JPH09224665A - β−フラクトフラノシダーゼとその製造方法並びに用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 フラクトシル転移能が高く、工業的実施に有
利なβ−フラクトフラノシダーゼを提供し、併せて、そ
の製造方法並びに用途を提供する。 【解決手段】 主な理化学的性質が、 分子量：ＳＤＳ−ゲル電気泳動法で４９，０００±５，
０００ダルトン 等電点：アンフォライン含有電気泳動法で４．６±０．
５ 至適ｐＨ：４０℃、１０分間反応で、約５．５乃至６．
０ 至適温度：ｐＨ６．０、１０分間反応で、カルシウム非
存在下で４５℃付近、カルシウムイオン存在下で５０℃
付近 である新規フラクトフラノシダーゼと、その製造方法並
びに用途を提供することで上記課題を解決する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術的分野】本発明は、フラクトシル転
移能の高い新規なβ−フラクトフラノシダーゼと、その
製造方法及び用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】蔗糖と他の糖質とを原料として、β−フ
ラクトフラノシダーゼ（別名フルクトシルトランスフェ
ラーゼ）の糖転移作用により生成されるフラクトシル転
移糖、例えば、キシロシルフラクトシド、ラクトスクロ
ースなどは、抗う蝕性、あるいはビフィズス菌増殖促進
性などの性質を有することから、食品、医薬品分野にお
いて注目されているオリゴ糖である。

【０００３】これらのフラクトシル転移糖を生成するβ
−フラクトフラノシダーゼとして、微生物起源のアルス
ロバクター・スピーシーズ Ｋ−１（Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｓｐ． Ｋ−１）、及びバチルス・メガテリ
ウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ） Ｉ
ＦＯ １３４９８の産生する酵素が知られている。

【０００４】アルスロバクター・スピーシーズ Ｋ−１
のβ−フラクトフラノシダーゼは、『アグリカルチュラ
ル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉ
ｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ）』、第５４巻、第４号、９１３乃至
９１９頁、（１９９０年）によれば、その反応至適ｐＨ
が６．５乃至６．８とされている。このｐＨ領域では、
工業的な酵素反応の温度条件において、糖質の褐変が起
こりやすく、とくにフラクトースが生成する反応におい
てその傾向が顕著であり、反応糖液の精製過程における
脱色操作に多大の負荷をかけることが懸念される。ま
た、バチルス・メガテリウム ＩＦＯ １３４９８のβ
−フラクトフラノシダーゼは、特開平４−２００３８６
号公報に示されているように、その反応至適ｐＨは６．
０であり、その条件下での酵素反応液の褐変の程度は低
いものと思われる。しかしながら、この酵素の至適温度
が４０乃至４５℃と低く、この付近の温度での酵素反応
においては、微生物汚染の心配がある。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、フラクトシ
ル転移能が高く、工業的実施に有利なβ−フラクトフラ
ノシダーゼと、該酵素を利用したフラクトシル転移糖の
製造方法，並びにその用途を提供するものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために、反応の至適温度が高く、至適ｐＨが
糖質の安定な弱酸性域にあり、しかも糖転移能の高い新
規なβ−フラクトフラノシダーゼを求めて、その酵素を
産生する微生物を広く検索した。その結果、岡山市の土
壌から分離したバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属す
る新規な微生物Ｖ２３０が、目的とするβ−フラクトフ
ラノシダーゼを産生することを見いだし、更に、本酵素
を、蔗糖とそれ以外の糖質とを含有する溶液に作用させ
ることにより、フラクトシル転移糖含有糖質の製造方法
を確立し、併せてこの糖質を含有せしめた組成物を確立
して本発明を完成した。

【０００７】以下、本発明における新規微生物バチルス
属に属する微生物Ｖ２３０の同定試験結果を示す。な
お、同定試験は、『微生物の分類と同定』（長谷川武治
編、学会出版センター、１９８５年）に準拠して行っ
た。

【０００８】〈Ａ 細胞形態〉 （１）肉汁寒天培養、２７℃、培養１日：１．０乃至
１．５×３．０乃至７．５μｍの桿菌。単独、希に対を
なし、連鎖した細胞も観察される。周鞭毛による運動性
あり。非抗酸性。グラム染色不定。ポリ−β−ヒドロキ
シブチレートを蓄積しない。培養４日で内生胞子を極希
に認める。 （２）ポテトエキス・ペプトン・グルコース寒天培地、
27℃、培養１日：０．９乃至１．５×２．７乃至６．０
μｍの桿菌。単独、希に対をなし、連鎖した細胞も観察
される。運動性あり。グラム染色不定。内生胞子形成。
胞子着生位置は細胞の末端で、胞子のうの膨らみ無し。
胞子は０．８乃至１．０×１．０乃至１．６μｍの楕
円。土壌エキス培地を用いた培養でも胞子形成を認め
る。

【０００９】 〈Ｂ 培養的性質〉 （１）肉汁寒天平板培養、２７℃ 形状 ：円形、大きさは１日で１．０乃至１． ５ｍｍ。３日で１．５乃至３ｍｍ。 周縁 ：全縁 隆起 ：台状 光沢 ：鈍光 表面 ：平滑〜疣状 透明度 ：半透明〜不透明 色調 ：クリーム色 （２）肉汁寒天斜面培養、２７℃ 生育度 ：良好 形状 ：糸状。隆起は薄く、表面は平滑で湿光 〜鈍光、半透明、クリーム色 （３）肉汁ゼラチン穿刺培養、２７℃ ：液化

【００１０】 〈Ｃ 生理学的性質〉 （１）硝酸塩の還元性 ：陽性 （２）脱窒反応 ：陰性 （３）メチルレッド試験 ：陰性 （４）ＶＰ試験 ：陰性 （５）インドールの生成 ：陰性 （６）硫化水素の生成 ：陰性 （７）澱粉の分解 ：陽性 （８）カゼインの分解 ：陰性 （９）ポリ−β−ヒドロキシブチレートの蓄積 ：陰性 （１０）プロトカテク酸の分解 ：陰性 （１１）クエン酸の利用 ：陰性 （１２）無機窒素源の利用 ：アンモニウム塩および硝酸塩ともに利 用できる。 （１３）色素の生成 ：陰性 （１４）蛍光色素の生成 ：陰性 （１５）ウレアーゼ ：陽性 （１６）オキシダーゼ ：陽性 （１７）カタラーゼ ：陽性 （１８）生育の範囲 ：ｐＨ５乃至８、温度１５乃至４５℃。 （１９）酸素に対する態度 ：好気性 （２０）炭素源の利用と酸生成の有無 利用性 酸生成能 Ｄ−グルコース 利用する 陽性 Ｄ−ガラクトース 利用する 陽性 Ｄ−マンノース 利用する 陽性 Ｄ−フラクトース 利用する 陽性 Ｌ−アラビノース 利用する 陽性 Ｄ−キシロース 利用する 陽性 Ｌ−ラムノース 利用する 陽性 マルトース 利用する 陽性 蔗糖 利用する 陽性 乳糖 利用する 陰性 トレハロース 利用する 陽性 ラフィノース 利用する 陽性 ソルビトール 利用する 陽性 マンニトール 利用する 陽性 ズルチトール 利用しない 陰性 グリセロール 利用しない 陰性 デキストリン 利用する 陽性 （２１）アミノ酸の脱炭酸試験 ：Ｌ−リジン、Ｌ−アルギニン、オルニ チンのいずれに対しても陰性。 （２２）アミノ酸の利用 ：Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、Ｌ−ア スパラギン酸ナトリウム、Ｌ−アルギ ニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−ヒス チジン、Ｌ−バリン、Ｄ−アラニンの いずれも利用する。 （２３）ＤＮａｓｅ ：陰性 （２４）３−ケト乳糖の生成 ：陰性 （２５）ＤＮＡのＧ−Ｃ含量 ：４１％ （２６）細胞壁ジアミノ酸 ：ｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸

【００１１】以上の菌学的性質に基づいて、『バージー
ズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオ
ロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ
ｕｍｅ ２）』、第２巻、（１９８６年）を参考にして
公知菌との異同を検討した。その結果、本菌は、グラム
染色は不定であったが、好気性で、内生胞子を形成した
ことから、バチルス属に属する微生物であることが判明
した。さらに、本菌は、上記の菌学的諸性質からバチル
ス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒ
ｉｕｍ）に近いことがわかるが、内生胞子は細胞の末端
に形成されること、カゼインの分解性陰性、クエン酸の
利用性陰性、１０℃での生育陰性などの点でバチルス・
メガテリウムとは明らかに異なることが判明した。

【００１２】これらの結果から、本発明者等は、本微生
物をバチルス・スピーシーズ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓ
ｐ．）Ｖ２３０と命名し、平成７年３月２４日付で、茨
城県つくば市にある通商産業省工業技術院生命工学工業
技術研究所に寄託し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５０５
４として受託された。

