JPH09500172A

JPH09500172A - 放射性同位体標識したグルカン類

Info

Publication number: JPH09500172A
Application number: JP7505953A
Authority: JP
Inventors: ディーン，リチャード・ティー
Original assignee: ダイアテック，インコーポレイテッド
Priority date: 1993-07-28
Filing date: 1994-07-28
Publication date: 1997-01-07
Anticipated expiration: 2017-09-03
Also published as: ZA945587B; GR3034918T3; ES2151933T3; JP2001354594A; US5770179A; WO1995003836A2; DE69426035D1; ATE196609T1; WO1995003836B1; CA2167807A1; US5843403A; JP3320734B2; US5820846A; US5814299A; CA2167807C; US5851509A; EP0788377B1; AU7827494A; WO1995003836A3; DK0788377T3

Abstract

(57)【要約】本発明は、放射性診断剤およびかかる剤を調製するための試薬、ならびら放射能標識した放射性診断剤の製法に関する。特に、本発明はテクネチウム−９９ｍ（^99mＴｃ）標識した該剤、該剤を製造するための方法およびっキット、ならびに哺乳動物体内の感染、炎症、癌およびアテローム性動脈硬化症の部位を含めた、病理学的部位をイメージするための該剤の使用方法に関する。特に、該剤および試薬はオリゴ糖、特にβ−グルカンの誘導体である。

Description

【発明の詳細な説明】放射性同位体標識したグルカン類発明の背景１．発明の分野本発明は、放射性診断剤およびかかる診断剤を調製するための試薬、ならびに放射能標識した放射性診断剤の製法に関する。特に、本発明は、テクネチウム− ９９ｍ（^99mＴｃ）標識した剤、かかる剤を製造するための方法およびキット、ならびに、哺乳動物体内の感染、炎症、癌およびアテローム性動脈硬化症の部位を含めた病理学的部位をイメージするための該剤の使用方法に関する。特に、該剤および試薬はオリゴ糖、より特別にはβ−グルカンの誘導体である。２．先行技術の記載核医学の分野では、ある種の病理学的疾患は、該病理学的部位に特異的に蓄積する投与された放射能活性に標識したトレーサー化合物（すなわち、放射性トレーサーまたは放射性医薬）の体内分布をイメージングすることによって位置決定され、また、かかる疾患の程度が判断される。このタイプの方法は、通常、放射性イメージングまたはシンチグラフィーイメージングとして知られている。放射性イメージングは、本質的に非侵入性で、高感度で、高度に特異的であり、全身を走査でき、かつ比較的コスト的に有利である点で、他の診断方法よりも優れた利点を有している。⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、^99mＴｃ、¹¹¹Ｉｎ、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉまたは²⁰ ¹ Ｔｌを含めた種々の放射性核種が放射性イメージングで有用であることが知られている。病巣感染または局所化感染の部位の位置および／または程度を判断できる臨床的要求が存在する。かなりの数の場合において、（身体的調査、Ｘ線、ＣＴおよび超音波技術のごとき）診断の常法はかかる部位（例えば、膿傷）を同定できない。いくつかの場合において、バイオプシーを利用することができるが、好ましくは、少なくとも、知られた位置における膿傷の原因である病原菌を同定する必要が生じるまで回避される。かかる「隠れた」感染の部位を同定するのは重要である。何故ならば、問題となる迅速な位置決めは効果的な治療的介入にとって臨界的であるからである。膿傷は多くの可能な病原菌のうちのいずれか１つによって引き起こされ、従って、特定の病原菌に対して特異的な放射性トレーサーは限定された範囲を有するであろう。他方、感染はほとんど不可避的に炎症を伴い、これは組織の損傷に対する身体の一般的応答である。従って、炎症部位に特異的な放射性トレーサーはいずれかの病原菌によって引き起こされる感染部位の位置決めで有用であると期待される。炎症に伴う主要な現象の１つは、炎症部位におけるマクロファージ、単球および好中球を含めた白血球（白血球細胞）の位置決めである。白血球に特異的な放射性トレーサーは、局所化感染の部位における白血球を検出するのに有用であろう。現在認可されている感染部位をイメージングする核医学的方法は、インジウム −１１１標識白血球（¹¹¹Ｉｎ-ＷＢＣ）（例えば、ピーターズ(Peters)、１９９２、ジャーナル・オブ・ヌクレイック・メディシン(J．Nucl.Med.)３３：６５− ６７参照）またはガリウム−６７（⁶⁷Ｇａ）クエン酸塩（例えば、エブライト(E bright)ら、１９８２、アーク・スント・メドゥ(Arch．Int．Med.)１４２：２４６−２５４参照）いずれかを用いる。 ¹¹¹Ｉｎ−標識ＷＢＣを用いる主要な不利は、放射性トレーサーの調製が、自己血液の滅菌取出、白血球の血液からの滅菌単離、（損傷されたＷＢＣは再注射した場合に細網内内皮細胞によって摂取されるので）細胞に損傷を与えない条件を用いる白血球の滅菌標識および患者への（今や標識した）白血球の復帰（再注射）を要する点である。さらに、注射とイメージングとの間の１２ないし４８時間の遅れが最適イメージに必要であろう。^99mＴｃ標識白血球はこの遅延時間を短縮するのに使用できる（例えば、ボルネ(Vorne)ら、１９８９、ジャーナル・オブ・ヌクレイック・メディシン(J．Nucl．Med.)３０：１３３２−１３３６参照）が、体外標識が依然必要である。好ましい放射性トレーサーは、自己血液成分の取出および操作を必要としないものであろう。 ⁶⁷Ｇａ−クエン酸塩は静脈内注射によって投与できる。しかしながら、この化合物は感染または炎症の部位に特異的でない。さらに、７２時間までの遅れが、しばしば、放射性トレーサーの注射とイメージングとの間に必要である。加えて、⁶⁷Ｇａのγ−（ガンマ）放射エネルギーは通常のガンマカメラに十分には適しない。（単球、好中球、顆粒球その他を含めた）ヒト白血球に対して生起された放射能標識したモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体が開発されてきた。⁹⁹ ^m Ｔｃ標識抗顆粒球モノクローナル抗体（例えば、リンド(Lind)ら、１９９０、ジャーナル・オブ・ヌクレイック・メディシン（J．Nucl．Med.）３１：４１７〜４７３参照）および¹¹¹Ｉｎ−標識非特異的ヒト免疫グロブリン（例えば、ラムラグリア(LaMuraglia)ら、１９８９、ジャーナル・オブ・バスキャラー・サージェリ(J．Vasc．Surg.)１０：２０〜２８参照）は、感染に二次的な炎症の検出についてテストされている。¹¹¹Ｉｎ−標識ＩｇＧは、注射と最適イメージングとの間に２４〜４８時間を要する点で¹¹¹Ｉｎ−標識ＷＢＣの不利を共有する。加えて、抗体は、産生するのが困難であり、生物学的病原菌（例えば、レトロウイルス）での可能な汚染に関する安全性に関連する。加えて、外科手術または放射療法による癌の治療の効果的治療は病気の位置決めおよび程度の知識を要する。いずれかの形態の療法の後のまたはその間の腫瘍の進行／退行をモニターする手段も高度に望ましい。ＣＴおよびＭＴＩのごとき高分解能イメージング物理療法の進歩は、多くの新生物の検出を可能とする。しかしながら、ある種の腫瘍およびその転移は小さくて、これらの方法によって位置決めするのは困難である。核医学は潜在的により感度のよい別法を提供する。容易な体外検出を可能とするのに十分な、いずれかのおよび全ての癌性組織に選択的に結合しまたはそれに局所化する放射性トレーサーは、放射性診断腫瘍学の最終ゴールと考えることができよう。また、心臓学における顕著な進歩にも拘わらず、冠動脈病は、依然、米国での死亡の主要原因である。