JPH09510988A

JPH09510988A - 子宮頸の成熟を誘発するためのｍｃｐ−１の使用

Info

Publication number: JPH09510988A
Application number: JP7525504A
Authority: JP
Inventors: ウイリアムケニー，ロドニー
Original assignee: Medical Research Council
Current assignee: Medical Research Council
Priority date: 1994-03-31
Filing date: 1995-03-31
Publication date: 1997-11-04
Also published as: AU2080195A; DK0752883T3; ATE253933T1; ES2210287T3; EP0752883A1; CA2186370A1; AU703297B2; DE69532112D1; GB9406463D0; PT752883E; US5908829A; FI963915A0; NZ282876A; NO964076D0; RU2207873C2; FI963915L; NO964076L; DE69532112T2; FI963915A7; WO1995026748A1

Abstract

(57)【要約】単球走化性ペプチド-1あるいはその機能的誘導体は、例えば、(A)出産予定日を経て分娩を誘発すること、(B)異常妊娠において分娩を誘発すること、(C)子宮内胎児死亡において分娩を誘発すること、(D)中絶を誘発すること、(E)予定日前の分娩を誘発すること、(F)非妊娠あるいは妊娠雌性動物に子宮頸成熟を誘発して手術的もしくは診断的処置を補助すること、及び(G)in vitro受精による処置を受ける雌性動物に子宮頸成熟を誘発すること等のための、子宮頸の成熟を誘発することにおいて有用である。

Description

【発明の詳細な説明】子宮頸の成熟を誘発するためのMCP-1の使用発明の背景１．発明の分野本発明は子宮頸の成熟のための治療に関し、特に哺乳動物を補助して出産させるための分娩の誘発に関する。２．関連技術についての説明分娩（子宮からの胎児の娩出）においては、子宮の平滑筋である子宮筋層が収縮し、かつ子宮頸の高度な結合織が軟化し、十分に伸びて膨張することにより胎児が押し出されるようにならなければならない。この軟化は「成熟」として知られている。現在の子宮頸成熟の好まれている方法はプロスタグランジンE2の使用によるものである。これは膣用ゲルもしくは錠剤、あるいは子宮頸に施用されるゲルとして使用される。PGE₂を使用することの１つの懸念は、子宮を過剰に刺激し、子宮頸が成熟する前、従って苦痛のない安全な出産が可能となる前に子宮筋層の収縮を招く可能性があることである。理想的な薬剤は子宮筋層を収縮させることなく子宮頸を軟化させ抵抗をなくすものである。これによりその後に収縮を起こし（これは必要であればプロスタグランジンの少量の投与で誘発できる）、最小限の抵抗で赤ん坊を出産させることができる。動物実験から、RU486のような抗プロゲスチンがこの要請に答えることができるという十分な証拠が得られているが、この薬剤の問題点は抗糖コルチコイド活性を伴い、高いコルチゾール及びACTHレベルを生じ[X．Bertagna et al．J Clin Endocrinol Metab 78，375-380(1994)]、胎児にとっても致死的であり得ることである。子宮頸を成熟させる薬剤としてインターロイキン-8を使用することもこれまでに提案されている(WO 93/09796)。IL-8の生成はプロゲステロンにより抑制されることが知られている[R W Kelly et al，The Lancet，339，776-777(1992); R W Kelly et al．Human reproduction 9，253-258(1994)]。発明の概要今回驚くべきことに、絨毛脱落膜組織による単球走化性ペプチド-1(monocyte chemotactic peptide-1，MCP-1)の生産がプロゲステロンにより阻害されることが見出された。