JPH09512433A

JPH09512433A - ズブチリシンｂｐｎ′変異体を含む布帛クリーニング組成物

Info

Publication number: JPH09512433A
Application number: JP7528271A
Authority: JP
Inventors: フレデリックザサードブロウド，フィリップ; リーバーネット，ボビー; ネルソンルービング，ドン; カマーゴウシュ，チャーンチャール
Original assignee: Procter and Gamble Co
Current assignee: Procter and Gamble Co
Priority date: 1994-05-02
Filing date: 1995-04-17
Publication date: 1997-12-16
Also published as: PE12396A1; MX9605359A; FI964411A0; FI964411A7; PE49595A1; FI964411L; EP0758373A1; CA2189428A1; ZA952220B; CN1151757A; AU2293195A; BR9507593A; NO964590L; WO1995029979A1; NO964590D0

Abstract

(57)【要約】本発明はズブチリシンＢＰＮ′変異体を含む布帛クリーニング組成物に関する。ＢＰＮ′変異体は具体的な特定の位置で野生型ズブチリシンＢＰＮ′に存在する場合とは異なるアミノ酸（即ち、置換）を有した１以上のアミノ酸位置を含み、それによりＢＰＮ′変異体は野生型ズブチリシンＢＰＮ′と比較して不溶性基質に対する減少した吸着性と増加した加水分解性を有している。

Description

【発明の詳細な説明】ズブチリシンＢＰＮ′変異体を含む布帛クリーニング組成物技術分野本発明は、ズブチリシン変異体であるプロテアーゼ酵素を含んだ布帛クリーニング組成物に関する。背景酵素は最大類の天然タンパク質を構成している。各類の酵素は通常異なる種類の化学反応を触媒する（消費されずに反応を促進する）。プロテアーゼとして知られる酵素の１種は、他のタンパク質を加水分解する（開裂される化学結合のいずれかの側における水分子のＨおよびＯＨ部分の取込みで化合物を２以上のより簡単な化合物に分解する）それらの能力について知られている。タンパク質を加水分解するこの能力は、洗濯洗剤製品への添加剤として天然およびタンパク質工学処理プロテアーゼを配合することにより利用されてきた。衣類上の多くの汚れはタンパク質性であり、広域特異性プロテアーゼはこのような汚れの除去性を実質上改善することができる。残念ながら、天然細菌環境下におけるこれらタンパク質の効力レベルは相対的に非天然の洗浄環境中にしばしば移行していない。特に、熱安定性、ｐＨ安定性、酸化安定性および基質特異性のようなプロテアーゼ特徴は、酵素の天然環境外での利用上必ずしも最良になっていない。プロテアーゼのアミノ酸配列がプロテアーゼの特徴を決定する。プロテアーゼのアミノ酸配列の変化は、酵素の性質を様々な程度に変えるかもしれないし、あるいはアミノ酸配列における変化の位置、性質および／または大きさに応じて酵素を不活化させることさえある。洗浄環境下でプロテアーゼの効力を増加させることを目標として、それらの性質を改善する試みに際し、プロテアーゼの野生型アミノ酸配列を変えるいくつかのアプローチが行われてきた。これらのアプローチには、全く多様な条件下で熱安定性を高めて酸化安定性を改善するために、アミノ酸配列を変えることを含む。当業界で記載された様々なアプローチにもかかわらず、布帛表面をクリーニングする上で有用なプロテアーゼの有効な変異体を含んだ組成物に関する必要性が継続して存在する。本発明の目的本発明はズブチリシン酵素変異体を含んでなる布帛クリーニング組成物の提供をその目的とする。概要本発明は、布帛表面をクリーニングするためにズブチリシンＢＰＮ′変異体を含んだ組成物に関する。これらの組成物で有用なＢＰＮ′変異体は、具体的な特定の位置で野生型ズブチリシンＢＰＮ′に存在する場合とは異なるアミノ酸（即ち、置換）を有した少くとも１、２または３つのアミノ酸位置を含み、それによりＢＰＮ′変異体は野生型ズブチリシンＢＰＮ′と比較して不溶性基質に対する減少した吸着性と増加した加水分解性を有している。説明Ｉ．布帛クリーニング組成物で有用なズブチリシン変異体本発明は、酵素についてコードする様々なヌクレオチド配列を変異させて酵素のアミノ酸配列を修正することにより修正されたズブチリシン酵素、特にＢＰＮ ′を含んでなる布帛クリーニング組成物に関する。本発明の組成物で有用な修正ズブチリシン酵素（以下、“ＢＰＮ′変異体”）は、野生型ズブチリシンと比較して、不溶性基質に対して減少した吸着性と増加した加水分解性を有している。これらのＢＰＮ′変異体のうちあるものは、Brodeらにより１９９３年９月１５日付で出願された同時係属出願Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／１２１，４３７に記載されている。本発明の組成物で有用なズブチリシン酵素は、プロテアーゼとして知られる酵素の１種に属する。プロテアーゼはペプチド結合の開裂用の触媒である。１タイプのプロテアーゼはセリンプロテアーゼである。セリンプロテアーゼは、活性部位に必須セリン残基があるという事実により識別される。可溶性基質の酵素加水分解速度が酵素濃度に応じて増加するという観察は、詳しく文献に記載されている。したがって、多くのクリーニング適用例で遭遇するような表面結合基質にとり、加水分解の速度が表面濃度の増加に従い増加することはもっともらしい。これは事例として示された（Brode,P.F.III and D.S.Rauc h,LANGMUIR,"Subtilisin BPN'：Activity on an Immobilized Substrate",Vol.8 ,pp.1325-1329(1992)）。実際に、表面濃度に対する速度の直線的依存性は、酵素の表面濃度が変えられたときに不溶性基質でみられた（Rubingh,D.N.and M.D. Bauer,"Catalysis of Hydrolysis by Proteases at the Protein-Solution Inte rface",in POLYMER SOLUTIONS,BLENDS AND INTERFACES,Ed.by I.Noda and D.N.R ubingh,Elsevier,p.464(1992)）。意外にも、より良いクリーニング性能を与える変異プロテアーゼに関するサーチでこの原理を適用しようとしたとき、我々は多く吸着する酵素ほど良い性能を与えるということを見い出せなかった。実際に、我々は意外にも、基質への酵素による吸着性が減少すると基質の加水分解性が増加する（クリーニング性能が良くなる）という、反対の事例を見い出した。以下の理論に拘束されないが、ある変異体を他と比較したときに改善された性能は、少なく吸着する酵素ほど強く結合されず、したがって不溶性タンパク質基質が除去されるべき表面上においてより高度に移動性であるという事実の結果であると考えられる。匹敵する酵素溶液濃度のとき、この増加した移動性はより高濃度の酵素を表面にデリバリーすることで付与されるいかなる利点よりも十分に越えている。本明細書にここで記載された変異は、表面結合汚れへの酵素の吸着性を変える（即ち、減少させる）ように設計されている。