この病気の最終の事象は、通常、アテローム性動脈硬化症粥状斑合併症の部位における１またはそれ以上の冠動脈の閉塞的血栓によって引き起こされる致死的心筋梗塞である。従って、好ましくは非侵入的な、アテローム性動脈硬化症粥状斑の位置および／または程度を測定する手段は、適当な患者の管理を選択する助けとして高度に望ましい。アテローム性動脈硬化症粥状斑の最も顕著な特徴の１つは、脂質担持マクロファージである泡沫細胞の蓄積である。 β−グルカンは、元来、酵母および真菌類細胞壁の成分として発見された、１ ,３および１,６結合β−Ｄ−グルコース残基よりなるオリゴグルコシドである（バートニッキィ−ガルシア(Bartnicki-Garcia)、アヌ・レブ・マイクロバイオル (Ann．Rev．Microbiol.)、１９６８、２２、８７）。元来不溶性形態で得られが、β−グルカンはそれ以来、可溶性の低分子量オリゴマー（ジャヌズ(Janusz)ら、１９８９、ジャーナル・オブ・イミュノロジー(J．Immunol.)１４２：９５９ −９６５）として得られている。それらは、単球、マクロファージおよび好中球の細胞表面で見い出された受容体（β−グルカン受容体と呼ばれる）へのその特異的結合を介して代替補体経路を活性化することによって哺乳動物の宿主防御機構を促進するのに活性であることが示されている（クゾプ(Czop)およびカイ(Kay )、１９９１、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン(J．Exp．Me d.)１７３：１５１１−１５２０；クゾプ(Czop)ら、１９８９、急性アレルギー反応の生物化学：第５回国際シンポジウム(Biochemistry ofthe Acute Allergic Reactions:Fifth International Symposium)、第２８７−２９６頁；クゾプ(Cz op)、１９８６、パソル・イミュノパソル・レス(Pathol. Immunopathol．Res.)５：２８６−２９６；クゾプ(Czop)およびオーステン(Austen)、１９８５、ジャーナル・オブ・イミュノロジー(Immunol.)１３４：２５８８−２５９３）。粒状 β−グルカンのin vivo投与は、細菌、ウイルスおよび真菌類を含めた多くの病原菌からの保護を供し、ならびに腫瘍の増殖を減少させることが示されている（クゾプ(Czop)ら、１９８９、急性アレルギー反応の生物化学：第５回国際シンポジウム(Biochemistry of the Acute Allergic Reactions:Fifth International Symposium)、第２８７−２９６頁）。現在までに報告されている最も小さな活性β−グルカンは肝グルコシドである（ジャヌズ (Janusz)ら、１９８９、ジャーナル・オブ・イミュノロジー(Immunol.)１４２：９５９）。オンダードンク(Onderdonk)および共働者（１９９２、インフェクション・アンド・イミューニティ(Infection & Immunity)、６０：１６４２〜１６４７）は、この小さなβ−グルカンの抗−感染性特性を記載している。また、β −グルカンは、腫瘍に局在化されるマクロファージの数を増加させることによって起こると信じられ、抗−腫瘍増殖効果を呈することが示されている（ジ・ルジオ(Di Luzio)、、細網内内皮細胞系の病理生理学(Pathophysiology ofthe R eticuloendothelial System)(アルトルオ(Altruo)およびサバ(Saba)編)、ラーベン・プレス(Raven Press)、ニューヨーク州、２０９〜２２４頁）。クゾプ(Czop)およびジャヌズ(Janusz)の米国特許第５,０５７,５０３号（１９９１）は、β−グルカン受容体と反応できる肝グルコシド、その単離およびその治療剤用途を特許請求している。ジャマス(Jamas)らのＰＣＴ／ＵＳ９０／０３４４０は薬物送達ビビクルとしてのおよびアジュバントとしてのβ−グルカンを特許請求している。ジャマス(Jamas)らのＰＣＴ／ＵＳ９０／０５０２２はβ−グルカンを投与することによる免疫系を活性化する方法を特許請求している。ジャマス(Jamas)らのＰＣＴ／ＵＳ９０／０５０４１は可溶性β−グルカンを産生する方法を特許請求している。放射性同位体標識結合性部位を調製する方法およびそれらを^99mＴｃで標識する方法が、同時係属米国特許出願第０７／６５３,０１２号、第０７／７５７,４７０号、第０７／８０７,０６２号、第０７／８５１,０７４号、第０７／８７１ ,２８２号、第０７／８８６,７５２号、第０７／８９３,９８１号、第０７／９５５,４６６号、０７／９７７,６２８号、第０８／０１９,８６４号、第０８／０４４,８２５号、第０８／０７３,５７７号、第０８／０９２,３５５号、第０８／０９５,７６０号、第０８／０９８,２０６号、第０８／２１０,８２２号、第０８／２３６,４０２号、第０８／２４１,６２５号、第０８／２４４,３３６号、第０８／２５３,９７３号、第０８／２５３,３１７号および第０８／２５３,６７８号ならびにＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／００７５７、ＰＣＴ／ＵＳ９２／１０７１６、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０２３２０、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０３６８７、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０４７９４、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０６０２９、ＰＣＴ／ＵＳ／０９３８７、ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１８９４、ＰＣＴ／ＵＳ／０５８９５、およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０６２７４に記載されており、ここに出典明示して本明細書の一部とみなす。発明の概要本発明は、放射性同位体で放射能標識したβ−グルカンであるか、あるいは放射性同位体で放射能活性に標識したβ−グルカン由来試薬であるシンチグラフィーイメージング剤を提供する。本発明のβ−グルカン由来試薬は、放射性同位体標識結合性部位に共有結合したβ−グルカンよりなる。本発明のシンチグラフィーイメージング剤は感染、炎症、癌およびアテローム性動脈硬化症の部位を含めた哺乳動物体内の病理学的部位をイメージングするのに有用である。本発明の第１の態様は、哺乳動物体内の部位をイメージングするためのシンチグラフィーイメージング剤を調製するための試薬よりなり、該試薬は分子量約２０００ｋＤａまでの、１,３−および１,６−結合Ｄ−グルコシド配列および放射性同位体標識結合性部位よりなる。第２の態様において、本発明のシンチグラフィーイメージング剤は可溶性β− グルカンである。第３の態様において、本発明のシンチグラフィーイメージング剤は放射性同位体^99mＴｃよりなる。本発明のもう１つの態様において、放射性同位体標識結合性部位は１−アミノ、１−ヒドラジノまたは１−チオ置換基を介してβ−グルカンに結合している。さらにもう１つの態様において、本発明の試薬はβ−グルカンおよび式：Ｉ．Ｃｐ（ａａ）Ｃｐ［式中、Ｃｐは保護されたまたは保護されていないシステイン残基であって、（ａａ）はいずれかのα−もしくはβ−アミノ酸を表す］で示される放射性同位体標識結合性部位よりなり、ここに、該放射性同位体標識結合性部位はβ−グルカンに共有結合されている。好ましい具体例において、該アミノ酸はグリシンである。もう１つの好ましい具体例において、放射性同位体標識結合性部位は、β−グルカンに対してエーテル、チオエーテルまたはアミン結合を形成するリンカーを介してβ−グルカンに結合している。もう１つの態様において、本発明は、以下の構造式： II．