JPH093089A - 新規ポリフェノール配糖体、その製造法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 一般式１（式中Ｒ₁ 、Ｒ₂ はそれぞれ独立に
水酸基あるいは重合度２から１０のマルトオリゴ糖残
基、Ｘは水酸基あるいは水素、Ｙは水酸基あるいはガロ
イル基、ｎは１から９の整数を示す。）で表されるポリ
フェノール配糖体。 並びにエピガロカテキン、ガロカテキン、エピガロカテ
キン３−Ｏ−ガレ−ト、ガロカテキン３−Ｏ−ガレ−
ト、エピカテキン、エピカテキン３−Ｏ−ガレ−ト、カ
テキン３−Ｏ−ガレ−トあるいはこれらを２種類以上含
むポリフェノール類混合物とデキストリン、サイクロデ
キストリン、澱粉もしくはこれらの混合物にサイクロマ
ルトデキストリングルカノトランスフェラーゼを作用さ
せるポリフェノール配糖体の製造方法と該ポリフェノー
ル配糖体を含む組成物。 【効果】 上記ポリフェノール配糖体は、従来のポリフ
ェノール類の持つ強い渋味や収斂性を効果的に改善し、
呈味性に優れているだけでなく、生体内でポリフェノー
ル類を遊離することが期待できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、茶ポリフェノール類の
配糖体、その製造法およびその用途に関し、さらに詳細
には、呈味性を改良した新規構造のポリフェノール配糖
体、その製造法およびその用途に関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】茶ポ
リフェノール類は、コレステロール上昇抑制作用（特公
平２−４４４４９号公報）、抗菌作用（特開平２−２７
６５６２号公報）、抗酸化作用（特公平１−４４２３４
号公報）、抗腫瘍作用（特開昭６０−１９０７１９号公
報）、血圧上昇抑制作用および酵素活性阻害作用（特開
平３−１３３９２８号公報）などの生理活性作用を示
し、その有効成分はエピガロカテキン、エピカテキン３
−Ｏ−ガレートおよびエピガロカテキン３−Ｏ−ガレー
トであることが知られている。しかしながら、これらの
物質は強い収斂性を持つ渋味成分であることから、呈味
性が著しく損なわれ、食品をはじめ各種分野への利用を
考える上で大きな欠点となっている。

【０００３】現在、茶ポリフェノールと類似の構造を持
つ（＋）−カテキンについては、（＋）−カテキンとグ
ルコース−１−リン酸あるいはシュークロースとの混合
液にシュークロースホスホリラーゼを作用させることに
より、易溶性や色沢安定性を付与した（＋）−カテキン
配糖体を製造する方法（特開平５−１７６７８６号公
報）や（＋）−カテキン配糖体をメラニン色素の生成に
関与するチロシナーゼの阻害剤として皮膚外用剤に利用
する方法（特開平４−２７３８９０号公報）が開発され
ている。しかし、コレステロール上昇抑制作用、抗菌作
用、抗酸化作用、抗腫瘍作用や血圧上昇抑制作用などの
生理活性作用においては、（＋）−カテキンはエピガロ
カテキン、エピガロカテキン３−Ｏ−ガレートおよびエ
ピカテキン３−Ｏ−ガレートに比べ、その生理活性が著
しく弱く、また場合によっては活性を持たない。従っ
て、配糖体についても（＋）−カテキン配糖体よりもエ
ピガロカテキン、エピガロカテキン３−Ｏ−ガレートお
よびエピカテキン３−Ｏ−ガレートの配糖体の方がより
生理活性を期待することができる。

【０００４】一方、茶ポリフェノールである（−）−エ
ピカテキン、（−）−エピカテキン３−Ｏ−ガレート、
（−）−エピガロカテキンや（−）−エピガロカテキン
３−Ｏ−ガレートの配糖体については、これまでに本発
明に示すような構造が明らかにされたとの報告がない。
従って、本発明の新規ポリフェノール配糖体の特性や機
能性についても明らかになっていない。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の茶
ポリフェノール類とデキストリン、サイクロデキストリ
ン、澱粉もしくはこれらの混合物に、バチルス・ステア
ロサーモフィラス由来のサイクロマルトデキストリング
ルカノトランスフェラーゼを作用させることによって、
ポリフェノール類を配糖化できることを見いだした。さ
らに、得られたポリフェノール配糖体を単離して茶ポリ
フェノール類の３’位、３’と５位および３’と７位が
配糖化された新規化合物の構造を明らかにした。また、
本発明の新規ポリフェノール配糖体は、収斂性のある渋
味がほとんどなく呈味性に優れていることを確認し、本
発明を完成した。