ＢＰＮ′において、１９９〜２２０位のアミノ酸は酵素分子上で大きな外部ループを形成している。このループは表面結合ペプチドへの酵素分子の吸着上有意な役割を果たして、このループにおける特異的変異はこの吸着上有意の効果を有することが発見された。以下の理論に拘束されないが、このループは少くとも２つの理由からＢＰＮ′分子の吸着にとり重要であると考えられる。第一に、この外部ループを含んだアミノ酸は分子が暴露されるいかなる表面とも密に接触することができる。第二に、ＢＰＮ′分子の活性部位および結合ポケットに対してのこのループの近接は、表面結合基質（ペプチド／タンパク質汚れ）への酵素の触媒生産性吸着に際して役割を有する。本明細書で用いられる“変異体”とは、野生型の場合とは異なるアミノ酸配列を有した酵素を意味する。本明細書で用いられる“変異ＢＰＮ′遺伝子”とは、ＢＰＮ′変異体についてコードする遺伝子を意味する。本明細書で用いられる“野生型ズブチリシンＢＰＮ′”とは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１で表されるズブチリシン酵素に関する。ズブチリシンＢＰＮ′のアミノ酸配列は、引用することにより本明細書の開示の一部とされるWells,J.A.,E.Fer rari,D.J.Henner,D.A.Estell and E.Y.Chen,NUCLEIC ACIDS RESEARCH,Vol.II,79 11-7925(1983)で更に記載されている。本明細書で用いられる“野生型アミノ酸配列”という用語は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１と、１９９〜２２０位以外のアミノ酸配列に修正を有するＳＥＱＩＤＮＯ：１とを包含している。本明細書で用いられる“より親水性のアミノ酸”とは、下記親水性表で対象アミノ酸よりも大きな親水性を有するあらゆる他のアミノ酸に関する。下記親水性表（表１）は親水性増加順として下位の方からアミノ酸を掲載している（Hopp,T .P.and Woods,K.R.,"Prediction of Protein Antigenic Determinants from Ami no Acid Sequences",PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCE USA,Vo l.78,pp.3824-3828,1981参照；引用することにより本明細書の開示の一部とされる）。表１はアミノ酸がどちらの電荷を有するかについて示している（この特徴は約８〜９のｐＨに基づいている）。正荷電アミノ酸はＡｒｇおよびＬｙｓであり、負荷電アミノ酸はＧｌｕおよびＡｓｐであり、残りのアミノ酸は中性である。本発明の好ましい態様において、置換アミノ酸は中性または負荷電であり、更に好ましくは負荷電（即ち、ＧｌｕまたはＡｓｐ）である。したがって、例えば、“中性であるかまたは負電荷を有する同等またはより親水性のアミノ酸でＧｌｎを置換する”という表現は、ＧｌｎがＡｓｎ（Ｇｌｎと同親水性である）あるいはＳｅｒ、ＧｌｕまたはＡｓｐ（Ｇｌｎより親水性である）で置換されることを意味する；それら各々は中性であるかまたは負電荷を有して、Ｇｌｎと比較して大きな親水価を有している。同様に、“中性であるかまたは負電荷を有するより親水性のアミノ酸でＰｒｏを置換する”という表現は、ＰｒｏがＧｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＧｌｕまたはＡｓｐで置換されることを意味する。Ａ．少くとも１つのアミノ酸置換を含む変異体本発明の１つの態様において、ＢＰＮ′変異体は野生型アミノ酸配列が１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１８、２１９または２２０位のうち１以上で置換された野生型アミノ酸配列からなり、それによりＢＰＮ′変異体は野生型ズブチリシンＢＰＮ′と比較して不溶性基質に対する減少した吸着性と増加した加水分解性を有している。好ましくは、置換アミノ酸を有する位置は１９９、２００、２０１、２０２、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２または２１５、更に好ましくは２００、２０１、２０２、２０５または２０７である。好ましくは、１９９位の置換アミノ酸はＣｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２００位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０１位の置換アミノ酸はＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０２位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０３位の置換アミノ酸はＭｅｔ、Ｃｙｓ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０４位の置換アミノ酸はＧｌｕである。好ましくは、２０５位の置換アミノ酸はＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０６位の置換アミノ酸はＰｒｏ、ＡｓｎまたはＳｅｒである。好ましくは、２０７位の置換アミノ酸はＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０８位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０９位の置換アミノ酸はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１０位の置換アミノ酸はＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１１位の置換アミノ酸はＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１２位の置換アミノ酸はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１３位の置換アミノ酸はＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１４位の置換アミノ酸はＰｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１５位の置換アミノ酸はＴｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１６位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１８位の置換アミノ酸はＧｌｕである。好ましくは、２１９位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２２０位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。更に好ましくは、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１９および２２０位のいずれに関する置換アミノ酸も、表１を参考にすると、中性または負荷電であり、野生型ズブチリシンＢＰＮ′の対象位置にあるアミノ酸と等しいかまたはそれより親水性、好ましくはより親水性である。