JPH09500896A - プロドラッグに関する改善 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、一般式ＦＴＬｉ−（ＰＲＴ）_mのプロドラッグを提供する、式中、ＦＴＬｉはファルネシルトランスフェラーゼ・インヒビター化合物のようなｒａｓインヒビターであり、ＰＲＴは酵素の作用によりｒａｓインヒビターから開裂され得るｍ個の保護基を示し、ここでｍは１〜５の整数である。

Description

【発明の詳細な説明】 プロドラッグに関する改善 本発明は、プロドラッグおよび腫瘍治療におけるその使用に関する。 プロドラッグの使用は、癌治療において臨床的に非常に重要な概念の代表例で ある。なぜなら、腫瘍関連抗原に結合するモノクローナル抗体に連結し得る(lin kable)酵素の影響下に、該プロドラッグが抗腫瘍剤に転換される場合は特に、そ のようなプロドラッグとそのような酵素・モノクローナル／抗体複合体との組み 合わせが非常に強力な臨床的薬剤となるからである。癌治療へのこのアプローチ は、しばしば「抗体指向性酵素／プロドラッグ療法(antibody directed enzyme/ prodrug therapy)」（ＡＤＥＰＴ）と称され、ＷＯ８８／０７３７８に開示され ている。 より最近、類似のアプローチ（”ＶＤＥＰＴ”）が提案されたが、そこでは、 腫瘍細胞は、抗体／酵素複合体の代わりに、プロドラッグを活性化し得る酵素を コードする遺伝子を含む(carrying)ウィルスベクターによって標的化される。該 遺伝子は、腫瘍特異的なプロモーターまたはエンハンサー配列により、転写的に 調節され得る。ウィルスベクターは、腫瘍細胞に入り、酵素を発現 し、この結果、プロドラッグは、腫瘍細胞の近辺のみで活性な薬剤に転換される （ヒューバー(Huber)ら、（プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミ ー・オブ・サイエンスイズ(Proc．Natl．Acac．Sci.)USA（1991）88、8039）。 あるいは、遺伝子の運搬(delivery)のために、非ウィルス的方法が使用された。 そのような方法には、リン酸カルシウム共沈殿法、マイクロインジェクション、 リポソーム、直接的ＤＮＡ取り込み、およびレセプター介在性ＤＮＡ転移(recep tor-mediated DNA transfer)が含まれる。これらは、モーガン・アンド・フレン チ・アンダーソン(Morgan & French Anderson)，アニュアル・レビュー・オブ・ バイオケミストリー(Annu．Rev．Biochem.)，1993，62;191に概説されている。 用語「ＧＤＥＰＴ」（遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法(gene-directed enzym e prodrug sysyem)）は、ウィルスおよび非ウィルスの両方の運搬システム(deli very system)を包含するために使用される。該酵素は、特定の細胞下区域(subce llular locations)に標的化されるか、または細胞表面で発現されても良い。 ＧＤＥＰＴおよびＡＤＥＰＴシステムは、腫瘍の部位に運搬され得る抗腫瘍剤 の濃度を増大させるが、薬剤運搬の特異性をさらに増大させる必要がある。両方 のシス テムとも、活性薬剤は、正常細胞の環境に放出されることがあり得、損傷を与え る。ＡＤＥＰＴの場合、これは、腫瘍部位への局在化を果たせなかった、複合体 によるプロドラッグの活性化が原因であり得る。ＧＤＥＰＴの場合、正常組織の 形質転換は、腫瘍から離れた酵素の発現を残余レベルに導くかもしれないし、ま たは活性薬剤は、腫瘍細胞から放出されるかもしれない。ＡＤＥＰＴシステムの 特異性を増大する方法は、ＷＯ８９／１０１４０に開示されているが、ＡＤＥＰ ＴおよびＧＤＥＰＴの特異性のレベルを向上させる継続的な必要性が存在する。 Ｒａｓは、しばしば、細胞の形質転換と関連する。発癌性の(oncogenic)ｒａ ｓは、多くのヒトの腫瘍において、例えば、５０％以上の結腸癌および９０％の 膵臓癌（マースターズ(Marsters)ら、1993、サイエンス 260 1937-1942）さらに 肺の腫瘍でも、過剰に発現される。 細胞培養物中の発癌性ｒａｓの抑制は、形質転換された表現型の逆転をもたら すことが示されていた。従って、ｒａｓの特異的なインヒビターを開発する能力 は、大きな治療的用途を有するかもしれない。 しかしながら、ｒａｓを標的化する上での１つの潜在的な落し穴は、全ての正 常細胞中の、正常な非変異の(non-mutated)ｒａｓの存在である。正常細胞では 、ｒａｓ の役割は非常に重要である。よって、形質転換細胞中の活性化されたｒａｓのみ を選択的に抑制することが必須である。 最近、発癌性ｒａｓのファルネシル化(farnesylation)を選択的に抑制する、 ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼ(farnesyltransferase)のインヒビター について記載された（コール(Kohl)ら、サイエンス、260，1934，1993；ジェイ ムズ(James)、同書、1937）。 本発明は、新規なクラスのプロドラッグを使用することにより、そのような問 題を扱い、それは、ファルネシルトランスフェラーゼのインヒビターのようなｒ ａｓインヒビターのプロドラッグである。この酵素は、発癌性ｒａｓの機能を形 質転換するための絶対的な要件である、ｒａｓのファルネシル化に必須である（ ギブズ(Gibbs)、1992、セミナーズ・イン・キャンサー・バイオロジー(seminars in Cancer biol.)、3、383）。 ＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴにおける、ファルネシルトランスフェラーゼ・イ ンヒビターのようなｒａｓインヒビターの使用は、従って、腫瘍細胞の治療のた めの、増強されたレベルの特異性を与える。ファルネシルトランスフェラーゼ・ インヒビターに基づくプロドラッグは、主として腫瘍部位でファルネシルトラン スフェラーゼ・ インヒビターに転換されるが、同時に、他の部位での、または腫瘍からのファル ネシルトランスフェラーゼ・インヒビターの放出は、非特異的細胞毒性薬剤の放 出に匹敵する細胞毒性は生じないであろう。 １つの局面において、本発明は、下記の一般式で示されるプロドラッグを提供 する： ＦＴＬｉ−（ＰＲＴ）_m 式中、ＦＴＬｉは、ファルネシルトランスフェラーゼ・インヒビター化合物のよ うなｒａｓインヒビターであり、ＰＲＴは、酵素の作用によりｒａｓインヒビタ ーから開裂され得るｍ個の保護基を示し、ここでｍは、１〜５の整数である。 好適なＦＴＬｉには、ジェイムズら（同書）およびコールら（同書）により記 載されているもの、特に下記の一般式（Ｉａ）で示されるＦＴＬｉが含まれる 式中、Ｃｙｓは、システインであり；Ａは、 基−ＮＨ．ＣＨ（Ｒ¹）．ＣＯＯＲ²［式中、Ｒ¹は、天然に生じるアミノ酸側鎖 であり、Ｒ²は、水素、メチルまたはアミノである］である。Ａが、ロイシン［ −ＮＨ．ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）．ＣＯＯＨ］基、セリン［−ＮＨ．ＣＨ （ＣＨ₂ＯＨ）．ＣＯＯＨ］基、メチオニン［−ＮＨ．ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃ ）．ＣＯＯＨ］基、またはアミド化されたメチオニン［−ＮＨ．ＣＨ（ＣＨ₂Ｃ Ｈ₂ＳＣＨ₃）．ＣＯＮＨ₂］基である、式Ｉａの化合物が好ましい。式Ｉａの化 合物は、ラセミ混合物として使用しても良く、その異性体を分離しても良い。 他の好適なＦＬＴｉには、式（Ｉｂ）または（Ｉｃ）のものが含まれる： Ｒ₃およびＲ₄は、 天然に生じるアミノ酸の側鎖であり［例えば、 −ＣＨ₃、−ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂、 −ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＯＨ、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃、−ＣＨ（Ｏ Ｈ）ＣＨ₃、それらの酸化形態を含む（例えば、メチオニンスルホキシドまたは メチオニンスルホン）］、或いは置換または非置換の脂肪族、芳香族もしくはヘ テロ芳香族基、好ましくはシクロヘキシル、フェニル、ピリジル、イミダゾリル 、或いは芳香族またはヘテロ芳香族環で必要に応じて置換された飽和または不飽 和の分岐状もしくは直鎖状の２〜８炭素原子であり； Ｘ₁は、ＣＨ₂ＣＨ₂、トランスＣＨ＝ＣＨまたはＣＨ₂ＮＨであり；および Ｘ₂は、（ＣＨ₂）_n［式中、ｎは０、１または２である］である。好ましくは 、Ｒ₃およびＲ₄は、ともにＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃を示す。 Ｘ₁が、−ＣＨ₂ＮＨ−である、式（Ｉｂ）または（Ｉｃ）の化合物は、下記の 一般的方法により得られ得る。式（ＩＸ）の化合物： ［式中、Ｙ₁は、好適な保護基、例えば、ｔ−ブトキシカルボニルであり、およ びＲ。は上記のように定義される。］、それは、ウェインレブ(Weinreb)アミド の形成およびそれに続く還元、好ましくはエーテル中ＬｉＡｌＨ₄による−３５ ℃以下での還元、により対応する保護化アミノ酸から調製され、下記式（Ｘ）の 化合物のトリフルオロ酢酸塩と無水ＤＭＦ中で反応させ： ［式中、Ｒ₄は、上記のように定義される］、続いて、還元、好ましくはトリア セトキシホウ水素化ナトリウム(sodium triacetoxy borohydride)による還元に より、下記式（ＸＩ）の化合物を得る： ［式中、Ｙ₁、Ｒ₃およびＲ₄は、上記のように定義される。］式（ＸＩ）の化合 物は、次に、トリエチルアミンの存在 下、下記式（ＸＩＩ）の化合物： ［式中、Ｘ₂は、上記のように定義される］と反応させて、下記式（ＸＩＩＩ） ： ［式中、Ｙ₁、Ｒ₃、Ｒ₄およびＸ₂は、上記のように定義される］の化合物を得る 。次に、この生成物を、例えば、酢酸エチル中、無水塩化水素の溶液で−２５℃ で処理することにより脱保護し、続いて、下記式（ＸＩＶ）の化合物と反応させ る： ［式中、Ｙ₂およびＹ₃は、好適な保護基であり、例えば、Ｙ₂は、ｔ−ブトキシ カルボニルであり、Ｙ₃は、トリチ ルであり［式（ＸＩＶ）の化合物は、ウェインレブアミドの形成およびそれに続 く還元、好ましくはエーテル中ＬｉＡｌＨ₄により、−３５℃以下での還元によ り対応する保護化システインから得ることができる。］と反応させ、脱保護の後 、式（Ｉｂ）の化合物を得、それは次に、必要に応じて加水分解されて、式（Ｉ ｃ）の化合物を得ても良い。 Ｘが−ＣＨ₂ＮＨ−である、上記の式（Ｉｂ）または（Ｉｃ）の化合物はまた 、コールらおよびジェイムズらを参照して得ても良い。 ＸがＣＨ₂ＣＨ₂またはトランスＣＨ＝ＣＨである式（Ｉｂ）または（Ｉｃ）の 化合物は、ＷＯ９４／０９７６６に記載される方法により得ても良い。 ＦＴＬｉは、酵素により除去され得るあらゆる好適な保護基と連結されて(lin ked)いても良い。そのような基の例には、ＷＯ８８／０７３７８またはＷＯ９３ ／０８２８８中に示されるものが含まれる。例えば、ＷＯ９３／０８２８８は、 ニトロレダクターゼ(nitroreductase)酵素の作用により活性化され得る「自己破 壊的(self immolative)」プロドラッグを記載している。これらのプロドラッグ は、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル化合物の誘導体である。 保護基の厳密な構造は、ｒａｓインヒビタープロドラッグがそれと共に使用さ れるＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴシステムの特質(nature)に依存する。