JPH0930973A - 腎炎治療もしくは予防薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】単球走化活性化因子阻害剤を有効成分とす
る腎炎治療薬もしくは予防薬。 【効果】本発明によりこれまで既存薬では有効なものが
ない腎疾患、特に白血球、特に単球もしくはマクロファ
ージの浸潤、活性化を阻害することにより、特に、単球
走化活性化因子を阻害することを特徴とする腎炎の治療
および予防薬を提供することが可能となった。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、白血球、特に単球
もしくはマクロファ−ジの浸潤、活性化を阻害する物
質、さらに詳細には単球走化活性化因子阻害剤を有効成
分とする、腎炎の治療もしくは予防薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】単球走化活性化因子（Macrophage Chemo
tactic Activating Factor、 以下ＭＣＡＦという) はま
たＭＣＰ−１（Monocyte chemotactic protein-1 ）や
ＧＤＣＦ(glioma-derived monocyte chemotactic facto
r)とも称され、アミノ酸７６個からなる蛋白質であり、
４個のシステイン基を持つ。ＭＣＡＦとＭＣＰ−１およ
びＧＤＣＦについてはその同定と遺伝子クローニングが
報告されている（K. Matsushima et al., J. Exp. Me
d., 169, 1485-1490, 1989. Y. Furutani et al.,Bioch
em. Biophys. Res. Commun., 159, 249-255, 1989. E.
R. Robinson et al.Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86,
1850-1854, 1989. T. Yoshimura et al., FEBS Letter
s, 244, 487-493, 1989.Leonard, E.J. およびYoshimur
a, T. (1990)Immunology Today vol.11 97-101 ）。以
下本発明ではＭＣＰ−１、ＧＤＣＦを含めてＭＣＡＦと
略称する。

【０００３】ＭＣＡＦにはそのアミノ酸数とシステイン
残基の配置が類似した、ＣＣケモカインファミリーの一
員である。ＣＣケモカインファミリーはアミノ酸配列中
にシステインが２個つながる特徴を有する走化性を示す
生理活性物質（ケモカイン）として呼ばれている（N.Mu
kaida et al., Microbiol. Immunol. 36, 773-789, 199
2 ）。ＣＣケモカインはまたβケモカインとも呼ばれる
（Oppenheim et al.,Annual Rev. Immunol., 9, 617 19
91 ）。ＣＣ−ケモカインファミリーは互いにアミノ酸
レベルで３０％程度のホモロジ−を有し、４個のシステ
イン残基の位置が一致する一群の低分子量タンパク質の
総称である。ＭＣＡＦの他に、このファミリ−に属する
他のタンパクとしては、ヒトではＲＡＮＴＥＳ、ＬＤ７
８、ＡＣＴ２、Ｉ−３０９、、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３
などが、またマウスではＪＥ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−
１β、ＴＣＡ−３などがＭＣＡＦの構造的類縁体として
知られている。

【０００４】ＭＣＡＦは、生体内では単球およびマクロ
ファ−ジ、リンパ球といった血球系の細胞のほかに、線
維芽細胞、血管内皮細胞、平滑筋細胞、各種腫瘍細胞な
ど様々な細胞から、ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＩＦＮ−γ、Ｌ
ＰＳなどの刺激により産生されることが報告されてい
る。これら走化活性化因子は炎症関連の細胞が産生する
ことからも、炎症反応を担う重要な因子である。

【０００５】腎炎は一般に治癒しにくい疾病であり、特
に慢性腎炎はこれといった治療法も少なく、予後も悪
い。腎炎の多くを糸球体腎炎が占め、その病因は腎糸球
体の異常であり、慢性腎炎のうち最も多いIgA 腎症もこ
の腎糸球体の異常が原因であるとされている。糸球体腎
炎の場合、腎糸球体が機能低下および機能不全を起こす
メカニズムは、腎糸球体における炎症反応であり、腎臓
の濾過装置である糸球体がこの炎症反応により障害を受
け、機能が低下もしくは停止してしまうこと、および炎
症反応が引き金となっておこる糸球体メサンギウム細胞
の異常増殖などが指摘されている。

【０００６】また腎炎においてマクロファージの活性化
および糸球体部位への浸潤による障害が報告されており
(D.J.Nikolic-Paterson et al. Kidney International
suppl.45 79-82 1994)、マクロファージが炎症の患部に
遊走していく際にMCAFを初めとする走化活性因子が働い
ていることが判明している(D.Schlondorff Kidney Inte
rnational suppl.45 54-55 1995) 。

【０００７】腎炎に対する薬物療法は、腎炎が炎症反応
のひとつであることから、対症療法的にはステロイド剤
をはじめとする抗炎症薬および免疫抑制薬が用いられて
いる。また、症状に応じて、抗血小板薬、抗凝固療法、
降圧薬が使用されている。特にステロイド剤を初めとす
る抗炎症薬は蛋白尿を軽減し、その中でもステロイド剤
や免疫抑制剤は優れた薬効を持つ。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
ステロイド剤や免疫抑制薬は優れた効果を示すが副作用
が重篤であり、長期の服薬が必要とされる慢性腎炎にお
いては、特に臨床上重大な問題といえる。

