体を選定する必要が
ある。有用な支持体材料としてポリスチレン、ポリエス
テル〔例、ポリ（エチレンテレフタレート）〕、ポリカ
ーボネート、セルロースエステル（例、酢酸セルロー
ス）、等が挙げられる。

【００２８】レセプター層のための高分子バインダーに
ついては、カナダ国特許第１，２４０，４４５号明細書
に一般的に記載されており、本明細書ではこれを援用す
る。有用なポリマーは、Ｎ−イソプロピルアクリルアミ
ドのようなＮ−アルキル置換アクリルアミドの重合体を
約３０〜９７重量％含むポリマーである。その他の有用
なＮ−アルキル置換アクリルアミドとして、Ｎ−ｎ−ブ
チルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアクリルアミド
及びＮ−ｎ−プロピルアクリルアミドが挙げられる。こ
れらのバインダーの有用性を例示するために、実施例で
はポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド−コ−メタク
リル酸−コ−Ｎ，Ｎ−メチレンビスアクリルアミドが使
用されている。

【００２９】この高分子バインダーはさらに、１分子当
たり２個以上の付加重合性基を有する架橋性モノマーの
重合体の一種又は二種以上を約３〜２５重量％含む。こ
れらの架橋性モノマーは当該技術分野では一般に周知で
ある。好適な架橋性モノマーは、Ｎ−アルキル置換アク
リルアミドとの重合を促進するためにアクリルアミド基
又はメタクリルアミド基を含有する。有用な架橋性モノ
マーの例として、Ｎ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミ
ド、Ｎ，Ｎ’−メチレンビスメタクリルアミド、エチレ
ンジメタクリレート、２，２−ジメチル−１，３−プロ
ピレンジアクリレート、ジビニルベンゼン、モノ〔２，
３−ビス（メタクリロイルオキシ）プロピルホスフェー
ト、Ｎ，Ｎ’−ビス（メタクリロイル）ウレア、トリア
リルシアヌレート、アリルアクリレート、アリルメタク
リレート、Ｎ−アリルメタクリルアミド、４，４’−イ
ソプロピリデンジフェニレンジアクリレート、１，３−
ブチレンジアクリレート、１，４−シクロヘキシレンジ
メチレンジメタクリレート、２，２’−オキシジエチレ
ンジメタクリレート、ジビニルオキシメタン、エチレン
ジアクリレート、エチリデンジアクリレート、プロピリ
デンジメタクリレート、１，６−ジアクリルアミドヘキ
サン、１，６−ヘキサメチレンジアクリレート、１，６
−ヘキサメチレンジメタクリレート、フェニルエチレン
ジメタクリレート、テトラメチレンジメタクリレート、
２，２，２−トリクロロエチリデンジメタクリレート、
エチレンビス（オキシエチレン）ジアクリレート、エチ
レンビス（オキシエチレン）ジメタクリレート、エチリ
ジントリメタクリレート、プロピリジントリアクリレー
ト、ビニルアリルオキシアセテート、１−ビニルオキシ
−２−アリルオキシエタン、２−クロトノイルオキシエ
チルメタクリレート、ジアリルフタレート及び２−（５
−フェニル−２，４−ペンタジエノイルオキシ）エチル
メタクリレートが挙げられる。

【００３０】これらの高分子バインダーは、さらに親水
性モノマーの重合体を０〜６０重量％含むことができ
る。また、５〜３５重量％の量も有用である。親水性モ
ノマーについてはカナダ国特許第１，２４０，４４５号
明細書に記載されている。具体的には、このようなモノ
マーはヒドロキシ、ピロリドン、アミン、アミド、カル
ボキシ、スルホ、カルボン酸塩、スルホン酸塩及び硫酸
塩の中から選ばれた基を一つ又は二つ以上有する。一般
に、これら塩の基の対イオンはアルカリ金属又はアンモ
ニウムである。有用な親水性モノマーはアクリル酸及び
メタクリル酸並びにそれらの塩、２−アクリルアミド−
２−メチルプロパンスルホン酸ナトリウム、２−ヒドロ
キシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタク
リレート、２−ヒドロキシプロピルアクリレート、２−
ヒドロキシプロピルメタクリレート及びグリセリルメタ
クリレートである。

【００３１】さらに、先に列挙したバインダーによる
と、押出ホッパー塗布工程中の剪断薄化により実現され
る非常に低いバインダー粘度のため、均一なレセプター
層塗膜を形成することができる。列挙したバインダーに
よると、均一塗膜の形成直後にバインダーの粘度が著し
く上昇し、バインダーの乾燥や湿式輸送中に安定性及び
均一性が維持される「セット層」が得られる。レセプタ
ーはまた、分子量８０００〜４００，０００を有するポ
リ（ビニルアルコール）、牛血清アルブミン、アラビア
ゴム及びＮ−ビニルピロリドンのホモポリマー、並びに
アクリルアミド、メタクリルアミド、Ｎ−アルキル置換
アクリルアミド、Ｎ−アルキル置換メタクリルアミド、
１−ビニルイミダゾール、２−アルキル置換−１−ビニ
ルイミダゾール、２−ヒドロキシアルキル置換−１−ビ
ニルイミダゾール、Ｎ−ビニルピロリドン、ヒドロキシ
アルキルアクリレート、ヒドロキシアルキルメタクリレ
ート、アクリル酸及びメタクリル酸から成る群より選ば
れた二種以上のモノマーを有する水溶性ビニル付加コポ
リマー（該コポリマー中のアルキル及びヒドロキシアル
キルはメチル、エチル、プロピル及びヘキシルのように
１〜６個の炭素原子を含有する）から成る群より選ばれ
たポリマーバインダー中に分散させてもよい。

【００３２】本発明の要素は、一つ又は二つ以上の別の
層、例えば、電子移動剤のような他に必要な添加剤を含
有するゼラチン／緩衝剤層と試薬／展開層との混合層又
は別々の層を含むことができる。要素のゼラチン／緩衝
剤層又は試薬層又は展開層は、一種以上の合成又は天然
バインダー材料、例えば、ゼラチン又はその他の天然コ
ロイド、ホモポリマー及びコポリマー、例えば、ポリ
（アクリルアミド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ
（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（アクリル
アミド−コ−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン）及び同様な
コポリマーに分散された一種以上の試薬を含む指示組成
物を含有することができる。この指示組成物はレセプタ
ー層に分散されてもよい。

【００３３】その他の任意の層、例えば、下塗層、輻射
線遮断層、等を所望であれば含めることもできる。要素
のすべての層は互いに流体接触状態にある、すなわち、
流体及び該流体中の試薬や未複合体化反応生成物は隣接
層の重畳領域間を透過することができる。本発明の要素
の層は、界面活性剤、増粘剤、緩衝剤、硬化剤、酸化防
止剤、カプラー溶剤及びその他当該技術分野で周知の材
料をはじめとする他の望ましいが任意である各種成分を
含有することができる。これら成分の量についても、当
該技術分野の当業者であれば適宜選定することができ
る。

【００３４】本発明の要素を使用して、生物学的流体
（例、全血、血清、血漿、尿、脊髄液、ヒト又は動物細
胞の懸濁液、排泄物、唾液、リンパ液、等）のような液
体中の低濃度の免疫学的に反応性のリガンドを測定する
ことができる。これらのリガンドは１０^-15 モル程度の
低濃度で、最も一般には約１０^-11 〜約１０^-4モルの濃
度範囲で測定することができる。このように、定量的又
は定性的に、測定することができるリガンドとして、治
療薬（例、フェノバルビタール、ジゴキシン、ジギトキ
シン、テオフィリン、ゲンタマイシン、キニジン、フェ
ニトイン、プロパノロール、カルバマゼピン、トブラマ
イシン、リドカイン、プロカインアミド、等）、天然又
は合成ステロイド（例、コルチゾル、アルドステロン、
テストステロン、プロゲステロン、エストリオール、
等）、ホルモン（例、甲状腺ホルモン、ペプチドホルモ
ン、インスリン、等）、タンパク質（例、アルブミン、
ＩｇＧ、ＩｇＭ、フェリチン、血液凝固因子、Ｃ−反応
性タンパク質、イソ酵素、ｈＣＧ、アポリポタンパク
質、等）、抗原、モノクローナル抗体をはじめとする抗
体、その他レセプターと自然に反応する種が挙げられ
る。本発明は、ジゴキシン、フェニトイン、カルバマゼ
ピン、テオフィリン又はフェノバルビタールのような治
療薬、チロキシン又はトリヨードチロニンのようなホル
モン並びにｈＣＧ及びＣ−反応性タンパク質のようなア
ナライトの測定に特に有用である。

【００３５】本発明の分析は、リガンドに結合して標識
リガンドを生成することができる何らかの酵素標識を使
用して実施することができる。グルコースオキシダー
ゼ、ペルオキシダーゼ〔例、西洋ワサビペルオキシダー
ゼ（ＨＲＰ）〕、アルカリ性ホスファターゼ及びガラク
トシダーゼのような酵素が好適な標識である。特定の標
識に適した基質を決めることは臨床化学分野における当
業者であれば適宜行うことができる。基質は、酵素標識
によって直接に作用を受ける物質であっても、或いは該
標識の酵素反応を含む一連の反応に関与する物質であっ
てもよい。例えば、酵素標識がペルオキシダーゼである
場合、その基質は過酸化水素と適当な還元剤である。一
例としてグルコースオキシダーゼを使用すると、その基
質であるグルコースは、試薬層内に一般に存在するか又
は基質溶液として添加されて、約０．０１モル／ｍ² 、
好ましくは約０．００１〜約０．１モル／ｍ² になるよ
うにされる。当業者であれば、分析に用いられる酵素標
識の量に対して特定の基質の量を調整する方法を知って
いる。