それは、 酵素により除去され得るか、または基が不安定であり「自己破壊(self immolati on)」を受けて、活性なｒａｓインヒビター薬剤を得るような様式で、酵素によ り修飾され得る、あらゆる好適な基であって良い。 各ＦＴＬｉに付加する保護基の数は、一部分、インヒビター化合物の厳密な構 造に依存する。追加的な保護基が、プロドラッグの効力に減少を生ずる場合、こ れは、ＦＴＬｉのＦＴＬｉ−（ＰＲＴ）_mに対する活性の比率を増大させるので 、異なる数の保護基が付加されるときには、それは、非保護化ＦＴＬｉのＦＴＬ ｉに対する相対的活性にも依存する。 ＦＴＬｉが、３、４または５個の基を連結させ得る構造である場合には、より 多くの、例えば、３、４または５個の基が付加されても良いが、望ましくは、１ 個または２個の保護基が各ＦＴＬｉ分子に付加して、本発明の化合物を与える。 従って、本発明によるプロドラッグは、式（ＩＩ）の保護基を有する化合物を 含む： FTL-(X-CO.O-CH₂-Ph-NO₂)_m (II) 式中、Ｘは、ＮＨ、ＯまたはＳであり、ｍは１〜５の整数（例えば、１、２また は３）であり、Ｐｈは、必要に応じて置換されたフェニレン環であり、ＦＴＬは 、ＦＴＬ−（ＸＨ）_mがｍ個の−ＸＨ基を含むＦＴＬｉであるような基である。 ニトロ基は、Ｐｈ環に対して、望ましくは、環の４位にあるが、２位にあっても 良い。 ｍが２〜５である式（ＩＩ）の各化合物では、基ＸおよびＰｈのそれぞれは、 同一または異なるものであって良い。好ましくは、それらは、同一である。 式（ＩＩ）のＦＴＬインヒビターに含まれるのは、上記の式（Ｉａ）、（Ｉｂ ）または（Ｉｃ）のものである。 フェニレン環の好適な置換基には、同一または異なっても良い１〜４個の基が 含まれ、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、ニト ロ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4ハロアルキル、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4ハロアルコキ シ、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4アルキニル、およびＣ_2-4ハロアルケニルから選択 される。好ましくは、置換基は、環の２、３、５および６位における、１〜４個 のフッ素である。 本発明の好ましいプロドラッグは、式（ＩＩＩａ）のものである： FTL-(NH-CO.O-CH₂-Ph-NO₂)_m (IIIa) 式中、ｍおよびＰｈは、上記のように定義され、ＦＴＬは、ＦＴＬ−（ＮＨ₂）_m がｍ個のアミノ基を含むＦＴＬｉ化合物であるような基である。そのようなプロ ドラッグには、少なくとも１個のアミノ基を含む、上記式（Ｉｂ）または（Ｉｃ ）のものが含まれる。ニトロ基は、Ｐｈ環に対して、望ましくは、環の４位であ るが、２位にあっても良い。 本発明の更に好ましいプロドラッグは、式（ＩＩＩｂ）のものである： FTL-(S-CO.O-CH₂-Ph-NO₂)_m (IIIb) 式中、ｍおよびＰｈは、上記のように定義され、ＦＴＬは、ＦＴＬ−（ＳＨ）_m がｍ個のメルカプト基を含むＦＴＬｉ化合物であるような基である。そのような プロドラッグには、少なくとも１個のメルカプト基を含む、上記式（Ｉｂ）また は（Ｉｃ）のものが含まれる。ニトロ基は、Ｐｈ環に対して、望ましくは、環の ４位であるが、２位にあっても良い。 本発明の好ましいプロドラッグは、式（ＩＩＩｃ）のものである： (O₂N-Ph-CH₂-O.OC-S)-FTL-(NH-CO.O-CH₂-Ph-NO₂) (IIIc) 式中、Ｐｈは、同一または異なって上記のように定義される。ＦＴＬは、（ＨＳ ）−ＦＴＬ−（ＮＨ₂）がＦＴＬｉ化合物であるような基である。そのようなプ ロドラッグには、上記式（Ｉｂ）または（Ｉｃ）のものが含まれる。ニトロ基は 、Ｐｈ環に対して、望ましくは、環の４位であるが、２位にあっても良い。 式（ＩＩ）および（ＩＩＩａ、ｂおよびｃ）の化合物は、ＡＤＥＰＴまたはＧ ＤＥＰＴシステム中で、ＷＯ９３／０８２８８に記載された大腸菌のニトロレダ クターゼを含む、ニトロレダクターゼ酵素と組み合わせて、プロドラッグとして 使用しても良い。本発明は、その定義に関して、式ＩＩまたは（ＩＩＩａ、ｂま たはｃ）の化合物に対するニトロレダクターゼ作用の厳密な様式には依存しない が、ｐ−ニトロフェニル−ベンジルオキシ−カルボニル残基のニトロ基が、対応 するアミノまたはヒドロキシルアミノ基に転換されること、および、得られるｐ −アミノベンジルオキシ−カルボニルまたはｐ−ヒドロキシル−アミノベンジル オキシカルボニル化合物が、酵素的還元に使用される反応条件下で自動的に分解 して、細胞毒性化合物を放出し、下記の反応スキームに従って、副産物として、 ｐ−アミノベンジルアルコールまたはｐ−ヒドロキシルアミノベンジルアルコー ルおよび二酸化 炭素を形成する： 本発明のｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル化合物は、それ自体が公知の化 学的合成の方法により都合よく調製される。例えば、好適に保護されたアミンま たはヒドロキシｒａｓインヒビター化合物は、塩化水素の受容体、特にトリエチ ルアミンのようなアルキルアミンの存在下に、無水条件下で、４−ニトロベンジ ルクロロホルメートと反応させることができる。この反応は、クロロホルムのよ うな乾燥有機溶媒の中で行われ、得られる本発明の式ＩＩまたは式ＩＩＩａ、ｂ またはｃの化合物は、クロマトグラフィーのような慣用されている方法により、 有機溶媒から単離される。ＡＤＥＰＴで使用するためには、プロドラッグは、細 胞に入ることができないか、または限られた能力を有するべきであり、逆に、Ｇ ＤＥＰＴのためには、プロドラッグは、細胞に入らなければな らない。従って、プロドラッグを多少親油性にするために、プロドラッグ中の、 例えばベンゼン環に修飾がなされても良い。グルタミン酸のガンマ酸を改変して 、例えばエステル基で、より親油性の化合物を作製しても良い。 カルボキシペプチダーゼＧ２（ＣＰＧ２）のようなカルボキシペプチダーゼ酵 素によって活性化されることができる類似のプロドラッグは、下記式（ＩＶ）の 誘導体を用いて作製されることができる： Q-CO.O.CH₂-Ph-Z-NH-glu (IV) 式中、Ｑは、水素またはフルオロ、クロロまたはブロモ或いは−Ｏ−（Ｎ−スク シンイミド）であり、Ｐｈは、上記のように定義され、Ｚは、−Ｏ．ＣＯ−また は−ＮＨ．ＣＯ−であり、ｇｌｕは、グルタミン酸残基、即ち、下記基であり： -CH(CO₂H)(CH₂CH₂CO₂H) またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステル（例えば、エチルまたはｔ−ブチル エステル）であり、その目的は、式（Ｖ）： FTL-(X-CO.O.CH₂-Ph-Z-NH-glu)_m (V) ［式中、Ｘは、上記のように定義される］、および式（ＶＩ） FTL-(NH-CO.O.CH₂-Ph-Z-NH-glu)_m (VI) ［式中、ＦＴＬは、ＦＴＬ−（ＸＨ）_mおよびＦＴＬ−（ＮＨ₂）_mが上記のよう に定義されるようなＦＴＬｉ化合物の残基であり、ならびにｍ、Ｐｈ、Ｚおよび ｇｌｕもまた上記のように定義される］プロドラッグを提供することである。式 （ＩＩ）および式（ＩＩＩａ、ｂまたはｃ）のプロドラッグに関連して上述した ように、ＡＤＥＰＴのためには、プロドラッグは、細胞に入る限られた能力を有 するべきであり、他方、ＧＤＥＰＴのためには、プロドラッグは、それが細胞に 入るために、より親油性にする必要性がある場合には、修飾されても良い。グル タミン酸のガンマ・カルボキシル基は、より親油性である化合物にするために、 例えば芳香族または複素環式アミドで改変されても良い。 ｍが、２〜５である式（Ｖ）の各化合物において、基ＸおよびＰｈのそれぞれ は、同一または異なるものであって良い。好ましくは、それらは、同一である。 式（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物では、基−Ｚ−は、置換基を含む ＦＴＬに対して、環の４位にあ る。 ＦＴＬが、式 （Ｉｂ）または（Ｉｃ）で示される、式（Ｖ）および（ＶＩ） の化合物が好ましい。 Ｚが−ＮＨ．ＣＯ−である式（ＩＶ）のベンジルクロロホルメート誘導体は、 グルタミン酸または例えば、グルタミン酸残基の両方のカルボキシ基が、エチル またはｔ−ブチル基で保護されたその保護化誘導体の反応により、４−（クロロ メチル）フェニルイソシアネートから作製されても良い。適切には、反応は、Ｃ Ｈ₂Ｃｌ₂のような溶媒中で、室温付近で行われる。得られる中間体、［４−クロ ロメチル］フェニル−ウリドグルタメート(uridoglutamate)−ジ−ｔｅｒｔ−ブ チルエステルは、含水エタノールの中で還流しながら処理されて、対応する４− ヒドロキシメチル化合物を与え、これは、不活性溶媒、例えばＴＨＦ中で、室温 で、トリホスゲン(triphosgene)（（ＣＣｌ₃Ｏ）₂ＣＯ）と反応して、必要に応 じて保護された式（ＩＶ）の化合物を与える。該化合物が保護されているときに は、トリフルオロ酢酸またはギ酸での処理により脱保護化されても良い。 Ｚが−Ｏ．ＣＯ−である式（ＩＶ）のベンジルクロロホルメート誘導体は、ス キーム１の反応スキームに従って、４−ヒドロキシベンズアルデヒドから出発し て作製 されても良い。簡単に言うと、アルデヒド５は、ＣＨ₂Ｃｌ₂を加えたボラントリ フルオロエーテラート(borane trifluoroetherate)中、１，２−エタンジチオー ルで、２５℃で約１２時間処理して、１，３ジチオラン中間体を形成し、これは 、上述のようにトリホスゲンで処理して４［１，３ジチオラン］フェニルクロロ ホルメートを形成する。これは、ジｔｅｒｔブチル−グルタメート塩酸塩と、乾 燥ＴＨＦ中で、トリエチルアミンの存在下、室温で、約５時間カップリングされ て、４［１，３ジチオラン］フェニルカルバメート−グルタメート−ジ−ｔ−ブ チルを与える。ジチオランは、メタノールおよびクロロホルム中の過塩素酸水銀 (mercuric perchlorate)で、約２５℃で約５分間、脱保護される。アルデヒドは 、室温でエーテル中、水素化ホウ素ナトリウムによる穏和な還元により、対応す るベンジルアルコールに変換され、次に、上述のようにトリホスゲンにより、対 応するクロロホルメートに変換される。 Ｑが、−Ｏ−（Ｎ−スクシンイミド）である、式（ＩＶ）の好ましい化合物は 、下記式（ＸＶＩ）の新規な化合物である： 式中、Ｒ₅は、Ｃ_1-6アルキル、好ましくはエチルまたはｔ−ブチルを示す。従っ て、本発明のさらなる局面によると、式（ＸＶＩ）の化合物が提供される。これ らの化合物は、実施例２に開示されている方法または類似の方法により調製され 得る。 式（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物は、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物製 造のための、上記の方法に類似した手順により、アミノまたはヒドロキシ基を含 むｒａｓインヒビターから、作製されても良い。 式（Ｖ）または（ＶＩ）のｒａｓインヒビタープロドラッグは、ＣＰＧ２のよ うなカルボキシペプチダーゼにより、その酵素の作用によって活性化され、続い て、ニトロレダクターゼに関連して上述されたものに類似の様式で、残りのプロ ドラッグの「自己破壊(self immolation)」を起こすことにより、グルタミン酸 残基を除去する。 Ｚが−ＮＨ．ＣＯ−である式（Ｖ）のプロドラッグもまた、下記式（ＶＩＩ） のリンカー(linker)を用いて作製されることができ： HOH₂C-Ph-NH-CO-NH-glu (VII) 式中、Ｐｈおよびｇｌｕは、上記のように定義される。