JPH09511989A

JPH09511989A - タイプ１インターフェロンを用いた自己免疫疾患の治療法

Info

Publication number: JPH09511989A
Application number: JP7526504A
Authority: JP
Inventors: ブロード，ステイリイ，アームストロング
Original assignee: Research Development Foundation
Current assignee: Research Development Foundation
Priority date: 1994-04-12
Filing date: 1995-04-11
Publication date: 1997-12-02
Also published as: WO1995027502A1; ATE271879T1; DE69533311T2; KR100424212B1; DE69533311D1; DK0752884T3; KR970702063A; EP0752884B1; ES2224124T3; AU695260B2; IL113280A; EP0752884A4; SA95160081B1; EP0752884A1; CA2187550A1; IL113280A0; AU2283995A; NZ284276A

Abstract

(57)【要約】本発明は該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含む動物の自己免疫性疾患を処置するための方法を提供する。また、該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含む動物の自己免疫性疾患に関連した炎症を軽減する方法も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称タイプ１インターフェロンを用いた自己免疫疾患の治療法発明の背景発明の背景本発明は一般的には神経学、免疫学、および蛋白質化学に関するものである。より具体的には、本発明はタイプ１インターフェロンを用いて自己免疫疾患を処置するための新しい方法に関するものである。関連説明の説明急性実験的自己免疫脳脊髄炎［ＥＡＥ］はヒトの疾病である多発性硬化症に類似した中枢神経系のＴ細胞に仲介された炎症性自己免疫プロセスである。病理的にも臨床的な表現でもヒトの多発性硬化症［ＭＳ］と類似した中枢神経系の慢性的炎症性自己免疫プロセスであるＣＲ−ＥＡＥはヒトの自己免疫疾患のコースを変える干渉の効果を評価するためのモデルを提供してくれる。ミエリン塩基性蛋白質［ＭＢＰ］はこの疾患の病原における重要な神経抗原である。ＳＪＬ/ＪマウスでのＣＲ−ＥＡＥはＭＢＰペプチド89−100固有Ｔ細胞系を静脈注射して、その後アドプティブ（adoptively）に移送させることができる。ＭＢＰペプチド 91−103固有Ｔ細胞を化学的に架橋させたペプチドとの共培養はＴ細胞をＳＪＬ/ Ｊマウス内のＣＲ−ＥＡＥに耐えられるようにする。非経口的に、例えば天然のラット・インターフェロン[10⁵ ユニット]のIV投与は、免疫源接種と同じ日に投与された場合、雄ルイス・ウイルスにおける急性ＥＡＥを部分的に抑制すると同時に、受動的過急性局所化ＥＡＥを抑止した。ＴＧＦ−βなどのサイトカインを非経口的に投与した他の例でもＥＡＥにおける脳および脊髄における臨床的な疾患や炎症を減らすことができる。経口的に投与されたヒトＩＦＮ−αは動物におけるウイルスおよび寄生虫による感染を防ぐことができる。急性ＥＡＥは経口的に投与された免疫活性物質の自己免疫疾患のコースに影響を及ぼす証明するためのモデルを提供する。ヒトＩＦＮ−αは動物におけるウイルス性疾患の処置において低い容量で経口的に投与することができる免疫活性蛋白質である。他のタイプ１インテーフェロンであるヒトＩＦＮ−βはイン・ビトロで進行性ＭＳにおける抑制細胞機能を強化し、ラットＩＦＮ−βはラットのＥＡＥにおける症状の重篤性を緩和する。タイプ１インターフェロンの免疫規制および抗ウイルス性特性を考慮して、その応答および生産に関するアセスメントが自己免疫性疾患において行われている。不活性リューマチ性関節炎を補強［２′−５′］オリゴアデニレート・シンセターゼ［ＯＡＳ］でマークし、ＩＦＮ−α/βで刺激を与えた後の末梢血液白血球においてタイプ１インターフェロン活性の評価を行ったところ、活性リューマチ性間接では通常のドナーと比較して、ＩＦＮ−α／βがかなり減少した。乾癬およびアトピー性皮膚炎などの他の自己免疫疾患もインターフェロン生産の低下を示した。ＭＳ患者の末梢血液白血球もその疾患の重篤性に比例するウイルスまたはミトゲン性刺激に対応してのタイプ１インターフェロンの生産において同様の非効率性を示す。天然キラー［ＮＫ］細胞活性はＭＳにおいては不十分であり、これは疾病の重篤性と関連していて、ＩＦＮ −αによる処置で正常化することができる。自己免疫性疾患におけるタイプ１インターフェロンの生産およびそれに対する応答における異常性の報告はＭＳにおける治療剤としてのタイプ１インターフェロンを用いたいくつかのにパイロット的研究を促した。これらの研究においては 100万単位以上の投与量で毎日タイプ１インターフェロンが系統的に投与されたが、明確な治療効果はもたらされなかった。回帰弛張性ＭＳにおける非経口的に投与されたＩＦＮ−βに関する研究結果は、160〜800万単位のＩＦＮ−β皮下注射を１週間に三度投与すると、病気のぶり返しが40〜50％程度減少し、シリアルＭＲＩで評価した場合の脳の炎症を減少させることを示している。先行技術は、タイプ１インターフェロンなどのサイトカインの経口的投与による自己免疫性疾患を処置するための効果的手段を欠いている点で不十分である。本発明はこうした長年の必要性および期待に応えるものである。発明の要約本発明の目的は、タイプ１インターフェロンの経口投与がマウスＣＲ−ＥＡＥにおいて、感作化された抗原の増殖を抑止し、疾患のぶり返しの臨床的表現を抑制し、そしてサイトカインの変性による炎症を低下させることを示すものである。本発明の別の目的は、急性ＥＡＥにおいてＧＰ−ＭＢＰによる免疫化の前と後に経口投与されたタイプ１インターフェロンの効果を示すことである。本発明の別の目的は、タイプ１インターフェロンなど生物学的反応修正子の経口投与によって自己免疫性疾患の発作の臨床的表現を抑制し、病理的続発症を減らし、そしてそうした病気における炎症性サイトカインを抑止することである。本発明のさらに別の目的は、急性炎症性髄鞘脱落神経根神経病またはギラン− バレ症候群のイン・ビボ・モデルである実験的アレルギー性神経炎における臨床結果、病歴およびＩＦＮ−γ分泌に対するラットＩＦＮ−α/βの経口投与の影響を示すことである。本発明の１つの実施の態様において、該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含む、動物における自己免疫性疾患を処置する方法が提供される。本発明の別の実施態様において、該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含む、ヒトにおける多発性硬化症の重篤性およびぶり返しの頻度を低下させる方法が提供される。本発明のさらに別の実施態様においては、該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含んだ、動物における自己免疫性疾患と関連した炎症を減少させる方法が提供される。本発明のさらに別の実施態様においては、該動物にタイプ１インターフェロンを毛とするステップを含む、自己免疫性疾患の発現を抑止する方法が提供される。本発明の現段階におけるその他の、そしてさらなる側面、特徴、および利点は開示のためにのみ提供される以下の説明でさらに明らかになるであろう。図面の簡単な説明上に述べた、および以下に明らかになるような本発明の特徴、利点、および目的をさらに詳細に理解できるように、上に略述した本発明のより詳細な説明を、添付図面に示すそのいくつかの実施の態様を参照して、以下に述べる。これらの図面は明細書の一部を構成する。しかしながら、添付図面は好ましい実施の態様を示すものであり、したがって、本発明の範囲を限定するものではない。図１は、経口投与されたマウスの天然ＩＦＮ−α/βがマウスのＣＲ−ＥＡＥにおける病気のぶり返しを抑制することを示している。６匹の動物の２つのグループに接種し、最初の発作の後、偽ＩＦＮおよび100単位のマウス天然ＩＦＮ− α/βを１週間の３回、７週間にわたって与えた。２つの代表的な実験の１つの例が示されている。ＳＥＭは10％未満である。図２は、5,000単位のラットＩＦＮ−α/βの経口投与が急性ＥＡＥにおける臨床的疾患を抑制することを示している。各６匹のラットで構成される４グループに偽ＩＦＮ、1,000,3,000または5,000単位のラットＩＦＮ− α/βを免疫化［−７］に先立って７日間、およびその後21日間［＋14］与えた。