JPH0928722A - 長期保存可能な肝補助体及びその製造方法 - Google Patents
長期保存可能な肝補助体及びその製造方法Info
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- JPH0928722A JPH0928722A JP18265895A JP18265895A JPH0928722A JP H0928722 A JPH0928722 A JP H0928722A JP 18265895 A JP18265895 A JP 18265895A JP 18265895 A JP18265895 A JP 18265895A JP H0928722 A JPH0928722 A JP H0928722A
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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- A61K35/37—Digestive system
- A61K35/407—Liver; Hepatocytes
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 長期保存可能な肝補助体及びその製造方法を
提供する。 【構成】 本発明による長期間保存可能な肝補助体３
は、妊娠ブタより無菌的に取り出した胎令７０日以上の
胎児から摘出した肝臓を細切して凍害防止溶液を浸透さ
せることにより肝臓の生理的活性を失わせずに−１９８
℃以下で保存可能とした肝臓組織切片２を備え、選択性
透過膜１により形成されたカプセル内に肝臓組織切片２
を充填して形成される。凍害防止溶液としては、５.０
〜１０.０％のジメチルスルホキシド又はグリセロール
等及び４０.０〜６０.０％のリン酸緩衝液を含有する保
存液が使用可能である。凍害防止溶液は細胞培養液を含
有してもよい。
提供する。 【構成】 本発明による長期間保存可能な肝補助体３
は、妊娠ブタより無菌的に取り出した胎令７０日以上の
胎児から摘出した肝臓を細切して凍害防止溶液を浸透さ
せることにより肝臓の生理的活性を失わせずに−１９８
℃以下で保存可能とした肝臓組織切片２を備え、選択性
透過膜１により形成されたカプセル内に肝臓組織切片２
を充填して形成される。凍害防止溶液としては、５.０
〜１０.０％のジメチルスルホキシド又はグリセロール
等及び４０.０〜６０.０％のリン酸緩衝液を含有する保
存液が使用可能である。凍害防止溶液は細胞培養液を含
有してもよい。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ブタ胎児から摘出
した肝臓組織切片を用いた長期間保存可能な肝補助体及
びその製造方法に関する。
した肝臓組織切片を用いた長期間保存可能な肝補助体及
びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】肝不全、即ち肝機能の障害・低下の対策
には内科的方法と外科的方法とがある。内科的な肝不全
対策の例として、安静、休養、食事療法、薬物治療、Ｉ
Ｆ等の生物製剤を用いた治療があるが、いずれも肝不全
を根本的に解決するものではない。外科的な肝不全対策
には、治療目的又は外傷に起因する切除、血漿交換、移
植又は人工肝若しくはハイブリッド型を用いた再建等が
あるが、内科的方法と同様に、絶対的に有効な対策は未
だ存在しない。肝移植には細胞・組織の単位で移植する
場合と、臓器をそのまま移植する場合の二通りが考えら
れるが、前者は臓器の生理的活性を失わせずに長期間保
存ができない難点がある。一方、後者は同種肝移植と異
種肝移植とに大別できるが、それぞれ種々の問題を有す
る。本来は同種肝移植が望ましいが、必要数に見合う臓
器提供者（ドナー）の確保が困難である。更に、同種肝
移植でも、臓器提供を受ける者（レシピエント）に対し
免疫学的適合のない肝臓には免疫抑制剤の効果が充分に
及ばないため、拒絶反応が起こりレシピエントの生存を
維持できない。臓器移植に対する代替臓器の免疫学的適
合は極めて重要な条件であるが、これを満足する肝臓を
好ましい状況下で移植できるケースは少ない。異種肝移
植としては、ブタ又はヒヒの肝臓を他の哺乳動物に移植
した事例が報告されているが、やはり免疫学的不適合に
よる拒絶反応が発生するため、その効果はレシピエント
