JPH09500026A

JPH09500026A - サイトカインに応答性のｄｎａスペーサー調節要素およびその使用方法

Info

Publication number: JPH09500026A
Application number: JP7527056A
Authority: JP
Inventors: セイデル，エイチ・マーチン; ラム，アイ・ピーター
Original assignee: Ligand Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Ligand Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1994-04-14
Filing date: 1995-04-10
Publication date: 1997-01-07
Also published as: EP0722497A1; WO1995028482A2; WO1995028482A3; CA2165057A1; AU2285995A

Abstract

(57)【要約】本発明は、サイトカインなどのシグナル伝達分子に応答して活性化された転写調節タンパク質に結合する一般配列ＴＴＮｘＡＡで示されるＤＮＡ調節要素を含むオリゴヌクレオチド配列を提供する。さらに、本発明はまた、該オリゴヌクレオチド配列を含むＤＮＡ構築物、該ＤＮＡ構築物でトランスフェクションした細胞、および構造遺伝子の制御された発現、転写調節タンパク質の検出および回収、および遺伝子転写のアゴニストおよびアンタゴニストとして作用する化合物の能力を測定するための、該ＤＮＡ構築物およびトランスフェクションした細胞の使用方法をも提供する。

Description

【発明の詳細な説明】サイトカインに応答性のＤＮＡスペーサー調節要素およびその使用方法発明の技術分野本発明は、サイトカインなどの種々の分子に応答して転写に影響を及ぼす調節タンパク質に結合するオリゴヌクレオチド配列、該オリゴヌクレオチド配列を含むＤＮＡ構築物、該ＤＮＡ構築物でトランスフェクションした細胞、および異種遺伝子の制御された発現、新たな調節タンパク質の検出および回収および遺伝子転写のアゴニストおよびアンタゴニストとして作用する化合物の能力の測定のためのその使用方法に関する。発明の背景多くの細胞系において、ポリペプチドリガンドなどの細胞外シグナル伝達分子は、細胞表面にあるレセプターに結合することにより、細胞内での遺伝子転写を最終的に調節することになる細胞内シグナル伝達経路を誘発する。たとえば、哺乳動物細胞の成長、分化および機能を制御する可溶性ポリペプチドの大きく多様なファミリーを構成するサイトカインおよび成長因子は、特異的な細胞表面レセプターに結合することにより、特異的な表現型応答を引き起こすシグナルをある種の形で伝達する。ミヤジャマ（Ａ.Ｍiyajama）ら、１０Ａnnu.Ｒev.Ｉmmunol. ,２９５（１９９２）；アグエット（Ｍ.Ａguet）ら、５５Ｃell,２７３（１９８８）；キシモト（Ｔ.Ｋishimoto）ら、２５８Ｓcience、５９３（１９９２）およびウルリッヒ（Ａ.Ｕllrich）およびシュレシンガー（Ｊ.Ｓchlessinger）、６１Ｃell,２０３（１９９０）。多数の証拠は、特定の遺伝子における転写速度の変化が該応答の重要な要素であることを示している。これは、特定のＤＮＡ結合タンパク質の量または活性の変化の結果であると考えられている。幾つかの場合において、細胞表面におけるレセプター−リガンド相互作用からかかるＤＮＡ結合タンパク質または他の核タンパク質の活性の変化へと導く経路を定義するうえで進歩がなされてきている。ウルリッヒ、６１Ｃell,２０３。この観点において、表面レセプターシグナル伝達経路における共通の応答にはＲａｓの活性化が含まれる。マルカヒー（Ｌ.Ｓ.Ｍulcahy）ら、３１３Ｎature,２４１（１９８５）。活性化されたＲａｓは、ついでＭＡＰキナーゼを介してセリン／トレオニンリン酸化のカスケードを開始させてＤＮＡ結合タンパク質のリン酸化に導き、それによってその転写制御活性を変化させる。ムーディー（Ｓ.Ａ.Ｍ oodie）ら、２６０Ｓcience、１６５８（１９９３）；ラング−カーター（Ｃ.Ａ .Ｌange−Ｃarter）ら、２６０Ｓcience、３１５（１９９３）；ヒル（Ｃ.Ｓ.Ｈ ill）ら、７３Ｃell,３９５（１９９３）；ジル（Ｈ.Ｇille）ら、３５８Ｎatur e ,４１４（１９９２）およびチェン（Ｒ.Ｈ.Ｃhen）ら、１２Ｍol.Ｃell.Ｂiol. ,９１５（１９９２）。これら進歩にも拘わらず、遺伝子発現を変化させるために多くの成長因子およびサイトカインによって利用されているシグナル伝達経路はいまだ解明されていない。それゆえ、知られた第二メッセンジャーがこれら因子の幾つかに対して応答してシグナル伝達に関与していると考えられているけれども、遺伝子発現を制御するうえでのその役割はいまだ解明されていない。ミヤジャマら、１０Ａnnu. Ｒev.Ｉmmunol .,２９５およびレビー（Ｄ.Ｅ.Ｌevy）およびダーネル（Ｊ.Ｅ.Ｄ arnell）、２Ｎew Ｂiol.,９２３（１９９０）。このことが今度は、そのような細胞系においてリガンド特異的応答がいかにして引き起こされるのかという疑問を提起する。ウルリッヒ、６１Ｃell,２０３；テャオ（Ｍ.Ｖ.Ｃhao）、６８Ｃe ll ,９９５（１９９２）およびレビー、２Ｎew Ｂiol.,９２３。これら問題を解決するうえでの進歩が、最近、インターフェロン（ＩＦＮ）系でなされている。ＩＦＮαおよびβ（タイプＩ）は、ウイルス感染に対する主要な非特異的防御として働く。ペツカ（Ｓ.Ｐetska）およびランガー（Ｊ.Ａ.Ｌan ger）、５６Ａnnu.Ｒev.Ｂiochem.,７２７（１９８７）。ＩＦＮγ（タイプII）は抗ウイルス特性を有するが、免疫応答の制御においても主要な役割を果たしている。上記文献。タイプＩおよびタイプIIＩＦＮは異なる細胞表面レセプターに結合し、遺伝子発現を迅速に変化させる。アグエット、５５Ｃell,２７３；ウゼ（Ｕze）、６０Ｃell,２２５；およびセン（Ｇ.Ｃ.Ｓen）およびレンギエル（Ｐ . Ｌengyel）、２６７Ｊ.Ｂiol.Ｃhem.５０１７（１９９２）。インターフェロン α刺激応答要素（interferon−α stimulated response elements）（ＩＳＲＥ）と呼ばれるＩＦＮαに応答する特定の配列要素が遺伝子のプロモーター中で同定されており、これはＩＦＮαによる制御に必要かつ充分なものである。セン、２６７、Ｊ.Ｂiol.Ｃhem.５０１７。詳しくは、ＩＦＮαレセプターの活性化は、ＤＮＡ結合タンパク質として、従ってＩＳＲＥを介した転写調節要素として働くタンパク質ファミリーのチロシンリン酸化を刺激する。シンドラー（Ｃ.Ｓchi ndler）ら、２５７Ｓcience、８０９（１９９２）；シュアイ（Ｋ．Ｓhuai）ら、２５８Ｓcience、１８０８（１９９２）およびグッチュ（Ｍ．Ｊ.Ｇutch）ら、８９Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ、１１４１１（１９９２）。これらＤＮＡ結合タンパク質は一般に「転写のシグナルトランスデューサーおよびアクチベーター（signal transducers and activators of transcription）（ＳＴＡＴ）」と呼ばれ、多量体複合体に会合し、核に位置を移し、適当な調節領域中のシス作動性エンハンサー要素（cis−acting enhancer elements）に結合する。レビーら、３Ｇenes Ｄev.,１３６２（１９８９）；およびケスラー（Ｄ.Ｓ.Ｋessle r）ら、４Ｇenes Ｄev.,１７５３（１９９０）およびゾング（Ｚ.Ｚhong）ら、２６４Ｓcience、９５（１９９４）。ＩＦＮαにより誘発されたＩＳＲＥ結合タンパク質複合体の一つの例はＩＳＧＦ３である。デイル（Ｔ.Ｃ.Ｄale）ら、８６Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.１２０３（１９８９）およびフー（Ｘ−Ｙ.Ｆｕ）ら、８７Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.８５５５（１９９０）。ＩＳＧＦ３は、ｐ４８、ｐ８４（ＳＴＡＴ１β）、ｐ９１（ＳＴＡＴ１α）およびｐ１１３（ＳＴＡＴ２）と呼ばれる４つの結合タンパク質の複合体である。最近、ＩＳＧＦ３を構成するタンパク質をコードするｃＤＮＡが単離され特徴付けられた。フーら、８９Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.７８４０（１９９２）；シンドラーら、８９Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.７８３６（１９９２）およびビールズ（Ｓ.Ａ.Ｖeals）ら、１２Ｍol.Ｃell.Ｂiol.３３１５（１９９２）。ｐ４８はＩＳＧＦ３のＤＮＡ結合成分であり、ｍｙｂと相同である。ビールズ、１２Ｍol.Ｃell.Ｂiol.３３１５。ｐ８４およびｐ９１はおそらく同じ遺伝子が別の仕方でスプライスされた産物であり、ｐ１１３と関連している。フー、８９Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.７８４０およびシンドラー、８９Ｐroc.Ｎatl. Ａcad.Ｓci .７８３６。ｐ８４、ｐ９１およびｐ１１３はＳＨ２トメインおよびＳＨ３ドメインを含有する新規なタンパク質であり、未処理の細胞の細胞質中に認められる。シンドラー、２５７Ｓcience、８０９およびフー、７０Ｃell,３２３〜３３５（１９９２）。それゆえ、細胞をＩＦＮαで処理するとｐ８４、ｐ９１およびｐ１１３が迅速にチロシンリン酸化される結果となり、これらを会合させｐ４８とヘテロマーな複合体を形成してＩＳＧＦ３を形成し、これが核に位置を移してＩＳＲＥに結合し、転写を刺激する。上記文献；デイル、８６Ｐroc.Ｎ atl.Ａcad.Ｓci .１２０３およびケスラー、４Ｇenes Ｄev.,１７５３。ＩＦＮγに応答した調節は、ＩＳＲＥとは異なる配列、すなわちガンマ活性化配列（gamma activated sequence）（ＧＡＳ）により与えられる。デッカー（Ｔ .Ｄecker）ら、１０ＥＭＢＯＪ.,９２７（１９９１）；カン（Ｋ.Ｄ.Ｋhan）ら、９０Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.６８０６（１９９３）およびルー（Ｄ.Ｊ.Ｌew ）ら、１１Ｍol.Ｃell.Ｂiol.、１８２（１９９１）。細胞をＩＦＮγで処理するとｐ９１（ＳＴＡＴ１α）のチロシンがリン酸化され、ついでこれが核に位置を移しＧＡＳに結合する。デッカー、１０ＥＭＢＯＪ.,９２７およびシュアイら、２５８Ｓcience、１８０８（１９９２）。それゆえ、ＩＦＮαかまたはＩＦＮγのそれぞれのレセプターへの結合の特異性は、潜在的転写因子（latent tra nscription factors）（すなわち、ＤＮＡ結合タンパク質）の関連ファミリー内での特定のリン酸化パターンに翻訳される。このリン酸化パターンがタンパク質の会合状態を指示し、このことがＩＳＲＥまたはＧＡＳのいずれかへの結合の特異性およびその後の転写応答を決定する。さらに他のサイトカインであるインターロイキン−６（ＩＬ−６）は、肝細胞において急性期応答の誘発に主要な役割を果たしている。急性期応答は、急性期応答遺伝子と呼ばれる独特のセットの遺伝子の劇的な転写上方調節（upregulati on）を特徴とする。ハインリッヒ（Ｐ.Ｃ.Ｈeinrich）ら、２６５Ｂiochem.Ｊ., ６２１〜６３６（１９９０）。これら遺伝子のプロモーター領域を調べたところ、ＩＬ−６によって急性期遺伝子が誘発されるのに必要な特定のＤＮＡ配列が同定された。クンツ（Ｄ.Ｒ.Ｋunz）ら、１７Ｎuc．Ａcids Ｒes.,１１２１〜１１３８（１９８９）；ハットリ（Ｍ.Ｈattori）ら、８７Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ、２３６４〜２３６８（１９９０）；ウォン（Ｋ.Ａ.Ｗon）およびバウマン（Ｈ.Ｂaumann）、１０Ｍol.Ｃell.Ｂiol.、３９６５〜３９７８（１９９０）およびウイルソン（Ｄ.Ｒ.Ｗilson）ら、１０Ｍol.Ｃell.Ｂiol.、６１８１〜６１９１（１９９０）。これら配列は、急性期応答要素（acute phase response ele ments）（ＡＰＲＥ）と呼ばれる。ＡＰＲＥの一つのタイプは、ＩＦＮγによる誘発を与えるＧＡＳ要素と多くの類似点を示す。ユアン（Yuan）ら、１４Ｍol. Ｃell.Ｂiol .、１６５７〜１６６８（１９９４）。このＡＰＲＥのクラスに結合するタンパク質は特徴付けられ精製されている。ウエジェンカ（Ｕ.Ｍ.Ｗegenka ）ら、１３Ｍol.Ｃell.Ｂiol.、２７６〜２８８（１９９３）；イトー（Ｔ.Ｉto ）ら、１７Ｎuc.Ａcids Ｒes.,９４２５〜９４３５（１９８９）およびハットリ、８７Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ、２３６４〜２３６８。ＩＬ−６によって誘発されるＡＰＲＥ結合タンパク質のｃＤＮＡクローンは単離されており（ゾング、２６４Ｓcience、９５；アキラ（Ａkira）ら、７７Ｃell、６３〜７１（１９９4）；ゾングら、９１Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.、４８０６〜４８１０（１９９４）；ラズ（Ｒaz）ら、２６９Ｊ.Ｂiol.Ｃhem.、２４３９１〜２４３９５（１９９４））、ｐ９１（ＳＴＡＴ１α）に対してかなりの相同性を示すタンパク質をコードすることがわかっている。この理由から、該タンパク質はＳＴＡＴ３と呼ばれている。ＳＴＡＴ１αと同様、ＳＴＡＴ３は活性化されて迅速なチロシンリン酸化によりＤＮＡに結合する潜在的転写因子である。インターロイキン−４（ＩＬ−４）は、種々のリンパ球および非リンパ球細胞タイプの両者において生物学的応答を引き起こす多面発現性の（pleiotropic）サイトカインである。ＩＬ−４は、活性化Ｔ細胞のＴｈ２サブセットによって主として産生される約１９ｋＤの糖タンパク質である。ＩＬ−４は、以来、Ｂ細胞の増殖、免疫グロブリンの発現の調節、Ｔ細胞の調節、造血前駆細胞の増殖および分化において重要な役割を果たすことが示されている。ＩＬ−４は、その生物学的作用を、造血細胞株およびある種の非造血細胞株の表面上の特定の高親和性レセプターを介して発揮する。そのレセプターの一方の鎖であるγｃ鎖は、ＩＬ −２レセプター、ＩＬ−７レセプター、ＩＬ−９レセプター、ＩＬ−１３レセプターおよびＩＬ−１５レセプターと共通するものである。コンドー（Ｍ.Ｋondo ）ら、２６２Ｓcience、１８７４（１９９３）、ノグチ（Ｍ.Ｎoguchi）ら、２６２Ｓcience、１８７７（１９９３）、ラッセル（Ｓ.Ｒussell）ら、２６２Ｓc ience 、１８８０（１９９３）、およびコンドーら、２６３Ｓcience、１４５３（１９９４）。ＩＬ−４が細胞表面上のそのレセプターに結合すると細胞内チロシンキナーゼが活性化され、幾つかのタンパク質がチロシンにおいて迅速にリン酸化される。これら初期の事象は、標的遺伝子転写に対するＩＬ−４の即時作用に直接関係していると思われる。