その結果を、病後接種±ＳＥＭの各グループの毎日の平均的な臨床スコアで示す。２つの臨床的な実験の１つを示す。1,000および3,000単位に関するデータは示していない。＊ｐは偽および5,000単位のＩＦＮ−α/βを与えた動物間で0.02 未満。図３はラット急性ＥＡＥにおけｈｒｒＩＦＮ−αａの経口投与がその病気の発現を遅らせ、その重篤性を低下させ、そして臨床的効果の回復を促進することを示している。各６匹のルイス・ラットで構成される３グループに日０にＭＢＰおよびＣＦＡを接種し、免疫化より７日前［−７］から始めてその14日後［＋14］までｈｒＩＦＮ−αａを毎日ＰＢＳ、1,000単位または5,000単位経口投与した。値は７匹構成の各グループのアレルギー性神経炎に関する臨床スコア±ＳＥＭを示している。２つの代表的な実験のうちの１つを示す。図４はラット急性ＥＡＥにおけるｈｒＩＦＮ−αａの経口投与が実験的アレルギー性神経炎の急性臨床的発作の累積重篤性を低下させることを示している。各７匹のルイス・ラットで構成される３つのグループを図３に示す。値は７匹構成の各グループの接種後10日目から16日目までの実験的アレルギー性神経炎における累積臨床スコアを示している。＊ｐは 5,000単位ＩＦＮ−αと1,000単位ＩＦＮ−αおよびＰＢＳコントロールとの両方の間で0.001未満。図５は5,000単位のｈｒＩＦＮ−αａ経口投与が、コントロールおよび1,000インターフェロン・グループと比較して脊髄での炎症性病巣の数を減少させることを示している。実験動物を致死させた後、図３に示す動物から脊髄を取り出して方法のところで述べたように処理した。その結果は１脊髄あたりの炎症性病巣数 ±ＳＥＭで示してある。２つの代表的な実験例の１つを示す。＊ｐは5,000単位のＩＦＮを与えたグループと1,000単位ＩＦＮを与えたグループまたはＰＢＳコントロール・グループとの間で0.04未満。図６は、5,000単位のｈｒＩＦＮ−αａの経口投与、および皮下注射以外の投与が臨床的発作の重篤性を軽減することを示している。各６匹のルイス・ラットで構成される３つのグループに日０にＭＢＰおよびＣＦＡを接種して、１つのグループには処置を行わず、別のグループには、免疫化に先立つ７日目［−７］からその後21日目［＋14］までの5,000単位のｈｒＩＦＮ−αａを毎日餌と一緒に与え、あるいは注射した。値は６匹構成の各グループの実験的アレルギー性神経炎の毎日の臨床スコア±ＳＥＭを示している。２つの代表的な実験例の１つを示している。図７はラットの急性ＥＡＥにおけるｈｒＩＦＮ−αの経口投与が実験的アレルギー性神経炎の急性臨床的発作の累積臨床重篤性を減少させることを示している。各６匹のルイス・ラットで構成される３つのグループを図６に示すように処置した。値は６匹構成の各グループに関する病後接種の10日目から16日目までの実験的アレルギー性神経炎の累積臨床スコアを示している。＊ｐは餌を通じて与えたグループと未処置／皮下注射グループ間で0.005未満。図８は、5,000単位のｈｒＩＦＮ−αａの経口投与がコントロール・グループと比較して、脊髄における炎症性病巣の数を低下させることを示している。致死させた後、図６に示す動物から脊髄を取り出して、上に述べた方法で処置し、処置状態に関する知識をもたない１人のオブザーバーが炎症の病巣を独自に評価した。結果を１脊髄あたりの炎症性病巣の数±ＳＥＭで示す。代表的な２つの実験のうちの１つを示す。＊ｐは5,000単位のＩＦＮを与えたグループと5,000単位を注射したグループとの間で0.04未満。図９Ａおよび９Ｂは、実験的アレルギー性神経炎を有するラットにおいて、インターフェロン−α/αを経口投与すると臨床的な疾患が減少することを示している。ルイス・ラットに5,000単位のＩＦＮ−α/β（インターフェロン）か偽ＩＦＮを仔ウシ末梢神経ミエリンで免疫化させるより７日前から与えた。偽ＩＦＮを与えたラットにおいては（ｎ＝11）ＩＦＮ−α/βを与えたラット（ｎ＝11）と比較して臨床スコアがはるかに高かった。偽ＩＦＮを与えたグループの方がＩＦＮ−α/βを与えたグループより多くのラットが４以上の臨床スコアに到達し（偽ＩＦＮグループでは11匹中７匹であるのに対して、ＩＦＮ−α/βを与えたグループでは11匹中４匹）（図９Ａ）、その体重の25％以上を失った（偽ＩＦＮグループでは11匹中４匹、ＩＦＮ−α/ βグループ中では11匹中２匹）（図９Ｂ）。図10は、実験的アレルギー性神経炎において、ラットＩＦＮ−α/βの経口投与が炎症およびＩＦＮ−γ生産を減少させることを示している。ルイス・ラットに対して5,000単位のＩＦＮ−α/βまたは偽ＩＦＮを仔ウシ末梢神経ミエリンによる免疫化７日前から致死するまで与えた。臨床的疾患の発現時に免疫化してから13日目にＥＤ１抗体（１：1,000）およびＩＦＮ−γ抗体（１：10）を用いた腰部仙骨神経根の免疫細胞化学の検査結果は、偽ＩＦＮを与えたラットと比較してＩＦＮ−α/βを与えたラットではＥＤ１陽性マクロファージが少ないことを示した（図10Ａ，２Ｂ）。ＥＤ１陽性マクロファージの減少と付随して、ＩＦＮ −α/βを与えたラットにおいては偽ＩＦＮを与えたラットと比較してＩＦＮ− γの表現における低下も認められた・（図10Ｃ）。（図10Ｆ）バー＝20ミクロン。本発明の詳細な説明本発明において、ＥＡＥにおいて経口投与されたサイトカインによって誘発される病気の規制および炎症性サイトカイン生産の抑止は、ヒトにおける未知の抗原による自己免疫性疾患、特に多発性硬化症を治療するための簡便で効果的、かつ長期にわたって有効な手段を提供してくれる。本発明は、動物における自己免疫性疾患を処置するための方法に関するものであり、該動物に対するタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含んでいる。タイプ１インターフェロンはいずれの適切な供給源からでも手に入れることができる。好ましくは、このインターフェロンはヒト組換えインターフェロン、ラット・インターフェロン、およびマウス・インターフェロンで構成されるグループから選択される。一般的に、本発明の方法で投与されるタイプ１インターフェロンは、例えば自己免疫性疾患などの発生またはぶり返しを効果的に抑止する量で投与される。例えば、インターフェロンは50I.U./kgから25000I.U./kg程度の範囲の量で投与することができる。本発明による方法は自己免疫性疾患を有するどの動物に対しても用いることができる。もっとも好ましくは、本発明の方法はヒトの治療に用いられる。広い範囲の自己免疫性疾患を本発明の方法を用いることによって治療することができる。代表的な自己免疫性疾患の例は多発性硬化症、リューマチ性関節炎、真性糖尿病（diabetes mellitus）、乾癬、器官固有自己免疫性疾患、慢性炎症性髄鞘脱落多神経根神経病、およびギラン−バレ症候群などである。本発明はまた、ヒトの多発性硬化症の重篤性、およびぶり返しの頻度を減らす方法に関するものであり、この方法は該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与する方法を含んでいる。さらに、本発明は該動物にタイプ１インターフェロンを投与するステップを含んだ、自己免疫性疾患の発現を抑止する方法に向けられたものである。以下の例は本発明の種々の実施の態様を示すためのものであって、いかなる意味でも本発明を自己免疫性疾患に限定するためのものではない。実施例１実験的自己免疫性脳脊髄炎の導入ＥＡＥの慢性的回帰的形態が、BrownおよびMcFarlinがLab.Invest.（1981）45 ：278−284で発表し、Millerらが、」J.Immunol.（1987）138：3776−3784で修正した方法を用いて、生後７〜10周の雌ＳＪＬ/Ｊマウスに誘発させた。要約して述べると、各マウスに0.15mlのリン酸緩衝食塩水に１mgの同質遺伝子的マウス脊髄ホモゲネート［ＭＳＣＨ］を溶かしたもの、および、0.15mlの不完全Freund 'sアジュバンド［ＩＦＡ］に0.03mgのミクロバクテリウム・テュバークロシス・ホミネスＨ37Ｒa［ＭＴ］［Difco Labs，Detroit，MI］を溶かしたものを含むエマルジョン0.3mlを毛を剃った右のわき腹に皮下注射した。７日後、それらのマウスの左側のわき腹にも同様の注射を行った。疾患の最初の臨床的兆候は免疫化後13〜25日の期間に認められた。回帰性発作の臨床的な重篤性を、情報を提供していないオブザーバーによって以下のように等級づけた。０＝病気なし；１＝後ろ足の微弱または軽度の弱さ；２＝後ろ足の中程度の弱さまたは軽度の運動失調；３＝中程度−重篤な後ろ足の弱さ；４＝重大な後ろ足の弱さ、または中程度の運動失調；５＝後ろ足に中程度以下の弱さを伴った対麻痺；６＝４つの足に重大な弱さを伴った対麻痺、または重大な運動失調。