の一時的な延命に留まるに過ぎなかった。
には内科的方法と外科的方法とがある。内科的な肝不全
対策の例として、安静、休養、食事療法、薬物治療、Ｉ
Ｆ等の生物製剤を用いた治療があるが、いずれも肝不全
を根本的に解決するものではない。外科的な肝不全対策
には、治療目的又は外傷に起因する切除、血漿交換、移
植又は人工肝若しくはハイブリッド型を用いた再建等が
あるが、内科的方法と同様に、絶対的に有効な対策は未
だ存在しない。肝移植には細胞・組織の単位で移植する
場合と、臓器をそのまま移植する場合の二通りが考えら
れるが、前者は臓器の生理的活性を失わせずに長期間保
存ができない難点がある。一方、後者は同種肝移植と異
種肝移植とに大別できるが、それぞれ種々の問題を有す
る。本来は同種肝移植が望ましいが、必要数に見合う臓
器提供者（ドナー）の確保が困難である。更に、同種肝
移植でも、臓器提供を受ける者（レシピエント）に対し
免疫学的適合のない肝臓には免疫抑制剤の効果が充分に
及ばないため、拒絶反応が起こりレシピエントの生存を
維持できない。臓器移植に対する代替臓器の免疫学的適
合は極めて重要な条件であるが、これを満足する肝臓を
好ましい状況下で移植できるケースは少ない。異種肝移
植としては、ブタ又はヒヒの肝臓を他の哺乳動物に移植
した事例が報告されているが、やはり免疫学的不適合に
よる拒絶反応が発生するため、その効果はレシピエント
の一時的な延命に留まるに過ぎなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】前記の通り、現在の肝
不全対策はいずれも満足な成果が得られるものではない
ため、一時的又は緊急避難的にせよ肝不全に適用がで
き、望ましくは半永久的ないし永久的に適用可能な肝不
全対策が切望される。そこで本発明は、あらゆる種類の
肝不全に対して肝機能を補助できると共に、長期間保存
可能な肝補助体及びその製造方法を提供することを目的
とする。
不全対策はいずれも満足な成果が得られるものではない
ため、一時的又は緊急避難的にせよ肝不全に適用がで
き、望ましくは半永久的ないし永久的に適用可能な肝不
全対策が切望される。そこで本発明は、あらゆる種類の
肝不全に対して肝機能を補助できると共に、長期間保存
可能な肝補助体及びその製造方法を提供することを目的
とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明による長期間保存
可能な肝補助体は、妊娠ブタより無菌的に取り出した胎
令７０日以上、好ましくは９０日以上の胎児から摘出し
た肝臓を細切して凍害防止溶液を浸透させることにより
肝臓の生理的活性を失わせずに−１９８℃以下で保存可
能とした肝臓組織切片を備え、選択性透過膜により形成
されたカプセル内に肝臓組織切片を充填して形成され
る。凍害防止溶液としては、５.０〜１０.０％のジメチ
ルスルホキシド又はグリセロール等及び４０.０〜６０.
０％のリン酸緩衝液を含有する保存液が使用可能であ
る。凍害防止溶液には、例えばギブコ社製Ｌ−１５等の
細胞培養液を加えてもよい。本発明の実施例では、肝臓
組織切片の形状は０.５〜５.０ｍｍ角、好ましくは１.
０〜３.０ｍｍ角の立方体である。また、本発明による
長期間保存可能な肝補助体の製造方法は、妊娠ブタより
胎令７０日以上の胎児を無菌的に取り出す工程と、胎児
から肝臓を摘出する工程と、摘出した胎児の肝臓を切片
に細切する工程と、肝臓組織切片に凍害防止溶液を浸透
させることにより肝臓の生理的活性を失わせずに−１９
８℃以下で保存可能とする工程と、選択性透過膜により
形成されたカプセル内に肝臓組織切片を充填する工程と
を含む。
可能な肝補助体は、妊娠ブタより無菌的に取り出した胎
令７０日以上、好ましくは９０日以上の胎児から摘出し
た肝臓を細切して凍害防止溶液を浸透させることにより
肝臓の生理的活性を失わせずに−１９８℃以下で保存可
能とした肝臓組織切片を備え、選択性透過膜により形成
されたカプセル内に肝臓組織切片を充填して形成され
る。凍害防止溶液としては、５.０〜１０.０％のジメチ
ルスルホキシド又はグリセロール等及び４０.０〜６０.
０％のリン酸緩衝液を含有する保存液が使用可能であ
る。凍害防止溶液には、例えばギブコ社製Ｌ−１５等の
細胞培養液を加えてもよい。本発明の実施例では、肝臓
組織切片の形状は０.５〜５.０ｍｍ角、好ましくは１.
