JPH09278793A - ポリペプチド - Google Patents
ポリペプチドInfo
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- JPH09278793A JPH09278793A JP8113128A JP11312896A JPH09278793A JP H09278793 A JPH09278793 A JP H09278793A JP 8113128 A JP8113128 A JP 8113128A JP 11312896 A JP11312896 A JP 11312896A JP H09278793 A JPH09278793 A JP H09278793A
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- JP
- Japan
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- polypeptide
- helix
- amino acid
- leu
- ala
- Prior art date
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- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
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- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
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- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 安定にα−ヘリックスを形成し、かつ一定の
長さを持つポリペプチドを提供する。 【解決手段】 親水性面および疎水性面を持つことを特
徴とする遺伝子工学的方法より得られるα−ヘリックス
構造状ポリペプチドに関する。
長さを持つポリペプチドを提供する。 【解決手段】 親水性面および疎水性面を持つことを特
徴とする遺伝子工学的方法より得られるα−ヘリックス
構造状ポリペプチドに関する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はポリペプチド、およ
び該ポリペプチドよりなる繊維状会合物に関するもので
ある。
び該ポリペプチドよりなる繊維状会合物に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】α−ヘリックスは、蛋白質やポリペプチ
ドのとる二次構造の一つであり、アミノ酸３．６残基ご
とに１回転し、４番目ごとのアミノ酸の−ＮＨ−と、−
ＣＯ−の間に螺旋軸とほぼ平行な水素結合を作り、エネ
ルギー的に安定な構造を有しているものである。α−ヘ
リックスは右巻きと左巻きの２種類の螺旋があるが、安
定性の点から天然には右巻きしか見られない。
ドのとる二次構造の一つであり、アミノ酸３．６残基ご
とに１回転し、４番目ごとのアミノ酸の−ＮＨ−と、−
ＣＯ−の間に螺旋軸とほぼ平行な水素結合を作り、エネ
ルギー的に安定な構造を有しているものである。α−ヘ
リックスは右巻きと左巻きの２種類の螺旋があるが、安
定性の点から天然には右巻きしか見られない。
【０００３】蛋白中のα−ヘリックス中のアミノ酸残基
の置換、化学合成ポリぺプチドを用い、α−ヘリックス
の性質および安定性に関する研究が行われている。しか
しながらこれらの手法ではα−ヘリックスの分子量をコ
ントロールすることが困難であった。
の置換、化学合成ポリぺプチドを用い、α−ヘリックス
の性質および安定性に関する研究が行われている。しか
しながらこれらの手法ではα−ヘリックスの分子量をコ
ントロールすることが困難であった。
【０００４】一定のアミノ酸配列で長さが一定に揃って
いないと、分子会合は不揃いとなり、長くて特定の性状
をもったポリペプチド会合体が得られない。
いないと、分子会合は不揃いとなり、長くて特定の性状
をもったポリペプチド会合体が得られない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、遺伝子
工学の手法を用いることにより安定にα−ヘリックスを
形成し、かつ一定の長さを持つポリペプチドを提供する
ことを目的とする。
工学の手法を用いることにより安定にα−ヘリックスを