動物たちのスコアはブラインド方式で６〜８週間行われ、累積週間スコアは各動物グループあたり週３回［月曜日、水曜日、および金曜日］のスコアを平均して計算した。実施例２サイトカインの投与最初の発作の後、動物にいろいろな量［１〜100単位］のマウス天然ＩＦＮ− α/β［細胞免疫マウスＩＦＮ−α＋β，4.0×10⁵IRU/ml，Lee Biomolecular Re search，Inc.，San Diego，CA］、または偽マウスＩＦＮ−α/β［細胞免疫＜２ IRU/ml，Lee Biomolecular Research，Inc.，San Diego，CA，｛培養が偽誘発された他はＩＦＮ−α/βと同様に作成された｝］を、20ゲージ・ボール・ポイント針を取りつけた2.5cm注射器［Thomas Scientific，Swedesboro，NJ］で１週間３回［月曜日、水曜日、金曜日］６〜８週間にわたって与えた。熱で変成したＩＦＮは一定の免疫学的活性を有しているので、偽ＩＦＮをコントロールに用いた。実施例３ギニア・ピッグ・ミエリン塩基性蛋白質［ＧＰ−ＭＢＰ］の調製 20グラムのギニア・ピッグ脊髄を4.7ml −20℃メタノールに加えて、組織ホモジナイザーで均一化した。9.4ml −20℃のクロロホルムを加えて、さらに２分間均一化し、その後、室温で60分間撹拌し、その後、４℃でさらに60分間撹拌した。この物質を薄さ２の殺菌ガーゼを使って冷却バックナー・フラスコおよび＃１ホワットマンろ紙で濾過した。この組織ケーキを20ml −20℃のアセトンでリンスして、冷たいddＨ₂Ｏ 40mlに再懸濁させ、その後、30分間４℃の温度で撹拌して、二度目の濾過を行った後、冷たいddＨ₂Ｏ 10mlに再懸濁させた。懸濁液はdd Ｈ₂Ｏ内でのペレットの再懸濁を容易にするために超音波処理した。組織と水で構成されたスラリーを１Ｎ塩酸でpH＝３に調整して、４℃の温度で１昼夜撹拌した。１昼夜撹拌した後、pHを３に再調整した後，10,000×ｇで15分間４℃で回転させた。上澄液を＃１ホワットマン紙で濾過して、液体部分を保存した。この濾過液を10ＮＮaＯＨでpH＝９に調整して、40℃で60分間撹拌し、次に、10,000×ｇで15分間４℃で回転させた。上澄液の体積を測定して、硫酸アンモニウムを最終濃度が27.7グラム/100mlとなるように加え、上澄液を冷たい温度で30分間撹拌し、その後、10,000×ｇで４℃の温度下で15分間回転させ、１ml d dＨ₂Ｏに再懸濁させた。再懸濁させたペレットを小分子量「６−8000MW］透析チューブでddＨ₂Ｏに透析した。蛋白質濃度は紫外線顕微鏡でＡ₂₈₀で判定した。ミエリン塩基性蛋白質製剤の純度を測定するために、７〜20％ＳＤＳ−ＰＡＧＥ傾斜ゲルを作成して、0.3ＭＣuＣl₂で染色した。ギニア・ピッグ・ミエリン塩基性蛋白質［ＧＰ−ＭＢＰ］製剤の純度は、18kDバンドで示された。実施例４リンパ・ノード細胞および脾臓製剤鼠径ノードの投与および排出から６〜８週間後に動物を致死させて、脾臓細胞を取り除き、90umステンレス・ワイア・メッシュを通過させて単一細胞懸濁液を作成した。その脾臓細胞懸濁液内で２mlのＡＣＫ溶液をペレットに加え、室温で５分間反応を行わせて、赤色細胞溶解を行った。実施例５イン・ビトロでのＴ細胞増殖臨床的な回帰性発作の後の７日目にマウスを殺し、排出鼠径リンパ・ノードをプールし、抗原特性Ｔ細胞増殖性反応についての判定を行うためにイン・ビトロで培養した。抗原刺激は０または100μg/ml［ＧＰ−ＭＢＰまたはＭＴ］の抗原を用い、ミトゲン刺激は2.5μg/mlのＣon Ａを用いて、10％仔ウシ胎仔結成［ＦＣＳ］［Whittaker Bioproducts，Walkersville，MD］、１％ピルビン酸ナトリウム［Gibco，Grand Island，NY］、１％グルタミン［Gibco］、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、および50μM ２−メルカプトエタノールで補強したＲＰＭＩ［Gibco，Grand Island，NY］内で２×10⁵細胞／ウエルの条件で培養することによって行った。プレートは５％ＣＯ₂の存在下、37℃で４日間加湿して培養した。その時点で、細胞を２μCiのトリチウムを含む［³Ｈ］dＴdで増幅して、18時間後に自動ハーベスター上に取り出した。［³Ｈ］dＴd摂取量をベッグマン［液体］シンチレーション・カウンターで測定した。培養は三重に行われ、その結果をΔＣＰＭで示した。実施例６微細構造致死させた後、脊髄を取り出して10％緩衝ホルマリン内に最低２週間浸し、固定した。固定後、脳を平面上で二等分し、髄を水平面で約３mm毎の間隔で完全に分解して、パラフィンで処理した。パラフィン・ブロックを６〜８ミクロンに分けて、各セクションをヘマトキシリンおよびエオシンとルタソール−ファスト・ブルー／ＰＡＳ／ヘマトキシリンで染色して、光学顕微鏡で検査した。髄の各分画に病巣および炎症が認められないかどうか、致死前の動物の措置状態に関する情報を与えていないオブザーバーがそれぞれ独自に評価した。脊髄組織は各動物共まったく同じ方法でサンプル化し、柔組織の１分画あたりの炎症性病巣の数［＞20炎症性細胞］をカウントした。実施例７サイトカイン分析偽および100単位マウスＩＦＮ−α/βで措置した動物から取り出した脾臓細胞を75cm²培養フラスコ内に１×10⁶細胞/ml入れてＣon Ａ［2.5ug/ml］で48時間、加湿５％ＣＯ₂/95％空気インキュベータ内で37℃の温度で培養した。上澄液はＣon Ａ活性化後24時間および48時間後に集めて遠心分離後、−70℃の温度で冷凍した。固体相ＥＬＩＳＡアッセイを用いてインターロイキンを測定した。抗− ＩＬ−２、抗−ＩＬ−10、または抗ＩＦＮ−γ［PharMingen，San Diego，CA］をポリビニル・プラスチック96ウェル・マイクロタイター・プレートで炭酸緩衝液（pH9.6）を用いて一昼夜４℃で培養した。これらのプレートをリン酸緩衝食塩水に３％ＢＳＡを加えたもので３時間ブロックした。上澄液の100μlを種々の希釈液に加えて、吸収／濃度曲線の線形部分に３つに分けて滴下し、室温で１時間培養した。プレートをリン酸緩衝液ツイーン（0.05％）で５回洗浄した後、１：1000の濃度の100μlペロキシダーゼ接合インターロイキン・モノクローナル抗体（ポリビニル・プレートを被覆するのに用いた最初のコンクリート体とは異なったエピトープ決定因子を有している）を60分間加えた。その後、ペロキシダーゼ基Ｏ−フェニレンジアミン・ジヒドロクロライドを加えて、450nmでその吸収を測定した。いろいろの量の異なったインターロイキンによる標準曲線が作成された。ワン−テール・スチューデントｔ− テストを用いて統計的分析が行われた。実施例８経口投与されたマウス・タイプ１インターフェロンは臨床的疾患、炎症を軽減し、ＭＢＰに対する増殖的反応を抑止する１〜10単位の経口投与されたタイプ１インターフェロンは免疫学的な効果は有していたが、臨床的な病気のぶり返しを抑制する程には十分ではなかった。したがって、各６匹の免疫化されたＳＪＬ/Ｊマウスで構成される２つのグループに、最初の発作からの回復後、30日目から、１週間に３回偽ＩＦＮまたは100単位マウス天然ＩＦＮ−α/βを投与した。これらのグループの間で、最初の発作後のグループ臨床スコアに有意差はなかった。臨床的な病気の回帰は接種後約40日後に起きた。しかし、偽ＩＦＮを与えたグループと100単位のマウス天然ＩＦＮ −α/βを提供したグループとの間では結果に有意差が現れた［ｐ＜0.03、図４］。偽ＩＦＮを与えたグループでは７週間の間に２度の重大なぶり返しが発生し、神経学的欠損が増大される結果となった。マウスＩＦＮ−α/βを経口投与したグループはやや時間的に遅れたぶり返しが１回認められただけで、神経的不全の発生は認められなかった。マウス天然ＩＦＮ−α/βを経口投与すると、重篤性が低下し、最初の発作とぶり返しとの間のグループ・スコアが減少した。排出鼠径部リンパ・ノード細胞Ｃon Ａ活性の抑止程度は偽ＩＦＮを与えたグループの方が100単位のマウス天然ＩＦＮ−α/βを与えたグループより大きかった［88,222cpm±1,910 vs 38,095cpm± 3,160］。偽ＩＦＮを与えたグループから取り出したリンパ・ノード細胞をＭＢＰでテストしたところ、頑強な増殖反応の発生が認められたが、この反応はマウス天然ＩＦＮ−α/βを与えた動物においては基本的に抑止された［14,052cpm± 842 vs 448cpm±50］。別の感作化抗原に対する抑制効果があるかどうかを判定するために、排出鼠径部リンパ・ノードの第二の感作化抗原、ＭＳＣＨ接種材料の成分であるマイコバクテリウム・テュバークロシス・ホミネス［ＭＴ］に対する抗原固有増殖を調べた。偽ＩＦＮを与えた動物からのリンパ・ノード細胞はしっかりした増殖反応を発生させたが、その反応は100単位マウス天然ＩＦＮ−α/βを与えた動物では低下した［52,401cpm±857 vs 5,214cpm±808］。