絨毛脱落膜組織は胎嚢の外側上にあるものであり、従って子宮頸領域において子宮と接触している。このことから、MCP-1及びその機能的な誘導体は子宮頸成熟のために使用できることになる。従って本発明は、単球走化性ペプチド-1(MCP-1)あるいはその機能的誘導体の、雌性哺乳動物の子宮頸の成熟を誘発するための薬剤の製造における使用を提供するものである。雌性哺乳動物はヒトまたは動物であることができる。典型的にはヒト女性である。即ち、MCP-1あるいはその機能的誘導体は哺乳動物の出産あるいは胎児除去を補助するのに使用することができる。 MCP-1あるいはその機能的誘導体は局所的な作用を開始させることができ、プロスタグランジンを使用した場合に伴うことがある過剰な子宮筋層の収縮を誘発することがない。従って、胎児を害することがない。出産の間、子宮頸は通常は外部からの補助なしに成熟する。しかし本発明の化合物は、通常の成熟、及び成熟が不十分な出産のあらゆる場合について補助となり得る。さらに、前記化合物により正常な成熟を補助し、女性が容易に出産できるようにできる。従って、出産、中絶、並びに手術及び診断処置中の痛みを軽減しあるいは回避させることができる。好ましい態様についての説明単球走化性及び活性化因子(MCAF)としても知られるMCP-1は、繊維芽細胞あるいは単球から得られる[T Yoshimura et al．FEBS Letters，244，487-493; T Yo shimura et al J Immunol 144，2377-2383(1990); M W Rolfe et al，Am J Phys iol 263 L536-L545(1992)]。MCP-1は、組換え体DNA合成により、あるいはIL-8合成の方法を改変した方法を使用するペプチド合成により得ることができる[I Cla rk-Lewis，Biochemistry，30 3128-3135(1991)]。MCP-1は、例えば培養物中のポリI/ポリC刺激繊維芽細胞のような生物学的ソースから得ることもできる。種々の炭水化物置換のために天然のMCP変異体が存在する。該ペプチドは末端シアル酸残基を有し、種々の分子量種を発生させるO-グリコシル化の程度を示す[T Yoshimura :Baggiolini M and Sorg，C "Interleukin-8(NAP-1)and related cy tokines" Karger，Basel，131-152(1992)]。 MCP-1の「機能的誘導体」も子宮頸の成熟を誘発できる。これは試験により判定することができる。「機能的誘導体」の用語は、MCP-1の「フラグメント」、「変異体」、「類縁体」、「化学的誘導体」あるいは「ポリマー形態」を意味するものである。「フラグメント」は、MCP-1を短くした形態である。フラグメントは、nを天然分子のアミノ酸残基の数とすると、典型的には6〜n-1残基を含む。従って、フラグメントは6〜50、例えば10〜40、あるいは15〜25残基からなる。「変異体」は、MCP-1あるいはそのフラグメントに実質的に類似した天然に存在する分子をいうものである。例としては、MCP-2及びMCP-3と指称される腫瘍誘導変異体がある[J van Damme et al．J Exp Med 176，59-65(1992)]。MCP-1の「類縁体」は、MCP-1あるいはそのフラグメントに実質的に類似した非天然分子である。２つの分子のアミノ酸配列が実質的に同じであり、両方の分子が同様な生物学的活性を有している場合に、ある分子が別の分子に「実質的に類似している」というものである。 MCP-1の「化学的誘導体」は、通常はその分子の部分ではない付加的な化学基を含むものである。そのような化学基は、分子の溶解度、吸収、生物学的半減期等を改善し得る。そのような基は、分子の毒性を減少させたり、あるいは分子の望ましくない副作用を除去あるいは緩和し得る場合もある。そのような効果を与える化学基の例は、Remington's Pharmaceutical Sciences(1980)に開示されており、当業者には明らかであろう。