【００１３】本発明では、本菌株のみならず、その変異
株なども使用することができる。

【００１４】本発明の微生物の培養に用いる培地は、本
微生物が生育でき、本発明の酵素を産生するものであれ
ばよく、合成培地および天然培地のいずれでもよい。炭
素源としては、本微生物が資化できる物であればよく、
例えば、蔗糖、乳糖、マルトース、デキストリン、澱粉
などの糖質、糖蜜および酵母エキスなどの糖含有物など
を使用することができる。培地におけるこれらの炭素源
の濃度は炭素源の種類により適宜選択される。例えば、
培養液の蔗糖の濃度は、２０ｗ／ｖ％以下が望ましく、
菌の生育および増殖からは、通常、５ｗ／ｖ％以下が好
ましい。窒素源としては、例えば、アンモニウム塩、硝
酸塩などの無機窒素化合物、及び、例えば、尿素、コー
ン・スティープ・リカー、カゼイン、ペプトン、酵母エ
キス、肉エキスなどの有機窒素含有物が用いられる。ま
た、無機成分としては、例えば、カルシウム塩、マグネ
シウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、リン酸塩、マン
ガン塩、亜鉛塩、鉄塩、銅塩、モリブデン塩、コバルト
塩などが、必要に応じて適宜用いられる。

【００１５】培養は、通常、温度１５乃至４５℃、好ま
しくは２５乃至３７℃、ｐＨ５乃至８、好ましくはｐＨ
５．５乃至７．５から選ばれる条件で、好気的に行われ
る。培養時間は、本微生物が増殖し得る時間であればよ
く、好ましくは５乃至１００時間である。また、培養液
の溶存酸素濃度には特に制限はないが、通常は、０．５
乃至２０ｐｐｍが好ましい。そのために、通気量を調節
したり、攪拌したり、酸素を使用したり、また、培養槽
内の圧力を高めるなどの手段が採用される。また、培養
方式は、回分培養または連続培養のいずれでもよい。

【００１６】このようにして、微生物を培養した後、得
られる培養物から本発明の酵素を回収する。本酵素活性
は、培養物の菌体外培養液に認められ、菌体外培養液を
粗酵素として回収すればよく、また、培養物全体を粗酵
素として用いることもできる。菌体外培養液と菌体との
分離には、通常の固液分離手段が採用される。例えば、
培養物そのものをそのまま遠心分離する手段、培養物に
濾過助剤を加えたり、あるいは、濾過助剤をプレコート
したプレコートフィルターにより濾過分離する手段、平
膜、中空糸膜などを用いる膜濾過分離する手段などが採
用される。菌体外培養液をそのまま粗酵素液として用い
ることもできるが、好ましくは濃縮して用いる。例え
ば、硫安塩析法、アセトン及びアルコール沈澱法、平
膜、中空糸膜などを用いる膜濃縮法などが採用される。

【００１７】更に、菌体外培養液およびその濃縮物は、
固定化することもできる。例えば、イオン交換体への結
合法、樹脂及び膜などとの共有結合・吸着法、高分子物
質を用いた包括法などが採用される。

【００１８】粗酵素は、そのまま用いてもよいが、精製
して使用することもできる。例えば、菌体外培養液を硫
安塩析して濃縮した粗酵素標品を透析後、ＤＥＡＥ−ト
ヨパール樹脂を用いる陰イオン交換カラムクロマトグラ
フィー、続いて、ブチルトヨパール樹脂を用いる疎水カ
ラムクロマトグラフィー、再度ＤＥＡＥ−トヨパール樹
脂を用いる陰イオン交換カラムクロマトグラフィーによ
り精製することによって、電気泳動的に単一な酵素を得
ることができる。

【００１９】このようにして得られる本発明のβ−フラ
クトフラノシダーゼは、下記の理化学的性質を有する。 （１） 作用 蔗糖、ラフィノース及びエルロースのβ−フラクトフラ
ノシド結合を加水分解して、フラクトースを遊離する。
また、これらβ−フラクトフラノシド結合を有する糖質
を糖供与体として、他の糖質、糖アルコール及びアルコ
ール類から選ばれる受容体にβ−フラクトフラノシル基
の転移を触媒する。 （２） 分子量 ＳＤＳ−ゲル電気泳動法で、４９，０００±５，０００
ダルトン （３） 等電点 アンフォライン含有電気泳動法で、４．６±０．５ （４） 至適ｐＨ 温度４０℃、１０分間反応で、約５．５乃至６．０ （５） 至適温度 ｐＨ６．０、１０分間反応で、カルシウムイオン非存在
下で４５℃付近，カルシウムイオン存在下で５０℃付近 （６） ｐＨ安定性 温度４℃、２４時間保持の条件で、ｐＨ約５．０乃至
８．０の範囲で安定 （７） 温度安定性 ｐＨ６．０、１時間保持の条件で、４５℃付近まで安定 （８） 阻害 １ｍＭのＣｕ⁺⁺、Ｐｂ⁺⁺、Ｆｅ⁺⁺、Ｆｅ⁺⁺⁺ 、Ｈｇ⁺⁺で
阻害を受ける。

【００２０】本発明のβ−フラクトフラノシダーゼの活
性は、次のようにして測定する。基質として蔗糖１．０
ｗ／ｖ％を含む水溶液（２０ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ６．
０、５ｍＭ塩化カルシウムを含む）５ｍｌに酵素液０．
２ｍｌを加え、４０℃で１０分間反応させた後、ソモギ
ー銅液を加え反応を停止させ、還元力をソモギー・ネル
ソン法により測定する。対照として、あらかじめ１００
℃で１０分間加熱することにより失活させた酵素液を用
いて、同様に測定する。酵素活性１単位は、上記の測定
方法で、１分間に２マイクロモルのグルコースに相当す
る還元力を増加させる酵素量、と定義する。

【００２１】本発明のβ−フラクトフラノシダーゼは、
蔗糖に作用して、グルコースとフラクトースを生成する
が、蔗糖濃度を高めても、蔗糖分子間の転移反応は起こ
りにくく、蔗糖よりも分子量の大きいオリゴ糖の生成は
極めて少ない。しかし、蔗糖を糖供与体とし、他の適切
な糖質、例えば、キシロース、ガラクトース、乳糖、マ
ルトース、イソマルトースなどの還元性糖質を受容体と
して本酵素を作用させた場合、それぞれの還元性糖質に
フラクトシル基を転移して、キシロシルフラクトシド、
ガラクトシルフラクトシド、ラクトスクロース（別名、
ラクトシルフラクトシド）、エルロース（別名、マルト
シルフラクトシド）、イソマルトシルフラクトシドを生
成する。また、他の糖質として、トレハロース、ネオト
レハロースなどのグルコースからなる非還元性二糖類を
受容体として、同様に本酵素を作用させた場合、フラク
トシルトレハロース、フラクトシルネオトレハロースを
生成する。単糖類、二糖類のみならず、それ以上の重合
度のキシロオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マルトオリゴ
糖、イソマルトオリゴ糖などのオリゴ糖類、また、ソル
ビトール、マルチトールなどの糖アルコール類も受容体
となりうる。受容体としては２種以上を同時に用いるこ
とも有利に実施できる。また、供与体としては、蔗糖以
外に、例えば、ラフィノース、エルロースなどβ−フラ
クトフラノシド結合を有するオリゴ糖を用いることもで
きる。

【００２２】本発明のβ−フラクトフラノシダーゼを用
いたフラクトシル転移糖生成反応における基質濃度は、
特に限定されないが、工業的には１０ｗ／ｗ％（以下、
本明細書では、特にことわらない限り、ｗ／ｗ％を％と
略称する。）以上、望ましくは２０乃至６０％が好適で
ある。反応温度は、基質存在下で酵素が失活しない温
度、すなわち６０℃付近までで行えばよいが、好ましく
は約５０乃至５５℃の範囲を用いる。反応ｐＨは、通
常、約３．５乃至８．０の範囲に調整すればよいが、好
ましくはｐＨ約４．５乃至６．５の範囲に調整すればよ
い。反応時間は、酵素反応の進行具合により適宜選択す
ればよく、通常、基質固形物１グラム当たり約０．１乃
至５０単位の使用量で、０．１乃至１００時間程度であ
る。

【００２３】フラクトシル転移糖の生成率は、酵素反応
液の基質濃度、用いる受容体の種類、反応条件などによ
って異なる。例えば、２０％蔗糖と２０％乳糖を基質と
して用いた場合、ラクトスクロースの生成率は、最大約
４０％である。

【００２４】反応液は、常法により、濾過、遠心分離な
どして不溶物を除去した後、活性炭による脱色、Ｈ型、
ＯＨ型イオン交換樹脂による脱塩などの精製工程を経た
後、濃縮し、シラップ状製品にする。必要ならば、更に
乾燥して粉末状製品にすることも随意である。

