JPH09510975A

JPH09510975A - アレルギー治療用合成ペプチドベース免疫原

Info

Publication number: JPH09510975A
Application number: JP7525239A
Authority: JP
Inventors: ワン，チャン・イ
Original assignee: United Biomedical Inc
Current assignee: United Biomedical Inc
Priority date: 1994-03-28
Filing date: 1995-03-24
Publication date: 1997-11-04
Also published as: AU2195395A; CA2186595A1; EP0811016A1; EP0811016A4; WO1995026365A1; CN1146772A

Abstract

(57)【要約】本発明は、マスト細胞活性化を阻害し、アレルゲン誘発性ＩgＥ産生を減少させるための、放射状分枝鎖状多量体形態（例えば、分枝鎖状八量体または十六量体ペプチド）または直鎖状単量体形態の合成ペプチド免疫原の組成物の使用による、ヒトＩgＥ重鎖におけるエフェクター部位、すなわち、ε鎖のＣＨ４ドメインにおける部位に対する高力価抗体の、ヒトを含む健康な哺乳動物における産生を誘発するための方法に関する。合成ワクチンにおけるキー成分としてアレルギーの治療のための免疫治療を提供するための、かかる「最適に」設計された、担体タンパクを含まないＩgＥε鎖関連免疫原の使用にも関する。課題のペプチドは、ＩgＥＣＨ４ドメインに対する免疫反応を刺激するのを補助するために、特異的配向で直列に結合したビルトインヘルパーＴ細胞エピトープを含む免疫刺激要因配列を含有する。

Description

【発明の詳細な説明】アレルギー治療用合成ペプチドベース免疫原関連出願の相互参照これは、１９９１年１月４日に出願し、現在放棄されている出願番号第０７／６３７,３６４号の一部継続出願であった、１９９２年３月６日に出願し、現在放棄されている係属中の出願番号第０７／８４７,７４５号の一部継続出願である１９９３年５月１０日に出願した係属中の出願番号第０８／０６０,７９８号の継続出願である１９９４年３月２８日に出願した係属中の出願番号第０８／２１８,４６１号の一部継続出願である。発明の分野本発明は、ヒトＩgＥ重鎖のε−鎖のＣＨ４ドメイン上のエフェクター部位に対する高力価抗体の、ヒトを含む健康な哺乳動物における産生を誘発するための免疫原としての直鎖状形態または放射状分枝鎖状多量体形態の合成ペプチドの組成物の使用、およびアレルギーの治療のための免疫治療を提供するためのワクチンとしての該組成物の使用に関する。発明の背景今世紀の初期以来知られており実践されている、喘息および枯草熱などのＩg Ｅ媒介アレルギー反応の予防のための免疫治療は、漸増量のアレルゲンを患者に投与して、アレルゲンへの次回の曝露の影響を軽減する除感作または感受性減退によるものであった⁽¹⁾。かかるアレルゲンベース免疫治療法の限界は、関係するアレルゲンの同定の困難さを含んでおり、アレルゲンが同定される場合、同定されたアレルゲンの使用によってしばしば副作用が生じた⁽²⁾。アレルギーの免荷のための他の治療は、アレルギー反応の原因である細胞性事象のカスケードを遮断する薬物を用いる。これらの薬物としては、抗ヒスタミン、鬱血除去薬、およびβ₂作動薬、およびコルチコステロイドが挙げられる。抗ヒスタミン、鬱血除去薬、およびβ₂作動薬は、アレルギー性カスケードにおけるＩgＥの下流の事象に作用し、アレルギー症状だけを扱う待期療法となる。予防療法は、ＩgＥ媒介アレルギー反応の開始に近い細胞性事象に対して作用しなければならない。これらの待期療法は、短期かつ部分的な免荷を提供する。さらにまた、症状の免荷は、しばしば、逆の副作用を伴い、例えば、抗ヒスタミンは、不眠状態（restlessness）または嗜眠状態を生じ、β₂作動薬は、しばしば、喘息患者における増加した罹患率に関係していた。コルチコステロイドは、有用な免疫抑制薬であり、アレルギー症状の治療に非常に有効である。しかしながら、それらは、逆のホルモン活性を刺激し、望ましくない広範囲の免疫抑制を生じる。公知の治療薬の短所を回避するために、ＩgＥを標的とする選択的抑制によってアレルギー反応を予防するのがより望ましい。これは、不都合な除感作法によって行われるようなＩgＥ合成を抑制すること、または、過敏症の化学的媒介物の随伴性放出によるマスト細胞および好塩基球の脱顆粒を刺激するプロセスを遮断することのいずれかによって行われる。より基本的なレベルで、スタンワース（Stanworth）ら^(3-7)および他^(8-13)は、マスト細胞および好塩基球の免疫学的誘発性（trigerring）について分子的基礎を解明しようとする試みにおいて、細胞シグナルプロセスにおける細胞親和性ペプチドの役割を研究するために、合成ＩgＥε鎖ペプチドおよび対応する抗体を用いた。過去２０年間にわたって研究された多くのＩgＥペプチド（第１表）のうち、ヒトε鎖のＦc ＣＨ４ドメイン内の有効なエフェクター部位（Ｌys₄₉₇−Ｐhe₅₀₆ 、第２表において二重下線によって示されている）は、デカペプチドであった。それは、構造／活性研究のために合成され使用された⁽³⁾。このＩgＥＣＨ４ドメイン誘導テカペプチドは、ＩgＥ媒介マスト細胞誘発性プロセスに似ている非細胞溶解方法における単離されたラット腹膜マスト細胞からの投与量依存性ヒスタミン放出を活性化する能力を有することが判明した⁽⁴⁾。このペプチドエフェクター部位のための正確な構造要求は、ε鎖デカペプチドの複数の合成類似体を用いて構造−活性研究を介して導き出された^(3,4,5)。 ε鎖関連「ペプチド−担体タンパクコンジュゲート」を用いて免疫化により誘導された抗ＩgＥＣＨ４ペプチド抗体もまた、阻害活性を観察することによって、ＩgＥ感作細胞の脱顆粒についての構造作用研究のために用いられた^(5,11,12) 。ＩgＥ媒介感受性を有する患者に免疫治療を提供するためにペプチドベースのワクチンを用いることの可能性は、スタンワース（Ｓtanworth）ら^(14,15)によって示唆された。彼は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）または精製ツベルクリンタンパク分画（ＰＰＤ）などの「担体タンパク」にコンジュゲートしたＬys−Ｔhr−Ｌys−Ｇly−Ｓer−Ｇly−Ｐhe−Ｐhe−Ｖal−Ｐhe−ＮＨ₂ ⁽ ³⁾ （配列番号１）の配列を有する予め同定されたε鎖デカペプチドを用い、「ペプチド−担体タンパク」コンジュゲートがデカペプチド特異性抗体を誘発したことが判明した。例えば、平均よりも良好な抗ペプチド力価に基づいて選択されたウサギ抗ペプチド血清は、力価依存形態でラット腹膜マスト細胞からのデカペプチド誘発ヒスタミン放出を軽減した。この阻害活性は、さらに、ラット受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）モデル系におけるin ivo試験によって確認された。このウサギ抗ペプチド血清のアナフィラキシーに対する効果は、アレルゲンによるアナフィラキシー抗原投与前の多アレルゲン投与（multiple allergen applic ation）によって予め感作されたラットに投与した場合、青色になる領域の測定によって、および、色強度の評価によって評価された。同一の研究において、かかる「デカペプチド−タンパク担体コンジュゲート」を含有する免疫原を用いてラットにおいて得られた結果は、それらのアレルギー治療用ワクチンとして使用についての可能性の予備的指摘を与えた。しかしながら、このストラテジーは、かなりの困難に出会った。このプロトタイプ「デカペプチド−タンパク担体コンジュゲート」ワクチンの主な欠点としては、至適よりも小さい免疫刺激能ならびに担体タンパクのあまり定義されていない組成物およびコンジュゲーション反応の不均一性に由来する製造の困難さが挙げられる。かかるペプチド−タンパクコンジュゲートによって生じた抗血清が、しばしば、標的−ペプチドよりも多くの、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）などのタンパク担体上のエピトープで指向される抗体を含有する。小さなペプチドが不充分な免疫原であることは、当業者に知られている。小さなペプチドを免疫原性にするために、通常、化学的コンジュゲーションによって、または、遺伝子融合によって、該ペプチドを大きな担体タンパクに結合させる。しかしながら、これらのプロセスは、一般に、ペプチドの予測できない構造変化を生じる。さらに、免疫反応は、しばしば、免疫優性担体に誤誘導される。結果として、アレルギーからの長期持続性（long-lasting）免荷を与える有効なワクチンの開発は、さらなる免疫原設計を待っている。第２表では、ラットＩgＥε鎖⁽¹⁶⁾およびマウスε鎖⁽¹⁷⁾のＣＨ２−ＣＨ４ドメインについてのアミノ酸配列をヒトε鎖⁽¹⁸⁾についてのアミノ酸配列と並べて（配列番号２〜４）、予め報告されたＩgＥ関連ペプチドフラグメントについてのガイドを提供する。ヒトＩgＥε重鎖において、２５２位のＱの次のＬがオリジナルＩgＥ骨髄腫ＮＤ配列には存在しないことが示される。ダッシュで示されるギャップは、ホモロジーを最大にするように導入した。相同残基位置のマッチを四角で囲んだ。第２表では、構造的活性について研究したε配列上の位置（第１表）に下線を引く。ヒトＩgＥＣＨ４ドメインにおける構造的に活性なＩgＥＣＨ４デカペプチド配列には、二重下線を引く（配列番号１）。