とりわけ、ＩＬ−４は、応答性細胞において、クラスIIＭＨＣ、ＩｇＥに対する低親和性Ｆｃレセプター（ＦｃεＲII、ＣＤ２３）、ＬＡＦ −１およびＬＡＦ−３、ＣＤ４０および表面ＩｇＭを含む幾つかの細胞表面抗原の発現を上方調節する。アッガーワル（Ｂ.Ａggarwal）およびグッターマン（Ｊ .Ｕ.Ｇutterman）、Ｈuman Ｃytokines：Ｈandbook for Ｂasic Ｃhemical Ｒes earch ブラックウエル・サイエンティフィック・パブリケーションズ、ボストン、マサチューセッツ（１９９２）。おそらく、ＩＬ−４の最も顕著な役割はＢ細胞の分化にあり、その際、ＩＬ−４はＩｇのＨ鎖クラスをＩｇＥ（タイプＩアレルギー反応の主要なメディエーターである）にスイッチさせるのを促進する「スイッチ因子（switch factor）」として働く。ポール（Ｗ.Ｅ.Ｐaul）、７７Ｂlo od １８５９（１９９１）。ＩＬ−４がＳＴＡＴシグナル伝達系を介して作動するとの証拠は、ＩＬ−４が種々の細胞株において、ＧＡＳ様ＤＮＡ配列要素に結合するホスホチロシン含有タンパク質複合体を速やかに活性化するという観察に基づいている。コタニド（Ｈ.Ｋotanides）およびライヒ（Ｎ.Ｒeich）、２６２Ｓ cience 、１２６５（１９９３）およびシンドラーら、１３ＥＭＢＯＪ.１３５０（１９９４）；ラム（Ｐ.Ｌamb）ら、８３Ｂlood、２０６３（１９９４）およびケー３０６６（１９９３）。ＴＨＰ−１細胞においてＩＬ−４によって活性化されたＳＴＡＴは最近クローニングされ（ＳＴＡＴ−ＩＬ−４またはＳＴＡＴ６と呼ばれる）、報告されたＩＬ−４誘発複合体の構成員であるようである。ホウ（Ｊ. Ｈou）ら、２６５Ｓcience、１７０１（１９９４）およびイール（Ｊ.Ｎ.Ｉhle ）ら、１１Ｔrends in Ｇenetics、６９（１９９５）。インターロイキン１３（ＩＬ−１３）は、ＩＬ−４と共通する多くの生物学的活性を有する多面発現性サイトカインである。ズロースキー（Ｇ.Ｚurawski）およびドゥ・ブリーズ（Ｊ.Ｅ.de Ｖries）、１５Ｉmmunol.Ｔoday１９（１９９４）。ＩＬ−１３はＩＬ−４に対してほぼ３０％の配列相同性を有し、単球／マクロファージおよびＢ細胞に対してＩＬ−４様の活性を示す（ミンティー（Ａ.Ｍi nty）ら、３６２、Ｎature２４８（１９９３）およびマッケンジー（Ａ.Ｎ.Ｊ. ＭcKenzie）ら、９０Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ３７３５（１９９３））。しかしながら、ＩＬ−４と違ってＩＬ−１３はＴ細胞には作用を有しない。ＩＬ −１３の生物学的活性は、ＩＬ−１３結合サブユニットおよびＩＬ−４レセプターと共通する１または２以上のレセプター成分（「ＩＬ−４Ｒ」サブユニットおよび／またはγｃサブユニット）とからなる特定の高親和性細胞表面レセプターへの結合を介して発揮される。アバーサ（Ｇ.Ａversa）ら、１７８Ｊ.Ｅxp.Ｍed .２２１３（１９９３）。ＩＬ−１３がＩＬ−４と同様にＳＴＡＴシグナル伝達系を介して作動するとの証拠は、ＩＬ−１３が、ＧＡＳ様ＤＮＡ配列要素と結合するホスホチロシン含有タンパク質複合体をＩＬ−４によって誘発されるものと極めて類似の仕方で速やかに活性化するという観察に基づいている。ケーラーら、３４５ＦＥＢＳＬett.１８７（１９９４）。ＧＭ−ＣＳＦは、造血前駆細胞の生存、クローン拡張および分化に関与するコロニー刺激因子と呼ばれる一群の成長因子に属する。ガッソン（Ｊ.Ｇasson）、７７Ｂlood １１３１（１９９１）およびニコラ（Ｎ.Ａ.Ｎicola）、５８Ａnn. Ｒev.Ｂiochem .,４５（１９８９）。ＧＭ−ＣＳＦは、部分的に引き渡された前駆細胞の集団に作用し、これら細胞を顆粒球−マクロファージ経路に分割および分化させる。ＧＭ−ＣＳＦはまた、成熟顆粒球およびマクロファージをも活性化しうる。骨髄単球系列（myelomonocytic lineages）への作用に加え、ＧＭ−ＣＳＦは赤血球前駆細胞および巨核球前駆細胞の増殖を促進しうる。１８〜２２ｋＤの糖タンパク質であるＧＭ−ＣＳＦは、免疫刺激または炎症刺激に応答して、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、マスト細胞、内皮細胞および線維芽細胞を含む種々の細胞によって産生される。ＧＭ−ＣＳＦは、特定の標的細胞上の細胞表面レセプターと相互作用することにより作用を発揮する。該レセプターは、２つの鎖、すなわちＧＭ−ＣＳＦ−α およびＧＭ−ＣＳＦ−βからなる。パーク（Ｌ.Ｓ.Ｐark）ら、８９Ｐroc.Ｎatl .Ａcad.Ｓci. ４２９５（１９９２）。ＧＭ−ＣＳＦ−αはＧＭ−ＣＳＦに特異的であるが、ＧＭ−ＣＳＦ−βはＩＬ−５およびＩＬ−３のレセプターのβサブユニットと同一である。グッダル（Ｇ.Ｇoodall）ら、８Ｇrowth Ｆactors８７（１９９３）。ＧＭ−ＣＳＦ−αおよびＧＭ−ＣＳＦ−βのいずれも内生的なチロシンキナーゼ活性を有しないが、細胞をＧＭ−ＣＳＦで処理すると複数のタンパク質の速やかなチロシンリン酸化が引き起こされる。ＧＭ−ＣＳＦがＳＴＡＴシグナル伝達系を介して作動するとの証拠は、ＧＭ−ＣＳＦが種々の細胞株において、ＧＡＳ様ＤＮＡ配列要素に結合するホスホチロシン含有タンパク質複合体を速やかに活性化するという観察に基づいている。ラーナー（Ａ.Ｃ.Ｌarner）ら、２６１Ｓcience１７３０（１９９３）およびラムら、８３Ｂlood２０６３（１９９４）。ＧＭ−ＣＳＦがＳＴＡＴ５を活性化することが報告されており、それゆえ報告されたＧＭ−ＣＳＦ活性化複合体の構成員であるかもしれない。イールら、１１Ｔrends in Ｇenetics、６９（１９９５）。インターロイキン−３（ＩＬ−３）は、活性化Ｔ細胞によって主として産生される多面発現性サイトカインである。その作用としては、多分化能性造血前駆細胞並びに広範囲の系統分化に供された細胞の両者の増殖および分化を刺激することが挙げられる。イールら、Ｐeptide Ｇrowth Ｆactors and their Ｒeceptors 、スプリンガー−フェアラーク、ニューヨーク（１９９１）。この成熟タンパク質はみかけの分子量２８,０００を有し、少なくとも２つのポリペプチド鎖（ＩＬ−３ＲαおよびＩＬ−３Ｒβ）からなる細胞表面レセプター（ＩＬ−３Ｒ）に結合する。ＩＬ−３Ｒβ鎖はまたＩＬ−５レセプターおよびＧＭ−ＣＳＦレセプターの成員でもあるが、ＩＬ−３α鎖はＩＬ−３Ｒに独特のものである。ミヤジャマら、８２Ｂlood １９６０（１９９３）。ＩＬ−３がそのレセプターに結合するとチロシンキナーゼＪＡＫ２の活性化および一群の細胞質タンパク質の速やかなチロシンリン酸化を引き起こす。シルベノイネン（Ｏ.Ｓilvennoinen）ら、９０Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci .８４２９（１９９３）。ＳＴＡＴファミリーの成員を含有するＧＡＳ結合複合体は、ＩＬ−３で処理した細胞の抽出物で検出することができる。ラーナーら、２６１Ｓcience１７３０（１９９３）；イールら、１９Ｔrends Ｂiochem.Ｓci.２２２（１９９４）。ＩＬ−３がＳＴＡＴ５を活性化することが報告されており、それゆえ報告されたＩＬ−３活性化複合体の構成員であるかもしれない。イールら、１１Ｔrends in Ｇenetics、６９（１９９５）。エリスロポエチン（Ｅｐｏ）は、赤血球前駆細胞の増殖および成熟を起こさせる主要なホルモンである。クランツ（Ｓ.Ｂ.Ｋrantz）、７７Ｂlood４１９（１９９１）。インビトロでの証拠により、エリスロポエチンはまた血小板生成においても役割を有することが示されている。アン（Ａn）ら、２２Ｅxp.Ｈemat.１４９（１９９４）。みかけの分子量３０,０００を有するこのタンパク質は、腎臓で主として産生され、組織低酸素症の条件によって誘発される。エリスロポエチンは、ヘマトポエチンレセプターファミリーの成員である単一のポリペプチド鎖からなる細胞表面レセプター（ＥｐｏＲ）に結合することによって作用する。ダンドルア（Ａ.Ｄ'Ａndrea）ら、５７Ｃell２７７（１９８９）。ＥｐｏのＥｐｏＲへの結合に引き続いて起こる初期事象はチロシンキナーゼＪＡＫ２の活性化であり、このものはレセプター鎖の細胞質ドメインと非共有結合により会合している。ウィッツーン（Ｂ.Ｗiithuhn）ら、７４Ｃell２２７。ＥｐｏによるＪＡＫ２の活性化は、ＥｐｏＲおよび細胞質タンパク質のチロシンリン酸化の誘発と関連している。細胞をＥｐｏで処理すると、未だ未同定のＳＴＡＴタンパク質を含有するＧＡＳ結合活性の速やかな誘発も引き起こされ、これは遺伝子発現においてＥｐｏにより誘発された変化を引き起こすものと考えられる。ラムら、８３Ｂlood２０６３（１９９４）；フィンブルーム（Ｆinbloom）ら、１４Ｍol.Ｃ ell.Biol .２１１３（１９９４）。ＥｐｏがＳＴＡＴ５を活性化することが報告されており、それゆえ報告されたＥｐｏ活性化複合体の構成員であるかもしれない。イールら、１１Ｔrends in Ｇenetics、６９（１９９５）。Ｇ−ＣＳＦは、好中球顆粒球系列の造血細胞の増殖、分化および活性化に特異的作用を有することで最もよく知られた多面発現性サイトカインである。Ｇ−ＣＳＦはまた、ヒト顆粒球および単球並びに線維芽細胞、平滑筋細胞および筋線維芽細胞を含む間充織細胞に対して化学走化性活性を有することが報告されている。これらインビトロでの機能は、定常状態の造血の維持、感染に対する防御、炎症および修復におけるＧ−ＣＳＦのインビボでの役割の可能性を反映している。Ｇ−ＣＳＦを種々の動物モデルに投与した場合に循環好中球レベルの上昇が観察されている。Ｇ−ＣＳＦは現在、化学療法を受けたり臓器移植後の免疫抑制剤を与えられたりした結果として顆粒球減少症になった患者に臨床的に用いられている。ムーア（Ｍ.Ａ.Ｓ.Ｍoore）、９Ａnnu.Ｒev.Ｉmmunol.１５９（１９９１）、ニコラ、５８Ａnnu.Ｒev.Ｂiochem.４５（１９８９）およびピメンテル（Ｅ. Ｐimentel）、（１９９４）、Ｈandbook of Ｇrowth Ｆactors、ＶolIII、ピメンテル編、ＣＲＣプレス、ボカラントン、１７７頁。Ｇ−ＣＳＦは、Ｇ−ＣＳＦｒへ結合することによりその生物学的活性を発揮する。Ｇ−ＣＳＦのレセプター（Ｇ−ＣＳＦｒ）は、タイプＩサイトカインレセプタースーパーファミリーの成員であり、キナーゼドメインを欠き、単一のポリペプチド鎖からなると思われる。２つのＧ−ＣＳＦｒ鎖の二量体形成はＧ−ＣＳＦに対する高親和性の結合部位を形成する。種々のヘマトポエチンレセプタースーパーファミリー成員のうち、Ｇ−ＣＳＦｒは、ＩＬ−６レセプター、オンコスタチン（oncostatin）Ｍレセプター、および白血病阻害因子レセプターのシグナル伝達成員であるｇｐ１３０と最も密接に関連している。最近の研究によれば、骨髄性白血病細胞株においてＧ−ＣＳＦ処理が、Ｇ−ＣＳＦｒ、ＪＡＫＩおよびＪＡＫ２チロシンキナーゼおよび転写因子のＳＴＡＴファミリーの成員の速やかなチロシンリン酸化を引き起こすことが示されている。ニコルソン（Ｓ.Ｅ.Ｎicho lson）ら、９１Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ２９８５（１９９４）およびチアン（Ｓ.Ｓ.Ｔian）ら、８４Ｂlood １７６０（１９９４）。多くのサイトカインは類似の配列（ＧＡＳ／ＡＰＲＥ）に結合しうるＳＴＡＴタンパク質を活性化するけれども、これらサイトカインは別々の遺伝子のセットを調節している。このことは、これら遺伝子がこれらサイトカインの一つにのみ応答するように、これら遺伝子の幾つかにおける応答要素に関して特異性が存在することを示唆している。それゆえ、種々のサイトカインへ応答する能力において選択性を有する別々のクラスのＧＡＳ様配列が存在することがありうる。従って、ＳＴＡＴタンパク質を含むサイトカイン活性化タンパク質への結合能に関して選択性を示す特異的なＤＮＡ配列は、種々のサイトカインにより活性化されたＤＮＡ結合タンパク質により媒体される応答を選択的にアッセイすることを可能にする有用な手段となるであろう。上記で引用された文献の開示は、参照のためその全体が本明細書中に引用される。発明の要約本発明は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、インターロイキン３（ＩＬ −３）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）などのサイトカインを含むシグナル伝達分子に応答して、活性化転写調節タンパク質、好ましくはＳＴＡＴタンパク質へ直接的または間接的に結合するＤＮＡ調節要素を含むオリゴヌクレオチド配列に関する。驚くべきことに、該調節要素の各半分間を４、５、６または７のヌクレオチドで隔てると、種々の活性化された転写調節タンパク質に結合するかおよび／または活性化された転写調節タンパク質の単一のタイプまたはクラスにのみ特異的に結合する別々の調節要素が得られる。従って、本発明の調節要素は、ＩＬ−４などのシグナル伝達分子およびその同族の転写調節タンパク質、ＳＴＡＴ６の選択的アゴニストまたはアンタゴニストを見出すための転写アッセイにおいて用いることができる。とりわけ、本発明は、ヌクレオチド配列ＴＴＮｘＡＡ（式中、ＮはヌクレオチドＡ、Ｔ、ＣまたはＧから独立に選ばれ、ｘは４、５、６または７である）の調節要素（該調節要素は、シグナル伝達分子に応答して活性化された転写調節タンパク質に結合する）を含むオリゴヌクレオチド配列を提供する。さらに好ましくは、該調節要素は、ＴＴＣＮｙＧＡＡ、ＴＴＡＮｙＧＡＡ、ＴＴＡＮｙＴＡＡ、ＴＴＴＮｙＧＡＡおよびＴＴＴＮｙＴＡＡ（式中、Ｎは前記と同じ意味であり、ｙは２、３、４または５である）よりなる群から選ばれたヌクレオチド配列を含む。これらオリゴヌクレオチド配列は、その相補鎖を含む二本鎖であってよい。本発明はまた、プロモーターに機能的に連結した上記オリゴヌクレオチド配列を含むＤＮＡ構築物を提供するものであり、該プロモーターは異種遺伝子に機能的に連結しており、その際、該ＤＮＡ構築物は該異種遺伝子が該オリゴヌクレオチド配列およびプロモーターの転写制御下にあるような仕方で連結している。本発明はまた、適当な転写調節タンパク質を含有するトランスフェクションした宿主細胞をシグナル伝達分子の存在下で培養することを特徴とする、所望の異種遺伝子の制御された発現方法をも提供する。好ましくは、該方法におけるシグナル伝達分子はサイトカインであり、該転写調節タンパク質はＳＴＡＴタンパク質である。本発明はさらに、試料中の転写調節タンパク質（新規なＳＴＡＴタンパク質など）の存在を検出する方法であって、該試料を上記オリゴヌクレオチド配列と、該転写調節タンパク質が活性化され該オリゴヌクレオチド配列と結合して複合体を形成するような条件下で接触させ、ついで該試料中の該複合体の存在を検出することを特徴とする方法を提供する。その後、該複合体を該試料から分離し、転写調節タンパク質を調節要素から単離する。さらに、本発明は、遺伝子転写のアゴニストとして働きうる化合物の能力の測定方法であって、（ａ）該化合物を上記トランスフェクションした宿主細胞と、該化合物に応答して異種遺伝子が発現されうるような条件下で接触させ、ついで（ｂ）工程（ａ）での遺伝子発現レベルを該化合物の不在下での該宿主細胞からの遺伝子発現レベルと比較することを特徴とする方法を提供する。