【００２５】また、転移糖含量を高めるために、酵素反
応液から目的とする転移糖を分離、精製して、フラクト
シル転移糖高含有物にすることもできる。その方法とし
ては、例えば、インベルターゼ欠損酵母を用いた発酵法
により単糖類を除去する方法（酵母発酵法）、アルカリ
性溶液にして加熱処理することにより還元性糖質を分解
する方法（アルカリ処理法）、膜濾過法、カラムクロマ
トグラフィーなどにより、夾雑糖類を分離除去する方法
が、適宜採用できる。とりわけ、特開昭５８−２３７９
９号公報、特開昭５８−７２５９８号公報などに開示さ
れている塩型強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムク
ロマトグラフィーにより、夾雑糖類を除去して目的とす
るフラクトシル転移糖高含有画分を採取する方法は、工
業的規模で有利に実施できる。この際、公知の固定床方
式、移動床方式、疑似移動床方式のいずれの方法を採用
することも随意である。

【００２６】夾雑糖質を分離した液は、常法により、瀘
過、遠心分離などして不溶物を除去した後、活性炭によ
る脱色、Ｈ型、ＯＨ型イオン交換樹脂による脱塩などの
精製工程を経て、濃縮し、シラップ状製品にする。必要
ならば、更に、噴霧乾燥などの方法で乾燥して、粉末状
製品にすることも随意である。

【００２７】このようにして得られる本発明のβ−フラ
クトフラノシダーゼにより生成されるフラクトシル転移
糖含有糖質は、通常フラクトシル転移糖を固形物当たり
５％以上、望ましくは１０％以上含有している。

【００２８】以上述べた方法で製造されるフラクトシル
転移糖含有糖質は、味質良好な甘味を有し、また、浸透
圧調節性、保湿性、照付与性、結晶防止性、澱粉老化防
止性などの性質を有し、また、抗う蝕性、ビフィズス菌
増殖促進性、ミネラル吸収促進性などの機能をも有し、
広く飲食物、嗜好物、飼料、餌料、化粧品、医薬品、成
形物など、更には、生活用品、農林水産用品、試薬、化
学工業用品などの各種組成物に有利に利用される。

【００２９】フラクトシル転移糖含有糖質は、甘味付け
のための調味料としてそのまま使用することができる
が、必要ならば、例えば、粉飴、ブドウ糖、マルトー
ス、トレハロース、蔗糖、異性化糖、蜂蜜、メイプルシ
ュガー、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、
ジヒドロカルコン、ステビオシド、α−グリコシルステ
ビオシド、レバウディオシド、グリチルリチン、Ｌ−ア
スパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル、サ
ッカリン、グリシン、アラニンなどのような他の甘味料
の一種または二種以上の適量と混合して使用してもよ
く、また必要ならば、デキストリン、澱粉、乳糖などの
ような増量剤と混合して使用することもできる。

【００３０】また、フラクトシル転移糖含有糖質の呈味
は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの他の呈味
を有する各種物質とよく調和するので、一般の飲食物の
甘味付け、呈味改良に、また品質改良などに有利に利用
できる。

【００３１】例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味
噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシ
ング、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、
麺つゆ、ソース、ケチャップ、たくあん漬の素、白菜漬
の素、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スープ
の素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テー
ブルシュガー、コーヒーシュガーなど、各種調味料とし
て有利に使用できる。

【００３２】また、例えば、せんべい、あられ、おこ
し、餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羮、水羊
羮、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、
パン、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリ
ン、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリ
ーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレ
ート、チューインガム、キャラメル、キャンデーなどの
洋菓子、アイスクリーム、シャーベット、などの氷菓、
果実のシロップ漬、氷蜜などのシロップ類、フラワーペ
ースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、スプ
レッドなどのペースト類、ジャム、マーマレード、シロ
ップ漬、糖果などの果実、野菜の加工食品類、福神漬、
べったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、ハ
ム、ソーセージなどの畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソー
セージ、かまぼこ、ちくわ、天ぷらなどの魚肉製品、ウ
ニ、イカの塩辛、酢こんぶ、さきするめ、ふぐみりん干
しなどの各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝な
どで製造されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、こん
ぶ巻などの惣菜食品、乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜
のビン詰、缶詰類、清酒、合成酒、リキュール、洋酒な
どの酒類、紅茶、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲
料、乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼飲料水、プリンミ
ックス、ホットケーキミックス、即席しるこ、即席スー
プなどの即席食品、更には、離乳食、治療食、ドリンク
剤などの各種飲食物への甘味付に、呈味改良に、また、
物性改良などに有利に利用できる。

【００３３】また、家畜、家禽、魚などの飼育動物のた
めに、飼料、餌料などの嗜好性の向上、あるいは、肥育
向上の目的で使用することもできる。その他、タバコ、
練歯磨、口紅、リップクリーム、内服液、錠剤、トロー
チ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤な
どの各種固形物にも使用できるし、ペースト状、液状な
どにして嗜好物、化粧品、医薬品など、各種組成物への
甘味剤として、または呈味改良剤、矯味剤として、更に
は、品質改良剤として有利に利用できる。

【００３４】品質改良剤、安定剤としては、有効成分、
活性などを失い易い各種生理活性物質、またはこれを含
む健康食品、医薬品などに有利に適応できる。例えば、
インターフェロン−α、インターフェロン−β、インタ
ーフェロン−γ、ツモア・ネクロシス・ファクター−
α、ツモア・ネクロシス・ファクター−β、マクロファ
ージ遊走阻止因子、コロニー刺激因子、トランスファー
ファクター、インターロイキン２などのリンホカイン含
有液、インシュリン、成長ホルモン、プロラクチン、エ
リトロポエチン、卵細胞刺激ホルモン、胎盤ホルモンな
どのホルモン含有液、ＢＣＧワクチン、日本脳炎ワクチ
ン、はしかワクチン、ポリオ生ワクチン、痘苗、破傷風
トキソイド、ハブ抗毒素、ヒト免疫グロブリンなどの生
物製剤含有液、ペニシリン、エリスロマイシン、クロラ
ムフェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシ
ン、硫酸カナマイシンなどの抗生物質含有液、チアミ
ン、リボフラビン、Ｌ−アスコルビン酸、肝油、カロチ
ノイド、エルゴステロール、トコフェロールなどのビタ
ミン含有液、リパーゼ、エラスターゼ、ウロキナーゼ、
プロテアーゼ、β−アミラーゼ、イソアミラーゼ、グル
カナーゼ、ラクターゼなどの酵素含有液、薬用人参エキ
ス、スッポンエキス、クロレラエキス、アロエエキス、
プロポリスエキスなどのエキス類、ウイルス、乳酸菌、
酵母などの生菌、ロイヤルゼリーなどの各種生理活性物
質も、本発明のフラクトシル転移糖含有糖質を使用する
ことによって、その有効成分、活性を失うことなく、品
質改良および／または安定化でき、安定で高品質の健康
食品や医薬品などを容易に製造できる。

【００３５】以上述べたように、本発明でいう組成物
は、経口的または非経口的に利用する飲食物、医薬品の
みならず、それ以外にも、例えば、化粧品、生活用品、
農林水産用品、試薬、化学工業用品など広範な用途を有
する。

【００３６】また、これら組成物に、本発明のフラクト
シル転移糖含有糖質を含有せしめる方法は、その製品が
完成するまでの工程で含有せしめればよく、例えば、混
和、溶解、浸漬、浸透、散布、塗布、噴霧、注入、固化
などの公知の方法が適宜選ばれる。その含有せしめる量
は、組成物によっても異なるが、一般的には、フラクト
シル転移糖として、０．１％以上、望ましくは０．５％
以上の量が好適である。

【００３７】次に、実験により、本発明をさらに具体的
に説明する。

【００３８】〈実験１ 酵素の生産〉蔗糖１．０ｗ／ｖ
％、ポリペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ
／ｖ％、リン酸二カリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸一ナ
トリウム・２水塩０．０６ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム
・７水塩０．０５ｗ／ｖ％、炭酸カルシウム０．３ｗ／
ｖ％及び水からなる液体培地を、５００ｍｌ容三角フラ
スコに１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２１
℃、１５分間滅菌し、冷却して、バチルス・スピーシー
ズ Ｖ２３０（ＦＥＲＭ ＢＰ−５０５４）を接種し、
３０℃、２００ｒｐｍで２０時間回転振盪培養したもの
を、種培養とした。

【００３９】容量１０ｌのファーメンターに種培養の場
合と同組成の培地を約７ｌ入れて、加熱滅菌、冷却して
温度３０℃とした後、種培養液１ｖ／ｖ％を接種し、温
度３０℃で、約２０時間通気攪拌培養した。

【００４０】培養液約６．５ｌを遠心分離（１５，００
０Ｇ，２０分間）して、培養液上清約６．３ｌを得た。
この培養液上清のβ−フラクトフラノシダーゼの活性
は、３．６単位／ｍｌであった。

【００４１】〈実験２ 酵素の精製〉実験１で得た培養
液上清に、飽和度０．８になるように硫安を加えて溶解
させ、４℃、一夜放置した後、遠心分離機にかけ、硫安
塩析物を回収した。