MCP-1のポリマー形態は、モノマー形態の繰り返し単位を含むものである。そのような形態は溶液中に存在すると考えられる。 MCP-1はβ-ケモカインあるいはC-Cケモカインである。任意のβ-ケモカインを本発明に使用することができる。従って、MCP-1以外のβ-ケモカインはMCP-1の機能的誘導体と見ることができる。典型的には、ヒトβ-ケモカインはヒト女性の治療に用いられる。動物のβ-ケモカインは、ヒト女性に適合性を有するならばヒト女性に使用することができる。これは試験により判定できる。本発明に使用できる好ましいβ-ケモカインは、ヒト MCP-1、ヒト MCP-2、ヒト MCP-3; ヒト RANTES; ヒト MIP-1α、ヒト MIP-1β; 及び I-309 である。これらのβ-ケモカインは、R．Callard and A．Gearing，"The Cytokine Fact s Book"，Academic Press，London，1994に詳述されている。それらのアミノ酸配列は下記表１に記載する。β-ケモカインは全て単球に対して走化性を有する。MCP-1、MCP-2、MCP-3、RANTES、MIP-1α、MIP-1β及びI-309のin vitroでの生物学的機能は下記表２に示す。I-309はネズミTCA-3遺伝子のヒト相同体である[S .D．Wilson et al．J.Immunol 145，2745-2744(1990); M.D．Miller et al.J.Im munol 143，2907-2916(1989); P.R．Burd et al．J．Immunol 139，3126-3131(1 987)]。 β-ケモカインのフラグメントを本発明に使用できる。そのようなフラグメントは、子宮頸の成熟を誘発するようなものでなければならない。これは試験することにより判定できる。適当なフラグメントは、nをβ-ケモカインのアミノ酸残基数とした場合、6〜n-1のアミノ酸残基を含む。従って、フラグメントは6〜50 、例えば10〜40、あるいは15〜25残基からなり得る。子宮頸の成熟を誘発し得るβ-ケモカイン類縁体も本発明に使用し得る。類縁体の子宮頸の成熟を誘発する能力は試験により判定することができる。β-ケモカインのアミノ酸配列、例えば表１に記載したアミノ酸配列の１つ、あるいはβ -ケモカインのフラグメントのアミノ酸配列を改変することにより類縁体を得ることができる。 β-ケモカインあるいはそのフラグメントのアミノ酸配列は１以上のアミノ酸の置換及び／または挿入及び／または各末端のいずれかにおける延長により改変することができる。典型的には、非改変β-ケモカインあるいはβ-ケモカインフラグメントのアミノ酸配列と、その類縁体のアミノ酸配列との間には75%以上の相同性の程度が存在するものとする。相同性の程度は85%以上、あるいは95%以上であってもよい。 β-ケモカインあるいはβ-ケモカインフラグメントの天然の配列に保存アミノ酸置換を導入することができる。15まで、例えば1〜10、あるいは2〜6のそのような置換を導入することができる。１、２、３、４あるいは５の保存置換を導入することができる。可能な保存置換を下記表３に示す。表３で使用する記号、略号は、IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature，"Nomenclature and Symbolis m for Amino Acids and Peptides，Recommendations 1983" J．Biol．Chem．260 14-42(1985)により推奨されているものである。その他の使用した略号は以下の通りである。 