更に一層好ましくは、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１９および２２０位のいずれに関する置換アミノ酸もＡｓｐまたはＧｌｕであり、２０４または２１８位の置換アミノ酸はＧｌｕである。Ｂ．少くとも２つのアミノ酸置換を含む変異体本発明のもう１つの態様において、ＢＰＮ′変異体は野生型アミノ酸配列が１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９または２２０位のうち２以上で置換された野生型アミノ酸配列からなり、それによりＢＰＮ′変異体は野生型ズブチリシンＢＰＮ′と比較して不溶性基質に対する減少した吸着性と増加した加水分解性を有している。好ましくは、置換アミノ酸を有する位置は１９９、２００、２０１、２０２、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２または２１５、更に好ましくは２００、２０１、２０２、２０５または２０７である。好ましくは、１９９位の置換アミノ酸はＣｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２００位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０１位の置換アミノ酸はＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０２位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０３位の置換アミノ酸はＭｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０４位の置換アミノ酸はＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０５位の置換アミノ酸はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０６位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０７位の置換アミノ酸はＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０８位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０９位の置換アミノ酸はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１０位の置換アミノ酸はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１１位の置換アミノ酸はＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１２位の置換アミノ酸はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１３位の置換アミノ酸はＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１４位の置換アミノ酸はＰｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１５位の置換アミノ酸はＴｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１６位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１７位の置換アミノ酸はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１８位の置換アミノ酸はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１９位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２２０位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。更に好ましくは、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９または２２０位のいずれに関する置換アミノ酸も、表１を参考にすると、中性または負荷電であり、野生型ズブチリシンＢＰＮ′の対象位置にあるアミノ酸と等しいかまたはそれより親水性、好ましくはより親水性である。更に一層好ましくは、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１４、２１５、２１６、２１８、２１９または２２０位のいずれに関する置換アミノ酸もＡｓｐおよびＧｌｕであり、２１７位の場合はＬｅｕ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、２１３位の場合はＡｓｐである。Ｃ．少くとも３つのアミノ酸置換を含む変異体本発明のもう１つの態様において、ＢＰＮ′変異体は野生型アミノ酸配列が１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９および２２０位のうち３以上で置換された野生型アミノ酸配列からなり、それによりＢＰＮ′変異体は野生型ズブチリシンＢＰＮ′と比較して不溶性基質に対する減少した吸着性と増加した加水分解性を有している。好ましくは、置換アミノ酸を有する位置は１９９、２００、２０１、２０２、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２または２１５、更に好ましくは２００、２０１、２０２、２０５または２０７である。好ましくは、１９９位の置換アミノ酸はＣｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２００位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０１位の置換アミノ酸はＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０２位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０３位の置換アミノ酸はＭｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０４位の置換アミノ酸はＡｓｐまたはＧｌｕからなる群より選択される。