【０００６】すなわち本発明は、一般式１（式中Ｒ₁ 、
Ｒ₂ はそれぞれ独立に水酸基あるいは重合度２から１０
のマルトオリゴ糖残基、Ｘは水酸基あるいは水素、Ｙは
水酸基あるいはガロイル基を、またｎは１から９の整数
を示す。）で表されるポリフェノール配糖体を提供し、
さらにエピガロカテキン、ガロカテキン、エピガロカテ
キン３−Ｏ−ガレ−ト、ガロカテキン３−Ｏ−ガレ−
ト、エピカテキン、エピカテキン３−Ｏ−ガレ−ト、カ
テキン３−Ｏ−ガレ−トあるいはこれらを２種類以上含
むポリフェノール類混合物とデキストリン、サイクロデ
キストリン、澱粉もしくはこれらの混合物にサイクロマ
ルトデキストリングルカノトランスフェラーゼを作用さ
せることを特徴とする上記のポリフェノール配糖体の製
造方法並びに上記のポリフェノール配糖体を含む組成物
を提供するものである。

【０００７】

【化５】

【０００８】以下に、本発明を詳しく説明する。本発明
に用いるポリフェノールの基本骨格は下記の一般式５で
表される。

【０００９】

【化６】

【００１０】この構造式において、ベンゾピラン環の２
位と３位はそれぞれＲ配置またはＳ配置のいずれであっ
てもよい。例えば、配糖体のアグリコン部分として
（＋）あるいは（−）−ガロカテキン、（＋）あるいは
（−）−エピガロカテキン、（＋）あるいは（−）カテ
キン３−Ｏ−ガレート、（＋）あるいは（−）−エピカ
テキン３−Ｏ−ガレート、（＋）あるいは（−）−ガロ
カテキン３−Ｏ−ガレート、（＋）あるいは（−）−エ
ピガロカテキン３−Ｏ−ガレートが挙げられる。

【００１１】前記の一般式１で表されるポリフェノール
配糖体の製造方法に関しては、特に限定するものではな
く、化学合成法，植物組織培養細胞法や微生物菌体を用
いる方法などが考えられる。これらポリフェノール類の
安定性や呈味性を改善するためには、当該ポリフェノー
ル類の１種あるいは２種以上の混合物に、デキストリ
ン、サイクロデキストリン、澱粉もしくはこれらの混合
物を添加し、これにサイクロマルトデキストリングルカ
ノトランスフェラーゼを作用させる方法を用いることが
できる。 サイクロマルトデキストリングルカノトラン
スフェラーゼとしては、バチルス属由来のものが用いら
れ、特にバチルス・ステアロサーモフィラス（Bacillus
stearothermophilus)由来の酵素がポリフェノール類へ
の配糖化能が高く、有利に利用できる。

【００１２】酵素反応の条件としては、反応のｐＨを３
〜９、好ましくはｐＨ５〜８、反応温度を２０〜８０
℃、好ましくは３０〜７０℃、基質濃度としてポリフェ
ノール類を０．１〜２０％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．
５〜１０％（ｗ／ｖ）、デキストリン、サイクロデキス
トリン、澱粉もしくはこれらの混合物を１〜４０％（ｗ
／ｖ）、好ましくは２〜３０％（ｗ／ｖ）含む反応液を
用いる。また、酵素量や反応時間は、上記の反応条件に
合わせ最適に設定することができる。

【００１３】このようにして一般式１で表されるポリフ
ェノール配糖体が得られる。ポリフェノール配糖体とし
ては、ポリフェノールとして、例えばガロカテキンを用
いた場合は、一般式２で表されるポリフェノール配糖体
が得られ、ガロカテキン３−Ｏ−ガレートを用いた場合
は、一般式３で表されるポリフェノール配糖体が得ら
れ、カテキン３−Ｏ−ガレートを用いた場合は、一般式
４で表されるポリフェノール配糖体が得られる。

【００１４】

【化７】

【００１５】

【化８】

【００１６】

【化９】

【００１７】このようにして得られたポリフェノール配
糖体を含有する反応溶液は、そのまま各種用途に使用す
ることができるが、反応溶液を必要に応じてシロップや
粉末とした後に使用することもできる。また、以下に述
べるように精製したものを使用することもできる。

【００１８】高純度のポリフェノール配糖体を採取する
場合には、多孔性合成吸着剤、例えば三菱化学株式会社
製の商品名、ダイアイオンＨＰ−１０，ダイアイオンＨ
Ｐ−２０，ダイアイオンＨＰ−４０等や、Rohm & Haas
社製の商品名、アンバーライトＸＡＤ−１，アンバーラ
イトＸＡＤ−４，アンバーライトＸＡＤ−７，アンバー
ライトＸＡＤ−８等を用いて、ポリフェノール配糖体と
夾雑物との吸着性の違いを利用して精製することができ
る。

【００１９】例えば、ポリフェノール配糖体、ポリフェ
ノール類および遊離の糖類を分離する場合は、反応溶液
を多孔性合成吸着剤を充填したカラムに通液すれば、遊
離の糖類はカラムに吸着されずに溶出するが、ポリフェ
ノール化合物は吸着される。次いで、吸着されたポリフ
ェノール配糖体などのポリフェノール化合物を低級アル
コール溶液、例えば５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液
などで溶出し、この溶出液を濃縮してシロップ化、さら
には乾燥、粉末化して採取することができる。さらに、
ポリフェノール配糖体と未反応のポリフェノール類とを
分離する必要がある場合には、分液などによりこれらの
化合物の極性の差を利用して、酢酸エチルなどの有機溶
媒相に未反応のポリフェノール類を移行させて除去する
こともできる。また、ポリフェノール配糖体をクロマト
グラフィーなどの方法によって、特定の画分を採取して
利用することもできる。