Nle:ノルロイシン Aib:アミノイソ酪酸 AdaA: β-アダマンチルアラニン AdaG: α-アダマンチルグリシンホモ-Arg: L-ホモアルギニン D-ホモ-Arg: D-ホモアルギニン Acp:アミノカプロン酸 Chg:L-α-シクロヘキシルグリシン allo-Thr: L-アロスレオニン Cha:β-シクロヘキシルアラニン Orn:オルニチンピロ-Glu: ピログルタミル Met(O)及びD-Met(O):それぞれL-及びD-メチオニンから誘導されたスルホキシド β-Ala: β-アラニン Acm:アセタミドメチル L-ドーパ: 3-(3,4-ジヒドロキシフェニル)-L-アラニン Bpa:4-ベンゾイル-フェニルアラニンもとの配列の物理化学的特性、即ち、電荷密度、疎水性/親水性、サイズ、コンフィギュレーションを保存することができる。即ち、天然のβ-ケモカインあるいはβ-ケモカインフラグメントに実質的に類似した分子を製造することができる。例えば、単球に対する走化性等の類似性は試験により確認することができる。上記の個々の好ましいβ-ケモカインの類縁体の場合は、表２に示したin vi tro生物学的機能についてそのような類縁体を試験することができる。類縁体は、β-ケモカインまたはβ-ケモカインフラグメントのアミノ酸配列中に例えば、10アミノ酸残基まで、例えば1〜5残基を挿入することによっても得られる。類縁体は、β-ケモカインまたはβ-ケモカインフラグメントのC-末端あるいはN-末端に延長を与えることにより誘導され得る。そのような延長は10アミノ酸残基長まで、例えば1〜5残基長とすることができる。挿入及び／または延長部分としての付加のための残基は、得られる類縁体が、β-ケモカインあるいは適当な場合にはそれが誘導されたβ-ケモカインフラグメントと実質的に同様の活性を有するように選択する。本発明は、子宮頸の成熟を必要とする雌性哺乳動物において子宮頸の成熟を誘発する方法も提供するものであり、該方法は有効量のMCP-1あるいはその機能的誘導体を雌性哺乳動物に投与することを含む。本発明は、子宮頸の成熟を必要とするヒト、及びヒトのものと同様の基本的分娩機構を有する任意の哺乳動物に適用される。投与は、それが子宮頸に到達するような、任意の直接的あるいは間接的方法により行うことができる。従って、活性化合物は膣内に、あるいは子宮頸に直接、例えば典型的にはゲルあるいはクリームとして適用するのが便利である。子宮頸に注入することもできる。羊膜外、即ち子宮壁及び羊膜嚢の間に、カテーテルを用いて適用することもできる。 MCP-1あるいはその機能的誘導体の安全で有効な量を投与する。投与量は、患者、投与形態、目的等の種々のファクターに依存する。投与量は通常、子宮頸あたり0.001〜20 mg、例えば0.01〜20 mgである。全量を一度に投与してもよく、分割投与してもよく、徐放剤により行ってもよい。適用時期は、MCP-1あるいはその機能的誘導体を投与する目的等の種々のファクターに依存する。出産において投与する場合には、時期は分娩期間に依存する。出産の場合には、子宮筋層の収縮が開始されるか、開始しそうになる前に子宮頸が成熟するようにすることが望ましい。 MCP-1あるいはその機能的誘導体は出産あるいは中絶において使用できる。妊娠の場合には、子宮頸を予備処置する。妊娠期間中のホルモンにより子宮頸は他の刺激剤に有効に反応しやすくなるように変わる。MCP-1あるいはその機能的誘導体は手術及び診断過程においても使用することができる。従って、前記化合物は下記のような適応症に使用できる。 (A)出産予定日を経た分娩の誘発（通常の出産時に、任意にオキシトシンあるいは類似の薬剤による連続的な治療と組み合わせる） (B)異常妊娠（例えば胎児奇形）における分娩の誘発（第２のトリメスター(seco nd trimester)における好ましい中絶） (C)子宮内胎児死亡における分娩の誘発 (D)中絶の誘発（第２のトリメスターにおける好ましい中絶） (E)出産予定日前の分娩の誘発 (F)手術あるいは診断法を補助するための非妊娠雌性個体あるいは妊娠雌性個体の子宮頸の成熟の誘発 (G)in vitro受精により処置される雌性個体の子宮頸成熟の誘発 MCP-1あるいはその機能的誘導体は、自然な分娩あるいは手術的に補助された分娩のいずれを補助するのにも使用することができる。MCP-1あるいはその機能的誘導体はさらに、例えば中絶における、自然なあるいは手術的に補助された方法のいずれでもよい、望ましくない胎児の除去にも有用である。