０〜３.０ｍｍ角の立方体である。また、本発明による
長期間保存可能な肝補助体の製造方法は、妊娠ブタより
胎令７０日以上の胎児を無菌的に取り出す工程と、胎児
から肝臓を摘出する工程と、摘出した胎児の肝臓を切片
に細切する工程と、肝臓組織切片に凍害防止溶液を浸透
させることにより肝臓の生理的活性を失わせずに−１９
８℃以下で保存可能とする工程と、選択性透過膜により
形成されたカプセル内に肝臓組織切片を充填する工程と
を含む。
【０００５】異種動物間での免疫学的不適合は、異種糖
蛋白［ＭＨＣ（major histocompatibility complex：主
要組織適合遺伝子複合体）を含む］等により起こる。本
発明の肝補助体は、肝組織が未分化で免疫学的に未成熟
なブタ胎児の肝臓組織切片を用いるため、異種糖蛋白認
識に起因する免疫学的不適合のおそれが少なく、レシピ
エントに導入後に最小限の拒絶反応しか起こらない。従
って、従来技術では十分に達成できなかった生命維持効
果が得られ、異種動物からの肝機能の提供が可能とな
る。細胞レベルではなく組織レベルでは、冷蔵保存又は
通常方法による冷凍保存では生理活性を維持できない。
即ち、冷凍保存する場合、必要時に解凍して使用できる
ことが求められるが、単に冷凍・解凍するのでは生理活
性が失われる。本発明はブタ胎児の肝臓組織を所定の大
きさの切片として用いるため、凍害防止溶液が十分に浸
透可能で且つ組織の全ての部位を均一に凍結させること
ができる。従って、細胞レベルでなく組織レベルでの生
理活性を維持した長期保存が可能となる。本発明で用い
る凍害防止溶液は、胎児ブタ肝臓組織に浸透することに
より組織細胞と外界との間での水の移動を円滑にする。
従って、肝臓組織切片を冷凍する際に、組織細胞中に滞
留する水分が凝固して膨張することによる細胞破壊のお
それがないため、組織細胞の活性を保持しつつ冷凍保存
が可能となる。カプセルを形成する選択性透過膜は、所
定の大きさのポアサイズを有しており、本発明の肝補助
体をある動物（ホスト）の体内に導入したときに、比較
的分子量が大きい異種反応分子（ホストの抗体）を遮断
すると共に、本来ホストの肝臓が必要な分子（代謝すべ
き物質）を通過させる。これにより、ホストの抗体が肝
臓組織切片に到達するのを防ぐと共に、代謝すべき物質
を肝臓組織切片からホストへ供給することができ、臓器
活性の維持が可能となる。
蛋白［ＭＨＣ（major histocompatibility complex：主
要組織適合遺伝子複合体）を含む］等により起こる。本
発明の肝補助体は、肝組織が未分化で免疫学的に未成熟
なブタ胎児の肝臓組織切片を用いるため、異種糖蛋白認
識に起因する免疫学的不適合のおそれが少なく、レシピ
エントに導入後に最小限の拒絶反応しか起こらない。従
って、従来技術では十分に達成できなかった生命維持効
果が得られ、異種動物からの肝機能の提供が可能とな
る。細胞レベルではなく組織レベルでは、冷蔵保存又は
通常方法による冷凍保存では生理活性を維持できない。
即ち、冷凍保存する場合、必要時に解凍して使用できる
ことが求められるが、単に冷凍・解凍するのでは生理活
性が失われる。本発明はブタ胎児の肝臓組織を所定の大
きさの切片として用いるため、凍害防止溶液が十分に浸
透可能で且つ組織の全ての部位を均一に凍結させること
ができる。従って、細胞レベルでなく組織レベルでの生
理活性を維持した長期保存が可能となる。本発明で用い
る凍害防止溶液は、胎児ブタ肝臓組織に浸透することに
より組織細胞と外界との間での水の移動を円滑にする。
従って、肝臓組織切片を冷凍する際に、組織細胞中に滞
留する水分が凝固して膨張することによる細胞破壊のお
それがないため、組織細胞の活性を保持しつつ冷凍保存
が可能となる。カプセルを形成する選択性透過膜は、所
定の大きさのポアサイズを有しており、本発明の肝補助
体をある動物（ホスト）の体内に導入したときに、比較
的分子量が大きい異種反応分子（ホストの抗体）を遮断
すると共に、本来ホストの肝臓が必要な分子（代謝すべ
き物質）を通過させる。これにより、ホストの抗体が肝
臓組織切片に到達するのを防ぐと共に、代謝すべき物質
を肝臓組織切片からホストへ供給することができ、臓器