【００３６】試薬層は、標識によって触媒される反応の
結果として検出可能な種を提供する試薬を一種又は二種
以上含む指示組成物を含有することができる。この検出
可能な種は、発色性のもの、放射性のもの、蛍光性のも
の、又は化学発光性のものであることができる。本発明
の説明では、酵素標識リガンド類似体と基質との酵素反
応の結果として比色定量法で検出可能な種を提供する比
色定量用指示組成物を使用する。

【００３７】この指示組成物は、酵素反応時に検出可能
な色素を生成する単一化合物であっても、或いは色素を
生成する試薬の組合せであってもよい。例えば、基質と
してグルコースを使用し且つ酵素標識としてグルコース
オキシダーゼを使用する場合、比色定量用指示組成物
は、反応して色素を生成する被酸化性化合物とカプラー
を含むことができる。別法として、この組成物は、ロイ
コ色素とペルオキシダーゼ又はグルコースオキシダーゼ
がグルコースをグルコン酸に転化する際に発生する過酸
化水素の生成の結果として検出可能な色素を生成する別
の適当な過酸化性化合物を含むことができる。有用なロ
イコ色素は当該技術分野では周知であり、例えば、米国
特許第４，０８９，７４７号明細書（１９７８年５月１
６日発行、Ｂｒｕｓｃｈｉ）及び米国特許出願第６１
２，５０９号明細書（１９８４年５月２１日、Ｂａｂｂ
ら）に記載されているものが挙げられる。比色定量用指
示組成物の具体的量及びその各種成分については当業者
であれば適宜選定することができる。

【００３８】標識リガンドは、既知の出発物質及び手順
を用いて調製すること、或いは市販品を入手することが
できる。一般に、リガンドは標識（例、酵素部分）に共
有結合で結合される。免疫分析法は手動式であっても自
動化されていてもよい。一般に、液体中のリガンドの量
は、供給ロール、チップパケット又はその他のソースか
ら本発明の要素を取り出して、その展開層の有限領域に
試料液（例、１〜１００μＬ）を物理的に接触させるこ
とにより測定される。接触を受ける有限領域の面積は、
一般に約１５０ｍｍ² 以下である。

【００３９】リガンドの量は、複合体化リガンド類似体
を直接検出するための、又は酵素標識と基質の酵素反応
の結果として生成した検出可能な種を検出するための、
適当な装置に要素を通過させることによって測定され
る。例えば、一般に知られている手順を用いて適当な分
光光度分析装置によってこれらの種を検出することがで
きる。酵素反応においては、得られた生成物を、例え
ば、検査試料を接触させた有限領域における反射濃度又
は透過濃度の変化速度を測定することによって、分析す
る。測定される領域の直径は約３〜約５ｍｍである。液
体試料中のリガンド量は、有限領域において測定された
標識量に、競合型アッセイ法の場合には反比例し、また
サンドイッチアッセイの場合には直接比例する。一般
に、標識測定は基質溶液を適用した後に行われる。

【００４０】本発明の詳細な説明 １．ジアリールテルリドの合成 ＤＡＴの合成には多くの合成経路がある。個々の化合物
に対して採用される合成経路は芳香族環上の置換基によ
って大きく異なる。既知の合成経路のいくつかを下記の
例で説明する。これらの合成経路の補外経路や他の文献
に記載されているその他のＤＡＴの合成方法については
明白であろう。

【００４１】合成１：４，４’−ジ（２−ヒドロキシエ
トキシ）−１，１’−テルロビスベンゼン（１） （ａ）〔２−（４−ブロモフェノキシ）エトキシ〕
（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシラン（１ａ）の
合成 １５０ｍＬの乾燥ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中
に〔２−（４−ブロモフェノキシ）エタノール（１０．
０ｇ、４６ミリモル）を含む溶液にｔ−ブチルジメチル
シリルクロリド（８．３４ｇ、５５ミリモル）とイミダ
ゾール（７．８２ｇ、１１５ミリモル）を加えた。これ
らの物質を反応フラスコ中へ洗い流すためにさらに新た
なジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を使用した。得ら
れた溶液をニューマン管を用いて室温で一晩攪拌した。
それを水（２００ｍＬ）に注ぎ込み、エーテル（３×７
５ｍＬ）で抽出した。抽出物を一緒にしたものを０．５
ＮＨＣｌ（２００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ₃ （２００ｍ
Ｌ）、水（４×１５０ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ（２００
ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄ で乾燥し、そして濾過し
た。溶剤をロータリーエバポレーターで減圧除去すると
粗生成物（１６．５ｇ、＞１００％）が得られた。 ¹Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ７．３４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝
８．９）、６．７８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．９）、４．０
０−３．９３（４Ｈ、ｍ）、０．８９（９Ｈ、ｓ）、
０．０８（６Ｈ、ｓ）。¹³Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：
δ１５８．１、１３２．２、１１６．４、１１２．８、
６９．６、６１．９、２５．９、１８．４。ＦＤＭＳ
（ｍ／ｅ）３３０（Ｍ⁺ 、⁷⁹Ｂｒ）。この粗生成物は精
製せずに１００％として使用した。

【００４２】（ｂ）４，４’−ジ（２−ヒドロキシエト
キシ）−１，１’−テルロビスベンゼン（１）の合成 ５００ｍＬの三口フラスコを窒素雰囲気下に置き、凝縮
器及び添加漏斗を備えつけた。マグネシウムターニング
（turning ）（０．８９ｇ、３７ミリモル）を添加し
た。臭化物（１ａ）（１２．３ｇ、３７ミリモル、１０
０％として使用）を乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）
（１００ｍＬ）に吸収させ、そして添加漏斗へ移した。
その臭化物溶液約１０ｍＬと、１，２−ジブロモエタン
と、ヨウ素を用いてグリニャール反応を開始させた。残
りの臭化物溶液を加え、その反応を一晩還流させた後
は、Ｍｇはまったく残存していなかった。加熱マントル
を３０分間取り外し、次いでテルル粒体（４．７４ｇ、
３７ミリモル）を加え、そして反応を加熱して７時間還
流させた後は、ほぼすべてのＴｅが消費されていた。反
応を室温まで冷却し、次いで激しく攪拌されている１０
％ＮＨ₄ Ｃｌ水溶液（３００ｍＬ）に注ぎ込み、そして
１５分間攪拌した。析出したＴｅをセライト（商標）珪
藻土で濾過して分離し、その濾過ケークをエーテルで洗
浄した。その濾液を分液漏斗に移し、エーテルで３回
（２００ｍＬ、１００ｍＬ、１００ｍＬ）抽出した。こ
れらの抽出物を一緒にして水及び飽和ＮａＣｌで洗浄
し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、そして濾過した。溶剤を減圧
除去すると粗生成物（１２．４ｇ）が赤い油状物として
得られた。それを銅粉末（２．５ｇ）と共にトルエン
（５０ｍＬ）に吸収させ、ニューマン管で２．５時間加
熱還流すると、色が赤から灰色に変化した。その反応を
室温まで冷却し、セライト（商標）珪藻土で濾過し、エ
ーテルで洗浄し、そして濃縮すると、琥珀色の油状物
（１２．４ｇ）が得られた。これを ¹Ｈ ＮＭＲで分析
すると、所望の生成物と、失活したグリニャール試薬
と、残留トルエンとの混合物であった。この混合物をメ
タノール（５０ｍＬ）及びＴＨＦ（２０ｍＬ）にフッ化
カリウム（５．０２５、８６ミリモル）と共に吸収さ
せ、そして２４時間還流させた。メタノールを減圧除去
し、そしてエーテル／酢酸エチルと水の間で分配させ
た。その水相を酢酸エチルでさらに２回抽出し、そして
抽出物を一緒にしたものを水及び飽和ＮａＣｌで洗浄
し、Ｎａ₂ ＳＯ₄ で乾燥し、その後濾過した。溶剤を減
圧除去すると粗生成物（８ｇ）が淡褐色の固体として得
られた。エーテルを用いて粉砕して濾過分離すると白色
固体が得られ、これをエーテルで洗浄し、風乾し、粗生
成物（１．７４ｇ）を得た。それをジクロロメタンを用
いてフラッシュ(flash) シリカゲル（２０ｍＬ）に吸着
させた。２００ｍＬのフラッシュシリカゲルによって、
ジクロロメタン、次いで９５：５ジクロロメタン：メタ
ノールで溶離させるフラッシュクロマトグラフィーを慎
重に実施し（生成物は対応する少量のビアリール化合物
の直前に溶離する）、エーテルで粉砕し、そして濾過す
ると、白色固体（１．２ｇ）の純物質（１）が得られ
た。粗生成物のエーテル粉砕で得られたエーテル濾液を
上記と同様にクロマトグラフィーにかけた。エーテル粉
砕及びエタノールからの再結晶化によりさらに新たな純
物質（１）が０．２ｇ得られた。全収量：１．４ｇ（１
９％）。 ¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）：δ７．５２
（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５）、６．８０（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝
８．５）、４．８２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．５）、３．９
１（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．０）、３．６５（４Ｈ、ａｐｐ
ｑ、Ｊ＝５．１）。¹³Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−
ｄ₆ ）：δ１５９．２、１３９．８、１１６．５、１０
４．５、６９．９、５９．９。ＦＤＭＳ（ｍ／ｅ）４０
４（Ｍ⁺ 、 ¹³⁰Ｔｅ）。