必要に応じて置換された フェニレン基は、ヒドロキシメチル基に対して４位で、ｇｌｕを含む部分(moiet y)により置換される。 式（ＶＩＩ）のリンカーは、必要に応じた置換基が上記の基−Ｐｈ−に関して 定義されたものである、必要に応じて置換された４−ニトロベンジルアルコール から作 製されても良い。４−ニトロベンジルアルコールのヒドロキシル基は、例えば、ｔｅｒｔ −ブチル−ジフェニル−クロロ−シランとの、室温での有機溶媒中での 反応により保護され、必要に応じて置換された（４−ニトロ−ベンジル）ｔｅｒ ｔ −ブチル−ジ−フェニル−シリルエーテルを与える。４−ニトロ基は、次に、 アルコールのようなプロトン性溶媒、例えばメタノールまたはエタノール中、Ｐ ｄ／Ｃのような触媒の存在下、例えば、ギ酸アンモニウムを用いる、接触水素化 または触媒による水素移動により、アミン基に還元される。 アミン基は、次に、例えば、トリエチルアミンのような第３級有機アミンおよ びトルエンのような沸点が５０℃以上である非プロトン性有機溶媒の存在下に、 ホスゲン、ジホスゲンまたはトリホスゲンと反応することにより、イソシアネー ト基に転換されても良い。イソシアネート化合物は、次に、ジ−Ｃ_1-6アルキル −グルタミン酸またはその誘導体、例えば、ジ−Ｃ_1-6アルキルグルタメート塩 酸塩と反応される。これは、室温で、トルエン、ＴＨＦまたはジクロロメタンの ような非プロトン性有機溶媒中、トリエチルアミンの存在下に、行われても良い 。 あるいは、該アミン化合物は、ＴＨＦまたはジクロロメタンのような非プロト ン性溶媒中、トリホスゲンおよ びトリエチルアミンの存在下に、ジ−Ｃ_1-6アルキル−グルタミン酸またはその 誘導体と、直接的にワンポット合成(one-pot synthesis)で反応させても良い。 いずれの場合にも、得られる化合物は、例えば、室温で、ＴＨＦ中フッ化テト ラ−ブチル−アンモニウムの使用により、処理されて、ヒドロキシ保護基を除去 する。 得られる、ｇｌｕがジ−Ｃ_1-6アルキルエステルの形態である式（ＶＩＩ）の 化合物は、例えば、ギ酸またはトリフルオロ酢酸のような酸の使用により、脱保 護されて、エステル基を除去しても良い。式（ＶＩＩ）または（ＸＶＩ）の化合 物は、ジクロロメタンおよび／またはＴＨＦのような非プロトン性溶媒中、トリ エチルアミンのような第３級有機塩基の存在下に、ＦＴＬｉまたはその活性化さ れた誘導体と室温で反応させ、基−ＯＨ、−ＮＨ₂または−ＳＨを含むＦＴＬｉ と連結させて、式（Ｖ）の化合物を与えることができる。該化合物のジ−Ｃ_1-6 アルキルエステル基は、もし存在するならば、上述のように除去されても良い。 基−ＸＨを有するＦＴＬｉを、式（ＶＩＩ）のリンカーに連結するために、基 −ＸＨは、テトラブチルアンモニウム硫酸水素塩のような相間移動触媒の存在下 、ホスゲン、ジホスゲンまたはトリホスゲンの使用により、反 応性クロロホルミル、クロロチオホルミルまたはイソシアネート誘導体に転換さ れても良い。反応は、トルエン、ＴＨＦまたはジクロロメタンのような有機溶媒 中、ＮａＯＨのような塩基の存在下に、行われても良い。 Ｚが−Ｏ．ＣＯ−である式（Ｖ）のプロドラッグは、下記式（ＶＩＩＩ）のリ ンカーを用いて、作製されても良い： HOH₂C-Ph-O-CO-NH-glu (VIII) 式中、Ｐｈおよびｇｌｕは、上記のように定義される。必要に応じて置換された フェニレン基は、ｇｌｕを含む部分(moiety)により、ヒドロキシメチル基に対し て４位で置換される。 式（ＶＩＩＩ）の化合物を製造するために、必要に応じて置換された４−ヒド ロキシベンズアルデヒドは、ＣＨ₂Ｃｌ₂のような非プロトン性溶媒中、ＢＦ₃． Ｅｔ₂Ｏの存在下、１，３−プロパンジチオールまたは１，２−エタンジチオー ルとの室温での反応により、１，３−ジチアンまたはジチオラネイン(dithiolan ein)として保護され、対応する４（１’，３’−ジチアニル）フェノールまたは ４（１’，３’−ジチダニル(dithidanyl)）フェノールを与える。この化合物は 、トル エンのような非プロトン性溶媒中、トリエチルアミンのような第３級有機アミン の存在下に、ジ−Ｃ_1-6アルキル−グルタミルイソシアネートとカップリングさ れ、対応するＯ［４（１’，３’−ジチアニル）−フェニル］Ｎ（ジ−Ｃ_1-6ア ルキル−グルタミル）カルバメートになる。該カルバメートの、対応するアルデ ヒドへの脱保護は、ＴＨＦまたはジクロロメタン中、Ｈｇ（ＣｌＯ₄）₂またはＴ ｌ（ＮＯ₃）₃を用いて、室温で行われても良い。アルデヒドの還元により、所望 のＯ（４−ベンジル−オキシ）Ｎ（ジ−Ｃ_1-6アルキル−グルタミル）カルバメ ートが生じる。これは、トリフルオロ酢酸またはギ酸のような酸で処理されるこ とにより脱保護され、アルキルエステル保護基を除去して、式（Ｖ）のプロドラ ッグを与えても良い。 式（ＶＩＩＩ）のリンカーは、式（ＶＩＩ）または（ＸＶＩ）のリンカーに関 して上述したと同じ方法で、遊離のヒドロキシ、アミノまたはメルカプト基を含 むＦＴＬｉ化合物に結合(attached)されても良い。 他の好適なＦＴＬｉプロドラッグには、糖またはβ−ラクタム誘導体で誘導体 化されたものが含まれる。例えば、上述のＦＴＬ−ＮＨ₂またはＦＴＬ−ＯＨま たはＦＴＬ−ＳＨタイプのＦＴＬインヒビターに結合しても良い 好適なリンカーは、下記のものである： 式中、Ｒは、水素またはアセチルであり、Ｙは、フェニル、ベンジルまたはトル リル(tolulyl)のようなアリールであり、およびこれらは、上述した他のプロド ラッグに類似した方法で作製されても良い。 ＦＴＬｉのあらゆるヒドロキシ、アミノまたはメルカプト基は、上記の方法で 連結され、本発明のプロドラッグを与える。所望されるならば、１を超えるその ような基は、誘導体化されて、プロドラッグを作製しても良い。しかしながら、 ヒドロキシ、メルカプトまたはアミノ基の１つのみを反応させてプロドラッグを 作製する場合は、 ＦＴＬのあらゆる残りの基が、例えば（ヒドロキシルの場合には）、ｔ−ブチル またはアダマンチル基で、あるいは、アミノの場合にはブチルオキシカルボニル 基で、保護されても良い。そのような保護基は、当分野で公知の化学的方法を用 いて、結合(attached)することができる。リンカーと反応されるＦＴＬｉの基は 、対応するハロホルメートまたはイソシアネートに誘導体化され、次に、式（Ｖ ＩＩ）または（ＶＩＩＩ）のもののようなリンカーとカップリングされても良い 。ＦＴＬｉプロドラッグが作製された後、保護基は、慣用されている手段、例え ば、トリフルオロ酢酸で処理して、除去されても良い。 該プロドラッグの生理学的に許容される誘導体には、塩、アミド、エステルお よびエステルの塩が含まれる。エステルには、エステル原子団の非カルボニル部 分(moiety)が、直鎖状または分岐鎖状のＣ_1-6アルキル、（メチル、ｎ−プロピ ル、、ｎ−ブチルまたはｔ−ブチル）；或いはＣ_3-6環状アルキル（例えば、シ クロヘキシル）から選択されるカルボン酸エステルが含まれる。塩には、生理学 的に許容される塩基塩、例えば、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）、アルカ リ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、アンモニウムおよびＮＲ₄（式中、Ｒ は、Ｃ_1-4アルキルである）塩のような適切な塩基に由来するものが含まれる。 他の塩には、塩酸塩および酢酸塩を含む、酸付加塩が含まれる。アミドには、非 置換ならびにモノ−およびジ−置換誘導体が含まれる。 本発明は、さらに、薬学的製剤(pharmaceutical formulations)を提供する。 そのような製剤は、本発明の化合物を、１種以上の薬学的に許容される担体また は希釈剤とともに含む。 薬学的に許容される担体または希釈剤には、経口的または非経口的（例えば、 筋肉内または経静脈的）投与に適した製剤中で使用されるものが含まれる。該製 剤は、好都合には、一回投与量形態(unit dosage form)で提供され、および薬学 の分野で周知のあらゆる方法により調製されても良い。そのような方法は、活性 成分(activeingredient)を、１種以上の補助的成分(accessory ingredients)を 構成する担体と混合(association)する工程を含む。一般に、該製剤は、活性成 分を、液性担体もしくは細かく粉砕された固形担体またはその両方と、均一にお よび完全に(intimately)混合させることにより調製され、続いて、必要ならば、 生成物を造形(shaping)する。 例えば、非経口的投与に適した製剤には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤(bacte riostats)および予定されたレシピ エントの血液と等張な製剤にさせる溶質を含んでも良い水性および非水性の滅菌 注射液；ならびに懸濁化剤および濃化剤を含んでも良い水性および非水性の滅菌 懸濁液、およびポリペプチドを血液成分(component)または１種以上の器官に標 的化するように設計されているリポソームまたは他の微粒子システムが含まれる 。 好適なリポソームは、例えば、正に荷電した脂質（Ｎ［１−（２，３−ジオレ イルオキシ(dioleyloxy)）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム（ ＤＯＴＭＡ）を含むもの、ジオレオイルホスファチジル−エタノールアミン（Ｄ ＯＰＥ）を含むもの、および３β［Ｎ−（ｎ’，Ｎ’−ジメチル−アミノエタン ）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）を含むものを包含する。 本発明のｒａｓインヒビタープロドラッグおよびＡＤＥＰＴに関する抗体／酵 素複合体は、同時に投与されることができるが、臨床のプラクティスにおいては 、酵素／薬剤複合体が腫瘍標的領域に局在化する機会を与えるために、プロドラ ッグよりも先に、例えば、７２時間までか、あるいは１週間も前に、酵素／薬剤 複合体を投与することが好ましいと、しばしば見受けられる。プロドラッグが投 与されるときは、こうした方法で操作すれば、 プロドラッグの細胞毒性物質への転換は、酵素／薬剤複合体が局在化される領域 、即ち、標的腫瘍の領域に限定されやすく、ｒａｓインヒビター薬剤の時期尚早 な放出が最小限になる。 ＧＤＥＰＴでは、プロドラッグは通常、酵素をコードする修飾されたウィルス の投与の後に、投与される。代表的には、ウィルスは患者に投与されて、その後 、感染細胞によるウィルスの取り込みを、例えば、標的組織の生検サンプルの回 収および分析により、モニターする。或いは、プロドラッグは、酵素をコードす る遺伝子を含む運搬システム(delivery system)の投与の後に、投与され得る。 ＡＤＥＰＴでは、酵素／薬剤複合体の局在化の度合い（自由循環に対する局在 化した活性複合体の比率に換算して）は、ＷＯ８９／１０１４０に記載されてい るクリアランスおよび／または不活性化システムを用いて、さらに増強されるこ とができる。これは、酵素を不活性化する、および／または血液からの複合体の クリアランスを促進するために、通常、複合体の投与の後およびプロドラッグの 投与の前に、複合体のそのような部分に結合できる成分(component)（「第２成 分」）の投与を必要とする。そのような成分は、該システムの酵素成分に対す る抗体で、該酵素を不活性化し得る抗体を含んでも良い。 該第２成分は、デキストラン、リポソーム、アルブミン、マクログロブリンま たは血液型Ｏの赤血球のような巨大分子に連結されて、第２成分が、血管コンパ ートメントを離れる(leaving)のを制限しても良い。加えて、またはそれに代わ るものとして、該第２成分には、十分な数の共有結合したガラクトース残基、ま たはラクトースもしくはマンノースのような他の糖の残基が含まれても良く、血 漿中で複合体と結合するが、肝臓中のガラクトースまたは他の糖に対する受容体 により、血漿から複合体とともに除去されることができる。