活性の維持が可能となる。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明によるブタ胎児の肝
臓組織切片を用いた長期間保存可能な肝補助体及びその
製造方法の実施例を図１〜図３について説明する。本発
明の実施例では、ＳＰＦ（specific pathogen-free：特
定の病原体がない）ブタを使用する。ブタの種類として
は、ランドレース（Landrace）、バークシャ（Berkshir
e）を用いているが、その他の種類も本発明に適用可能
である。最初に、妊娠ブタより胎令７０以上の胎児を無
菌的に帝王切開で取り出し、更に胎児から肝臓を摘出す
る。通常、１頭の妊娠ブタから８〜１２頭のブタ胎児が
得られる。ブタ胎児がビールス、細菌、スピロヘータ、
寄生虫その他の病原菌に感染しているか否かは、遺伝子
検査又は抗体を用いた血清学的検査により確認できる。
胎令を７０日以上としたのは組織が幼若的だからであ
り、７０日未満の場合は肝臓の発育が不十分でサイズが
小さく、肝機能が有効に発揮されない不具合がある。
臓組織切片を用いた長期間保存可能な肝補助体及びその
製造方法の実施例を図１〜図３について説明する。本発
明の実施例では、ＳＰＦ（specific pathogen-free：特
定の病原体がない）ブタを使用する。ブタの種類として
は、ランドレース（Landrace）、バークシャ（Berkshir
e）を用いているが、その他の種類も本発明に適用可能
である。最初に、妊娠ブタより胎令７０以上の胎児を無
菌的に帝王切開で取り出し、更に胎児から肝臓を摘出す
る。通常、１頭の妊娠ブタから８〜１２頭のブタ胎児が
得られる。ブタ胎児がビールス、細菌、スピロヘータ、
寄生虫その他の病原菌に感染しているか否かは、遺伝子
検査又は抗体を用いた血清学的検査により確認できる。
胎令を７０日以上としたのは組織が幼若的だからであ
り、７０日未満の場合は肝臓の発育が不十分でサイズが
小さく、肝機能が有効に発揮されない不具合がある。
【０００７】摘出したブタ胎児の肝臓を速やかに４℃の
抗生物質含有リン酸緩衝液で洗浄し、レーザナイフで１
〜３ｍｍ角の立方体切片に裁断する。次に、切片に含ま
れる血液細胞を除去するため、４℃の０.５４ｍＭ ＥＤ
ＴＡ（ethylenediaminetetraacetic acid：エチレンジ
アミン四酢酸）添加リン酸緩衝液で洗浄し、更に２０％
リン酸緩衝液で洗浄する。平均的なブタ胎児の肝臓の大
きさは、直径約４０〜５０ｍｍ、厚さ約２０ｍｍ程度で
あるから、切片形状を３ｍｍ角の立方体とした場合、ブ
タ胎児１頭から８００〜１３００個の切片が得られるこ
ととなる。
抗生物質含有リン酸緩衝液で洗浄し、レーザナイフで１
〜３ｍｍ角の立方体切片に裁断する。次に、切片に含ま
れる血液細胞を除去するため、４℃の０.５４ｍＭ ＥＤ
ＴＡ（ethylenediaminetetraacetic acid：エチレンジ
アミン四酢酸）添加リン酸緩衝液で洗浄し、更に２０％
リン酸緩衝液で洗浄する。平均的なブタ胎児の肝臓の大
きさは、直径約４０〜５０ｍｍ、厚さ約２０ｍｍ程度で
あるから、切片形状を３ｍｍ角の立方体とした場合、ブ
タ胎児１頭から８００〜１３００個の切片が得られるこ
ととなる。
【０００８】その後、凍害防止のため、４℃の７.５％
ＤＭＳＯ（dimethyl sulfoxide：ジメチルスルホキシ
ド）及び５０％リン酸緩衝液を含有する保存液（以下Ｄ
ＭＳＯ溶液という）中に浸漬する。ＤＭＳＯ溶液にＬ−
１５培養液を加えてもよい。必要に応じ、注射針（サイ
ズ：２７×１／２″Ｇ）を用いた注射筒でＤＭＳＯ溶液
を約５μｌずつ２〜３回、切片に注入する方法がある。
ＤＭＳＯ溶液の注入の前に切片をＥＤＴＡ添加リン酸緩
衝液で洗浄することにより、肝臓組織中の細胞間の結合
が緩められ、ＤＭＳＯ溶液の浸透を促すことができる。
次に、ＤＭＳＯ溶液を注入した切片を１０〜１５個ずつ
凍結チューブに移し、１ｍｌ ＤＭＳＯ溶液を加える。
以上のすべての操作は、温度を４℃に保持して行なう。
この後、プログラムフリーザにより毎分１℃の割合で段
階的に−８０℃に冷却し、−１９８℃の液体窒素中で保