表中で用いるアミノ酸コードは、以下のとおりである：Ａ、アラニン；Ｒ、アルギニン；Ｎ、アスパラギン；Ｄ、アスパラギン酸；Ｃ、システイン；Ｑ、グルタミン；Ｅ、グルタミン酸；Ｇ、グリシン；Ｈ、ヒスチジン；Ｉ、イソロイシン；Ｌ、ロイシン；Ｋ、リシン；Ｍ、メチオニン；Ｆ、フェニルアラニン；Ｐ、プロリン；Ｓ、セリン；Ｔ、トレオニン；Ｗ、トリプトファン；Ｙ、チロシン；Ｖ、バリン。参考文献のリスト１．ヌーン・エル(Noon L.)，「枯草熱に対する予防接種」(Prophylactic ino culation against hay fever)，ランセット(Lancet)，i:1572-1573(1911) ２．世界保健機関および国際免疫学会連合ワーキンググループレポート：アレルゲン免疫治療の現状(World Health Organization and International Union o f Immunological Societies Working Group Report: Current status of allerg en immunotherapy.)ランセット，i:259-261(1989) ３．スタンワース(Stanworth)，キングス(Kings)，ロイ(Roy)ら，バイオケミカル・ジャーナル(Biochem．J.)，180:665-668(1979) ４．スタンワース，モレキュラー・イムノロジー(Mol．Immunol.)，21:1183-1 190(1984) ５．スタンワースおよびバート(Burt)，モレキュラー・イムノロジー，23:123 1-1235(1986) ６．バートおよびスタンワース，ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー(Eur．J．Immunol.)，17:437-440(1987) ７．スタンワース，モレキュラー・イムノロジー，25:1213-1215(1988) ８．ハンバーガー(Hamburger)，サイエンス(Science)，189:389-390(1975) ９．ケンテン(Kenten)，ヘルム(Helm)，イシザカ(Ishizaka)ら，プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ(Proc．Natl．Acad．Sci.，USA)，81:2955-2956(1984) １０．コールマン(Coleman)，ヘルム，スタンワースおよびゴールド(Gould)，ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー，15:966-969(1985) １１．クレティアン(Chretien)，ヘルム，マーシュ(Marsh)ら，ジャーナル・オブ・イムノロジー(J．Immunol.)，141:3128-3134(1988) １２．ロバートソン(Robertson)およびリン(Lin)，モレキュラー・イムノロジー，25:103-113(1988) １３．ヘルム，ケボ(Kebo)，ヴェルチェリ(Vercelli)ら，プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ，86:9 465-9469(1989) １４．スタンワース，ジョーンズ(Jones)，ルーウィン(Lewin)およびナイヤー(N ayyar)，ペプチドワクチンによるアレルギー治療(Allergy treatment with a pe ptide vaccine)，ランセット，336:1279-1281(1990) １５．スタンワース，ルーウィン，ナイヤーおよびジョーンズ，免疫反応性ペプチドおよび抗体ならびに抗アレルギー治療におけるそれらの使用(Immunoreactiv e peptides and antibodies and their use in anti-allergy treatment)，EPO 403 312 A1(1990) １６．カインズロジャー(Kindsroger)ら，DNA 1:335-343(1982) １７．イシダ(Ishida)ら，EMBO 1:1117-1123(1982) １８．ドーリントン(Dorrington)およびベーニッヒ(Bennich)，イムノロジカル・リビューズ(Immunol．Rev.)，41:3-25(1978) １９．ブレット(Brett)ら，ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー，2 3:1608-1614(1993) ２０．ヴァイスミューラー(Weismuller)ら，インターナショナル・ジャーナル・オブ・ペプタイド・リサーチ(Int．J．Peptide Res.)，40:255-260(1992) ２１．セリス(Celis)ら，ジャーナル・オブ・イムノロジー，140:1808-1815(198 8) ２２．デモッツ(Demotz)ら，ジャーナル・オブ・イムノロジー，142:394-402(19 89) ２３．チョン(Chong)ら，インフェクション・アンド・イムニティ(Infect. Immu n. )，60:4640-4647(1992) ２４．グラント(Grant)編，合成ペプチド：ユーザーのガイド(Synthetic Peptid es: A User's Guide )，ダブリュ・エイチ・フリーマン・アンド・カンパニー(W. H.Freeman & Co.)，ニューヨーク，ニューヨーク，(1992)第382頁２５．オハガン(O'Hagan)ら，バクシーン(Vaccine)，9:768-771(1991) ２６．エルドリッジ(Elridge)ら，モレキュラー・イムノロジー，28:287-294(19 91) ２７．マクグラシャン(MacGlashan)ら，ジャーナル・オブ・イムノロジー，136: 2231-2239(1986) 発明の目的放射状分枝鎖状形態または直鎖状Ｔヘルパーエピトープ含有形態で化学的に合成されたＩgＥε鎖ベースペプチド免疫原の一のグループを用いて、ヒトを含む哺乳動物に導入する場合、ヒトε鎖のＣＨ４ドメインのデカペプチドエフェクター部位に対する高力価抗体を誘発することが本発明の目的である。他の目的は、ヒトを含む哺乳動物に導入する場合、ヒトＩgＥＣＨ４上のエフェクター部位に対して有効な高力価抗体の産生を刺激するであろう特定の配向において無差別（promiscuous）ヒトヘルパーＴ細胞エピトープを含有するペプチドに結合したヒトＩgＥ重鎖ＣＨ４ドメイン（ＩｇＥＣＨ４）から得られた特定のアミノ酸配列を有する最適なペプチド免疫原を設計することである。これらの抗体は、マスト細胞活性化を阻害し、アレルギー症状の原因であるヒスタミンなどの化学的媒介物質の放出を減少させ、ＩgＥ媒介受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）反応を抑制し、Ｂリンパ球によるアレルゲン誘発ＩgＥ産生を抑制するべきである。さらなる目的は、分枝鎖状多量体免疫原または直鎖状免疫原を含有する組成物を用いる有効なＩgＥε鎖ペプチドベースワクチンを研究して、アレルギー性反応の治療のための免疫治療を提供することである。発明の概要本発明によると、ペプチド免疫原は、固相合成法によって調製される。該ペプチド免疫原は、１０アミノ酸ＩgＥＣＨ４ペプチド（配列番号１）またはその免疫原性類似体を含有する一連の放射状分枝鎖状多量体ペプチド；ＩgＥＣＨ４ペプチド（配列番号１）またはその免疫原性類似体をヘルパーＴ細胞エピトープ（Ｔh エピトープ）と一緒に含有する一連の分枝鎖状多量体ペプチド；およびＩg ＥＣＨ４ペプチド（配列番号１）またはその免疫原性類似体をヘルパーＴ細胞エピトープ（Ｔh エピトープ）の一部と一緒に含有する一連の直鎖状単量体ペプチドからなる。ＩgＥＣＨ４ペプチドは、ＩgＥ重鎖のＦc領域、すなわちε鎖ＣＨ４ドメイン（ＩgＥＣＨ４）から得られる。ペプチド免疫原の３つのシリーズのうち、直鎖状ペプチドが好ましい。これらのペプチドを含有する組成物を用いて、健康な哺乳動物、例えば、モルモット、ラットおよびヒトを免疫化して、ＩgＥＣＨ４エフェクター部位（配列番号１）に対して特異的であり、かつ、無関係な抗体を含まない高力価抗血清の産生を誘発する。本発明によると、キー免疫原として合成ペプチドを含有するワクチンは、適正なアジュバントおよび／またはデリバリー賦形剤の存在下、分枝鎖状多量体ペプチドまたは直鎖状ペプチドの有効量を用いても調製される。かかるワクチン組成物は、スタンワース（Ｓtanworth）ら⁽¹⁴⁾によって現在用いられているペプチド一担体タンパクコンジュゲートのものよりも集中した抗ＩgＥペプチド反応を誘発し、かくして、アレルギーの治療のための良好な免疫治療を提供すると思われる。発明の詳細な説明本発明は、ＩgＥ媒介アレルギー疾患の治療のための、ヒトを含む健康な哺乳動物におけるヒトＩgＥε重鎖のＣＨ４ドメイン（配列番号１）上のエフェクタ一部位に対する高力価抗体の産生のためのペプチドベース免疫原の新規なグループの使用に関する。一般に、ＩgＥ依存性過敏症の直接の結果であるアレルギー症状は、マスト細胞および好塩基球によって放出された化学的媒介物質によって生じる。表面結合ＩgＥで感作されたマスト細胞または好塩基球が、表面結合ＩgＥが特異的であるアレルゲンに結合する場合、放出が誘発される。誘発は、アレルゲンの、抗原− 抗体型相互作用における表面結合ＩgＥのＦab'部分への結合によって行われる。アレルゲン／抗体結合は、二価の表面結合ＩgＥを架橋し、細胞表面上の高親和性Ｆc受容体との直接接触におけるＩgＥの領域であるＩgＥの遠位Ｆc領域の構造変化を誘発する。今なお正確に理解されていないメカニズムによって、構造変化は、結果として生じる細胞によるヒスタミンを含む媒介物質の放出を伴って細胞 −ＩgＥ−アレルゲン複合体を活性化する。