【００４３】合成２：Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（フェニ
ルテルロ）ベンゼンメタンアミン塩酸塩（２） （ａ）Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（フェニルテルロ）ベン
ゼンメタンアミン（２ａ）の合成 丸底フラスコ中、室温、アルゴン雰囲気下にある乾燥エ
ーテル（５０ｍＬ）にＮ，Ｎ−ジメチルベンゼンメタン
アミン（２．７０ｇ、０．０２０モル）を含む溶液に、
シリンジでｎ−ＢｕＬｉ（２．５Ｍ、１０ｍＬ、０．０
２５モル）を滴下した。その反応混合物を室温で５時間
攪拌した後、乾燥テトラヒドロフラン中にフェニルテル
レニルブロミドを含む溶液（０．５Ｍ）をシリンジで滴
下した。３８ｍＬ（０．０１９モル）を添加した後、反
応液はフェニルテルレニルブロミドに特徴的なオレンジ
色に変わり、添加を停止した。その反応混合物をエーテ
ル（１００ｍＬ）に注ぎ込み、得られた溶液を飽和Ｎａ
Ｃｌ（１×１００ｍＬ、２×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｍｇ
ＳＯ₄ で乾燥し、そして濃縮した。その残留物をアセト
ン（１００ｍＬ）に溶解させ、そしてヨウ素（５．０８
ｇ、０．０２０モル）を加えた。得られた溶液を冷却し
て生成物を析出させた。黄色の結晶物を濾過して集め、
低温のアセトンで洗浄し、そして乾燥すると、ヨウ素付
加体（２ａ）（５．９５ｇ、５０％、融点１７８〜１７
９℃）が得られた。そのヨウ素付加体（５．９３ｇ、
０．０１０モル）をジメチルホルムアミド（１００ｍ
Ｌ）に溶解させた。水（１００ｍＬ）に重亜硫酸ナトリ
ウム（５．２ｇ、０．０５モル）を含む溶液を徐々に添
加し、そして反応混合物を室温で１時間攪拌し、その間
に反応混合物は無色になった。その反応混合物を水（５
００ｍＬ）に注ぎ込み、次いでエーテル（２×５０ｍ
Ｌ）で洗浄した。その水層を１０％ＮａＯＨによって塩
基性にし、そして該アミンをエーテル（３×１００ｍ
Ｌ）中に抽出させた。抽出物を一緒にしたものを飽和Ｎ
ａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ₄ で乾燥し、そして濃縮し
た。その残留物をメタノールから再結晶化すると、純粋
生成物（３．１４ｇ、９３％）が白色固体（融点５１〜
５４℃）として得られた。 ¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ₃ ）：δ７．８８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．９）、７．３
５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３）、７．２６（２Ｈ、ｔ、Ｊ
＝７．３）、７．１７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７）、７．
１０−７．０４（２Ｈ、ｍ）、６．９４−６．８９（１
Ｈ、ｍ）、３．５３（２Ｈ、ｓ）、２．２５（６Ｈ、
ｓ）。

【００４４】（ｂ）Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（フェニル
テルロ）ベンゼンメタンアミン塩酸塩（２）の合成 水浴内に配置したエーテル（５０ｍＬ）中に２−（Ｎ，
Ｎ−ジメチルアミノメチル）−１−フェニルテルロベン
ゼン（１．０２ｇ、３．０ミリモル）のスラリーに、塩
化水素／エーテル溶液（３．１５ｍＬ、１．０Ｍ、３．
１５ミリモル）をシリンジで滴下した。この濃厚なスラ
リーをイソプロパノール（２０ｍＬ）で希釈した後、濾
過した。その白色固体をエーテルで洗浄し、風乾する
と、生成物（１．１３ｇ、９５％）が得られた。 ¹Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ２．６（１Ｈ、ｂｒ、ｓ）、
８．１３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５）、７．８０（１Ｈ、
ｄ、Ｊ＝７．７）、７．５２−７．４８（３Ｈ、ｍ）、
７．２６−７．１７（４Ｈ、ｍ）、４．４４（２Ｈ、
ｄ、Ｊ＝５．８）、２．６８（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．
５）。Ｃ₁₅Ｈ₁₈ＣｌＮＴｅの元素分析理論値：Ｃ＝４
８．００；Ｈ＝４．８３；Ｎ＝３．７３、測定値：Ｃ＝
４７．９７；Ｈ＝４．８７；Ｎ＝３．６５。

【００４５】合成３：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ（２
−ヒドロキシエチル）−４，４’−テルロビスベンゼン
アミン（３） （ａ）Ｎ，Ｎ−ビス〔２−〔〔（１，１−ジメチルエチ
ル）ジメチルシリル〕オキシ〕エチル〕ベンゼンアミン
（３ａ）の合成 下記の物質を用いて前記（１ａ）について記載した類似
の手順を採用した：２，２’−（フェニルイミノ）ジエ
タノール（９．０ｇ、５０ミリモル）、ｔ−ブチルジメ
チルシリルクロリド（１８．１ｇ、０．１２モル）、イ
ミダゾール（１７．０ｇ、０．２５モル）及びジメチル
ホルムアミド（５０ｍＬ）。反応混合物を便宜上一晩攪
拌した。（１ａ）と同様に処理すると、淡色の油状物
（３ａ）が得られた（２１．６ｇ、＞１００％）。 ¹Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ７．２１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝
８．４）、６．６８（３Ｈ、重複するｄ、ｔ）、３．７
７（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６）、３．５２（４Ｈ、ｄ、Ｊ
＝６．６）、０．９２（１８Ｈ、ｓ）、０．０６（１２
Ｈ、ｓ）。¹³Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ１４７．
８、１２９．２、１１５．７、１１１．４、６０．３、
５３．５、２５．９、１８．３、−５．３。ＦＤＭＳ
（ｍ／ｅ）４０９（Ｍ⁺ ）。この油状物は精製せずに１
００％として使用した。

【００４６】（ｂ）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ（２−
〔〔（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル〕オキ
シ〕エチル〕−４，４’−テルロビスベンゼンアミン
（３ｂ）の合成 炉乾燥しアルゴン雰囲気下に置いた５００ｍＬの三口フ
ラスコに塩化テルル（ＩＶ）（５．９３ｇ、２２ミリモ
ル）を入れた。乾燥エーテル（１００ｍＬ）をシリンジ
で加えると薄い黄色のスラリーが得られ、そしてフラス
コを水浴中に配置した。乾燥エーテル（５０ｍＬ）に３
ａ（１８ｇ、４４ミリモル）を含む溶液アルゴン雰囲気
下で調製し、その溶液をカニューラで反応混合物へ激し
く攪拌しながら移した。最初に非常に濃厚な黄色の析出
物が形成し、これをアニリン溶液を添加し続けて希釈し
た。添加完了後、緑味がかった黄色のスラリーを一晩攪
拌した。反応混合物を濾過し、その濾液を減圧下でエバ
ポレートした。得られた黄緑色の油状物をジクロロメタ
ン（２００ｍＬ）に吸収させ、そして水（２００ｍＬ）
にメタ重亜硫酸ナトリウム（８．３６ｇ、４４ミリモ
ル）を含む溶液を攪拌しながら添加した。得られた二相
混合物を室温で３０分間攪拌した後、セライト（商標）
珪藻土で濾過した。固体のＮａＨＣＯ₃ を添加してｐＨ
を９にし、その後反応混合物を分液漏斗に移した。ジク
ロロメタン層を捨てて、水層をさらに新たなジクロロメ
タンで抽出した。抽出物を一緒にしたものを水／飽和Ｎ
ａＣｌ（２００ｍＬ／５０ｍＬ）で、次いで飽和ＮａＣ
ｌで洗浄し、Ｎａ₂ ＳＯ₄ で乾燥し、濾過し、そして溶
剤を減圧除去した。得られた赤色の油状物（２１．４
ｇ）をトルエン（８０ｍＬ）に吸収させ、そして銅粉末
（４ｇ）を添加した。反応をニューマン管で一晩加熱還
流した。得られた灰色の反応混合物を室温まで冷却し、
セライト（商標）珪藻土で濾過し、そして溶剤を減圧下
で除去した。得られた琥珀色の油状物（１８ｇ）を３：
１のシクロヘキサン：ジクロロメタンで２回クロマトグ
ラフィーにかけて、生成物と回収された出発物質とを分
離すると、純粋な３ｂが黄色の油状物（５．０ｇ、理論
量の４８％）として得られた。 ¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ
₃ ）：δ７．５４（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６）、６．５３
（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５）、３．７２（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝
６．４）、３．４７（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．５）、０．８
８（１８Ｈ、ｓ）、０．０３（１２Ｈ、ｓ）。¹³Ｃ Ｎ
ＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ１４７．６、１３９．７、１１
２．７、９８．２、６０．２、５３．４、２５．９、１
８．３、−５．３。ＦＤＭＳ（ｍ／ｅ）９４６（Ｍ ⁺ 、
¹³⁰Ｔｅ）。

【００４７】（ｃ）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ（２−
ヒドロキシエチル）−４，４’−テルロビスベンゼンア
ミン（３）の合成 シリルエーテル（３ｂ）（２．７ｇ、２．８６ミリモ
ル）と、フッ化カリウム（０．６６ｇ、１１．４ミリモ
ル）と、メタノール（２０ｍＬ）との不均一混合物を２
０時間加熱還流した。この白色スラリーを氷浴で冷却
し、次いでその生成物を濾過して単離し、低温のメタノ
ールで洗浄し、そして風乾した（０．８０ｇ、５７
％）。分析試料用に少量をメタノールから再結晶化させ
た（融点１６９〜１７０℃）。 ¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ
−ｄ₆ ）：δ７．５４（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６）、６．
５３（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５）、３．４５（４Ｈ、ａｐ
ｐ ｑ、Ｊ＝５．７）、３．３３（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．
９）。¹³Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ ₆ ）：δ１４８．
１、１３９．８、１１３．１、９７．６、５８．４、５
３．５。ＩＲ（ＫＢｒ）：３３５０、１５８５、１４９
５、１３５０ｃｍ^-1。ＦＤＭＳ（ｍ／ｅ）４９０
（Ｍ⁺ 、 ¹³⁰Ｔｅ）。Ｃ₂₀Ｈ₂₈Ｎ₂ Ｏ₄ Ｔｅの元素分析
理論値：Ｃ＝４９．２２；Ｈ＝５．７８；Ｎ＝５．７
４、測定値：Ｃ＝４８．７８；Ｈ＝５．７２；Ｎ＝５．
６６。