存した。尚、組織切片にＤＭＳＯ溶液を注入する方法と
しては、直接ＤＭＳＯ溶液に浸漬する方法がある。浸漬
法では、組織切片の内部まで十分にＤＭＳＯ溶液が浸透
しないおそれがあるが、前記の注射法によれば直接内部
に注射針が到達しＤＭＳＯ溶液を注入できるため、特に
切片のサイズが大きい場合に有利である。しかしなが
ら、切片のサイズが比較的小さければ、より簡便な浸漬
法によっても十分にＤＭＳＯ溶液を浸透させることが可
能である。
ＤＭＳＯ（dimethyl sulfoxide：ジメチルスルホキシ
ド）及び５０％リン酸緩衝液を含有する保存液（以下Ｄ
ＭＳＯ溶液という）中に浸漬する。ＤＭＳＯ溶液にＬ−
１５培養液を加えてもよい。必要に応じ、注射針（サイ
ズ：２７×１／２″Ｇ）を用いた注射筒でＤＭＳＯ溶液
を約５μｌずつ２〜３回、切片に注入する方法がある。
ＤＭＳＯ溶液の注入の前に切片をＥＤＴＡ添加リン酸緩
衝液で洗浄することにより、肝臓組織中の細胞間の結合
が緩められ、ＤＭＳＯ溶液の浸透を促すことができる。
次に、ＤＭＳＯ溶液を注入した切片を１０〜１５個ずつ
凍結チューブに移し、１ｍｌ ＤＭＳＯ溶液を加える。
以上のすべての操作は、温度を４℃に保持して行なう。
この後、プログラムフリーザにより毎分１℃の割合で段
階的に−８０℃に冷却し、−１９８℃の液体窒素中で保
存した。尚、組織切片にＤＭＳＯ溶液を注入する方法と
しては、直接ＤＭＳＯ溶液に浸漬する方法がある。浸漬
法では、組織切片の内部まで十分にＤＭＳＯ溶液が浸透
しないおそれがあるが、前記の注射法によれば直接内部
に注射針が到達しＤＭＳＯ溶液を注入できるため、特に
切片のサイズが大きい場合に有利である。しかしなが
ら、切片のサイズが比較的小さければ、より簡便な浸漬
法によっても十分にＤＭＳＯ溶液を浸透させることが可
能である。
【０００９】前記の手順で作製した肝臓組織切片は液体
窒素で凍結保存できる。使用する際は、液体窒素から取
り出した凍結肝臓組織切片を３７℃で急速解凍する。組
織切片の生理的活性は、インビトロ（in vitro）では組
織切片を一般染色又は特殊染色し顕微鏡で観察すること
により、インビボ（in vivo）では実際にラットの大網
に組織切片を挿入してその作用を観察することにより、
それぞれ確認できる。本発明によれば、解凍後の組織切
片の生理的活性はほぼ１００％である。３７℃で急速解
凍した肝臓組織切片を２０％リン酸緩衝液含有Ｌ−１５
培養液で２回洗浄する。一方、所定の選択性透過膜を約
３０ｍｍ幅の短冊状に切り、図２に示すように、短手方
向に二つ折りにして端部同士をインパルスシーラで熱溶
着し、筒状に形成しておく。図３に示すように、洗浄し
た切片２を筒状の透過膜１に充填し、長手方向約２０ｍ
ｍ毎にインパルスシーラで膜を熱溶着し、この溶着部を
切断する。結果として、図１に示すような、約１０ｍｍ
×約２０ｍｍ×約３ｍｍの直方体形状を有する透過膜１
に肝臓組織切片２を約１０個ずつ充填した肝補助体３が
得られる。尚、肝臓組織切片２は、１頭のブタ胎児から
得られたものだけでなく、複数のブタ胎児からのものを
混ぜて用いてもよい。また、図１に示すように肝臓組織
切片が透過膜内で規則的に並ぶ必要はなく、ある程度乱
雑に充填されてもよい。選択性透過膜としては、比較的
分子量が大きいホストの抗体を遮断すると共に、本来ホ
ストの肝臓が代謝すべき物質を通過させる性質が求めら
れる。例として、ポアサイズ０.０７５×０.２５μｍ、
厚さ２５μｍ、アルブミンふるい効率０.３である泉工
医科社製の微小多孔質ポリプロピレン薄膜のシートが使
用可能である。その他ヘキスト社製の膜も使用可能であ
る。本発明において、透過膜からなるカプセルは前記の
ような短冊状のシートを熱溶着して形成するものに限定
されず、例えば風呂敷状、茶巾状に包むものその他の形
態のものも可能である。
窒素で凍結保存できる。使用する際は、液体窒素から取
り出した凍結肝臓組織切片を３７℃で急速解凍する。組
織切片の生理的活性は、インビトロ（in vitro）では組
織切片を一般染色又は特殊染色し顕微鏡で観察すること
により、インビボ（in vivo）では実際にラットの大網