別法として、本発明はまた、遺伝子転写のアンタゴニストとして働きうる化合物の能力の測定方法であって、（ａ）該化合物を前以て決定した量のシグナル伝達分子の存在下、該シグナル伝達分子に応答して異種遺伝子が発現されうるような条件下で上記トランスフェクションした宿主細胞と接触させ、ついで（ｂ）工程（ａ）での遺伝子発現レベルを、シグナル伝達分子の存在下、該化合物の不在下での該宿主細胞からの遺伝子発現レベルと比較することを特徴とする方法を提供する。これら両方法において、異種遺伝子は、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、緑蛍光タンパク質（green fluorescent protein）またはβ−ガラクトシダーゼの異種遺伝子などのいかなる適当なリポーター遺伝子であってもよい。本発明はまた、ＡＮＴＴＣＮＮＮＮＧＡＡＮＡ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５２）またはその相補鎖ＴＮＴＴＣＮＮＮＮＧＡＡＮＴ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５３）（式中、Ｎは独立にＡ、Ｔ、ＣまたはＧから選ばれる）を含むＩＬ−４およびＩＬ−１３選択的なオリゴヌクレオチド配列をも提供するものであり、該オリゴヌクレオチド配列は、プロモーターおよび異種遺伝子に機能的に連結している場合に、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３によって活性化されたＳＴＡＴ６タンパク質を含む活性化された転写調節タンパク質に結合し、該異種遺伝子を転写の段階で調節する。定義「オリゴヌクレオチド」または「ＤＮＡ」分子または配列とは、一本鎖の形態かまたは二本鎖へリックスの形態でデオキシリボヌクレオチドアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）および／またはシトシン（Ｃ）からなる分子であって、本明細書において定義する本発明による「調節要素」を包含する。正確なサイズ、鎖の数および方向（すなわち、３'→５'または５'→３'）は多くの因子に依存するであろうし、これら因子はまた本発明のオリゴヌクレオチドの最終的な機能および用途に依存するであろう。それゆえ、「オリゴヌクレオチド」または「ＤＮＡ」なる語は、線状ＤＮＡ分子または断片、ウイルス、プラスミド、ベクター、染色体または合成由来のＤＮＡに認められる二本鎖ＤＮＡを包含する。本明細書において、特定の二本鎖ＤＮＡ配列は、５'から３'方向にのみ配列を記載する通常の慣習に従って記載するものとする。「調節要素」とは、オリゴヌクレオチド配列の全体またはその一部であって、該オリゴヌクレオチド配列に活性化された転写調節タンパク質または１または２以上の活性化された転写調節タンパク質を含む複合体が結合した場合に、関連する１または２以上の遺伝子（異種遺伝子を含む）の発現が転写レベルで制御されるものをいう。「シグナル伝達分子」とは、細胞の表面またはその近傍にあるレセプターと相互作用する、遊離または結合のいずれかの形態の細胞外ポリペプチド、オリゴ糖または他の非ペプチド性分子をいう。この相互作用が今度は、調節要素に結合する１または２以上の転写調節タンパク質の活性化を含む細胞内経路を引き起こさせ、それにより関連する１または２以上の遺伝子の発現を転写レベルで制御する。本明細書において「シグナル伝達分子」は、サイトカイン、ペプチド性および非ペプチド性ホルモン、抗体、細胞表面抗原などの天然に存在する分子、またはこれらシグナル伝達分子のいずれかの合成模造品、またはこれらシグナル伝達分子の作用を模倣した合成分子を包含する。「サイトカイン」とは、生物において最終的に表現型応答を引き起こすような仕方で細胞の増殖、分化および機能を制御する多様な可溶性ポリペプチド（成長因子およびホルモンを含む）をいう。本発明の調節要素および関連方法に有用な好ましいサイトカインとしては、ＩＦＮγ、１１−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｅｐｏ、Ｔｐｏ、成長ホルモン、プロラクチン、オンコスタチンＭ、Ｇ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＥＧＦ、ＣＮＴＦおよびＰＤＧＦが挙げられる。「転写調節タンパク質」とは、活性化されたときに本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列に直接、または転写調節タンパク質の複合体または他のアダプタータンパク質を介して間接的に結合して、関連する１または２以上の遺伝子の活性を転写レベルで制御する細胞質または核のタンパク質をいう。それゆえ、転写調節タンパク質は本発明のＤＮＡ調節要素に直接結合することができるし、または他のタンパク質に結合することによって調節要素に間接的に結合し、該他のタンパク質が今度は本発明のＤＮＡ調節要素に結合するかまたは結合しているようにすることができる。たとえば、ビールズら、１３Ｍol.Ｃell.Ｂiol.、１９６〜２０６（１９９３）参照。本明細書において転写調節タンパク質としては、ＳＴＡＴタンパク質（ゾングら、２６４Ｓcience、９５）、ＳＴＦタンパク質（シンドラーら、１３ＥＭＢＯＪ.、１３５０（１９９４））、乳腺特異的核因子（Ｍammary Ｇland−Ｓpecific Ｎuclear Ｆactor）（シュミット−ネイ（Ｍ.Ｓ chmidt−Ｎey）ら、６Ｍol.Ｅndochronol.、１９８８（１９９２）およびワカオ（Ｈ.Ｗakao）ら、２６７Ｊ.Ｂiol.Ｃhem.、１６３６５（１９９２））、ＡＰＲＦ（ウエジェンカ（Ｗegenka）、１３Ｍol.Ｃell.Ｂiol.、２７６）、ＧＨＩＦ（メイヤー（Ｍayer）、２６９Ｊ.Ｂiol.Ｃhem.、４７０１）、ＧＨＳＦおよびＥＰＯＳＦ（フィンブルーム、１４Ｍol.Cell.Bio.、２１１３）として当該技術分野で呼ばれているタンパク質、並びにすべての実質的に相同な類似体および対立遺伝子変異体が挙げられるが、これらに限られるものではない。「関連する１または２以上の遺伝子の発現を転写レベルで制御する」とは、かかる１または２以上の遺伝子の転写速度を変化させることを意味する。「ＳＴＡＴタンパク質」とは、ロックフェラーユニバーシティーのダーネル博士によって「転写のシグナルトランスデューサーおよびアクチベーター」（ＳＴＡＴ）として示された転写調節タンパク質をいう。ゾングら、２６４Ｓcience９５参照。本明細書においてＳＴＡＴタンパク質は、ｐ９１（ＳＴＡＴ１α）タンパク質、ｐ８４（ＳＴＡＴ１β）タンパク質、ｐ１１３（ＳＴＡＴ２）タンパク質およびＳＴＡＴ関連ｐ４８ファミリーのタンパク質を包含する。ビールズら、１２Ｍol.Ｃell.Ｂiol.、３３１５（１９９２）。さらに、ＳＴＡＴタンパク質はまた、ＳＴＡＴ３と呼ばれる結合タンパク質（ゾング、２６４Ｓcience９５）、およびＳＴＡＴ４と呼ばれる結合タンパク質（上記文献）をも包含する。加えて、ＭＧＦは現在、ＳＴＡＴ５と呼ばれており（グイヨー（Ｇouilleux）ら、１３ＥＭＢＯＪ.、４３６１〜４３６９（１９９４））、ＳＴＡＴ−ＩＬ−４（またはＳＴＡＴ６）が最近になってクローニングされた。ホウ（Ｈou）ら、２６５Ｓcience 、７３０（１９９４）およびイールら、１１Ｔrends in Ｇenetics、６９（１９９５）。以上のＳＴＡＴタンパク質のすべての実質的相同な類似体および対立遺伝子変異体もまた包含される。「活性化する」、「活性化された」、「活性化」その他類似の表現は、細胞内の１または２以上の転写調節タンパク質が配列特異的な仕方で本発明のＤＮＡ調節要素／オリゴヌクレオチド配列に直接または間接的に結合することができるように、該転写調節タンパク質が翻訳後に修飾されることを意味する。この修飾には、一般に、種々のプロテインキナーゼによる活性化を含む（これに限られるものではない）種々の機構による転写調節タンパク質のリン酸化が含まれる［たとえば、シュアイ、２５８Ｓcience、１８０８およびコーエン（Ｐ．Ｃohen）、１７ＴＩＢＳ、４０８（１９９２）参照］。「ＤＮＡ構築物」とは、本発明のオリゴヌクレオチド配列を導入させたプラスミド、ベクター、染色体およびウイルスを含む（これらに限られるものではない）あらゆる遺伝子要素をいう。たとえば、ＤＮＡ構築物は、プロモーターが本発明のオリゴヌクレオチド配列に機能的に連結しており、該配列が今度はルシフェラーゼリポーター分子の遺伝子などの異種遺伝子に機能的に連結したベクターであってよい。「プロモーター」とは、細胞内でＲＮＡポリメラーゼに直接または間接的に結合することができ、下流域（３'方向）のコード配列の転写を開始することができるＤＮＡ調節領域をいう。本発明の目的のためには、プロモーターはその３' 末端が転写開始部位と結合しており、バックグラウンドを越えるレベルの転写を開始するのに必要な最小限の数の塩基または要素を含むように上流（５'方向）に延びている。プロモーター内には、転写開始部位（Ｓ１マッピングにより都合よく定められる）、並びにＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメイン（共通配列）が認められるであろう。真核細胞のプロモーターには、しばしば（常にではないが）、「ＴＡＴＡ」ボックスおよび「ＣＣＡＴ」ボックスが含まれるであろう。原核細胞のプロモーターには、−１０共通配列および−３５共通配列に加えてシャイン−ダルガノ配列が含まれるであろう。「遺伝子」とは、核酸分子であって、その配列に特定のタンパク質の正常な制御された産生に必要なすべての情報を含むものをいう。ＤＮＡ構築物の「異種」領域（すなわち、異種遺伝子）とは、天然では構築物中の他の遺伝子成分と関連して認められることがない一層大きなＤＮＡ内の同定しうるＤＮＡセグメントをいう。それゆえ、異種遺伝子が哺乳動物の遺伝子である場合には、該遺伝子は通常、その採取源の生物のゲノム中では構造ゲノムＤＮＡにフランキングしないプロモーターによってフランキングされるであろう。ＤＮＡ構築物（本発明のオリゴヌクレオチド配列を含む）のプロモーターは、該プロモーターの存在が異種遺伝子（ルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、緑蛍光タンパク質および分泌型胎盤アルカリ性ホスファターゼなどのリポーター配列の遺伝子を含む）からの転写に影響を及ぼす場合には該プロモーターは該異種遺伝子に「機能的に連結している」。機能的に連結した配列はまた、同じＲＮＡ転写物に転写される２つのセグメントを含む。それゆえ、プロモーターと「リポーター配列」などの２つの配列は、該プロモーターで開始される転写によって該リポーター配列のＲＮＡ転写物が産生される場合には機能的に連結している。「機能的に連結している」ためには、２つの配列が相互に直ちに隣接している必要はない。宿主細胞は、該細胞中に外来ＤＮＡまたは異種ＤＮＡ（たとえば、ＤＮＡ構築物）が導入された場合には、そのようなＤＮＡで「トランスフェクションされた」という。トランスフェクションするＤＮＡは、該細胞のゲノムを構成するように染色体ＤＮＡ中に組み込まれても（共有結合により連結しても）よいし組み込まれなくてもよい。たとえば原核細胞、酵母および哺乳動物細胞では、トランスフェクションするＤＮＡはプラスミドなどのエピソーム要素上に保持されてよい。真核生物の細胞に関しては、安定にトランスフェクションされた細胞とは、染色体の複製によって娘細胞により遺伝されるようにトランスフェクションするＤＮＡが染色体中に組み込まれたものをいう。この安定性は、該真核生物細胞がトランスフェクションしたＤＮＡを含有する娘細胞の集団から構成される樹立細胞系またはクローンを確立する能力によって示される。「宿主細胞」とは、正常にまたは必要なｃＤＮＡでトランスフェクションした後に、所定のシグナル伝達分子、シグナル伝達（たとえば、キナーゼ）タンパク質、転写調節タンパク質および付属因子に対する関連するレセプター成員を発現することにより、該シグナル伝達分子が細胞表面に結合したときに転写調節要素タンパク質によって媒体された遺伝子転写が行われるようにする細胞株をいう。宿主細胞株は、正常にまたは必要なｃＤＮＡでトランスフェクションした後に、関連するサイトカインレセプター成員、ＪＡＫタンパク質、ＳＴＡＴタンパク質および付属因子を発現することにより、サイトカインが細胞表面に結合したときにＳＴＡＴによって媒体された遺伝子転写が行われるように、サイトカイン応答性であるのが好ましい。図面の簡単な記載本発明を添付の図面に基づいてさらに詳しく説明する。図１は、本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列に結合する転写調節タンパク質の転写活性を評価するのに用いることができるリポーター構築物の模式図である。図１Ａは、機能性のプロモーター配列の上流に調節要素（単一または複数）を含む一般的なリポーター構築物の模式図であり、これら２つ（プロモーター配列および調節要素）は下流の異種リポーター遺伝子配列に機能的に連結している。図１Ｂは、本明細書の実施例に記載し表７〜１０および１５〜１６にまとめた実験に用いる一層特定のリポーター構築物を示す。それゆえ、このリポーター構築物は、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ−３５〜＋１０（キャップ部位に関して）プロモーター配列の上流に位置する単一（または複数の）調節要素を含み、これら２つ（プロモーター配列および調節要素）は下流のホタルルシフェラーゼリポーター遺伝子配列に機能的に連結している。図２は、ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４によって活性化された転写調節タンパク質−ＤＮＡ結合複合体の結合パターンを示す電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）オートラジオグラムの再現である。ＥＭＳＡは本明細書の実施例１の記載に従って行った。図２Ａ〜２ＤのＥＭＳＡにおいて利用した放射性標識二本鎖オリゴヌクレオチドプローブの調製は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６６と６７（図２Ａ）、ＳＥＱＩＤＮＯ：７６と７７（図２Ｂ）、ＳＥＱＩＤＮＯ：７８と７９（図２Ｃ）、およびＳＥＱＩＤＮＯ：８０と８１（図２Ｄ）のオリゴヌクレオチドをアニールすることにより行った。発明の態様の詳細な記載本発明者らは、一連のＤＮＡ調節要素（すなわち、応答要素）が、種々のシグナル伝達分子に応答して、活性化された転写調節タンパク質に直接かまたは間接的に結合し、それによってかかる調節要素に機能的に連結した１または２以上の遺伝子の発現を転写レベルで制御することを見いだした。この点に関し、本発明者らは、驚くべきことに、該調節要素内の４、５、６または７ヌクレオチドのスペーシングにおける変化が、サイトカインによって誘発され活性化された種々の転写調節タンパク質に結合するものからサイトカインによって誘発され活性化された転写調節タンパク質の一つのタイプまたはクラスにのみに選択的に結合するものへ要素を変換させうることを見いだした。