【００２０】以上に述べたようにして採取される本発明
のポリフェノール配糖体は、従来のポリフェノール類と
は異なり、苦味，渋味，えぐみや収斂性などの嫌味がほ
とんどなく、その精製の程度や純度を問わず、そのまま
で、あるいは他の素材と共に含有させて食品、医薬部外
品、化粧品、医薬品などの広い分野に用いることができ
る。

【００２１】また、本発明のポリフェノール配糖体は、
α−グルコシダーゼやグルコアミラーゼによって分解さ
れて元のポリフェノールを遊離することが確認されてい
る。従って、本発明のポリフェノール配糖体を人体に投
与した場合、体内のα−アミラーゼやα−グルコシダー
ゼなどの作用により、容易にポリフェノール類が遊離
し、ポリフェノール類本来の生理活性機能、例えばコレ
ステロール上昇抑制作用、抗菌作用、抗酸化作用、抗腫
瘍作用や血圧上昇抑制作用などを示すようになる。それ
故、本発明のポリフェノール配糖体は、ポリフェノール
類本来の生理活性機能を低減させることなく、食品、医
薬部外品、化粧品、医薬品などの広い分野に用いること
ができる。特に、健康増進食品、健康維持食品、健康回
復食品などに有利に利用できる。

【００２２】本発明のポリフェノール配糖体の利用分野
を列挙すれば、調味料、和菓子、洋菓子、氷菓子、シロ
ップ類、果実加工品、野菜加工品、漬物類、畜肉製品、
魚肉製品、珍味類、缶詰・ビン詰類、酒類、清涼飲料、
即席飲食品などの食品類、タバコ、練歯磨、口紅、リッ
プクリーム、内服薬、トローチ、肝油ドロップ、口中清
涼剤、口中香錠、うがい薬など各種固形状、ペースト
状、液状の嗜好品、化粧品、医薬品などやこれらの原料
である。

【００２３】

【実施例】次に、本発明を実施例により詳しく説明する
が、かかる説明によって本発明は何ら制限されるもので
はない。 実施例１ デキストリン（商品名：パインデックス＃１、松谷化学
株式会社製）１００ｇと（−）−エピガロカテキン（三
井農林株式会社製）５ｇを１０ｍＭ塩化カルシウムを含
む０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）５００ｍｌに溶解
後、バチルス・ステアロサーモフィラス由来のサイクロ
マルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式
会社林原生物化学研究所製）をデキストリン固形分１グ
ラム当たり１０００単位加え、５０℃で２４時間反応さ
せた。次いで、ＵＦ膜濾過により酵素を除去後、この反
応液に０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１０００ｍｌ
とリゾプス・ニベウス由来のグルコアミラーゼ（生化学
工業株式会社製）を固形物１グラム当たり５０単位加
え、４０℃で２０時間反応を行った。反応終了後、酵素
をＵＦ膜を用いて取り除いた後、得られた反応液を水で
平衡化したダイアイオンＨＰ−１０（三菱化学株式会社
製）１０００ｍｌを充填したカラムに吸着させた。

【００２４】カラムを脱イオン水３０００ｍｌで洗浄
後、５０％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液１０００ｍｌ、
次いで１００％（ｖ／ｖ）メタノール２０００ｍｌを用
いて溶出し、吸着画分を回収した。溶出液を減圧濃縮し
てメタノールを除去したのち、５００ｍｌの蒸留水に溶
解した。この溶液を酢酸エチル５００ｍｌで５回洗浄
し、未反応の（−）−エピガロカテキンを除去した。次
いで、この水溶液画分をダイアイオンＨＰ−２０ＳＳカ
ラム２５００ｍｌに展開し、蒸留水で十分に洗浄後、２
５％（ｖ／ｖ）メタノール水溶液８０００ｍｌで溶出し
て２０００ｍｌづつを分画した。さらに、５０％（ｖ／
ｖ）メタノール溶液５リットルで溶出した。これらの画
分についてＨＰＬＣで分析を行い、エピガロカテキン配
糖体を含む画分ＡおよびＢを得た。これらの画分につい
ては、分取用ＨＰＬＣで分離を行いＡ画分からエピガロ
カテキン配糖体１（１２７ｍｇ）とエピガロカテキン配
糖体２（８５ｍｇ）、Ｂ画分からエピガロカテキン配糖
体３（３２７ｍｇ）を得た。これらの配糖体はＨＰＬＣ
分析で単一ピークを示した。