好ましくは、２０５位の置換アミノ酸はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０６位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０７位の置換アミノ酸はＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０８位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２０９位の置換アミノ酸はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１０位の置換アミノ酸はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１１位の置換アミノ酸はＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１２位の置換アミノ酸はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１３位の置換アミノ酸はＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１４位の置換アミノ酸はＰｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１５位の置換アミノ酸はＴｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１６位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１７位の置換アミノ酸はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１８位の置換アミノ酸はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２１９位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。好ましくは、２２０位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである。更に好ましくは、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９または２２０位のいずれに関する置換アミノ酸も、表１を参考にすると、中性または負荷電であり、野生型ズブチリシンＢＰＮ′の対象位置にあるアミノ酸と等しいかまたはそれより親水性、好ましくはより親水性である。更に一層好ましくは、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１４、２１５、２１６、２１８、２１９または２２０位のいずれに関する置換アミノ酸もＡｓｐまたはＧｌｕであり、２１７位の場合はＬｅｕ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、２１３位の場合はＡｓｐである。Ｄ．酵素変異体の製造例１変異ＢＰＮ′遺伝子野生型ズブチリシンＢＰＮ′遺伝子を含んだファージミド（ｐＳＳ‐５）（Mi tchinson,C.and J.A.Wells,(1989),"Protein Engineering of Disulfide Bonds in Subtilisin BPN'",BIOCHEMISTRY,Vol.28,pp.4807-4815）をEscherichia coli ｕｎｇ株ＣＪ２３６中に組み込んで形質転換させ、一本鎖ウラシル保有ＤＮＡ鋳型をＶＣＳＭ１３ヘルパーファージを用いて作製する（Kunkel,T.A.,J.D.Robe rts and R.A.Zakour,"Rapid and efficient site -specific mutagenesis witho ut phenotypic selection",METHODS IN ENZYMOLOGY,Vol.154,pp.367-382(1987) ；Yuckenberg,P.D.,F.Witney,J.Geisselsoder and J.McClary,"Site-directed i n vitro mutagenesis using uracil-containing DNA and phagemid vectors",DI RECTED MUTAGENESIS - A PRACTICAL APPROACH,ed.M.J.McPherson,pp.27-48(1991 )により修正；双方とも引用することにより本明細書の開示の一部とされる）。Z ollerおよびSmithの方法（Zoller,M.J．and M.Smith,"Oligonucleotide-directe d mutagenesis using M13-derived vectors: an efficient and general proced ure for the production of point mutations in any fragment of DNA",NUCLEI C ACIDS RESEARCH,Vol.10,pp.6487-6500(1982)；引用することにより本明細書の開示の一部とされる）の単一プライマー部位特異的変異誘発修正法を用いて、すべての変異体を作製する（基本的には、前掲のYuckenbergら,1991で表されたとおり）。オリゴヌクレオチドはApplied Biosystem Inc.３８０ＢＤＮＡシンセサイザーを用いて作る。変異誘発反応産物をEscherichia coli株ＭＭ２９４（American T ype Culture Collection E.coli ３３６２５）に組み込んで形質転換させる。すべての変異体をＤＮＡ配列決定により確認し、単離されたＤＮＡをBacillus s ubtilis発現株ＢＧ２０３６（Yang,M.Y.,E.Ferrari and D.J.Henner,(1984),"Cl oning of the Neutral Protease Gene of Bacillus subtillis and the Use of the Cloned Gene to Create an In Vitro-derived Deletion Mutation",JOURNAL OF BACTERIOLOGY,Vol.160,pp.15-21）に組み込んで形質転換させる。一部の変異体では、アミノ酸２１７位にフレームシフト停止コドン変異がある修正ｐＳＳ ‐５を用いて、ウラシル鋳型を作製する。オリゴヌクレオチドは２１７位で適正なリーディングフレームを復元するように考えて、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９および２２０位のランダム置換についてもコードさせる（これらのコドンにおいて３つすべての塩基に関する全部で４つのヌクレオチドの等モルおよび／または可変混合物）。フレームシフト停止を訂正して機能性酵素を産生する変異は、カゼインを消化するそれらの能力により同定する。ランダム置換はＤＮＡ配列決定より調べる。例２発酵関心あるズブチリシン変異体を含んだBacillus subtilis細胞（ＢＥ２０３６）をＬＢ‐グルコースブロスの１ｌ培養物中で中間対数期まで増殖させ、全容量１０ｌのBiostat ＥＤ醗酵槽（B.Braun Biotech,Inc.,Allentown,Pennsylvania ）中に接種する。発酵培地は酵母エキス、デンプン、消泡剤、緩衝剤および微量ミネラルを含有している（FERMENTATION: A PRACTICAL APPROACH,Ed.B.McNeil a nd L.M.Harvey,1990参照）。ブロスを発酵ラン中に７．０の一定ｐＨに保つ。クロラムフェニコールを変異誘発プラスミドの抗生物質選択用に加える。細胞をＡ₆₀₀ 約６０まで３７℃で一夜増殖させて、回収する。例３精製発酵ブロスは純粋な酵素を得るために下記ステップで用いる。