たとえば、配列ＴＴＮｘＡＡにおいて、４つのスペーサーヌクレオチド（すなわち、ｘ＝４）のスペーシングは、活性化されたＳＴＡＴ３転写調節タンパク質（たとえば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＬＩＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦまたはＧ−ＣＳＦによって誘発されたもの）に選択的な調節要素となり、一方、６または７のスペーサーヌクレオチドのスペーシングからは、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３およびＩＬ −１５サイトカインによって誘発された活性化転写調節タンパク質に選択的なものが得られる。しかしながら、５つのスペーサーヌクレオチドのスペーシングでは、ＳＴＡＴ１αおよびＳＴＡＴ３タンパク質並びにＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ −４、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｅｐｏ、Ｔｐｏ、成長ホルモン、プロラクチン、Ｇ− ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦサイトカインによって誘発される転写調節タンパク質（たとえば、ＳＴＡＴ５および／またはＳＴＡＴ６）を含む、サイトカインによって誘発される種々の異なる転写調節タンパク質に結合する調節要素となる。本発明による調節要素は、ヌクレオチド配列ＴＴＮｘＡＡ（式中、ＮはＡ、Ｔ、ＣまたはＧから独立して選ばれるスペーサーヌクレオチド、ｘは４、５、６または７である）から選ばれる。さらに好ましくは、調節要素は、ＴＴＣＮｙＧＡＡ、ＴＴＡＮｙＧＡＡ、ＴＴＡＮｙＴＡＡ、ＴＴＴＮｙＧＡＡおよびＴＴＴＮｙＴＡＡ（式中、Ｎは前記と同じ、ｙは２、３、４または５である）よりなる群から選ばれたヌクレオチト配列を有する。本発明による好ましいヌクレオチト配列としては、以下のものが挙げられる。（式中、Ｎは独立にＡ、Ｔ、ＣまたはＧから選ばれる）本発明による特に好ましい調節要素配列としては、以下のものが挙げられる。この点に関し、ＳＥＱＩＤＮＯ：２２、２５、３０および４３の調節要素はＳＴＡＴ３タンパク質選択的な調節要素を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７、４０および４４の調節要素はＳＴＡＴ１αおよびＳＴＡＴ３選択的な調節要素を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：２３、２６、２８、３１、５１、５２および５３の調節要素は活性化された種々の転写調節タンパク質に結合する調節要素を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３、３５、３８、４１および４５の調節要素はＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２およびＩＬ−４によって活性化された転写調節タンパク質に結合する調節要素を含み、ＳＥＱＩＤＮＯ：２４、２７、２９、３２、３４、３６、３９、４２、４６、４７、４８、４９および５０の調節要素はＩＬ−４およびＩＬ−１３によって誘発された活性化転写調節タンパク質に結合する調節要素を含む。さらに、これら調節要素は単独で、またはそれに隣接するヌクレオチド配列と一緒になって、本発明のオリゴヌクレオチド配列を形成する。この点において、そのようなオリゴヌクレオチド配列は、本発明の調節要素を含む８〜２００ヌクレオチドを含むものであるのが好ましい。しかしながら、２００ヌクレオチドを越えるものであっても、本発明の調節要素を含み、活性化された転写調節タンパク質に結合することができ、１または２以上の遺伝子の発現を転写レベルで制御することができるものであれば本発明の範囲に包含される。この点において、観察されたスペーシングの優先性が選択的な結合および転写活性を決定する重要な因子ではあるとしても、スペーサー分子の特定の配列並びにコア要素に隣接するヌクレオチドの特定の配列もまた結合およびトランス作用（transactivation）に影響を及ぼすことが当業者には理解されるであろう。本発明のオリゴヌクレオチド配列はまた、基本的な調節要素の２またはそれ以上の「ユニット」の多量体を含んでいてよい。この点において、そのような多量体オリゴヌクレオチド配列は、実際問題として本発明による同じまたは異なる調節要素を約２〜１５ユニット含んでいてよい。しかしながら、理論的には、そのような多量体オリゴヌクレオチド配列中の調節要素の数には限度はない。そのような多量体オリゴヌクレオチド配列は、転写調節タンパク質の検出、単離および／または精製のためのプローブとして有用である。さらに、本発明に従ってプロモーターおよび異種遺伝子を含むＤＮＡ構築物中に用いた場合には、調節要素の多量体は、種々のサイトカインまたは他のシグナル伝達分子に応答した該ＤＮＡ構築物からの該遺伝子の発現を増幅することができる。種々のシグナル伝達分子が、本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列に直接または間接的に結合する転写調節タンパク質を活性化させる。そのようなシグナル伝達分子の例としては、遊離または結合の両形態での、サイトカインや抗体などのポリペプチド、および細胞表面抗原、細胞の表面またはその近傍に一般に認められるオリゴ糖、ＴＵＢａｇ４（コンスタント（Ｐ.Ｃonstant）ら、２６４Ｓcience 、２６７（１９９４））などの非ペプチド性分子およびこれら分子の合成模造品が挙げられるが、これらに限られるものではない。それゆえ、本発明は、細胞または他の基体の表面またはその近傍に結合したシグナル伝達分子による細胞−細胞または細胞−基体の転写調節タンパク質活性化を包含する。好ましくは、本発明のシグナル伝達分子は、本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列に結合する転写調節タンパク質を活性化するサイトカインを含む。そのようなサイトカインの例としては、インターロイキン２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３および１５（ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、コロニー刺激因子１（ＣＳＦ−１）、インターフェロンアルファ、ベータおよびガンマ（ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ、神経成長因子（ＮＧＦ）、毛様体神経成長因子（ＣＮＴＦ）、脳由来神経成長因子（ＢＤＮＦ）、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、成長ホルモンおよびプロラクチンが挙げられるが、これらに限られるものではない。本発明に従って特に好ましいサイトカインとしては、ＩＦＮα、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｅｐｏ、Ｔｐｏ、オンコスタチンＭ、Ｇ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦおよびＣＮＴＦが挙げられるが、これらに限られるものではない。本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列はまた、本発明の該調節要素／オリゴヌクレオチド配列に対する結合特異性を示す新たな転写調節タンパク質を検出、単離および精製するうえで有用であることがわかるであろう。さらに、これら調節要素／オリゴヌクレオチド配列は、新たなＳＴＡＴタンパク質またはＳＴＡＴ関連転写調節タンパク質を見いだすうえで有用であることもわかるであろう。この点において、そのような新たな転写調節タンパク質の検出は以下の技術を用いて行うことができる。ＨｅｐＧ２などの細胞を適当なサイトカイン、たとえばＩＦＮγで１５分間処理して１または２以上の転写調節タンパク質を活性化させる。ついで、これら細胞の核および細胞質の抽出物を常法に従って調製し、レビー、３Ｇenes Ｄev.,１３６２およびケスラー、４Ｇenes Ｄev.,１７５３に記載されているように（その開示を参照のため本明細書中に引用する）、特異的な結合をほとんどまたは全く示さないであろう未処理細胞と比較して、調節要素／オリゴヌクレオチド配列への結合を電気泳動移動度シフトアッセイにより試験する。さらに、ＤＮＡ調節要素結合活性はまた、細胞膜を添加した細胞質抽出物をサイトカインなどのシグナル伝達分子で処理することによりインビトロで刺激することもできる。転写調節要素に特異的な抗体が利用できる場合には、活性化された調節タンパク質への本発明の調節要素の結合を特異的に妨害させ、それによって転写調節タンパク質の同定を補助するために該抗体を用いることができる。さらに、本発明の調節要素／オリゴヌクレオチドを用いて同定または精製された未知の転写調節タンパク質は、当該技術分野でよく知られた方法を用い、該転写調節タンパク質に特異的な抗体を調製するために動物を免疫するのに用いることができる。たとえば、ハーロウ（Ｅ.Ｈarlow）ら、Ａntibodies：ＡＬaboratory Ｍanual,コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク（１９８８）（その開示を参照のため本明細書中に引用する）を参照。それゆえ、本発明の調節要素／ヌクレオチド配列は、当該技術分野でよく知られた種々の核酸検出系に使用するものと同様に「プローブ」として用いることができるが、本発明のプローブでは核酸配列ではなく、本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列に特異的に結合するタンパク質を検出するのに用いる点が異なる。そのような核酸検出アッセイの感度は、観察者によってシグナルが検出される仕方を変えることによって増大させることができる。たとえば、アッセイ感度は、酵素標識、放射性同位体標識、蛍光標識および修飾塩基を含む（これらに限られるものではない）広範囲の種々の検出可能な標識を用いた標識オリゴヌクレオチド配列を用いることによって増大させることができる。たとえば、米国特許第４,５８１,３３３号、同第４,３５８,５３５号、同第４,４４６,２３７号、同第４,５８２,７８９号、および同第４,５６３,４１７号、並びにヨーロッパ特許出願第ＥＰ１４４９１４号およびＥＰ１１９４４８号（その開示を参照のため本明細書中に引用する）を参照。それゆえ、本発明によるＤＮＡプローブは、放射性同位体、酵素、蛍光標識、化学標識または修飾塩基などの検出可能な標識で標識した、調節要素を単独でまたは本発明の一層長いオリゴヌクレオチド配列の一部として含むのが好ましい。それゆえ、本発明は、試料中の新たな転写調節タンパク質の存在を検出する方法を提供する。そのような試料としては、細胞、細胞培養上澄み液、細胞または組織抽出物、またはその特定のフラクション、および血液、血清、尿、唾液などの他の生物学的流体を含む（これらに限られるものではない）生物学試料が好ましい。本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列の試料中の転写調節タンパク質への結合は、当該技術分野で知られた適当な手段により検出することができる。たとえば、直接または間接、または競合結合アッセイを用いることができる。そのようなアッセイにおいて、ついで該標識プローブと試料中のタンパク質性物質との会合を検出する。好ましい態様において、放射性標識したヌクレオチドを導入することによりオリゴヌクレオチド配列を修飾する。検出されたら、当該新たな転写調節タンパク質を当業者によく知られた種々の技術によりプローブ−タンパク質複合体から分離、精製することができる。たとえば、そのような単離および精製は、精製しようとするタンパク質と固定化リガンドとの相互作用を利用したアフィニティークロマトグラフィーに基づいて行うことができる。本発明において、支持体上に固定化した本発明の調節要素および／またはオリゴヌクレオチド配列は固定化リカンドとして働き、これを用いて新たな転写調節タンパク質を試料から単離および精製することができる。好ましい態様において、本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列を固相支持体または担体上に固定化させる。本明細書において「固相担体または支持体」とは、本発明のオリゴヌクレオチド配列／ＤＮＡ調節要素の結合を可能とするあらゆる支持体をいう。よく知られた支持体または担体としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然または修飾したセルロース、ポリアクリルアミド、アガロースおよびマグネタイトが挙げられる。核酸を固相に結合させる方法、これら方法に有用な固相物質、および結合リガンドからタンパク質を溶出する手段は当業者によく知られている。上記特定の方法に加え、アフィニティー分離するに先立って行う精製工程として、硫酸アンモニウム沈殿、サイズ排除クロマトグラフィー（ゲル濾過）、イオン交換クロマトグラフィー、分別沈殿などの１または２以上の追加の方法が挙げられ、これらはすべて当該技術分離でよく知られている。疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）として知られる方法もまた有用であり、これは溶質と疎水性であるゲルとの相互作用に基づくものである。疎水性相互作用は高イオン強度において最も強いため、この形態の分離法は塩沈殿またはイオン交換法の後に行うのが都合がよい。ＨＩＣ支持体からの溶出は、溶媒、ｐＨ、イオン強度を変えることによって、またはカオトロープ剤またはエチレングリコールなどの有機修飾剤を加えることによって行うことができる。ＨＩＣの一般原理は、米国特許第３,９１７,５２７号および同第４,０００,０９８号に記載されている。ＨＩＣを用いた特定のタンパク質の精製は、米国特許第４,３３２,７１７号、同第４, ７７１,１２８号、同第４,７４３,６８０号、同第４,８９４,４３９号、同第４, ９０８,４３４号および同第４,９２０,１９６号（その開示を参照のため本明細書中に引用する）に記載されている。本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列は、プロモーターおよび異種遺伝子に機能的に連結した調節要素／オリゴヌクレオチド配列を含む組換えＤＮＡ構築物中に含まれていてよい。一般に、異種遺伝子としては、ルシフェラーゼの遺伝子などのリポーター遺伝子が含まれる。この点において、本発明のリポータープラスミドなどの組換えＤＮＡ構築物は、当業者によく知られた通常の分子生物学、微生物学、および組換えＤＮＡ法を用いて構築することができる。そのような方法は、マニアチス（Ｍaniatis）、フリッチュ（Ｆritsch）＆サンブルック（Ｓambrook）、「Ｍolecular Ｃloning:ＡＬaboratory Ｍanual」（１９８２）；「ＤＮＡＣloning:ＡＰractical Ａpproach」Ｖolumes ＩおよびII（グロバー（Ｄ.Ｎ.Ｇlover）編、１９８５）；「Ｏligonucleotide Ｓynthesis」（ゲイト（Ｍ.Ｊ.Ｇait）編、１９８４）；「Ｎucleic Ａcid Ｈybridization」［ヘイムズ（Ｂ.Ｄ.Ｈames）＆ヒギンズ（Ｓ.Ｊ.Ｈiggins）編、（１９８４）］；「Ａnimal Ｃell Ｃulture」［フレッシュネイ（Ｒ.Ｊ.Ｆreshney）編、（１９８６）］；「Ｉmmobilized Ｃells and Ｅnzymes」［ＩＲＬプレス（１９８６）］およびパーバル（Ｂ.