【００２５】分析ＨＰＬＣ条件は、以下の通りである。 カラム：資生堂カプセルパック AG-120 ODS （４．６×
２５０ｍｍ） 移動相：アセトニトリル：酢酸エチル：０．０５％（ｖ
／ｖ）燐酸水＝１２：０．６：９０ 流 速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ 検 出：ＵＶ ２８０ｎｍ （４０℃） 分取ＨＰＬＣ条件は、以下の通りである。 カラム：カプセルパック ODS AG-120 S-5 （５０×５００ｍｍ） 移動相：Ａ画分：０．０５％（ｖ／ｖ）燐酸水を含む１０％（ｖ／ｖ）メタノ ール水溶液 Ｂ画分：０．０５％（ｖ／ｖ）燐酸水を含む１５％（ｖ／ｖ）メタノ ール水溶液 流 速：１２０ｍｌ／ｍｉｎ 検 出：ＵＶ ２８０ｎｍ （室温）

【００２６】これらの配糖体１、２および３をＮＭＲお
よびＭＳによる機器分析で解析した結果、下記の構造で
あると決定した。また、機器分析の結果も併せて列記し
た。なお、参考として（−）−エピガロカテキン配糖体
３の ¹Ｈ−ＮＭＲ、¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルおよびマス
スペクトルを図１、図２および図３にそれぞれ示した。

【００２７】（−）−エピガロカテキン配糖体１ （−）−エピガロカテキン３’，７−ジ−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド¹ H-NMR(ppm, methanol(d₄)-D₂O) 2.80(1H,dd,H-4a), 2.
87(1H,dd,H-4b),3.45-3.92(12H,ring H,Glcx2), 4.21(1
H,m,H-3), 4.83(1H,s,H-2),5.36(1H,d,H-1'",JH-1'",H-
2'"=4 Hz), 5.41(1H,d,H-1",JH-1",H-2"=4 Hz), 6.26(1
H,d,H-8), 6.31(1H,d,H-6), 6.76(1H,d,H-6'), 6.98(1
H,d,H-2')¹³ C-NMR(ppm, methanol(d₄)-D₂O) 28.5(C-4), 60.5(C-
6",C-6'"), 64.5(C-3),69.8(C-4",C-4'"), 71.6(C-2"),
72.0(C-2'"), 73.0(C-3"), 73.1(C-3'"), 73.5(C-5"),
73.6(C-5'"), 78.2(C-2), 95.6(C-8), 96.7(C-6), 98.
0(C-1"), 100.6(C-1'"), 101.5(C-4a), 107.9(C-2'), 1
09.8(C-6'), 129.6(C-1'), 134.9 (C-4'), 145.1(C-
3'), 145.3(C-5'), 155.6(C-8a), 156.3(C-7), 156.5(C
-5) FAB-MS(pos.) m/z=631 =(M+H)⁺ , 分子量６３０

【００２８】（−）−エピガロカテキン配糖体２ （−）−エピガロカテキン３’，５−ジ−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド¹ H-NMR(ppm, methanol(d₄)) 2.79(1H,dd,H-4a), 3.03(1
H,dd,H-4b),3.43-3.92(12H,ring H,Glcx2), 4.20(1H,m,
H-3), 4.83(1H,s,H-2), 5.37(1H,d,H-1'", JH-1'",H-
2'"=3.5 Hz), 5.52 (1H,d,H-1",JH-1",H-2"=3.5 Hz),
6.09(1H,d,H-8), 6.33(1H,d,H-6), 6.74(1H,d,H-6'),
6.97(1H,d,H-2') FAB-MS(pos.) m/z=631 =(M+H)⁺ , 分子量６３０

【００２９】（−）−エピガロカテキン配糖体３ （−）−エピガロカテキン３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシド¹ H-NMR(ppm, methanol(d₄)-D₂O) 2.73(1H,dd,H-4a), 2.
85(1H,dd,H-4b), 3.45(1H,dd,H-4"), 3.57(1H,dd,H-
2"), 3.78(3H,m,H-3",6"), 3.88(1H,m,H-5"), 4.18(1H,
m,H-3), 4.79(1H,s,H-2),5.35(1H,d,H-1", JH-1",H-2"=
3.2 Hz), 5.91(1H,d,H-8), 5.93(1H,d,H-6), 6.75(1H,
d,H-6'), 6.95(1H,d,H-2')¹³ C-NMR(ppm, methanol(d₄)-D₂O) 29.3(C-4), 62.4(C-
6"), 67.4(C-3), 71.4(C-4"), 73.5(C-2"), 74.4(C-
3"), 74.9(C-5"), 79.3(C-2), 95.9(C-8), 96.4(C-6),1
00.0(C-4a), 101.2(C-1"), 108.9(C-2'), 110.4(C-6'),
131.6(C-1'), 135.9 (C-4'), 146.7(C-3',5'), 157.2
(C-8a), 157.6(C-7), 158.0(C-5) FAB-MS(pos.) m/z=469 =(M+H)⁺ , 分子量４６８