形成し、かつ一定の長さを持つポリペプチドを提供する
ことを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は親水性
面および疎水性面を持つことを特徴とする遺伝子組換え
法より得られるα−ヘリックス構造状ポリペプチドおよ
び該ポリペプチドよりなる繊維状蛋白質に関する。
面および疎水性面を持つことを特徴とする遺伝子組換え
法より得られるα−ヘリックス構造状ポリペプチドおよ
び該ポリペプチドよりなる繊維状蛋白質に関する。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明は疎水性アミノ酸と親水性
アミノ酸を配列中に持つことにより、図１に示すように
α−ヘリックス中に疎水面と親水面を持ち合わせ、両親
媒性α−ヘリックスをとることを特徴としたものであ
る。
アミノ酸を配列中に持つことにより、図１に示すように
α−ヘリックス中に疎水面と親水面を持ち合わせ、両親
媒性α−ヘリックスをとることを特徴としたものであ
る。
【０００８】図１を例に説明すると、７アミノ酸配列を
４回繰返してなるＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａ
ｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−
Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａで示さ
れるポリペプチドを順に配置し、アミノ酸配列１番目、
８番目、１５番目、２２番目のＬｅｕが重なるように配
置しα−ヘリックスの側面に疎水面と親水面を配置し、
安定なα−ヘリックスを形成するものである。
４回繰返してなるＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａ
ｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−
Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａで示さ
れるポリペプチドを順に配置し、アミノ酸配列１番目、
８番目、１５番目、２２番目のＬｅｕが重なるように配
置しα−ヘリックスの側面に疎水面と親水面を配置し、
安定なα−ヘリックスを形成するものである。
【０００９】α−ヘリックス中に疎水性面を持たせるた
め、本発明のポリぺプチドはＬｅｕ、Ａｌａ，Ｖａｌの
アミノ酸からなる少なくとも一種有するのが好ましく、
さらに好ましくは図１に示すようにα−ヘリックスにお
ける隣接する２以上のアミノ酸を上述の疎水性アミノ酸
とすることが好ましい。
め、本発明のポリぺプチドはＬｅｕ、Ａｌａ，Ｖａｌの
アミノ酸からなる少なくとも一種有するのが好ましく、
さらに好ましくは図１に示すようにα−ヘリックスにお
ける隣接する２以上のアミノ酸を上述の疎水性アミノ酸
とすることが好ましい。
【００１０】同様にα−ヘリックス中に親水性面を持た
せるため、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒのアミノ酸からなる
少なくとも一種有するのが好ましく、さらに好ましくは
図１に示すようにα−ヘリックスにおける隣接する２以
上のアミノ酸を上述のアミノ酸とすることが好ましい。
せるため、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒのアミノ酸からなる
少なくとも一種有するのが好ましく、さらに好ましくは
図１に示すようにα−ヘリックスにおける隣接する２以
上のアミノ酸を上述のアミノ酸とすることが好ましい。
【００１１】上述のアミノ酸の中でも本発明のポリペプ
チドは、本発明のポリぺプチドはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｌ
ａ、ＴｈｒおよびＬｅｕのアミノ酸を有することが好ま
しい。
チドは、本発明のポリぺプチドはＬｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｌ
ａ、ＴｈｒおよびＬｅｕのアミノ酸を有することが好ま
しい。
【００１２】本発明のポリペプチドはα−ヘリックスの
長手方向にそって親水性面と疎水性面を持つことに特徴
の一つを持つものであり、本発明のポリペプチドはその
α−ヘリックスの側面に親水性面、疎水性面を形成する
ものであれば、特にそのアミノ酸配列は限定されるもの
ではない。中でも、α−ヘリックスがアミノ酸3.6 残基