Ｐerbal）、「ＡＰractical Ｇuide to Ｍolecular Ｃlon ing」（１９８４）（その開示を参照のため本明細書中に引用する）を含む文献に詳細に説明されている。本発明によるＤＮＡ構築物において有用なプロモーターとしては、適当な宿主細胞中にトランスフェクションされた場合に、本発明の調節要素と一緒になって所望の異種遺伝子の転写を駆動させうるすべての原核細胞、真核細胞またはウイルスプロモーターが挙げられる。適当な原核細胞プロモーターとしては、Ｔ４、Ｔ３、Ｓｐ６およびＴ７ポリメラーゼによって認識されるプロモーター、バクテリオファージのＰ_RおよびＰ_Lプロモーター、大腸菌の転写調節タンパク質、ｒｅｃＡ、熱ショック、およびｌａｃＺプロモーター、バシラス・サチリスの−アミラーゼおよび−２８−特異的プロモーター、バシラス属のバクテリオファージのプロモーター、ストレプトマイセスプロモーター、バクテリオファージのｉｎｔプロモーター、ｐＢＲ３２２のβ−ラクタマーゼ遺伝子のｂｌａプロモーターおよびｐＰＲ３２５のクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子のＣＡＴプロモーターが挙げられるが、これらに限られるものではない。たとえば、グリック（Ｂ.Ｒ.Ｇlick）、Ｊ.Ｉnd.Ｍicrobiol.,２７７〜２８２（１９８７）；セナチエンポ（Ｙ.Ｃenatiempo）、６８Ｂiochimie、５０５〜５１６（１９８６）；ワトソン（Ｊ.Ｄ.Ｗatson）ら、Ｍolecular Ｂiology of the Ｇene、第４版、ベンジャミンカミンズ、メンロパーク、カリフォルニア（１９８７）およびゴッテスマン（Ｓ.Ｇottesman）、１８Ａnn.Ｒev.Ｇenet.,４１５〜４４２（１９８４）（その開示を参照のため本明細書中に引用する）を参照。好ましい真核細胞プロモーターとしては、酵母ｃｙｃ−１プロモーター、マウスメタロチオネインＩ遺伝子のプロモーター、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、および酵母ｇａｌ−４遺伝子プロモーターが挙げられるが、これらに限られるものではない。グアランテ（Ｇuarante）ら、７８Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ、２１９９〜２２０３（１９８１）、ハマー（Ｄ.Ｈamer）ら、１Ｊ.Ｍol.Ａppl.Ｇen.２７３〜２８８（１９８２）、マックナイト、３１Ｃell、３５５〜３６５（１９８２）、ベノイスト（Ｃ.Ｂen oist）ら、２９０Ｎature（ロンドン）、３０４〜３１０（１９８１）、ジョンストン（Ｓ.Ａ.Ｊohnston）ら、７９Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.（ＵＳＡ）、６９７１〜６９７５（１９８２）およびシルバー（Ｐ.Ａ.Ｓilver）ら、８１Ｐroc. Ｎatl.Ａcad.Ｓci.（ＵＳＡ）、５９５１〜５９５５（１９８４）（その開示を参照のため本明細書中に引用する）を参照。本発明によるＤＮＡ構築物では、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターを用いるのが好ましい。本発明の組換えＤＮＡまたは構築物分子の第三の成員は、配列の如何にかかわらずヌクレオチドのセットからなる「異種遺伝子」である。そのような異種遺伝子の例としては、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型胎盤のアルカリ性ホスファターゼ、ヒト成長ホルモン、ｔＰＡ、緑蛍光タンパク質およびインターフェロンの構造遺伝子が挙げられるが、これらに限られるものではない。本発明の構築物および方法に使用可能な異種遺伝子の一層広範なリストを知りたければ、ボーデ（Ｂeaudet）、３７Ａm.Ｊ.Ｈum.Ｇen.、３８６〜４０６（１９８５）を参照のこと。異種遺伝子は、その生成物をプロモーターおよび本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列による転写の調節を評価するのに用いるリポーター遺伝子を含むのが好ましい。この「リポーター配列」の発現は、容易に検出可能なリポーター産物（たとえば、タンパク質）の生成となる。リポーター配列は、当該技術分野で知られた手段による同定または検出を可能とするかまたは容易とする物理的および化学的特性を該リポーター分子が有するように選択するのが好ましいであろう。一つの態様において、リポーター分子の存在は、該リポーター分子に特異的に結合しうる抗体または抗体断片を用いて検出されるであろう。他の態様において、β−ガラクトシダーゼやルシフェラーゼなどのリポーターを酵素的または免疫学的にアッセイすることができる。好ましいリポーター分子はＬＵＣであり、当該技術分野でよく知られている。たとえば、ドゥ−ウエット（Ｊ.Ｒ.Ｄe−Ｗet）ら、７Ｍol.Ｃell Ｂiol.、７２５（１９８７）参照。このものは昆虫の遺伝子であるため哺乳動物細胞には存在せず、該酵素産物を細胞抽出物中で直接アッセイすることができる。酵素活性のレベルは生成した酵素の量に対応し、これが今度は発現レベルを明らかにする。加えて、ＬＵＣｍＲＮＡはまた直接測定することもできる。一般に、ＬＵＣ遺伝子を含む本発明の組換えＤＮＡ分子を含有するプラスミドを哺乳動物細胞中に導入し、ついで該細胞を集密的となるかまたは集密的に近くなるまで増殖させる。この点において、適当なシグナル伝達分子に応答して１または２以上の転写調節タンパク質を活性化しうるあらゆる宿主細胞を、本発明のＤＮＡ構築物でトランスフェクションすることができる。そのようなサイトカイン応答性の宿主細胞としては、ＨｅｐＧ２細胞、Ｕ９３７細胞、ＭＥ−１８０細胞、ＴＦ−１細胞およびＮＦＳ−６０細胞などの哺乳動物細胞が好ましい。リポーター細胞を、転写調節タンパク質を誘発もしくは活性化しうるシグナル伝達分子を含有していると思われる化合物または試料、たとえば細胞と接触させることによって該細胞から分泌または放出されたシグナル伝達分泌を含有する増殖培地の試料で処理する。ＬＵＣ−産生リポーター細胞を抽出し、得られた可溶性抽出物にルシフェリンおよびＡＴＰを加える。これら化合物の存在下でルシフェラーゼの作用が光を発生し、これをルミノメーターで検出する。発生した光の量は、細胞抽出物中に存在するルシフェラーゼの量に正比例する。宿主細胞中にトランスフェクションした適当なＤＮＡ構築物を用いることにより、本発明は所望の遺伝子の制御された発現方法を提供する。それゆえ、トランスフェクションした宿主細胞にサイトカインなどのシグナル伝達分子を適用することにより、当業者によく知られた種々の細胞培養法および発酵法によって異種遺伝子の発現を駆動させ、ヒト成長ホルモンなどの所望の生成物を定められた量で産生させることができる。別法として、ＤＮＡ構築物にルシフェラーゼ遺伝子などのリポーター遺伝子が含まれている場合には、宿主細胞中への該ＤＮＡ構築物のトランスフェクションにより、シグナル伝達分子、たとえばサイトカインや、細胞と接触させることにより該細胞によって分泌または放出されたシグナル伝達分子を含むようになった増殖培地の試料に応答して、リポーター産物の転写活性を測定する都合のよい手段が得られる。重要なことに、アッセイした転写調節タンパク質によってＬＵＣの転写が活性化される場合には、転写調節タンパク質を欠くコントロールに比べてＬＵＣの合成が増大する。それゆえ、生成したＬＵＣ酵素の量は、本発明の調節要素／オリゴヌクレオチド配列（ＬＵＣ遺伝子に機能的に連結している）に結合した活性化された転写調節タンパク質によって誘発された転写の間接的な測定手段である。ＨｅｐＧ２細胞などの好ましい宿主細胞を本発明によるリポーターＤＮＡ構築物でトランスフェクションした場合、これを、活性化された転写調節タンパク質により遺伝子転写を誘発するシグナル伝達分子のアゴニストまたはアンタゴニストを検出するためのアッセイにおいて利用することができる。本明細書において遺伝子転写のアゴニストまたはアンタゴニストとしては、シグナル伝達経路のいずれかの点において、１または２以上の転写調節タンパク質の活性化および該活性化タンパク質のＤＮＡ調節要素への結合によるシグナル伝達分子と細胞表面レセプターとの相互作用に介在する化合物が含まれる（その最終結果は遺伝子転写の制御である）。さらに、本明細書において遺伝子転写のアゴニストまたはアンタゴニストにはまた、そのようなアゴニストまたはアンタゴニスト特性を有する公知化合物の増強剤も含まれる。アゴニストの検出は、トランスフェクションした宿主細胞を化合物または化合物の混合物と接触させ、所定の期間の後、処理細胞内での遺伝子発現のレベル（たとえば、生成したルシフェラーゼのレベル）を測定することにより行うことができる。ついで、この発現レベルを、該化合物または該化合物の混合物の不在下での該リポーター遺伝子の発現レベルと比較する。これら遺伝子発現のレベルに差異が存在するなら、それは、該化合物または該化合物の混合物が細胞内転写調節タンパク質の活性化をサイトカインなどの公知のアゴニストシグナル伝達分子と同様の仕方でアゴナイズする（agonize）かどうかを示すものである。さらに、処理細胞および未処理細胞で発現されたリポーター産物のレベル間の大きさは、転写調節タンパク質経路による遺伝子転写のアゴニストとしての化合物または化合物の混合物の強度の相対的指標を提供する。別法として、そのようなトランスフェクションした宿主細胞は、本発明のＤＮＡ構築物でトランスフェクションした宿主細胞を利用した遺伝子転写の公知のアゴニスト（たとえば、ＩＬ−４などのサイトカイン）に対するアンタゴニストを見いだすために用いることができる。そのようなアッセイにおいて、所望の化合物または化合物の混合物を、所定の濃度に保持した１または２以上の公知のアゴニスト（たとえば、サイトカイン）とともに宿主細胞と接触させる。該化合物または該化合物の混合物が宿主細胞中での遺伝子発現のレベルを、該化合物の不在下だが該公知アゴニストの存在下で宿主細胞から得られた遺伝子発現のレベルよりも低いレベルに抑制する程度は、そのような化合物または化合物の混合物のアンタゴニスト特性の相対的強度の指標を与える。それゆえ、本発明は、適当なＤＮＡ構築物およびトランスフェクションした宿主細胞において本発明の調節要素／オリゴヌクレオチドを利用した、遺伝子転写のアゴニストおよびアンタゴニストのアッセイ法を提供する。さらに、これら方法を利用して見いだされたアゴニストおよびアンタゴニスト化合物は、種々のサイトカインによって誘発された疾患状態および条件に介入するため、またはサイトカインの不足によって引き起こされる疾患状態、たとえば炎症、感染、貧血、血球減少症および癌性または前癌性状態を改善するための医薬として用いることができる。つぎに、本発明を下記実施例に基づいてさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限られるものではない。実施例１試薬オリゴヌクレオチドをオペロンテクノロジース(Ｏperon Ｔechnologies)［アラメダ(Ａlameda)，カリフォルニア州］から入手した。ＩＦＮγは、Ｊ.Ｅ.ダーネル(Ｄarnell)博士［ロックフェラー大学，ニューヨーク，ニューヨーク州：ジェンザイム(Ｇenzyme)，ケンブリッジ，マサチューセッツ州から市販されている］の贈物であった。組換えヒトＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、オンコスタチンＭ、ＩＬ−３およびＩＬ−４をＲ＆Ｄシステムズ(Ｓystems)［ミネアポリス，ミネソタ州］から入手した。組換えＩＬ−１３をバイオソース(Ｂiosource)［カマリロ (Ｃamarillo)，カリフォルニア州］から入手した。組換えＩＬ−２をカイロン( Ｃhiron)［エマリービル(Ｅmeryville)，カリフォルニア州］から入手した。組換えヒトＥpoおよびＧ−ＣＳＦは、アムゲン社(Ａmgen,Ｉnc.)［サウザンドオークス(Ｔhousand Ｏaks)，カリフォルニア州］の製品であった。プロテアーゼ阻害剤およびポリd(Ｉ−Ｃ)ポリd(Ｉ−Ｃ)は、ベーリンガーマンハイム(Ｂoehring er Ｍannheim)［インディアナポリス(Ｉndianapolis)，インディアナ州］の製品であった。細胞および細胞培養ＨepＧ２細胞をＡＴＣＣ［ロックビル(Ｒockville)，メリーランド州］から入手して、ウシ胎児血清(１０％ｖ／ｖ)、グルタミン(２mＭ)および硫酸ゲンタマイシン(５０μg／ml、バイオウィットテイカー(Ｂio Ｗhittaker))を補ったイーグルの最少必須培地［ＥＭＥＭ,バイオウィットテイカー,ウォーカーズビル(Ｗa lkersville)，メリーランド州］中で増殖させた。Ｕ−９３７細胞をＪ.Ｅ.ダーネル(Ｄarnell)博士から入手して(ＡＴＣＣから市販されている)、ウシ胎児血清 (１０％ｖ／ｖ)、グルタミン(２mＭ)および硫酸ゲンタマイシン(５０μg／ml)を補ったＲＰＭＩ−１６４０［バイオウィットテイカー］中で増殖させた。ＭＥ− １８０細胞をＡＴＣＣから入手して、ウシ胎児血清(１０％ｖ／ｖ)、グルタミン (２mＭ)および硫酸ゲンタマイシン(５０μg／ml)を補ったＭcＣoy's５Ａ［ジブコ(Gibco)／ＢＲＬ，ゲイザーズブルグ(Ｇaithersburg)，メリーランド］中で増殖させた。ＣＴＬＬ−２およびＴＦ−１細胞をＡＴＣＣから入手して、ウシ胎児血清(１０％ｖ／ｖ)、グルタミン(２mＭ)、硫酸ゲンタマイシン(５０μg／ml) 、およびＩＬ−２(ＣＴＬＬ−２，２００Ｕ／mｌ)またはＧＭ−ＣＳＦ(ＴＦ−１，５ng／ml)を補ったＲＰＭＩ−１６４０［バイオウィットテイカー］中で増殖させた。ＩＬ−３依存性ＮＦＳ−６０細胞をＪ.Ｎ.イール(Ｉhle)博士［セイント・ジューデ小児研究病院(Ｓt.Ｊude Ｃhildren's Ｒesearch Ｈospital)，メンフィス(Ｍemphis)，テネシー州］から入手して、ウシ胎児血清(１０％ｖ／ｖ) 、グルタミン(２mＭ)、硫酸ゲンタマイシン(５０μg／ml)、および１０％ＷＥＨＩ−３Ｂ−ならし増殖培地(ＩＬ−３を与えるため)を補ったＲＰＭＩ−１６４０中で保存した。培養基からＷＥＨＩ−３Ｂならし培地を回収することにより、因子依存性ＮＦＳ−６０細胞を選抜した。細胞は約２週間で新しい増殖条件に適合して、親のＮＦＳ−６０細胞と同様に増殖した。集密度が５０〜７５％の時点でＨepＧ２およびＭＥ−１８０細胞を、密度が２×１０⁵〜１×１０⁶／mlの時点でＵ−９３７、ＣＴＬＬ−２、ＴＦ−１およびＮＦＳ−６０細胞をサイトカインで処理した。サイトカインを以下の濃度で使用した。ＩＦＮγ，５ng／ml、ＩＬ− ４，１０〜３０ng／ml、ＩＬ−６，１０ng／ml、ＧＭ−ＣＳＦ，５ng/ml、Ｅpo ，４〜６Ｕ／ml、ＩＬ−２，２００Ｕ／ml、ＩＬ−３，２０ng/ml、ＩＬ−１３，６０ng／ml、およびＧ−ＣＳＦ，２０ng／ml。核抽出物の調製および電気泳動移動度シフトアッセイＨ.Ｂ.サドウスキー(Ｓadowski)およびＭ.Ｚ.ジルマン(Ｇilman)，３６２ネイチャー (Ｎature)，７９（１９９３）［この開示は引用により本明細書に包含される］で記載されているＮＰ４０溶菌により、核抽出物を調製した。ブラッドフォード染料(Ｂradforddye)結合アッセイ［バイオ−ラッド研究所(Ｂio−Ｒad Ｌ aboratories)，ヘラクレス(Ｈercules)，カリフォルニア州］を利用して、タンパク質濃度を測定した。