に組織切片を挿入してその作用を観察することにより、
それぞれ確認できる。本発明によれば、解凍後の組織切
片の生理的活性はほぼ１００％である。３７℃で急速解
凍した肝臓組織切片を２０％リン酸緩衝液含有Ｌ−１５
培養液で２回洗浄する。一方、所定の選択性透過膜を約
３０ｍｍ幅の短冊状に切り、図２に示すように、短手方
向に二つ折りにして端部同士をインパルスシーラで熱溶
着し、筒状に形成しておく。図３に示すように、洗浄し
た切片２を筒状の透過膜１に充填し、長手方向約２０ｍ
ｍ毎にインパルスシーラで膜を熱溶着し、この溶着部を
切断する。結果として、図１に示すような、約１０ｍｍ
×約２０ｍｍ×約３ｍｍの直方体形状を有する透過膜１
に肝臓組織切片２を約１０個ずつ充填した肝補助体３が
得られる。尚、肝臓組織切片２は、１頭のブタ胎児から
得られたものだけでなく、複数のブタ胎児からのものを
混ぜて用いてもよい。また、図１に示すように肝臓組織
切片が透過膜内で規則的に並ぶ必要はなく、ある程度乱
雑に充填されてもよい。選択性透過膜としては、比較的
分子量が大きいホストの抗体を遮断すると共に、本来ホ
ストの肝臓が代謝すべき物質を通過させる性質が求めら
れる。例として、ポアサイズ０.０７５×０.２５μｍ、
厚さ２５μｍ、アルブミンふるい効率０.３である泉工
医科社製の微小多孔質ポリプロピレン薄膜のシートが使
用可能である。その他ヘキスト社製の膜も使用可能であ
る。本発明において、透過膜からなるカプセルは前記の
ような短冊状のシートを熱溶着して形成するものに限定
されず、例えば風呂敷状、茶巾状に包むものその他の形
態のものも可能である。
【００１０】本発明の肝機能補助作用を確認するため、
前記の肝補助体１０個を肝臓を９０％切除したラットの
大網内に挿入した。これにより、ラットは肝機能が補助
され、１カ月間以上生存できる。一般に、ラットにおい
て、肝臓の７０％を切除した場合、肝機能は一旦低下す
るが、やがてラットの自然治癒力により肝臓が１００％
に復元する。しかしながら、肝臓の９０％を切除したラ
ットはそのままだと４〜７日で死亡する。また、ｄ−グ
ルコサミン等の肝臓毒を付与した場合も４〜７日で死亡
し、ラット間の同種肝移植では約１０日で死亡する。こ
れに対し、本発明による肝補助体の肝機能補助作用によ
り、正常に機能しなくなった肝臓の部位を大幅に切除し
たラットの延命を図ることができる。尚、ラットに挿入
した肝補助体が大網の組織に与える影響を観察したが、
影響はほとんど見られなかった。本発明の肝補助体は、
ラットに限らず、ヒトその他の哺乳動物に導入すること
ができる。ラットの体重を２５０ｇ、ヒトの体重を６０
ｋｇとすると、ヒトはラットの２４０倍の体重を有す
る。従って、前記の肝補助体をヒトに適用する場合に
は、ラットで３ｍｍ角立方体の肝臓組織切片を１０個充
填した肝補助体を１０個挿入するのに対し、ヒトの場合
には約２００個の肝補助体が必要になると推定される。
また、ヒトの大網に挿入できる範囲で肝補助体を大きく
しかつ肝補助体１個当たりの切片の充填数を増やし、大
網に挿入する肝補助体の総数を少なくすることも可能で
ある。尚、本発明の肝補助体を使用するに当たり、哺乳
動物の腹膜、腹腔ではなく大網に導入することにより、
代謝を容易にすることが可能となる。尚、ヒトに導入す
る場合は、肝補助体全体の大きさを６０ｍｍ×１００ｍ
ｍ程度として大網に収まるようにする必要がある。
前記の肝補助体１０個を肝臓を９０％切除したラットの
大網内に挿入した。これにより、ラットは肝機能が補助
され、１カ月間以上生存できる。一般に、ラットにおい
て、肝臓の７０％を切除した場合、肝機能は一旦低下す
るが、やがてラットの自然治癒力により肝臓が１００％
に復元する。しかしながら、肝臓の９０％を切除したラ
ットはそのままだと４〜７日で死亡する。また、ｄ−グ
ルコサミン等の肝臓毒を付与した場合も４〜７日で死亡
し、ラット間の同種肝移植では約１０日で死亡する。こ
れに対し、本発明による肝補助体の肝機能補助作用によ
り、正常に機能しなくなった肝臓の部位を大幅に切除し
たラットの延命を図ることができる。尚、ラットに挿入
した肝補助体が大網の組織に与える影響を観察したが、
影響はほとんど見られなかった。本発明の肝補助体は、