Ａ−ＣＺ（Ｂ）−（Ｃ（Ｒ¹Ｒ²））_n−Ｘ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＣＯ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＣＯ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨまたは−ＮＨＲ³；−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）− （リンカー）−（β−グルカン）、−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴；ＸはＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）、−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴ ；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分岐鎖または環状の低級アルキル；ｎは０、１または２；および（１）Ｂが−ＮＨＲ³または− Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）である場合、ＸはＳＨであってｎは１または２；（２）Ｘが−ＮＨＲ³または−（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）である場合、ＢはＳＨであってｎは１または２；（３）ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β− グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣまたは（β−グルカン）− （リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣ、ＸはＳＨであってｎは０または１；（４）ＡがＨまたはＲ⁴である場合、ＢがＳＨであれば、Ｘは−ＮＨＲ₃または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）であって、ＸがＳＨであれば、Ｂは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β −グルカン）；（５）ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣまたは（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣであってＢはＳＨ；（６）Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣまたは（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣであってＢはＳＨかつｎは０；および（７）ＺがＳＨであってＸがＳＨである場合、ｎは０ではない；ここに、該チオール部位は還元形態であり、ここに、（アミノ酸）はチオール基を含有しないいずれかの第一級β−もしくはβ−アミノ酸を意味する］を有する単一チオール含有放射性同位体標識結合性部位よりなる試薬を提供する。本発明のこの態様の特別の具体例において、放射性同位体標識錯化部位は： IIａ．−（アミノ酸）¹−（アミノ酸）²−｛Ａ−ＣＺ（Ｂ）−（Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)）_n −Ｘ｝、 IIｂ．−｛Ａ−ＣＺ（Ｂ）−（Ｃ（Ｒ¹Ｒ²））_n−Ｘ｝−（アミノ酸）¹−（アミノ酸）²、 IIｃ．−（第一級α，ω−またはβ，ω−ジアミノ酸）−（アミノ酸）¹−｛Ａ−ＣＺ（Ｂ）−（Ｃ（Ｒ¹Ｒ²）_n−Ｘ｝、または IIｄ．−｛Ａ−ＣＺ（Ｂ）−（Ｃ（Ｒ¹Ｒ²））_n−Ｘ｝−（アミノ酸）¹−（第一級α，ω−またはβ，ω−ジアミノ酸）［式中、（アミノ酸）¹および（アミノ酸）²は各々、独立して、チオール基を含有しないいずれかの天然に生じる、修飾された、置換されたまたは改変されたα −もしくはβ−アミノ酸；ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）− （リンカー）−ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−ＯＯＣまたはＲ⁴ ；ＢはＨ、ＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（リンカー）−（β−グルカン）またはＲ⁴；ＸはＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（リンカー）−（β− グルカン）またはＲ⁴；またはＲ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は独立してＨまたは直鎖または分岐鎖または環状の低級アルキル；ｎは０、１または２の整数；および（１）Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（リンカー）−（β−グルカン）である場合、ＸはＳＨであってｎは１または２；（２）Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（リンカー）−（β−グルカン）である場合、ＢはＳＨであってｎは１または２；（３）ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−ＯＯＣ、ＸはＳＨであってｎは０または１；（４）ＡがＨまたはＲ⁴である場合、ＢがＳＨであれば、Ｘは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（リンカー）−（β−グルカン）であって、ＸがＳＨであれば、Ｂは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（リンカー）− （β−グルカン）；（５）ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−ＯＯＣであってＢはＳＨ；（６）Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−ＮＨＯＣ、（β− グルカン）−（リンカー）−ＯＯＣであってＢはＳＨかつｎは０；および（７）ＺがＳＨであってＸがＳＨである場合、ｎは０ではない；ここに、該チオール部位は還元形態を意味する］である式を有する。さらにもう１つの態様において、本発明は、以下の構造式：［本発明目的では、構造式IIIを有する放射性同位体標識結合性部位をピコリン酸（Ｐｉｃ）−をベースとする部位という］または［本発明目的では、構造式ＩＶを有する放射性同位体標識結合性部位をピコリルアミン（Ｐｉｃａ）−をベースとする部位という］［式中、ＸはＨまたは保護基：（アミノ酸）はいずれかのアミノ酸である］を有する放射性同位体標識結合性部位に共有結合したβ−グルカンよりなる試薬を提供する。好ましい具体例において、該アミノ酸はグリシンであって、Ｘはアセチアミドメチル保護基である。本発明のさらにもう１つの具体例において、β−グルカンおよび該β−グルカンに共有結合したビスアミノビスチオール放射性同位体標識結合性部位よりなる、哺乳動物体内の部位をイメージングするためのシンチグラフィーイメージング剤を調製するための試薬が提供される。本発明のこの具体例におけるビスアミノビスチオール放射性同位体標識結合性部位は、［式中、各Ｒ⁵は独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅となり得；各（ｐｇｐ）^Sは独立してチオール保護基またはＨとなり得；ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３；Ａは線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体；およびＸは（リンカー）−β−グルカンを意味する］［式中、各Ｒ⁵は独立してＨ、１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、あるいは低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたフェニル；ｍ、ｎおよびｐは独立して１または２；Ａは線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体；ＶはＨまたは−ＣＯ−（リンカー）−β−グルカン；Ｒ⁶はＨまたは（リンカー）−β−グルカン；但し、ＶがＨである場合、Ｒ⁶は（リンカー）−β−グルカンであって、Ｒ⁶がＨである場合、Ｖは−ＣＯ−（リンカー）−β−グルカンを意味する］［本発明目的では、これらの構造を有する放射性同位体標識結合性部位を「ＢＡＴ」部位という］よりなる群から選択される式を有する。