【００４８】合成４：２，２’−〔テルロビス（４，１
−フェニレンオキシ）〕ビス酢酸二ナトリウム塩（４） （ａ）４−（ブロモフェノキシ）（１，１−ジメチルエ
チル）ジメチルシラン（４ａ）の合成 乾燥ジメチルホルムアミド（４５０ｍＬ）にｐ−ブロモ
フェノール（１０４ｇ、０．６モル）を含む溶液に、ｔ
−ブチルジメチルシリルクロリド（１０８ｇ、０．７２
モル）とイミダゾール（１０２ｇ、１．５モル）を添加
した。得られた淡黄色の溶液をニューマン管で室温で３
時間攪拌した。それを水（１．２Ｌ）に注ぎ込み、そし
てエーテル（９００ｍＬ、３００ｍＬ、３００ｍＬ）で
３回抽出した。抽出物を一緒にしたものを水（１５０ｍ
Ｌ）で４回、１Ｎ ＨＣｌ（３００ｍＬ）、飽和ＮａＨ
ＣＯ₃ （３００ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ（３００ｍＬ）
で１回洗浄し、ＭｇＳＯ₄ で乾燥し、そして濾過した。
溶剤をロータリーエバポレーター、次いで真空ポンプで
減圧除去すると、加水分解した出発物質から比率６：１
のシラノールとして粗生成物（１８３ｇ、＞１００％）
が得られた。 ¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ７．３１
（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７）、６．７１（２Ｈ、δ、Ｊ＝
８．７）、０．９７（９Ｈ、ｓ）、０．１８（６Ｈ、
ｓ）。この粗生成物は精製せずに１００％として使用し
た。

【００４９】（ｂ）４，４’−ジ（ｔ−ブチルジメチル
シリルオキシ）−１，１’−テルロビスベンゼン（４
ｂ）の合成 炉乾燥した後アルゴン雰囲気下に置いた２Ｌの三口フラ
スコに、オーバーヘッド式スターラーと添加漏斗を備え
つけた。マグネシウムターニング（１５．２ｇ、０．６
６モル）を添加した。臭化物４ａ（１７．２ｇ、０．６
モル、１００％として使用）を乾燥ＴＨＦ（６００ｍ
Ｌ）に吸収させ、そして添加漏斗に移した。その臭化物
溶液２５ｍＬといくつかの結晶ヨウ素を用いてグリニャ
ール反応を開始させた。反応の還流が継続するような速
度で残りの臭化物溶液を添加した。添加完了後、その反
応をさらに３０分間還流させると、わずかな量のＭｇし
か残存しなかった。反応混合物を水浴において若干冷却
し、次いでテルル粒体（７６．８ｇ、０．６モル）を加
え、そして反応を加熱して２．５時間還流させた後は、
ほぼすべてのＴｅが消費されていた。反応混合物を室温
まで冷却し、次いで激しく攪拌されている１０％ＮＨ₄
Ｃｌ水溶液（２Ｌ）に注ぎ込み、そして３０分間攪拌し
た。析出したＴｅをセライト（商標）珪藻土で濾過して
分離し、その濾過ケークをエーテルで洗浄した。その濾
液を分液漏斗に移し、エーテルで３回（１２００ｍＬ、
３００ｍＬ、３００ｍＬ）抽出した。これらの抽出物を
一緒にして水及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ₄ で
乾燥し、そしてセライト（商標）珪藻土で濾過して処理
中に析出したＴｅとＭｇＳＯ₄ の両方を分離した。溶剤
を減圧除去すると粗生成物（１９４ｇ）が赤い油状物と
して得られた。それを銅粉末（３８ｇ）と共にトルエン
（９００ｍＬ）に吸収させ、ニューマン管で２．５時間
加熱還流すると、色が赤から灰色に変化した。その反応
混合物を室温まで冷却し、セライト（商標）珪藻土で濾
過し、そして濃縮すると、琥珀色の油状物（１８１ｇ）
が得られた。これを ¹Ｈ ＮＭＲで分析すると、所望の
生成物と、失活したグリニャール試薬と、残留トルエン
との混合物であり、計算から４ｂを０．２３モル含有す
ることがわかった。ヨウ素付加体４ｂによる精製を行っ
た。粗生成物をアセトン（０．６Ｌ）に吸収させ、そし
て攪拌しながらヨウ素（５８ｇ、０．２３モル）を少し
ずつ添加した。１５分後、非常に濃厚な析出物が生成し
た。エタノール（１．２Ｌ）を加え、そしてオレンジ色
の固体と濃い真珠色の結晶性固体を濾過して単離し、風
乾した。その濾液を再濾過して第二の収量を得た。合わ
せた収量は２０６ｇとなり、ＮＭＲ上では純粋物質であ
り、唯一の汚染物は残留エタノールであった。 ¹Ｈ Ｎ
ＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ７．９５（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．
７）、６．８６（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７）、０．９８
（１８Ｈ、ｓ）、０．２５（１２Ｈ、ｓ）。¹³Ｃ ＮＭ
Ｒ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ１５８．６、１３８．４、１２
１．９、２５．５、１８．２、−４．３。このヨウ素付
加体をジオキサン（５００ｍＬ）、ジクロロメタン（５
００ｍＬ）及び５％ＮａＨＳＯ₃水溶液（１．１Ｌ）に
吸収させ、そしてその二相系を激しく攪拌した。１時間
後、下部（有機）層はまだ赤色をしており、還元が不完
全であることを示していた。黄色水性層の本体をデカン
トして保存し、そしてオレンジ色の層を減圧下で蒸発さ
せた。その残留物にジオキサン（２００ｍＬ）、ジクロ
ロメタン（２００ｍＬ）及び５％ＮａＨＳＯ₃ 水溶液
（４００ｍＬ）を加え、そしてその混合物をさらに１時
間攪拌した。それを減圧下で蒸発させて有機溶剤を部分
的に除去し、そして残りの水性ジオキサンを分液漏斗に
移してエーテルで３回抽出した。抽出物を一緒にし、こ
れを水、飽和ＨａＨＣＯ₃ 及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、
ＭｇＳＯ ₄ で乾燥し、そして濾過した。先にデカントし
た水層についても同様に処理してこれら二つを一緒にし
た。溶剤を減圧除去すると純粋な４ｂ（９７．３ｇ、６
０％）が琥珀色の油状物として得られた。 ¹Ｈ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ₃ ）：δ７．５４（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．
４）、６．８０（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４）、０．９６
（１８Ｈ、ｓ）、０．１７（１２Ｈ、ｓ）。¹³Ｃ ＮＭ
Ｒ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ１５５．８、１３９．６、１２
１．５、１０５．２、２５．７、１８．２、−４．４。
ＦＤＭＳ（ｍ／ｅ）５４４（Ｍ⁺ 、 ¹³⁰Ｔｅ）。

【００５０】（ｃ）４，４’−テルロビスフェノール
（４ｃ）の合成 ５００ｍＬの丸底フラスコにおいてシリルエーテル４ｂ
（５４．２ｇ、０．１モル）をメタノール（２００ｍ
Ｌ）に吸収させた。フッ化カリウム（１１．６ｇ、０．
２モル）を添加し、その反応混合物をアルゴン雰囲気
下、１．５時間加熱還流した。反応混合物を室温に冷却
した後、それを激しく攪拌されている水（１．２Ｌ）に
注ぎ込み、その際、さらに新たなメタノール（２０ｍ
Ｌ）を用いて移行を促進した。ｐＨを１０％ＮａＯＨ
（約４０ｍＬ）で１４に調整し、そして反応混合物をセ
ライト（商標）珪藻土で濾過した。その濾液を分液漏斗
に移してジクロロメタンで２回洗浄した。その水層を氷
浴において２Ｌの三角フラスコに移し入れ、そして２５
％酢酸水溶液を加えてｐＨを６にすると、クリーム色の
析出物が生成した。その生成物を濾過して単離し、水で
洗浄し、風乾すると、粗生成物（２９ｇ）が得られた。
それをフラッシュシリカゲル（１５０ｍＬ）にエーテル
を用いて吸着させた。１Ｌのフラッシュシリカゲルで真
空クロマトグラフィーを実施し、ジクロロメタンに続い
て１：４の酢酸エチル：ジクロロメタンで溶離させる
と、純粋な生成物が得られた。ジクロロメタンを用いて
粉砕すると、２部の収穫で、純粋な４ｃが黄色固体（２
４ｇ、７６％）として得られた。 ¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ₃ 、５滴のＤＭＳＯ）：δ８．７７（２Ｈ、ｓ）、
７．２９（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４）、６．４７（４Ｈ、
ｄ、Ｊ＝８．４）。