動物に対しては、免疫後65日目に組織的調査も行われた。ＩＦＮを与えたグループ［0.5±0.1］の炎症性病巣の数は比較対照の偽ＩＦＮを与えたグループ［1. 8±1.1］と比較してかなり少なかった［ｐ＜0.05］。したがって、経口投与されたマウス天然タイプ１インターフェロンは臨床的疾患を抑制し、炎症を低下させ、ＭＢＰおよびＭＴに対する増殖反応を抑止する。実施例９経口投与されたＩＦＮ−α/βによる病気ぶり返しの抑制はＩＦＮ−γ分泌の減少と関連しているＥＡＥにおける病気の重度は脾細胞のＣon Ａ刺激の後、ＩＦＮ−γ分泌物と関連する。したがって、脾細胞は偽［ｎ＝５］または100単位を与えた［ｎ＝５］マウスＩＦＮ−α/βをＣon Ａ［2.5μg/ml］を用いて１×10⁶細胞/mlで２日間培養し、上澄液を固体相ＥＬＩＳＡ［ＩＬ−２，ＩＬ−10，ＩＦＮ−γ］で評価した。ＩＦＮ−α/βを経口投与した場合、炎症の仲介因子であるＩＦＮ−γ が一貫して減少した［例１：偽ＩＦＮを与えた脾臓2,500ng/ml±300 vs 100単位を与えた脾臓＊1,100ng/ml±200；例２：偽ＩＦＮを与えた脾臓2,180ng/ml±100 vs 100単位を与えた脾臓247vs＊143ng/ml±13，＊ｐ偽ＩＦＮ比較対照と比べて＜0.001］。ＩＬ−２、Ｔ細胞成長因子の減少、およびＩＬ−10生産の増大も認められたが、これらの変化は統計的に見て有意な結果はもたらさなかった。本発明は、タイプ１インターフェロンの経口投与が、動物が最初の発作から回復した後に投与されると、ＣＲ−ＥＡＥにおける生物学的反応を修正できることを示している。十分な量で与えられると、経口投与されたタイプ１インターフェロンは臨床的な疾患のぶり返しを抑え、炎症を減らし、そして、皮下注射で与えられた抗原からの活性化Ｔ細胞が高い頻度で作り出される天然の部位である排出鼠径部リンパ・ノードからの活性化細胞の増殖を抑制する。したがって、タイプ１インターフェロンは経口ルートで活性を示し、感作性のある免疫対応物内で十分な免疫効果を発揮する。ＩＦＮを経口投与すると、脾臓細胞内でのＣon Ａによって誘発されたＩＦＮ−γ分泌が一貫して減少した。ＭＢＰに対する増殖反応の抑制は接種後６週間の期間後、および最初の臨床的発作後４週間後でもその効果が認められる。したがって、oropharynxおよび消化管のその他の部分での蛋白質消化を防ぐ保護マトリックスを欠いているサイトカインの経口投与は以前に感作化された抗原に対する増殖反応を抑止することができる。すでに確立している、および始まったばかりの免疫反応を鈍化させることは治療上の重要な課題である。動物のミエリン抗原を経口ルートで投与するとラットおよびギニア・ピッグにおけるＣＲ−ＥＡＥの臨床的なコースを改善し、ＣＲ− ＥＡＥにおけるミエリン抗原に対する病理的続発症を軽減することができる。ミエリン蛋白質の経口投与は男性ＤＲ２−ＭＳ患者における発作の重篤性とミエリンで処置した個体におけるＴ細胞株固有ＭＢＰの発生頻度を低下させることができる。しかしながら、ヒトでの実験と動物での実験では、臨床および病態的疾患の部分的な抑制が認められただけで、このことは他の経口投与された免疫活性物質の方がミエリン抗原より優れていることを示している。経口投与されたタイプ１インターフェロンの免疫調節メカニズムはまだ分かっていない。Ｃon Ａで活性化させたリンパ球の正常なレスポンダー細胞のミトゲン反応に対する調節機能はイン・ビトロで抗ヒト・リンパ球ＩＦＮ血清を付加することで抑止され、このことは、ＩＦＮ −α、例えば可溶性免疫反応サブレッサ［ＳＩＲＳ］およびマクロファージから誘導したサプレッサ因子［Ｍφ−ＳＦ］によって誘発される抑止因子の生産を阻止するのかもしれない。末梢化Ｔ細胞はこうしたミトゲン刺激後のインターフェロン生産のために必要であるのかもしれない。しかしながら、マウスに対しての低用量ＩＦＮ−αの経口投与は腹膜内投与の場合とは違って血液中に検出可能なＩＦＮ−αをもたらさず、その効果が抗ＩＦＮコンクリート体のサーキュレーションによってブロックされることもない。経口投与されたＩＦＮのニュートロペニッグ（neutropenic）効果は血液細胞の注射によって被処置動物に移すことは可能であるが血清を注射しても、その効果は移らない。ＥＡＥにおけるＣＮＳのサイトカインmＲＮＡ分析は、ＩＬ−２，ＩＬ−６およびＩＦＮ−γは急性疾患においては増大するが、症状の継続期間中はこれらのサイトカインは減少し、逆にＴｈ１細胞を規制できるＩＬ−10が増大する。したがって、タイプ１インターフェロンはＩＬ−10などの、ＭＢＰおよびＭＴなどの免疫化抗原に対する反応を抑止するサプレッサ因子を含む免疫調節分子であるのかもしれない。要するに、タイプ１インターフェロンなどの生物学的反応修正因子を経口投与すると、免疫応答性を抑止するための基本的には非毒性で、簡便で持続的な手段が提供される。経口ルートによってもたらされる生物学的反応修正因子は抗免疫疾患を処置するための別の手段を提供してくれる。実施例10 急性実験脳脊髄炎の誘発ＰＢＳにミエリン塩基性蛋白質と、完全Freund'sアジュバンド［ＣＦＡ］とを同量含んだエマルジョン；マイクロバクテリウム・テュバークシス・ホミネ[ＭＴ]［Difco，Labs，Detroit，MI］を用いて、生後８〜10週間目の雌ルイス・ラット［Harlan Sprague Dawley，Indianapolis，IN］に、ＥＡＥを誘発させた。ルイス・ラットはFreundアジュバンドに50μg ＭＢＰと500μgを溶かしたものを含んだエマルジョン0.1mlを後ろ足に投与して免疫化させた。疾患の最初の臨床的兆候は、免疫後９日から11日目の間に認められた。最初の発作の臨床的重篤性は情報を与えていないオブザーバーによって以下のように等級付けされた。０＝疾病なし；１＝尾がだらりと下がっている；２＝後ろ足に軽度の弱さ；３＝後ろ足に中程度の弱さ；４＝後ろ足全体の弱さおよびいらだち。平均的日別臨床スコアは、発作中の毎日グループ毎に平均スコアを判定して計算した。全体的な臨床的重篤性、病気の発生頻度、および臨床的兆候の継続を１つの比較的指数に組み込んだ実験的アレルギー性神経炎累積臨床スコアは、発作の開始から終了する期間、処置グループのすべてのラットの日別スコアを合計して、それを処置グループの総数で割ることによって計算した。少なくとも２つの類似した実験からのデータを組み合わせて統計的な分析を行った。実施例11 ＩＦＮの投与免疫化に先立つ７日目［−７］および免疫後21日目［＋14］に、ラットに対して偽ＩＦＮ、1,000，3,000または5,000単位のラット天然ＩＦＮ−α/β［細胞免疫ラットＩＦＮ−α＋β、4.0×10⁵IRU/ml、Lee Biomolecular Reserch，Inc．S an Diego，CA］、またはヒト組換えＩＦＮ−α［ｈｒＩＦＮ−α］［ＩＦＮ−α₁₁ 3.0×10⁶IU/ml，Schering Corp，Kenilworth，NJ］を、背面oropharynxに配置された20ゲージ・ボール・ポイント針を装着した注射器［Thomas Scientific ，Swedesboro，NJ］を用いて投与するか、あるいは毎日ＰＢＳ擬薬または5,000 単位ｈｒＩＦＮ−αを注射した。凍結乾燥されたＩＦＮ製剤をＤＰＢＳで再構成して、１/600から１／3,000に希釈した。偽天然製剤はラット天然ＩＦＮ−α/β とまったく同様に調製されたが、ニューキャッスル・ウイルスによって誘発されたものではない。ギニア・ピッグ塩基性蛋白質［ＧＰ−ＭＢＰ］の調製、つまり、ＭＢＰ、リンパ球ノード細胞、および脾臓製剤の均一化、破損、および酸溶出、イン・ビトロでのＴ細胞増殖、およびサイトカイン分析は上に述べたように行われた。実施例12 微細組織致死させた後、脊髄を取り出して、10％中性緩衝ホルマリンに最低２週間浸潤固定した。固定後、脊髄を水平プレート上で約３mm間隔で分解して、パラフィン処理した。パラフィン・ブロックを６〜８ミクロンに細分して、各セクション［ｎ＝５］をヘマトキシリインとエロシン、およびルコソール−ファスト・ブルー／ＰＡＳ／ヘマトキシリンで染色して、光学顕微鏡で調査した。髄の断面を、致死させるまえの動物の処置状況に関する情報を与えていないオブザーバーが独自にその病巣および炎症について評価を加えた。脊髄組織を各動物に対して同様にサンプル化し、断面毎の柔組織の炎症性病巣（炎症性細胞20個以上）の数をカウントした。ツー・テール・ステューデントｔ−テストを用いて統計的な分析を行った。実施例13 天然ラットＩＦＮ−α/βは臨床的疾患を改善し、増殖反応を抑止し、ＧＰ−ＭＢＰに対する炎症を軽減する生後８〜10週目のルイス・ラット各６匹で構成される４つのグループを等しい量のＭＢＰおよびＣＦＡで免疫化したところ、その後、９日目から発作が始まり、16日目まで継続した。免疫化に先立つ７日目［−７］およびその後21日目[＋1 4]までの期間、各動物グループに対して、偽ＩＦＮ、1,000,3,000または5,000単位のラット・タイプ１インターフェロンを毎日0.1ml ＰＢＳに入れて与えた。