本発明は、本発明のβ−グルカンまたは試薬と^99mＴｃとの間の錯体であるシンチグラフィーイメージング剤、および本発明のβ−グルカンおよび試薬を^99m Ｔｃで放射能標識する方法よりなる。本発明によって提供される放射能標識錯体は、還元剤の存在下で本発明のβ−グルカンまたは試薬を^99mＴｃと反応させることによって形成される。好ましい還元剤は、限定されるものではないが、ジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンを包含する。また、本発明の錯体は、本明細書で提供するごとく、予め還元した^99mＴｃ錯体のリガンド交換によって本発明のβ−グルカンまたは試薬を^99mＴｃで標識することによっても形成される。また、本発明は、^99mＴｃで放射能標識した本発明のβ−グルカンまたは試薬であるシンチグラフィーイメージング剤を調製するためのキットを提供する。本発明によって提供されるβ−グルカンまたは試薬を^99mＴｃで標識するためのキットは、所定量の本発明のβ−グルカンまたは試薬および該β−グルカンまたは試薬を^99mＴｃで標識するのに十分な量の還元剤を含有するシールされたバイアルよりなる。本発明は、in vivoでガンマカウンターシンチグラフィーイメージを得ることによって、哺乳動物体内の感染、炎症、癌およびアテローム性動脈硬化症を含めた病理学的部位をイメージングするための放射能標識β−グルカンおよび試薬であるシンチグラフィーイメージング剤を使用する方法を提供する。これらの方法は、診断有効量の放射能標識された本発明のβ−グルカンまたは試薬を投与し、次いで、哺乳動物体内の病理学的部位に局在化した放射性同位体標識によって発せられるガンマ放射を検出することよりなる。本発明の特に好ましい具体例は、以下のある好ましい具体例および請求の範囲のより詳細な記載から明らかとなるであろう。発明の詳細な記載本発明のβ−グルカンは直鎖または分岐鎖の１,３および１,６結合Ｄ−グルコシド配列を有する。それらは、共に、約２０００ｋＤａまでの分子量を有する不溶性および可溶性分子存在よりなる。好ましい具体例において、該β−グルカンは可溶性である。最も好ましくは、該可溶性β−グルカンはポリ−β１−６−グルコトリオシル−β１−３−グルコピラノースである。Ｃｐ（ａａ）Ｃｐ−含有β−グルカン試薬において、Ｃｐは保護されてシステインであり、ここに、Ｓ−保護基は同一または異なって、 −ＣＨ₂−アリール（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −ＣＨ−（アリール）₂（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −Ｃ−（アリール）₃（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −ＣＨ₂−（４−メトキシフェニル）； −ＣＨ−（４−ピリジル）（フェニル）₂； −Ｃ（ＣＨ₃）₃； −９−フェニルフルオレニル； −ＣＨ₂ＮＨＣＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＨ₂−ＮＨＣＯＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＯＮＨＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−フェニルであり得るが、これらに限定されるものではない。好ましい保護基は式−ＣＨ₂−ＮＨＣＯＲ（ここに、Ｒは１ないし８個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニルまたは低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキシ、カルボキシもしくは低級アルコキシカルボニルで置換されたフェニル）を有する。本発明のβ−グルカンは当該分野でよく知られた方法によって酵母のごとき天然源から得られる（例えば、マナーズ(Manners)ら、１９７４、ジャーナル・オブ・ジェン・モイクロバイオル(J．Gen．Microbiol.)８０：４１１−４１７参照）。小さな可溶性β−グルカンは当該分野で公知の方法によって大きなβ−グルカンから得られるか（例えば、ジァヌズ(Janusz)ら、１９８９、ジャーナル・オブ・イミュノロジー(J.Immunol.)１４２：９５９−９６５およびジャマス(Jamas )ら、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０５０４１参照）、あるいは化学合成によって得ることができる。好ましい可溶性β−グルカンはポリ−β１−６−グルコトリオシル −β１−３−グルコピラノースであり、肝グルコシドであるものも含む。本明細書で用いる可溶性β−グルカンなる語は、約１０ｍｇ／ｍＬまで生理学的に適合する溶液に溶解することを意味する。本発明の試薬は放射性同位体標識結合性部位に共有結合しているβ−グルカンよりなる。該放射性同位体標識結合性部位はβ−グルカンに直接結合できるか、あるいはそれはリンカーを介して結合できる。放射性同位体標識結合性部位の直接的結合は、有利には、１−チオエーテル、１−ヒドラジノまたは１−アミノ基によって作成されるか、あるいはβ−グルカンのいずれかのヒドロキシル基に対するエステルまたはエーテル結合を介して作成される（例えば、ヘール(Her)ら、１９８７、ジャーナル・オブ・カルボヒドラート・ケミストリー(J．Carbohyd rate Chem.)６：１２９〜１３９；ボグバルド(Bogwald)ら、１９８６、カルボヒドラート・リサーチ(Carbohydrate Res.)１４８：１０１〜１０７）。該リンカーは通常約５００Ｄａ未満の式量の小さな原子団であり、有利には、所望により複数のヘテロ原子、好ましくは酸素よりなっていてもよい、かつ所望により好ましくは親水性部位で置換されていてもよい、小さな（約１０個までの炭素原子）直鎖または分岐鎖の二価アルキル、アルカリールまたはアリール基であり得る。また、放射能標識部位はβ−グルカンの部分的酸化によりβ−グルカンに結合され得る。β−グルカンの部分的酸化はβ−グルカン上のさらなるアルデヒド基を暴露し、それにより、β−グルカンの受容体結合親和性を実質的に減少させることなく、β−グルカン分子当たり多量の放射性同位体標識結合性部位の結合を可能とする。放射性テクネチウムと本発明のβ−グルカンおよび試薬との錯体の形成において、テクネチウム錯体、好ましくは^99mＴｃ過テクネチウム酸塩を還元剤の存在下でβ−グルカンまたは試薬と反応させる。好ましい還元剤はジチオン酸、第一スズおよび第一鉄イオンであり；最も好ましい還元剤は塩化第一スズである。かかる錯体を調製するための手段は、便宜には、所定量の標識すべき本発明のβ− グルカンまたは試薬および該試薬を^99mＴｃで標識するのに十分な量の還元剤を含有するシールしたバイアルよりなるキットにて提供される。別法として、錯体は、本発明のβ−グルカンまたは試薬を、テクネチウムの予め形成されたラービル錯体および移行リガンドとして知られているもう１つの化合物とを反応させることによって形成できる。このプロセスはリガンド交換として知られており、当業者によく知られている。該ラービル錯体は例えばタルトラート、シトラート、グルコナートまたはマンニトールのごとき移行リガンドを用いて形成できる。本発明で有用な^99mＴｃ過テクネチウム酸塩の中には、ナトリウム塩のごときアルカル金属塩、アンモニウム塩または低級アルキルアンモニウム塩が含まれる。本発明のβ−グルカンおよび試薬とＴｃ−過テクネチウム酸塩または予め形成された^99mＴｃラービル錯体との反応は、室温にて水性媒質中で行うか、あるいは短時間（５ないし約６０分間）加熱して行うことができる。