毎に一回転することから、７アミノ酸を一単位として繰
り返すことにより安定なα−ヘリックスを作製すること
ができる。α−ヘリックスを安定に形成するためには、
７アミノ酸を１単位とする場合を例にとると、７アミノ
酸を複数回繰返してなるポリペプチドを用いることが好
ましく、７アミノ酸からなる１単位を３回以上繰返して
なるポリペプチドが用いられる。
長手方向にそって親水性面と疎水性面を持つことに特徴
の一つを持つものであり、本発明のポリペプチドはその
α−ヘリックスの側面に親水性面、疎水性面を形成する
ものであれば、特にそのアミノ酸配列は限定されるもの
ではない。中でも、α−ヘリックスがアミノ酸3.6 残基
毎に一回転することから、７アミノ酸を一単位として繰
り返すことにより安定なα−ヘリックスを作製すること
ができる。α−ヘリックスを安定に形成するためには、
７アミノ酸を１単位とする場合を例にとると、７アミノ
酸を複数回繰返してなるポリペプチドを用いることが好
ましく、７アミノ酸からなる１単位を３回以上繰返して
なるポリペプチドが用いられる。
【００１３】本発明のポリぺプチドの具体例としては、
配列番号１記載のアミノ酸を有するものが好ましい一例
として挙げられ、該アミノ酸配列を３回繰り返したもの
（配列番号２：以下α３と略す）、４回繰り返したもの
（配列番号３：以下α４と略す）、α３の配列を逆にし
たもの（配列番号４：以下ｒ´３と略す）、ｒ´３を４
残基ずらしたもの（配列番号５：以下ｒ３と略す）が用
いられる。
配列番号１記載のアミノ酸を有するものが好ましい一例
として挙げられ、該アミノ酸配列を３回繰り返したもの
（配列番号２：以下α３と略す）、４回繰り返したもの
（配列番号３：以下α４と略す）、α３の配列を逆にし
たもの（配列番号４：以下ｒ´３と略す）、ｒ´３を４
残基ずらしたもの（配列番号５：以下ｒ３と略す）が用
いられる。
【００１４】さらに、本発明のポリペプチドは上述の通
り７つのアミノ酸配列を単に繰り返すものも含むが、さ
らに７アミノ酸配列の繰り返しの間にリンカーを有する
ものも用いられ、例えばリンカーとしてアミノ酸数で５
−７のポリペプチドが挿入されていているものが挙げら
れる。挿入されるアミノ配列は柔軟性という観点から適
宜選択されるが、好ましい具体例としては−Ｇｌｙ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−がある。例えば、２つ
のα３をリンカー（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−
Ｇｌｙ）でつないだもの（配列番号６：以下α３−ＧＰ
ＲＲＧ−α３と略す）が好ましく用いられる。
り７つのアミノ酸配列を単に繰り返すものも含むが、さ
らに７アミノ酸配列の繰り返しの間にリンカーを有する
ものも用いられ、例えばリンカーとしてアミノ酸数で５
−７のポリペプチドが挿入されていているものが挙げら
れる。挿入されるアミノ配列は柔軟性という観点から適
宜選択されるが、好ましい具体例としては−Ｇｌｙ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−がある。例えば、２つ
のα３をリンカー（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−
Ｇｌｙ）でつないだもの（配列番号６：以下α３−ＧＰ
ＲＲＧ−α３と略す）が好ましく用いられる。
【００１５】本発明のポリペプチドは、図１にα３を例
に挙げて示す通り、Ｌｅｕ（Ｌ１，Ｌ４）で疎水面を、
Ｇｌｕ、Ｌｙｓ（Ｅ２，Ｋ６）で親水面を持つ両親媒性
であるため、会合体を形成し安定に、α−ヘリックスを
保持できる。特に繰り返し数が４以上になるとｐＨや塩
濃度などの影響もほとんど受けず、安定に会合体すなわ
ちα−ヘリックス構造をとることができる。
に挙げて示す通り、Ｌｅｕ（Ｌ１，Ｌ４）で疎水面を、
Ｇｌｕ、Ｌｙｓ（Ｅ２，Ｋ６）で親水面を持つ両親媒性
であるため、会合体を形成し安定に、α−ヘリックスを
保持できる。特に繰り返し数が４以上になるとｐＨや塩
濃度などの影響もほとんど受けず、安定に会合体すなわ
ちα−ヘリックス構造をとることができる。
【００１６】また本発明のポリペプチドは上述の通り両
親媒性α−ヘリックスを形成するため、繊維状の会合体
を形成できる。その直径はα−ヘリックス時の直径が約
１０オングストロームであり、会合体の直径は特に限定
されるものではないが、数十オングストローム以上とな
る。
親媒性α−ヘリックスを形成するため、繊維状の会合体