【００４２】得られた硫安塩析物を、５ｍＭ塩化カルシ
ウムを含む１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解さ
せた後、同じ緩衝液に対して一昼夜透析し、遠心分離
（１５，０００Ｇ，２０分間）して不溶物を除いた。そ
の透析液上清（２１０ｍｌ）を、ＤＥＡＥ−トヨパール
ゲル ６５０ゲル（東ソー株式会社製）を用いたイオン
交換カラムクロマトグラフィー（ゲル量３８０ｍｌ）に
かけた。

【００４３】本発明のβ−フラクトフラノシダーゼは、
上記ＤＥＡＥ−トヨパールゲルに吸着し、０．１Ｍ食塩
で溶出される画分に回収される。回収画分を１Ｍ硫安を
含む１０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に対して透析
し、その透析液を遠心分離（１５，０００Ｇ，２０分
間）して不溶物を除き、次に、ブチルトヨパール ６５
０ゲル（東ソー株式会社製）を用いた疎水カラムクロマ
トグラフィー（ゲル量１００ｍｌ）を行った。吸着した
β−フラクトフラノシダーゼを硫安１Ｍから０Ｍへのリ
ニアグラジエントにより、カラムより溶出させ、酵素活
性画分を回収した。

【００４４】続いて、ＤＥＡＥ−トヨパールゲル ６５
０ゲルを用いたイオン交換カラムクロマトグラフィー
（ゲル量１０ｍｌ）を行い、溶出した酵素活性画分を回
収した。

【００４５】以上の精製手段により得られた精製酵素標
品における酵素活性の回収率は、培養液上清のそれに対
して約１３％であった。また、精製酵素標品の比活性
は、蛋白質ｍｇ当たり２０５単位であった。なお、蛋白
質は、ローリー法に従って牛血清アルブミンを標準にし
て定量した。

【００４６】精製したβ−フラクトフラノシダーゼ標品
を、７．５ｗ／ｖ％濃度ポリアクリルアミドを含むゲル
電気泳動により酵素標品の純度を検定したところ、蛋白
バンドは単一で、純度の高い標品であった。

【００４７】〈実験３ 酵素の性質〉実験２の方法で得
た精製β−フラクトフラノシダーゼ標品を、ＳＤＳ−ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動法（ゲル濃度１０ｗ／ｖ
％）に供し、同時に泳動した分子量マーカー（日本バイ
オ・ラッド ラボラトリーズ株式会社製）と比較して、
本酵素の分子量を測定したところ、分子量は４９，００
０±５，０００ダルトンであった。また、ＴＳＫｇｅｌ
Ｇ３０００ＳＷカラム（φ７．８ｍｍ×３００ｍｍ，
東ソー株式会社製）を用いたゲル濾過法により、分子量
を測定した結果、３７，０００±３，０００ダルトンで
あった。

【００４８】上記と同じ精製β−フラクトフラノシダー
ゼ標品を、２ｗ／ｖ％アンフォライン（スウェーデン
国、ファルマシア・エルケイビー社製）含有等電点ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動法に供し、泳動後、蛋白染
色およびゲルのｐＨを測定して、本酵素の等電点を求め
たところ、４．６±０．５であった。

【００４９】本発明のβ−フラクトフラノシダーゼ活性
に及ぼすｐＨ、温度の影響を、５ｍＭ塩化カルシウム存
在下又は非存在下で、活性測定の方法に準じて調べた。
結果を、図１（ｐＨの影響）及び図２（温度の影響）に
示した。本酵素の至適ｐＨは、温度４０℃、１０分間反
応で、カルシウムイオン存在下、非存在下にかかわらず
ｐＨ約５．５乃至６．０、また、本酵素の至適温度は、
ｐＨ６．０、１０分間反応で、カルシウムイオン存在下
で５０℃付近、カルシウムイオン非存在下で４５℃付近
であった。本酵素のｐＨ安定性は、本酵素を各ｐＨの５
０ｍＭ緩衝液中で４℃、２４時間保持した後、ｐＨ６に
調整し、残存する酵素活性を測定することにより求め
た。また、熱安定性は、酵素溶液（２０ｍＭ酢酸緩衝
液、ｐＨ６．０）を、各温度に１時間保持し、水冷した
後、残存する酵素活性を測定することにより求めた。結
果は、図３（ｐＨ安定性）及び図４（熱安定性）に示し
た。本酵素はｐＨ約５．０乃至８．０の範囲で、また４
５℃付近まで安定であった。なお、本酵素のｐＨ安定性
及び熱安定性は、カルシウムイオン存在下でも非存在下
と全く変わらなかった。また、本酵素活性は、１ｍＭの
Ｃｕ⁺⁺、Ｐｂ⁺⁺、Ｆｅ⁺⁺、Ｆｅ⁺⁺⁺およびＨｇ⁺⁺で阻害
された。

【００５０】〈実験４ 基質特異性〉最終濃度２ｗ／ｖ
％の蔗糖、ラフィノース、エルロース、スタキオース、
ラクトスクロース、キシロシルフラクトシド、マルトー
ス、セロビオース、乳糖、イヌリンあるいはレバンに、
実験２の方法で得た精製β−フラクトフラノシダーゼを
基質固形物１グラム当たり２単位ずつ加え、４０℃、ｐ
Ｈ５．５で２４時間作用させた。酵素反応前後の反応液
をキーゼルゲル６０（メルク社製；アルミプレート，２
０×２０ｃｍ）を用いた薄層クロマトグラフィー（以
下、「ＴＬＣ」と略称する。）を行い、それぞれの糖質
に対する酵素作用の有無を確認した。ＴＬＣは、展開溶
媒に１−ブタノール：ピリジン：水＝７：３：１（容積
比）を用い、室温で１回展開した。発色は、フラクトー
スを構成糖として含む基質の場合は、０．２ｗ／ｖ％ナ
フトレゾルシノール−０．５Ｎリン酸溶液を噴霧し、１
１０℃で約５分間加熱して行い、それ以外の基質の場合
は、２０ｗ／ｖ％硫酸−メタノール溶液を噴霧し、１１
０℃で約１０分間加熱して行った。

【００５１】その結果、本発明のβ−フラクトフラノシ
ダーゼは、蔗糖、ラフィノース、エルロース、スタキオ
ース、ラクトスクロース、キシロシルフラクトシドに作
用して、フラクトースを特異的に遊離し、マルトース、
セロビオース、乳糖、イヌリン、レバンには、作用しな
いことが判明した。

【００５２】〈実験５ 受容体特異性〉受容体として表
１に示す各種単糖類、オリゴ糖類及びアルコール類と、
供与体として蔗糖とを、重量比で等量混合した最終濃度
１０％の糖液に、実験２の方法で得た精製β−フラクト
フラノシダーゼを、蔗糖１グラム当たり２単位ずつ加
え、４０℃、ｐＨ５．５で２４時間作用させた。酵素反
応前後の反応液を、実験４と同様にＴＬＣを行い、０．
２ｗ／ｖ％ナフトレゾルシノール−０．５Ｎリン酸溶液
を噴霧し、１１０℃で約５分間加熱して発色させ、転移
糖を生成しているかどうかを判定した。結果を、表１に
示した。

【００５３】

【表１】

【００５４】表１に示されるように、本発明のβ−フラ
クトフラノシダーゼは、蔗糖を糖供与体として、Ｄ−キ
シロース、Ｄ−ガラクトース、マルトース、イソマルト
ース、セロビオース、マルトトリオース、パノース、乳
糖、メリビオースなどの還元性糖質、トレハロースなど
の非還元性糖質にフラクトシル基を良く転移することが
判明した。また、Ｄ−キシリトール、Ｄ−ソルビトー
ル、マルチトールなどの糖アルコール類及びグリセロー
ル、エチレングリコールなどのアルコール類にも良く転
移し、フラクトシル転移糖を生成することが判った。

【００５５】〈実験６ 蔗糖と還元性糖質とからのフラ
クトシル転移糖〉本発明のβ−フラクトフラノシダーゼ
による糖転移反応で生成するフラクトシル転移糖を同定
するために、確認試験を行った。実験５で得た蔗糖と乳
糖とを基質とした酵素反応液の一部を、糖濃度２％にな
るよう２０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）で希釈し、こ
の０．５ｍｌにインベルターゼ（生化学工業株式会社
製）０．１単位、又はβ−ガラクトシダーゼ（生化学工
業株式会社製）０．１単位を加え、４０℃で２０時間反
応させた。本発明のβ−フラクトフラノシダーゼによる
反応液、そのインベルターゼ処理液及びβ−ガラクトシ
ダーゼ処理液の糖成分をガスクロマトグラフィー（以
下、「ＧＬＣ」と略称する。）で分析した。酵素反応液
の一部を乾固し、ピリジンに溶解した後、トリメチルシ
リル化したものをＧＬＣの分析試料とした。ＧＬＣカラ
ムは、２％シリコンＯＶ−１７／クロモゾルブＷ（ジー
・エル・サイエンス株式会社製）を充填したステンレス
カラム（３ｍｍφ×２ｍ）、キャリアーガスは、窒素ガ
スを流量４０ｍｌ／分で、カラムオーブン温度は、１６
０℃から３２０℃まで７．５℃／分の昇温速度で分析し
た。検出は、水素炎イオン化検出器を用いた。