該第２成分は、測定 可能な程度まで、それが腫瘍の血管外区域(extravascular space)（ここは、プ ロドラッグの投与前および投与中に、局在化された複合体を不活性化し得る）に 入らないように投与され、使用するために計画されるべきである。 ＧＤＥＰＴおよびＡＤＥＰＴの両方に関する、厳密な投与計両は、無論、個々 の臨床医により、個々の患者に対して決定される必要があり、これは、引き続い て、プロドラッグの厳密な特質およびプロドラッグから放出される細胞毒性物質 によりコントロールされるが、幾つかの一般的指針は示すことができる。このタ イプの化学療 法は、通常、プロドラッグと、酵素／薬剤複合体または修飾されたウィルスの両 方の非経口的投与を必要とし、経静脈的経路による投与がしばしば、最も実際的 であると見い出されている。ＡＤＥＰＴシステムでは、プロドラッグと複合体の 投与量は、最終的には、医師の自由裁量にあり、医師は、患者の年齢、体重およ び健康状態などの要因を考慮に入れる。プロドラッグおよび複合体の好適な投与 量は、バグショウ(Bagshawe)ら、抗体、免疫複合体、および放射性医薬品(Antib ody，Immunoconjugates，and Radiopharmaceuticals)、(1991)、4、915-922に示 されている。複合体の好適な投与量は、５００〜２００，０００酵素単位／ｍ² （例えば、２０，０００酵素単位／ｍ²）であって良く、プロドラッグの適切な 投与量は、５〜２０００ｍｇ／ｍ²（例えば、２００ｍｇ／ｍ²）であって良い。 所望の治療の部位での、複合体の最大濃度を確実にするために、通常、２つの 成分(component)の投与は、少なくとも４時間、間隔をあけることが望ましい。 厳密な投与計画は、標的化される腫瘍の特質およびプロドラッグの特質を含む種 々の要因に影響されるが、通常は、４８時間以内に所望の治療部位での複合体の 適切な濃度がある。 ＧＤＥＰＴシステムでは、運搬される(delivered)ウィルスまたは他のベクタ ーの量は、上記のＡＤＥＰＴシステムにおいてと同様の、酵素の細胞内濃度を与 えるものである。これは、患者に、ある範囲の試験投与量を投与すること、およ び、標的細胞または腫瘍の感染もしくはトランスフェクションの程度を測定する ことを包含する、臨床試験により決定され得る。必要とされるプロドラッグの量 は、ＡＤＥＰＴシステムに関してのものと同様か、またはそれよりも多い。 本発明はさらに、ヒトまたは動物の被験体における新形成(neoplasia)をコン トロールするのに使用されるシステムを提供し、該システムは、ｒａｓインヒビ タープロドラッグを活性なｒａｓインヒビターに転換し得る酵素を、好ましくは 腫瘍関連抗原と結合するモノクローナル抗体のような標的化物質と複合体化し、 上記のようにｒａｓインヒビタープロドラッグと混合して含む。酵素がニトロレ ダクターゼである場合、該システムはまた、好ましくは、該酵素に関する好適な 補助因子を含む。好適な補助因子には、ニコチン酸またはニコチンアミドのリボ シドまたはリボチドが含まれる。 本発明は、新形成を治療する方法であって、そのような治療を必要としている ヒトまたは動物の被験体の治療 方法に及び、該治療方法は、宿主に有効量の、本発明のｒａｓインヒビタープロ ドラッグおよび酵素を、好ましくは腫瘍関連抗原と結合するモノクローナル抗体 のような標的化物質と複合体化して、投与することを包含する。腫瘍関連抗原は 、細胞表面に存在する腫瘍関連レセプターを含む。 本発明はまた、ヒトまたは動物の被験体における新形成のコントロールに使用 されるシステムを提供し、該システムは、該被験体中の腫瘍細胞に選択的に感染 し得る修飾されたウィルスを、酵素の作用によりｒａｓインヒビターに転換され 得るｒａｓインヒビタープロドラッグと混合して含み、該ウィルスは、酵素をコ ードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含む(carry)。 本発明は、新形成を治療する方法であって、そのような治療を必要としている ヒトまたは動物の被験体の治療方法に及び、該治療方法は、宿主に有効量の、本 発明のｒａｓインヒビタープロドラッグおよび修飾されたウィルスを投与するこ とを包含し、該修飾されたウィルスは、該被験体中の腫瘍細胞に選択的に感染す ることができ、該ウィルスは、該ｒａｓインヒビタープロドラッグをｒａｓイン ヒビターに転換し得る酵素をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含む。 本発明はまた、新形成を治療する方法であって、そのような治療を必要として いるヒトまたは動物の被験体の治療方法にも及び、該治療方法は、宿主に有効量 の、本発明のｒａｓインヒビタープロドラッグおよび非ウィルスベクターシステ ムを投与することを包含し、該非ウィルスベクターシステムは、該被験体中の腫 瘍細胞に選択的に導入されることができ、該ベクターシステムは、該ｒａｓイン ヒビタープロドラッグを活性なｒａｓインヒビターに転換し得る酵素をコードす るＤＮＡまたはＲＮＡ配列を、該細胞中で該酵素を発現するのに有効なプロモー ターと、作動可能に(operably)連結して含む。 上述されたようなＡＤＥＰＴによる、新形成の治療に使用される種々のシステ ムは、前記のクリアランスを促進させるための「第２成分」を、必要に応じて含 む。同様に、上記の新形成の治療方法は、必要に応じて、自由循環に対する局在 化酵素の比率を増大させるために、その方法の一部分として酵素の投与後に投与 される、有効量の第２成分の使用を含む。第２成分のさらなる特定の詳細に関し て、ＷＯ８９／１０１４０が参照され、そのような詳細は、本発明の使用に組み 込まれる。 腫瘍細胞に選択的に感染し得る修飾されたウィルスは、当分野で公知である。 「選択的に感染する」とは、ウィ ルスが、主として腫瘍細胞に感染すること、および、この疾病の特質が治療され ると仮定した場合、感染された非腫瘍細胞の比率が、ｒａｓインヒビタープロド ラッグ投与による非腫瘍細胞への損傷が容認されるほどに低いものである、こと を意味する。最終的には、これは、医師により判断される。 ウィルスにより運ばれる(carried)、酵素をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配 列は、該酵素の発現が標的腫瘍細胞の中で起こるように、好適な発現制御シグナ ルに連結される、ことも理解される。 非ウィルスベクターシステムは、上述したもののような方法、例えば、リン酸 カルシウム共沈殿法、マイクロインジェクション、リポソーム、直接的ＤＮＡ取 り込み、およびレセプター介在性ＤＮＡ転移を活用して、腫瘍細胞中に選択的に 導入されることができる（モーガン・アンド・フレンチ・アンダーソン(Morgan & French Anderson)、アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー(Annu ．Rev．Biochem.)、1993、62；191）。 本発明に使用されるための好適なモノクローナル抗体には、ｃｅｒｂＢ２に対 する抗体、例えばＩＣＲ１２（バキール，エムエー(Bakir，M A)ら、ジャーナル ・オブ・ヌクリアーメディシン（J．Nucl．Med）(1992)33 ；2154-2160）および表皮増殖因子レセプターに対する抗体、例えばＩＣＲ１６ （ディーン，シージェイ(Dean,CJ)ら、インターナショナル・ジャーナル・オブ ・キャンサー・サプリメント(Int．J．Cancer Suppl.)8(1994)、103）が含まれ る。ｃｅｒｂＢ２が、形質転換のためにｒａｓを必要とするという証拠は、ベン −レヴィ(Ben-Levy)ら、(Embo J．13、3302、1994)により示されている。 本明細書で使用されるように、用語「モノクローナル抗体」は、単に伝統的な ハイブリドーマ技法により製造される抗体を指すのみでなく、組換え的手段で製 造される抗体およびその変異種(variants)もまた包含すると、当業者に理解され る。これらには、例えば、ヒト抗体からの定常領域を非ヒト抗体の可変領域に移 植したもののようなヒト化抗体（例えば、ＥＰ−Ａ−０ １２０ ６９４を参照 ）、非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲｓ）をヒト可変領域のフレームワークに移植 したもののようなキメラ抗体（例えば、ＥＰ−Ａ−０ ２３９ ４００を参照） およびシングルチェイン抗体(single chain antibody)が含まれる。それらの標 的結合活性を保持している、そのようなモノクローナル抗体のフラグメントも、 一般的用語「モノクローナル抗体」に包含される。これは、Ｆｖ、Ｆａｂ’およ びＦ（ａｂ’）₂フラグメントを含む。 それはまた、そのような抗体のＣＤＲｓに基づく組換えまたは合成タンパク質、 例えば、アブザイム(abzymes)（抗体様結合活性と酵素活性の両方を有するポリ ペプチド）およびジアボディ(diabodies)も含む。 本発明のプロドラッグはまた、ＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴシステムに組み込 まれても良い、候補となる酵素または抗体の活性をテストするための、インビト ロシステム中での試薬として使用されても良い。 例えば、抗体が指向する(directed)マーカーを含む(carrying)腫瘍細胞系を、 インビトロで増殖させて、その後、抗体−酵素複合体を培養物に加えても良い。 酵素は、本発明のプロドラッグを活性な薬剤に転換し得る、またはそのように推 測される、ものである。続いて、プロドラッグを培養物に加えて、細胞殺滅また は細胞増殖抑制の量を測定する（例えば、生存細胞の数を記録するために生体染 色剤(vital strain)を使用するか、生存細胞の数をカウントするために培養物サ ンプルを再プレートすることによって）。 実施例 以下の実施例１および２は、本発明を更に説明するものである。調製例１は、 式（Ｉｂ）の化合物の調製の説明である。これに続く反応スキームは、更にこれ ら実施 例を説明するものである。 特に断らない限り、全ての出発物質、試薬および無水溶媒（窒素気流下のＴＨ Ｆ）は、アルドリッチ（Aldrich）から購入した。キーゼルゲル ６０ Ｆ₂₅₄（ アート ５７３５，メルク）であらかじめコートされた薄板上でＴＬＣを行った 。プレパラティブＴＬＣは、アナルテック(Analtech)からのシリカゲルプレート （２０ｃｍ×２０ｃｍ）上で行った。特に断らない限り、ＮＭＲスペクトルは、 ブルッカー ＡＣ２５０スペクトロメーター（２５０ＭＨｚ）を用いて、Ｍｅ₂ ＳＯ−ｄ₆中３０℃（３０３Ｋ）で測定した。カップリング定数（Ｊ）は、Ｈｚ で表した。調製例１ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルイソロイシンのＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド（ Ｉ） Ｏ，Ｎ，−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（９７６ｍｇ，１０ｍｍｏｌ） を、ジクロロメタン（１０ｍｌ）中に懸濁し、−１０℃に冷却した。次に、温度 を−２℃以下に維持しながら、１−メチルピペリジン（９９２ｍｇ，１．２２ｍ ｌ， １０ｍｍｏｌ）を、ゆっくり加えた。この溶液を、−１０で保存した。別 のフラスコ中で、Ｎ−ｂｏｃイソロイシン（２．２９０ｇ，９．９ｍｍｏｌ） を、ジクロロメタン（４０ｍｌ）中に溶解し、−２０℃に冷却した。次に、１− メチルピペリジン（９９２ｍｇ，１．２２ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）およびイソブチ ルクロロホルメート（１．３３６ｇ，１．