ＩgＥ上のエフェクター部位は、誘発事象に関係すると思われる。かかる「エフェクター部位」に対して指向する特異的抗ＩgＥ抗体の存在は、能動または受身免疫化のいずれかを介して、ＩgＥ「エフェクター」部位および細胞表面の間の相互作用を妨害することによってアレルギー反応に罹っている宿主において細胞活性化プロセスの阻害を導く。特異的抗ＩgＥ抗体の使用によるかかる介入、すなわち、一種の免疫治療は、宿主自身の部位特異的抗ＩgＥ抗体の宿主による産生を誘発するために、ＩgＥに対する特異的「部位特異的」抗体による予防的処置により受身的に、または、より好ましくは、部位特異的ペプチド免疫原からなるワクチンを宿主に投与することにより能動的に行うことができる。活性免疫化は、より有効かつ長期持続性の保護を提供すると思われる。機能的活性について研究された循環ＩgＥのＦc領域由来の部位のうち、ＩgＥ分子のＣＨ４ドメイン上の領域（Ｌys₄₉₇−Ｐhe₅₀₆）は、マスト細胞および好塩基球の誘発に関係する構造エフェクターと同定された^(3-8,14)。第１表および第２表で下線を引いた領域を参照。配列Ｌys−Ｔhr−Ｌys−Ｇly−Ｓer−Ｇly−Ｐ he−Ｐhe−Ｖal−Ｐhe−ＮＨ２（配列番号１）を有するこの部位から誘導されたデカペプチドは、このエフェクター部位の構造に近いことが判明した。これは、免疫学的誘発プロセス⁽⁴⁾に類似している方法でラットのマスト細胞からの用量依存性ヒスタミン放出を誘発するデカペプチドの能力によって証明される。スタンワース（Ｓtanworth）ら^(14,15)は、免疫原として、担体タンパク、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合したＩgＥＣＨ４デカペプチドを用いることによって、実験的ワクチンの使用によるＩgＥ媒介アレルギー反応を有する患者に免疫治療を与えることの可能性を示した。かかる免疫化により得られた動物免疫血清は、スタンワース（Ｓtanworth）ら^(14,15)によって、力価依存性形態でラット腹膜マスト細胞からのデカペプチド誘発ヒスタミン放出を適度に減少させることが判明した。得られた免疫血清による阻害活性は、さらに、多アレルゲン適用の条件下、in vivo受身皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）によって確認された。スタンワース（Ｓtanworth）らによって研究されたプロトタイプ「ＩgＥＣＨ４ペプチド」ワクチンの主な欠点は、ほとんど全ての自己抗原に本質的に関連する問題であるその弱い免疫原性である。本発明では、合成免疫刺激素子が特異的配向でＩgＥのＣＨ４デカペプチド（配列番号１）に結合されて、その結果、ＩgＥ上のこのエフェクター部位に指向される有効な抗体が遺伝的に異なる宿主個体群において広範囲に生じることができる特異的免疫原を提供することである。次いで、これらの抗体は、マスト細胞および好塩基球上のＩgＥの刺激作用を遮断し、かくして、ＩgＥ媒介アレルギー疾患を予防するための有効な処置を生じる。本発明のペプチド免疫原は、ＩgＥのＦc領域の標的アミノ酸配列（配列番号１）との血清学的交差反応性を有する抗体を誘発する能力を有し、一方、実質的に非細胞毒性ヒスタミン放出を媒介する能力を有する。初回量、例えば、免疫原０.２〜２.５mg；好ましくは、１mgが、次いで、反復（ブースター）量が、注射、好ましくは、筋肉内注射により投与されるべきである。投与量は、患者の年齢、体重および全身の健康状態に依存し、治療分野でよく知られている。活性な免疫化について、本明細書で引用する「免疫原」なる用語は、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）に対する抗体を誘発する能力を有する合成ペプチドに関しており、この抗体は、ＩgＥ媒介好塩基球およびマスト細胞脱顆粒の抑制を導く。本発明の免疫原は、多量体ペプチドまたは分枝鎖状リシルコアマトリックス構造を有するその類似体を含んだ。これらの分枝鎖状多量体ペプチドは、宿主動物における免疫反応を独立して誘発する能力を有する。ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）の類似体としては、スタンワース（Ｓtanworth）ら^(3.4,5)によって開示された合成ペプチド類似体が挙げられる（出典明示により本明細書の一部とする）。好適であるためには、免疫原の分子量は、５,０００より高くあるべきであり、好ましくは、１０, ０００より高くあるべきである。ペプチドについての反復枝単位は、４以上であるべきである。リシンなどの二官能性アミノ酸、次いで、ＧlyまたはＡlaなどの好ましい非チャージ側鎖を有するアミノ酸への結合は、コアマトリックス構造の作製に有用である。２つのジ−Ｂoc−リシンカップリングサイクル間の１つの付加的カップリングサイクルにおいてアミノ酸を挿入することによって、該アミノ酸は、最適な提供に必要な構造を得るために最大の自由を許すようにペプチド枝の間でスペーサーとして作用する。本発明の免疫原は、無差別ヘルパーＴ細胞エピトープ（Ｔh エピトープ）を含有する直鎖状ペプチドも含んでいた。これらのＴh エピトープは、有効な抗体反応を引き起こすために、スペーサーを用いてかまたは用いずに、デカペプチドエフェクター配列（配列番号１）に所定の形態で共有結合して、デカペプチドのＮ末端に隣接させた。該免疫原は、また、例えば、細菌エルシニア・エスピーピー（Ｙersinia spp）由来のインベーシンタンパクのドメインに対応する免疫刺激配列からなってもよい。インベーシンドメインは、スペーサーを介してＴhエピトープに結合されてもよい。本発明の「免疫原」は、無関係の抗体の発生を最小にし、かくして、アレルギーの治療のための免疫治療プロセスを複雑にする望ましくない副作用を生じずに、「標的配列」に対するより集中した免疫反応、すなわち、所望のＩgＥＣＨ４交差反応性を誘発する（配列番号１）。短いペプチド抗原は、通常、Ｔ細胞依存性抗原である。すなわち、Ｔヘルパーエピトープの存在は、短い「標的」ペプチド免疫原性にするために必要とされる。短いＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）またはその免疫原性類似体は、Ｔヘルパー細胞エピトープを含有しない。分枝鎖状多量体免疫原および短いＩgＥＣＨ４デカペプチドからなる直鎖状免疫原は、人工的なビルトイン機能性ヘルパーＴ細胞エピトープを提供するように設計される。本発明のペプチド免疫原は、下記式： (Ａ)_n−(Ｔh)_m−(Ｂ)_o−(ＩgＥＣＨ４ペプチド)_p ［式中、Ａは、アミノ酸、α−ＮＨ₂、脂肪酸、脂肪酸の誘導体、または、インベーシンドメインであり；Ｂは、アミノ酸であり；Ｔhは、ヘルパーＴ細胞エピトープまたはその免疫増強類似体またはセグメントであり；ＩgＥＣＨ４ペプチドは、Ｌys−Ｔhr−Ｌys−Ｇly−Ｓer−Ｇly−Ｐhe−Ｐhe −Ｖal−Ｐhe（配列番号１）またはその免疫原性類似体であり；ｎは、１〜１０であり；ｍは、１〜４であり；ｏは、０〜１０であり；ｐは、１〜３である］で示される。本発明のペプチド免疫原は、約２０〜約１００アミノ酸残基、好ましくは、約２０〜約５０アミノ酸残基、より好ましくは、約２０〜約３５アミノ酸残基からなる。Ａがアミノ酸である場合、非天然であっても天然アミノ酸であってもよい。非天然アミノ酸としては、限定されないが、β−アラニン、オルチニン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、チロキシン、γ−アミノ酪酸、ホモセリン、シトルリンなどが挙げられる。天然アミノ酸としては、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが挙げられる。さらにまた、ｎが１よりも大きく、２つ以上のＡがアミノ酸である場合、各アミノ酸は、独立して、同一または異なってもよい。Ａが、例えば、ステアリン酸もしくはパルミチン酸などの脂肪酸またはトリパルミトイルシステイン（Ｐam₃Ｃys）基などの脂肪酸誘導体である場合、それは、Ｔhエピトープの免疫刺激特性を増強することによってアジュバントとして作用する⁽²⁰⁾。Ａが脂肪酸またはその誘導体である場合、通常、ペプチドのアミノ末端に位置する。さらにまた、Ａの１つが脂肪酸である場合、本発明で有用な脂肪酸は、飽和であっても不飽和であってもよい８〜２４個の炭素原子の炭化水素鎖を有する。Ａがインベーシンドメインである場合、それは、エルシニア（Ｙersinia）種のインベーシンタンパク由来の免疫刺激エピトープである。この免疫刺激特性は、このインベーシンドメインの、Ｔ細胞上に存在するβ１インテグリン（integrin ）分子と相互作用する能力により生じる。β１インテグリンと相互作用することが判明したインベーシンドメインに対する特異的配列はブレット（Ｂrett）ら⁽¹ ⁹⁾ によって開示されている。好ましい具体例では、無差別Ｔhエピトープへの結合のためのインベーシンドメイン（Ｉnv）は、以下の配列：を有するか、または、別のエルシニア（Ｙersinia）種インベーシンタンパクにおける対応する領域からのその免疫刺激性類似体である。かかる類似体は、置換、欠失または挿入を含有して、株−株変異に適応させてもよい。ただし、該類似体は、免疫刺激特性を維持している。１つの具体例では、ｎは、４であり、Ａは、α−ＮＨ₂、リシン、リシンおよびリシン（この順序で）である。別の具体例では、ｎは、１であり、Ａは、α− ＮＨ₂である。別の具体例では、ｎは、４であり、Ａは、α−ＮＨ₂、インベーシンドメイン(Ｉnv)、グリシンおよびグリシン（この順序で）である。