さらにMCP-1あるいはその機能的誘導体は、子宮頸を軟化させ、補助受胎法や内視鏡検査のようなその他の操作を容易にするために使用することもできる。子宮頸が軟化すると、上記のようなものやその他の方法を麻酔なしに行うことが可能であり得る。 MCP-1あるいはその機能的誘導体は典型的には、医薬上許容できる担体あるいは希釈剤をさらに含む医薬組成物として配合される。一定の組成物、特にMCP-1 あるいはその機能的誘導体及びゲル形成あるいはクリーム形成ビヒクルをそれそれ含むゲルあるいはクリーム配合物が本発明に包含される。このようなゲル及びクリームは任意の適当な水性、油性物質をビヒクルとして含む。あるいは、MCP- 1あるいはその機能的誘導体は、軟化性カプセル、リポソーム、座薬、徐放性もしくは遅延放出性配合物、あるいは水性溶液、例えば生理食塩水もしくはタンパク質含有溶液として配合することもできる。ゲルは通常は、架橋ポリエチレングリコール、架橋澱粉あるいはポリビニルピロリドンのような親水性ポリマーからなるものである。ゲルは注入可能なゲルとすることができる。カプセルは体温で軟化し得るポリマー、例えばゼラチン、あるいは体液中でゆっくりと溶解するポリマーからなるものとすることができる。多くの種類の徐放性組成物が知られており、例えばマトリックス型のもの（例えば米国特許3,851,648号参照）、膜型のもの等がある。 MCP-1あるいはその機能的誘導体は、子宮筋層の収縮を誘発する物質、例えばプロスタグランジンE₂のようなプロスタグランジン、あるいは子宮収縮効果を有する化合物とともに投与することができる。そのような併用投与は、出産あるいは中絶に関して使用することができる。子宮収縮効果を有する化合物は、EP-A-O 214 924及びEP-A-O 184 471に記載されている。好ましい子宮収縮効果を有する化合物はオキシトシンである。本発明はさらに、 - 雌性哺乳動物における子宮頸成熟のための医薬の製造のための、(i)子宮筋層収縮を誘発する物質と(ii)MCP-1あるいはその機能的誘導体との組み合わせ、 - 雌性哺乳動物における子宮頸成熟のために同時に、または別々に、または連続的に使用するための組み合わせた調製物としての、(i)子宮筋層収縮を誘発する物質と(ii)MCP-1あるいはその機能的誘導体とを含む製品、及び - 雌性哺乳動物における子宮頸成熟のために同時に、または別々に、または連続的に使用するための組み合わせた調製物としての、(i)子宮収縮効果を有する化合物と(ii)MCP-1あるいはその機能的誘導体とを含む製品が提供される。一方の子宮筋層収縮を誘発する物質あるいは子宮収縮効果を有する化合物と、もう一方のMCP-1あるいはその機能的誘導体は、異なる経路（例えばゲルと注射）により、異なる時点（例えば最初にMCP-1あるいはその機能的誘導体、６〜48 時間後にオキシトシン）で投与することができる。一方の子宮筋層収縮を誘発する物質あるいは子宮収縮効果を有する化合物と、もう一方のMCP-1あるいはその機能的誘導体は、キット中の別々に包装されたものとして提供することができる。さらに本発明は、(1)MCP-1あるいはその機能的誘導体、(2)例えばプロスタグランジンE₂のようなプロスタグランジン等の子宮筋層収縮を誘発する物質、及び(3)薬剤上許容される希釈剤あるいは担体を含む医薬組成物も提供する。このような組成物は上記した、あるいは以下に記載するような形態のいずれの形態にあってもよい。組成物はWO 93/07976に記載されたような形態の任意の形態においてIL-8も含んでもよい。以下の実施例は本発明を具体的に示すものである。実施例１子宮内膜組織子宮内膜は、患者のインフォームドコンセントのもと、非悪性原因による腹式子宮全摘術により得た。組織の小片(約2 mm x 2 mm x 1 mm)を液体/空気界面でマットした殺菌ポリプロピレン毛細管上に置いた。使用した培地は、10%胎児ウシ血清(Gibco)ペニシリン(50 μg/ml)及びストレプトマイシン(50 単位/ml)及びゲンタマイシン5 μg/mlを含むRPMI 1640(Hyclone)であった。