を形成できる。その直径はα−ヘリックス時の直径が約
１０オングストロームであり、会合体の直径は特に限定
されるものではないが、数十オングストローム以上とな
る。
【００１７】本発明のポリペプチドは下記の遺伝子組換
え型技術を利用して調製される。すなわち本発明のポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを組み込んだ発現ベクター
により宿主細胞を形質転換し、該形質転換体を培養する
ことにより製造することができる。
え型技術を利用して調製される。すなわち本発明のポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを組み込んだ発現ベクター
により宿主細胞を形質転換し、該形質転換体を培養する
ことにより製造することができる。
【００１８】上記ベクターとしては、特に限定されるも
のではないが、例えばブタアデニル酸キナーゼの遺伝子
が組込まれた発現プラスミドｐＭＫＡＫ３（Kumagai,
I.,Takeda,S.,and Miura,K.(1990) Protein Engng.5,44
9-452)が好ましく用いられる。
のではないが、例えばブタアデニル酸キナーゼの遺伝子
が組込まれた発現プラスミドｐＭＫＡＫ３（Kumagai,
I.,Takeda,S.,and Miura,K.(1990) Protein Engng.5,44
9-452)が好ましく用いられる。
【００１９】宿主細胞としては、大腸菌が用いられるが
他の細胞も用いることができる。
他の細胞も用いることができる。
【００２０】本発明のポリペプチドの用途は特に限定さ
れるものではないが、各種薬剤などをα−ヘリックス中
に包含し、標的組織に特異的に運搬するドラッグ・デリ
バリー・システムに使用される包接剤、ポリペプチド中
に蛍光を出しうるチロシンなどを含ませることにより各
種マーカーとして使用が可能である。
れるものではないが、各種薬剤などをα−ヘリックス中
に包含し、標的組織に特異的に運搬するドラッグ・デリ
バリー・システムに使用される包接剤、ポリペプチド中
に蛍光を出しうるチロシンなどを含ませることにより各
種マーカーとして使用が可能である。
【００２１】また会合体は、生体適合性高分子材料、例
えば手術用糸、人工血管、人工組織などの医療用材料と
して使用され得る。
えば手術用糸、人工血管、人工組織などの医療用材料と
して使用され得る。
【００２２】
【実施例】以下、本発明を実施例を挙げて説明するが、
本発明は下記実施例により制限されるものではない。 実施例１ 発現プラスミドの作製 配列番号２〜６記載のポリヌクレオチドを各々プラスミ
ドｐＭＫＡＫ３（Kumagai,I.,Takeda,S.,and Miura,K.
(1990) Protein Engng.5,449-452)に組み込み、５種類
の発現プラスミドを得た。
本発明は下記実施例により制限されるものではない。 実施例１ 発現プラスミドの作製 配列番号２〜６記載のポリヌクレオチドを各々プラスミ
ドｐＭＫＡＫ３（Kumagai,I.,Takeda,S.,and Miura,K.
(1990) Protein Engng.5,449-452)に組み込み、５種類
の発現プラスミドを得た。
【００２３】実施例２ ポリペプチドの発現および精製 配列番号３のヌクレオチドを有する発現プラスミドで
Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９株を形質転換したものを、ＬＢ
／Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ培地5.8 ｌで 培養した。約１
５時間３７℃でインキュベーションした後、集菌して、
ＴＥ ｂｕｆｆｅｒで菌体を洗い、超音波破砕（２００
Ｗ，２０ｋＨｚ）を行って、遠心分離（１０００００r.
p.m.,10min.,４℃）し、不溶性の封入体を回収した。得
られた封入体は遠心分離後の上清が透明になるまでＴＥ
ｂｕｆｆｅｒで洗浄した。
Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９株を形質転換したものを、ＬＢ
／Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ培地5.8 ｌで 培養した。約１
５時間３７℃でインキュベーションした後、集菌して、
ＴＥ ｂｕｆｆｅｒで菌体を洗い、超音波破砕（２００
Ｗ，２０ｋＨｚ）を行って、遠心分離（１０００００r.