【００５１】（ｄ）４，４’−ジ（エトキシカルボニル
メトキシ）−１，１’−テルロビスベンゼン（４ｄ）の
合成 オーバーヘッド式スターラーと添加漏斗を具備した炉乾
燥済の２５０ｍＬ三口フラスコをアルゴン雰囲気下に置
き、水素化ナトリウム（６０％、１．７６ｇ、４４ミリ
モル）を加えた。それをシクロヘキサンで３回洗浄し、
次いで乾燥した（シーブ）ジメチルホルムアミド（６０
ｍＬ）を加えた。そのフラスコを水浴に配置し、そして
乾燥ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中にビスフェノ
ール４ｃ（６．２８ｇ、２０ミリモル）を含む溶液を添
加漏斗から滴下した（激しくＨ₂が発生）。得られたス
ラリーを油浴において８５℃に２０分間加熱した（さら
にＨ₂ が発生）。そのスラリーを室温まで冷却し、そし
て乾燥ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）にブロモ酢酸エ
チル（６．６８ｇ、４０ミリモル）を含む溶液を添加漏
斗から滴下すると、その間に析出物が透明になった。そ
の反応混合物を４５分間攪拌した後、激しく攪拌されて
いる水（３２０ｍＬ）に注ぎ込んだ。得られた淡褐色の
析出物を濾過して単離し、水で洗浄した。それを水（５
０ｍＬ）とジクロロメタン（８０ｍＬ）との間で分配さ
せた。その水相をジクロロメタンでさらに２回抽出し、
その抽出物を一緒にしてこれを水、次いで飽和ＮａＣｌ
で洗浄し、Ｎａ₂ ＳＯ₄ で乾燥し、そして濾過した。溶
剤を減圧下で除去し、そして得られた固形分をエタノー
ル（５０ｍＬ）から再結晶化し、冷却し、そして濾過し
た。その生成物は白色固体（５．３ｇ、５５％、融点８
８．５〜８９℃）として得られた。 ¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ
Ｃｌ₃ ）：δ７．６０（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５）、６．
７５（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５）、４．５８（４Ｈ、
ｓ）、４．２５（４Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．１）、１．２８
（６Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１）。ＩＲ（ＫＢｒ）：１７６
５、１７２０、１５８０、１４８０ｃｍ^-1。ＦＤＭＳ
（ｍ／ｅ）４８８（Ｍ ⁺ 、 ¹³⁰Ｔｅ）。Ｃ₂₀Ｈ₂₂Ｏ₆ Ｔ
ｅの元素分析理論値：Ｃ＝４９．４３；Ｈ＝４．５６、
測定値：Ｃ＝４９．３６；Ｈ＝４．５５。

【００５２】（ｅ）４，４’−ジ（カルボキシメトキ
シ）−１，１’−テルロビスベンゼン二ナトリウム塩
（４）の合成 ジエステル４ｄ（３９．２ｇ、８１ミリモル）をメタノ
ール（４００ｍＬ）に吸収させ、１０％ＮａＯＨ水溶液
（４７ｍＬ、１７０ミリモル）を加えた。非常に濃厚な
スラリーが得られた。その反応混合物を１時間加熱還流
した。得られたスラリーを氷浴で冷却した。固形分を濾
過して単離し、エタノールで洗浄し、風乾し、そして乳
鉢と乳棒で磨砕すると淡いクリーム色の固体（３７．６
ｇ、９８％）として４が得られた。 ¹Ｈ ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆ 、５滴のＤ₂ Ｏ）：δ７．４６（４Ｈ、ｄ、
Ｊ＝８．４）、６．６６（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５）、
４．０６（４Ｈ、ｓ）。¹³Ｃ ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ）：δ１
７６．６、１５８．０、１３９．８、１１５．９、１０
４．８、６６．５。ＩＲ（ＫＢｒ）：３５４０、３４３
０、１５９５、１４９０、１４１５、１２３０ｃｍ^-1。
Ｃ₁₆Ｈ₁₂Ｎａ₂ Ｏ₆ Ｔｅ１．５Ｈ₂ Ｏの元素分析理論
値：Ｃ＝３８．３７；Ｈ＝３．０２、測定値：Ｃ＝３
８．３３；Ｈ＝３．０５。

【００５３】合成５：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ（カ
ルボキシメチル）−４，４’−テルロビスベンゼンアミ
ン四ナトリウム塩（５） （ａ）Ｎ−（２−エトキシ−２−オキソエチル）−Ｎ−
フェニルグリシン、エチルエステル（５ａ）の合成 ニューマン管を具備したフラスコ内で、アニリン（９．
３ｇ、０．１モル）、ブロモ酢酸エチル（３６．７ｇ、
０．２２モル）及び２，６−ルチジン（２３．５ｇ、
０．２２モル）をアセトニトリル（２００ｍＬ）中で１
日還流させた。反応はＴＬＣ（ジクロロメタン）によっ
て完了させた。反応混合物を室温にまで冷却し、そして
エーテル（２００ｍＬ）で希釈した。析出したルチジン
塩酸塩を濾過して分離し、その濾液を減圧下で蒸発させ
た。その残留物をエーテルと水の間で分配させ、そして
その水層をエーテルでさらに２回抽出した。抽出物を一
緒にし、これを１Ｎ ＨＣｌ、水、飽和ＮａＨＣＯ₃ 及
び飽和ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ₄ で乾燥し、そして
減圧下で蒸発させると、暗色の液体として粗生成物５ａ
が得られた。これをジクロロメタンに吸収させ、シリカ
ゲルで濾過して色を除くと、淡色の油状物として生成物
（２３．２ｇ、８８％）が得られた。 ¹Ｈ ＮＭＲ（Ｃ
ＤＣｌ₃ ）：δ７．２１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．９）、
６．７７（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．３）、６．６１（２Ｈ、
δ、Ｊ＝８．４）、４．２０（４Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．
２）、４．１３（４Ｈ、ｓ）、１．２６（６Ｈ、ｔ、Ｊ
＝７．１）。

【００５４】（ｂ）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ（エト
キシカルボニルメチル）−４，４’−テルロビスベンゼ
ンアミン（５ｂ）の合成 炉乾燥し、添加漏斗を具備し、そしてアルゴン雰囲気下
に置いた５００ｍＬの三口フラスコに、塩化テルル（Ｉ
Ｖ）（１１．９ｇ、４４ミリモル）を添加した。乾燥エ
ーテル（２００ｍＬ）をシリンジで添加すると、薄い黄
色のスラリーが得られ、そしてそのフラスコを氷浴内に
配置した。乾燥エーテル（５０ｍＬ）に５ａ（２３．２
ｇ、８９ミリモル）を含む溶液をアルゴン雰囲気下で調
製し、そしてその溶液をカニューレで添加漏斗に移し
た。その溶液を反応混合物へ激しく攪拌しながら滴下し
た。すぐに濃厚なスラッジが形成され、スターラー棒が
停止した。残りの添加は反応混合物を手動で攪拌して渦
運動をさせながら実施した。一晩攪拌することなく反応
混合物を静止させ、次いでスラッジのすべてが塊状の固
体になるまで音波処理した。反応混合物を濾過し、そし
て濾過ケークをエーテルで洗浄した。その濾過ケークを
ジクロロメタン（２００ｍＬ）に吸収させ、そして水
（２００ｍＬ）にメタ重亜硫酸ナトリウム（１７．０
ｇ、８９ミリモル）を含む溶液を攪拌しながら添加し
た。得られた二相混合物を室温で３０分間攪拌した。固
体のＮａＨＣＯ₃ を添加してｐＨを７にし、その反応混
合物をセライト（商標）珪藻土によって濾過した。その
濾液を分液漏斗に移し、ジクロロメタン層を分離し、そ
して水層をさらに新たなジクロロメタンで抽出した。抽
出物を一緒にし、これを水及び飽和ＮａＣｌで洗浄し、
Ｎａ₂ ＳＯ₄ で乾燥し、そして濾過した。次いで、溶剤
を減圧除去した。得られた赤色の油状物（１７．９ｇ）
をトルエン（１００ｍＬ）に吸収させ、そして銅粉末
（９ｇ）を添加した。その反応混合物をニューマン管で
２時間加熱還流させた。得られた灰色の反応混合物を室
温にまで冷却し、セライト（商標）珪藻土によって濾過
し、そして溶剤を減圧除去した。粗生成物（１８ｇ、琥
珀色の油状物）を、ジクロロメタン、次いで９８：２の
ジクロロメタン：メタノールで２回フラッシュクロマト
グラフィーにかけ、生成物と回収された出発物質とを分
離すると、淡いオレンジ色の粘性油状物（７．３６ｇ、
理論量の５０％）として純粋な５ｂが得られた。 ¹Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）：δ７．５２（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝
８．６）、６．４３（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７）、４．１
９（８Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．１）、４．０８（８Ｈ、ｓ）、
１．２５（１２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．１）。¹³Ｃ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ₃ ）：δ１７０．７、１４７．６、１３９．
５、１１３．６、１０１．３、６１．２、５３．３、１
４．２。ＩＲ（塩プレート）：１７３０、１５８０、１
４９０、１１８０ｃｍ^-1。ＦＤＭＳ（ｍ／ｅ）６５８
（Ｍ⁺ 、 ¹³⁰Ｔｅ）。

【００５５】（ｃ）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ（カル
ボキシメチル）−４，４’−テルロビスベンゼンアミン
四ナトリウム塩（５）の合成 ジエステル５ｂ（４．３５ｇ、６．６３ミリモル）をメ
タノール（６０ｍＬ）に吸収させ、１０％ＮａＯＨ水溶
液（７．４ｍＬ、２６．５ミリモル）を添加した。反応
混合物を１時間加熱還流した。得られたスラリーを氷浴
で冷却した後、濾過した。その固形分を低温のメタノー
ルで洗浄し、風乾すると、淡いクリーム色の固体（３．
８１ｇ、９１％）として物質５が得られた。 ¹Ｈ ＮＭ
Ｒ（Ｄ₂Ｏ）：δ７．５６（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６）、
６．３８（４Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６）、３．８３（８Ｈ、
ｓ）。¹³Ｃ ＮＭＲ（Ｄ₂ Ｏ）：δ１７９．４、１４
８．７、１３９．６、１１３．０、９８．３、５５．
５。ＩＲ（ＫＢｒ）：３２５０（ｂｒ）、１５７５、１
４０５、１２１０ｃｍ^-1。Ｃ₂₀Ｈ₁₆Ｎａ₄ Ｎ₂ Ｏ₈ Ｔｅ
・３Ｈ₂ Ｏの元素分析理論値：Ｃ＝３５．０２；Ｈ＝
３．２３；Ｎ＝４．０８、測定値：Ｃ＝３４．８２；Ｈ
＝３．０３；Ｎ＝４．０４。