組織を空気中5% C O₂雰囲気における培養物中におき、30分以内に回収した。各処置につき６つの複製のウェルを使用した。組織タンパク質レベルは、水酸化ナトリウム中での消化とその後の比色分析により測定した。絨毛脱落膜細胞脱落膜の付着した胎膜を、出産予定日を経た選択的帝王切開から得た。胎盤にかぶさる膜の部分は使用しなかった。絨毛膜を羊膜から分離し、3〜4 mmの破片に切断し、トリプシン、0.5%(w/v)及びDNAアーゼ 20 mg/lを含むRPMIの300 mlを入れた消化用フラスコ中に入れた。組織を40分間消化し、0.16 mmメッシュナイロンフィルターを通して濾過した。全細胞の生存率（トリパンブルー排除）は90 %を越えていた。細胞をウェルあたり200,000細胞で1.7 cmの直径のウェルに塗布し、空気中5% CO₂の雰囲気でインキュベートした。各処置につき６つの複製のウェルを使用した。培養の７日後からステロイド処置を開始した。示したデータはホルボールエステル（ホルボールミリストイルアセテート）処置の後24〜72 時間の間に回収した培地から得た。プロゲステロン及びメドロキシプロゲステロンアセテート(MPA; 6a-メチル-17 a-アセトキシプレグン-4-エン-3,20-ジオン)はSigmaから入手した。ステロイドストックはエタノール中で2 mg/mlで保存し、完全培地で希釈して10倍濃度溶液を得た。この実験用溶液の10%をインキュベーションウェル中に加えた。エタノールの最終濃度は0.02%であり、この濃度のエタノールを対照ウェルに加えた。ステロイドはウェル中10^-6Mで使用した。 MCP-1アッセイウェル中で生成されたMCP-1は特別なラジオイムノアッセイにより測定した。M CP-1に対する抗血清（ヤギ）はR&D Systems，Oxfordから購入し、約1:12500の希釈度で使用した。ヒト組換え体MCP-1，R&D Systems，Oxfordのヨウ素化（クロラミン-T）により標識を調製し、その後カルボキシメチルシリカカラムでのクロマトグラフィーを行った。種々の重量の全組織を使用した子宮内膜組織については、結果は溶液のmlあたりのmg組織あたりのMCP-1のngで表した。結果を以下に示す。結果は同じ組織についてのみ比較可能であり、MCP-1が子宮内膜（子宮内部の粘膜）及び絨毛脱落膜組織で生成されたことを示している。生成は妊娠を維持するホルモンであるプロゲステロンにより阻害された。絨毛脱落膜組織が子宮頸に接近していることは、MCP-1が子宮頸に利用され得ることを意味する。先に説明したように、この情報からMCP-1が子宮頸成熟に有用であり、従ってそのような成熟はMCP-1を子宮頸の領域に投与することにより誘発し促進することができることは十分に推測できる。実施例２ 24羽の雌性ウサギを同数の４つの群に分けた。各群は６羽のウサギからなり、３羽は妊娠しておらず３羽は妊娠していた。全ての動物を偽薬（対照）または10 0 ngのMCP-1を含む膣座薬により処置した。MCP-1はポリI/ポリCにより刺激したヒト繊維芽細胞から調製し、精製した。MCP-1はToray Industries Inc．Kamakur a，Japanから入手したもので、0.1〜1 ng/mlでマクロファージに対する走化性活性を有し、1 ng/mlでTHP-1細胞においてカルシウム流出を誘発する。各ウサギに１、２あるいは３日間毎日１つの座薬を与えた。最後の投与の24時間後に動物を屠殺した。切開した子宮頸のコンシステンシーと、ヘーガル頸管拡張器を使用して拡張とについて調べた。組織学的切片を調製し、ヘマトキシリン及びエオシン(H&E)により染色し、病理学的変化を調べた。抗ウサギRT-2モノクローナル抗体(Cedarlane Laboratorie s Limited，Canada)を使用して、ウサギ白血球に見られる表面抗原RT-2についての免疫組織学的染色を行った。各生検標本の結合織の５つの任意の視野における全白血球数をカウントした（倍率x 20）。