【００５６】その結果、本発明のβ−フラクトフラノシ
ダーゼによる蔗糖と乳糖とからのフラクトシル転移糖の
ピークの保持時間は、既知糖質ラクトスクロース（ラク
トシルフラクトシド）のそれと一致し、インベルターゼ
処理、あるいはβ−ガラクトシダーゼ処理により、その
ピークは消失し、それぞれフラクトースと乳糖、ガラク
トースと蔗糖に分解されることが判った。インベルター
ゼ及びβ−ガラクトシダーゼの反応特性を考慮すると、
本発明のβ−フラクトフラノシダーゼによる蔗糖と乳糖
とからのフラクトシル転移生成物は、ラクトスクロース
であると判断される。

【００５７】キシロース、マルトース、イソマルトース
を受容体として生成したフラクトシル転移糖の場合も、
インベルターゼ処理前後の反応液のＧＬＣ分析の結果、
及び既知糖質のＧＬＣ分析との比較結果から、それぞれ
キシロシルフラクトシド、エルロース（マルトシルフラ
クトシド）、イソマルトシルフラクトシドであることが
判った。本発明のβ−フラクトフラノシダーゼによる糖
転移反応において、これら還元性糖質を受容体とした場
合のフラクトシル転移糖は、受容体としての還元性糖質
残基における１位炭素原子にβ−フラクトフラノシド結
合しているものと判断される。

【００５８】〈実験７ フラクトシルトレハロース〉一
方、トレハロースへのフラクトシル転移糖の構造を調べ
るため、フラクトシルトレハロースを単離し、構造を調
べた。蔗糖及びトレハロースをそれぞれ２０％含む糖液
をｐＨ６．０に調整し、これに実験２の方法で得た精製
β−フラクトフラノシダーゼを蔗糖１グラム当たり４単
位加え、５５℃で２０時間反応させ、次いで１００℃で
１０分間加熱して酵素を失活させた。本溶液には、フラ
クトシルトレハロースを約２３％含有していた。本溶液
を活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹
脂により脱塩して精製し、濃度約５０％まで濃縮して、
カラムクロマトグラフィーを行ない、フラクトシルトレ
ハロース高含有画分を採取した。

【００５９】分画用樹脂は、アルカリ金属型強酸性カチ
オン交換樹脂（東京有機化学工業株式会社製、商品名
『ＸＴ−１０１６』、Ｎａ型、架橋度４％）を使用し、
内径３ｃｍ、長さ１ｍのジャケット付きステンレス製カ
ラム２本に水懸濁状で充填し、直列につなぎ、樹脂層全
長を約２ｍになるようにした。カラム内温度を４０℃に
維持しつつ、糖液を樹脂に対して５ｖ／ｖ％加え、これ
に４０℃の温水をＳＶ０．１５の流速で流して分画し、
フラクトシルトレハロース高含有画分を採取した。

【００６０】フラクトシルトレハロース高含有画分を脱
塩、精製し、濃度約４０％に濃縮してオクタデシルシリ
カゲルを充填したカラム（株式会社ワイエムシー、商品
名『ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ』）を用いたクロマトグ
ラフィーを行ない、フラクトシルトレハロース高含有画
分を採取した。この方法を繰り返して採取されたフラク
トシルトレハロース高含有液を脱塩、精製、濃縮、真空
乾燥して、フラクトシルトレハロース高含有粉末を固形
物収率約１０％で得た。本粉末標品は、フラクトシルト
レハロースを固形物当たり約９８％含有していた。

【００６１】フラクトシルトレハロース高含有粉末標品
を用いて、酵素法及び部分メチルヘキシトールアセテー
トのＧＬＣ分析により構造を確認した。その結果、本発
明のβ−フラクトフラノシダーゼの作用により生成する
フラクトシルトレハロースは、インベルターゼ処理によ
り１対１のモル比でフラクトースとトレハロースとに分
解されること、及び、本糖質をメチル化した後、酸によ
り加水分解し、続いて還元、アセチル化して得られた部
分メチルヘキシトールアセテートをＧＬＣで分析する
と、１，５，６−トリ−Ｏ−アセチル−２，３，４−ト
リ−Ｏ−メチルグルシトールと１，５−ジ−Ｏ−アセチ
ル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−メチルグルシトール
が等モル比で検出されることから、トレハロースにフラ
クトシル基がβ−２，６結合した３糖であることが判明
した。

【００６２】〈実験８ 急性毒性〉７週齢のｄｄ系マウ
スを使用して、後述する実施例Ａ−４の方法で調製した
ラクトスクロース高含有粉末を、経口投与して急性毒性
テストをしたところ、体重１ｋｇ当たり１５ｇまで死亡
例は見られず、これ以上の投与は困難であった。従っ
て、本糖質の毒性は極めて低い。また、同様に、７週齢
のｄｄ系マウスを使用して、それぞれ後述する実施例Ａ
−６の方法で得たエルロース高含有粉末、実施例Ａ−８
の方法で得たキシロシルフラクトシド高含有シラップ、
実施例Ａ−１１の方法で得たフラクトシルトレハロース
高含有粉末及び実施例Ａ−１２の方法で得たイソマルト
シルフラクトシド含有シラップを用いて、経口投与によ
り急性毒性テストをしたところ、いずれも、体重１ｋｇ
当たり１５ｇまで死亡例は見られず、これ以上の投与は
困難であった。従って、これら糖質の毒性は極めて低
い。

【００６３】以下、本発明のβ−フラクトフラノシダー
ゼと、それを利用したフラクトシル転移糖含有糖質の製
造方法を実施例Ａで、このフラクトシル転移糖含有糖質
を含有せしめた組成物を実施例Ｂで示す。

【００６４】〈実施例Ａ−１〉バチルス・スピーシーズ
Ｖ２３０（ＦＥＲＭ ＢＰ−５０５４）を、培地組成
中の蔗糖濃度を２ｗ／ｖ％とし、容量３０ｌのファーメ
ンターを用いて、培地液量を約２０ｌとした以外は、実
験１と同じ方法で約２４時間、通気攪拌培養した。この
培養上清のβ−フラクトフラノシダーゼ活性は、培養液
１ｍｌ当たり７．３単位であった。培養液をＭＦ膜濾過
し、その透過液をＵＦ膜濃縮して、ｍｌ当たりβ−フラ
クトフラノシダーゼ活性約１３０単位を有する酵素液
を、もとの培養液の総活性に対して約８０％の収率で得
た。

【００６５】〈実施例Ａ−２〉蔗糖及び乳糖をそれぞれ
２０％含む水溶液をｐＨ５．５に調整し、これに実施例
Ａ−１の方法で調製したβ−フラクトフラノシダーゼ
を、蔗糖１グラム当たり１単位の割合になるように加
え、５５℃で１６時間反応させた。その反応液を９０℃
で３０分間加熱し、酵素を失活させた後、冷却し、常法
に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン
交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して、濃度約
７５％のシラップを固形物収率約９５％で得た。

【００６６】本品は、固形物当たりラクトスクロースを
約３７％含有しており、味質良好な甘味、適度の粘度、
保湿性を有し、甘味剤、呈味改良剤、安定剤、賦形剤、
ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤などとし
て飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用
できる。

【００６７】〈実施例Ａ−３〉蔗糖を２２％及び乳糖を
１８％含む水溶液をｐＨ６．０に調整し、これに実施例
Ａ−１で調製したβ−フラクトフラノシダーゼを、蔗糖
１グラム当たり１単位、及びインベルターゼ欠損酵母を
固形物重量当たり湿重量で５％になるように加えて、１
規定の水酸化ナトリウム溶液を用いて該反応液をｐＨ６
乃至７に制御しながら、３５℃で２０時間反応させた。
その反応液を９０℃で３０分間加熱し、酵素を失活させ
た後、冷却し、常法に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ
型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更
に濃縮して濃度約７５％のシラップを固形物収率約７０
％で得た。

【００６８】本品は、固形物当たりラクトスクロースを
約６５％含有しており、味質良好な甘味、適度の粘度、
保湿性を有し、甘味剤、呈味改良剤、安定剤、ビフィズ
ス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤などとして飲食
物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用でき
る。

【００６９】〈実施例Ａ−４〉実施例Ａ−２の方法で反
応、精製した固形物当たり約３７％のラクトスクロース
含有溶液を原料糖液とし、これを濃縮して濃度約４５％
にした。本糖液のラクトスクロース含量を高めるため、
アルカリ金属型強酸性カチオン交換樹脂（東京有機化学
工業株式会社製、商品名『ＸＴ−１０１６』、Ｎａ型、
架橋度４％）を用いたカラムクロマトグラフィーを行っ
た。樹脂を内径５．４ｃｍのジャケット付きステンレス
製カラム４本に充填し、直列につなぎ、樹脂層全長２０
ｍとした。カラム内温度を４０℃に維持しつつ、糖液を
樹脂に対して５ｖ／ｖ％加え、これに４０℃の温水をＳ
Ｖ０．２の流速で流して分画し、ラクトスクロース高含
有画分を採取した。更に、精製、濃縮し、真空乾燥し、
粉砕して、ラクトスクロース高含有粉末を固形物収率約
３０％で得た。