［−１］の電荷を有するアニオン錯体が、ナトリウムカチオン、アンモニウムカチオン、モノ、ジ −もしくはトリ−低級アルキルアミンカチオン等のごとき適当なカチオンとの塩の形態で水性媒質中で得られる場合。医薬上許容されるカチオンとのアニオン錯体のいずれの通常の塩を本発明で用いることができる。本発明の好ましい具体例において、^99mＴｃ−標識β−グルカンおよびβ−グルカン試薬を調製するためのキットが提供される。適量のβ−グルカンまたは試薬を、該β−グルカンまたは試薬を^99mＴｃで標識するのに十分な量で塩化第一スズのごとき還元剤を含有するバイアルに導入する。（例えば、タルトラート、シトラート、グルコナートまたはマンニトールのごとき）前記した移行リガンドの適量も含ませることができる。^99mＴｃ錯体を形成するにおいて、一般に、１ｍｌ当たり約０.０１ミリキュリー（ｍＣｉ）ないし１００ｍＣｉの濃度にて放射能を含有する溶液中で放射性錯体を形成するのが好ましい。また、本発明のシンチグラフィーイメージング剤は、放射能標識したβ−グルカンまたは放射能標識したβ−グルカン試薬を白血球と共にインキュベートすることによって調製することもでき、ここに、白血球は放射能標識した種を摂取し、次いで、放射能標識白血球として投与できる。本発明によって提供される放射能標識シンチグラフィーイメージング剤は、膿傷および「隠れた」感染および炎症性腸疾患の部位を含めた、炎症および感染の部位を含む病理学的部位を可視化するのに使用できる。また、提供されるイメージング剤はアテローム性動脈硬化症粥状斑および腫瘍の部位をイメージするのに使用できる。本発明では、シンチグラフィーイメージング剤は単一の注射用量で投与する。滅菌生理食塩水溶液または血漿のごとき当業者に公知のいずれの通常の担体も、注射溶液を調製するために放射能標識した後に用いて、種々の器官、腫瘍等を診断的にイメージすることができる。一般に、投与すべき単位用量は約０.０１ｍＣｉないし約１００ｍＣｉ、好ましくは１ｍＣｉないし２０ｍＣｉの放射能を有する。単位投与量にて注射すべき溶液は約０.０１ないし約１０ｍｌである。静脈投与の後、in vivoでの器官または腫瘍のイメージングが数分以内に起こり得る。しかしながら、所望ならば、患者への注射の後数時間またはより長い時間内にイメージングが起こるようにできる。ほとんどの場合、投与された用量のうち十分量が１時間の１／１０以内にイメージすべき領域に蓄積し、シンチフォトを取ることが可能となる。診断目的にシンチグラフィーイメージングのいずれの常法も本発明で用いることができる。本発明によって提供されるシンチグラフィーイメージング剤は、生理食塩水媒体のごとき静脈内注射用のいずれかの通常の媒体中にて、あるいは血漿媒体中にて静脈内投与できる。また、かかる媒体は例えば浸透圧を調整するための医薬上許容される塩、緩衝液、防腐剤等のごとき通常の医薬上許容される添加剤物質を含有させることもできる。好ましい媒質のうちには通常の生理食塩水および血漿がある。これらの化合物を製造し標識する方法を以下の実施例でさらに詳しく説明する。これらの実施例は前記した方法のある態様および有利な結果を説明する。これらの実施例は例示するものであって限定するものではない。実施例１試薬の合成本実施例に記載する合成スキームにおいて、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを、およびＤＩＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを表すことが理解されよう。ポリ−β１−６−β１−３−グルコピラノース（ＰＧＧ）はジャーマス(Jamas )ら（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９０／０５０４１）によって記載されている手法を用いて得られる。 β−グルカンの選択的酸化はハイ(Hay)らによって記載されている手法（１０６５、メト・カルボヒドラート・ケム(Meth．Carbohydrate Chem)５：３５７− ３６１）を用いて達成される。Ｎ−α−Ｂｏｃ−リシル−グリシル−（Ｓ−トリチル）システインアミド、グリシル−ジリシル−（Ｓ−トリチル）システインアミドおよびクロロアセチル− （Ｓ，Ｓ’−ビス−アセトアミドメチル）システイニル−グリシル−システインアミドは固相合成法によって調製され、逆相ＨＰＬＣまたは透析濾過によって精製される。Ｎ¹，Ｎ⁴−ビス（２−メルカプト−２−メチルプロピル）−１，４，１０−トリアザデカンとのコンジュゲートは、約６５℃にて、約ｐＨ７で、約１ないし１００ｍｇ／ｍＬのβ−グルカン（例えば、ＰＧＧ）を水中の約１.５ミリモルのＮ¹−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ¹,Ｎ⁴−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）−１，４，１０−トリアザデカン、セロソルブまたはそれらの混合物と１ないし約１０時間反応させ、続いてＮａＢＨ₃ＣＮで還元し、続いてトリフルオロ酢酸で脱保護することによって得られる。生成物は分取用ＨＰＬＣまたは透析濾過によって精製する。同様に、ε−（リシル−グリシル−システインアミド）およびグリシル−グリシル−システインアミドのコンジュゲートは、各々、Ｎ−α−Ｂｏｃ−リシル− グリシル−（Ｓ−トリチル）システインアミドおよびグリシル−グリシル−（Ｓ −トリチル）システインアミドから調製される。Ｎ⁶，Ｎ⁹−ビス（２−メルカプト−２−メチルプロピル）−６,９−ジアザノナン酸のコンジュゲートは、約１.５ミリモルのＤＩＥＡを含有し、かつ所望により約０.１５ミリモルの４−ジメチルアミノピリジンを含有していてもよい水、ＤＭＳＯまたはＤＭＦ中の約１ないし１００ｍｇ／ｍＬのβ−グルカン（例えば、ＰＧＧ）を、約１.５ミリモルのＮ⁹−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ⁶，Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）−６,９−ジアザノナン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと室温で反応させ、続いてＴＦＡで脱保護し、ＨＰＬＣまたは透析濾過することによって調製される。（Ｓ,Ｓ’−ビス−アセトアミドメチル）システイニル−グリシル−システインアミドのコンジュゲートは、ＤＭＳＯ中の約１ないし１００ｍｇ／ｍＬのβ− グルカン（例えば、ＰＧＧ）を、ナトリウムメチルスルフィニルメタニドまたはもう１つの適当な塩基（約１.６ミリモル塩基／１００ｍｇβ−グルカン）と１ないし約２４時間反応させ、得られた混合物を、２０および５０℃の間で、約１ .６ミリモルのクロロアセチル−（Ｓ,Ｓ’−ビス−アセトアミドメチル）システイニル−グリシル−システインアミドと約１ないし５時間反応させ、続いてＨＰＬＣまたは透析濾過することによって調製される。 β−グルカン−放射性同位体標識結合性部位コンジュゲートの能力はジャヌズ (Janusz)ら（１９８９、ジャーナル・オブ・イミュノロジー（J．Immunol.１４２：９５９−９６５）によって開示されている方法を用いて測定される。実施例２Ｔｃ−９９ｍで放射能標識する一般的方法１．実施例１に記載したごとくに調製したβ−グルカンまたは試薬約０.１ｍｇを０.１ｍＬの水または５０／５０エタノール／水に溶解させる。メタノールに予め溶解させた塩化第一スズ、または水に予め溶解させた酒石酸第一スズとしての第一スズ塩約１００μｇを添加し、続いて約０.１ｍＬ中の１〜１０ｍＣｉ⁹ ^9m Ｔｃ過テクネチウム酸塩を添加する。混合物を室温であるいは１００℃で１５〜３０分間放置する。可溶性β−グルカンについては、次いで、調製物を０.２ μｍのフィルターを通して濾過し、ＨＰＬＣによってＴｃ−９９ｍ標識生成物の純度を測定する。不溶性β−グルカン生成物の純度は生理食塩水で展開したＩＴＬＣによって評価する。２．実施例１に記載したごとくに調製した約０.１ｍｇのβ−グルカンまたは試薬を０.１ｍＬの水または５０／５０エタノール／水またはリン酸緩衝生理食塩水または５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ〜５.