p.m.,10min.,４℃）し、不溶性の封入体を回収した。得
られた封入体は遠心分離後の上清が透明になるまでＴＥ
ｂｕｆｆｅｒで洗浄した。
【００２４】回収した不溶性封入体を７０％ギ酸４２ｍ
ｌに溶かし、１％メルカプトエタノールと２％臭化シア
ンを加え、３７℃一晩インキュベーションを２回繰り返
した。なお、ＳＤＳ−ＰＡＧＥでブタアデニル酸キナー
ゼから目的とするポリペプチドが切り離されているか確
認した。得られた蛋白質を蒸留水、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ（ｐＨ８．５）を用い透析を行った。透析した
蛋白質は陰イオン交換体クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ
−cellurose)、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．
５），０．５Ｍ ＮａＣｌ、流速１ｃｃ／ｍｉｎで溶出
し、５ｍｌづつ分取した。各フラクションの２３０ｎ
ｍ、２８０ｎｍの吸光度測定を行った。
ｌに溶かし、１％メルカプトエタノールと２％臭化シア
ンを加え、３７℃一晩インキュベーションを２回繰り返
した。なお、ＳＤＳ−ＰＡＧＥでブタアデニル酸キナー
ゼから目的とするポリペプチドが切り離されているか確
認した。得られた蛋白質を蒸留水、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ（ｐＨ８．５）を用い透析を行った。透析した
蛋白質は陰イオン交換体クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ
−cellurose)、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．
５），０．５Ｍ ＮａＣｌ、流速１ｃｃ／ｍｉｎで溶出
し、５ｍｌづつ分取した。各フラクションの２３０ｎ
ｍ、２８０ｎｍの吸光度測定を行った。
【００２５】吸光度測定で２３０ｎｍに吸収があるフラ
クションを逆相ＨＰＬＣにかけ、２３０ｎｍのみに吸収
のあるピークを分取し、滅菌水で２倍に希釈し凍結乾燥
し、白い綿状物がえられた。このうち５μｌでアミノ酸
組成分析を行い、培地５．８ｌから５．９μｍｏｌのα
４が得られたことが分かった。
クションを逆相ＨＰＬＣにかけ、２３０ｎｍのみに吸収
のあるピークを分取し、滅菌水で２倍に希釈し凍結乾燥
し、白い綿状物がえられた。このうち５μｌでアミノ酸
組成分析を行い、培地５．８ｌから５．９μｍｏｌのα
４が得られたことが分かった。
【００２６】実施例３ 実施例２の発現プラスミドのかわりに配列番号２記載の
ヌクレオチドを有する発現プラスミドを用いる以外は実
施例２と同様にしα３が、配列番号４記載のヌクレオチ
ドを有する発現プラスミドを用いｒ´３が、配列番号５
記載のヌクレオチドを有する発現プラスミドを用いｒ３
が、配列番号６記載のヌクレオチドを有する発現プラス
ミドを用いα３−ＧＰＲＲＧ−α３が各々培地１ｌから
２−１０ｍｇ得られた。
ヌクレオチドを有する発現プラスミドを用いる以外は実
施例２と同様にしα３が、配列番号４記載のヌクレオチ
ドを有する発現プラスミドを用いｒ´３が、配列番号５
記載のヌクレオチドを有する発現プラスミドを用いｒ３
が、配列番号６記載のヌクレオチドを有する発現プラス
ミドを用いα３−ＧＰＲＲＧ−α３が各々培地１ｌから
２−１０ｍｇ得られた。
【００２７】実施例４ α−ヘリックスの確認 実施例２および３で得られたα４のポリペプチド１００
μＭ、α３のポリペプチド１１０μＭを各々０．１Ｍ塩
化カリウムを含むｐＨ６．０のリン酸緩衝液１０ｍＭ中
でJasco-J720 ＣＤスペクトロフォトメータを用い、セ
ル中の光透過長は１ｍｍ、３０℃でＣＤスペクトル測定
を行なった。結果を図２に示す。図２より明らかな通
り、α４，α３共に２０８ｎｍ，２２２ｎｍに負の極大
を持つα−ヘリックス特有のスペクトルが得られた。ま
たα４の場合、α−ヘリックスが非常に高く、安定なα
−ヘリックス体をとっていることが判る。同様の条件で
α３（１１０μＭ）、α３−ＧＰＲＲＧ−α３（１０μ
Ｍ）のＣＤスペクトルの結果を図３に、α３（１１０μ
Ｍ）、ｒ３（９０μＭ）、ｒ´３（９５μＭ）のＣＤス
ペクトルの結果を図４に示す。図３より、α３−ＧＰＲ
ＲＧ−α３がα３より安定に存在することが示され、こ
れはα３の間に５アミノ酸残基からなるリンカーがある
場合であっても、７アミノ酸残基の繰返しが、３から６
に増加することにより、α−ヘリックスの疎水面の相互
作用によるものと考えられる。また、図４よりｒ´３、
ｒ３はα３より安定にα−ヘリックスを形成しているこ
とが分かり、これはポリペプチド分子内、分子間の静電
的相互作用がα−ヘリックスの安定化に関与しているた
めと思われる。
μＭ、α３のポリペプチド１１０μＭを各々０．１Ｍ塩
化カリウムを含むｐＨ６．０のリン酸緩衝液１０ｍＭ中
でJasco-J720 ＣＤスペクトロフォトメータを用い、セ
ル中の光透過長は１ｍｍ、３０℃でＣＤスペクトル測定
を行なった。結果を図２に示す。図２より明らかな通
り、α４，α３共に２０８ｎｍ，２２２ｎｍに負の極大
を持つα−ヘリックス特有のスペクトルが得られた。ま
たα４の場合、α−ヘリックスが非常に高く、安定なα
−ヘリックス体をとっていることが判る。同様の条件で
α３（１１０μＭ）、α３−ＧＰＲＲＧ−α３（１０μ
Ｍ）のＣＤスペクトルの結果を図３に、α３（１１０μ
Ｍ）、ｒ３（９０μＭ）、ｒ´３（９５μＭ）のＣＤス
ペクトルの結果を図４に示す。図３より、α３−ＧＰＲ
ＲＧ−α３がα３より安定に存在することが示され、こ
れはα３の間に５アミノ酸残基からなるリンカーがある
場合であっても、７アミノ酸残基の繰返しが、３から６