未処理のＨepＧ２細胞、ＩＦＮγで１５分間処理したＨ epＧ２細胞、ＩＬ−６で１５分間処理したＨepＧ２細胞、未処理のＵ−９３７細胞、ＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−４で３０分間処理したＵ−９３７細胞、ＩＬ− ２を１８時間欠乏させておいた後、未処理のままにしておくか、またはＩＬ−２で３０分間処理したＣＴＬＬ−２細胞、ＧＭ−ＣＳＦを１８時間欠乏させておいた後、未処理のままにしておくか、またはＥpo、ＩＬ−３もしくはＧＭ−ＣＳＦで３０分間処理したＴＦ−１細胞、未処理のままにしておくか、またはＩＬ−４もしくはＩＬ−１３で３０分間処理したＭＥ−１８０細胞、およびＩＬ−３を１６〜１８時間欠乏させておいた後、未処理のままにしておくか、またはＧ−ＣＳＦ、ＩＬ−３もしくはＩＬ−６で１０分間処理したＮＦＳ−６０細胞のいずれかより、核抽出物を調製した。以下の配列を有するオリゴヌクレオチドをアニーリングすることにより、電気泳動移動度シフトアッセイ(ＥＭＳＡｓ)で使用する二本鎖プローブオリゴヌクレオチドを形成させた。配列中、肉太型活字で示したヌクレオチド配列は、それらの二本鎖相補鎖を含め、本発明の調節要素としての活性に関して試験するヌクレオチド配列に対応する。 [α−³²Ｐ]−dＧＴＰおよび／または[α−³²Ｐ]−dＡＴＰ［アメルシャム社( Ａmersham Ｃorporation)，アーリントンハイツ(Ａrlington Ｈeights)，イリノイ州］の存在下、突出している端をクレノウフラグメント［ベーリンガーマンハイム］で閉じ込めることにより、アニーリングしたオリゴヌクレオチドを標識した。電気泳動移動度シフトアッセイ(ＥＭＳＡｓ)は、塩化ナトリウム(８０mＭ) 、フッ化ナトリウム(３mＭ)、モリブデン酸ナトリウム(３mＭ)、ＤＴＴ(１mＭ) 、ＥＤＴＡ(０.１５mＭ)、ＥＧＴＡ(０.１５mＭ)、グリセロール(８％ｖ／ｖ，核抽出から得られる寄与物を含む)、ポリd(Ｉ−Ｃ)ポリd(Ｉ−Ｃ)(７５μg／ml) 、放射性標識プローブ(約０.２ng)および合計５〜１０μgのタンパク質を含有する核抽出物を含むＨＥＰＥＳ緩衝液［１３mＭ，pＨ７.６，シグマケミカル(Ｓig ma Ｃhemical)，セントルイス，ミズーリ州］中で行った。応答物を室温で２０分間インキュベートした後、０.２５ＸＴＢＥ［１ＸＴＢＥは、ＥＤＴＡ(１m Ｍ)を含むトリスボレート(８９mＭ)，pＨ８.０である］およびグリセロール(５％ｖ／ｖ)を含む５％ポリアクリルアミドゲル上に溶解した。０.２５ＸＴＢＥ中、２０Ｖ／cmの割合でゲルを４℃で流動させた後、乾燥して、オートラジオグラフィーにかけた。オリゴヌクレオチド配列番号５４〜１０５に関するＥＭＳＡの結果から測定される比結合親和性を目視により評価して、以下の段階に分類した。 (−) かろうじて認められる、または認められない、ＥＭＳＡオートラジオグラム上の特異的複合体に対応するバンド［例えば、第２Ｃ図，第２および第３レーンを参照］。 (＋) 容易に認められるが強度の弱い、ＥＭＳＡオートラジオグラム上の特異的複合体に対応するバンド［例えば、第２Ａ図，第３レーンを参照］。 (++) 容易に認められて並の強度の、ＥＭＳＡオートラジオグラム上の特異的複合体に対応するバンド［例えば、第２Ｂ図，第５レーンを参照］。 (+++) 容易に認められて強度の強い、ＥＭＳＡオートラジオグラム上の特異的複合体に対応するバンド［例えば、第２Ｃ図，第６レーンを参照］。この目視評価システムは、具体的な数値とは全く違ったものとして、ＥＭＳＡ結合データで識別可能な相違や傾向を分析するのに十分である。所望ならば、蛍りん光体イメージャー(imager)またはデンシトメーター［例えば、バイオ−ラッド研究所から市販されている］の使用により、本明細書で記載する相違を定量的に評価するための方法を提供することができる。オリゴヌクレオチド配列番号５４〜１０５の調節要素に関する結合親和性の具体的目視評価を以下の表１〜６で示す(表中、スペーシングヌクレオチドを肉太型活字で強調する)。表１〜６中のデータを評価する際、ＩＬ−６がＨepＧ２細胞において３つの特異的ＤＮＡ結合複合体を誘発することを認識すべきである［Ｐ.ラム(Ｌamb)ら，８３ブロッド(Ｂlood）２０６３（１９９４）］。従って、「ＩＬ−６」と記した欄に関して、評価する複合体は、ＥＭＳＡにおいてＩＬ−６により誘発される、最も緩慢に移動する複合体、すなわちＳＴＡＴ３ホモダイマーである［Ｚ.ゾング(Ｚhong)ら，２６４サイエンス(Ｓcience)９５］ことから、ＩＦＮγ複合体に関して評価される、ＳＴＡＴ１αを含む複合体を反映するものではない。さらに、表１〜６中に含まれる結果を解析する場合、具体的な数値とは全く違ったものとして、傾向に関してデータを分析すべきである。このことは、ＥＭＳＡアッセイにおいて繊細な感受性が本質的に欠けていることによる。こういった変化性は、少なくとも幾らかが、使用する核抽出物の量における相違、セルラインの相違、およびタンパク質濃度測定における変化性から生ずる。表１〜６中に要約した結合データは、驚いたことに、応答性宿主細胞をＩＦＮ γ、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４で処理することにより活性化された活性化転写調節タンパク質に対して、パリンドローム要素(ＴＴ−スペース−ＡＡ)間に異なったヌクレオチドスペーシングを含んでなるＤＮＡ調節要素配列が様々な親和性を有することを示す。具体的には、４つの塩基対スペーシングが、ＩＬ−６、すなわちＳＴＡＴ３により誘発される活性化転写調節タンパク質複合体への結合において著しい選択性を示す。さらにこのことは、オンコスタチンＭ、ＬＩＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１およびＣＮＴＦといったような、ＳＴＡＴ３を活性化する他のシグナル伝達分子に当てはまる。５つの塩基対スペーシングは、活性化転写調節タンパク質複合体に対してほとんど選択性を示さないが、試験したサイトカイン誘発複合体の全てに対して、ほとんどの場合、親和性を示すことに注目すべきである。６つの塩基対スペーシングは、著しい選択性を再び示すが、この場合、その結合はＩＬ−４により誘発される活性化転写調節タンパク質複合体(すなわちＳＴＡＴ５および／またはＳＴＡＴ６)に対するものである。該結合データはさらに、スペーシングヌクレオチドの厳密な同一性もまた結合親和性に幾らか影響を及ぼす、すなわちチミンおよびデオキシアデノシンに富むスペーシングヌクレオチド(配列番号９０〜１０５)がＳＴＡＴ１αおよびＳＴＡＴ３結合を疎んずることを示す［表４〜６］。従って、ＳＴＡＴ１αまたはＳＴＡＴ３を含むものに関し、チミンおよびデオキシアデノシンに富む５つの塩基対スペーサーを有する要素は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４(すなわちＳＴＡＴ５および／またはＳＴＡＴ６)により活性化されたＳＴＡＴ複合体に対して選択的であった。試験するオリゴヌクレオチドに関して、ＣＴＬＬ−２細胞におけるＩＬ−２、ＴＦ−１細胞におけるＥpo、およびＮＦＳ−６０細胞におけるＩＬ−３により活性化されたＳＴＡＴ複合体のスペーシング優先性(preference)は、Ｕ−９３７細胞においてＧＭ−ＣＳＦにより活性化された複合体に関するものと同じである。このことは、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＥpoおよびＩＬ−３が全て、同じＳＴＡＴタンパク質であるＳＴＡＴ５を活性化することが報告されたという事実と一致している。ＭＥ−１８０細胞においてＩＬ−１３により活性化されたＳＴＡＴ複合体に関するスペーシング優先性は、Ｕ−９３７およびＭＥ−１８０細胞においてＩＬ−４により活性化されたＳＴＡＴ複合体に関するものと同じであって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の両方が同じＳＴＡＴタンパク質であるＳＴＡＴ６を活性化するという可能性によるものである。ＮＦＳ−６０細胞において、Ｇ−ＣＳＦにより活性化された２つのＳＴＡＴ複合体は、ＥＭＳＡにおけるそれらの異なった移動度により区別された。より緩慢に移動する複合体は、ＩＬ−６により刺激されたＳＴＡＴ３ホモダイマーと共に移動し、また特異的ＳＴＡＴ３抗血清を用いる抗体スーパーシフト実験によりＳＴＡＴ３を含むことが示された。より迅速に移動する複合体は、ＩＬ−３およびＧＭ−ＣＳＦにより活性化されたＳＴＡＴ複合体のように移動する未確認のＳＴＡＴ複合体を含んでいた。結合実験では、試験するオリゴヌクレオチドに関して、Ｇ−ＣＳＦにより活性化されたＳＴＡＴ３様複合体は、ＩＬ−６により誘発されるＳＴＡＴ３ホモダイマーとは区別できないスペーシング優先性を有する。同様に、Ｇ−ＣＳＦおよびＩＬ−３により活性化されたＳＴＡＴ複合体と共に移動する、Ｇ−ＣＳＦにより活性化されたＳＴＡＴ複合体は、同様に対応するスペーシング優先性を有していた。調節要素である配列番号１０６、１０８および１１０に関するテータは、表１〜６に示していない。配列番号１０６は、５つの塩基対スペーシングを有する調節要素であって、ＩＦＮγ(+++)、ＩＬ−６(+++)、ＧＭ−ＣＳＦ(+++)およびＩＬ−４(+++)により活性化されたＳＴＡＴ複合体へ結合する。配列番号１０８は、５つの塩基対スペーシングを有する調節要素であって、ＩＦＮγ(+++)、ＩＬ −６(＋)、ＧＭ−ＣＳＦ(+++)およびＩＬ−４(++)により活性化されたＳＴＡＴ複合体へ結合する。配列番号１１０は、６つの塩基対スペーシングを有する調節要素であって、ＩＬ−４(+++)により活性化されたＳＴＡＴ複合体へ選択的に結合するが、ＩＦＮγ、ＩＬ−６またはＧＭ−ＣＳＦにより活性化されたＳＴＡＴ複合体へは選択的に結合しない。従って、インビトロにおける結合に関して試験する場合、配列番号１０６、１０８および１１０はまた、上記スペーシングパターンに一致する。このヌクレオチドスペーシング効果の具体例は、第２Ａ〜２Ｄ図のＥＭＳＡオートラジオグラムに関して見ることができる。パネル２Ａでは、配列番号６６および６７のオリゴヌクレオチドをアニーリングすることにより製造した、放射性標識した二本鎖オリゴヌクレオチドプローブ(４つの塩基対スペーサーに対応する)を使用した。「ＵＮ」と記されたレーンは、未処理の細胞から得られた抽出物を用いる実験を表す。他のレーンは、誘発するサイトカインにより記される。活性化複合体は、未処理の抽出物中にはそれらが存在しなくて、サイトカインにより処理された抽出物にはそれらが存在することにより確認することができる。この４つのスペーサープローブへ結合する唯一の活性化転写調節タンパク質複合体は、ＩＬ−６により誘発される抽出物に対応するレーン３で見ることができる (ＳＴＡＴ３ホモダイマーとして第２Ａ図で確認される)。パネル２Ｂでは、配列番号７６および７７のオリゴヌクレオチドをアニーリングすることにより製造した、放射性標識した二本鎖オリゴヌクレオチドプローブ (５つの塩基対スペーサーに対応する)を使用した。「ＵＮ」と記されたレーンは、未処理の細胞から得られた抽出物を用いる実験を表す。他のレーンは、誘発するサイトカインにより記される。このパネルでは、ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４が全て、このプローブが結合した転写調節タンパク質複合体を活性化することを示す。これらの活性化複合体は、レーン２、３、５および６で見ることができ、また様々な複合体が第２Ｂ図で確認される。パネル２Ｃでは、配列番号７８および７９のオリゴヌクレオチドをアニーリングすることにより製造した、放射性標識した二本鎖オリゴヌクレオチドプローブ (６つの塩基対スペーサーに対応する)を使用した。「ＵＮ」と記されたレーンは、未処理の細胞から得られた抽出物を用いる実験を表す。他のレーンは、誘発するサイトカインにより記される。この６つのスペーサープローブへ結合する唯一の活性化転写調節タンパク質複合体は、レーン６、すなわちＩＬ−４により誘発される抽出物で見ることができる(第２Ｃ図で確認される)。パネル２Ｄでは、配列番号８０および８１のオリゴヌクレオチドをアニーリングすることにより製造した、放射性標識した二本鎖オリゴヌクレオチドプローブ (７つの塩基対スペーサーに対応する)を使用した。「ＵＮ」と記されたレーンは、未処理の細胞から得られた抽出物を用いる実験を表す。他のレーンは、誘発するサイトカインにより記される。構成的に結合する唯一の複合体(第２Ｄ図に記される)は、この７つのスペーサープローブを用いて検出することができる。サイトカインにより活性化される転写調節タンパク質複合体は全く見られない。一過性トランスフェクションアッセイリポータープラスミド配列番号５６ｘ４ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号６８ｘ４ＴＫ −ＬＵＣ、配列番号１０６ｘ４ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号７０ｘ４ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１０８ｘ６ＴＫ−ＬＵＣ、および配列番号１１０ｘ４ＴＫ−ＬＵＣは、キャップ部分に関して、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子のプロモーターに３５位で結合した配列番号を示しているオリゴヌクレオチド配列の４つのコピー(または配列番号１０８ｘ６ＴＫ−ＬＵＣに対する６つのコピー)を含む［第１図参照］。対照リポーターであるＴＫ−ＬＵＣ［Ｐ.ラムら，８ブロッド２０６３（１９９４）］［この開示は引用により本明細書に包含される］は、調節要素を全く含まない親ベクターである。これらのキメラプロモーターは、ホタルのルシフェラーゼの構造遺伝子の発現を起こす。リン酸カルシウムと共沈させることにより、ＨepＧ２およびＭＥ−１８０細胞を上記リポータープラスミドでトランスフェクションした。トランスフェクションする前日に細胞を１〜４Ｘ１０⁵／mlの割合で播種した。上記リポータープラスミド(１０〜２０μg／ml)およびβ−ガラクトシダーゼ発現プラスミドpＣＨ１１０(５μg／ml)［ファーマシア・バイオテック(Ｐharmacia Ｂiotech)，ピスカタウェイ(Ｐiscataway)，ニュージャージー州から市販されている］を含むリン酸カルシウム沈殿に細胞を６時間(ＨepＧ２)または１２時間(ＭＥ−１８０)さらした。次いで、培地を変えて、細胞を１６〜１８時間回復した。次いで、組換えサイトカインをあらかじめ希釈しておいた増殖培地に加えて、５時間(ＨepＧ２) または６時間(ＭＥ−１８０)後に細胞を収集した。細胞を溶菌し、標準法を用いてルシフェラーゼおよびβ−ガラクトシダーゼ活性を測定した［例えば、Ｊ.Ｒ. デ・ウェット(Ｄe Ｗet)ら，７モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー (Ｍol.Ｃell.Biol.)７２５（１９８７）およびサンブルック(Ｓambrook)ら，モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル (Ｍolecular Ｃlo ning：ＡＬaboratory Ｍanual )第２版，コールド・スプリング・ハーバー研究所出版(Ｃold Ｓpring Ｈarbor Ｌaboratory Ｐress)，コールド・スプリング・ハーバー，ニョーヨーク州（１９８９）を参照］［この開示は引用により本明細書に包含される］。