すべての動物の臨床的疾病に関して免疫化から16日後までスコアした。日別の臨床スコアのブラインド検査の結果、偽ＩＦＮを与えたグループと特に13日目から16日目までに5,000単位のＩＦＮ−α/βを与えた動物との間には有意差は認められたが、1,000および3,000単位を与えた動物においては有意差は認められなかった。5,000単位のラット天然ＩＦＮ−α/β で処置したラットのピーク時の疾患は偽ＩＦＮグループのそれと比較してそれ程重大ではなかったし、5,000単位のＩＦＮ−α/βで処置したグループは迅速に回復して、偽ＩＦＮで処置したグループより早い時期にベースラインに戻った［図２、1,000および3,000単位の場合のデータは示さず］。5,000単位のラット天然ＩＦＮ−αで処置した動物の実験的アレルギー性神経炎臨床スコアは偽ＩＦＮを与えた比較対象群と比較してかなり低かった［5,000単位投与グループの0.8±0. 2 vs 偽ＩＦＮ投与グルーブの1.2±0.2、ｐ＜0.02］。動物の微細組織についても免疫化後16日目に検査された。比較対象の偽インターフェロン・グループ［50 ±２］と比較してＩＦＮ−α/βで処置したグループ［26±６］の炎症性病巣の数はかなり低かったが、このことは１グループあたりの検査対象の個体の数が低かったので［ｎ＝３］、統計的な有意差とは認められなかった［ｐ＜0.06］。排出膝かがみ筋リンパ・ノードＣon Ａ増殖は偽ＩＦＮを与えたグループの16, 209±1,234cpmの範囲から5,000単位ＩＦＮ−α/βを与えたグループの8,120±765cpmの範囲で抑制された。偽および5, 000単位で処置した排出膝かがみ筋リンパ・ノードはイオノマイシン＋ＰＭＡで刺激され、偽ＩＦＮを与えたグループ［20,505cpm±505］より5,000単位ＩＦＮ −α/βを与えたグループ［6,111cpm±636］の方が増殖の程度は低かった。排出膝かがみ筋リンパ・ノードにおいては、5,000単位ＩＦＮ−α/βを与えたグループと偽ＩＦＮを与えたグループとの間で、ＭＢＰおよびＭＴにおいて一貫した差異は見られなかった。また、ＩＦＮで処置した動物において、脾臓または非排出腸間膜リンパ・ノードのＣon Ａまたはイノミシン／ＰＭＡに対する反応における抑制効果は認められなかった。このように、種に固有のタイプ１インターフェロンは十分な量で投与された場合、重大な急性臨床疾患を抑止する。経口投与されたＩＦＮ−α/βによる増殖の抑止は、腸を通じて直接、または間接的に血液流に入り込むＩＦＮの直接作用に起因するものであろう。排出膝かがみ筋リンパ・ノードおよび脾臓細胞のイン・ビトロでのタイプ１のＩＦＮによる処置について免疫化されたが偽のＩＦＮを与えられた動物について調べたが、イン・ビボでの処置と同様の効果が示された。イン・ビトロでＩＦＮ［１〜100単位］に露出された排出膝かがみ筋リンパ・ノードまたは脾臓細胞におけるＣon Ａの増殖に関しては、明確な影響は認められなかったが、それとは対照的に、イン・ビボでのＩＦＮの経口投与の場合、排出膝かがみ筋リンパ・ノード増殖の減少が認められた。したがって、タイプ１インターフェロンの間接的な効果は腸に関連したリンパ組織を通じて仲介されている可能性がある。実施例14 ヒト組換えインターフェロン・アルファの経口投与による急性ラットＥＡＥの修正ヒト・タイプ１インターフェロンはマウス、ギニア・ピッグ、無菌の仔ウシ、ウマ、およびブタ、ネコなどの動物に対して種を越えた活性を示すので、天然製剤より１単位あたりの免疫抑制作用をより強力に発揮する均一的な物質である、組換えヒト・インターフェロン［ｈｒＩＦＮ−α］を用いた。免疫化に先立つ７日間［−７］、およびその後21日間［＋14］、各動物グループに対してＰＢＳ、 1,000または5,000単位のｈｒＩＦＮ−αを毎日与えた。生後８〜10週間のルイス・ラットで構成される３つのグループを免疫化したところ、その後、10日目に発作が起こり、16日目まで続いた。すべての動物について、免疫化16日まで臨床的疾病に関するスコアが届いた。図３に示すように、ＰＢＳおよび1,000単位のｈｒＩＦＮ−αを与えた動物は10日目に重度の急性発作を示し、14日目にその強度がピークに達した。5,000単位のｈｒＩＦＮ−αを与えられた動物は発作の開始の遅れを示し、ピーク時の重篤性が低下し、そして発作が早くおさまった。5,00 0単位のｈｒＩＦＮ−αを与えた動物の実験的アレルギー性神経炎の累積臨床スコアはＰＢＳコントロールを与えたグループ、または1,000単位を与えた動物よりもかなり低かった［図４］。このように、経口投与されたｈｒＩＦＮ−αは接種前に投与されるとルイス・ラットのＥＡＥの臨床的発作の開始を抑制する。致死後、免疫後から16日目に、動物の微細組織についても検査した。5,000単位のｈｒＩＦＮ−αを与えたグループにおいては、炎症性病巣の数がＰＢＳコントロール・グループまたは1,000単位のｈｒＩＦＮ−αを与えたグループよりかなり少なかった［図５］。実施例15 等量でない非経口的投与を除くヒト組換えＩＦＮ−αの経口投与も臨床的疾患を改善する経口投与されたhrＩＦＮ−αは臨床的疾患を改善し、脊髄における炎症を減少させる。等しい量を経口投与した場合と、非経口投与した場合の効果の比較について調べた。６匹のルイス・ラットで構成される３つのグループを免疫化して、処置を講じないグループと、5,000単位のｈｒＩＦＮ−αを与えたグループと、5 ,000単位のｈｒＩＦＮ−αをそれぞれ免疫化に先立つ７日目［−７］からその後 21日目［＋14］まで与えたグループとに分けた。すべての動物の疾患について、免疫化後18日目までスコアを採った。5,000単位のｈｒＩＦＮ−αの経口投与で処置したラットは病気のピーク時の状態がそれほどひどくなく、未処置のグループより早く回復した［図６］。実際、未処置および皮下注射処置のグループの臨床曲線スコアは非常に類似していたが、このことは皮下注射ｈｒＩＦＮ−αが臨床的疾患におよぼす効果がほとんど、またはまったくないことを示している。実験的アレルギー性神経炎の累積臨床スコアは、未処置／および皮下注射で処置した動物とｈｒＩＦＮ−αを与えた動物の間に、かなりの違いがあることを示している［図７］。未処置の動物と皮下注射処置した動物との間に有為な差は存在しない。免疫後18日目に、動物を致死させて微細構造について調べた。5,000単位を与えたグループでは、炎症性の病巣が5,000単位の皮下注射で処置したグループと比較してかなり少なかった［図８］。ＰＢＳおよびＰＢＳ皮下注射を注射したコントロール群においても同様の傾向が認められた。この場合、各６匹のルイス・ラットで構成される４つのグループに対して、ＰＢＳを与えるか、皮下注射をＰＢＳと共に注射するか、5,000単位のｈｒＩＦＮ−αを与えるか、あるいは5,000単位のｈｒＩＦＮ−αを免疫化に先立つ７日目［−７］からその21日後［＋14］まで与えた。すべての動物は０日目に免疫化された。免疫化16日後、致死するまで動物の臨床的疾患についてスコアが採られた。実験的アレルギー性神経炎に関する累積臨床スコアは、ＰＢＳを与えたグループ［2.5±0.4］と比較してｈｒＩＦＮ−αを与えたグループ［1.0 ±0.2］においてかなり低かった［ｐ＜0.005］。皮下注射で処置した動物では実験的アレルギー性神経炎に関する累積臨床スコアはかなり高いが偽皮下注射［1. 7±0.4］と5,000単位のｈｒＩＦＮ−α 皮下注射を与えたグループ［2.1±0.4］との間で有意差はなかった。したがって、皮下注射投与ｈｒＩＦＮ−αは臨床的に予防的な量を経口投与された場合、急性臨床的疾患の開始を改善することはできなかった。実施例16 経口投与されたＩＦＮ−αは排出膝かがみ筋リンパ・ノードのミトゲン誘発生産を抑制するＥＡＥにおける疾患の強度はＣon Ａ接種後のＩＦＮ−γ分泌と結びつけられている。したがって、偽ＩＦＮを与えたグループと5,000単位を与えたｈｒＩＦＮ−αラットの両方から取り出した排出膝かがみ筋リンパ・ノード細胞［免疫後 18日目］にＣon Ａ［2.5μg/ml］で２日間刺激を与え、上澄液をＥＬＩＳＡで評価した。表Ｉに示す結果は経口投与されたhrＩＦＮ−αは炎症の仲介因子であるＩＦＮ−γを排出膝かがみ筋リンパ・ノードにおいては減少させたが、脾臓細胞においては減少させなかった。偽ＩＦＮを与えたグループおよび5,000単位ＩＦＮを与えた免疫化ラットから取り出した脾臓および排出膝かがみ筋リンパ・ノード細胞［ 18日目］をＣon Ａ［2.5μg/ml］で１×10⁶細胞/mlで48時間培養した。上澄液をＣon Ａ活性化後48時間目に収集して、遠心分離後、−70℃の温度で冷凍した。ＩＦＮ−γは固体相ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定された。与えられた結果は ng/mlで示してある。