ブロスから遠心によりBacillus subtilis細胞を除き、１００Ｋカットオフ膜で細かな粒子を除去することにより清澄化する。この後１０Ｋカットオフ膜で遠心し、フロー透析してイオン強度を減少させ、０．０２５ＭＭＥＳ緩衝剤（２‐（Ｎ‐モルホリノ）エタンスルホン酸）を用いてｐＨを５．５に調整する。酵素はそれを陽イオン交換クロマトグラフィーカラムまたはアフィニティ吸着クロマトグラフィーカラムにいれて、それをＮａＣｌまたはプロピレングリコール勾配でカラムから溶出させることにより更に精製する（Scopes,R.K.,PROTEIN PURIFICATION PRINCIP LES AND PRACTICE,Springer-Verlag,New York(1984)参照；引用することにより本明細書の開示の一部とされる）。ｐＮＡアッセイ（DelMar,E.G.,C.Largman,J.W.Brodrick and M.C.Geokas,ANAL .BIOCHEM.,Vol.99,pp.316-320(1979)；引用することにより本明細書の開示の一部とされる）を用いて、勾配溶出中に集められた画分について活性酵素濃度を調べる。このアッセイでは、酵素が可溶性合成基質スクシニル‐アラニン‐アラニン‐プロリン‐フェニルアラニン‐ｐ‐ニトロアニリド（ｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡ）を加水分解するとｐ‐ニトロアニリンが放出される速度を測定する。加水分解反応による黄色の発生速度を分光光度計において４１０ｎｍで測定するが、これは活性酵素濃度と比例している。更に、２８０ｎｍの吸光度測定も全タンパク質濃度を調べるために行う。活性酵素／全タンパク質比は酵素純度を示し、ストック溶液としてプールされる画分を確認するために用いる。貯蔵中に酵素の自己分解を避けるため、等重量のプロピレングリコールをクロマトグラフィーカラムから得られたプール画分に加える。精製操作の終了後、ストック酵素溶液の純度をＳＤＳ‐ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）でチェックし、絶対酵素濃度をトリプシンインヒビタータイプII‐Ｔ：Sigma Chemical Company（St.Louis,Missouri）から購入した七面鳥卵白を用いて活性部位滴定法により調べる。測定された変換ファクターは、酵素分子の様々な位置で起きるどの変化が可溶性基質ｐＮＡに対して野生型よりも増加した活性を有する酵素変異体を生じるのかについて示す。使用向け製造に際して、酵素ストック溶液は、プロピレングリコールを除去して緩衝剤を交換するために、Sephadex‐Ｇ２５（Pharmacia,Piscataway,New Jer sey）サイズ排除カラムで溶出させる。酵素ストック溶液中のＭＥＳ緩衝剤は、０．０１ＭＣａＣｌ₂を含有してＨＣｌで８．６にｐＨ調整された０．１Ｍトリス緩衝剤（トリス（ヒドロキシメチルアミノメタン））と交換する。すべての実験は２５℃に恒温されたトリス緩衝液中ｐＨ８．６で行う。Ｅ．酵素変異体の特徴付け例４モデル表面作製ＣＰＧ社（Fairfield,New Jersey）から購入したアミノプロピル制御多孔質ガラス（ＣＰＧ）を、Bachem,Inc．（Torrence,California）から購入したｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡ基質を共有結合させるための支持体として用いる。反応はジメチルスルホキシド中で行い、１‐エチル‐３‐〔３‐（ジメチルアミノ）プロピル〕カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）をカップリング剤として用いる。終了時（ｐＮＡアッセイでモニターする）、過剰溶媒を除去し、ＣＰＧ：ｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および二重蒸留水ですすぐ。この後、約７０℃でＮ₂パージしながらオーブン乾燥させる。固定基質の反応スキームおよび製造はBrode,P.F.III and D.S.Rauch,"Subtilisin BPN'：Activity on an Immob ilized Substrate",LANGMUIR,Vol.8,p.1325-1329(1992)で記載されたように行うが、その開示は引用することにより本明細書の開示の一部とされる。ＣＰＧ表面は６２，０００±７０００ｐＮＡ分子／μｍ²を有する。表面積は受け取ったＣＰＧに関してＣＰＧ社により報告された５０．０ｍ²／ｇの値から変わっていない。これはｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡをＣＰＧに加えるために用いた操作が多孔質構造にダメージを与えていないことを示唆している（平均径は４８６Å である）。例５表面加水分解アッセイＣＰＧ：ｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡを用いると、酵素変異体の吸着とＣＰＧ結合ペプチドの加水分解が単一実験で測定できる。少量の酵素変異体ストック溶液を脱気されたトリス緩衝液およびＣＰＧ：ｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡ含有のフラスコに加える。フラスコを９０分間にわたりリスト式シェーカー上で振盪させ、その間にシェーカーを様々な時間間隔で停止させる（例えば、吸着加水分解の初期段階では２分毎に‐例えば最初の２０分間‐実験の最後では１０分毎に）。ＣＰＧ：ｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡを静置して、溶液をサンプリングする。実験操作と吸着および加水分解の計算はいずれも前掲のBrodeら,1992で記載されたようにして行う。すべての酵素は自己分解に対する安定性についてモニターされ、この実験の経過中に明らかな自己分解喪失を示さない。したがって、酵素吸着は溶液からの減少分を測定することにより調べることができる。初期酵素変異体濃度と個々の各時点に測定された濃度との差異が、吸着された酵素変異体の量を表す。表面から加水分解されたｐＮＡの量は、４１０ｎｍでサンプルの一部について吸光度読取りを行うことにより測定する。加水分解されたｐＮＡの全量は、サンプリングされた量およびフラスコに残存する量を加えることにより計算する。この値は、酵素が存在しないときｐＨ８．６でトリス緩衝液により加水分解されたｐＮＡの量を差引くことにより補正する。この塩基加水分解は、酵素の効力に応じて、全加水分解の７〜２９％である。例６可溶性基質速度論的分析可溶性基質ｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡの加水分解速度は、ＤＵ‐７０分光光度計において４１０ｎｍで時間の関数として吸光度増加を測定することによりモニターする。酵素濃度は一定に保ち、６〜１０ナノモルの範囲内であるように調整するが、基質濃度は速度論的測定毎に９０〜７００μＭｓＡＡＰＦ‐ｐＮＡと様々である。吸光度データポイントは９００秒間にわたり毎秒測り、データをLOTUS^TM スプレッドシート（Lotus Development Corporation,Cambridge,Massachusetts ）に移す。