に増加することにより、α−ヘリックスの疎水面の相互
作用によるものと考えられる。また、図４よりｒ´３、
ｒ３はα３より安定にα−ヘリックスを形成しているこ
とが分かり、これはポリペプチド分子内、分子間の静電
的相互作用がα−ヘリックスの安定化に関与しているた
めと思われる。
【００２８】実施例５ 実施例２、３で得られたα４、α３、ｒ３、ｒ３´、α
３−ＧＰＲＲＧ−α３の水溶液を透過型電子顕微鏡で観
察したところ、いずれも細長い繊維状の集合体を形成し
ていることを確認した。
３−ＧＰＲＲＧ−α３の水溶液を透過型電子顕微鏡で観
察したところ、いずれも細長い繊維状の集合体を形成し
ていることを確認した。
【００２９】
【発明の効果】本発明は遺伝子工学的手法により分子量
が一定で、安定なα−ヘリックスが作製でき、医療用材
料に代表される種々の用途に使用可能なα−ヘリックス
を提供できる。
が一定で、安定なα−ヘリックスが作製でき、医療用材
料に代表される種々の用途に使用可能なα−ヘリックス
を提供できる。
【００３０】
配列番号：１ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質
【００３１】配列番号：２ 配列の長さ：７８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成 配列 AATTC ATG CTG GAA ACC CTG GCG AAG GCT CTG GAG ACC CTG GCG AAG GCT 50 Met Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala 1 5 10 CTG GAA ACC CTG GCT AAA GCT TGATAGG 78 Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala 15 20
【００３２】配列番号：３ 配列の長さ：９９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成 配列 AATTC ATG CTG GAA ACC CTG GCG AAG GCT CTG GAG ACC CTG GCG AAG GCT 50 Met Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala 1 5 10 CTG GAA ACC CTG GCT AAA GCT CTG GAA ACC CTG GCG AAG GCT TGATAGG 99 Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala 15 20 25
【００３３】配列番号：４ 配列の長さ：７８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成 配列 AATTC ATG GCT AAG GCG CTG ACC GAA CTG GCT AAG GCG CTG ACC GAG CTG 50 Met Ala Lys Ala Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ala Leu Thr Glu Leu 1 5 10 GCT AAA GCT CTG ACC GAA CTG TGATAGG 78 Ala Lys Ala Leu Thr Glu Leu 15 20
【００３４】配列番号：５ 配列の長さ：７８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成 配列 AATTC ATG CTG ACC GAA CTG GCG AAG GCT CTG ACC GAG CTG GCG AAG GCT 50 Met Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ala Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ala 1 5 10 CTG ACC GAA CTG GCT AAA GCT TGATAGG 78 Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ala 15 20
【００３５】配列番号：６ 配列の長さ：１５６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成 配列 AATTC ATG CTG GAA ACC CTG GCG AAG GCT CTG GAG ACC CTG GCG AAG GCT 50 Met Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala 1 5 10 CTG GAA ACC CTG GCT AAG GCT GGT CCG CGT CGC GGC CTG GAG ACC CTG 98 Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala Gly Pro Arg Arg Gly Leu Glu Thr Leu 15 20 25 30 GCT AAG GCT CTG GAG ACC CTG GCG AAG GCT CTG GAA ACC CTG GCT AAA 146 Ala Lys Ala Leu Glu Thr Leu Ala Lys Ala Leu Glu Thr Leu Ala Lys 35 40 45 GCT TGATAGG 156 Ala
【図１】本発明の一例であるα３からなるα−ヘリック
スの断面図である。
スの断面図である。
【図２】実施例４におけるα３、α４のＣＤスペクトル
の結果を示す図である。
の結果を示す図である。
【図３】実施例４におけるα３、α３−ＧＰＲＲＧ−α
３のＣＤスペクトルの結果を示す図である。