Ｂは、前記の天然または非天然アミノ酸からなる。各Ｂは、独立して、同一であっても異なってもよい。Ｂがリシンである場合、分枝鎖状ポリマーを形成することができる。例えば、ｏが７であり、７個のＢ全てがリシンである場合、分枝鎖状Ｋコア（Ｋ₄Ｋ₂Ｋ）は、リシル側鎖ε−アミノ基を保護せずにペプチド合成を行った場合に形成される。Ｋコアを有するペプチドは、８つの枝を有しており、各枝は、同一であり、「(Ａ)_n−(Ｔh)_m−」または「(ビルトイン（built-in） −Ｔhを有するＩgＥＣＨ４ペプチド)−」と表される。さらに、Ｂのアミノ酸は、可撓性ヒンジ、またはスペーサーを形成して、ＴhエピトープおよびＩgＥＣＨ４デカペプチドまたはその類似体への免疫反応を増強することができる。可撓性ヒンジをコードする配列の例は、免疫グロブリン重鎖ヒンジ領域において見ることができる。可撓性ヒンジ配列は、しばしば、プロリンに富んでいる。１つの特に有用な可撓性ヒンジは、配列Ｐro−Ｐro−Ｘaa−Ｐro−Ｘaa−Ｐro（配列番号２４）で表される(ここで、Ｘaaは、アミノ酸、好ましくは、アスパラギン酸である)。免疫原性は、無差別ＴhエピトープおよびＩgＥＣＨ４デカペプチドまたはその類似体の間のスペーサー残基（例えば、Ｇly−Ｇly）の付加を介して改良することもできる。ＴhエピトープをＢ細胞エピトープ（すなわち、ＩgＥＣＨ４デカペプチド部位またはその類似体）から物理的に分離することに加えて、グリシン残基は、Ｔhエピトープの、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）またはその類似体との結合によって生じた人工的二次構造を中断することができ、これにより、Ｔおよび／またはＢ細胞反応の間の妨害を排除することができる。かくして、ヘルパー細胞および抗体誘発ドメインの間の構造的分離は、与えられた免疫原ならびに適切なＴhおよびＢ細胞の間のより有効な相互作用を可能にする。Ｔhは、天然または非天然アミノ酸からなるＴhエピトープである。Ｔhは、連続または不連続エピトープからなってもよい；Ｔhのアミノ酸は、いずれも、必ずしもエピトープの一部であるとは限らない。類似体およびセグメントを含む、本発明に適切なエピトープは、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）またはその類似体に対する免疫反応を増強または刺激する能力を有する。免疫優性および無差別であるエピトープは、動物およびヒト個体群において、広範囲に発散性のＭＨＣタイプ^(21-23)と高く広範囲に反応する。本発明に適切なＴhは、約１０〜約５０アミノ酸、好ましくは、約１０〜約３０アミノ酸を有する。複数のＴh エピトープが存在する場合（すなわち、ｍ＞２）、各Ｔhエピトープは、独立して、同一であっても異なってもよい。エピトープ類似体は、Ｔhエピトープにおける１〜約１０アミノ酸残基の置換、付加、欠失および挿入を含む。該セグメントは、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）またはその類似体に対する免疫反応を増強または刺激するのに充分であるＴhエピトープの隣接部分である。本発明のエピトープとしては、Ｂ型肝炎表面およびコア抗原ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＨＢ_sＴhおよびＨＢ_cＴh)、百日咳毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＰＴＴh）、破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴＴh）、麻疹ウイルスＦタンパクヘルパーＴ細胞エピトープ(ＭＶ_f Ｔh)、クラミジア・トラコマチス（Ｃhlamydia trachomati s）主要外膜タンパクヘルパーＴ細胞エピトープ（ＣＴＴh）、ジフテリア毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＤＴＴh）、プラスモディウム・ファルシパルム（Ｐlasmodium falciparum）サーカムスポロゾイト（circumsporozoite）ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＰＦＴh）、スキストソーマ・マンソニ（Ｓchistosoma man soni）トリオースリン酸イソメラーゼヘルパーＴ細胞エピトープ（ＳＭＴh）、エシェリキア・コリ（Ｅscherichia coli）ＴraＴヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴraＴＴh）ならびにこれらのＴhエピトープのいずれかの免疫増強類似体およびセグメントが挙げられる。Ｔhエピトープ配列の例としては、以下のものが挙げられる：および好ましくは、Ｔhエピトープは、ＨＢ_sＴh、ＰＴ₁Ｔh、ＰＴ₂Ｔh、ＴＴ₁Ｔh、ＴＴ₃Ｔh、またはＭＶ_F1Ｔhである。式(Ａ)_n−(Ｔh)_m−(Ｂ)_o−(ＩgＥＣＨ４ペプチド)で示される本発明の単量体直鎖状ペプチドにおいて、Ｔhエピトープは、スペーサーＢを介してＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）のＮ末端に共有結合する。ＩgＥＣＨ４ペプチドは、Ｌys−Ｔhr−Ｌys−Ｇly−Ｓer−Ｇly−Ｐhe−Ｐhe−Ｖal−Ｐhe(配列番号１)、デカペプチドである。ＩgＥＣＨ４ペプチドの代わりに免疫原性類似体を用いてもよい。その免疫原性類似体は、１〜約４アミノ酸残基の置換、付加、欠失または挿入を含んでもよい。ただし、該類似体は、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）と交差反応性の免疫反応を誘発する能力を有する。置換、付加および挿入は、本明細書で定義したような天然または非天然アミノ酸により作製されてもよい。ＩgＥＣＨ４ペプチド（配列番号１）の免疫原性類似体は、スタンワース（Ｓtanworth）ら^(3,4,5)によって定義されており、出典明示により本明細書の一部とする。したがって、本発明の好ましいペプチド免疫原は、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）またはその免疫原性類似体およびＴhを含有する単量体ペプチドである。さらに詳しくは、好ましいペプチド免疫原は、ＩgＥＣＨ４（配列番号１）またはその免疫原性類似体；スペーサー（例えば、Ｇly−Ｇly）；ＨＢ_sＴh 、ＰＴ₁Ｔh、ＰＴ₂Ｔh、ＴＴ₁Ｔh、ＴＴ₃Ｔh、およびＭＶ_F1Ｔh（各々、配列番号５、６、１１、７、１０、６１）からなる群から選択されるＴhエピトープ；ならびに所望によりＩnvドメイン（配列番号２５）を含有する直鎖構造のものである。好ましいペプチド免疫原組成物は、例えば、ペプチドＮo.１９−２３および２８を含む（第５表および第６表、配列番号５１−５５、６２）。本発明のペプチド免疫原は、当業者によく知られている化学合成によって作製されてもよい。例えば、グラント（Ｇrant）編、シンセティック・ペプタイディス（Ｓynthetic Peptides）⁽²⁴⁾を参照。したがって、ペプチド免疫原は、アプライド・バイオシステムズ・ペプタイド・シンセサイザー・モデル（Ａpplied Ｂiosystems Ｐeptide Ｓynthesizer Ｍodel）４３０Ａまたは４３１での側鎖保護アミノ酸を用いてｔ−ＢocまたはＦ−moc化学によって保護されたα−ＮＨ₂を用いる固相合成法の自動化メリフィールド（Ｍerrifield）法を用いて合成されてもよい。ペプチド枝を合成するＫコア部分を合成するために、ｔ−Ｂocリシンの代わりにジ−α,ε(ｔ−Ｂoc)リシン残基を２,４−ジクロロベンジル保護ε− アミノ酸と一緒に用いる。Ａが脂肪酸である場合、よく知られているカルボジイミド法によって樹脂結合ペプチドのＮ末端に容易に付加される。Ｐam₃Ｃysを付加するために、リポアミノ酸Ｓ−[２,３−ビス(パルミトイルオキシ)−(２Ｒ)−プロピル−Ｎ−パルミトイル−(Ｒ)−システイン（Ｐam₃Ｃys）を化学的に合成する。次いで、Ｐam₃Ｃys を、最終カップリング工程でＰam₃Ｃys−ＯＨを用いる固相合成法によってペプチドのＮ末端にカップリングさせて、リポアミノ酸を樹脂結合ペプチド鎖に結合させる。最後の結合したリポペプチド生成物の溶解性を改良するために、固相ペプチドをＮ末端でさらなるセリンおよびリシン残基で伸長させることができる。所望のペプチド免疫原の組み立てを完了した後、標準的な方法で樹脂を処理して、樹脂からペプチドを切り離し、アミノ酸鎖上の官能基を脱保護する。遊離ペプチドをＨＰＬＣによって精製し、生化学的に、例えば、アミノ酸分析法または配列決定法によって、特徴付けする。ペプチドについての精製および特徴付け法は、当業者によく知られている。本発明の直鎖状Ｔh−ＩgＥＣＨ４デカペプチド構築物を得るための他の化学的手段としては、「チオエーテル」連結基の形成を介するハロアセチル化されたシステイニルペプチドのライゲーションが挙げられる。例えば、システインは、Ｔh含有ペプチドのＣ末端に付加することができ、システインのチオール基を用いて、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）またはその免疫原性類似体のＮ末端に結合したリシン残基のＮ^αクロロアセチル修飾またはマレイミド誘導α− またはε−ＮＨ₂基などの求電子基への共有結合を形成することができる。本発明のペプチドは、重合することもできる。