【０００９】本発明の目的は、これまで既存薬では有効
なものがない腎疾患、特に白血球、特に単球もしくはマ
クロファージの浸潤、活性化を特徴とする腎炎に対する
治療および予防薬を提供することである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決すべく、鋭意検討を重ねた結果、マクロファ−ジの
炎症患部への集積の阻害する物質、特に、ＭＣＡＦ阻害
剤が腎炎の治療効果をもつことを見出し、本発明を完成
した。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。

【００１２】本発明のマクロファ−ジの炎症患部への集
積を阻害する、特に、ＭＣＡＦの産生を阻害することを
特徴とする薬剤、つまりＭＣＡＦ阻害剤としては、ＭＣ
ＡＦに結合してＭＣＡＦの作用を阻害するもの、ＭＣＡ
Ｆ受容体に結合してＭＣＡＦの作用を阻害するもの、Ｍ
ＣＡＦの産生を抑制するものも本発明に含まれる。例え
ば、ＭＣＡＦ中和抗体およびＭＣＡＦ阻害活性を持つ低
分子化合物が挙げられる。

【００１３】ＭＣＡＦ中和抗体としては、ポリクロ−ナ
ルまたはモノクロ−ナル抗体いずれでもよく、好ましく
はヒトモノクローナル抗体が用いられる。例えば、特開
平６−２０５６９０号公報にあるヒトＭＣＡＦ中和活性
を示すモノクローナル抗体ME120 抗体およびMI-446抗体
および特開平５−２７６９８６号公報にあるモノクロー
ナル抗体が挙げられる。なお、本発明実施例では、抗ヒ
トＭＣＡＦ抗体はラットＭＣＡＦと交差反応しないこと
が判明しているので、すべて抗ラットＭＣＡＦ抗体を用
いて行っている。

【００１４】ＭＣＡＦ阻害活性を持つ低分子化合物のフ
ェニルエタノールアミンおよびその誘導体としては、カ
テコ−ルアミン及びその誘導体が含まれるが、そのほか
にも例えば特開平７−２５７５７公報に記載の化合物が
含まれる。ホモピペラジン誘導体としては、ホモピペラ
ジン骨格を有する化合物であり、例えば、Ｂｒｉｔ．ｐ
ａｔ．１，１０７，４７０号、ＵＳ３，５３２，６８５
号明細書、特開平３−２１４４号公報、特開平７−１４
５０６０号公報に挙げられたものを含む。

【００１５】本発明治療剤は、他の成分としては、水や
有機溶剤の他に、薬学的に許容しうる一般的な医薬添加
物が選ばれる。もちろん添加物が無くとも本発明の目的
は達成される。そのような医薬添加物としては、コラ−
ゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、
カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロー
スナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸
ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルス
ターチナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチ
ルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイ
ン、ゼラチン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリ
セリン、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチ
レングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルア
ルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳ
Ａ）、マンニト−ル、ソルビト−ル、ラクト−ス、医薬
添加物として許容され得る界面活性剤などがあげられ
る。実際の添加物は本発明治療剤の剤形に応じて上記の
中から適宜あるいは組み合わせて選ばれるが、もちろん
これらに限定するものではない。

【００１６】本発明はまた、ＭＣＡＦと他の薬剤、生物
学的製剤や合成医薬製剤などとの、同時もしくは逐次的
併用投与をも包含する。他の薬剤としては、抗炎症薬や
抗アレルギー薬、抗血小板薬、抗腫瘍薬、高脂血症薬あ
るいは本発明の目的である活性を増強もしくは補助する
ような薬剤の中から選ばれる。

【００１７】投与方法としては、特に限定するものでは
ない。本発明の目的から局所投与や全身投与から適宜選
択される。局所投与形態として外用剤、局所注射剤など
が好適に実施し得る。外用剤としては、軟膏、ゲル、ク
リ−ム、乳液、液剤などの塗布剤、テープ剤、パッチ剤
などの貼付剤、あるいはスプレー剤、粉剤などの噴霧剤
から選択される。全身投与剤としては注射剤や、各種担
体を利用した徐放性投剤から適宜選ばれる。

【００１８】有効投与量としては、１日につき体重１ｋ
ｇ当たり０．００１ｍｇから１０００ｍｇの範囲で選ば
れる。好適には体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇから１０
ｍｇの範囲で選ばれる。前述の投与量は症状によっても
異なり、これらの値に限定されるものでは勿論ない。投
与回数としては通常１日１ないし２回、もしくは２ない
し数日に１回の範囲で選ばれるが、これに限定されるも
のではない。

【００１９】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明する。もちろんこれによって本発明が制限されるも
のではない。

【００２０】実施例１． ラットＭＣＡＦに対するポリクローナル抗体の作製：免
疫原となるラットＭＣＡＦは遺伝子組換え体により調製
した。これをヤギ背部皮下にフロイント完全アジュバン
トとともに免疫し、これを２週間おきに４回繰り返し
た。最後の免疫から4 日目にヤギ末梢血から血清を採取
した。