【００３０】実施例２ （−）−エピガロカテキン３−Ｏ−ガレート（三井農林
株式会社製）５ｇを用いて実施例１と同様にサイクロマ
ルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ反応とグ
ルコアミラーゼ反応を行った後、ダイアイオンＨＰ−１
０を用いて未反応の糖を除去した。吸着画分をメタノー
ル水溶液を用いて溶出させ減圧濃縮後、分取ＨＰＬＣに
供し、エピガロカテキンガレート配糖体１（３１５ｍ
ｇ）およびエピガロカテキンガレート配糖体２（７８０
ｍｇ）を得た。この配糖体は、上記条件（実施例１）に
よるＨＰＬＣ分析でそれぞれ単一のピークを示した。

【００３１】分取ＨＰＬＣ条件は、以下の通りである。 カラム：カプセルパック AG-120 ODS S-5 （５０×５０
０ｍｍ） 移動相：０．０５％（ｖ／ｖ）燐酸水を含む２０％（ｖ
／ｖ）メタノール水溶液; ４０ｍｉｎ 流 速：１２０ｍｌ／ｍｉｎ 検 出：ＵＶ ２８０ｎｍ（室温）

【００３２】これらの配糖体をＮＭＲおよびＭＳによる
機器分析で解析した結果、下記の構造であると決定し
た。また、機器分析の結果も併せて列記した。 （−）−エピガロカテキンガレート配糖体１ （−）−エピガロカテキンガレート３’，７−ジ−Ｏ−
α−Ｄ−グルコピラノシド¹ H-NMR(ppm, methanol(d₄)-D₂O) 2.94(1H,dd,H-4a), 3.
08(1H,dd,H-4b),3.43-3.92(12H,ring H,Glcx2), 4.87(1
H,d,H-1"", JH-1"",H-2""=4 Hz), 5.06(1H,s,H-2), 5.5
0(1H,d,H-1'",JH-1'",H-2'"=3.5 Hz), 5.51(1H,m,H-3),
6.38(1H,d, H-8), 6.38(1H,d,H-6), 6.71(1H,d,H-6'),
7.02(2H,s,H-2",6"), 7.13(1H,d,H-2')¹³ C-NMR(ppm, methanol(d₄))-D₂O) 27.7(C-4), 62.7(C-
6'"), 63.1(C-6""), 70.5(C-3), 71.7(C-4'"), 72.3(C-
4""), 74.1(C-2'"), 74.2(C-2""), 74.7(C-3'"), 75.0
(C-3""), 75.7(C-5'"), 75.7(C-5""), 79.6(C-2), 98.4
(C-8), 99.0(C-6), 99.9(C-4a), 101.9(C-1'"), 102.9
(C-1""), 109.5(C-2'), 111.1(C-6'), 111.2(C-2",6"),
122.0(C-1"), 131.4(C-1'), 136.7(C-4"), 140.8(C-
4'), 147.1(C-3",5"), 147.3(C-3'), 147.8(C-5'), 15
7.9(C-8a), 158.5(C-7), 158.9(C-5),168.1(C-7") FAB-MS(pos.) m/z=783 =(M+H)⁺ , 分子量７８２

【００３３】（−）−エピガロカテキンガレート配糖体
２ （−）−エピガロカテキンガレート３’−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシド¹ H-NMR(ppm, methanol(d₄)-D₂O) 2.87(1H,dd,H-4a), 2.
99(1H,dd,H-4b), 3.42(1H,dd,H-4'"), 3.51(1H,t,H-
2'"), 3.68(1H,dt,H-5'"), 3.81(1H,t,H-3'"), 3.85(2
H,m,H-6'"), 4.90(1H,d,H-1'", JH-1'",H-2'"=4 Hz),
5.94(1H,d,H-8), 5.95(1H,d,H-6), 6.64(1H,d,H-6'),
7.00(2H,s,H-2",6"), 7.11(1H,d,H-2')¹³ C-NMR(ppm, methanol(d₄)-D₂O) 27.8(C-4), 63.0(C-
6'"), 70.2(C-3), 71.0(C-4'"), 74.2(C-2'"), 74.7(C-
3'"), 75.5(C-5'"), 80.1(C-2),98.6(C-8), 99.3(C-6),
100.2(C-4a),101.8(C-1'"), 109.8(C-2'), 111.3(C-
6'), 111.5(C- 2",6"), 122.1(C-1"), 131.5(C-1'), 13
6.5(C-4"), 141.0(C-4'), 147.1(C-3", 5"),147.1(C-
3'), 147.5(C-5'), 158.0(C-8a), 158.5(C-7), 158.6(C
-5), 168.0(C-7") FAB-MS(pos.) m/z=621 =(M+H)⁺ , 分子量６２０

【００３４】実施例３ （−）−ガロカテキン（三井農林株式会社製）５ｇを用
いて実施例１と同様にサイクロマルトデキストリングル
カノトランスフェラーゼ反応とグルコアミラーゼ反応を
行った後、ダイアイオンＨＰ−１０を用いて未反応の糖
を除去した。吸着画分をメタノール水溶液を用いて溶出
させ減圧濃縮後、酢酸エチルと水で溶媒分画を行った。
水層を減圧濃縮した後に、分取用ＨＰＬＣに供し、ガロ
カテキン配糖体１（７５０ｍｇ）を得た。この配糖体
は、実施例１によるＨＰＬＣ分析で単一のピークを示し
た。