重合は、例えば、慣用の方法を用いてグルタルアルデヒドとリシン残基の−ＮＨ₂基との間の反応によって行うことができる。直鎖状「Ａ−Ｔh−スペーサー−ＩgＥＣＨ４」ペプチド構築物（例えば、ペプチドＮｏ.１９−２３および２８、配列番号５１−５５および６２）は、直鎖状「Ａ−Ｔh−スペーサー−ＩgＥＣＨ４」構築物のＮ末端に付加されたさらなるシステインの利用によって重合または共重合されてもよい。Ｎo. １９−２３末端システインのチオール基は、分枝鎖状ポリ−リシルコア分子（例えば、Ｋ₂Ｋ、Ｋ₄Ｋ₂Ｋ、Ｋ₈Ｋ₄Ｋ₂Ｋ）のＮ末端に結合するリシン残基のハロクロロアセチル修飾またはマレイミド誘導α−またはε−ＮＨ₂基との「チオエートル」結合の形成のために用いられる。別法としては、よく知られている組換えＤＮＡ法によって、長い直鎖状ペプチド免疫原を合成してもよい。ＤＮＡ法についての標準的なマニュアルは、本発明のペプチドを生成するための詳細なプロトコールを提供する。本発明のペプチドをコードする遺伝子を構築するために、好ましくは遺伝子を発現するであろう微生物に対して最適化されたコドン使用法を用いて、アミノ酸配列を核酸配列に逆翻訳する。次に、典型的には、所望によりペプチドおよび調節因子をコードする重複オリゴヌクレオチドを合成することによって、合成遺伝子を作製する。該合成遺伝子を好適なクローニングベクターに挿入し、組換え体を得、特徴付けを行う。次いで、選択された発現系および宿主に適切な好適な条件下、ペプチドを発現させる。該ペプチドを、標準的な方法によって、精製し、特徴付けを行う。本発明のペプチド免疫原の効力は、実施例に示すように、免疫原を動物に注射し、次いで、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）またはその免疫原性類似体に対する体液性免疫反応をモニターすることによって確立してもよい。好適な動物としては、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、ヤギ、ヒツジなどが挙げられる。本発明の別の態様は、医薬的に許容されるデリバリー系中有効量の本発明のペプチド免疫原の１種類以上からなるワクチン組成物を提供するものである。かかるワクチン組成物は、アレルギー性鼻炎を含むアトピー反応の予防、食物アレルギー、喘息、アナフィラキシー、およびウイルス誘発性喘息などの他のＩgＥ媒介過敏性反応の予防のために用いられる。したがって、本発明のペプチド免疫原は、アジュバント、医薬的に許容される担体またはワクチン組成物において慣用的に与えられる他の成分を用いて、ワクチン組成物として製剤化することができる。かかる製剤は、当業者によって容易に決定され、該製剤としては、即時放出用および／または持続放出用、ならびに全身系免疫性の誘発および／または局所性粘膜免疫性の誘発のための製剤が挙げられ、これは、例えば、微粒子による免疫原エントラップメントによって行われる。該製剤は、ミョウバン、フロイント不完全アジュバント、リポシン、サポニン、スクワレン、Ｌ１２１、エムルシゲンおよびＩＳＡ７２０などのアジュバントまたは乳化剤を含んでもよい。本発明のワクチンは、皮下、経口、筋肉内、または他の非経口もしくは腸経路を含む好都合な経路によって投与される。単回投与薬または多投与薬として投与される。免疫化スケジュールは、当業者によって容易に決定される。本発明のワクチン組成物は、ＩgＥＣＨ４デカペプチドまたはその免疫原性類似体を含む１種類以上の合成ペプチド免疫原の有効量および医薬的に許容される担体を含有する。投与単位形態は、体重kg当たり各ペプチド約０.５μg〜約１mg を含有するように製剤化される。多投与薬においてデリバリーされる場合、該有効量は、好都合には、単位投与形態当たり適切な量を含有するように分割される。本発明のワクチン組成物は、より一般の人々において免疫効力を増強し、かくして、ＩgＥＣＨ４デカペプチドに対する良好な免疫原を提供するために２種類以上の課題のペプチド免疫原のカクテルを含有するように製剤化されてもよい。例えば、ペプチドＮo.１９、２０、２１、２３および４のカクテルは、有用である。該組成物は、ビルトインアジュバントを提供するためにリポペプチドからなるように製剤化されてもよい。合成ＩgＥＣＨ４デカペプチド含有免疫原に対する免疫反応は、オハーガン（Ｏ'Ｈagan）ら⁽²⁵⁾によって開示されたタイプの生物分解性微粒子中または該微粒子上でのエントラップメントを介するデリバリーによって改良してもよい。該免疫原は、共有結合されたＰam₃Ｃysを含むアジュバントを用いるかまたは用いずに被包化してもよく、かかる微粒子は、フロイント不完全アジュバントまたはミョウバンなどの免疫刺激性アジュバントを有してもよい。該微粒子は、局所性粘膜免疫性を含む、免疫原に対する免疫反応の効力を増すように機能する。かかる局所性免疫性は、例えば、粘膜性局所性アレルギー反応のため、特に望ましい。微粒子形態におけるワクチン組成物は、持続性または周期性反応のための時間制御した放出を与えるように、経口投与用および局所投与用に製剤化されてもよい^(25-26)。以下に特定のペプチド免疫原の実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明の範囲を限定するために用いるものではない。実施例１八量体ペプチド免疫原の合成以下の多量体ペプチドを合成した：ペプチドＮｏ．１ペプチドＮｏ．２多量体ペプチドの合成は、低分子量マトリックスコアが分枝鎖状多量体ペプチド抗原系の形成の基礎であるので、供給すべき三官能性アミノ酸の制限された連続伸長（sequential propagation）によって進行する。三官能性アミノ酸、すなわち、Ｂoc−Ｌys(Ｂoc)、またはジ−(Ｂoc)−Ｌysは、Ｎ^α−およびＮ^ε−アミノ酸基が共に反応性末端として利用可能であるので、最も適切である。かくして、ジ−(Ｂoc)−Ｌysの連続伸長は、２ⁿ個の反応末端を生じるであろう。例えば、ジ−(Ｂoc)−Ｌysの固相樹脂上への最初のカップリングにより、２つの反応性アミノ末端が生じて、２つのペプチド鎖を結合する。したがって、ジ− (Ｂoc)−Ｌysを用いる第２、第３および第４段階の連続生成により、各々、多量体ペプチド鎖抗原を結合するための四価、八価および十六価の末端が生じるであろう。かかる多量体ペプチドは、免疫原として有用である。免疫原として用いるために、前記の分枝鎖状八量体ペプチドＮo.１および２を合成した。該分枝鎖状抗原は、コアマトリックスの周囲が均一なペプチド−抗原の高密度層によって囲まれた小さなヘプタリシルコアを含有する。このデザインは、多くの不確定形態でＰＰＤまたはＫＬＨなどの大きなタンパク担体および該タンパク担体の表面にランダムに分布した小さなペプチド抗原を含有する慣用のペプチド−担体コンジュゲート抗原とは異なる。八量体ペプチド免疫原の合成は、Ｂoc−アミノ酸樹脂結合ベンズヒドリルアミドおよびtＢoc−化学の組合せを用いる。例えば、バイオサーチ（Ｂiosearch）９５００装置で特別低い充填量の０.１４mmol／g ＭＢＨＡ（４−メチルベンズヒドリルアミン）樹脂にジ−t−Ｂoc Ｌysをカップリングさせることによって８ −分枝鎖状ヘプタリシルコア樹脂を調製した。各々についてジ−(Ｂoc)−Ｌysの２つのカップリングサイクルに続いて、ＤＭＦジメチルホルムアミド中０.３Ｍアセチルイミダゾールを用いる２つのキャッピング反応を行った。最初のジ−(ＮＨ₂)Ｌys−樹脂にさらに２つのジ−(Ｂoc)−Ｌysカップリングを付加した。次いで、ニンヒドリン試験によって合成八量体樹脂の置換レベルを測定し、理論的カップリング収量に基づいて適切なレベルの遊離−ＮＨ₂基を有することが判明し、次いで、標準的なt−Ｂoc法に従って、八量体ペプチド免疫原の合成のために用いた。Ｎ−αアミノ酸の保護のために酸性不安定なtert−ブチルオキシカルボニル（ t−Ｂoc）を用いた。以下の官能性側鎖保護基：Ｔhr、Ｓer、ＧluおよびＴyrについてはＯ−ベンジル；ＡrgについてはＮ^α−トシル；ＨisについてはＢＯＭ、すなわち、ＢＯＣ−Ｎ^im−ベンジルオキシメチル、ＬysについてはＮ^ε−ジクロロベンジルオキシカルボニル；ＣysについてはＳ−４−メチルベンジル−；Ａsp についてはＯ−シクロヘキシルおよびＴrpについてはＣＨＯを用いた。ペプチドＮo.１およびＮo.２の配列（配列番号２３、１３）によって指示されるように、Ｃ−末端からＮ−末端にペプチドＮo.１およびＮo.２の連続するアミノ酸を付加した。ペプチドＮo.１およびペプチドＮo.２について得られた八量体ペプチジル樹脂を、１０％ｖ／ｖアニソールの存在下、０℃で１時間、無水ＨＦによって切断した。放出された多量体抗原を酢酸で抽出し、エーテルで２回洗浄し、凍結乾燥させた。凍結乾燥した多量体ペプチトを免疫原として用いた。実施例２アジュバントとしてＣＦＡおよびＩＦＡを用いる分枝鎖状八量体ペプチド免疫原による能動免疫化（ａ）免疫化方法以下のプロトコールに従って、モルモットのグループ（グループ当たりＮ＝３）を、２つのＩgＥＣＨ４関連多量体ペプチド免疫原（ペプチドＮｏ.１および２）の各々、ならびにＫＬＨにコンジュゲートしたペプチドＮo.３（配列番号１）を用いて免疫化した：ペプチドベース免疫原またはコンジュゲート（１００μ g／mＬ）を同量のフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）で乳化した混合物（２００μＬ）を各動物に皮下注射した。次いで、２１日目、４２日目および６３日目に、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）と混合したペプチドベース免疫原の皮下注射を繰り返し行った。