速度論的パラメーターの分析は標準Lineweaver Burk分析により行い、その場合にランの初期部分（通常、最初の１分間）のデータを直線的回帰曲線に合わせて、ｖ_oを求める。ｖ_oおよびｓ_oデータを標準逆関数式にプロットして、Ｋ_Mおよびｋ_catを求める。Ｆ．例ＢＰＮ′変異体表面結合基質に対して減少した吸着性と増加した加水分解性を有する本発明のＢＰＮ′変異体は、下記表２で例示されている。特異的変異を表す上で、野生型に存在する本来のアミノ酸が最初に、位置番号が２番目に、置換アミノ酸が３番目に示されている。 II．布帛クリーニング組成物物質本発明の布帛クリーニング組成物は、前記ＢＰＮ′変異体に加えて、プロテアーゼ酵素と適合する１種以上のクリーニング組成物物質も含む。ここで用いられる“クリーニング組成物物質”という用語は、望まれるクリーニング組成物の具体的タイプと製品の形態（例えば、液体、顆粒、固形）からみて選択されるいずれかの液体、固体または気体物質を意味し、その物質は組成物で用いられるＢＰＮ′変異体とも適合しうる。クリーニング組成物物質の具体的選択はクリーニングされる布帛、使用（例えば、洗浄洗剤使用）時のクリーニング条件からみて望まれる組成物の形態を考慮することにより容易に行われる。ここで用いられる“ 適合”という用語は、プロテアーゼが通常の使用状況下で望まれるほど有効でないような程度までクリーニング組成物物質がＢＰＮ′変異体のタンパク質分解活性を減少させないことを意味する。具体的なクリーニング組成物物質は以下で詳細に例示されている。ここで用いられる“布帛クリーニング組成物”とは、限定されないが顆粒、液体および固形形態を含めた、布帛をクリーニングするための洗剤組成物のすべての形態に関する。好ましい布帛クリーニング組成物は液体形のものである。ここで用いられる“酵素変異体の有効量”とは、特定のクリーニング組成物で必要な酵素活性を出すために必要な酵素変異体の量に関する。このような有効量は当業者により容易に確認でき、用いられる具体的酵素変異体、クリーニング適用例、クリーニング組成物の具体的組成と、液体または乾燥（例えば、顆粒）組成物が必要かどうかなどのような多くのファクターに基づいている。好ましくは、本発明のクリーニング組成物は１種以上の酵素変異体を約０．０００１〜約１０％、更に好ましくは約０．００１〜約１％、更に一層好ましくは約０．０１〜約０．１％含有する。本発明の様々なクリーニング組成物のいくつかの例が、以下で更に詳細に記載されている。そこで用いられるすべての部、パーセンテージおよび比率は、他で指摘されないかぎり重量による。本発明の酵素変異体は、完全に処方された布帛洗濯組成物を提供するために、様々な慣用成分と共に用いることができる。このような組成物は液体、顆粒などの形をとることができる。このような組成物は３０〜６０重量％もの界面活性剤を含有した最新の“濃縮”洗剤として処方してもよい。本布帛クリーニング組成物は、場合により、好ましくは、様々なアニオン系、ノニオン系、双極性などの界面活性剤を含有することができる。このような界面活性剤は、典型的には組成物の約５〜約３５％のレベルで存在する。ここで有用な界面活性剤の非制限例には、慣用的なＣ₁₁‐Ｃ₁₈アルキルベンゼンスルホネートと一級およびランダムアルキルサルフェート、式ＣＨ₃（ＣＨ₂）_x （ＣＨＯＳＯ₃ ^-Ｍ⁺）ＣＨ₃およびＣＨ₃（ＣＨ₂）_y（ＣＨＯＳＯ₃ ^-Ｍ⁺）ＣＨ₂ＣＨ₃のＣ₁₀‐Ｃ₁₈二級（２，３）アルキルサルフェート（式中ｘおよび（ｙ＋１）は少くとも約７、好ましくは少くとも約９の整数であり、Ｍは水溶性カチオン、特にナトリウムである）、Ｃ₁₀‐Ｃ₁₈アルキルアルコキシサルフェート（特に、ＥＯ１〜５エトキシサルフェート）、Ｃ₁₀‐Ｃ₁₈アルキルアルコキシカルボキシレート（特に、ＥＯ１〜５エトキシカルボキシレート）、Ｃ₁₀‐Ｃ₁₈アルキルポリグリコシドおよびそれらの対応サルフェート化ポリグリコシド、Ｃ₁₂‐Ｃ₁₈ α‐スルホネート化脂肪酸エステル、Ｃ₁₂‐Ｃ₁₈アルキルおよびアルキルフェノールアルコキシレート（特に、エトキシレートおよび混合エトキシ／プロポキシ）、Ｃ₁₂‐Ｃ₁₈ベタインおよびスルホベタイン（“スルタイン”）、Ｃ₁₀‐Ｃ₁₈ アミンオキシドなどがある。アルキルアルコキシサルフェート（ＡＥＳ）およびアルキルアルコキシカルボキシレート（ＡＥＣ）がここでは好ましい（前記アミンオキシドおよび／またはベタインまたはスルタイン界面活性剤とこのような界面活性剤との併用も、処方者の希望に応じて好ましい）。他の慣用的で有用な界面活性剤は標準テキストに掲載されている。特に有用な界面活性剤には、引用することにより本明細書の開示の一部とされる、１９９３年３月１６日付で発行されたConnorらの米国特許第５，１９４，６３９号明細書で開示されたＣ₁₀‐Ｃ₁₈ Ｎ‐メチルグルカミドがある。他の活性成分、キャリヤ、ヒドロトロープ、加工助剤、色素または顔料、液体処方用溶媒などを含めて、布帛クリーニング組成物で有用な様々な他の成分を本組成物に含有させることができる。起泡性の一層の増加が望まれるならば、Ｃ₁₀ ‐Ｃ₁₆アルコールアミドのような起泡増進剤が典型的には約１〜約１０％レベルで組成物中に配合できる。Ｃ₁₀‐Ｃ₁₄モノエタノールおよびジエタノールアミドがこのような起泡増進剤の典型的種類である。このような起泡増進剤と前記のアミンオキシド、ベタインおよびスルタインのような高起泡性補助界面活性剤との併用も有利である。所望であれば、ＭｇＣｌ₂、ＭｇＳＯ₄などのような可溶性マグネシウム塩が、起泡性を追加するために、典型的には約０．１〜約２％のレベルで添加できる。本液体布帛クリーニング組成物は、キャリヤとして水および他の溶媒を含有することができる。メタノール、エタノール、プロパノールおよびイソプロパノールで例示される低分子量一級または二級アルコールが適切である。一価アルコールが界面活性剤を溶解させる上で好ましいが、約２〜約６の炭素原子と約２〜約６のヒドロキシ基を含んだもののようなポリオール（例えば、１，３‐プロパンジオール、エチレングリコール、グリセリンおよび１，２‐プロパンジオール）も使用できる。組成物はこのようなキャリヤを約５〜約９０％、典型的には約１０〜約５０％含有する。本布帛クリーニング組成物は、水性クリーニング操作で使用中に、洗浄水が約６．８〜約１１．０のｐＨを有するように処方されることが好ましい。このため、最終製品は典型的にはこの範囲で処方される。推奨される使用量レベルでｐＨをコントロールするための技術には緩衝剤、アルカリ、酸などの使用があり、これは当業者に周知である。本発明の布帛クリーニング組成物を処方するときに、処方者は約５〜約５０重量％のレベルで様々なビルダーを使用できる。典型的ビルダーには１〜１０ミクロンゼオライト、ポリカルボキシレート、例えばシトレートおよびオキシジサクシネート、積層シリケート、ホスフェートなどがある。他の慣用的ビルダーは標準処方集に掲載されている。同様に、処方者はこのような組成物中にセルラーゼ、リパーゼ、アミラーゼおよびプロテアーゼのような様々な追加酵素を、典型的には約０．００１〜約１重量％のレベルで使用することができる。様々な布帛ケア酵素が洗濯洗剤業界で周知である。ペルカーボネート、ペルボレートなどのような様々な漂白化合物が、典型的には約１〜約１５重量％のレベルでこのような組成物中に使用できる。所望であれば、このような組成物はテトラアセチルエチレンジアミン、ノナノイルオキシベンゼンスルホネートなどのようなブリーチ活性剤も含有することができ、これらも当業界で知られている。