【００３５】分取ＨＰＬＣ条件は、以下の通りである。 カラム：カプセルパック AG-120 ODS S-5 （５０×５０
０ｍｍ） 移動相：１０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル水溶液; ４０
ｍｉｎ 流 速：１００ｍｌ／ｍｉｎ 検 出：ＵＶ ２８０ｎｍ（室温）

【００３６】この配糖体をＮＭＲおよびＭＳによる機器
分析で解析した結果、下記の構造であると決定した。ま
た、機器分析の結果も併せて列記した。 （−）−ガロカテキン配糖体１ （−）−ガロカテキン３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シド¹ H-NMR(ppm, methanol-d₄) 2.73(1H,dd,H-4a), 2.87(1
H,dd,H-4b),3.42-3.94(6H, ring H,Glc), 4.00(1H,ddd,
H-3), 5.39(1H,d,H-1", JH-1",H-2"=4.1 Hz), 5.55(1H,
d,H-2) 5.88(1H,d,H-8), 5.96(1H,d,H-6), 6.63(1H,d,
H-6'), 6.89(1H,d,H-2') FAB-MS(pos.) m/z=455 =(M+H)⁺ , 分子量４５４

【００３７】実施例４ （−）−エピカテキン３−Ｏ−ガレート（三井農林株式
会社製）５ｇを用いて実施例１と同様にサイクロマルト
デキストリングルカノトランスフェラーゼ反応とグルコ
アミラーゼ反応を行った後、ダイアイオンＨＰ−１０を
用いて未反応の糖を除去した。吸着画分をメタノール水
溶液を用いて溶出させ減圧濃縮後、分取ＨＰＬＣに供
し、エピカテキンガレート配糖体１（９２３ｍｇ）を得
た。この配糖体は、実施例１によるＨＰＬＣ分析で単一
のピークを示した。

【００３８】分取ＨＰＬＣ条件は、下記のとおりであ
る。 カラム：カプセルパック AG-120 ODS S-5 （５０×５０
０ｍｍ） 移動相：０．０５％（ｖ／ｖ）燐酸水を含む２０％（ｖ
／ｖ）メタノール水溶液; ４０ｍｉｎ 流 速：１２０ｍｌ／ｍｉｎ 検 出：ＵＶ ２８０ｎｍ（室温）

【００３９】この配糖体をＮＭＲおよびＭＳによる機器
分析で解析した結果、下記の構造であると決定した。ま
た、機器分析の結果も併せて列記した。 （−）−エピカテキン３−Ｏ−ガレート配糖体１ （−）−エピカテキンガレート３’−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシド¹ H-NMR(ppm, methanol-d₄) 2.86(1H,dd,H-4a), 3.01(1
H,dd,H-4b),3.30-3.87(6H, ring H,Glc), 4.93(1H,d,H-
1'", JH-1'",H-2'"=3.8 Hz), 5.05(1H,s,H-2),5.48(1H,
m,H-3), 5.95(1H,d,H-8), 5.97(1H,d,H-6), 6.77(1H,d,
H-5'), 7.00(1H,dd,H-6'), 7.01(2H,s, H-2",6"), 7.57
(1H,d,H-2')¹³ C-NMR(ppm, methanol-d₄) 26.9(C-4), 61.8(C-6'"),
70.0(C-3), 70.7(C-4'"), 73.4(C-2'"), 73.9(C-5'"),
74.9(C-3'"), 78.6(C-2), 95.9(C-8), 96.6(C-6), 99.2
(C-4a), 101.1(C-1'"), 110.4(C-2",6"), 116.6(C-5'),
117.3(C-2'),121.2(C-1"), 123.0(C-6'), 131.6(C-
1'), 139.9(C-4"), 146.3(C-4'), 146.3(C-3",5"), 14
8.0(C-3'), 157.2(C-8a), 157.8(C-7), 157.8(C-5), 16
7.3(C-7") FAB-MS(pos.) m/z=605 =(M+H)⁺ , 分子量６０４

【００４０】実施例５ デキストリン（商品名：パインデックス＃１、松谷化学
株式会社製）１００ｇと（−）−エピガロカテキン、
（−）−エピガロカテキン ３−Ｏ−ガレート、（−）
−エピカテキン３−Ｏ−ガレート（すべて三井農林株式
会社製）それぞれ５ｇずつを１０ｍＭ塩化カルシウムを
含む０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）５００ｍｌに別
々に溶解した。各混合液にバチルス・ステアロサーモフ
ィラス由来のサイクロマルトデキストリングルカノトラ
ンスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）をデ
キストリン固形分１グラム当たり１０００単位加え、５
０℃で２４時間反応させた。次いで、反応液を１００℃
で３０分加熱して酵素を失活させた。