【００７０】本品は、固形物当たり約９０％のラクトス
クロースを含有しており、低い還元性、味質良好な甘
味、保湿性、低う蝕性を有し、甘味剤、呈味改良剤、安
定剤、賦形剤、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収
促進剤などとして飲食物、化粧品、医薬品など各種組成
物に有利に利用できる。

【００７１】〈実施例Ａ−５〉蔗糖及びマルトースをそ
れぞれ２０％含む糖液をｐＨ５．５に調整し、これに実
施例Ａ−１の方法で調製したβ−フラクトフラノシダー
ゼを、蔗糖１グラム当たり１単位の割合になるように加
え、５０℃で２４時間反応させた。その反応液を９０℃
で３０分間加熱し、酵素を失活させた後、冷却し、常法
に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン
交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して濃度約７
５％のシラップを固形物収率約９５％で得た。

【００７２】本品は、固形物当たりエルロースを約２８
％含有しており、味質良好な甘味、適度な粘度、保湿性
を有し、飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利
に利用できる。

【００７３】〈実施例Ａ−６〉実施例Ａ−５の方法で反
応、精製した固形物当たり約２８％のエルロース含有溶
液を原料糖液とし、これを濃縮して濃度約４５％にし
た。本糖液のエルロース含量を高めるため、分画用樹脂
として、アルカリ金属型強酸性カチオン交換樹脂（ダウ
ケミカル社販売、商品名『ダウエックス５０Ｗ×４』、
Ｃａ型）を用いた以外は、実施例Ａ−４の方法に従って
カラムクロマトグラフィーを行ない、エルロース高含有
画分を採集した。更に、精製、濃縮し、真空乾燥し、粉
砕して、エルロース高含有粉末を固形物収率約２５％で
得た。

【００７４】本品は、固形物当たり約８４％のエルロー
スを含有しており、低い還元性、味質良好な甘味、保湿
性、低う蝕性を有し、飲食物、化粧品、医薬品など各種
組成物に有利に利用できる。

【００７５】〈実施例Ａ−７〉蔗糖を３０％及びキシロ
ースを１５％含む糖液をｐＨ５．５に調整し、これに実
施例Ａ−１の方法で調製したβ−フラクトフラノシダー
ゼを、蔗糖１グラム当たり０．５単位の割合になるよう
に加え、５０℃で４０時間反応させた。その反応液を９
０℃で３０分間加熱し、酵素を失活させた後、冷却し、
常法に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イ
オン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して濃度
約７５％のシラップを固形物収率約９５％で得た。

【００７６】本品は、固形物当たりキシロシルフラクト
シドを約３５％含有しており、味質良好な甘味、適度な
粘度、保湿性、低う蝕性を有し、甘味剤、呈味改良剤、
安定剤、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤
などとして飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有
利に利用できる。

【００７７】〈実施例Ａ−８〉蔗糖を３０％及びキシロ
ースを１５％含む糖液をｐＨ６．０に調整し、これに実
施例Ａ−１で調製したβ−フラクトフラノシダーゼを、
蔗糖１グラム当たり０．５単位の割合になるように加
え、５０℃で４０時間反応させた。その反応液に水酸化
ナトリウムを加えてｐＨ１０以上のアルカリ性に保ちな
がら１００℃で加熱した後、冷却し、常法に従って活性
炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂によ
り脱塩して精製し、更に濃縮して濃度約７５％のシラッ
プを固形物収率約５５％で得た。

【００７８】本品は、固形物当たりキシロシルフラクト
シドを約６０％含有しており、味質良好な甘味、適度な
粘度、保湿性を有し、甘味剤、呈味改良剤、安定剤、ビ
フィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤などとして
飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用で
きる。

【００７９】〈実施例Ａ−９〉蔗糖及びトレハロースを
それぞれ２０％含む糖液をｐＨ５．５に調整し、これに
実施例Ａ−１の方法で調製したβ−フラクトフラノシダ
ーゼを、蔗糖１グラム当たり４単位の割合になるように
加え、５５℃で１６時間反応させた。その反応液を９０
℃で３０分間加熱し、酵素を失活させた後、冷却し、常
法に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオ
ン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して濃度約
７５％のシラップを固形物収率約９５％で得た。

【００８０】本品は、固形物当たりフラクトシルトレハ
ロースを約２４％含有しており、味質良好な甘味、適度
な粘度、保湿性、低う蝕性を有し、甘味剤、呈味改良
剤、安定剤、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促
進剤などとして飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物
に有利に利用できる。

【００８１】〈実施例Ａ−１０〉蔗糖及びトレハロース
をそれぞれ２０％含む糖液をｐＨ５．５に調整し、これ
に実施例Ａ−１で調製したβ−フラクトフラノシダーゼ
を、蔗糖１グラム当たり４単位、及びインベルターゼ欠
損酵母を固形物重量当たり湿重量で５％になるように加
えて、１規定の水酸化ナトリウム溶液を用いて該反応液
をｐＨ６乃至７に制御しながら、３５℃で２０時間反応
させた。その反応液を９０℃で３０分間加熱し、酵素を
失活させた後、冷却し、常法に従って活性炭で脱色、濾
過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精
製し、更に濃縮して濃度約７５％のシラップを固形物収
率約７０％で得た。

【００８２】本品は、固形物当たりフラクトシルトレハ
ロースを約３４％含有しており、味質良好な甘味、適度
な粘度、保湿性を有し、甘味剤、呈味改良剤、安定剤、
ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤などとし
て飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用
できる。

【００８３】〈実施例Ａ−１１〉実施例Ａ−９の方法で
反応、精製した固形物当たり約２４％のフラクトシルト
レハロース含有溶液を原料糖液とし、これを濃縮して濃
度約４５％にした。本糖液のフラクトシルトレハロース
含量を高めるため、分画用樹脂として、塩型強酸性カチ
オン交換樹脂（ダウケミカル社販売、商品名『ダウエッ
クス５０Ｗ×４』、Ｃａ型）を用いた以外は、実施例Ａ
−４の方法に従ってカラムクロマトグラフィーを行な
い、フラクトシルトレハロース高含有画分を採集した。
更に、精製、濃縮し、真空乾燥し、粉砕して、フラクト
シルトレハロース高含有粉末を固形物収率約２０％で得
た。

【００８４】本品は、固形物当たり約８０％のフラクト
シルトレハロースを含有しており、低い還元性、味質良
好な甘味、保湿性、低う蝕性を有し、甘味剤、呈味改良
剤、安定剤、賦形剤、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラ
ル吸収促進剤などとして飲食物、化粧品、医薬品など各
種組成物に有利に利用できる。

【００８５】〈実施例Ａ−１２〉蔗糖を３０％及びイソ
マルトース１５％を含む糖液をｐＨ５．５に調整し、こ
れに実施例Ａ−１の方法で調製したβ−フラクトフラノ
シダーゼを、蔗糖１グラム当たり０．５単位の割合にな
るように加え、５０℃で４０時間反応させた。この反応
液を９０℃で３０分間加熱し、酵素を失活させた後、冷
却し、常法に従って、活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及び
ＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮
して、濃度７５％のシラップを固形物収率約９５％で得
た。

【００８６】本品は、固形物当たりイソマルトシルフラ
クトシドを約２５％含有しており、味質良好な甘味、適
度な糖度、保湿性、低う蝕性を有し、甘味剤、呈味改良
剤、安定剤、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促
進剤などとして飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物
に有利に利用できる。

【００８７】〈実施例Ｂ−１ 混合甘味剤〉実施例Ａ−
４の方法で得たラクトスクロース高含有粉末１重量部に
α−グリコシル ステビオシド（東洋精糖株式会社製
造、商品名α−Ｇスィート）０．０５重量部を均一に混
合して粉末甘味料を製造した。本品は、上品な甘味を有
し、砂糖の約２倍の甘味を有する。また、本品は、ビフ
ィズス菌増殖促進効果を発揮し、美容、健康の維持増
進、成人病の予防、病中、病後の回復促進、高アンモニ
ア血症、肝性脳症などの治療、予防などに有利に利用で
きる。また、家畜、家禽などの飼育動物の感染予防、下
痢予防、食欲増進、肥育促進、糞便の臭気抑制などにも
有利に利用できる。

【００８８】〈実施例Ｂ−２ ハードキャンディー〉還
元麦芽糖水飴（水分２５％）８０重量部に、実施例Ａ−
１２の方法で得たイソマルトシルフラクトシド含有シラ
ップ３０重量部を加熱溶解し、減圧下で水分が２％未満
になるまで濃縮し、これにクエン酸１重量部および適量
のレモン香料と着色料とを混和し、次いで、常法に従っ
て成形しハードキャンディーを製造した。