【００５６】

【実施例】下記の実施例により本発明の実施を説明す
る。実施例１ 記載の被膜を細長く切ってスライドとして載せた。スラ
イドを含むカートリッジを製作し、これをベンチトップ
の上に置いて実験室の照明をつけたまま１６〜２４時間
放置しておいた。ベンチトップでのインキュベーション
が終了した日に、プロトタイプの自動薄層イムノアッセ
イ分析装置を用いてスライドを試験した。１０，０００
ｍＩＵ／ｍＬのｈＣＧを含有する１１μＬのヒト血清マ
トリックス溶液を各スライドにアプライした。次いで、
各スライドを３７℃で５分間インキュベートし、その
後、Ｎａ₂ ＨＰＯ₄ （１０ｍＭ、ｐＨ６．８）と、４’
−ヒドロキシアセタナリド（５ｍＭ）と、ヘキサデシル
ピリジニウムクロリド（０．１％）と、Ｈ₂ Ｏ₂ （８ｍ
Ｍ）と、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）（１
０μＭ）とを含有する洗浄液１２μＬを各スライドにア
プライした。この洗浄液は、結合していない抗体−西洋
ワサビペルオキシダーゼ標識を読取り領域から完全に洗
い流し、且つＨＲＰ−触媒発色反応を開始させるように
働く。洗浄液を加えた後、各スライドに３７℃における
第二のインキュベーションを施し、その間に、６７０ｎ
ｍの波長で３秒のインターバルを置いて反射濃度の読取
りを行った。反射濃度の測定値から各被膜のスライドの
発色速度を算出した。

【００５７】血清試料中のヒト絨毛膜ゴナドトロピン
（ｈＣＧ）を分析するための下記組成の薄い被膜をポリ
（エチレンテレフタレート）支持体の上に製作した。
（被膜構造における用語はまとめて後述してある。）

【００５８】被膜（１） 層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.219 展開層 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 ジメドン 0.45 接着剤ポリマー 2.58 ポリマービーズ 130.0 ＢＳＡ 1.0 グリセロール 2.0 マンニトール 1.0 標識 34e-6 レセプター ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.10 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.80 ロイコ色素 0.20 抗体ビーズ 0.10 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10.0 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.58 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＴＸ−１００ 0.02 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００５９】被膜（２） 層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.219 展開層 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 ジメドン 0.45 接着剤ポリマー 2.58 ポリマービーズ 130.0 ＢＳＡ 1.0 グリセロール 2.0 マンニトール 1.0 標識 34e-6 ＶＯＳＯ₄ 0.04 レセプター ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.10 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.80 ロイコ色素 0.20 抗体ビーズ 0.10 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10.0 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.58 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＴＸ−１００ 0.02 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００６０】被膜（３） 層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.219 展開層 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 ジメドン 0.45 接着剤ポリマー 2.58 ポリマービーズ 130.0 ＢＳＡ 1.0 グリセロール 2.0 マンニトール 1.0 標識 34e-6 １ 0.04 レセプター ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.10 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.80 ロイコ色素 0.20 抗体ビーズ 0.10 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10.0 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.58 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＴＸ−１００ 0.02 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００６１】被膜（４） 層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.219 展開層 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 ジメドン 0.45 接着剤ポリマー 2.58 ポリマービーズ 130.0 ＢＳＡ 1.0 グリセロール 2.0 マンニトール 1.0 標識 34e-6 ３ 0.012 レセプター ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.10 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.80 ロイコ色素 0.20 抗体ビーズ 0.10 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10.0 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.58 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＴＸ−１００ 0.02 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００６２】被膜（５） 層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.219 展開層 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 ジメドン 0.45 接着剤ポリマー 2.58 ポリマービーズ 130.0 ＢＳＡ 1.0 グリセロール 2.0 マンニトール 1.0 標識 34e-6 ＶＯＳＯ₄ 0.04 １ 0.04 レセプター ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.10 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.80 ロイコ色素 0.20 抗体ビーズ 0.10 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10.0 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.58 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＴＸ−１００ 0.02 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００６３】被膜（６） 層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.219 展開層 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 ジメドン 0.45 接着剤ポリマー 2.58 ポリマービーズ 130.0 ＢＳＡ 1.0 グリセロール 2.0 マンニトール 1.0 標識 34e-6 ＶＯＳＯ₄ 0.04 ３ 0.012 レセプター ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.10 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.80 ロイコ色素 0.20 抗体ビーズ 0.10 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10.0 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.58 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＴＸ−１００ 0.02 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００６４】被膜１〜６のカートリッジスライドの比較 最上部スライド 非最上部スライド 最上部スライド被膜 の速度（n=3) の速度(n=15) の速度低下率％ １ 0.186 Dt/分 0.231 Dt/分 -19.48% ２ 0.316 Dt/分 0.317 Dt/分 -0.32% ３ 0.305 Dt/分 0.318 Dt/分 -4.09% ４ 0.202 Dt/分 0.211 Dt/分 -4.27% ５ 0.292 Dt/分 0.295 Dt/分 -1.02% ６ 0.211 Dt/分 0.212 Dt/分 -0.47%

【００６５】このカートリッジスライドの比較は、被膜
中にＶＯＳＯ₄ 又はＤＡＴ化合物のいずれも含まれてい
ない場合に、カートリッジ内の第一番目のスライドの速
度低下率が大きいことを明確に示している。この第一ス
ライドにおける発色速度の低下は、検査を受ける試料に
ついて間違ったアナライト濃度の予測をもたらすことに
なる。ＶＯＳＯ₄ （被膜２）、ＤＡＴ化合物（被膜３及
び４）又はＶＯＳＯ₄とＤＡＴ化合物の組合せ（被膜５
及び６）を内蔵させると、最上部スライドにおいて保持
される速度率が著しく改良される。

【００６６】実施例２ 調査したＤＡＴ化合物の効果をさらに明確にするため、
各被膜からのスライドをベンチトップ上で上向きに配置
し、カートリッジ内に残されたスライドと同じ条件に晒
した（蛍光灯をつけたまま室温で１６〜２０時間のイン
キュベーション）。インキュベーション期間後、先に記
載したものと同じ材料及びプロトコールを使用したプロ
トタイプの自動薄層イムノアッセイ分析装置でスライド
を試験した。予想される結果は、スライドを環境因子
（光、空気、等）により多く暴露したことによる発色速
度のより大幅な低下である。環境への暴露を増加させた
ことによる効果を観測する方法として、ベンチトップス
ライドの発色速度と（最上部スライドを除く）各条件に
ついてのカートリッジスライドの発色速度とを比較し
た。上記のように処理したスライドの結果は以下の通り
であった。

【００６７】被膜１〜６のカートリッジスライドの比較 ベンチトップ カートリッジ ベンチトップ スライド スライド スライド 被膜 の速度（n=10) の速度(n=15) の速度低下率％ １ 0.161 Dt/分 0.231 Dt/分 -30.3 % ２ 0.288 Dt/分 0.317 Dt/分 -9.15% ３ 0.293 Dt/分 0.318 Dt/分 -7.86% ４ 0.179 Dt/分 0.211 Dt/分 -15.17% ５ 0.291 Dt/分 0.295 Dt/分 -1.36% ６ 0.198 Dt/分 0.212 Dt/分 -6.6 %

【００６８】このベンチトップスライド試験は、ＶＯＳ
Ｏ₄ （被膜２）、ＤＡＴ化合物（被膜３及び４）又はＶ
ＯＳＯ₄ とＤＡＴ化合物の組合せ（被膜５及び６）を被
膜に内蔵させると、環境への暴露による速度低下が防止
されることを示している。この試験はまた、同じ被膜中
にＶＯＳＯ₄ と化合物１を内蔵させた場合（被膜５）の
協同的な作用についても示している。このため、いずれ
かの化合物を単独で内蔵させた場合（被膜２及び被膜
３）よりも速度低下率が小さくなっている。ＤＡＴ（１
〜５）は、ＨＲＰ活性の低下を強調するように設計され
たモデル系でどれも評価した。この系では、次の実施例
に示したように、ＤＡＴの１、４及び５が、単独で又は
バナジル塩との協同において、ＨＲＰ活性を保護した。

【００６９】実施例３〜５ ポリ（エチレンテレフタレート）支持体上で下記組成の
分析要素を製作した。 層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.219 展開層 接着剤ポリマー 2.58 ポリマービーズ（２０〜４０μＭ） 130.0 レセプター ポリマーバインダーＩ 0.60 層 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 0.10 ＴＸ−１００ 0.02 ゲル ゼラチン 10.0 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.58 ＴＸ−１００ 0.020 ＢＶＳＭＥ 0.150