ラットに限らず、ヒトその他の哺乳動物に導入すること
ができる。ラットの体重を２５０ｇ、ヒトの体重を６０
ｋｇとすると、ヒトはラットの２４０倍の体重を有す
る。従って、前記の肝補助体をヒトに適用する場合に
は、ラットで３ｍｍ角立方体の肝臓組織切片を１０個充
填した肝補助体を１０個挿入するのに対し、ヒトの場合
には約２００個の肝補助体が必要になると推定される。
また、ヒトの大網に挿入できる範囲で肝補助体を大きく
しかつ肝補助体１個当たりの切片の充填数を増やし、大
網に挿入する肝補助体の総数を少なくすることも可能で
ある。尚、本発明の肝補助体を使用するに当たり、哺乳
動物の腹膜、腹腔ではなく大網に導入することにより、
代謝を容易にすることが可能となる。尚、ヒトに導入す
る場合は、肝補助体全体の大きさを６０ｍｍ×１００ｍ
ｍ程度として大網に収まるようにする必要がある。
【００１１】肝切除等に伴い肝臓をそのまま移植する場
合、免疫学的不適合が発生することにより拒絶反応が起
こるおそれがある。これに対し、本発明による肝補助体
は、血液型が確定していないブタ胎児の肝臓組織を適当
な大きさの切片にして用いるために免疫学的不適合が起
こらず、拒絶反応の危険性がきわめて少ない。また、カ
プセル等の透過膜に肝臓組織切片を充填した状態で使用
できるので、肝切除をしなければならないにも拘らず代
替肝臓が得られない場合等に有効である。ブタ胎児の肝
臓組織切片の大きさは、０.５〜５.０ｍｍ、好ましくは
１.０〜３.０ｍｍの範囲に設定する。この範囲よりも肝
臓組織を小さくすると、組織の生理活性が失われるおそ
れがあるため、利用に供することができない。一方、前
記の範囲よりも切片が大きいと、切片内部までＤＭＳＯ
溶液が浸透せず、肝臓組織を長期間保存することが困難
となる。尚、前記の実施例では、ブタ胎児の肝臓組織を
立方体形状の切片にして用いているが、細長の直方体、
偏平形状、球状その他の形状に裁断してもよい。
合、免疫学的不適合が発生することにより拒絶反応が起
こるおそれがある。これに対し、本発明による肝補助体
は、血液型が確定していないブタ胎児の肝臓組織を適当
な大きさの切片にして用いるために免疫学的不適合が起
こらず、拒絶反応の危険性がきわめて少ない。また、カ
プセル等の透過膜に肝臓組織切片を充填した状態で使用
できるので、肝切除をしなければならないにも拘らず代
替肝臓が得られない場合等に有効である。ブタ胎児の肝
臓組織切片の大きさは、０.５〜５.０ｍｍ、好ましくは
１.０〜３.０ｍｍの範囲に設定する。この範囲よりも肝
臓組織を小さくすると、組織の生理活性が失われるおそ
れがあるため、利用に供することができない。一方、前
記の範囲よりも切片が大きいと、切片内部までＤＭＳＯ
溶液が浸透せず、肝臓組織を長期間保存することが困難
となる。尚、前記の実施例では、ブタ胎児の肝臓組織を
立方体形状の切片にして用いているが、細長の直方体、
偏平形状、球状その他の形状に裁断してもよい。
【００１２】
【発明の効果】本発明の肝補助体により、あらゆる種類
の肝不全に対して肝機能が補助できる。また、本発明の
肝補助体は臓器の生理活性を維持しつつ長期保存が可能
である。
の肝不全に対して肝機能が補助できる。また、本発明の
肝補助体は臓器の生理活性を維持しつつ長期保存が可能
である。
【図１】 本発明による肝補助体の斜視図
【図２】 選択性透過膜の加工手順を示す正面図
【図３】 選択性透過膜の加工手順を示す側面図
１．．選択性透過膜、 ２．．肝臓組織切片、 ３．．
肝補助体
肝補助体
Claims (7)
- 【請求項１】 妊娠ブタより無菌的に取り出した胎令７
０日以上の胎児から摘出した肝臓を細切して凍害防止溶
液を浸透させることにより肝臓の生理的活性を失わせず
に−１９８℃以下で保存可能とした肝臓組織切片を備
え、 選択性透過膜により形成されたカプセル内に肝臓組織切
片を充填したことを特徴とする長期間保存可能な肝補助
体。 - 【請求項２】 胎児の胎令は９０日以上である請求項１
に記載の長期間保存可能な肝補助体。 - 【請求項３】 凍害防止溶液は５.０〜１０.０％のジメ
チルスルホキシド又はグリセロール及び４０.０〜６０.