相対的コラーゲン濃度を、ピクロシリウスレッド(Sirius red F3BA Chroma-Ge sellschaft Schmid Gmbh，Germany)による染色で調べ、子宮頸のものを含む組織の重合コラーゲン濃度測定の組織学的方法として有効であることが確認された。各生検標本の結合織の５つの任意の視野から光学密度(%偏光透過度)を測定することにより組織学的分析を行い、平均光学密度を計算した。全ての組織学的測定にイメージアナライザー（顕微鏡:Olympus IMT-2、ビデオカメラ:SIT C2400-8 0及びARGUS-100 Hamamatsu photonicsを有するコンピュータアナライザーシステム）を使用した。ピクロシリウスレッド染色においては、コラーゲン濃度が高くなるほど複屈折が大きくなり、従って光透過のパーセンテージが大きくなった。各子宮頸において、100 mgの結合織を切断し、リン酸緩衝生理食塩水とともに均質化し、遠心分離した。上清液体を回収し、使用するまで-80℃で保存した。高度に特異的なキット(Collagenase type I activity measurement，Yagai，Jap an)を使用してこれらの子宮頸液体のコラゲナーゼ活性を測定した。一方、顆粒球エラスターゼS-2484の特異的発色基質(L-ピログルタミル-L-プロリル-1-バリン-P-ニトラニリド、KABI Diagnostic，Sweden)によりエラスターゼ活性を測定した。エラスターゼレベルは表３に示したが、好中球酵素の放出を反映している。 MCP-1で処置した子宮頸において軟化及び膨張が観察された。MCP-1の効果は時間とともに増加した。組織学的切片を調べたところ、MCP-1の適用後に顕著なコラーゲン含量の減少が見られた。コラーゲン管束はゆるくなり、固有マトリックスにより広範に分離された。同時に血管が拡張し、白血球が増加した。また白血球が血管周囲及び腺上皮下の結合織に分布した。結合織に侵入する白血球の数の有意な増加が観察された。光学密度の測定により、MCP-1により処置された子宮頸組織において相対的なコラーゲン含量が有意に減少したことが判った（表６）。試験した非妊娠及び妊娠子宮頸では対照群と比較してコラゲナーゼ活性が有意に増加していた。MCP-1 処置群の子宮頸液のエラスターゼ活性（好中球酵素放出の尺度）は対照群と比較して増加していた（表６）。実施例３水溶液中の単球走化性ペプチド-1(0.5 mg)を0.1 gの架橋澱粉に加え、ポリマーに溶液を吸着させる。次いでこの調製物を凍結乾燥し乾燥状態で保存する。医師による投与の際には生理食塩水をポリマーに加えて注入での投与に必要なコンシステンシーのゲルを得る。その後ゲルをシリンジにより子宮頸内に注入する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．雌性哺乳動物の子宮頸の成熟を誘発するための薬剤の製造における、単球走化性ペプチド-1(MCP-1)あるいはその機能的誘導体の使用。２．ヒト出産または中絶に関しての請求項１に記載の使用。３．MCP-1あるいはその他のβ-ケモカインを使用する請求項１または２に記載の使用。４．MCP-1あるいはその機能的誘導体を子宮筋層収縮を誘発する物質あるいは子宮収縮効果を有する化合物とともに投与する請求項１〜３のいずれかに記載の使用。５．MCP-1あるいはその機能的誘導体及びゲル形成またはクリーム形成ビヒクルを含むゲルまたはクリーム。６．(1)MCP-1あるいはその機能的誘導体、(2)子宮筋層収縮を誘発する物質、及び(3)薬剤上許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物。７．物質(2)がプロスタグランジン-Eである請求項６に記載の組成物。８．ゲル、クリームマイクロカプセル、徐放性もしくは遅延放出性配合物、または滅菌注射溶液もしくは懸濁物の形態の請求項６または７に記載の組成物。９．MCP-1あるいはその機能的誘導体を含む子宮頸成熟剤。 10．有効量のMCP-1あるいはその機能的誘導体を雌性哺乳動物に投与することを含む、子宮頸の成熟を必要とする雌性哺乳動物においてその子宮頸の成熟を誘発する方法。