【００４１】得られた３種類の反応液をそれぞれ水で平
衡化したダイアイオンＨＰ−１０（三菱化学株式会社
製）１０００ｍｌを充填したカラムに吸着させた。カラ
ムを脱イオン水３０００ｍｌで洗浄後、７０％（ｖ／
ｖ）エタノール水溶液１０００ｍｌを用いて溶出し吸着
画分を回収した。溶出液を減圧濃縮してエタノールを除
去し、５００ｍｌの蒸留水に溶解した。この溶液を酢酸
エチル５００ｍｌで５回洗浄し、未反応のポリフェノー
ル類を除去した。未反応のポリフェノールが除去されて
いることを実施例１のＨＰＬＣ法で確認した。酢酸エチ
ルで洗浄した反応液をそれぞれ凍結乾燥してポリフェノ
ール配糖体を得た。このようにして得られた配糖体の収
量はエピガロカテキンから２１．４ｇ、エピガロカテキ
ン３−Ｏ−ガレートから１３．８ｇ、エピカテキンガレ
ートから１６．２ｇであった。得られた配糖体をそれぞ
れ蒸留水に溶解して紫外線の吸収を測定した。分子吸光
係数から各ポリフェノール１分子当り平均で６〜８個グ
ルコースが結合しているものと考えられた。

【００４２】実施例６ 実施例５で得られた３種類のポリフェノール配糖体をそ
れぞれ１００ｍｇずつ秤取って、１ｍｌの蒸留水に溶解
した。溶解した液にそれぞれグルコアミラーゼ（グルク
ザイムAF６、天野製薬株式会社製）１．６ｍｇとα−グ
ルコシダーゼ（シグマ社製）０．２３ｍｇずつを加えて
よく撹拌した。混合液を３７℃で３時間インキュベート
した。反応液を以下のＨＰＬＣ法で分析した。

【００４３】ＨＰＬＣ条件は、以下の通りである。 カラム：資生堂カプセルパック AG-120 ODS （４．６×
２５０ｍｍ） 移動相：アセトニトリル：酢酸エチル：０．０５％（ｖ
／ｖ）燐酸水＝１２：０．６：９０ 流 速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ 検 出：フォトダイオードアレイ検出器

【００４４】エピガロカテキン配糖体の反応液からはエ
ピガロカテキンが、エピガロカテキン３−Ｏ−ガレート
配糖体の反応液からはエピガロカテキン３−Ｏ−ガレー
トが、エピカテキン３−Ｏ−ガレート配糖体の反応液か
らはエピカテキン３−Ｏ−ガレートがそれぞれ検出され
た。

【００４５】以上の結果は、実施例４で行った配糖化反
応によって実際にポリフェノール類がそのまま配糖化さ
れていることを示すものである。さらに、本ポリフェノ
ール配糖体はα−グルコシダーゼやグルコアミラーゼに
よって加水分解されて、ポリフェノール類が遊離するこ
とから、生体内においてもα−グルコシダーゼやα−ア
ミラーゼ等の酵素によっても容易に加水分解されて、生
理活性機能を持つポリフェノール類を遊離して、ポリフ
ェノール類本来の生理活性機能を示すものと考えられ
る。

【００４６】実施例７ 実施例５で得られた配糖体の渋味の強さを２０人のパネ
ラーに対して官能検査を行って調べた。結果を第１表に
示した。

【００４７】

【表１】

【００４８】第１表から明らかなように、ポリフェノー
ル類が１００〜２００ｐｐｍで渋味を感じ始めるのに対
して、ポリフェノール配糖体では１０００ｐｐｍでも渋
味は感じられず、２０００ｐｐｍでわずかに収斂性を感
じ始めるようになった。このように、ポリフェノール配
糖体は従来のポリフェノール類に比べて呈味性が改善さ
れた物質である。従って、本発明のポリフェノール配糖
体は食品、嗜好品、化粧品、医薬品を問わずその呈味を
味わうことのできるすべての物品に応用できる。

【００４９】実施例８ ゼリー菓子 実施例５と同様の方法で得たエピガロカテキン３−Ｏ−
ガレート配糖体１０ｇとカップリングシュガー（登録商
標、株式会社林原製）１２６ｇ、オリゴメイト５０（商
品名：ヤクルト薬品工業社製）１３６ｇ、乳糖６ｇ、ア
スパルテーム（商品名、味の素株式会社製）０．３ｇに
水１５０ｇを加えて混合後、撹拌しつつ溶解した。この
溶液にペクチン４．５ｇを徐々に加えて溶解後、５０％
（ｗ／ｖ）クエン酸溶液３．３ｇ、１／５濃縮レモン果
汁６ｇ、天然色素０．１ｇおよびレモンフレーバー０．
２ｇを加えて十分に混合し、この溶液を型に流し込み、
室温で１２時間放冷して固化させペクチンゼリーを作製
した。本品はポリフェノール類特有の渋味がなく、風味
に優れたゼリー菓子である。また、ポリフェノール類の
機能性を有するゼリー菓子として好適である。