【００８９】本品は、上品な甘味を有する低う蝕性のハ
ードキャンディーである。また、本品は、ビフィズス菌
増殖促進効果、ミネラル吸収促進効果を発揮し、美容、
健康の維持増進、成人病の予防、病中、病後の回復促
進、各種疾病の治療、予防などにも有利に利用できる。

【００９０】〈実施例Ｂ−３ チューインガム〉ガムベ
ース２重量部を柔らかくなる程度に加熱溶融し、これに
実施例Ａ−４の方法で得たラクトスクロース高含有粉末
４重量部、グルコース３重量部および適量のハッカ香料
と着色料とを混合した後、常法に従ってロールにより練
り合わせ、成形することによってチューインガムを製造
した。

【００９１】本品は、テクスチャー、甘味ともに良好で
ある。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進効果を発揮
し、美容、健康の維持増進、成人病の予防、病中、病後
の回復促進、各種疾病の治療、予防などにも有利に利用
できる。

【００９２】〈実施例Ｂ−４ チョコレート〉カカオペ
ースト４０重量部、カカオバター１０重量部、実施例Ａ
−６の方法で得たエルロース高含有粉末１５重量部、蔗
糖１０重量部および全脂粉乳１５重量部を混合し、レフ
ァイナーを通した。そして粒度を下げた後、コンチェに
入れ、レシチン０．５重量部を加えて、５０℃で二昼夜
練り上げた。次いで、常法に従い成型機に流し込み成型
固化して製造した。

【００９３】本品は、ファットブルーム、シュガーブル
ームの恐れがなく、舌にのせた時の融け具合、風味とも
に良好である。

【００９４】〈実施例Ｂ−５ 乳飲料〉コーヒー浸出液
７０重量部、牛乳１００重量部、実施例Ａ−３の方法で
得たラクトスクロース高含有シラップ２４重量部および
適量のコーヒー香料、着色料を混合し、均質化した後、
常法に従って、殺菌、冷却、充填、包装して乳飲料を製
造した。

【００９５】本品は、香り、呈味とも良好なコーヒー牛
乳である。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進効果、
ミネラル吸収促進効果を発揮し、美容、健康の維持増
進、成人病の予防、病中、病後の回復促進などに有利に
利用できる。

【００９６】〈実施例Ｂ−６ カスタードクリーム〉コ
ーンスターチ５００重量部、マルトース（株式会社林原
商事販売、登録商標サンマルト）４００重量部および食
塩５重量部を、篩を通して充分に混合し、鶏卵１４００
重量部および実施例Ａ−１０の方法で得たフラクトシル
トレハロース高含有シラップ６００重量部を加えて攪拌
し、これに沸騰した牛乳５０００重量部を徐々に加え、
更に、これをとろ火にかけて攪拌を続け、コーンスター
チが完全に糊化して全体が半透明になったときに火を止
め、これを冷却して適量のバニラ香料を加えることによ
りカスタードクリームを製造した。

【００９７】本品は、なめらかな光沢を有し、甘味が強
すぎず美味である。また、本品は、ビフィズス菌増殖促
進効果を発揮し、美容、健康の維持増進、成人病の予
防、病中、病後の回復促進などに有利に利用できる。

【００９８】〈実施例Ｂ−７ 即席コーンポタージュス
ープ〉α−化コーン粉末３０重量部、α−化澱粉５重量
部、α−化ポテトスターチ４重量部、α−化ワキシーコ
ーンスターチ１２重量部、実施例Ａ−１１の方法で得た
フラクトシルトレハロース高含有粉末８重量部、グルタ
ミン酸ナトリウム５重量部、食塩８．５重量部、脱脂粉
乳７重量部、オニオンパウダー０．５重量部を摩砕して
よく混合した後、これにソルビタン脂肪酸エステル０．
５重量部と植物性硬化油９重量部とを加熱融解したもの
を添加して混合し、更に、乳糖１０重量部を加えて混合
し、これを流動層造粒機に仕込み、少量の水をスプレー
して造粒した後、７０℃の熱風で乾燥し、篩分けして即
席コーンポタージュスープを製造した。

【００９９】本品は、熱湯を注げば、容易に溶解、分散
し、風味の優れたスープとなる。また、本品は、ビフィ
ズス菌増殖促進効果、ミネラル吸収促進効果を発揮し、
美容、健康の維持増進、成人病の予防、病中、病後の回
復促進などに有利に利用できる。

【０１００】〈実施例Ｂ−８ 乳液〉ポリオキシエチレ
ンベヘニルエーテル０．５重量部、テトラオレイン酸ポ
リオキシエチレンソルビトール１重量部、親油型モノス
テアリン酸グルセリン１重量部、ベヘニールアルコール
０．５重量部、アボガド油１重量部、実施例Ａ−５の方
法で得たエルロース含有シラップ３．５重量部、α−グ
リコシル ルチン１重量部、ビタミンＥおよび防腐剤の
適量を、常法に従って加熱溶解し、これに１，３−ブチ
レングリコール５重量部、カルボキシビニルポリマー
０．１重量部および精製水８５．３重量部を加え、ホモ
ゲナイザーにかけ、乳化し、乳液を製造した。

【０１０１】本品は、保湿性ある乳液で、日焼け止め、
色白剤などとして有利に利用できる。

【０１０２】〈実施例Ｂ−９ スキンクリーム〉モノス
テアリン酸ポリオキシエチレングリコール２重量部、自
己乳化型モノステアリン酸グリセリン５重量部、α−グ
リコシル ルチン２重量部、流動パラフィン１重量部、
トリオクタン酸グリセリン１０重量部、実施例Ａ−９の
方法で得たフラクトシルトレハロース含有シラップ４重
量部および防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、
これに１，３−ブチレングリコール５重量部および精製
水６６重量部を加え、ホモゲナイザーにかけて乳化し、
更に、香料の適量を加えて攪拌混合し、クリームを製造
した。

【０１０３】本品は、伸びの良いクリームで、日焼け止
め、美肌剤、色白剤などとして有利に使用できる。

【０１０４】〈実施例Ｂ−１０ 練歯磨〉第二リン酸カ
ルシウム４５重量部、ラウリル硫酸ナトリウム１．５重
量部、グリセリン２５重量部、ポオキシエチレンソルビ
タンラウレート０．５重量部、実施例Ａ−８の方法で得
たキシロシルフラクトシド高含有シラップ１５重量部、
サッカリン０．０２重量部および防腐剤０．０５重量部
を水１３重量部と混合して練歯磨を得た。

【０１０５】本品は、光沢、洗浄力も良好で、練歯磨と
して好適である。

【０１０６】〈実施例Ｂ−１１ 経管栄養剤〉実施例Ａ
−６の方法で得たエルロース高含有粉末２０重量部、グ
リシン１．１重量部、グルタミン酸ナトリウム１重量
部、乳酸カルシウム０．４重量部、炭酸マグネシウム
０．１重量部、チアミン０．０１重量部およびリボフラ
ビン０．０１重量部からなる配合物を調製する。この配
合物２４ｇずつをラミネートアルミ製小包に充填し、ヒ
ートシールして製品を得た。

【０１０７】本品は、１袋分を約３００乃至５００ｍｌ
の水に溶解して栄養補給液とし、経管方法により、鼻
腔、胃腸などへ投与して使用する。

【０１０８】本品は、ヒトのみならず、家畜などへの非
経口的栄養補給液としても有利に利用できる。

【０１０９】〈実施例Ｂ−１２ 経管栄養剤〉実施例Ａ
−４の方法で得たラクトスクロース高含有粉末５８０重
量部、乾燥卵黄１９０重量部、脱脂粉乳２０９重量部、
塩化ナトリウム４．４重量部、塩化カリウム１．８５重
量部、硫酸マグネシウム４重量部、チアミン０．０１重
量部、アスコルビン酸ナトリウム０．１重量部、ビタミ
ンＥアセテート０．６重量部およびニコチン酸アミド
０．０４重量部からなる配合物を調製する。この配合物
２５ｇずつを、ラミネートアルミ製小袋に充填し、ヒー
トシールして、個体状経管栄養剤を製造した。

【０１１０】本品は、長期間品質が安定して維持され、
溶解性、分散性が良好である。本剤は、１袋分を約１５
０乃至３００ｍｌの水に溶解して栄養補給液とし、経管
方法により、鼻腔、食道、胃などへ投与して利用する。
また、本品は、ビフィズス菌増殖促進効果、ミネラル吸
収促進効果を発揮し、美容、健康の維持増進、成人病の
予防、病中、病後の回復促進、各種疾病の治療、予防、
更には、家畜、家禽などの病中、病後の回復促進、肥育
促進などに有利に利用できる。

【０１１１】〈実施例Ｂ−１３ 錠剤〉実施例Ａ−１１
の方法で得たフラクトシルトレハロース高含有粉末４０
重量部、マルトース１０重量部、第三リン酸カルシウム
１重量部、シュガーエステル１重量部および適量の粉末
香料を均一に混合した後、常法に従って、１錠約３５０
ｍｇになるように打錠機にて打錠し、錠剤を得た。