【００７０】この分析要素を使用して、下記のプロトコ
ールでＨＲＰの安定性を測定した。本発明のジアリール
テルリド化合物の一種を各種量で含有し且つ約３×１０
^-8ＭのＨＲＰを含有する１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ７．０）の試料１０μＬを、上記の被覆要素
の離れた１ｃｍ² 部分の各々に点着した（各化合物につ
いて及び各濃度において４個の試料）。これらの要素を
乾燥し、そして暗い引出しの中に入れておいた。３０分
後及び２４時間後（すなわち、翌日）、要素を引出しか
ら取り出して、各要素を、試験管内の１０ｍＭリン酸ナ
トリウム緩衝液、０．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％
牛血清アルブミンを含む溶液（ｐＨ７．０）１ｍＬの中
に浸漬してＨＲＰを抽出した。その試験管をボルテック
スで１分間攪拌した後〔分析要素成分がポリ（エチレン
テレフタレート）支持体から分離〕、得られた懸濁液を
遠心分離して溶液を分離した。この溶液中の活性なＨＲ
Ｐの量を、１００μＬのアリコートを分光光度計のキュ
ベットに加え且つ５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）、５ｍＭの４’−ヒドロキシアセトアニリ
ド、０．６２５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（商標）
界面活性剤、０．００５％の４，５−ビス（４−ジメチ
ルアミノフェニル）−２−（４−ヒドロキシ−３−メト
キシフェニル）イミダゾール系ロイコ色素、及び０．８
５ｍＭの過酸化水素を含む最終溶液１ｍＬを提供する試
薬溶液を添加することによって測定した。アッセイの温
度は３０℃とした。青色の発色があり、その発色速度を
６５５ｎｍにおいて分光光度法で測定した。この発色速
度は、抽出物中の活性酵素の量に直接比例した。

【００７１】これらのデータは、各試料について２４時
間時点で抽出された活性を３０分時点で抽出された活性
で割り算して得られた活性比として表現した。活性比１
は、酵素が２４時間にわたって添加物によって完全に保
護されたことを示す。実験間でデータのばらつきが多少
認められたが、これは恐らく環境の湿度や温度が日によ
って異なるためである。このことは、被膜におけるＨＲ
Ｐの乾燥速度に影響を及ぼし、引いては酵素の見かけの
安定性に影響を与える恐れがある。従って、データの比
較は実施例３〜５の内部では可能であるが、これら実施
例間では不可能である。

【００７２】実施例３ 化合物１、２、３及び４の１ｍＭにおける効果を、単独
で又は１ｍＭのＶＯＳＯ₄ の存在下で、比較した（図
１）。化合物１及び４は、モデル系の乾燥定着フォーマ
ットにおいて、添加剤を含まないものに関してＨＲＰ活
性を保護した。化合物２及び３は、このフォーマットで
は有効な安定化剤ではなかった。ＶＯＳＯ ₄ と化合物１
又は４との両方が含まれる場合には、いずれか一方が単
独で存在する場合よりも多くのＨＲＰ活性が保持され
た。実施例４ 化合物１及び４のＨＲＰ安定化能に対する濃度の効果を
示す（図２）。ＨＲＰ溶液において、１、０．１又は
０．０１ｍＭの化合物１及び１０、１又は０．１ｍＭの
化合物４を使用した。さらに、緩衝液のみを含有する又
は１ｍＭのＶＯＳＯ₄ を含有するＨＲＰ溶液を点着し
た。化合物１及び４共に、活性低下には試薬濃度依存性
があった。１０ｍＭの化合物４が存在すると、ＨＲＰ活
性は２４時間のインキュベーション後でも完全に保護さ
れていた。

【００７３】実施例５ この実施例は、抗−ＣＲＰ−ＨＲＰ酵素複合体（２．８
５×１０^-8Ｍ）の安定性に対する化合物４及び５の効果
を示すものである。点着液には、緩衝液のみを含むも
の、１、２、４もしくは８ｍＭの化合物４を含むもの、
又は１もしくは８ｍＭの化合物５を含むものを使用し
た。化合物４及び５のどちらも複合体ＨＲＰの活性を保
護し、またその保護には濃度依存性があった（図３）。実施例６ 下記被膜構造体７〜１０に示したような被膜７〜１０を
製作し、スライドとして載せ、約２１℃（７０°Ｆ）／
３３％ＲＨで２日間コンディショニングし、そして凍結
した。

【００７４】被膜（７） 血清試料中のＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）を分析す
るための下記組成の薄い被膜をポリ（エチレンテレフタ
レート）支持体の上に製作した。層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 0.219 展開層 ジメドン 0.450 ＣａＣｌ₂ 1.0 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 グリセロール 2 牛血清アルブミン 0.5 マゼンタ色素 0.0538 接着剤ポリマー 2.538 ポリマービーズ 130 レセプター ＴＥＳ緩衝液 0.1 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.8 ロイコ色素 0.2 ＰＣビーズ 0.3 抗−ＣＲＰ抗体 0.05 抗−ＣＲＰ抗体−ＨＲＰ複合体 0.0005 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.580 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００７５】被膜（８） 血清試料中のＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）を分析す
るための下記組成の薄い被膜をポリ（エチレンテレフタ
レート）支持体の上に製作した。層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 0.219 展開層 ジメドン 0.450 ＣａＣｌ₂ 1.0 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 グリセロール 2 牛血清アルブミン 0.5 マゼンタ色素 0.0538 接着剤ポリマー 2.538 ポリマービーズ 130 １ 0.08 レセプター ＴＥＳ緩衝液 0.1 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.8 ロイコ色素 0.2 ＰＣビーズ 0.3 抗−ＣＲＰ抗体 0.05 抗−ＣＲＰ抗体−ＨＲＰ複合体 0.0005 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.580 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００７６】被膜（９） 血清試料中のＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）を分析す
るための下記組成の薄い被膜をポリ（エチレンテレフタ
レート）支持体の上に製作した。層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 0.219 展開層 ジメドン 0.450 ＣａＣｌ₂ 1.0 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 グリセロール 2 牛血清アルブミン 0.5 マゼンタ色素 0.0538 接着剤ポリマー 2.538 ポリマービーズ 130 ２ 0.075 レセプター ＴＥＳ緩衝液 0.1 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.8 ロイコ色素 0.2 ＰＣビーズ 0.3 抗−ＣＲＰ抗体 0.05 抗−ＣＲＰ抗体−ＨＲＰ複合体 0.0005 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.580 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００７７】被膜（１０） 血清試料中のＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）を分析す
るための下記組成の薄い被膜をポリ（エチレンテレフタ
レート）支持体の上に製作した。層 材料 乾燥塗布量(g/m²) ビーズ ＴＥＳ緩衝液 0.219 展開層 ジメドン 0.450 ＣａＣｌ₂ 1.0 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.22 グリセロール 2 牛血清アルブミン 0.5 マゼンタ色素 0.0538 接着剤ポリマー 2.538 ポリマービーズ 130 ＶＯＳＯ₄ 0.04 レセプター ＴＥＳ緩衝液 0.1 層 ＴＸ−１００ 0.02 ポリマーバインダー 0.8 ロイコ色素 0.2 ＰＣビーズ 0.3 抗−ＣＲＰ抗体 0.05 抗−ＣＲＰ抗体−ＨＲＰ複合体 0.0005 Tetronic T908 0.02 Olin 10G 0.01 ゲル ゼラチン 10 ＴＥＳ緩衝液 ｐＨ７．０ 4.580 3',5'-ジクロロ-4'-ヒドロキシアセトアニリド 0.44 ＢＶＳＭＥ 0.15

【００７８】カートリッジを解凍してＥ２５０分析装置
に装填した。各スライドに、約２０ｍｇ／ＬのＣＲＰを
含有するヒト血清試料１１μＬをアプライした。次い
で、各スライドを３７℃で５分間インキュベートし、そ
の後、Ｎａ₂ ＨＰＯ₄ （１０ｍＭ、ｐＨ６．８）、４’
−ヒドロキシアセトアニリド（５ｍＭ）、ヘキサデシル
ピリジニウムクロリド（０．１％）、Ｈ２０２（８ｍ
Ｍ）及びＤＴＰＡ（１０μＭ）を含有する洗浄液１２μ
Ｌを各スライドにアプライし、結合していない抗体−Ｈ
ＲＰ複合体を読取り領域から洗い流して、ＨＲＰを触媒
とする色素生成反応を開始させた。３７℃における２．
５分間のインキュベーション後、６７０ｎｍにおける反
射濃度を測定し、これを検量線によってＣＲＰ濃度に変
換した。最上部スライドの予測濃度を、次の６枚のスラ
イドの予測濃度平均値と比較した。この種の数回の実験
結果を以下に示す。バイアス＝最上部スライド予測値−
スライド２〜７の平均予測値

【００７９】 実験１ 実験２ 実験３被膜 試薬 １カート ２カートの平均 １カート ７ 無し -29.9 -27.5 -34.3 ８ １ -6.0 -6.1 -7.2 ９ ２ -23.2 -19.3 -21.8 １０ VOSO₄ -13.3 -16.2 -20.6

【００８０】これらの結果は、いずれの保護剤も存在し
ない場合に、最上部スライドの予測値は以降のスライド
よりも実質的に小さくなることを示している。ＤＴＡの
１もしくは２又はＶＯＳＯ₄ を添加すると、最上部スラ
イドとそれ以降のスライドとの間のバイアスが縮小す
る。化合物１による改良が最大であった。

【００８１】実施例７ 被膜７〜１０を製作し、スライドとして載せ、約２１℃
（７０°Ｆ）／３３％ＲＨで２日間コンディショニング
し、そして凍結した。カートリッジを解凍した。各カー
トリッジの最上部のスライドを取り出し、そしてそのカ
ートリッジを約２１℃（７０°Ｆ）／３３％ＲＨで３日
間インキュベートした。これらのスライドを、実施例６
に記載したように、約２０ｍｇ／ＬのＣＲＰを含有する
ヒト血清を用いて試験した。約２１℃（７０°Ｆ）／３
３％ＲＨに３日間暴露した最上部スライドの予測値を、
スライド２〜７の平均予測値と比較した。その結果を以
下に示す。バイアス＝最上部スライド予測値−スライド
２〜７の平均予測値