０％のリン酸緩衝液を含有する保存液である請求項１に
記載の長期間保存可能な肝補助体。 - 【請求項４】 凍害防止溶液は細胞培養液を含有する請
求項３に記載の長期間保存可能な肝補助体。 - 【請求項５】 肝臓組織切片の形状は０.５〜５.０ｍｍ
角の立方体である請求項１に記載の長期間保存可能な肝
補助体。 - 【請求項６】 肝臓組織切片の形状は１.０〜３.０ｍｍ
角の立方体である請求項５に記載の長期間保存可能な肝
補助体。 - 【請求項７】 妊娠ブタより胎令７０日以上の胎児を無
菌的に取り出す工程と、 胎児から肝臓を摘出する工程と、 摘出した胎児の肝臓を切片に細切する工程と、 肝臓組織切片に凍害防止溶液を浸透させることにより肝
臓の生理的活性を失わせずに−１９８℃以下で保存可能
とする工程と、 選択性透過膜により形成されたカプセル内に肝臓組織切
片を充填する工程とを含むことを特徴とする長期間保存
可能な肝補助体の製造方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18265895A JPH0928722A (ja) | 1995-07-19 | 1995-07-19 | 長期保存可能な肝補助体及びその製造方法 |
| EP96110682A EP0754462A3 (en) | 1995-07-19 | 1996-07-02 | Auxiliary liver with long term storability and production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18265895A JPH0928722A (ja) | 1995-07-19 | 1995-07-19 | 長期保存可能な肝補助体及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0928722A true JPH0928722A (ja) | 1997-02-04 |
Family
ID=16122176
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18265895A Pending JPH0928722A (ja) | 1995-07-19 | 1995-07-19 | 長期保存可能な肝補助体及びその製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0754462A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0928722A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2153344C1 (ru) * | 1999-09-13 | 2000-07-27 | Тимербулатов Виль Мамилович | Способ трансплантации эмбриональных печеночных клеток в эксперименте |
| RU2204399C1 (ru) * | 2001-12-29 | 2003-05-20 | Челябинский государственный институт лазерной хирургии | Способ патогенетического лечения хронических заболеваний печени в эксперименте |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU938949A1 (ru) * | 1978-06-13 | 1982-06-30 | Онкологический Научный Центр Амн Ссср | Способ получени печени дл трансплантации |
| US4352883A (en) * | 1979-03-28 | 1982-10-05 | Damon Corporation | Encapsulation of biological material |
| US4391909A (en) * | 1979-03-28 | 1983-07-05 | Damon Corporation | Microcapsules containing viable tissue cells |
| AU584312B2 (en) * | 1984-01-17 | 1989-05-25 | Hoxan Corporation | Method of fabricating frozen fine liver pieces for artificial liver, apparatus for freezing the same, and freezing vessel |
| AU659795B2 (en) * | 1990-01-17 | 1995-06-01 | Regents Of The University Of California, The | Composition to improve survival of biological materials |
| US5160312A (en) * | 1990-02-09 | 1992-11-03 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Cryopreservation process for direct transfer of embryos |
-
1995
- 1995-07-19 JP JP18265895A patent/JPH0928722A/ja active Pending
-
1996
- 1996-07-02 EP EP96110682A patent/EP0754462A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0754462A2 (en) | 1997-01-22 |
| EP0754462A3 (en) | 1998-08-12 |
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