（ｂ）抗ＩgＥＣＨ４関連ペプチド反応を測定することによるモルモット免疫血清のアッセイ対応する免疫原で被覆した９６ウエルの平底マイクロタイタープレートを用いて、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）によって抗ペプチド抗体活性を測定する。５μg／mＬのペプチド免疫原溶液のアリクウォット（１００μＬ）を３７ ℃で１時間インキュベートした。該プレートを、３％ゼラチン／ＰＢＳ溶液と一緒に３７℃で１時間さらにインキュベートすることによってブロックした。次いで、ブロックしたプレートを乾燥させ、アッセイのために用いた。試験モルモット血清のアリクウォット（１００μＬ）を、試料希釈緩衝液中１：１０希釈で始め、その後、１０倍連続希釈で、ペプチド被覆プレートに添加した。該プレートを３７℃で１時間インキュベートした。対照として正常なモルモット血清を用いた。た。ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ヤギ抗モルモット抗体１００μＬをコンジュゲート希釈緩衝液（０.５ＭＮaＣlおよび正常なヤギ血清を含有するリン酸緩衝液）中１：１,０００の希釈で添加した。該プレートを３７℃で１時間インキュベートした後、前記に従って洗浄した。次いで、ｏ−フェニレンジアミン基質溶液のアリクウォット（１００μＬ）を添加した。５〜１５分間、発色させた後、２ＮＨ₂ＳＯ₄５０μＬの添加により酵素的着色反応を停止させた。プレート測定器で各ウエルの内容物のＡ_492nmを測定した。共に分枝鎖状多量体形態の免疫原であるペプチドＮo.１およびその非常に関連した誘導体ペプチドＮo.２は、ＥＬＩＳＡ阻害アッセイを介して、ＩgＥＣＨ４標的配列（配列番号１）に対して特異的な抗体を誘発するのに有効であることが判明した。対照免疫原である単量体ペプチドＮo.３（ＩgＥＣＨ４デカペプチド配列番号１）のＫＬＨコンジュゲートと比較した場合、結果は、これらの２つの多量体ペプチド抗原がＫＬＨコンジュゲートよりも高レベルの抗体力価を生じたことを示した。これらの免疫化実験の好結果は、ペプチド配列のＣ末端でのＧly−Ｌys−Ｍet の挿入（配列番号２３および１３、ペプチドＮｏ.１および２を参照）の結果として多量体系におけるＴhエピトープの発生を示し、免疫系への有効な提供のためのある配向の重要さを示した。他の実験では、単に、他の配向においてＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）またはその複数の反復体を含有する８−または１６−分枝鎖状ＩgＥペプチド免疫原を作製するだけでは、抗ＩgＥＣＨ４反応の誘発に有効ではなかったことが示された。実際、合計１９個の分枝鎖状多量体構築物のうち、ペプチドＮo.１および２は、増強された免疫原性を示す唯一のものである。これに関して、多量体ペプチドＮo.１および２を用いて観察された高い免疫原性は、実験を必要とし、当業者によって予想されなかった。さらに、得られた結果は、短いＩgＥＣＨ４セグメント間に取り込まれたスペーサー配列、すなわち、Ｇly−Ｐro−Ｇlyが、サブユニット配列によって与えられたエピトープの自由な提供を必要とすることを示す。分枝鎖状リシンコア樹脂への連結前のＣ末端でのスペーサー、すなわち、Ｇly−Ｌys−Ｍetの挿入は、多量体分枝鎖状ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）合成構築物の免疫原性のために必要であることも判明した。実施例３直鎖状免疫原（配列番号１５−２２）によるラットの免疫化Ａ．免疫原の調製：アプライド・バイオシステムズ・ペプタイド・シンセサイザー・モデル（Ａpplied Ｂiosystems Ｐeptide Ｓynthesizer Ｍodel）４３０Ａまたは４３１で製造者の指示に従ってＦ−moc化学を用いて固相合成法によってペプチド免疫原Ａ〜Ｈ（第３表）を合成する。該ペプチドを完全に組み立てた後、該樹脂を、標準的な方法に従って処理して、樹脂からペプチドを切断し、アミノ酸側鎖上の官能基を脱保護する。アミノ末端からカルボキシル末端までのペプチド免疫原の構造は、以下のとおりである：ペプチド免疫原Ａは、３つのドメイン：３つのリシン残基（３Ｋ）、Ｂ型肝炎表面抗原ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＨＢ_sＴhエピトープ）およびＩgＥＣＨ４ペプチドを有する直鎖状ペプチドである。かくして、ペプチド免疫原Ａは、３Ｋ−ＨＢ_sＴh−ＩgＥＣＨ４ペプチドと示される。ペプチド免疫原Ａについて、および、ペプチド免疫原Ｂ〜Ｈについての実際の配列を第５表に示す（配列番号１５−２２）。０、２および５週間目の免疫化について、各ペプチド免疫原を溶解させ、アジュバント溶液（フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、または０.２％ミョウバン）と合し、最終濃度０.５mg／mlとする。該溶液を、使用するまで４℃で貯蔵し、注射の３〜５分前に渦巻撹拌する。各ラットに注射当たり１００μgを投与する。Ｂ．免疫化スケジュールおよび血清回収：スプレーグ・ドーリー種ラット（ｎ＝５）を皮下的に（ｓ.ｃ.）免疫化する。２週間目および５週間目にブースター注射をｓ.ｃ.投与する。３週目、６週目、７週目および１１週目に血液を回収する。０.９％ＮaＣl中１：１０に希釈したペントバルビタールナトリウム（６４.８ mg／mＬ；アンソニー・プロダクツ・カンパニー(Ａnthony Ｐroducts Ｃo.)、カリフォルニア州アッカディア）１mＬの腹腔内注射によりラットを麻酔した後、中尾動脈（middle caudal artery）からの血液回収を行う。尾部を４８℃±０. ５℃の水に２分間維持し、ペーパータオルで迅速にマッサージする(すなわち、搾取する)。すぐに、２３ゲージの針を装着した５mＬの注射器中に血液を回収する。典型的には、２〜２.５mＬの血液を得る。３０００rpmで２５分間の遠心により、血清を回収する。該血清を３００μＬ容量ずつのアリクウォットにし、ＥＬＩＳＡアッセイのために用いるまで冷凍貯蔵する。実施例４直鎖状免疫原（配列番号３７−５０）によるラットの免疫化Ａ−Ｔh−ＧＧ−ＩgＥＣＨ４［ここで、Ａは、ＮＨ₂−、Ｌys−Ｌys(２Ｋ)、Ｌys−Ｌys−Ｌys（３Ｋ）またはインベーシンドメイン（Inv）（配列番号２５）のいずれであってもよく、Ｔhは、Ｔヘルパーペプチドであり、ＧＧは、Ｇly −Ｇlyスペーサーであり、ＩgＥＣＨ４は、標的デカペプチド（配列番号１）である］と示される直鎖状ペプチド免疫原を実施例３の記載に従って合成する。これらのペプチド免疫原を第４表においてペプチド免疫原Ｎo.４−１７（配列番号３７−５０）として示す。合成され、切断されたペプチドを用いてラットを免疫化して、効力について試験する。以下に概略記載する実験的免疫化プロトコールによって、５匹のラットのグループについて効力を評価する。実験計画：免疫原: ペプチドＮo.４−１７（試行当たり１）投与量: 免疫化当たり１００μg 経路: 筋肉内アジュバント: フロイント完全／不完全投与計画: ０週目(ＦＣＡ)、３および６週目（ＩＦＡ）採取計画: ０、３、６、８、１０週目種: スプレーグ・ドーリー種ラットグループサイズ: ５アッセイ: 抗ペプチド活性についてのＥＬＩＳＡ、固相免疫吸着剤は、ＩgＥＣＨ４デカペプチド配列（配列番号１）の単量体ペプチドＮo.３。血液を回収し、血清に処理し、貯蔵した後、トレーサーとしてヤギ抗モルモットＩgＧの代わりにホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ラットＩgＧ抗体を用いる以外は実施例２の記載に従って、ＥＬＩＳＡにより力価測定する。実施例５直鎖状免疫原（配列番号５１−５６、６２）および逆極性の直鎖状免疫原（配列番号５７−６０）によるラットの免疫化実施例３の記載に従って、第５表に示すペプチド免疫原Ｎo.１８−２３（配列番号５１−５６）を合成した。ペプチド免疫原Ｎo.１８−２３についての式は、Ａ−Ｔh-ＧＧ−ＩgＥＣＨ４［式中、Ａは、Ｎ末端、Ｌys−Ｌys(２Ｋ)、Ｌys− Ｌys−Ｌys(３Ｋ)、またはスペーサーＧＧによってＴh配列と分離されたインベーシンドメイン（Inv）（配列番号２５）であり；Ｔhは、ＨＢ_sＴh、ＰＴ₁Ｔh、ＰＴ₂Ｔh、ＭＶ_F1Ｔh、またはＴＴ₃Ｔhからなる群から選択され；ＧＧは、Ｇly −Ｇlyスペーサーであり；ＩgＥＣＨ４は、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）である］で表される。ペプチドＮo.１８−２３と同一の方法で、第５表においてペプチドＮo.２４− ２７としても示される配列番号５７−６０のペプチド免疫原を合成した。これらのペプチドは、ＩgＥＣＨ４−ＧＧ−Ｔhと表される。これらのペプチドは、デカペプチド／Ｔh極性が逆転した、すなわち、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）がＮ末端にあり、ＴhがＣ末端に配置された以外は、ＩgＥＣＨ４デカペプチドに関してペプチドＮo.１９、２０、２１、２３(第５表)、スペーサーおよびＴh配列と等価である。これらのペプチド免疫原を用いて、効力の比較および証明のために、以下の実験プロトコールの記載に従って、ラットを免疫化した。実験計画：免疫原: ペプチドＮo.１８−２８（クループ当たり１）（配列番号５１−６０および６２）投与量: 免疫化当たり１００μg 経路: 筋肉内アジュバント: プチドＮo.１８−２７についてフロイント完全／不完全、ペプチドＮo.２８について０.４％ミョウバン投与計画: ペプチドＮo.