３のＣＤスペクトルの結果を示す図である。
【図４】実施例４におけるα３、ｒ３、ｒ´３のＣＤス
ペクトルの結果を示す図である。
ペクトルの結果を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 栗城 ゆきの 東京都豊島区目白１−５−１ 学習院大学 理学部生命分子科学研究所内 (72)発明者 吉田 尊雄 東京都豊島区目白１−５−１ 学習院大学 理学部生命分子科学研究所内 (72)発明者 中江 進 東京都豊島区目白１−５−１ 学習院大学 理学部生命分子科学研究所内 (72)発明者 土居 葉子 東京都豊島区目白１−５−１ 学習院大学 理学部生命分子科学研究所内
Claims (6)
- 【請求項１】 親水性面および疎水性面を持つことを特
徴とする遺伝子組換え法で得られるα−ヘリックス構造
状ポリペプチド。 - 【請求項２】 親水性面が、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｔｈｒか
ら選ばれる少なくも一種のアミノ酸を有することを特徴
とする請求項１記載のポリペプチド。 - 【請求項３】 疎水性面がＬｅｕ、Ａｌａ、Ｖａｌから
選ばれる少なくも一種のアミノ酸を有することを特徴と
する請求項１記載のポリペプチド。 - 【請求項４】 アミノ酸残基Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ａｌａ、
ＴｈｒおよびＬｅｕを含んでなる請求項１記載のポリペ
プチド。 - 【請求項５】 配列番号２，３，４，５または６記載の
アミノ酸配列を有する請求項１記載のポリペプチド。 - 【請求項６】 請求項１ないし５のいずれかに記載のポ
リペプチドよりなる繊維状会合物。
Priority Applications (3)
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|---|---|---|---|
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| CA002190812A CA2190812A1 (en) | 1996-04-10 | 1996-11-20 | Polypeptide |
| US08/752,526 US6124429A (en) | 1996-04-10 | 1996-11-20 | Genetically engineered alpha helix polypeptide |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8113128A JPH09278793A (ja) | 1996-04-10 | 1996-04-10 | ポリペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09278793A true JPH09278793A (ja) | 1997-10-28 |
Family
ID=14604259
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP8113128A Pending JPH09278793A (ja) | 1996-04-10 | 1996-04-10 | ポリペプチド |
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|---|---|
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| JP (1) | JPH09278793A (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| AU2012220558A1 (en) | 2011-02-23 | 2013-08-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Water soluble membrane proteins and methods for the preparation and use thereof |
| US10373702B2 (en) | 2014-03-27 | 2019-08-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Water-soluble trans-membrane proteins and methods for the preparation and use thereof |
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| US5374531A (en) * | 1993-03-22 | 1994-12-20 | Zynaxis, Inc. | Immunoassay for determination of cells |
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-
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- 1996-11-20 US US08/752,526 patent/US6124429A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-20 CA CA002190812A patent/CA2190812A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| CA2190812A1 (en) | 1997-10-11 |
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