２つの実験から得られたデータを組み合わせて示した。ＬＮ5,000をＬＮ偽と比較すると＊ｐは0.05未満である。経口投与されたタイプ１インターフェロンは、同じ量の皮下注射とは反対に、本発明ではそれらが感作化および臨床的疾患より前に投与された場合にルイス・ラットの急性ＥＡＥにおけるＭＢＰに対する生物学的の修正因子として開示している。経口投与されたタイプ１インターフェロンは臨床的発作を部分的に修正し、脊髄における炎症性病巣を減少させ、Ｃon Ａおよびイオノマイシン／ＰＭＡによる非固有増殖を減少させ、そして、排出膝かがみ筋リンパ・ノードにおけるＩＦＮ−γの生産を減少させる。このことは、ＩＦＮ−γが経口ルートによってより活性を示し、明確な免疫効果を有しており、そして、特有のサイトカインがＧＩトラクト経由で与えられた場合、臨床的疾患を抑止することができることを示している。驚くべきことに、ヒト組換えＩＦＮ−αと種固有ラット天然ＩＦＮの両方とも、本発明において効果を発揮した。天然ＩＦＮは天然タイプの少量の成分として存在している場合もあるＩＦＮ−α₁₁を含む14の別個の亜種の混合物である。ヒトＩＦＮは一定の種を越えた活性を示すが、ＩＦＮ−α₁₁亜種だけを独占的に用いると、ラットにおける免疫抑制効果にとって最も重要な要素である抑制的活性／総活性単位を提供してくれる可能性がある。経口投与されたＩＦＮの抗抑制効果は排出膝こうリンパ・ノードの方が、非排出膝かがみ筋リンパ・ノードにおけるより高かった。ＩＦＮ−αの経口投与も排出膝かがみ筋リンパ・ノードにおけるＩＦＮ−γの生産を抑止した。排出膝かがみ筋リンパ・ノードは皮下注射で抗原を投与するための天然の排出領域で、したがって、高頻度の感作化ＭＢＰ固有Ｔ細胞の貯蔵箇所であると思われる。経口投与されたサイトカインは系統投与の場合と比較して免疫活性化の部位での増殖およびサイトカイン生産に優先的に効果を及ぼす。ＩＦＮ−αによる活性化領域免疫コンパートメントにおけるＩＦＮ−γの抑止はＣＮＳにおけるＭＢＰ固有細胞の炎症効果を引き起こす可能性がある。経口投与されたＩＦＮ−αは同量の皮下注射と比較して、ＥＡＥの抑止においてより効果的であった。イン・ビトロでのＩＦＮはイン・ビボでのｐ．ｏ．投与とは違って、pop ＬＮにおけるＣon Ａ増殖を抑止しなかった。したがって、投与のルートは重要な意味を持っており、ＩＦＮの免疫学的メカニズムを決定している可能性がある。消化管を通じての移送中に生き残れないかもしれない蛋白質がoropharynx内の腸に関連したリンパ系組織経由で免疫抑制効果を発揮する場合があるかもしれない。したがって、経口投与は腸の免疫システム経由で免疫調整細胞を発生させることによって、自己免疫性疾患の処置における治療用サイトカインのための別の薬剤伝達経路を提供してくれる。経口投与されたタイプ１インターフェロンの免疫調整メカニズムについては分かっていない。Ｃon Ａ活性化リンパ球の通常のレスポンダー細胞のミトゲン反応に対する調節的効果は、ＩＦＮ−α、例えば可溶性免疫反応抑制因子［ＳＩＲＳ］およびマクロファージ誘導抑制因子［Ｍφ−ＳＦ］¹⁶の生産を調節する可能性を有するイン・ビトロで抗ヒト白血球を加えることによって失わせることができる。こうしたミトゲン刺激後のインターフェロン生産のためには末梢化Ｔ細胞が必要とされる場合があるかもしれない。しかしながら、低容量のＩＦＮをマウスに経口投与しても、腹膜内投与の場合とは違って検出できる程の血液中でのＩＦＮレベルはもたらされないし、抗ＩＦＮ抗体を循環させても、その効果を阻止することはできない。経口投与されたＩＦＮのニュートロペニック（neutropeni c）効果は血液細胞の注射によって動物に伝達することはできるが、血清の注射では不可能である。同様に、イン・ビトロで体液反応を低下させる抗原のマウスへの経口投与後にパイエル板に細胞を誘発させることができる。したがって、タイプ１インターフェロンはＳＩＲＳおよびＭφ−ＳＦなどの抑制因子を発生させてＭＢＰなどの免疫化抗原に対する反応を抑止する活性化Ｔ細胞およびその他の免疫細胞によってつくりだされる免疫調整分子である可能性がある。本発明はＩＦＮ−αの経口投与による治療が、経口投与されたＩＦＮ−αが同量のＩＦＮ−αを非経口投与した場合より効果的であるように思われるので、ぶり返したり和らいだりする多発性硬化症や他の慢性的非神経学的自己免疫性疾患には適している。したがって、ＩＦＮ−αなどのサイトカイン生物学的反応修正因子の経口投与は感作化前に投与されると自己抗原に対する臨床的発作を修正するための効果的な手段を提供してくれる。経口ルートは、かなり少量のサイトカインの使用を可能にしてくれ、副作用を抑えると共に効果を増大させる簡便な薬剤伝達システムである。実施例17 免疫化体重が150〜170ｇの雌ルイス・ラット（Harlan）を１mlあたり10mgのＭ・テュバークロシスを含んでいる等しい量の完全Freund'sアジュバンド（ＣＦＡ）に乳化させた末梢神経ミエリン20mg（加湿重量）で免疫化させた。免疫源は200μlで右後ろ足の踵に注射した。末梢神経ミエリンはNortonがMethods Enzymol.，31（ partＡ）435，1975で述べている方法にしたがって仔ウシ脊髄根から取り出したものである。実施例18 インターフェロン投与免疫化より７日前から免疫化の20日後まで、ラットに偽ＩＦＮまたは5,000単位のラット天然ＩＦＮ−α/β（細胞免疫ラットＩＦＮ−α/β 1.5×10⁶単位/ml 、Lee Biomolecular Research Inc，San Diego，CA）のいずれかを与えた。冷凍乾燥したＩＦＮを滅菌水で再構成し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に希釈し、背面口腔咽頭に配置された20ゲージ・ボール・ポイント針を取りつけた注射器を用いて毎日0.1mlずつ投与した。実施例19 臨床アセスメント免疫後の７日前からその７日後まで、ラットの体重を量り、HahnらがActa Neu ropathol ，82：60−65（1991）に述べたような以下のスケールを用いて臨床的な評価を行った：０、正常；１、だらりと下がった尾；２、歩き方の異常；３、軽度の麻痺；４、重度の麻痺；５、対麻痺；６、前足も伴った対麻痺；７、前足も伴った対麻痺および呼吸不全；８、瀕死または死亡。各動物の体重ロスは致死させた時の体重と最大体重との差で計算し、最大体重のパーセンテージで表した。実施例20 増殖アッセイ免疫化後20日目に致死させた時点で、排出膝かがみ筋リンパ・ノードおよび脾臓を取り出した。90μmワイア・メッシュを通過させて単一細胞懸濁液を作成した。ペレットにＡＣＫ溶液を２ml付加して赤色細胞溶解を行った。脾臓および排出膝かがみ筋リンパ・ノードからの細胞をイン・ビトロで培養するために各処置グループのためにプールした。脾臓またはリンパ・ノード・ポピュレーションを10μg/mlのＭ／テュバークロシスおよび１μg/mlのＳＰ26で培養した［ＳＰ26はテキサス大学分析化学部で合成されたアミノ酸による神経遺伝子ペブチド（Rostamiら、J.Neuroimmunol.，30：145−151 （1990）），ＲＰＭＩ（Gibco，Grand Island，NY）内に溶かした2.5μg/mlのコンカナバリンＡ(Sigma Chemical Co.，St．Louis，MO)、10％仔ウシ胎児血清（ＦＣＳ；Whittaker Bioproducts，Walkserville，MD）で補完した１ng/mlのミリスティック酸パルミチル・エステル（ＰＭＡ）と組み合わせた100ng/mlイオノミシン（Calbiochem，La Jolla，CA）、１mMピルビン酸ナトリウム（Gibco，Grand Island，NY）、２mMグルタミン（Gibco）、100単位ペニシリン／ストレプトマイシン、および50μM ２−メルカプトエタノールを用いて２×10⁵細胞/mlで培養した。プレートは５％ＣＯ₂で培養され、37℃の温度下で４日間加湿された。その時点で、細胞を２μCiのトリチウムを含む（³Ｈ）dＴdで増幅し、自動ハーベスター上に18時間後に取り出した。（³Ｈ）dＴd摂取量はベックマン液体シンチレーション・カウンターで測定した。培養は３つの組で行われ、その結果をΔＣＰＭで示した。実施例21 サイトカイン分析偽および5,000単位のラットＩＦＮで処置した実験的アレルギー性神経炎をもった動物から取り出し、プールされた排出化膝かがみ筋リンパ・ノードおよびプールされた脾臓細胞をＣon Ａ（2.5μg/ml）、Ｍテュバークロシス（10μg/ml）または（１μg/ml）を用いて１×10⁶細胞/mlで75cm²組織培養フラスコ内で48時間、37℃で加湿５％ＣＯ₂/95％エア・インキュベータで培養した。遠心分離後上澄液を収集後、−70℃で冷凍した。ＩＦＮ−γは固体相ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した。