３０ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）を加えて、 温度を−２０℃以下に維持した。１５分後、上述のように調製されたヒドロキシ ルアミン溶液を、単一部分で加え、溶液を周囲温度で一晩攪拌した。溶液を、次 に、飽和塩化アンモニウム溶液（２×３０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上 で乾燥し、濾過し、そして減圧下で溶媒を除去して、黄色いオイルを得、これを カラムクロマトグラフィー（シリカ−ヘキサン中１０〜３０％酢酸エチル）で精 製して、Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド（２．２８ｇ，８４％）を無色のオイ ルとして得た。 この化合物の調製を順次行い、その収率は、６０と８４％の間であった。Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルイソロイシナル（２） 上述のように調製されたＮ−ｔ−ブトキシカルボニルイソロイシンのウェイン レブアミド(Weinreb amide)（１．９８ｇ，７．２ｍｍｏｌ）を、無水エーテル （１０ｍｌ）中に溶解し、−４５℃に冷却した。次に、水素化アルミニウムリチ ウム（エーテル中１Ｎ溶液１０ｍｌ，１０ｍ ｍｏｌ）を、温度を−３５℃以下に維持しながら加え、該溶液の添加の後、続い て、溶液を５℃に温めた。その後、溶液を、−４５℃に冷却し、硫酸ナトリウム １０水塩(decahydrate)（５．００ｇ）を加え、冷却浴を取り除いた。１時間後 、溶液をセライトを通して濾過し、溶媒を減圧下に除去して、アルデヒド（１． ４７ｇ，９５％）を無色のオイルとして得、それが室温でラセミ化するので、直 ちに次の反応に使用した。 この化合物の調製を順次行い、その収率は、８９と９７％の間であった。Ｎ［２（Ｓ）−［ｔ−ブトキシカルボニルアミノ］−３−メチルペンチル］−イ ソロイシン（３） イソロイシン（１．３１ｇ，９．９５ｍｍｏｌ）を、無水メタノール（１０ｍ ｌ）中に懸濁し、トリフルオロ酢酸（１．１３３ｇ，０．７７ｍｌ，９．９５ｍ ｍｏｌ）を加えた。全てのイソロイシンが溶解するまで、混合物を攪拌し、その 後、溶媒を、減圧下に除去した。得られたイソロイシントリフルオロ酢酸塩に、 無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）を加え、３Åモレキュラーシーブ及び無水ＤＭＦ（５ｍ ｌ）中２（１．４７ｇ，４．９ｍｍｏｌ）の溶液を得た。１５分後、溶液をトリ アセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．５８ｇ，７．４５ｍｍｏｌ）で処理 し、一晩攪拌した。得られた懸濁液を、セライトで濾過し、酢酸エチル（５０ｍ ｌ）で希釈して、飽和塩化ナトリウム溶液（２×３５ｍｌ）で洗浄した。有機抽 出物を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、酸（ １．３６ｇ，８４％）を黄色いオイルとして得た。 この化合物の調製を順次行い、その収率は、６７と８８％の間であった。Ｎ−２（Ｓ）−［ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−メチルペンチル］−イソ ロイシルホモセリンラクトン（４） 無水ＤＭＦ（２ｍｌ）中に溶解した化合物３（３３１ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を、 ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１３５ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、１−（３− ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２６０ｍｇ，１ ．３６ｍｍｏｌ）およびホモセリンラクトン塩酸塩（１２５ｍｇ，１ｍｍｏｌ） で処理した。トリエチルアミン（１７４ｍｇ，０．２４ｍｌ，１．７２ｍｍｏｌ ）を加え、混合物を一晩攪拌した。溶液を、酢酸エチル（２５ｍｌ）で希釈し、 飽和塩化ナトリウム溶液（２×１０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥 し、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、黄色いオイ ルを得た。これを次に、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中５％メタ ノール）およびヘキサンを滴下してエーテルから沈殿させることにより、精製し て、生成物（１４７ｍｇ，４７％）を白色粉末として得た。 この化合物の調製を順次行い、その収率は、４１と５４％の間であった；ｍ／ ｚ：［Ｍ＋Ｈ］⁺＝４１４；微量分析データ： Ｎ−［２（Ｓ）−アミノ−３−メチルペンチル］−イソロイシルホモセリンラク トン塩酸塩（５） 化合物４（１４７ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１０ｍｌ）中に 溶解し、−２５℃に冷却した。続いて、無水塩化水素ガスを、ｔｌｃ（ジクロロ メタン中５％メタノール）が反応の完結を示すまで、溶液中に通した。次に、窒 素を溶液中に通して、過剰の塩化水素を除去した。続いて、溶媒を減圧下に除去 して、生成物（１２５ｍｇ，９１％）を淡黄色固体として得た。 この化合物の調製を順次行い、その収率は、６２と９ ２％の間であった。Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｓ−トリチル−システインのＮ−メトキシ−Ｎ− メチルアミド（６） Ｏ，Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１０８ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ） を、ジクロロメタン（１０ｍｌ）中に懸濁し、−１０℃に冷却した。次に、１− メチルピペリジン（１１０ｍｇ，０．１３ｍｌ，１．１ｍｍｏｌ）を、温度を− ２℃以下に維持しながら、ゆっくりと加えた。この溶液を、−１０℃で保存した 。別のフラスコ中で、Ｎ−ｂｏｃ−Ｓ−トリチルシステイン（４６４ｍｇ，１ｍ ｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２０ｍｌ）中に溶解し、−２０℃に冷却した。続 いて、１−メチルピペリジン（１１０ｍｇ，０．１３ｍｌ，１．１ｍｍｏｌ）お よびイソブチルクロロホルメート（１４４ｍｇ，０．１４ｍｌ，１．１ｍｍｏｌ ）を、温度を−２０℃以下に維持しながら、加えた。１５分後、上述のように調 製されたヒドロキシルアミン溶液を単一部分で加え、溶液を周囲温度で一晩攪拌 した。次に、溶液を、飽和塩化アンモニウム溶液（２×１５ｃｍ³）で洗浄し、 硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、白い泡を得、 これをカラムクロマトグラフィー（シリカ−ヘキサン中１０〜３０％酢酸エチル ）で精製して、Ｎ−メト キシ−Ｎ−メチルアミド（４０６ｍｇ，８１％）を白い泡として得た。 この化合物の調製を順次行い、その収率は、８１と９２％の間であった。Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｓ−トリチル−システイナル（７） 上述のように調製したＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｓ−トリチルシステイン のウェインレブ(Weinreb)アミド（４０６ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を、無水エー テル（５ｍｌ）中に溶解し、−４５℃に冷却した。続いて、水素化アルミニウム リチウム（エーテル中１Ｎ溶液１ｍｌ，１ｍｍｏｌ）を、温度を−３５℃以下に 維持しながら加え、加えた後、次に溶液を５℃に温めた。続いて、溶液を、−４ ５℃に冷却し、硫酸ナトリウム１０水塩（１．２５ｇ）を加え、冷却浴を取り除 いた。１時間後、溶液をセライトで濾過して、溶媒を減圧下で除去し、アルデヒ ド（３３２ｍｇ，９３％）を白い泡として得た。 この化合物の調製を順次行い、その収率は、８４と９３％の間であった。Ｎ−［２（Ｓ）−２−｛（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ｝−３−［（トリフ ェニル−メチル）チオ］プロピル］アミノ［−３−メチルペンチル］イソロイシ ルホモ セリンラクトン（８） 化合物５（１２５ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を、無水メタノール（１０ｍｌ） 中に溶解し、３Åモレキュラーシーブ、酢酸カリウム（６４ｍｇ，０．６４ｍｍ ｏｌ）、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｓ−トリチルシステイナル（２８９ｍｇ ，０．６４ｍｍｏｌ）およびシアノホウ水素化ナトリウム(sodium cyanoborohyd ride)（３１ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を、周囲温度で２４ 時間攪拌し、セライトで濾過し、メタノールを減圧下で除去した。残渣を、酢酸 エチル（２５ｍｌ）に溶解し、飽和塩化アンモニウム溶液（１５ｍｌ）および飽 和塩化ナトリウム溶液（１５ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾 過し、溶媒を減圧下で除去して、白い泡を得た。続いて、これを、カラムクロマ トグラフィー（シリカ、ジクロロメタン中１〜３％メタノール）で精製し、所望 の化合物（１０７ｍｇ，４５％）を白い泡として得た。 この化合物の調製を順次行い、その収率は、３２と４３％の間であった；ｍ／ ｚ：［Ｍ＋Ｈ］⁺＝７４５。実施例１ 概要 ニトロレダクターゼで活性化され得る２個のｒａｓイ ンヒビタープロドラッグを、作製した。これらは、Ｎ−｛２（Ｒ）−［［２（４ ’−ニトロベンジルオキシ−カルボニル）−アミノ−３−メルカプトプロピル］ アミノ］−３−メチル−ペンチル］イソロイシルホモセリンラクトン、１０およ びＮ｛２（Ｒ）−［［２（４’−ニトロベンジルオキシ−カルボニル）−アミノ ］−３［（４’−ニトロベンジルオキシ−カルボニル）チオ］プロピル］アミノ ］−３−メチル−ペンチル］イソロイシルホモセリンラクトン、１１であった（ スキーム２参照）。出発物質は、Ｎ−｛２（Ｓ）−２［（ｔｅｒｔ−ブトキシ− カルボニル）−アミノ−３［（トリフェニルメチル）チオ］プロピル］アミノ］ −３−メチル−ペンチル］イソロイシルホモセリンラクトン、８であり、これは 、調製例１の生成物であった。それは、ＣＨ₂Ｃｌ₂中トリエチルシランおよびＴ ＦＡを用いて、脱保護した（反応が４℃で行われたという只一点の相違はあるが 、グラハム(Graham)らの手順（ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー 、1994、37(6)、725-732）に従う。後処理(work up)（但し、ＨＰＬＣによる最 終的精製はせずに）の後、このようにして得られた化合物９を、４−ニトロ−ベ ンジルクロロホルメートと反応させ、化合物１０および１１の混合物を得、これ らをプレパラティブＴＬＣで 分離精製した。化合物１１の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルからの、メルカプト基に属 するプロトンの消失（範囲１．０−２．０ｐｐｍ）は、第２のニトロ−ベンジル 部分(moiety)の位置を支持するものであった。 