８−２７について０週目(ＦＣＡ)、３および６週目(ＩＦＡ)、ペプチドＮo.２８について０、３および６週目ミョウバン採取計画: ０、３、６、８、１０週種: スプレーグ・ドーリー種ラットグループサイズ: ペプチドＮo.２７−２８について５、ペプチドＮo.２８について４アッセイ: 抗ペプチド活性についてのＥＬＩＳＡ、固相基質は、ペプチドＮo.３（配列番号１）血液を回収し、血清に処理し、貯蔵した後、トレーサーとしてヤギ抗モルモットＩgＧの代わりにホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ラットＩgＧ抗体を用いる以外は実施例２の記載に従って、ＥＬＩＳＡにより力価測定した。全ての血清を抗ペプチドＥＬＩＳＡによってアッセイし、１：１００希釈で＞０. ２のＡ_492nm値を与えたこれらの試料を血清陽性として記録した。ペプチド免疫原Ｎo.１８−２８（配列番号５１−６０および６２）の免疫効力を抗ペプチドＥＬＩＳＡによって評価し、実験的免疫化に応じて、６および８週目でＩgＥＣＨ４ペプチドＮo.３について血清陽性反応性（すなわち、１：１００希釈でＡ _492nm＞０.２）に転換した４または５の各グループにおけるラットの数として第６表に示す。極性Ｔh−ＧＧ−ＩgＥＣＨ４のこの実施例のペプチド免疫原（ペプチドＮo.１８−２３および２８、配列番号５１−５６および６２）は、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（ペプチドＮo.３、配列番号１）に対する抗体の誘導について有意な効力を示した。この極性のペプチド免疫原（ペプチドＮo.１８−２３、２８）で免疫化された６グループのラット全てが対照と比較して血清陽性への有意な転換を示した。グループについての血清転換罹患率は、６週目までに１／５から５／５に変化し、血清転換罹患率は、免疫原の第３投与に応じて、６週目および８週目の間に増加し続けた。ＨＢ_sＴhペプチド配列を含有するペプチド免疫原Ｎo.１８、ＭＶ_F1Ｔhペプチドを有するペプチド免疫原Ｎo.１９およびＰＴ₁Ｔhペプチド配列を含有するペプチドＮo.２８は、８週目までに、各々、４／５、５／５および４／４の血清転換罹患率を有する最も有効なものであった。ペプチド免疫原Ｎo. ２１および２２（配列番号５４、５５）の免疫原性の比較は、Ｉnvドメインペプチドが８週目までＰＴ₂Ｔh含有ペプチドの免疫刺激能について有意な改良を提供したことを示す(第６表)。対照的に、逆Ｔh極性を有する類似のペプチド免疫原（ペプチド免疫原Ｎo.２４−２７、配列番号５７−６０）は、ラットの血清転換について有意な免疫効力を示さない。この低い免疫効力は、Ｔh−ＧＧ−ＩgＥＣＨ４アミノからカルボキシル末端への極性が本発明の直鎖状ペプチド免疫原の免疫原性にとって決定的であることを示す。標的ペプチドおよびＴhの一の方向についての他の方向に優る効力の決定は、当業者に予想できなかったことであり、意外なことである。実施例６直鎖状免疫原のカクテルは、応答性個体群をさらに広げるＩgＥＣＨ４デカペプチドおよびＴhを含有する多くの異なる直鎖状構築物（実施例３〜５）の相対的な効力を確立することにより、カクテルワクチン組成物を製剤化するための有用なペプチド免疫原の選択が可能になる。麻疹ウイルスＦタンパク、破傷風毒素および百日咳毒素由来の免疫優性無差別（promiscuous ）Ｔhペプチトを有する個々のＴh−ＧＧ−ＩgＥＣＨ４構築物（ペプチトＮo.１９−２３）は、実施例５の研究によって、ＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）への抗体反応を誘発することにおいて有効であることが証明された。これらの直鎖状ペプチドの混合物を含有する組成物は、遺伝的に多様な個体群において望ましい最大免疫原性を提供し得る。好ましい「Ａ−Ｔh−ＧＧ−ＩgＥＣＨ４」極性を有する合成ペプチド、ペプチト免疫原Ｎo.１９、２０、２１、２３（第５表）およびペプチド免疫原Ｎo.４（第４表、実施例４）の混合物を含有するように製剤化されたかかる組成物の免疫効力を、実施例５に記載のプロトコールによってラットにおいて評価した。ラット５匹からなる１グループにおける各動物を５つのペプチドの等モル製剤の１００μg投与量、すなわち、各ペプチド２０μgで免疫化した。５週目および８週目までに血清陽性反応性に転換したラットの数は、両方の時間間隔で５のうち５（すなわち、１００％）であった。該結果は、本発明のペプチド免疫原のカクテルからなるワクチンが改良された免疫原性を提供することを示す。個々の有効なペプチドからなるカクテルなどのこの混合物についての効力は、遺伝的に多様なヒト個体群における免疫治療的抗体反応を誘発することも示す。実施例７有効な直鎖状免疫原のカクテルによる免疫化ＩgＥＣＨ４デカペプチドおよびＴhを含有する多くの異なる直鎖状構築物（実施例３〜５）の相対的な効力を確立することにより、免疫原のカクテルのために有用なペプチドの選択が可能になる。免疫原カクテルにおけるＧly−Ｇlyスペーサーならびに麻疹ウイルスＦタンパク、Ｂ型肝炎表面抗原、破傷風毒素および百日咳毒素由来の無差別Ｔhペプチドを有する個々の構築物は、有効であることが示される(第６表)。証明された効力を有する特定の極性を有するこれらの直鎖状ペプチド免疫原の混合物は、かくして、遺伝的に多様な個体群における最大免疫原性を提供し得る。以下のプロトコールは、好ましい「Ａ−Ｔh−ＧＧ− ＩgＥＣＨ４」構築物を含有する合成ペプチド免疫原の混合物として製剤化される本発明の組成物についての効力を示すように設計された。実験計画：免疫原: （１）カクテル１：ペプチドＮo.１８、１９、２０（２）カクテル２：ペプチトＮo.１８、１９、２２（３）陽性対照−ペプチド３のＫＬＨコンジュゲート（ラットのグループ当たり１つの免疫原）投与量: 免疫化当たりペプチド１００μgまたは３３.３μgと同等の各合成ペプチドまたはＩgＥＣＨ４等価物のモル等量経路: 筋肉内アジュバント: （１）フロイント完全／不完全（２）０.４％ミョウバン（水酸化アルミニウム）（グループ当たり免疫原当たりいずれか１つのアジュバント）投与計画: ０週目、２および４週目（ＣＦＡ／ＩＦＡグループには、０週目にＣＦＡを投与し、２および４週目にＩＦＡを投与する。ミョウバングループには、３回の投与全て、ミョウバン製剤を投与する）採取計画: ０、３、６および８週目種: スプレーグ・ドーリー種ラット／グループグループサイズ: ５、６グループアッセイ: 抗ペプチド活性についてのＥＬＩＳＡ、固相免疫吸着剤は、ペプチドＮo.３（配列番号１）である。血液を回収し、血清に処理し、貯蔵した後、実施例５の記載に従って、ＥＬＩＳＡにより力価測定した。この実験は、従来技術^(14,15)の公知の免疫原と比較して本発明の免疫原の改良された性能を示すように計画される。結果は、各々、３つのＴhペプチドを含有する有効なペプチド免疫原の２つの混合物の評価のために有用であり、免疫刺激性Ｉnvドメインの有用性（カクテル２は、Ｉnvを含有し、カクテル１は、含有しない）および本発明のワクチン組成物におけるアジュバントであるミョウバンの効力を示す。実施例８免疫原のカクテルを用いる臨床試験ＩgＥＣＨ４デカペプチドおよびＴhを含有する多くの異なる直鎖状構築物（実施例３〜５）の相対的な効力を確立することにより、免疫原のカクテルのための代表的なペプチドの選択が可能になる。免疫原カクテルにおけるＧly−Ｇlyスペーサーならびに麻疹ウイルスＦ、Ｂ型肝炎表面抗原、破傷風毒素および百日咳毒素由来のＴhペプチド配列を有する個々の構築物は、有効性を示すものであり( 第６表)、複数のヒトＨＬＡＤＲ抗原について無差別であり、その結果、遺伝的に多様なヒト個体群における最大免疫原性を提供する。さらにまた、これらのＴ hペプチドは、子供のワクチンから誘導されるので、幼少時のワクチン投与は、免疫化されたヒト個体群における有効なＴh記憶源である。かくして、子供のワクチンは、かかるＴhペプチドの混合物からなる抗アレルギーワクチンに対する増強した免疫効力を提供するための効力を有する。以下の臨床プロトコールは、広く許容されるアジュバントであるミョウバンにおけるかかる直鎖状「Ａ−Ｔh −スペーサー−ＩgＥＣＨ４デカペプチド」ペプチド免疫原の混合物として製剤化された本発明の組成物についての効力を示すように計画された。実験計画：対象: 枯草熱患者季節および期間: 枯草熱季節、８週間グループ: ４グループ、１グループ／免疫原／投与グループ当たりＮ＝１５、１２には、免疫原を投与し、３には、プラシーボを投与する。免疫原: カクテル１：ペプチドＮo.１８、１９、２０、２３アジュバント: ０．２％ミョウバン投与量: 投与当たりペプチド５００μgまたは１２５μgと同等の各合成ペプチドのモル等量経路: 筋肉内投与計画: ０週目、および４週目評価計画: ０、４および６週目血液を回収し、血清に処理し、貯蔵した後、実施例５の記載に従って、ＥＬＩＳＡにより力価測定した。皮膚反応試験、枯草熱薬の患者使用の速度、アレルギー症状および副作用についての患者の身体的試験、ならびに患者と面接して該生成物の使用の効果の主観的な評価を得ることによって、ワクチン組成物「カクテル１」の効力および安全性を血清学的に評価する。血清学的評価としては、抗ペプチド力価についての前記ＥＬＩＳＡ、ならびにヒスタミンレベルの低下を測定するためおよび該生成物がヒスタミン放出を誘発しないことを確認するための標準的な自動化分光蛍光測定アッセイが挙げられる。皮膚試験は、アレルゲンの標準溶液を皮膚の上層に注射する経皮試験である。アレルゲンに対する反応において生成された典型的な「膨疹および潮紅」の領域を測定することによって、アレルゲンに対する反応を定量化する。