抗ＩＦＮ−γ（Pharmingen，San Diego，CA）を0.01Ｍ炭酸緩衝液（pH9.6）を用いて４℃でポリビニル・プラスチック製96ウェル・マイタロタイター・プレート上で培養した。このプレートをＰＢＳに３％仔ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を加えたもので３時間ブロックした。上澄液100μlを種々の希釈度で３つの組で吸収／濃度曲線の線形部分に滴定し、室温で１時間分離した。プレートをＰＢＳツイーン（0.05％）で５回洗浄した後、100μlのペロキシダーゼ接合ＩＦＮ−γモノクローナル抗体（ポリビニル・プレートを被覆するために用いる第一の抗体以外のエピトピック決定因子を含む）を１：1000の濃度で60分間付加した。その後、ペロキシダーゼ基質Ｏ−フェニレンヂアミン・ジヒドロクロライドを加え、その吸収度を450nmで測定した。種々の量のＩＦＮ−γによる標準曲線を作成した。実施例22 微細組織免疫後20日目にペントバルビタール・アネステシアの存在下、食塩を注いで致死させた。cauda equineを取り出して、分割した。一番先端の部分を2.5％パラホルマルアルデヒド／2.5％グルタルアルデヒドをＰＢＳに溶解したものの中に４〜６時間固定し、２％オスミウム・テトロキサイド内で１昼夜オスミウム処理し、エプロン内で脱水、埋め込み処理した。下側の腰仙のルーツ（roots）の４つのブロックの内の４つを各動物から取り出した。各ブロックから代表として0. 5ミクソン分画をトルイジン・ブルーで染色した。各根における髄鞘脱落および炎症に関する組織的アセスメントを以下の尺度（ Hahnら、1991）にしたがって行なった。髄鞘脱落１＋＝少数の髄鞘脱落軸索が末梢小静脈または散乱状態で観察される；２＋＝末梢小静脈髄鞘脱落の多くの病巣；３＋＝末梢小静脈合流部に広範な髄鞘脱落；炎症１＋＝少数の単核炎症性細胞が末梢神経系にしばしば観察される；２＋＝単核炎症性細胞による末梢小静脈のカフィング；３＋＝広範な複数病巣による末梢小静脈カフィングおよび広い領域に分散した内包神経系の炎症。スコアは各動物につき、各分画の神経根の数で髄鞘脱落および炎症箇所の総数を割ることによって計算した。スライドは標本に関する免疫化または処置手順を知らない調査者（ＭＰ）によって読み取られた。第２腰椎部の下部の近位部分（±２cm）を液体窒素内で冷却されたメチルブタン内でスナップ凍結し、−70℃の温度で保存した。グリオスタット上で８ミクロンの断面をつくり、氷冷エーテル内に固定し、免疫化学検査に用いた。実施例23 免疫細胞化学検査以下の抗体：ＥＤ１１：1000（マクロファージ）、Ｗ３/13（リンパ球；Harl an Bioproducts for Science, IN）、ＣＤ11ｄ/ｃ１：100（マクロファージ上にＣＲ３、顆粒球、樹状突起細胞；Pharmingen，CA），ＩＦＮ−γ １：10（Ge nzyme，MA）を用いて、免疫細胞化学検査を行なった。８ミクロンの冷凍分画を通常のウサギ血清内で30分間ブロックし、その後、一次抗体で時間培養し、ＰＢＳで洗浄し、ビオチン化二次抗体で１時間培養し、ＰＢＳで洗浄し、さらにＡＢＣペロキシダーゼ（Vectastain）で45分間培養し、ジアミノベンジダインおよび過酸化水素で洗浄した。ＩＦＮ−γに対する一次抗体で培養する前に、0.01％過酸化水素でのブロッキングが行なわれた。神経根内での染色の強度および分布は１＋：軽度、２＋：中程度、および３＋：重度でスコアした。実施例24 臨床的症状免疫化の10日目にラットの体重は減り始め。12日目に最初の神経学的症状が現れ、16日目以後に回復が始まった。22匹のラットのうちの11匹（50％）は臨床スコアが４以上の重大な実験的アレルギー性神経炎を発生し、偽ＩＦＮを与えられた11匹のうち２匹は免疫後14日目および15日目に死亡し、ＩＦＮ−α/βを与えられた動物の方はどれも死ななかった。偽ＩＦＮを与えたラット（ｎ＝11、スコア4.1±2.4；実験的アレルギー性神経炎±ＳＤ）の臨床スコアはＩＦＮ−α/βを与えたラット（ｎ＝11、スコア3.3±1.4；ｐ＜0.03,Wilcoxonランク・テスト）におけるよりかなり高かった。偽ＩＦＮを与えたグループのより多数のラットは臨床スコア４以上であった（図９Ａ）。同様により多数のＩＦＮを与えた動物がＩＦＮ−α/βを与えた動物より25％以上体重を失った（図９Ｂ）。実施例25 細胞増殖およびサイトカインＩＦＮ−α/βを与えた動物から取り出したＣon Ａを与えた場合の脾臓細胞増殖は偽ＩＦＮを与えた動物と比較して、低下した（脾臓：偽ＩＦＮ 118,114±5, 194 vs ラットＩＦＮ−α/β835±94、平均値±ＳＥＭ，ｐ＜0.006、ｔ−テスト）。偽ＩＦＮを与えたラットから取り出したリンパ・ノードおよび脾臓細胞によるＳＰ26での刺激後のＩＦＮ−γ生産は、ＥＬＩＳＡで比較して、ＩＦＮ−α/β を与えた動物から取り出したリンパ・ノードおよび脾臓相棒によるＩＦＮ−γ生産よりずっと高かったが、その差は統計的有意差には達しなかった（リンパ・ノード：18.9±2.4ng/ml vs 11.9±3.8ng/ ml：脾臓：11.9±0.4ng/ml vs 6.3±1.8mg/ml、平均値±ＳＥＭ，偽ＩＦＮを与えたラット vs ＩＦＮ−α/βを与えたラット、ｐ＜0.08）。ＣonＡまたはＭ／テュバークロシスで刺激を与えた後、ＩＦＮ−γの生産に差は見られなかった。実施例26 組織検査Ｅponを埋め込んだ部分の組織検査の結果では、偽ＩＦＮを与えたラット（スコア：1.1±0.26；ｐ＜0.05，ｔ−テスト）と比較して、ＩＦＮ−α/βを与えたラット（スコア：0.88±0.11，平均値±ＳＤ）の方が骨髄鞘脱落の程度がかなり低かったこと、および炎症については両方の動物グループでさほど違いがなかったことを示している（スコア：1.0±0.2 vs 1.18±0.24）。ＣＤ11bcによる免疫細胞化学検査では、20日目に致死させた場合、ＩＦＮ−α /βを与えたラットと偽ＩＦＮを与えたラットの両方のグループで、cauda equin eの末梢小静脈および拡散浸潤神経根の両方に多数の炎症性細胞が認められた。これらの細胞の多数は食細胞ＥＤ１陽性マクロファージであり、ＩＦＮ−α/β を与えたラットと偽ＩＦＮを与えた動物との間に、炎症の程度に有意差は認められなかった。ＩＦＮ−α/β（ｎ＝３）または偽ＩＦＮ（ｎ＝３）のいずれかで処置したラットのグループを免疫後の13日目に疾患の初期の状態で致死させた。体内でのＩＦＮ−γ生産を評価するために免疫細胞化学検査を行ったが、結果については実験的アレルギー性神経炎および炎症の両方で14日目までしか示していない。ＥＤ１陽性マクロファージおよびＷ３/13陽性リンパ球による浸潤は偽ＩＦＮを与えたコントロール群よりＩＦＮ−α/βを与えたラットのおける方がずっと軽度であった。炎症性細胞の表面の密度の高い炎症領域にＩＦＮ−γ染色が認められた。図10は、ＩＦＮ−γ染色がＩＦＮ−α/βを与えたラットではかなり低く、それに伴って炎症の範囲も小さいことを示している。種固有ＩＦＮ−α/βを経口投与した場合、実験的アレルギー性神経炎の重篤性は偽ＩＦＮを与えた場合より低下し、臨床スコアもかなり低下すると同時に、体重のロスも少なかった。回復が始まった免疫後20日目に集められた組織データは、ＩＦＮ−α/βで処置したグループでの骨髄鞘脱落は少なく、炎症の程度は変わらなかった。免疫後13日目にＩＦＮ−γの生産は免疫細胞化学検査で評価した炎症の範囲と同様減少した。排出リンパ・ノードおよび脾臓細胞の増殖検査ではＩＦＮ−α/βを与えた実験的アレルギー性神経炎を有するラットでのＣon Ａに対する増殖の程度が減少することを示した。サイトカイン分析の結果では、実験的アレルギー性神経炎を誘発することができる末梢神経ミエリン抗原であるＳＰ26による刺激後、ＩＦＮ−γ生産が減少することが示されている。以上の結果を組み合わせると、本発明はＩＦＮ−α/βの経口投与がＩＦＮ−γ生産を減少させることで実験的アレルギー性神経炎の重度を低下させることを示している。このように、本発明は経口投与されたＩＦＮ−α/βのホスト免疫システムに対する免疫調節効果を示すものである。経口投与されたＩＦＮ−α/βが免疫システムに作用するメカニズムは不明であるが、調節細胞を発生させることができる腸関連リンパ系組織（ＧＡＬＴ）内のPeyer'sパッチに対する影響を含んでいるのかもしれない。ＩＦＮ−γが疾患の修正に関与しているＣＤ８＋Ｔ細胞から導かれた免疫調節ファクターを誘発している可能性もある。ＩＦＮ−α/βの経口投与に伴ってＩＦＮ−γ生産が減少されることは、ＩＦＮ−γを生産するＥＡＥ内に見いだされるＴｈ１状のＴヘルパー細胞の機能的抑止の可能性を示唆している。これは能動的または受動的に誘発される疾患のＴ細胞encephalitogenicityの減少をもたらす。