使用量レベルは、典型的には約１〜約１０重量％の範囲である。様々な汚れ放出剤、特にアニオン系オリゴエステルタイプ、様々なキレート化剤、特にアミノホスホネートおよびエチレンジアミンジサクシネート、様々な土汚れ除去剤、特にエトキシル化テトラエチレンペンタミン、様々な分散剤、特にポリアクリレートおよびポリアスパラテート、様々な増白剤、特にアニオン系増白剤、様々な起泡抑制剤、特にシリコーンおよび二級アルコール、様々な布帛柔軟剤、特にスメクタイトクレーなどはすべて約１〜約３５重量％範囲のレベルでこのような組成物に使用できる。標準処方集と公開された特許では、このような慣用物質の多数の詳細な記載を含んでいる。酵素安定剤も本発明のクリーニング組成物に用いてよい。このような酵素安定剤にはプロピレングリコール（好ましくは、約１〜約１０％）、ギ酸ナトリウム（好ましくは、約０．１〜約１％）およびギ酸カルシウム（好ましくは、約０．１〜約１％）がある。ａ．顆粒布帛クリーニング組成物本発明の顆粒布帛クリーニング組成物は、本発明の１種以上の酵素変異体を有効量で、好ましくは組成物の約０．００１〜約１０重量％、更に好ましくは約０．００５〜約５％、更に好ましくは約０．０１〜約１％の活性酵素を含有する。１種以上の酵素変異体に加えて、顆粒布帛クリーニング組成物は典型的には少くとも１種の界面活性剤、１種以上のビルダーと、一部の場合には漂白剤を含有する。本発明の顆粒布帛クリーニング組成物態様は下記例で説明される。例７〜１０顆粒布帛クリーニング組成物例７〜８において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体がＡｌａ２１６Ｇｌｕの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例９〜１０において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体のいずれの組合せがＡｌａ２１６ＧｌｕおよびＧｌｎ２０６Ｇｌｕ＋Ｔｙｒ２１７Ｌｅｕの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例１１〜１４顆粒布帛クリーニング組成物例１１〜１２において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体がＧｌｎ２０６Ｇｌｕ＋Ａｌａ２１６Ｇｌｕ＋Ｔｙｒ２１７Ｌｅｕの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例１３〜１４において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体のいずれの組合せがＧｌｎ２０６Ｇｌｕ＋Ａｌａ２１６Ｇｌｕ＋Ｔｙｒ２１７ＬｅｕおよびＰｒｏ２１０Ａｌａ＋Ｇｌｙ２１５Ｔｈｒの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例１５および１６顆粒布帛クリーニング組成物例１７および１８顆粒布帛クリーニング組成物例１９コンパクト顆粒布帛クリーニング組成物成分重量％アルキルサルフェート８．０アルキルエトキシサルフェート２．０３および７回エトキシル化Ｃ₂₅およびＣ₄₅アルコールの混合物６．０ポリヒドロキシ脂肪酸アミド２．５オライト１７．０積層シリケート／シトレート１６．０カーボネート７．０マレイン酸アクリル酸コポリマー５．０汚れ放出ポリマー０．４カルボキシメチルセルロース０．４ポリ（４‐ビニルピリジン）‐Ｎ‐オキシド０．１ビニルイミダゾールおよびビニルピロリドンのコポリマー０．１ＰＥＧ２００００．２ Val203Glu + Gln206Glu + Ala216Glu + Tyr217Leu ０．５リパーゼ０．２セルラーゼ０．２テトラアセチルエチレンジアミン６．０ペルカーボネート２２．０エチレンジアミン二コハク酸０．３起泡抑制剤３．５４，４′‐ビス（２‐モルホリノ‐４‐アニリノ‐ｓ‐トリアジン‐６‐イルアミノ）スチルベン‐２，２′‐ジスルホン酸二ナトリウム０．２５４，４′‐ビス（２‐スルホスチリル）ビフェニル二ナトリウム０．０５水、香料およびその他１００％まで例２０顆粒布帛クリーニング組成物成分重量％直鎖アルキルベンゼンスルホネート７．６Ｃ₁₆‐Ｃ₁₈アルキルサルフェート１．３７回エトキシル化Ｃ_14-15アルコール４．０ココアルキルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロリド１．４分散剤０．０７シリコーン液０．８クエン酸三ナトリウム５．０ゼオライト４Ａ１５．０マレイン酸アクリル酸コポリマー４．０ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸０．４ペルボレート１５．０テトラアセチルエチレンジアミン５．０スメクタイトクレー１０．０ポリ（オキシエチレン）（ＭＷ３００，０００）０．３ Tyr214Phe + Tyr217Asn ０．４リパーゼ０．２アミラーゼ０．３セルラーゼ０．２ケイ酸ナトリウム３．０炭酸ナトリウム１０．０カルボキシメチルセルロース０．２増白剤０．２水、香料およびその他１００％まで例２１顆粒布帛クリーニング組成物成分重量％直鎖アルキルベンゼンスルホネート６．９２タロウアルキルサルフェート２．０５７回エトキシル化Ｃ_14-15アルコール４．４３回エトキシル化Ｃ_12-15アルキルエトキシサルフェート０．１６ゼオライト２０．２シトレート５．５カーボネート１５．４シリケート３．０マレイン酸アクリル酸コポリマー４．０カルボキシメチルセルロース０．３１汚れ放出ポリマー０．３０ Val203Glu + Pro210Ala + Gly215Thr + Ala216Glu + Tyr217Leu ０．２リパーゼ０．３６セルラーゼ０．１３ペルボレート四水和物１１．６４ペルボレート一水和物８．７テトラアセチルエチレンジアミン５．０ジエチレントリアミンペンタメチルホスホン酸０．３８硫酸マグネシウム０．４０増白剤０．１９香料、シリコーン、起泡抑制剤０．８５その他１００％までｂ．液体布帛クリーニング組成物本発明の液体布帛クリーニング組成物は、本発明の１種以上の酵素変異体を有効量で、好ましくは組成物の約０．００５〜約５重量％、更に好ましくは約０．０１〜約１％の活性酵素を含有する。このような液体布帛クリーニング組成物は、典型的にはアニオン系界面活性剤、脂肪酸、水溶性洗浄ビルダーと水を更に含有する。本発明の液体布帛クリーニング組成物態様は下記例で説明される。例２２〜２６液体布帛クリーニング組成物例２２〜２４において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体がＧｌｎ２０６Ｇｌｕ＋Ａｌａ２１６Ｇｌｕ＋Ｔｙｒ２１７Ｌｅｕの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例２５〜２６において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体のいずれの組合せがＧｌｎ２０６Ｇｌｕ＋Ａｌａ２１６Ｇｌｕ＋Ｔｙｒ２１７ＬｅｕおよびＰｒｏ２１０Ａｌａ＋Ｇｌｙ２１５Ｔｈｒの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例２７〜２８顆粒布帛クリーニング組成物例２７および２８の各々において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体がＡｌａ２１６Ｇｌｕ＋Ｔｙｒ２１７Ｌｅｕの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例２９〜３１液体布帛クリーニング組成物ｃ．