Ｎ−｛２（Ｒ）−［２（−アミノ−３−メルカプトプロピル］アミノ］−３−メ チル−ペンチル］イソロイシルホモセリンラクトン ９ Ｎ−｛２（Ｓ）−２［ｔｅｒｔブトキシカルボニル）−アミノ３［（トリフェ ニルメチル）−チオ］プロピル］アミノ］３−メチル−ペンチル］イソロイシル ホモセリンラクトン、８（０．２００ｇ，０．１４８ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１ ．０ｍｌ）およびトリエチルシラン（０．１８ｍｌ，０．１３ｇ，１．１ｍｍｏ ｌ）を有するＣＨ₂Ｃｌ₂（２．０ｍｌ）中に、４℃で溶解した。混合物を、この 温度で２時間攪拌し、その後、周囲温度に至らせ、蒸発乾固した。残渣を、ヘキ サン分画とＴＦＡ０．１％水溶液（６．０ｍｌ）の間で分配した。水性層を、ヘ キサン分画（２×２．５ｍｌ）で洗浄し、濾過し、２０から２５℃で、乾燥まで 濃縮した。オイル状の残渣（０．２５７ｇ）を得、これを更に精製することなく 使用した。Ｎ−｛２（Ｒ）−［［２（４’−ニトロベンジルオキシ−カルボニル）−アミノ −３−メルカプトプロピル］アミノ］−３−メチル−ペンチル］イソロイシルホ モセリンラクトン、１０およびＮ−｛２（Ｒ）−［［２（４’−ニトロ−ベンジ ルオキシ−カルボニル）−アミノ］−３［（４’−ニトロ−ベンジルオキシ−カ ルボニル）− チオ］プロピル］アミノ］−３−メチル−ペンチル］イソロイシルホモセリンラ クトン １１ ＴＨＦ（乾燥）（２ｍｌ）およびトリエチルアミン（０．１２ｍｌ，０．０８ １ｇ，０．８ｍｍｏｌ）中の先のラクトン生成物、９（０．１２８ｇ）、の攪拌 された溶液に、４−ニトロ−ベンジルクロロホルメート（０．０４７ｇ，０．２ ２ｍｍｏｌ）を加えた。５時間後、反応混合物を、蒸発させてオイル（０．１７ ５ｇ）を得た。該オイルを、ＥｔＯＡｃ（３ｍｌ）とＨ₂Ｏ（２ｍｌ）の間で分 配した。有機層を、Ｈ₂Ｏ（２×２ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、真空 下で蒸発させた。１０および１１の混合物を含むオイル（０．０７０ｇ）が得ら れた。化合物を、プレパラティブＴＬＣにより精製した。溶出液：ＥｔＯＡｃ： シクロヘキサン ３：１。 １０が最初に溶出した：０．００５ｇ 収率＝３３％。¹ Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：０．７３−０．９０（１２Ｈ，ｍ），１．００−１．２２（ ３Ｈ，ｍ，２Ｈ＋Ｈ_s），１．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４４），１．４０−１ ．５２（３Ｈ，ｍ），２．１０−２．１８（１Ｈ，ｍ），２．３０−２．８２（ ５Ｈ，ｍ），２．９０−３．１０（１Ｈ，ｍ），４．００−４．１０（１Ｈ，ｍ ），４．１５−４．２７（１Ｈ，ｍ），４．３０−４．４２（１Ｈ，ｍ）， ４．５０−４．６５（１Ｈ，ｍ），５．４０（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂−ベンジル）， ７．６３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７０，Ｈ_arom2+6），８．２４（２Ｈ，ｄ，Ｈ_{aro m3+5} ）；Ｃ₂₇Ｈ₄₃Ｎ₅Ｏ₇Ｓ。 １１が後に溶出した：０．００３ｇ 収率＝１５％。¹ Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：０．７０−０．９２（１２Ｈ，ｍ），１．０３−１．２０（ ２Ｈ，ｍ），１．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１２），１．４０−１．６０（３Ｈ ，ｍ），２．１６−２．２４（１Ｈ，ｍ），２．２５−２．８２（５Ｈ，ｍ）， ２．８２−２．９２（１Ｈ，ｍ），３．６４−３．８０（１Ｈ，ｍ），４．１２ −４．２６（１Ｈ，ｍ），４．２７−４．４３（１Ｈ，ｍ），４．５０−４．６ ５（１Ｈ，ｍ），５．１６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂−Ｓ−ベンジル） ５．３９（２ Ｈ，ｓ，ＣＨ₂−Ｎ−ベンジル），７．５９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３０，Ｈ_{arom2 +6} ，Ｓ−ＰｈＮＯ₂），７．６１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４６，Ｈ_arom2+6，Ｎ−Ｐ ｈＮＯ₂），８．２０（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom3+5，Ｓ−ＰｈＮＯ₂），８．２１（２ Ｈ，ｄ，Ｈ_arom3+5，Ｎ−ＰｈＮＯ₂）；Ｃ₃₅Ｈ₄₈Ｎ₆Ｏ₁₁Ｓ。実施例２ 概要 酵素ＣＰＧ２で開裂可能な新規なｒａｓプロドラッグ の合成のために、自己破壊的(self-immolative)リンカーのエステルを、メルカ プトまたはアミノ官能基と結合（couple）するようにデザインした。これは：Ｎ¹ （４’−スクシンイミジル−オキシカルボニル−オキシベンジル）Ｎ³（ジ−ｔ ｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレア，２０（スキーム３参照）である。一旦、 ｒａｓインヒビターに結合されると、エステル保護基が除去される。ｒａｓプロ ドラッグへの経路を、例示する。 中間体Ｎ¹（４−ヒドロキシベンジル）Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミ ル）ウレア１９を、スキーム２に従い、ｒａｓインヒビター薬剤と結合させるた めに合成した。出発物質である４−ニトロベンジルアルコール（4-nitrobenzyli c alcohol），１２，を、室温にてＤＭＦ（あるいはＴＨＦ）中でｔｅｒｔ−ブ チル−ジフェニル−クロロシランおよびイミダゾールと反応させることにより、 ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリルエーテル，１３，として保護した。該 保護されたニトロ誘導体，１３，を、ギ酸アンモニウムを用いた水素移動により 還元した（ＥｔＯＨ中Ｐｄ／Ｃ １０％）。このようにして形成したアミン，１ ４，を、７０℃にて、トルエン中でトリホスゲン（triphosgene）と反応させ、 対応するイソシアネート１５を生成した。保護されたリンカー， １８，を、室温にてＮＥｔ₃の存在下、ＴＨＦ中でジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グル タメートとイソシアネート１５をカップリングさせることにより得た。１８への もうひとつの経路は、上述の条件と同じ条件下で、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グル タミルイソシアネート１７とアミン１４を直接カップリングさせる方法であり、 該ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミルイソシアネート１７は、ジ−ｔｅｒｔ−ブ チル−グルタメートを−７８℃にてトルエン中、トリホスゲンおよびＮＥｔ₃で 処理することにより得た。この経路を用いることにより、アミン１４およびジ− ｔｅｒｔ−ブチル−グルタメートから、ワンポット合成（one-pot synthesis） で、化合物１８が良好な収率で得られた。 化合物１８を、室温でＴＨＦ中Ｂｕ₄ＮＦにより脱保護し、そしてリンカーの ジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル，１９，をカラムクロマトグラフィーで精製した 。化合物１９を、アセトニトリルおよびトリエチルアミン中の炭酸ジコハク酸イ ミド(disuccinimidyl carbonate)と室温で反応させ、所望のコハク酸イミド・リ ンカー，２０を導く。続いて、これを、ｒａｓインヒビター，９（調製例１およ び実施例１に従って作製された）とカップリングさせ、化合物，２１を得、これ を続いてギ酸中で４℃にて脱保護して、最終的なｒａｓプロドラッグ，２２を得 る。実験 （４−ニトロ−ベンジル）ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリル エーテル （１３） ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−クロロシラン（１．９８ｇ，７．２０ｍｍｏ ｌ）を、４−ニトロベンジルアルコール，１２，（１．００ｇ，６．５０ｍｍｏ ｌ）およびイミダゾール（０．９７ｇ，１４．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０．０ ｍｌ）中に溶解させた攪拌溶液に室温、窒素気流下で１０分間を要して加えた。 反応混合物をさらに５時間攪拌し、Ｅｔ₂Ｏ（７５ｍｌ）で希釈し、Ｈ₂Ｏ（５× １５ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真 空下で蒸発乾固した。放置により結晶化するオイルを得、ＥｔＯＨ（７０％）で 固体へと再結晶化した；収量：２．３６ｇ（９３％）。Ｖ_max／cm^-1（フィルム ）：２９３１，２８５７（ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．），１５２１，１３４ ５（ＮＯ₂）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１．０６（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），４．９２（ ２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），７．４２−７．４６（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ），７．６３−７． ６５（７Ｈ，ｍ，Ｐｈ＋Ｈ_arom2+6），８．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２３，Ｈ_{a rom3+5} ）；ＭＳ，（ＥＩ），（３９１．５４）；ｍ／ｚ：３３４（Ｍ−ｔ-Ｂｕ ，１００），２８８（Ｍ−ｔ-Ｂｕ−ＮＯ₂，１０），２５６（Ｍ−ｔ-Ｂｕ−Ｐ ｈ，２０），１９９（Ｐｈ₂ＳｉＯＨ⁺，１００）；Ｃ₂₃Ｈ₂₅ＮＯ₃Ｓｉ。（４−アミノ−ベンジル）ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリル エーテル （１４） エタノール（１００ｍｌ）に１３（５．００ｇ，１２．７７ｍｍｏｌ）を溶解 させた攪拌溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％，１．５０ｇ）およびギ酸アンモニウム（ ４．６０ｇ）を、室温で加えた。１．５時間後、濾過により触媒を除き、濾液を 真空下で濃縮乾固し、残渣をＥｔＯＡｃ：Ｈ₂Ｏの間で分配した。有機層を乾燥 し（ＭｇＳＯ₄）、真空下で濃縮し、オイルとして１４を得た；収量：４． ２４ｇ（９２％）；Ｖmax／cm^-1（フィルム）：３４３３，３３７８（ＮＨ₂）， ２９３１，２８５７（ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１． ００（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），４．５７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），４．９８（２Ｈ， ｓ ｂｒｏａｄ，ＮＨ₂），６．５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２５，Ｈ_arom3+5）， ６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6），７．