予想される結果は、研究の最後のアレルギー症状の有意な改善を含み、本発明のワクチン組成物によって誘発されたヒスタミン放出の証拠を含まない。この実験は、本発明の臨床効力を示すように計画される。結果は、医薬的に許容されるアジュバントであるミョウバンで製剤化された４つのＴhペプチド配列を含有する「Ａ−Ｔh−スペーサー−ＩgＥＣＨ４デカペプチド」免疫原の混合物の評価を提供する。実施例９ in vitroアッセイは、ＩgＥＣＨ４デカペプチド特異的抗体の効力を示すＩgＥＣＨ４デカペプチド免疫原による免疫化によって誘発された抗体のin v itro評価について、よく知られているヒスタミン放出アッセイにおいて受身感作されたヒト好塩基球を用いる。ボランティアの静脈血からヒト好塩基球を調製し、次いで、ＢＰＯ−ＨＳＡ特異的ＩgＥに対する過免疫グロブリン血（hyperimmunoglobulemic）ドナーの血液から調製するベンジルペニシロイル− ヒト血清アルブミンコンジュゲート（ＢＰＯ−ＨＳＡ）に対して特異的なＩgＥで受身感作する。感作された好塩基球によるヒスタミン放出は、ＢＰＯ−ＨＳＡまたはＩgＥＣＨ４ペプチドＮo.３（配列番号１）の投与によって行われる。ヒスタミン放出を誘発するための薬剤の添加前、好塩基球をＩgＥＣＨ４デカペプチド（配列番号１）に対する抗血清または前免疫対照血清の連続希釈と合わせる。自動化蛍光法によってヒスタミン放出について試料を分析する。自発的放出を両方から引いた後、試料の全好塩基ヒスタミン含量の割合から、ヒスタミン放出のパーセンテージを算出する⁽²⁷⁾。実験的抗血清のヒスタミン放出阻害能は、in vitro効力の性能である。このアッセイにより、濃度依存法におけるＩgＥＣＨ４ペプチドＮo.３（配列番号１）のヒスタミン放出誘発能を示した。第７表に示される結果は、ＩgＥＣＨ４ペプチドＮo.３（配列番号１）がヒト好塩基球によるヒト放出を誘発し、配列番号１および対応するヒトアレルギー反応についての抗体の関係を確認するために供された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＮ，ＪＰ，ＵＳ

Claims

【特許請求の範囲】１．式： (Ａ)_n−(Ｔh)_m−(Ｂ)_o−(ＩgＥＣＨ４ペプチド)_p ［式中、Ａは、アミノ酸、α−ＮＨ₂、脂肪酸またはその誘導体、またはインベーシンであり；Ｂは、アミノ酸であり；Ｔhは、ヘルパーＴ細胞エピトープ、その類似体またはセグメントであり；ＩgＥＣＨ４ペプチドは、配列番号１またはその免疫原性類似体であり；ｎは、１〜１０であり；ｍは、１〜４であり；ｏは、０〜１０であり；ｐは、１〜３である］で示されるペプチド免疫原。２．ｐが１である請求項１記載のペプチド免疫原。３．Ｔhが配列番号５〜１２、１４、２６〜３６、６１およびそれらの免疫原性類似体またはセグメントからなる群から選択される請求項１記載のペプチド免疫原。４．Ｔhが配列番号５〜１２、１４、２６〜３６、６１およびそれらの免疫原性類似体またはセグメントからなる群から選択される請求項２記載のペプチド免疫原。５．配列番号１３、１５〜２３、３７〜５０、５１〜５６および６２からなる群から選択される請求項１記載のペプチド免疫原。６．配列番号５１〜５６および６２からなる群から選択される請求項３記載のペプチド免疫原。７．Ａが脂肪酸である請求項１記載のペプチド免疫原。８．Ａが脂肪酸である請求項２記載のペプチド免疫原。９．Ａが脂肪酸誘導体である請求項１記載のペプチド免疫原。１０．Ａが脂肪酸誘導体である請求項２記載のペプチド免疫原。１１．脂肪酸誘導体がＰam₃Ｃysである請求項９記載のペプチド免疫原。１２．脂肪酸誘導体がＰam₃Ｃysである請求項１０記載のペプチド免疫原。１３．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項１記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。１４．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項２記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。１５．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項３記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。１６．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項４記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。１７．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項５記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。１８．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項６記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。１９．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項７記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。２０．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項８記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。２１．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項９記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。２２．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項１０記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。２３．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項１１記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。２４．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項１２記載のペプチド免疫原からなるワクチン組成物。２５．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項９記載のペプチド免疫原の混合物からなるワクチン組成物。２６．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項１０記載のペプチド免疫原の混合物からなるワクチン組成物。２７．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項１１記載のペプチド免疫原の混合物からなるワクチン組成物。２８．医薬的に許容されるデリバリー系中、有効量の請求項１２記載のペプチド免疫原の混合物からなるワクチン組成物。２９．請求項１３記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３０．請求項１４記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３１．請求項１５記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３２．請求項１６記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３３．請求項１７記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３４．請求項１８記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３５．請求項１９記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３６．請求項２０記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３７．請求項２１記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。３８．請求項２２記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方注。３９．請求項２３記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。４０．請求項２４記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。４１．請求項２５記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。４２．請求項２６記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。４３．請求項２７記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。４４．請求項２８記載のワクチン組成物の有効量を投与することによるアレルギー反応の治療方法。