各々の試料に関して、標準化応答は、発色基質を用いて測定された同じ溶解産物におけるβ−ガラクトシダーゼ活性でルシフェラーゼアッセイから得られた光単位(light units)を割ることにより測定した。これらのトランスフェクションの結果を表７〜８に示す。与えられた数字は、平均誘発倍数である(「誘発倍数」とは、未処理の試料における標準化応答で割った、サイトカインにより処理された試料における標準化応答として定義される)。Ｊ.スゾウ(Ｓuzow)およびＡ.Ｄ.フリードマン(Ｆriedman)，１３モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー，２１４１（１９９３）［この開示は引用により本明細書に包含される］により記載されているＤＥＡＥ−デキストラン法によって、ＴＦ−１細胞を上記リポータープラスミドでトランスフェクトしたが、以下の点を変更した：トランスフェクションの間、試験リポーター構築物を３ μg／mlの濃度まで加え、pＭＳＶＣＡＴベクターはトランスフェクション混合物に加えず、使用する増殖培地はＴＦ−１細胞に関して上記したものであって、サイトカイン導入を４〜５時間行った。細胞を溶菌し、標準法を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。トランスフェクションをバッチ中で行った後、同数のトランスフェクトした細胞を４〜５時間の誘発期間にサイトカインで別々に誘発させた。与えられた数字は、平均誘発倍数である(ＴＦ−１トランスフェクションに関する「誘発倍数」とは、未処理の試料におけるルシフェラーゼ応答で割った、サイトカインにより処理された試料におけるルシフェラーゼ応答として定義される)。これらのトランスフェクションの結果を表９に示す。前述のパラグラフで記載したＤＥＡＥ−デキストラン法によって、ＮＦＳ−６０細胞を上記リポータープラスミドでトランスフェクトしたが、以下の点を変更した：トランスフェクションの間、試験リポーター構築物を６μg／mlの濃度まで加えて、サイトカイン導入を２.５時間行った。これらのトランスフェクションの結果を表１０に示す。表７〜１０のデータを算出するのに使用されるＴＫ−ＬＵＣリポーター構築物中に導入した調節要素の１つ(配列番号１０６)は、ＩＦＮγにより調節されることが報告された遺伝子であるヒトＩＲＦ−１遺伝子のプロモーターから取られたものであり、また本発明の教示から考えて、表１〜６における５つの塩基対合成スペーシング要素に対する自然相対物と考えることができる。表７〜９のデータを算出するのに使用されるＴＫ−ＬＵＣリポーター構築物中に導入した調節要素の１つ(配列番号１０８)は、ヒトＦcεＲllb遺伝子のプロモーターから取られたものであり、また本発明の教示から考えて、表１〜６における５つの塩基対合成スペーシング要素に対する自然相対物と考えることができる。表７〜１０のデータを算出するのに使用されるＴＫ−ＬＵＣリポーター構築物中に導入した調節要素の１つ(配列番号１１０)は、ＩＬ−４により調節されることが報告された遺伝子であるヒトＣε遺伝子のプロモーターから取られたものであり、また本発明の教示から考えて、表１〜６における６つの塩基対合成スペーシング要素に対する自然の相対物と考えることができる。表７では、表１〜６に示すＩＦＮγおよびＩＬ−６により活性化された転写調節タンバク質複合体に関する結合データが転写の選択的活性化と関連があることを示す。従って、４つのヌクレオチドスペーシング調節要素は、ＩＬ−６により誘発される活性化転写調節タンパク質複合体を選択的に結合するだけでなく、リポーター遺伝子の上流に機能的プロモーターを置いた場合には、リポーター遺伝子転写を選択的に活性化する。ＳＴＡＴ３を活性化する他のシグナル伝達分子と同様に、オンコスタチンＭもまた、ＳＴＡＴ３を活性化することから、４つのスペーシングを有するパリンドローム要素（配列番号５６）からの転写もまた刺激する。５つのヌクレオチドスペーシング要素（配列番号６８および１０６）は、ＩＦＮγおよびＩＬ−６により誘発される転写調節タンパク質複合体の両方に結合し、また同様に、必要なリポーター構築物中に置いた場合もまた、ＩＦＮγ 、ＩＬ−６およびオンコスタチンＭに対する応答性を与える。６つのヌクレオチドスペーシング要素(配列番号７０および１１０)は、ＩＦＮγおよびＩＬ−６により誘発される転写調節タンパク質複合体の両方に弱く結合し、また同様に、ＩＦＮγに対するリポーター構築物に関して応答性を与えず、またＩＬ−６およびオンコスタチンＭに対するリポーター構築物に関してずっと低い応答性を与える。従って、パリンドローム要素の結合選択性は、本発明の調節要素の転写活性化の可能性と直接関連がある。ＭＥ−１８０細胞におけるリポーター構築物に関するトランスフェクション結果を表８に示す。４つの塩基対スペーシングを有する要素(配列番号５６)は、ＳＴＡＴ３の活性化物質であるＩＬ−６およびＯＳＭによる転写誘発を再び選択的に媒介した。５つの塩基対スペーシング要素(配列番号６８、１０６および１０８)を含むリポーターは、再びＩＦＮγ、ＩＬ−６、およびＯＳＭに対して応答した。しかし、それらはＩＬ−４により活性化されたＳＴＡＴ複合体には結合したが、ＩＬ−４に対しては応答しなかった。６つの塩基対合成スペーシング要素 (配列番号７０)を含むリポーターは、(ＩＬ−４により活性化されたＳＴＡＴには結合したが)試験したサイトカインのいずれに対しても応答しなかったが、６つの塩基対スペーシングを有する天然のＣε要素(配列番号１１０)は、ＩＬ−４による強くて非常に選択的な転写誘発を媒介したことから、インビトロにおける結合データと一致している機能的活性化部分である。ＴＦ−１細胞におけるリポーター構築物に関するトランスフェクション結果を表９に示す。その結果は、上記のインビトロにおける結合データと実質的に一致する。従って、４つの塩基対スペーシングを有する要素(配列番号５６)は、ＩＬ −４、Epo、ＩＬ−３およびＧＭ−ＣＳＦに対して非応答性であったがＩＬ−６に対しては応答する一方、５つの塩基対スペーシング要素(配列番号６８、１０６および１０８)を含むリポーターは、ＩＬ−６、Ｅpo、ＩＬ−３およびＧＭ− ＣＳＦに対して応答するがＩＬ−４に対しては応答しなかった。従って、天然の６つの塩基対スペーシング要素(配列番号１１０)を含むリポーターは、ＩＬ−４に対して応答するがＩＬ−６、Ｅpo、ＩＬ−３またはＧＭ−ＣＳＦに対しては応答しなかった。ＮＦＳ−６０細胞において試験したリポーター構築物に関するトランスフェクション結果を表１０に示す。その結果は、上記のインビトロにおける結合データと実質的に一致する。従って、４つの塩基対スペーシングを有する要素(配列番号５６)は、ＩＬ−６およびＧＭ−ＣＳＦの両方(これらは両方ともＳＴＡＴ３を活性化する)に対する応答を媒介する一方、５つの塩基対スペーシング要素(配列番号６８および１０８)を有するリポーターは、Ｇ−ＣＳＦにより活性化される両方のＳＴＡＴ複合体に結合し、ＩＬ−３、ＩＬ−６およびＧ−ＣＳＦに対する応答を媒介した。従って、天然の６つの塩基対スペーシング要素(配列番号１１０)を含むリポーターは、ＩＬ−３またはＧ−ＣＳＦに対して応答しなかった。実施例２電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡs）に用いる二本鎖プローブオリゴヌクレオチドを下記配列のオリゴヌクレオチドのアニーリングによって形成したこと以外は実施例１の記載に従い、試薬、細胞、細胞培養物、核抽出物の製造および電気泳動移動度シフトアッセイを行った。ここで、太字で示されるヌクレオチド配列は、本発明の調節要素として活性を試験されるヌクレオチト配列（その二本鎖相補鎖を含む）に対応する。オリゴヌクレオチト配列番号１１２〜１３５のＥＭＳＡの結果から決定される、相対的結合親和性を、視覚的に評価し、実施例１の記載と同様の視覚評価スケールに従って評定した。特定の数値で表現しなくとも、ＥＭＳＡ結合データにおける区別しうる差異および傾向を分析するには、この視覚評価システムで充分である。要すれば、燐光造影剤またはデンシトメーター（バイオ−ラド・ラボラトリーズなどから市販されている）を用い、ここに記載した差異を定量的に評価分析することもできる。オリゴヌクレオチド配列番号１１２〜１３５の調節要素に対する結合親和性の特異的視覚評価を下記の表１１〜１３に示す（これらの表中、太字はスペーシングヌクレオチドを表す）。表１１〜１３のデータを評価するに当たり、ＩＬ−６がＨｅｐＧ２細胞において３つの特異的ＤＮＡ結合複合体を誘発することを承知しておくべきである［ラム(P.Lamb)らの「Blood」,８，２０６３（１９９４年）］。したがって、ＩＬ− ６の欄については、評価される複合体は、ＥＭＳＡにおいて最も遅く移動するＩＬ−６誘発複合体、すなわちＳＴＡＴ３ホモダイマーであり［ゾング(Z.Zhong) らの「Sciense」,２６４，９５］、したがってＳＴＡＴ１を含む複合体を反映しているものではない。ＳＴＡＴ１はＩＦＮγ複合体に対して評価されるものである。さらに、表１１〜１３の結果を解釈する場合、データは、特定の数値としてではなく、その傾向について分析されるべきである。これは、ＥＭＳＡアッセイの感度が、本来さほど鋭敏なものではないからである。この変動は、少なくとも部分的には、使用した核抽出物の質の差異、細胞系の違い、およびタンパク質濃度の測定における変動を原因として生じるものである。表１１〜１３に示される、オリゴヌクレオチドに対するＳＴＡＴ複合体の結合親和性は通常、実施例１に記載の系列よりも低い（およそ１０倍かそれ以上）。驚くべきことに、表１１〜１３に要約された結合データから、回文要素（ＴＴ −スペーシング配列−ＡＡ）の間に異なるヌクレオチドスペーシング配列を含むＤＮＡ調節要素配列が、応答性の細胞をＩＦＮγ，ＩＬ−６，ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４で処理することによって活性化された活性化転写調節タンパク質に対して異なる親和性をもつということが示される。ひとつまたは両方のコアハーフサイトがＴＴＡであるスペーシング要素については、いくつかのＳＴＡＴ複合体のスペーシング優先性が、実施例１に記載の複合体のものとは微細に異なっている。実施例１で示したデータとも一致するが、４塩基対のスペーシングは、ＳＴＡＴ３含有複合体（ＩＬ−６活性化）が選択的に結合するという一例（表１３）以外は、一般にどの複合体とも結合しなかった。ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３含有複合体（ＩＦＮγまたはＩＬ−６によって活性化）は、各系列中の５塩基対スペーシングに結合した。ＴＴＡコアハーフサイト含有要素のこれらの系列については、ＧＭ−ＣＳＦによって活性化されたＳＴＡＴ複合体の結合優先性は、６塩基対スペーシングである（実施例１に示すような５塩基対スペーシングではなくて）。ＩＬ−４活性化ＳＴＡＴ複合体もまた、これらの６塩基対スペーシング要素に結合することができるが、７塩基対スペーシングはＩＬ−４活性化ＳＴＡＴ複合体に選択的に結合する。したがって、ＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３含有複合体とは異なって、ひとつまたは両方のコアハーフサイトが５'−ＴＴＡ−３'である場合、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４活性化ＳＴＡＴ複合体に対するスペーシング優先性はひとつのオリゴヌクレオチドによって拡張される。スペーシング優先性におけるこのシフトは、５塩基対のスペーシングをもつ実施例２の調節要素を、ＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−４によって活性化されたＳＴＡＴ複合体のうち、ＳＴＡＴ１および／またはＳＴＡＴ３に対して選択性があるようにする。したがって、内部ヌクレオチドの性質は、所定のＳＴＡＴ複合体（表４〜６および１１〜１３）の絶対的結合親和性ばかりでなく、種々のＳＴＡＴ複合体（表１１〜１３）のスペーシング優先性にも影響を与えることができる。試験したこのようなオリゴヌクレオチドについては、ＣＴＬＬ−２細胞においてＩＬ−２によって活性化されたＳＴＡＴ複合体に対するスペーシング優先性は、Ｕ９３７細胞においてＧＭ−ＣＳＦによって活性化された複合体に対するものと同様である。これは、ＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦが同じＳＴＡＴタンパク質、ＳＴＡＴ５を活性化するという事実と一致する。ＭＥ−１８０細胞においてＩＬ−３によって活性化されたＳＴＡＴ複合体に対するスペーシング優先性は、Ｕ −９３７およびＭＥ−１８０細胞においてＩＬ−４によって活性化されたＳＴＡＴ複合体に対するものと同様であったが、これはＩＬ−４およびＩＬ−３の両方が同じＳＴＡＴタンパク質、ＳＴＡＴ６を活性化するという可能性によるものである。ＮＦＳ−６０細胞において、Ｇ−ＣＳＦは、ＥＭＳＡにおける移動度が異なることから区別しうる２つのＳＴＡＴ複合体を活性化した。遅移動複合体は、ＩＬ −６によって刺激されたＳＴＡＴ３ホモダイマーと共に移動し、特異的ＳＴＡＴ３抗血清を用いる抗体スーパーシフト試験によってＳＴＡＴ３を含有することが示された。速移動複合体は、ＧＭ−ＣＳＦによって活性化されたＳＴＡＴ複合体のように移動する未同定のＳＴＡＴ複合体を含有していた。結合試験では、試験したオリゴヌクレオチド系列については、Ｇ−ＣＳＦ活性化ＳＴＡＴ３様複合体が、ＩＬ−６によって誘発されたＳＴＡＴ３ホモダイマーと区別できないスペーシング優先性を有していた。同様に、ＧＭ−ＣＳＦ活性化ＳＴＡＴ複合体と共に移動するＧ−ＣＳＦ活性化ＳＴＡＴ複合体は、同じ対応するスペーシング優先性を有していた。実施例３電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡs）に用いる二本鎖プローブオリゴヌクレオチドを下記配列のオリゴヌクレオチドのアニーリングによって形成したこと以外は（実施例１で言及したいくつかの変更に加えて）実施例１の記載に従い、試薬、細胞、細胞培養物、核抽出物の製造および電気泳動移動度シフトアッセイを行った。ここで、太字で示されるヌクレオチド配列は、本発明の調節要素として活性を試験されるヌクレオチド配列（その二本鎖相補鎖を含む）に対応する。下記オリゴヌクレオチドのＥＭＳＡの結果から決定される、相対的結合親和性を、視覚的に評価し、実施例１の記載と同様の視覚評価スケールに従って評定した。特定の数値で表現しなくとも、ＥＭＳＡ結合データにおける区別しうる差異および傾向を分析するには、この視覚評価システムで充分である。要すれば、燐光造影剤またはデンシトメーター（バイオーラド・ラボラトリーズなどから市販されている）を用い、ここに記載した差異を定量的に評価分析することもできる。オリゴヌクレオチド配列番号５８〜５９、６８〜６９、７０〜７１、８６〜８７、１００〜１０１、１０６〜１０７、１０８〜１０９、１１０〜１１１および１３６〜１５０の調節要素に対する結合親和性の特異的視覚評価を下記の表１４に示す（これらの表中、太字はコア配列を表す）。表１４のデータは、ＩＬ−４およびＩＬ−１３活性化ＳＴＡＴ複合体が、やや親和性が低い配列番号８６以外は同様な親和性をもってリストされた配列のすべてに結合しうることを示す。