４２−７．４６（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ）， ７．６２−７．６５（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ）；ＭＳ，（ＥＩ），（３６１．５６）； ｍ／ｚ：３６１（Ｍ⁺，８），３０４（Ｍ−ｔ-Ｂｕ，１００），１９９（Ｐｈ₂ ＳｉＯＨ⁺，１００）；Ｃ₂₃Ｈ₂₇ＮＯＳｉ。（４−イソシアネート−ベンジル）ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリル エーテル（１５） １４（０．６３ｇ，１．７０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１６ｇ ，０．６０ｍｍｏｌ）をトルエン（１０ｍｌ）に溶解させた７０℃の攪拌溶液に 、トリホスゲン（０．１８ｇ，１．７ｍｍｏｌ）を加えた。５時間後、反応混合 物を濾過し、濾液をオイルになるまで真空下で蒸発した；収量：０．６５ｇ（９ ９％）これをさらに精製せずに用いた。；Ｖmax／cm^-1（フィルム）：２９３１ ，２８５７（ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．），２２７５（ＮＣＯ）；¹Ｈ-ＮＭ Ｒ，ｄ_H：１．０３（９Ｈ， ｓ，ｔ-Ｂｕ），４．７６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），７．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８． ３８，Ｈ_arom3+5），７．３５（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6），７．３７−７．４８（ ５Ｈ，ｍ，Ｐｈ），７．６２−７．７１（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ）；ＭＳ，（ＥＩ）， （３８７．５５）；ｍ／ｚ：３３０（Ｍ−ｔ-Ｂｕ，５２），２８６（Ｍ−ｔ-Ｂ ｕ，Ｍ−ｔ-Ｂｕ−ＮＣＯ，４８），１９９（Ｐｈ₂ＳｉＯＨ⁺，１００）；Ｃ₂₄ Ｈ₂₅ＮＯ₂Ｓｉ。Ｎ¹（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ジ−フェニル−シリル−Ｏ−ベンジル）Ｎ³（ジ− ｔ−ブチル−グルタミル）ウレア（１８） 方法 Ａ ： ＴＨＦ（７ｍｌ）中にジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタメート塩酸塩 （０．４６ｇ，１．５５ｍｍｏｌ）を溶解させた溶液に、トリエチルアミン（０ ．３１ｇ ３．１０ｍｍｏｌ）を加えた。イソシアネート，１５，（０．６０ｇ ，１．５５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（３ｍｌ）溶液を、室温で該グルタメートエ ステルに加えた。２時間後、反応混合物を濾過し、真空下で蒸発乾固した。生成 物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：シクロヘキサン ２：１）により 精製し、オイル，１８を得た；収量 ０．５３ｇ（５３％）。Ｖmax／cm^-1（フ ィルム）：３３５９（ＮＨ），２９３２，２８５７ （ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．），１７２９（Ｃ＝Ｏ，エステル），１６７０ （Ｃ＝Ｏ，ウレア），１１５４（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１． ０３（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），１．４０（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ−ｇｌｕ），１．４ ３（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ−ｇｌｕ），１．６８−２．００（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ（ ＮＨ）ＣＨ ₂），２．１８−２．３２（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ ₂ＣＯ₂−ｔ-Ｂｕ），４ ．０８−４．１２（１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ₂），４．６８（２Ｈ，ｓ，Ｃ Ｈ₂），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１２，ＮＨ−ｇｌｕ），７．１９（２Ｈ ，ｄ，Ｊ＝８．４１，Ｈ_arom3+5），７．３２−７．４７（７Ｈ，ｍ，Ｐｈ＋Ｈ_{a rom2+6} ），７．６２−７．７０（５Ｈ，ｍ，Ｐｈ），８．５４（１Ｈ，ｓ，ＮＨ −Ｐｈ）；ＭＳ，（ＥＩ），（６４６．９０）；ｍ／ｚ：５４０（Ｍ−ｔ-Ｂｕ ＋１，２），５３４（Ｍ−２ｔ-Ｂｕ＋２，５），４７８（Ｍ−３ｔ-Ｂｕ＋３， １００），１９９（Ｐｈ₂ＳｉＯＨ⁺，１００）；Ｃ₃₇Ｈ₅₀Ｎ₂Ｏ₆Ｓｉ。方法 Ｂ ：（化合物１８のワンポット合成） −７８℃のジ−ｔｅｒｔ−ブチル −グルタメート塩酸塩（４．１４ｇ，１４．０ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（ １．３９ｇ，４．６７ｍｍｏｌ）のトルエン溶液へ、トリエチルアミン（２．８ ３ｇ，２８．０ｍｍｏｌ）のトルエン （１０ｍｌ）溶液を３０分を要して滴下した。反応を室温まで温めた。５０分後 、（４−アミノ−ベンジル）ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シリル エーテル ，１４（５．００ｇ，１３．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．９５ｍ ｌ，１４．０ｍｍｏｌ）を含む溶液を、５−１０分を要して加えた。２０時間後 、反応混合物を濾過し、Ｈ₂Ｏ（２００ｍｌ）、ＨＣｌ水溶液（１％，２００ｍ ｌ）、Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液（１％，２００ｍｌ）、Ｈ₂Ｏ（２×２００ｍｌ）で順 次洗浄し、乾燥し（Ｍｇ₂ＳＯ₄）、真空下でオイルにまで蒸発させた；収量：９ ．９０ｇ。この生成物をさらに精製することなく脱保護した。Ｎ¹（４−ヒドロキシベンジル）Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレ ア（１９） 方法Ａから： １８（０．５３ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ） 溶液へ、室温でテトラ−ブチルアンモニウム フルオリド（２．５ｍｌ，２．５ ｍｍｏｌ １Ｍ溶液）のＴＨＦ溶液を加えた。３時間後、反応混合物を真空下で 蒸発乾固した。生成物をＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）に溶解し、Ｈ₂Ｏ（２×１０ｍ ｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、オイルにまで蒸発させた；収量：０．４ ０ｇ。 脱保護された化合物，１９（０．３８ｇ）をカラムクロマトグラフィー（Ｅｔ ＯＡｃ：シクロヘキサン ３：１）を用いて精製すると、放置により結晶化する オイルになった；収量０．０９３ｇ（２９％）。Ｖmax／cm^-1（フィルム）：３ ３７０（ｂｒｏａｄ ＮＨ＋ＯＨ），２９６７（ＣＨ₃），２９３０，２８５７ （ＣＨ₂，ａｓｙｍ．，ｓｙｍ．），１７１６（Ｃ＝Ｏ，エステル），１６７８ （Ｃ＝Ｏ，ウレア），１１５３（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１． ４０（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），１．４２（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），１．７２−２． ００（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ ₂），２．２０−２．３１（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ ₂ ＣＯ₂−ｔ-Ｂｕ），４．１０−４．１８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ₂） ，４．３９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３６，ＣＨ₂），４．９９（１Ｈ，ｔ，ＣＨ₂ＯＨ ），６．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１１，ＮＨ−ｇｌｕ），７．１６（２Ｈ， ｄ，Ｊ＝８．３５，Ｈ_arom3+5），７．３１（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6）， ８．５ ０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−Ｐｈ）；ＭＳ，（ＥＩ），（４０８．９４）；ｍ／ｚ：４ ０８（Ｍ⁺，１０），３５２（Ｍ−ｔ-Ｂｕ＋１，４），２９６（Ｍ−２ｔ-Ｂｕ ＋２，１４）；Ｃ₂₁Ｈ₃₂Ｎ₂Ｏ₆。 方法Ｂから： ワンポット操作で１８が生成し、該生 成物をカラムクロマトグラフィーを用いて精製した；収量２．５７ｇ（３段階で ４６％）。含水ＭｅＯＨ（６０％）から再結晶した。Ｎ¹［（４’−スクシンイミジル−オキシ−カルボニル−オキシ−ベンジル）］ Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレア（２０） アセトニトリル５．０ｍｌ中、Ｎ¹（４’−ヒドロキシ−ベンジル）Ｎ³（ジ− ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレア，１９（０．２００ｇ，０．４９ｍｍｏ ｌ）および炭酸ジコハク酸イミド（０．１２８ｇ，０．５０ｍｍｏｌ）の溶液に 、ピリジン０．０４１ｍｌを室温で１度に加えた。２０時間後、反応混合物を、 真空下、蒸発乾固し、オイル状の残渣を３．０ｍｌ ＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ₂ Ｏ（３×３．０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、そして再び蒸発させた 。０．１５１ｇの半固体状物が得られ、これをカラムクロマトグラフィー（溶出 液：ＥｔＯＡｃ：クロロヘキサン ３：１）で精製した。最終的に、０．０８８ ｇの固体が得られた（収率：３９％）。 Ｖmax／cm^-1（フィルム）：３３６９（ＮＨ），１７８３（Ｃ＝Ｏ，カーボネ ート），１７２６（Ｃ＝Ｏ，エステル，ケトン），１６６０（Ｃ＝Ｏ，ウレア） ，１２０ ７，１１５６（Ｃ−Ｏ，ｓｔｒ．）；¹Ｈ-ＮＭＲ，ｄ_H：１．３９（９Ｈ，ｓ， ｔ-Ｂｕ），１．４２（９Ｈ，ｓ，ｔ-Ｂｕ），１．８０−２．００（２Ｈ，２ｍ ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ ₂），２．２２−２．３５（２Ｈ，２ｍ，ＣＨ ₂ＣＯ₂−ｔ-Ｂ ｕ），２．６０（４Ｈ，ｓ，ＣＨ₂−スクシンイミジル），４．１０−４．２０ （１Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＮＨ）ＣＨ₂），４．８９（２Ｈ，ｓ，ＣＨ₂），６．