【００２１】採取した血清を硫安沈殿、DEAEイオン交換
クロマトグラフイー、プロテインＡアフィニティーカラ
ムの順で精製を行い、抗ラットＭＣＡＦポリクローナル
抗体とした。ポリクローナル抗体の中和活性はヒト探求
由来細胞株THP-１細胞によるカルシウム流入の阻害実験
およびウサギ末梢血リンパ球の遊走阻害試験により確認
した。

【００２２】その結果を図１及び２にそれぞれ示す。こ
れらの結果より、抗ラットＭＣＡＦポリクローナル抗体
はTHP-１細胞におけるMCAFによって惹起されるカルシウ
ム流入、およびMCAFに対するリンパ球の遊走を抑制する
中和抗体であることが判明した。

【００２３】実施例２． 抗ラット糸球体基底膜抗体によるラット腎炎モデルにお
ける効果：抗ラット糸球体基底膜抗体はラット腎臓より
調製し、フロイントの完全アジュバントとともにウサギ
に数回免疫し、その血清を採取することにより行った。
腎炎発症ラットはWKY ラットを用いた。WKY ラットにウ
サギ抗ラット糸球体基底膜抗体を尾静脈より投与し、同
時に抗ラットＭＣＡＦポリクローナル抗体、もしくはコ
ントロール抗体を尾静脈より投与した。

【００２４】尿蛋白は、抗基底膜抗体投与の一日前から
試験動物を蓄尿ケージに入れ、24時間分の尿を採取し、
蛋白量を測定した。同様に、抗基底膜抗体投与後3 日目
および6 日目についてもその24時間前から蓄尿を行い、
尿中蛋白量を測定した。

【００２５】腎臓に浸潤した単球もしくはマクロファー
ジについては、組織凍結切片を作製し、ED-1(BMA Biome
dicals Switzerland) により染色し数えた。

【００２６】以上より、抗ラットＭＣＡＦ抗体は、ラッ
ト実験腎炎モデルにおいて尿蛋白の抑制（図３）および
臓器浸潤細胞の抑制効果（図４) があることが判明し
た。

【００２７】

【発明の効果】本発明によりこれまで既存薬では有効な
ものがない腎疾患、特に白血球、特に単球もしくはマク
ロファージの浸潤、活性化を特徴とする腎炎の治療およ
び予防薬を提供することが可能となった。

【図面の簡単な説明】

【図１】抗ラットＭＣＡＦ抗体のカルシウム流入抑制実
験。THP-1 細胞にラットリコンビナントＭＣＡＦを作用
させ、カルシウム流入を惹起させる。抗ラットＭＣＡＦ
抗体はＭＣＡＦと同時に細胞に共存させ、そのカルシウ
ム流入の抑制を観察した。

【図２】抗ラットＭＣＡＦ抗体の細胞遊走抑制試験。48
穴ケモタクティックチャンバーの下室にラットリコンビ
ナントＭＣＡＦを入れる。コントロール以外の下室には
抗ラットＭＣＡＦ抗体をそれぞれの濃度にて共存させて
ある。ポリカーボネートメンブレンをはさんだ上室には
ウサギ末梢血リンパ球浮遊液を入れる。37℃90分間、5%
CO2 下にて培養し、メンブレンの下側に遊走してきた細
胞数をディフクイック染色にて検鏡下計測した。

【図３】ラット糸球体腎炎における尿蛋白の抑制実験。
抗ラット糸球体基底膜抗体を投与し、またさらに抗ラッ
トＭＣＡＦ抗体もしくはコントロール抗体をそれぞれ尾
静脈投与を行った。採尿は抗基底膜抗体投与の前日から
24時間の蓄尿により尿中タンパクを測定した。また、抗
基底膜抗体投与の３日後および６日後についてもその測
定の前日から蓄尿を行い、尿蛋白量を測定した。

【図４】臓器浸潤細胞。抗糸球体基底膜抗体投与から３
日目のラットおよび６日目のラットの腎臓から凍結切片
を作製し、抗ラット単球・マクロファージ抗体であるED
-1抗体によって染色しその浸潤細胞数を計測した。コン
トロールは健常ラットの腎組織である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 成見 英樹 神奈川県鎌倉市手広1111番地 東レ株式会 社基礎研究所内

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】単球走化活性化因子阻害剤を有効成分とす
   る腎炎治療薬もしくは予防薬。
2. 【請求項２】単球走化活性化因子阻害剤が、単球走化活
   性化因子中和抗体である請求項１記載の腎炎治療薬もし
   くは予防薬。
3. 【請求項３】単球走化活性化因子阻害剤が、フェニルエ
   タノールアミンおよびその誘導体である請求項１記載の
   腎炎治療薬もしくは予防薬。
4. 【請求項４】単球走化活性化因子阻害剤が、ホモピペラ
   ジン誘導体である請求項１記載の腎炎治療薬もしくは予
   防薬。