これらのデータは実施例１で記載した結合データと完全に一致する。一過性トランスフェクションアッセイ配列番号５８×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号６８×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号７０×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１００×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１０６×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１０８×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１１０× ４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号８６×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１３６×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１３８×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１４０×４−ＴＫ− ＬＵＣ、配列番号１２４×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１４４×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１４６×４−ＴＫ−ＬＵＣ、配列番号１４８×４−ＴＫ−ＬＵＣおよび配列番号１５０×４−ＴＫ−ＬＵＣのリポータープラスミドは、キャップサイトとして単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ遺伝子の３５番目の位置に結合した上記配列番号で表示される４コピーのオリゴヌクレオチド配列を含む。図１を参照せよ。対照のリポーターＴＫ−ＬＵＣ［ラムらの「Blood」,８３，２０６３（１９９４年）（この文献は本明細書の参考文献である）］は、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼの調節要素をもたないプロモーターを含む。これらのキメラプロモーターはホタルルシフェラーゼの構造遺伝子を発現させる。実施例１に記載のリン酸カルシウム共沈法によってＭＥ−１８０細胞を上記リポータープラスミドにトランスフェクションさせた。これらのトランスフェクションの結果を下記表１５および表１６に示す。表示された数値は平均の誘発倍数である（誘発倍数とは、サイトカイン処理サンプルにおける標準応答を非処理サンプルにおける標準応答で割ったものである）。表１５にまとめられたデータから、スペーシングヌクレオチドおよびフランキングヌクレオチドの同一性が、その調節配列が転写的に活性であるかないか（ここでは誘発倍数が２以上であることで定義する）に影響を与えることが説明される。一般に、ＩＬ−１３に対するＭＥ−１８０細胞の応答はＩＬ−４に対する応答よりも低いが、これはおそらくＭＥ−１８０細胞上のＩＬ−１３受容体の数が比較的少ないことを反映しているものと思われる（このことは、ＩＬ−４よりもＩＬ−１３によって活性化されるＳＴＡＴ複合体が少ないことと相互関係がある）。フランキングヌクレオチドの効果は、配列番号１４０×ＴＫ−ＬＵＣの記載事項と配列番号７０×４ＴＫ−ＬＵＣの記載事項を比較することによって特によくわかる。配列番号１４０×４ＴＫ−ＬＵＣはＩＬ−４によって活性化され、一方配列番号７０×４ＴＫ−ＬＵＣは活性化されず、これらの配列において唯一異なるのはコア要素の５'および３'フランクにおける２つのヌクレオチドである。表１６にまとめられたデータから、試験を行ったすべての３塩基対のスペーシングを有する応答要素について、それらはＩＬ−４活性化ＳＴＡＴ複合体によく結合するけれども、驚くべきことに、ＴＫ最小プロモーターという面においては、ＭＥ−１８０細胞における転写応答を仲介しないということが説明される。これは、表１５および１６の配列番号１５０×４ＴＫ−ＬＵＣの記載事項に示されるように、たとえフランキングヌクレオチドが“最適”（配列番号１１０からみて）であっても真実である。したがって、表１５および１６に示されるすべての配列がＩＬ−４およびＩＬ−１３によって活性化されたＳＴＡＴ複合体（表１４参照）に結合可能であるけれども、すべてがＩＬ−４またはＩＬ−１３に応答した転写誘発を仲介するわけではない（仲介するとは、誘発倍数が２以上で定義する）。それにもかかわらず、所定のＳＴＡＴ複合体に対する調節要素の結合能力が、配列が転写的に活性であるための必要条件であるので、かくして観察されたスペーシング優先性は、選択的転写活性化の重要な決定要因である。表１５のデータから、ＩＬ−４およびＩＬ−１３活性化ＳＴＡＴ複合体を選択的に結合するばかりでなく、このことが重要であるのだが、ＩＬ−４およびＩＬ −１３に応答した転写誘発の仲介も行う一般的配列を同定することが可能である。そのような一般的配列は５'−ＡＮＴＴＣＮＮＮＮＧＡＡＮＡ−３'（配列番号１５２）［およびその二本鎖相補鎖：５'−ＴＮＴＴＣＮＮＮＮＧＡＡＮＴ−３' （配列番号１５３）］である（ここで、ＮはＡ，Ｔ，ＣまたはＧから独立して選ばれるヌクレオチドである）。この配列は、表１５のデータから転写的活性化に影響を与えることが示されたコア要素の外側のヌクレオチドを包含している。したがって、ＩＬ−４およびＩＬ−１３選択性の好ましいオリゴヌクレオチド配列は下記のとおりである。特許法規に準ずるために、本発明を好ましい重量範囲および製造条件の記載を提供したが、本発明の範囲はそれらに限定されるものではない。当業者であれば、本発明の範囲および本質から離れる事なく、本発明に関する各種の修飾および変更をなしえるであろう。最終的に、本発明の範囲の理解のために、次に請求の範囲を記載する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ラム，アイ・ピーターアメリカ合衆国92121カリフォルニア、サン・ディエゴ、ノース・リム・コート7565 番、ナンバー291

Claims

【特許請求の範囲】１．ヌクレオチド配列ＴＴＮ_xＡＡの調節要素(式中、ＮはＡ、Ｔ、ＣまたはＧから独立して選択され、ｘは４、５、６または７であり、そして調節要素はシグナル伝達分子に応答して活性化転写調節タンパク質に結合する)を含むオリゴヌクレオチド配列。２．シグナル伝達分子が、ポリペプチド、オリゴ糖、非ペプチド分子またはその合成模造品である、請求項１のオリゴヌクレオチド配列。３．ポリペプチドが、サイトカイン、ホルモン、抗体、細胞表面抗原またはその合成模造品である、請求項２のオリゴヌクレオチド配列。４．転写調節タンパク質がＳＴＡＴタンパク質を含む、請求項1のオリゴヌクレオチド配列。５．ＳＴＡＴタンパク質が、ＳＴＡＴ１αタンパク質、ＳＴＡＴ１βタンパク質、ＳＴＡＴ２タンパク質、ＳＴＡＴ３タンパク質、ＳＴＡＴ４タンパク質、ＳＴＡＴ５タンパク質およびＳＴＡＴ６タンパク質からなる群から選択される、請求項４のオリゴヌクレオチド配列。６．ヌクレオチド配列がＴＴＣＮ_yＧＡＡ、ＴＴＡＮ_yＧＡＡ、ＴＴＡＮ_yＴＡＡ、ＴＴＴＮ_yＧＡＡおよびＴＴＴＮ_yＴＡＡ(式中、Ｎは独立してＡ、Ｔ、ＣまたはＧから選択され、ｙは２、３、４または５である)からなる群から選択される、請求項１のオリゴヌクレオチド配列。からなる群から選択される、請求項１のオリゴヌクレオチド配列。８．ＴＴＣＮ_yＧＡＡまたはＴＴＡＮ_yＧＡＡ(式中、ｙは２であり、調節要素は、ＳＴＡＴ３タンパク質を含むサイトカイン活性化転写調節タンパク質に選択的に結合する)を含む、請求項６のオリゴヌクレオチド配列。９．サイトカインがＩＬ−６、ＬＩＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ −１０、ＩＬ−１１、成長ホルモンおよびオンコスタチンＭからなる群から選択される、請求項８のオリゴヌクレオチド配列。１０．ＴＴＡＮ_yＧＡＡまたはＴＴＡＮ_yＴＡＡ(式中、ｙは３であり、調節要素はＳＴＡＴ１αタンパク質および／またはＳＴＡＴ３タンパク質を含むサイトカイン活性化転写調節要素に結合する)を含む請求項６のオリゴヌクレオチド配列。１１．サイトカインがＩＬ−６、ＬＩＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＦＮγ、成長ホルモンおよびオンコスタチンＭからなる群から選択される、請求項１０のオリゴヌクレオチド配列。１２．ＴＴＣＮ_yＧＡＡ(式中、ｙは３であり、調節要素は、ＳＴＡＴ１タンパク質、ＳＴＡＴ３タンパク質、ＳＴＡＴ４タンパク質、ＳＴＡＴ５タンパク質および／またはＳＴＡＴ６タンパク質を含むサイトカイン活性化転写調節タンパク質に結合する)を含む、請求項６のオリゴヌクレオチド配列。１３．サイトカインが、ＩＬ−６、ＬＩＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、成長ホルモン、オンコスタチンＭ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｔｐｏ、Ｅｐｏ、プロラクチンおよびＩＦＮγからなる群から選択される、請求項１２のオリゴヌクレオチド配列。１４．ＴＴＣＴＴＴＧＡＡ、ＴＴＣＴＣＡＧＡＡ、ＴＴＡＮ_yＧＡＡまたはＴＴＡＮ_yＴＡＡ(式中、ｙは４であり、調節要素は、ＳＴＡＴ５タンパク質および／またはＳＴＡＴ６タンパク質を含むサイトカイン活性化転写調節タンパク質に選択的に結合する)を含む、請求項６のオリゴヌクレオチド配列。１５．サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｔｐｏ、Ｅｐｏ、成長ホルモンおよびプロラクチンからなる群から選択される、請求項１４のオリゴヌクレオチド配列。１６．ＴＴＣＮ_yＧＡＡ(式中、ｙは４であり、調節要素は、ＳＴＡＴ６タンパク質を含むサイトカイン活性化転写調節タンパク質に選択的に結合する)を含む、請求項６のオリゴヌクレオチド配列。１７．サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５からなる群から選択される、請求項１６のオリゴヌクレオチド配列。１８．ＴＴＡＮ_yＧＡＡまたはＴＴＡＮ_yＴＡＡ(式中、ｙは５であり、調節要素は、ＳＴＡＴ６タンパク質を含むサイトカイン活性化転写調節タンパク質に選択的に結合する)を含む、請求項６のオリゴヌクレオチド配列。１９．サイトカインが、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５からなる群から選択される、請求項１８のオリゴヌクレオチド配列。２０．二本鎖である、請求項１のオリゴヌクレオチド配列。２１．プロモーターに機能的に連結した請求項１のオリゴヌクレオチド配列を含み、プロモーターが異種遺伝子に機能的に連結し、該遺伝子が該オリゴヌクレオチド配列および該プロモーターの転写制御下にあるように連結されることを特徴とするＤＮＡ構築物。２２．プロモーターが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、アデノウイルスＥ1bおよび酵母アルコールデヒドロゲナーゼの遺伝子プロモーターからなる群から選択される、請求項２１記載のＤＮＡ構築物。２３．異種遺伝子が、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、分泌型胎盤アルカリ性ホスファターゼ、ヒト成長ホルモン、ｔ−ＰＡ、緑色蛍光タンパク質またはインターフェロンの遺伝子を含む、請求項２１のＤＮＡ構築物。２４．オリゴヌクレオチド配列が、請求項１の調節要素の少なくとも一つの多量体を含む、請求項２１のＤＮＡ構築物。２５．プロモーターが単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーターの遺伝子プロモーターを含み、異種遺伝子がルシフェラーゼの遺伝子を含む、請求項２１のＤＮＡ構築物。からなる群から選択される、請求項２１のＤＮＡ構築物。２７．請求項２１のＤＮＡ構築物を導入した宿主細胞。２８．細胞がＨepＧ２細胞、Ｕ９３７細胞、ＭＥ−１８０細胞、ＴＦ−１細胞またはＮＦＳ−６０細胞を含む、請求項２７の宿主細胞。２９．シグナル伝達分子の存在下で、適当な転写調節タンパク質を含む請求項２７の宿主細胞を培養することを特徴とする、異種遺伝子の制御発現方法。３０．シグナル伝達分子がサイトカインを含み、そして転写調節タンパク質がＳＴＡＴタンパク質を含む、請求項２９の制御発現方法。３１．転写調節タンパク質が活性化され、そしてオリゴヌクレオチド配列と結合して複合体を形成する条件下に、試料を請求項１のオリゴヌクレオチド配列と接触させ、ついで試料中の該複合体の存在を検出することを特徴とする、試料中の転写調節タンパク質の存在の検出方法。３２．試料から該複合体を分離し、該複合体から該オリゴヌクレオチド配列を分離して転写調節タンパク質を生成することをさらに含む、請求項３１の方法。３３．(ａ)異種遺伝子が化合物に応答して発現することができる条件下に、化合物を請求項２７の宿主細胞と接触させ、ついで (ｂ)工程(ａ)の遺伝子発現のレベルを、化合物の不存在での宿主細胞からの遺伝子発現のレベルと比較することを特徴とする、化合物が遺伝子転写のアコニストとして作用する能力の測定方法。３４．(ａ)異種遺伝子がシグナル伝達分子と応答して発現することができる条件下に、予め定めた量のシグナル伝達分子の存在下で、化合物を請求項２７の宿主細胞と接触させ、ついで (ｂ)工程(ａ)の遺伝子発現レベルを、シグナル伝達分子は存在するが、化合物の不存在での宿主細胞からの遺伝子発現のレベルと比較することを特徴とする、化合物が遺伝子転写のアンタゴニストとして作用する能力の測定方法。３５．異種遺伝子が、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質または分泌型胎盤アルカリ性ホスファターゼの遺伝子を含む、請求項３３の方法。３６．異種遺伝子が、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質または分泌型胎盤アルカリ性ホスファターゼの遺伝子を含む、請求項３４の方法。３７．ヌクレオチド配列ＴＴＣＮ_yＧＡＡ、ＴＴＡＮ_yＧＡＡ、ＴＴＡＮ_yＴＡＡ、ＴＴＴＮ_yＧＡＡおよびＴＴＴＮ_yＴＡＡ(式中、ＮはＡ、Ｔ、ＣまたはＧから独立して選択され、ｙは２、３、４または５である)の調節要素を含む、オリゴヌクレオチド配列。３８．二本鎖である、請求項３７のオリゴヌクレオチド配列。３９．ＡＮＴＴＣＮＮＮＮＧＡＡＮＡ(SEQ ID N0.152)またはＴＮＴＴＣＮＮＮＮＧＡＡＮＴ(SEQ ID NO.153)(式中、ＮはＡ、Ｔ、ＣまたはＧから独立して選択される)を含む選択的オリゴヌクレオチド配列であって、該オリゴヌクレオチド配列は、プロモーターおよび異種遺伝子に機能的に連結している場合に、ＩＬ −４および／またはＩＬ−１３により活性化されたＳＴＡＴタンパク質を含む活性化転写調節タンパク質に選択的に結合し、異種遺伝子を転写レベルで調節することを特徴とする配列。 (式中、ＳＴＡＴタンパク質はＳＴＡＴ６タンパク質を含む)からなる群から選択された請求項３９の選択的オリゴヌクレオチド。