【０１１２】本品は、ひび割れもなく安定性良好な飲み
やすい錠剤で、成人１日当たり、約１乃至４０錠、望ま
しくは、約２乃至２０錠摂取することにより、ビフィズ
ス菌増殖促進効果、ミネラル吸収促進効果を発揮し、美
容、健康の維持増進、成人病の予防、病中、病後の回復
促進、各種疾病の治療、予防などに有利に利用できる。

【０１１３】〈実施例Ｂ−１４ インターフェロン錠
剤〉ヒト天然型インターフェロン−α標品（株式会社林
原生物化学研究所製造、コスモ・バイオ株式会社販売）
を、常法に従って、固定化抗ヒトインターフェロン−α
抗体カラムにかけ、該標品に含まれるヒト天然型インタ
ーフェロン−αを吸着させ、安定剤である牛血清アルブ
ミンを素通りさせて除去し、次いで、ｐＨを変化させ
て、ヒト天然型インターフェロン−αを実施例Ａ−４の
方法で得たラクトスクロース高含有粉末を５％含有する
生理食塩水を用いて溶出した。本液を精密濾過し、約２
０倍量の無水結晶マルトース粉末（株式会社林原商事販
売、商品名『ファイントース（登録商標）』）に加えて
脱水、粉末化し、これを打錠機にて打錠し、１錠（約２
００ｍｇ）当たりヒト天然型インターフェロン−αを約
１５０単位含有する錠剤を得た。

【０１１４】本品は、舌下錠などとして、１日当たり、
大人１乃至１０錠程度が経口的に投与され、ウイルス性
疾患、アレルギー性疾患、リューマチ、糖尿病、悪性腫
瘍などの治療に有利に利用できる。とりわけ、近年、患
者数の急増しているエイズ、肝炎などの治療剤として有
利に利用できる。本品は、ラクトスクロースと共にマル
トースが安定剤として作用し、室温で放置してもその活
性を長期間よく維持する。

【０１１５】〈実施例Ｂ−１５ 配合飼料〉粉麩４０重
量部、脱脂粉乳３８重量部、実施例Ａ−１１の方法で得
たフラクトシルトレハロース高含有粉末１２重量部、ビ
タミン剤１０重量部、魚粉５重量部、第二リン酸カルシ
ウム５重量部、液状油脂３重量部、炭酸カルシウム３重
量部、食塩２重量部およびミネラル剤２重量部を配合し
て、配合飼料を製造した。

【０１１６】本品は、嗜好性の向上した家畜、家禽など
の飼料であって、とりわけ、子豚用飼料として好適であ
る。また、本品はビフィズス菌増殖効果、ミネラル吸収
促進効果を発揮し、飼育動物の感染予防、下痢予防、食
欲増進、肥育促進、糞便の臭気抑制などに有利に利用で
きる。更に、本品は、必要に応じて、他の飼料材料、例
えば、穀類、小麦粉、澱粉、油粕類、糟糠類などの濃厚
飼料材料や、ワラ、乾草、バガス、コーンコブなどの粗
飼料材料などと併用して、他の配合飼料にすることもで
きる。

【０１１７】

【発明の効果】以上述べたように、本発明は、工業的実
施に有利なフラクトシル転移能の高い微生物由来の新規
β−フラクトフラノシダーゼとその製造方法並びに用途
に関する。本発明のβ−フラクトフラノシダーゼを、蔗
糖を供与体とし、還元性又は非還元性の糖質を受容体と
して作用させると、受容体にフラクトシル基を転移して
非還元性糖質を生成する。新たに生成したフラクトシル
転移糖は、味質良好な甘味を有し、また浸透圧調節性、
保湿性、照付与性、結晶防止性、澱粉老化防止性などの
性質を有し、更には、抗う蝕性、ビフィズス菌増殖促進
性、ミネラル吸収促進性などの機能をも有し、広く、飲
食物、化粧品、医薬品、成形物など各種組成物に有利に
利用される。従って、食品、化粧品、医薬品などの分野
における工業的意義はきわめて大きい。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明のβ−フラクトフラノシダーゼ活性に
及ぼすｐＨの影響を示す図である。

【図２】 本発明のβ−フラクトフラノシダーゼ活性に
及ぼす温度の影響を示す図である。

【図３】 本発明のβ−フラクトフラノシダーゼのｐＨ
安定性を示す図である。

【図４】 本発明のβ−フラクトフラノシダーゼの熱安
定性を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ２３Ｋ 1/16 ３０３ Ａ２３Ｋ 1/16 ３０３Ｄ Ａ２３Ｌ 1/236 Ａ２３Ｌ 1/236 Ａ 1/30 1/30 Ｚ 1/40 1/40 2/38 2/38 Ｐ Ａ６１Ｋ 9/20 ＡＣＫ Ａ６１Ｋ 9/20 ＡＣＫＡ Ｃ１２Ｐ 19/18 Ｃ１２Ｐ 19/18 // Ａ６１Ｋ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 Ｆ 7/16 7/16 7/48 7/48 31/70 ＡＤＤ 31/70 ＡＤＤ ＡＥＲ ＡＥＲ (Ｃ１２Ｎ 9/24 Ｃ１２Ｒ 1:07）

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の理化学的性質を有するβ−フラク
   トフラノシダーゼ。 （１） 作用 少なくとも蔗糖、ラフィノース及びエルロースのβ−フ
   ラクトフラノシド結合を加水分解して、フラクトースを
   遊離する。また、これらβ−フラクトフラノシド結合を
   有する糖質を糖供与体として、糖供与体以外の他の糖
   質、糖アルコール及びアルコール類から選ばれる受容体
   にβ−フラクトフラノシル基の転移を触媒する。 （２） 分子量 ＳＤＳ−ゲル電気泳動法で、４９，０００±５，０００
   ダルトン （３） 等電点 アンフォライン含有電気泳動法で、４．６±０．５ （４） 至適ｐＨ ４０℃、１０分間反応で、約５．５乃至６．０ （５） 至適温度 ｐＨ６．０、１０分間反応で、カルシウムイオン非存在
   下で４５℃付近，カルシウムイオン存在下で５０℃付近 （６） ｐＨ安定性 温度４℃、２４時間保持の条件で、ｐＨ約５．０乃至
   ８．０の範囲で安定 （７） 温度安定性 ｐＨ６．０、１時間保持の条件で、４５℃付近まで安定
2. 【請求項２】 バチルス属に属する微生物由来の請求項
   １記載のβ−フラクトフラノシダーゼ。
3. 【請求項３】 微生物がバチルス・スピーシーズＶ２３
   ０（工業技術院生命工学工業技術研究所、受託番号 Ｆ
   ＥＲＭ ＢＰ−５０５４）である請求項２記載のβ−フ
   ラクトフラノシダーゼ。
4. 【請求項４】 β−フラクトフラノシダーゼ産生能を有
   する微生物を培養し、培養物から請求項１、２又は３記
   載のβ−フラクトフラノシダーゼを採取することを特徴
   とするβ−フラクトフラノシダーゼの製造方法。
5. 【請求項５】 β−フラクトフラノシダーゼ産生能を有
   する微生物が、バチルス・スピーシーズに属する微生物
   である請求項４記載のβ−フラクトフラノシダーゼの製
   造方法。
6. 【請求項６】 β−フラクトフラノシダーゼ産生能を有
   する微生物バチルス・スピーシーズＶ２３０（工業技術
   院生命工学工業技術研究所、受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ
   −５０５４）。
7. 【請求項７】 蔗糖とそれ以外の糖質とを含有する溶液
   に、請求項１、２又は３記載のβ−フラクトフラノシダ
   ーゼを作用させ得られるフラクトシル転移糖含有糖質。
8. 【請求項８】 フラクトシル転移糖が、キシロシルフラ
   クトシド、エルロース、イソマルトシルフラクトシド、
   ラクトスクロース及びフラクトシルトレハロースから選
   ばれる糖質である請求項７記載のフラクトシル転移糖含
   有糖質。
9. 【請求項９】 酵母発酵法、アルカリ処理法及びカラム
   クロマトグラフィーから選ばれる方法によりフラクトシ
   ル転移糖の含量を高めた請求項７又は８記載のフラクト
   シル転移糖含有糖質。
10. 【請求項１０】 請求項７、８又は９記載のフラクトシ
    ル転移糖含有糖質を含有せしめた組成物。
11. 【請求項１１】 組成物が飲食物、化粧品、医薬品、又
    は成形物であることを特徴とする請求項１０記載の組成
    物。
12. 【請求項１２】 蔗糖とそれ以外の糖質とを含有する溶
    液に、請求項１、２又は３記載のβ−フラクトフラノシ
    ダーゼを作用させるフラクトシル転移糖含有糖質の製造
    方法。
13. 【請求項１３】 それ以外の糖質が、乳糖、マルトー
    ス、キシロース、トレハロース、イソマルトース、ガラ
    クトース、セロビオース、パノース、メリビオースから
    選ばれる１種もしくは２種以上である請求項１２記載の
    フラクトシル転移糖含有糖質の製造方法。