【００８２】

【００８３】これらの結果は、新たに暴露された最上部
スライドが３日間で変化をし、保護剤が存在しない場合
には下部のスライドよりも実質的に低い予測値をもたら
すことを示している。ジアリールテルリド１及び２並び
にＶＯＳＯ₄ はスライドを保護し、同じカートリッジ内
の下部のスライドに対するバイアスを縮小する。ここで
もまた、化合物１による改良が最大であった。

【００８４】実施例８ 被膜７〜１０を製作し、スライドとして載せ、約２１℃
（７０°Ｆ）／３３％ＲＨで２日間コンディショニング
し、そして凍結した。カートリッジを解凍し、そして約
２１℃（７０°Ｆ）／３３％ＲＨで７日間インキュベー
トした。インキュベート後のカートリッジと解凍したば
かりのカートリッジとを、実施例６に記載したように、
約１０〜３０ｍｇ／ＬのＣＲＰを含有する３種類のヒト
血清試料を用いて分析した。インキュベートしたスライ
ドの予測値を、解凍したばかりのスライドの予測値と比
較した。３種類の流体について解凍直後のスライドに対
するインキュベート後のスライドの平均バイアスを測定
し、これを以下に示す。

【００８５】

【００８６】これらの結果は、保護剤が存在しない場
合、約２１℃（７０°Ｆ）／３３％ＲＨに７日間暴露さ
れたスライドは、解凍したばかりのスライドに対してバ
イアスを生じていることを示している。化合物１もしく
は２又はＶＯＳＯ₄ が存在する場合には、この暴露によ
るバイアスは実質的に縮小する。

【００８７】本発明によると、ＨＲＰの安定性が、単独
で又はバナジル系化合物のような他の安定化剤との併用
において、改良される。

【００８８】一覧表 接着剤ポリマー：ポリ（メチルアクリレート−コ−２−
アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸ナトリ
ウム−コ−２−アセトアセトキシエチルメタクリレー
ト） 抗体ビーズ：ヒト絨毛膜ゴナドトロピンに対する抗体が
結合しているポリ（スチレン−コ−３−（ｐ−ビニルベ
ンジルチオ）プロピオン酸 ＰＣビーズ：ホスホリルコリンが結合しているポリ（ス
チレン−コ−３−（ｐ−ビニルベンジルチオ）プロピオ
ン酸 ＢＳＡ：牛血清アルブミン ＢＶＳＭＥ：ビス（ビニルスルホニルメチル）エーテル ＤＴＰＡ：ジエチレントリアミン五酢酸 標識：抗−ヒト絨毛膜ゴナドトロピン抗体とチオレート
化西洋ワサビペルオキシダーゼとの複合体 ロイコ色素：４，５−ビス（４−ジメチルアミノフェニ
ル）−２−（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェ
ニル）イミダゾール マゼンタ色素：４，５−ジヒドロキシ−３−（６，８−
ジスルホ−２−ナフチランゾ）−２，７−ナフタレンジ
スルホン酸ナトリウム ＭＯＰＳ：３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン
酸緩衝剤 Ｏｌｉｎ １０Ｇ：１分子当たり平均約１０個のグリシ
ドール単位を有するイソノニルフェノキシポリグリシド
ール界面活性剤（Ｏｌｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製） ポリマービーズ：平均直径２０〜４０μｍのポリ（ビニ
ルトルエン−コ−メタクリル酸）粒子 ポリマーバインダー：ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリル
アミド−コ−２−アクリルアミド−２−メチルプロパン
スルホン酸ナトリウム−コ−Ｎ，Ｎ’−メチレンビスア
クリルアミド） ポリマーバインダーＩ：ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリ
ルアミド−コ−２−ヒドロキシエチルメタクリレート−
コ−Ｎ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド）（ＩＭｎ
Ａｇ） ＴＥＳ：Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−
２−アミノエタンスルホン酸緩衝剤 ＴＸ−１００：Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００界面活性剤／
オクチルフェノキシポリエトキシエタノール界面活性剤
（Ｕｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉｄｅ製） Ｔｅｔｒｏｎｉｃ Ｔ９０８：酸化エチレンと酸化プロ
ピレンのブロックコポリマーである非イオン性界面活性
剤（ＢＡＳＦ社製）

【００８９】本発明をその好ましい実施態様を特に参照
しながら説明してきたが、本発明の精神及び範囲内で種
々の置換や変更が可能であることを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例３の結果を示すグラフである。

【図２】実施例４の結果を示すグラフである。

【図３】実施例５の結果を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 キャロル アン デカン アメリカ合衆国，ニューヨーク 14612, ロチェスター，ブランドン サークル 40 (72)発明者 マーシャ デニス ベイル オーニック アメリカ合衆国，ニューヨーク 14610, ロチェスター，サン ガブリエル ドライ ブ 44 (72)発明者 ゲイリー ルイス スノッドグラス アメリカ合衆国，ニューヨーク 14514, ノース チリ，スレード ドライブ 20 (72)発明者 ロイ オージーン スノーク アメリカ合衆国，ニューヨーク 14580, ウェブスター，マリーゴールド ドライブ 1085

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （ａ）酵素標識リガンド又は酵素標識レ
   セプターの帯域、 （ｂ）展開帯域、並びに （ｃ）リガンドに対する固定化レセプター及び場合によ
   り存在する標識リガンドを一定濃度で含有し、その際前
   記レセプターは直径０．１〜５μｍのポリマービーズに
   共有結合されているレセプター帯域を担持する支持体を
   含むリガンド分析用の乾式免疫分析要素であって、該要
   素がジアリールテルリド系化合物を含有し且つ前記複数
   の帯域が同じ層内に存在しても又は別々の層に存在して
   もよいことを特徴とする乾式免疫分析要素。
2. 【請求項２】 前記ジアリールテルリド系化合物が下記
   構造式（Ｉ）で示される、請求項１に記載の乾式免疫分
   析要素： Ａｒ¹ −Ｔｅ−Ａｒ² （Ｉ） 〔上式中、Ａｒ¹ 及びＡｒ² は、置換されていてもいな
   くてもよい同じ又は異なるアリール基又はヘテロアリー
   ル基を表し、下記置換基： 【化１】 （上式中、ＸはＯ、Ｓ、Ｓｅ又はＴｅであり、Ｒ¹¹、Ｒ
   ¹²、Ｒ¹³、Ｒ²¹、Ｒ²²、Ｒ²³、Ｒ³¹、Ｒ³²、Ｒ³³、
   Ｒ⁴¹、Ｒ⁴²及びＲ⁴³は同じであるか又は異なり且つ水
   素、炭素原子数１〜５個のアルキル、ＯＨ、ＯＲ¹ 、Ｓ
   Ｈ、ＮＨ₂ 、ＮＨＲ¹ 、ＮＨＲ¹ ₂、ＮＲ¹ Ｒ² 、ＣＯ₂
   Ｈ及びその塩、ＣＯ₂ Ｒ¹ 、ＳＯ₃ Ｈ及びその塩、ＰＯ
   ₃ Ｈ₂ 及びその塩並びにＳＲ¹ から成る群より各々選ば
   れ、その際、Ｒ¹とＲ² は異なり且つ必要に応じて１個
   又は数個の親水性基、フェニル及び／又は置換フェニル
   を有する炭素原子数１〜１４個の炭素鎖を有するアルキ
   ルから成る群より各々選ばれ、 Ｒ¹⁴、Ｒ¹⁵、Ｒ²⁴及びＲ²⁵は同じであるか又は異なり且
   つ水素、炭素原子数１〜５個のアルキル、炭素原子数１
   〜５個のアルコキシ、ＣＯ₂ Ｈ及びその塩、ＣＯ
   ₂ Ｒ¹ 、ＳＯ₃ Ｈ及びその塩、ＰＯ₃ Ｈ₂ 及びその塩か
   ら成る群より各々選ばれる）を有する〕。
3. 【請求項３】 前記標識リガンド又は標識レセプターに
   おける標識が西洋ワサビペルオキシダーゼ又は西洋ワサ
   ビペルオキシダーゼの誘導体である、請求項１に記載の
   乾式免疫分析要素。
4. 【請求項４】 水性液体試料中に含まれる免疫学的に反
   応性のリガンドの分析方法であって、 （Ａ）請求項１に記載の乾式免疫分析要素を準備し、 （Ｂ）前記要素の最上部の帯域又は層の有限領域に前記
   試料を接触させて（１）固定化リガンド−レセプター複
   合体、（２）固定化酵素標識リガンド−レセプター複合
   体もしくは（３）前記（１）と（２）の混合物又は固定
   化レセプター−リガンド−標識レセプター複合体を形成
   させ、 （Ｃ）前記有限領域に基質溶液を接触させて発色反応を
   触媒し、そして （Ｄ）前記リガンドの濃度を比色測定する工程を含む分
   析方法。
5. 【請求項５】 ジアリールテルリドを含有する化合物及
   び西洋ワサビペルオキシダーゼ又はその複合体を含む、
   免疫学的に反応性のリガンドの分析に用いるための組成
   物。
6. 【請求項６】 前記化合物が下式： 【化２】 で示される化合物から成る群より選ばれた、請求項５に
   記載の組成物。
7. 【請求項７】 前記化合物が下式： 【化３】 で示される化合物である、請求項６に記載の組成物。
8. 【請求項８】 前記化合物が下式： 【化４】 で示される化合物である、請求項６に記載の組成物。
9. 【請求項９】 前記化合物が下式： 【化５】 で示される化合物である、請求項６に記載の組成物。
10. 【請求項１０】 前記化合物が下式： 【化６】 で示される化合物である、請求項６に記載の組成物。
11. 【請求項１１】 前記化合物が下式： 【化７】 で示される化合物である、請求項６に記載の組成物。