６または７.４）に溶解させる。Ｔｃ−９９ｍグルセプタートは、２００ｍＣｉまでを含有するＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸ナトリウム１.０ｍＬでGlucosanバイアル（イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・インコーポレイテッド（E.I.Dupont de Nemours，Inc .）を復元することによって調製し、室温で１５分間放置する。次いで、２５μ ｌのＴｃ−９９ｍグルセプタートをペプチドに添加し、反応を室温または１００ ℃で１５〜３０分間進行させた。可溶性β−グルカンについては、次いで、調製物を０.２μｍのフィルターを通して濾過し、Ｔｃ−９９ｍ標識生成物の純度はＨＰＬＣによって測定する。不溶性β−グルカン生成物の純度は生理食塩水で展開したＩＴＬＣによって評価する。実施例３ β−グルカン−（Ｌｙｓ（ＣＯ（ＣＨ₂）₃ＣＯＮＨＮＨ₂）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ −Ｐｈｅ.アミド）アダクトの調製および放射能標識Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−ＧｌｙおよびＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＯ（ＣＨ₂）₃ＣＯＮＨＮＨＢｏｃ）アミノ酸前駆体を用いて固相ペプチド合成法によって調製したペプチドＬｙｓ（ＣＯ（ＣＨ₂）₃ＣＯＮＨＮＨ₂）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ．アミド（２９ｍｇ、５０μモル）を、β− グルカン（１０００００ダルトンの名目分子量を有する；ＮａＣｌ水溶液０.２０８ｍＬ中０.０５μモル）の溶液に添加した。この混合物を６５℃で約３６時間撹拌した。０.５ｍＭＥＤＴＡを含有する０.５ｍＬリン酸緩衝液に溶解させたジチオスレイトール（７０ｍｇ、４５０μモル）を混合物に添加し、次いで、これを室温で約１８時間放置した。得られた混合物を、１００００の名目分子量限界のMicrocon１０ユニット（アミコン(Amicon)、ベバリー(Beverly)、マサチューセッツ州）を用いて濾過し、残渣を０.１５ＭＮａＣｌで３回洗浄した。ゲル濾過ＨＰＬＣ分析（０.１５ＭＮａＣｌで１０ｍＬ／分にて溶出し、インライン屈折率およびＵＶ₂₁₄検出器を装備した、ＰＷ_XL、０.６×４ｃｍガードカラムと共にＴＳＫ−Ｇｅｌ^RＧＭＰＷ_XL、０／７９×３０ｃｍカラムを使用）は、屈折率モニターおよびＵＶスペクトロスコピー双方によって検出され、出発β−グルカン物質と同一のカラムを通しての保持時間（約９.４分）を有する単一のピークを示した。かく調製されたβ−グルカンアダクトを以下のごとくに放射能標識した。β− グルカン−（Ｌｙｓ（ＣＯ（ＣＨ₂）₃ＣＯＮＨＮＨ₂）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ．アミドアダクトの０.１ｍＬ溶液（０.１５ＭＮａＣｌ中約１ｍｇ）に、１. ０ｍＬＴｃ−９９ｍジェネラスター(generastor)溶出物でGlucoscan^Rキットを復元することによって調製したＴｃ−９９ｍグルセプタートの溶液５０μＬを添加した。この溶液を室温で１５分間インキュベートした。前記したゲル濾過ＨＰＬＣは、９.９分（未標識出発物質のおよその位置）において単一の放射性ピークを示し、これはコンジュゲートの実質的に完全な標識を示す。実施例４Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドのシンチグラフィーイメージング剤および生体分布前記したごとく提供しされたＴｃ−９９ｍ標識β−グルカン試薬の有効性を証明するために、ニュージランド（New Zealand）ホワイトウサギを、イー・コリの効力ある株で左腓に筋肉内接種する。２４時間後、該動物をケタミンおよびキシラジンの筋肉内注射によって鎮静させ、次いで、Ｔｃ−９９ｍ標識β−グルカン（≦１５０μｇ、２〜１０ｍＣｉ）を静脈内注射する。該動物をガンマカメラ（ＬＥＡＰコリメーター／Ｔｃ−９９ｍにつき光電ピーク）の視野に仰臥にて位置させ、注射後最初の１時間にわたってイメージし、次いで、注射後の次の３時間にわたって約１時間間隔でイメージする。動物をイメージの取得の間に回復させ、要すれば再度麻酔する。最後のイメージングの完了に際して、各動物をフェノバルビタールの静脈内過剰用量によって犠牲にし、切開して、血液試料ならびに感染筋肉組織および対照筋肉組織を得る。組織試料の重量を計り、標準量の注射用量と共に、ガンマカウンターを用いてカウントし、該組織に残存する（組織１グラム当たりの）パーセント注射用量を測定する。感染した筋肉組織の１グラム当たりの注射用量のパーセント−対−非感染筋肉組織のそれの比、および感染した筋肉組織−対−血液の比を各ペプチドについて計算する。本発明のＴｃ−９９ｍ標識試薬を注射したウサギの全身のシンチフォトおよび脚のイメージをそれにより得る。これまでの開示は本発明の特定の具体例を強調するもので、すべての修飾または改変同等物は添付する請求の範囲に記載した発明の精神および範囲内のものであることは理解されるべきである。

【手続補正書】【提出日】１９９６年６月１０日【補正内容】（１）明細書第７頁１３行、「；Ｂは」とあるを、「;ＺはＨまたはＲ⁴;Ｂは」と捕正する。（２）同書第８頁下から５行、「；Ｂは」とあるを、「;ＺはＨまたはＲ⁴;Ｂは」と補正する。（３）請求の範囲を別紙のとおり補正する。補正した請求の範囲１． ^99mＴｃ−結合性部位に共有結合したβ−グルカンよりなる試薬である組成物。２．該β−グルカンが可溶性である請求項１記載の試薬。３．該可溶性β−グルカンがポリ−β１−６−グルコトリオシル−β１−３− グルコピラノースである請求項２記載の試薬。４．該 ^99mＴｃ−結合性部位が式：Ｃｙｓ（ｐｇｐ）^S−（ａａ）−Ｃｙｓ（ｐｇｐ）^S ［式中、（ｐｇｐ）^SはＨまたはチオール保護基であって、（ａａ）はいずれかのα−もしくはβ−アミノ酸を表す］またはＡ−ＣＺ（Ｂ）−（Ｃ（Ｒ¹Ｒ²）_n−Ｘ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＣＯ、（β−グルカン）−（リンカー）−ＮＨＣＯ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨまたは−ＮＨＲ³；−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）− 、−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）またはＲ⁴；ＸはＨ、ＳＨ、−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）−、− Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは低級の直鎖もしくは分岐鎖または環状のアルキル；ｎは０、１または２；およびここに、Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（ β−グルカン）である場合、ＢはＳＨであってｎは１または２；ここに、Ｘが−ＮＨＲ³または−（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β −グルカン）である場合、ＢはＳＨであってｎは１または２；ここに、ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド） −ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣ、または（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、ＸはＳＨであってｎは０または１；ここに、ＡがＨまたはＲ⁴である場合、ＢがＳＨであれば、Ｘは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）であって、ＸがＳＨであれば、Ｂは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）；ここに、ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド） −ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣ、または（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣであってＢはＳＨ；ここに、Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣ、または（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、ＢはＳＨであってｎは０；ここに、ＢがＳＨであってＸがＳＨである場合、ｎは０ではない］またはまたは［式中、Ｘ＝Ｈまたは保護基；（アミノ酸）＝いずれかのアミノ酸］［式中、各Ｒは独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；各（ｐｇｐ）^Sは独立してチオール保護基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３；Ａ＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体］［式中、各Ｒは独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３；Ａ＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体；Ｖ＝Ｈまたは−ＣＯ−（リンカー）−（β−グルカン）；Ｒ'＝Ｈまたは（リンカー）−（β−グルカン）；ここに、Ｖ＝Ｈである場合、Ｒ'＝−（リンカー）−（β−グルカン）であって、Ｒ'＝Ｈである場合、Ｖ＝−ＣＯ−（リンカー）−（β−グルカン）；ここに、各Ｒは独立してＨ、１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、あるいは低級アルキルまたは低級アルコキシで置換されたフェニル、ここに、各ｎは独立して１または２；ここに、（リンカー）は結合手であるか、あるいはβ−グルカンに、および ⁹⁹ ^mＴｃ− 結合性部位に共有結合した二価基を意味する］を有する請求項１記載の試薬。５．式：Ｃｙｓ（ｐｇｐ）^S−（ａａ）−Ｃｙｓ（ｐｇｐ）^S を有する ^99mＴｃ−結合性部位のシステインが式： −ＣＨ₂−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ［式中、Ｒは１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、２−、３−、４− ピリジル、フェニル、あるいは低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシ、もしくは低級アルコキシカルボニルで置換したフェニルを意味する］で示される保護基を有する請求項４記載の試薬。６．該 ^99mＴｃ−結合性部位Ｃｙｓ（ｐｇｐ）^S−（ａａ）−Ｃｙｓ（ｐｇｐ）^S が式：を有する請求項４記載の試薬。７． ^99mＴｃに結合したβ−グルカンよりなるシンチグラフィーイメージング剤。８．該β−グルカンが可溶性β−グルカンである請求項７記載のシンチグラフィーイメージング剤。９．該可溶性β−グルカンがポリ−β１−６−グルコトリオシル−β１−３− グルコピラノースである請求項８記載のシンチグラフィーイメージング剤。１０．該^99mＴｃ−結合性部位が^99mＴｃに結合している請求項１記載の試薬よりなるシンチグラフィーイメージング剤。１１．該試薬が可溶性β−グルカンであるβ−グルカンよりなる請求項１０記載のシンチグラフィーイメージング剤。１２．該可溶性β−グルカンがポリ−β１−６−グルコトリオシル−β１−３ −グルコピラノースである請求項１１記載のシンチグラフィーイメージング剤。１３．還元剤の存在下でβ−グルカンを^99mＴｃと反応させることによって形成された錯体。１４．該還元剤がジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項１３記載の錯体。１５．β−グルカンおよび第一スズイオンよりなる組成物。１６．所定量のβ−グルカンおよび該β−グルカンを^99mＴｃで標識するのに十分な量の還元剤を含有するシールしたバイアルよりなる放射性医薬製剤を調製するためのキット。１７．予め還元された^99mＴｃ錯体およびβ−グルカンのリガンド交換によって形成されたβ−グルカンおよび^99mＴｃの錯体。１８．還元剤の存在下で請求項１記載の試薬を^99mＴｃと反応させることによって形成された錯体。１９．該還元剤がジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項１８記載の錯体。２０．予め還元された^99mＴｃ錯体のリガンド交換によって請求項１記載の試薬を^99mＴｃで標識することによって形成された錯体。２１．請求項１記載の試薬および第一スズイオンよりなる組成物。２２．所定量の請求項１記載の試薬および該試薬を^99mＴｃで還元するのに十分な量の還元剤を含有するシールしたバイアルよりなる放射性医薬製剤を調製するためのキット。２３．還元剤の存在下でβ−グルカンを^99mＴｃと反応させることよりなる請求項１０記載のシンチグラフィーイメージング剤を調製するための方法。２４．該還元剤がジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項２３記載の方法。２５．還元剤の存在下で請求項１記載の試薬を^99mＴｃと反応させることを特徴とする該試薬を標識する方法。２６．該還元剤がジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項２５記載の方法。２７．診断有効量の請求項７記載のシンチグラフィーイメージング剤よりなる哺乳動物体内の部位をイメージングするための医薬組成物。２８．診断有効量の請求項１０記載のシンチグラフィーイメージング剤よりなる哺乳動物体内の部位をイメージングするための医薬組成物。２９．β−グルカン−（Ｌｙｓ−（ＣＯＮＨＮＨ₂）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ．アミドアダクトよりなる組成物。３０．Ｔｃ−９９ｍで放射能標識した請求項２９記載の組成物。

Claims

【特許請求の範囲】１．放射性同位体標識結合性部位に共有結合したβ−グルカンよりなる試薬である組成物。２．該β−グルカンが可溶性である請求項１記載の試薬。３．該可溶性β−グルカンがポリ−β１−６−グルコトリオシル−β１−３− グルコピラノースである請求項２記載の試薬。４．該放射性同位体標識結合性部位が式：Ｃ（ｐｇｐ）^S−（ａａ）−Ｃ（ｐｇｐ）^S ［式中、（ｐｇｐ）^SはＨまたはチオール保護基であって、（ａａ）はいずれかのα−もしくはβ−アミノ酸を表す］またはＡ−ＣＺ（Ｂ）−（Ｃ（Ｒ¹Ｒ²）_n−Ｘ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＣＯ、（β−グルカン）−（リンカー）−ＮＨＣＯ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨまたは−ＮＨＲ³；−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸のたはペプチド）− 、−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）またはＲ⁴；ＸはＨ、ＳＨ、−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）−、− Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは低級の直鎖もしくは分岐鎖または環状のアルキル；ｎは０、１または２；およびここに、Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（ β−グルカン）である場合、ＢはＳＨであってｎは１または２；ここに、Ｘが−ＮＨＲ³または−（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β −グルカン）である場合、ＢはＳＨであってｎは１または２；ここに、ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド） −ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣ、または（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、ＸはＳＨであってｎは０または１；ここに、ＡがＨまたはＲ⁴である場合、ＢがＳＨであれば、Ｘは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）であって、ＸがＳＨであれば、Ｂは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（ペプチド）−（リンカー）−（β−グルカン）；ここに、ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド） −ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣ、または（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣであってＢはＳＨ；ここに、Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（ β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（β−グルカン）−（リンカー）−（ペプチド）−ＯＯＣ、または（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、ＢはＳＨであってｎは０；ここに、ＢがＳＨであってＸがＳＨである場合、ｎは０ではない］またはまたは［式中、Ｘ＝Ｈまたは保護基；（アミノ酸）＝いずれかのアミノ酸］［式中、各Ｒは独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；各（ｐｇｐ）^Sは独立してチオール保護基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３；Ａ＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体］［式中、各Ｒは独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３；Ａ＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体；Ｖ＝Ｈまたは−ＣＯ−（リンカー）−（β−グルカン）；Ｒ'＝Ｈまたは（リンカー）−（β−グルカン）；ここに、Ｖ＝Ｈである場合、Ｒ'＝−（リンカー）−（β−グルカン）であって、Ｒ'＝Ｈである場合、Ｖ＝−ＣＯ−（リンカー）−（β−グルカン）；ここに、各Ｒは独立してＨ、１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、あるいは低級アルキルまたは低級アルコキシで置換されたフェニル、ここに、各ｎは独立して１または２；ここに、（リンカー）は結合手であるか、あるいはβ−グルカンに、および放射性同位体標識結合性部位に共有結合した二価基を意味する］を有する請求項１記載の試薬。５．式：Ｃ（ｐｇｐ）^S−（ａａ）−Ｃ（ｐｇｐ）^S を有する放射性同位体標識結合性部位のシステインが式： −ＣＨ₂−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ［式中、Ｒは１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、２−、３−、４− ピリジル、フェニル、あるいは低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシもしくは低級アルコキシカルボニルで置換したフェニルを意味する］で示される保護基を有する請求項４記載の試薬。６．該放射性同位体標識結合性部位Ｃ（ｐｇｐ）^S−（ａａ）−Ｃ（ｐｇｐ）^S が式：を有する請求項４記載の試薬。７．放射性同位体に結合したβ−グルカンよりなるシンチグラフィーイメージング剤。８．該β−グルカンが可溶性β−グルカンである請求項７記載のシンチグラフィーイメージング剤。９．該可溶性β−グルカンがポリ−β１−６−グルコトリオシル−β１−３− グルコピラノースである請求項８記載のシンチグラフィーイメージング剤。１０．該放射性同位体が^99mＴｃである請求項７記載のシンチグラフィーイメージング剤。１１．該放射性同位体が¹²³Ｉである請求項７記載のシンチグラフィーイメージング剤。１２．該放射性同位体標識結合性部位が放射性同位体に結合している請求項１記載の試薬よりなるシンチグラフィーイメージング剤。１３．該試薬が可溶性β−グルカンであるβ−グルカンよりなる請求項１２記載のシンチグラフィーイメージング剤。１４．該可溶性β−グルカンがポリ−β１−６−グルコトリオシル−β１−３ −グルコピラノースである請求項１３記載のシンチグラフィーイメージング剤。１５．該放射性同位体が^99mＴｃである請求項１２記載のシンチグラフィーイメージング剤。１６．該放射性同位体が¹¹¹Ｉｎ、⁶⁷Ｇａおよび⁶⁸Ｇａよりなる群から選択される請求項１２記載のシンチグラフィーイメージング剤。１７．還元剤の存在下でβ−グルカンを^99mＴｃと反応させることによって形成された錯体。１８．該還元剤がジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項１７記載の錯体。１９．β−グルカンおよび第一スズイオンよりなる組成物。２０．所定量のβ−グルカンおよび該β−グルカンを^99mＴｃで標識するのに十分な量の還元剤を含有するシールしたバイアルよりなる放射性医薬製剤を調製するためのキット。２１．予め還元された^99mＴｃ錯体およびβ−グルカンのリガンド交換によって形成されたβ−グルカンおよび^99mＴｃの錯体。２２．還元剤の存在下で請求項１記載の試薬を^99mＴｃと反応させることによって形成された錯体。２３．該還元剤がジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項２２記載の錯体。２４．予め還元された^99mＴｃ錯体のリガンド交換によって請求項１記載の試薬を^99mＴｃで標識することによって形成された錯体。２５．請求項１記載の試薬および第一スズイオンよりなる組成物。２６．所定量の請求項１記載の試薬および該試薬を^99mＴｃで還元するのに十分な量の還元剤を含有するシールしたバイアルよりなる放射性医薬製剤を調製するためのキット。２７．還元剤の存在下でβ−グルカンを^99mＴｃと反応させることよりなるβ −グルカンを標識する方法。２８．該還元剤がジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項２７記載の方法。２９．還元剤の存在下で請求項１記載の試薬を^99mＴｃと反応させることを特徴とする該試薬を標識する方法。３０．該還元剤がジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項２９記載の方法。３１．請求項７記載のシンチグラフィーイメージング剤の診断有効量を投与し、次いで、哺乳動物体内の部位に局所化した放射能を検出することを特徴とする哺乳動物体内の部位をイメージングする方法。３２．請求項１２記載のシンチグラフィーイメージング剤の診断有効量を投与し、次いで、哺乳動物体内の部位に局所化した放射能を検出することを特徴とする哺乳動物体内の部位をイメージングする方法。３３．β−グルカン−（Ｌｙｓ−（ＣＯＮＨＮＨ₂）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ．アミドアダクトよりなる組成物。３４．Ｔｃ−９９ｍで放射能標識した請求項３３記載の組成物。