４７（ １Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１０，ＮＨ−ｇｌｕ），７．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５７ ，Ｈ_arom3+5），７．４０（２Ｈ，ｄ，Ｈ_arom2+6）；ＭＳ，（５４９．５８）； ｍ／ｚ：５０６（Ｍ⁺−ＣＯ₂＋１，５０），４５０（Ｍ⁺−ＣＯ₂−Ｃ₄Ｈ₈＋１， １８），３９４（Ｍ⁺−ＣＯ₂−２Ｃ₄Ｈ₈＋１，６０）；２７９（Ｍ⁺−ＣＯ₂−２ Ｃ₄Ｈ₈，−ヒドロキシスクシンイミド ＋１，９０）；Ｃ₂₆Ｈ₃₅Ｎ₃Ｏ₁₀。Ｎ¹［−｛２（Ｒ）［［２（４’−ベンジルオキシ−カルボニル）−アミノ−３ −メルカプトプロピル］−アミノ］−３−メチル−ペンチル］イソロイシルホモ セリンラクトン］Ｎ³（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−グルタミル）ウレア（２１） ＣＨ₂Ｃｌ₂中の９の溶液に、乾燥ＴＨＦおよびトリエチルアミン中、Ｎ¹（４ −スクシンイミジル−オキシカル ボニル−オキシベンジル）Ｎ³（ジ−ｔ−ブチル−グルタミル）ウレア，２０を 、室温でＮ₂下に、加えた。反応混合物を、蒸発し、洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄ ）、そして再度、蒸発して２１にする。Ｎ¹［（４−ベンジリデン−マロノニトリル−オキシ−カルボニル）４−オキシ ベンジル）］Ｎ³グルタミルウレア（２２） 化合物，２１を、ギ酸（９５％）中に、４℃にてＮ₂下で溶解する。２２時間 後、溶媒を真空（ポンプ）下で蒸発させ、２２を得る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マライス リチャード イギリス国 エスダブリュ３ ６ジェイビ ー ロンドン フルハム ロード 237 ザ インスティテュート オブ キャンサ ー リサーチ チェスター ビーティ ラ ボラトリーズ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 少なくとも１個の保護基と連結したｒａｓインヒビター（ＦＴＬｉ）のプ ロドラッグを含み、該保護基は該化合物から開裂されｒａｓインヒビターを放出 することができる化合物または該プロドラッグの生理学的に許容される誘導体。 ２． 前記ＦＴＬｉがファルネシルトランスフェラーゼ・インヒビターである請 求項１に記載の化合物。 ３． 前記ＦＴＬｉが式（Ｉａ） 式中、Ｃｙｓはシステインであり、Ａは基−ＮＨＣＨ（Ｒ¹）．ＣＯＯＲ²［式中 、Ｒ¹は天然に生じるアミノ酸側鎖であり、Ｒ²は水素、メチルまたはアミ ノである］で示される請求項１または２に記載の化合物。 ４． Ａが以下のものである請求項３に記載の化合物： −ＮＨ．ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂）ＣＯＯＨ； −ＮＨ．ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）．ＣＯＯＨ； −ＮＨ．ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃）．ＣＯＯＨ；または −ＮＨ．ＣＨ（ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃）ＣＯＮＨ₂。 ５． 前記ＦＴＬｉが、式（Ｉｂ）または（Ｉｃ）： 式中、Ｘ₁はＣＨ₂ＣＨ₂、トランスＣＨ＝ＣＨまたはＣＨ₂ＮＨであり；Ｒ₃およ びＲ₄は同一または異なって天然に生じるアミノ酸の側鎖、それらの酸化形態、 或いは置換または非置換の脂肪族、芳香族もしくはヘテロ芳香族基であり、Ｘ₂ は（ＣＨ₂）_n［式中、ｎは０、１または ２である］で示されるものである請求項１または２に記載の化合物。 ６． Ｒ₃およびＲ₄が同一または異なってシクロヘキシル、フェニル、ピリジル 、イミダゾリル、或いは芳香族またはヘテロ芳香族環で必要に応じて置換された 飽和または不飽和の直鎖状または分岐鎖状の２〜８炭素原子である請求項５に記 載の化合物。 ７． Ｒ₃およびＲ₄が独立して−ＣＨ₃、 −ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂、 −ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＯＨ、 −ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₃、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＳＣＨ₃、 −ＣＨ₂ＣＨ₂Ｓ（Ｏ）ＣＨ₃、 −ＣＨ₂ＣＨ₂Ｓ（Ｏ）₂ＣＨ₃を示す請求項５または６に記載の化合物。 ８． Ｒ₃およびＲ₄がそれぞれ −ＣＨ（ＣＨ₃）ＣＨ₂ＣＨ₃である請求項５、６または７に記載の化合物。 ９． 式（ＩＩ）で示される請求項１〜８のいずれか１つに記載の化合物： FTL-(X-CO.O-CH₂-Ph-NO₂)_m (II) 式中、Ｘは同一または異なってＮＨ、ＯまたはＳであり、 ｍは１〜５の整数であり、Ｐｈはｍが２〜５のとき同一または異なって良く必要 に応じて置換されたフェニレン環であり、ＦＴＬはＦＴＬ−（ＸＨ）_mがｍ個の −ＸＨ基を含むＦＴＬｉであるような基であり、ニトロ基はＰｈ環に対して２位 または４位にある。 １０． 式（ＩＩＩａ）で示される請求項９に記載の化合物： FTL-(S-CO.O-CH₂-Ph-NO₂)_m (IIIa) 式中、ｍは１〜５の整数であり、Ｐｈはｍが２から５であるとき同一または異な って良く必要に応じて置換されたフェニレン環であり、ＦＴＬはＦＴＬ−（ＳＨ ）_mがｍ個のメルカプト基を含むＦＴＬｉ化合物であるような基であり、ニトロ 基はＰｈ環に対して２位または４位にある。 １１． 式（ＩＩＩｂ）で示される請求項９に記載の化合物： FTL-(NH-CO.O-CH₂-Ph-NO₂)_m (IIIb) 式中、ｍは１〜５の整数であり、Ｐｈはｍが２から５であるとき同一または異な って良く必要に応じて置換されたフェニレン環であり、ＦＴＬはＦＴＬ−（ＮＨ₂ ）_mが ｍ個のアミノ基を含むＦＴＬｉ化合物であるような基であり、ニトロ基はＰｈ環 に対して２位または４位にある。 １２． 式（ＩＩＩｃ）で示される請求項９に記載の化合物： (ON₂-Ph-CH₂-O.OC-S)-FTL-(NH-CO.O-CH₂-Ph-NO₂) (IIIc) 式中、Ｐｈは同一または異なって必要に応じて置換されたフェニレン環であり、 ＦＴＬは（ＳＨ）−ＦＴＬ−（ＮＨ₂）がＦＴＬｉ化合物であるような基であり 、ニトロ基はＰｈ環に対して２位または４位にある。 １３． 式（Ｖ）で示される請求項１〜８のいずれか１つに記載の化合物： FTL-(X-CO.O.CH₂-Ph-Z-NH-qlu)_m (V) 式中、Ｘは同一または異なって良くＮＨ、ＯまたはＳであり、ｍは１〜５の整数 であり、ＦＴＬはＦＴＬ−（ＸＨ）_mがｍ個の−ＸＨ基を含むＦＴＬｉ化合物で あるようなＦＴＬ化合物の残基であり、Ｐｈはｍが２〜５であるとき同一または 異なって良く必要に応じて置換されたフェニル基であり、Ｚは−Ｏ．ＣＯ−また は−ＮＨ．ＣＯ−であり、ｇｌｕは下記式： -CH(CO₂H) (CH₂CH₂CO₂H) で示されるグルタミン酸の残基またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステルであ る。 １４． 式 （ＶＩ）で示される請求項１３に記載の化合物： FTL- (NH-CO.O.CH₂-Ph-Z-NH-qlu)_m (VI) 式中、ｍは１〜５の整数であり、ＦＴＬはＦＴＬ−（ＮＨ₂）_mがｍ個のアミノ基 を含むＦＴＬｉであるようなＦＴＬ化合物の残基であり、Ｐｈはｍが２〜５であ るとき同一または異なって良く必要に応じて置換されたフェニル基であり、Ｚは −Ｏ．ＣＯ−または−ＮＨ．ＣＯ−であり、ｇｌｕは下記式： -CH(CO₂H) (CH₂CH₂CO₂H) で示されるグルタミン酸の残基またはそれらのジ−Ｃ_1-6アルキルエステルであ る。 １５． 前記フェニレン環（Ｐｈ）がフッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヒドロキシ 、メルカプト、アミノ、ニトロ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4ハロアルキル、Ｃ_1-4ア ルコキシ、Ｃ_1-4ハロアルコキシ、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4アルキニ ル、およびＣ_2-4ハロアルケニルから選択される同一または異なっても良い１〜 ４個の基で置換されている請求項９〜１４のいずれか１つに記載の化合物。 １６． 前記環が１個以上の２−、３−、５−および／または６−位でフッ素に より置換されている請求項１５に記載の化合物。 １７． 請求項１〜１６のいずれか１つに記載の化合物を１種以上の薬学的に許 容される担体または希釈剤と共に含む組成物。 １８． （ｉ）腫瘍関連抗原と結合し得る標的化物質と複合体化した、請求項１ 〜１６のいずれか１つに記載の化合物を活性な薬剤に転換し得る酵素；および （ｉｉ）請求項１〜１６のいずれか１つに記載の化合物、 を含むヒトまたは動物の被験体における新形成のコントロールに使用されるシ ステム。 １９． （ｉ）被験体中の腫瘍細胞に選択的に感染し得る修飾されたウィルス、 該ウィルスは酵素をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含む；および （ｉｉ）該酵素の作用により活性な薬剤に転換され得る請求項１〜１６のいずれ か１つに記載の化合物、 を含むヒトまたは動物の被験体における新形成のコントロールに使用されるシ ステム。 ２０． （ｉ）被験体中の腫瘍細胞に選択的に感染し得る非ウィルス的運搬シス テム、該運搬システムは酵素をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含む、およ び （ｉｉ）該酵素の作用により活性な薬剤に転換され得る請求項１〜１６のいずれ か１つに記載の化合物、 を含むヒトまたは動物の被験体における新形成のコントロールに使用されるシ ステム。 ２１． 前記酵素が細菌のニトロレダクターゼまたはカルボキシペプチダーゼで ある請求項１８、１９または２０に記載のシステム。 ２２． ＦＴＬｉが、請求項３および５で定義される式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、ま たは（Ｉｃ）の化合物である式ＦＴＬｉ−（ＰＲＴ）_mで示される化合物の製造 方法であって、但し該化合物のそれぞれは少なくとも１個のメルカプト、ヒドロ キシまたはアミノ基を含み；ｍは１〜５の整数であり；ＰＲＴはｍが２〜５であ るとき同一または異なって良く酵素の作用により式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（ Ｉｃ）の化合物から開裂され得る保護基であり；ここで式（Ｉａ）、（Ｉｂ）ま たは（Ｉｃ）の化合物は前記少なくとも１個のメルカプト、ヒドロキシまたはア ミノ基を介して基ＰＲＴに連結しており；式ＦＴＬｉ−（ＰＲＴ）_mの化合物を 製造する条件下で該保護基また はそれらの前駆体を式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）の化合物と反応させる ことを包含する、方法。 ２３． 製造される化合物が請求項１〜１６のいずれか１つで示されるものであ る請求項２２に記載の方法。 ２４． 式（ＸＶＩ）で示される化合物： 式中、Ｒ⁵はＣ_1-6アルキルである。 ２５． Ｒ⁵がエチルまたはｔ−ブチルである請求項２４に記載の化合物。 ２６． 前記前駆体が請求項２４または２５に記載される式（ＸＶＩ）で示され る化合物であり、前記方法が更に該前駆体のアルキル基を除去する工程を含む請 求項２２に記載の方法。