ＩＦＮ−γを非経口投与すると、ミエリンで誘発された場合とＴ細胞で仲介された場合の両方の実験的アレルギー性神経炎を増大させ、臨床的兆候および組織的異常も増大し、マクロファージも爆発的に増大し、抗ＩＦＮ−γ抗体の非経口投与によって逆の結果が得られることが示されている。ＩＦＮ−γもイン・ビトロでSchwann細胞上のＭＨＣクラスＩおよびIIＩ表現を誘発する。Ｔｈ１ＣＤ４＋Ｔ細胞によって放出される炎症性サイトカインであるＩＦＮ−γはマクロファージおよび内皮細胞上でのＭＨＣクラスII表現を昂進（upregulate）させ、ミエリン食作用において重要な役割を果すマクロファージを活性化する。ＩＦＮ−γ 表現の減少および炎症の減少はＩＦＮ−α/βを与えた動物における臨床疾患の開始時に見られる。回復が開始された時点での疾患プロセスの終了時の組織的評価の結果、ＩＦＮ−α/βを与えた動物では髄鞘脱落は減少するが、炎症は減少しないことを示している。初期段階でのＩＦＮ−γおよび炎症の減少と、後期段階での髄鞘脱落の減少は実験的アレルギー性神経炎における発病におけるＩＦＮ−γの重要な役割を示唆している。疾患の後期の段階で炎症を減らすことができないのは、ＩＦＮ−γ生産の部分的な抑圧、他のサイトカインおよび炎症仲介因子の影響、およびやや重大な実験的アレルギー性神経炎の誘発などの影響によることが考えられる。要約すれば、経口投与されたインターフェロンは他の実験的自己免疫性疾患、実験的アレルギー性神経炎における病状の改善に有効な生物学的反応修正因子としての役割を果す。実験的アレルギー性神経炎に本発明を適用した結果、ＩＦＮ −α/βを与えたラットの病状を緩和したが、このことはＩＦＮ−α/βの経口投与がギラン−バレ症候群または慢性炎症性髄鞘脱落多神経根神経病（ＣＩＤＰ）などのヒト免疫仲介神経病の処置において有効であろう。本明細書で述べられているすべての特許および出版物は、本発明が関連する分野の当業者が理解できるレベルである。すべての特許および出版物は、それを参照することによって、各個別出版物が具体的、個別的に組み込まれているのと同様に本明細書に組み込まれる。当業者であれば、本発明がここに述べられている、およびそれと本質的に付随した課題の達成と目的および利点の獲得によく適合していることが理解できるであろう。ここに述べられている本発明の実施例は、その方法、手順、処置、分子、および具体的な化合物も含めて、本発明の現段階における好ましい実施の態様を示すものであり、例として提供されるものであって、本発明の範囲の限定は意図していない。特許請求の範囲に定義されているような本発明の範囲内の変更およびその他の利用法は、当業者なら容易に想起するであろう。

【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項【提出日】１９９５年８月８日【補正内容】特許請求の範囲１．動物の自己免疫性疾患を処置する方法において、該動物に、経口投与後にタイプ１インターフェロンが消化されるように、タイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含む方法。２．該インターフェロンがアルファ−インターフェロンおよびベータ−インターフェロンから選択される請求項１の方法。３．該インターフェロンがヒト組換えインターフェロン、ラット・インターフェロン、およびマウス・インターフェロンで構成されるグループから選択される請求項２の方法。４．該インターフェロンが約50I.U./kgから約25,000I.U./kgの範囲の量で投与される請求項２の方法。５．該インターフェロンを隔日に投与する請求項１の方法。６．該動物がヒトである請求項１の方法。７．該自己免疫性疾患が、多発性硬化症、リューマチ性関節炎、真性糖尿病、乾癬、器官固有自己免疫性疾患、慢性炎症性髄鞘脱落多神経根神経病およびギラン −バレ症候群で構成されるグループから選択される請求項１の方法。８．該動物にタイプ１インターフェロンを、該タイプ１インターフェロンが経口投与後に消化されるように経口投与するステップを含む、ヒトの多発性硬化症の重篤性、およびぶり返しの頻度を低下させる方法。９．該インターフェロンがアルファ−インターフェロンおよびベータ・インターフェロンから選択される請求項８の方法。 10．該インターフェロンがヒト組換えインターフェロン、ラット・インターフェロンおよびマウス・インターフェロンで構成されるグループから選択される請求項８の方法。 11．該インターフェロンが約５I.U./kgから約50,000I.U./kgの範囲で投与される請求項８の方法。 12．該インターフェロンが隔日に投与される請求項８の方法。 13．該動物がヒトである請求項８の方法。 14．該動物にタイプ１インターフェロンを、該タイプ１インターフェロンが経口投与後に消化されるように経口投与するステップを含む、動物の自己免疫性疾患に関連する炎症を減少させる方法。 15．該インターフェロンがアルファ−インターフェロンおよびベータ−インターフェロンから選択される請求項14の方法。 16．該インターフェロンがヒト組換えインターフェロン、ラット・インターフェロンおよびマウス・インターフェロンで構成されるグループから選択される請求項14の方法。 17．該インターフェロンが約50I.U./kgから約25,000I.U./kgの範囲の量で投与される請求項14の方法。 18．該動物がヒトである請求項14の方法。 19．該自己免疫性疾患が、多発性硬化症、リューマチ性関節炎、真性糖尿病、乾癬、器官固有自己免疫性疾患、慢性炎症性髄鞘脱落多神経根神経病およびギラン −バレ症候群で構成されるグループから選択される請求項14の方法。 20．該動物にタイプ１インターフェロンを、該タイプ１インターフェロンが経口投与後に消化されるように経口投与するステップを含くむ自己免疫性疾患の開始を抑止する方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/21 ＡＤＳＡ６１Ｋ 37/66 ＡＡＡ // Ｃ０７Ｋ 14/555 ＡＢＥＣ１２Ｎ 15/09 9282−4ＢＣ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＮ，ＦＩ，ＪＰ，ＫＲ，ＮＯ，ＮＺ，ＲＵ

Claims

【特許請求の範囲】１．動物の自己免疫性疾患を処置する方法において、該動物にタイプ１インターフェロンを経口的に投与するステップを含む方法。２．該インターフェロンがアルファ−インターフェロンおよびベータ−インターフェロンから選択される請求項１の方法。３．該インターフェロンがヒト組換えインターフェロン、ラット・インターフェロンおよびマウス・インターフェロンで構成されるグループから選択される請求項２の方法。４．該インターフェロンが約50I.U./kgから約25,000I.U./kgの範囲の量で投与される請求項２の方法。５．該インターフェロンを隔日に投与する請求項１の方法。６．該動物がヒトである請求項１の方法。７．該自己免疫性疾患が、多発性硬化症、リューマチ性関節炎、真性糖尿病、乾癬、器官固有自己免疫性疾患、慢性炎症性髄鞘脱落多神経根神経病、およびギラン−バレ症候群で構成されるグループから選択される請求項１の方法。８．該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含む、ヒトの多発性硬化症の重篤性、およびぶり返しの頻度を低下させる方法。９．該インターフェロンがアルファ−インターフェロンおよびベータ・インターフェロンから選択される請求項８の方法。 10．該インターフェロンがヒト組換えインターフェロン、ラット・インターフェロンおよびマウス・インターフェロンで構成されるグループから選択される請求項８の方法。 11．該インターフェロンが約５I.U./kgから約50,000I.U./kgの範囲で投与される請求項８の方法。 12．該インターフェロンが隔日に投与される請求項８の方法。 13．該動物がヒトである請求項８の方法。 14．該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含む、動物の自己免疫性疾患に関連する炎症を減少させる方法。 15．該インターフェロンがアルファ−インターフェロンおよびベータ−インターフェロンから選択される請求項14の方法。 16．該インターフェロンがヒト組換えインターフェロン、ラット・インターフェロン、およびマウス・インターフェロンで構成されるグループから選択される請求項14の方法。 17．該インターフェロンが約50I.U./kgから約25,000I.U./kgの範囲の量で投与される請求項14の方法。 18．該動物がヒトである請求項14の方法。 19．該自己免疫性疾患が、多発性硬化症、リューマチ性関節炎、真性糖尿病、乾癬、器官固有自己免疫性疾患、慢性炎症性髄鞘脱落多神経根神経病、およびギラン−バレ症候群で構成されるグループから選択される請求項14の方法。 20．該動物にタイプ１インターフェロンを経口投与するステップを含くむ自己免疫性疾患の開始を抑止する方法。