【００５０】実施例９ 粉末乳酸発泡飲料 １カップ当り実施例５と同様の方法で得たエピガロカテ
キン３−Ｏ−ガレート配糖体０．６ｇ、砂糖２．７ｇ、
ビタミンＣ０．６ｇ、発泡剤（重曹）０．６ｇ、酸味料
（クエン酸）０．６ｇ、粉末発酵乳０．５ｇ、粉末香料
（ストロベリー）０．２ｇを均一に混合して粉末乳酸発
泡飲料を試作した。本品を冷水１８０ｍｌに溶かして飲
んだところ、さわやかな味と香りを持つ飲みやすい飲料
であった。また、本品はポリフェノール類本来の、例え
ばコレステロール上昇抑制作用、血糖値上昇抑制作用、
抗酸化作用などの機能性を有する飲み易い粉末乳酸発砲
飲料である。

【００５１】実施例１０ 化粧用クリーム スクワラン２３ｇ、ステアリン酸５ｇ、ベヘニルアルコ
ール０．８ｇ、モノステアリン酸ポリエチレングリコー
ル２ｇ、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン２．５
ｇ、酸化チタン２．５ｇおよびパラオキシ安息香酸メチ
ル０．０５ｇを加熱溶解後８０℃とし、これにアラント
イン０．１ｇ、１，３−ブチレングリコール２ｇ、パラ
オキシ安息香酸メチル０．１５ｇ、実施例６と同様に調
製したエピガロカテキンガレート配糖体１ｇおよび精製
水を加熱溶解して８０℃としたものを加えて、混合乳化
した。よく撹拌しながら３０℃まで冷却後、容器に充填
して製品とした。本品はポリフェノール類特有の、例え
ば抗酸化作用、紫外線吸収作用などの機能性を有する化
粧用クリームである。

【００５２】

【発明の効果】本発明のポリフェノール配糖体は、従来
のポリフェノール類の持つ強い渋味や収斂性を効果的に
改善し、呈味性に優れているだけでなく、生体内でポリ
フェノール類を遊離することが期待できることから、食
品、嗜好品、化粧品、医薬部外品、医薬品などに応用可
能な新規化合物である。

【図面の簡単な説明】

【図１】 （−）−エピガロカテキン３’−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシドの¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。

【図２】 （−）−エピガロカテキン３’−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシドの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。

【図３】 （−）−エピガロカテキン３’−Ｏ−α−Ｄ
−グルコピラノシドのマススペクトルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｇ Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｐ 19/44 (72)発明者 万代 隆彦 岡山県岡山市政津1428番地 (72)発明者 渋谷 孝 岡山県総社市下原318番地

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式１（式中Ｒ₁ 、Ｒ₂ はそれぞれ独
   立に水酸基あるいは重合度２から１０のマルトオリゴ糖
   残基、Ｘは水酸基あるいは水素、Ｙは水酸基あるいはガ
   ロイル基を、またｎは１から９の整数を示す。）で表さ
   れるポリフェノール配糖体。 【化１】
2. 【請求項２】 ポリフェノール配糖体が、一般式２（式
   中Ｒ₁ 、Ｒ₂ はそれぞれ独立に水酸基あるいは重合度２
   から１０のマルトオリゴ糖残基を、またｎは１から９の
   整数を示す。）で表されるガロカテキン配糖体である請
   求項１記載のポリフェノール配糖体。 【化２】
3. 【請求項３】 ポリフェノール配糖体が、一般式３（式
   中Ｒ₁ 、Ｒ₂ はそれぞれ独立に水酸基あるいは重合度２
   から１０のマルトオリゴ糖残基を、またｎは１から９の
   整数を示す。）で表されるガロカテキン３−Ｏ−ガレ−
   ト配糖体である請求項１記載のポリフェノール配糖体。 【化３】
4. 【請求項４】 ポリフェノール配糖体が、一般式４（式
   中Ｒ₁ 、Ｒ₂ はそれぞれ独立に水酸基あるいは重合度２
   から１０のマルトオリゴ糖残基を、またｎは１から９の
   整数を示す。）で表されるカテキン３−Ｏ−ガレ−ト配
   糖体である請求項１記載のポリフェノール配糖体。 【化４】
5. 【請求項５】 渋味を低減したことを特徴とする請求項
   １記載のポリフェノール配糖体。
6. 【請求項６】 エピガロカテキン、ガロカテキン、エピ
   ガロカテキン３−Ｏ−ガレ−ト、ガロカテキン３−Ｏ−
   ガレ−ト、エピカテキン、エピカテキン３−Ｏ−ガレ−
   ト、カテキン３−Ｏ−ガレ−トあるいはこれらを２種類
   以上含むポリフェノール類混合物とデキストリン、サイ
   クロデキストリン、澱粉もしくはこれらの混合物にサイ
   クロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼを
   作用させることを特徴とする請求項１記載のポリフェノ
   ール配糖体の製造方法。
7. 【請求項７】 サイクロマルトデキストリングルカノト
   ランスフェラーゼが、バチルス・ステアロサーモフィラ
   ス由来のものである請求項６記載のポリフェノール配糖
   体の製造方法。
8. 【請求項８】 請求項１記載のポリフェノール配糖体を
   含む組成物。
9. 【請求項９】 組成物が、飲食物，嗜好品，化粧品，医
   薬部外品，医薬品およびそれらの原料のうちのいずれか
   である請求項８記載の組成物。