固形布帛クリーニング組成物手洗い汚れ布帛用に適した本発明の固形布帛クリーニング組成物は、本発明の１種以上の酵素変異体を有効量で、好ましくは組成物の約０．００１〜約１０重量％、更に好ましくは約０．０１〜約１％で含有する。本発明の固形布帛クリーニング組成物態様は下記例で説明される。例３３〜３６固形布帛クリーニング組成物例３３において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体がＶａｌ２０３Ｇｌｕの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例３４において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体がＴｙｒ２１４Ｐｈｅ＋Ｔｙｒ２１７Ａｓｎの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。例３５〜３６において、特に表２で列挙されたＢＰＮ′変異体のいずれの組合せがＶａｌ２０３ＧｌｕおよびＴｙｒ２１４Ｐｈｅ＋Ｔｙｒ２１７Ａｓｎの代わりに用いられても、実質上同様の結果である。本発明の具体的態様が開示されてきたが、本発明の様々な変更および修正が本発明の精神および範囲から逸脱せずに行えることは当業者にとり明らかであろう。本発明の範囲内に属するすべてのこのような修正を添付された請求の範囲ではカバーしていると考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｒ 1:125） (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:125） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ルービング，ドンネルソンアメリカ合衆国オハイオ州、シンシナチ、シード、ロード、8224 (72)発明者ゴウシュ，チャーンチャールカマーアメリカ合衆国オハイオ州、ウェスト、チェスター、パインミル、ドライブ、7005

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）野生型アミノ酸配列が１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１８、２１９または２２０位のうち１以上で置換されていて、ｉ．置換が１９９位で生じるとき、１９９位の置換アミノ酸はＣｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 ii．置換が２００位で生じるとき、２００位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 iii.置換が２０１位で生じるとき、２０１位の置換アミノ酸はＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 iv．置換が２０２位で生じるとき、２０２位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｖ．置換が２０３位で生じるとき、２０３位の置換アミノ酸はＭｅｔ、Ｃｙｓ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 vi．置換が２０４位で生じるとき、２０４位の置換アミノ酸はＧｌｕであり、 vii.置換が２０５位で生じるとき、２０５位の置換アミノ酸はＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 viii．置換が２０６位で生じるとき、２０６位の置換アミノ酸はＰｒｏ、ＡｓｎまたはＳｅｒであり、 ix．置換が２０７位で生じるとき、２０７位の置換アミノ酸はＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｘ．置換が２０８位で生じるとき、２０８位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xi．置換が２０９位で生じるとき、２０９位の置換アミノ酸はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xii.置換が２１０位で生じるとき、２１０位の置換アミノ酸はＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xiii．置換が２１１位で生じるとき、２１１位の置換アミノ酸はＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xiv.置換が２１２位で生じるとき、２１２位の置換アミノ酸はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xv．置換が２１３位で生じるとき、２１３位の置換アミノ酸はＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xvi.置換が２１４位で生じるとき、２１４位の置換アミノ酸はＰｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xvii．置換が２１５位で生じるとき、２１５位の置換アミノ酸はＴｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xviii.置換が２１６位で生じるとき、２１６位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xix.置換が２１８位で生じるとき、２１８位の置換アミノ酸はＧｌｕであり、 xx．置換が２１９位で生じるとき、２１９位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、および xxi.置換が２２０位で生じるとき、２２０位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕであることで特徴付けられ、ＢＰＮ′変異体が野生型ズブチリシンＢＰＮ′と比較して不溶性基質に対する減少した吸着性と増加した加水分解性を有していることで特徴付けられる、野生型アミノ酸配列を含むＢＰＮ′変異体の有効量；および（ｂ）ＢＰＮ′変異体と適合する１種以上のクリーニング組成物物質を含んでなる、布帛クリーニング組成物。２．ａ．置換が２０６位で生じるとき、２０６位の置換アミノ酸がＡｓｎまたはＳｅｒであり、ｂ．置換が２１１位で生じるとき、２１１位の置換アミノ酸がＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｃ．置換が２１４位で生じるとき、２１４位の置換アミノ酸がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、およびｄ．置換が２１５位で生じるとき、２１５位の置換アミノ酸がＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕである、請求項１に記載の布帛クリーニング組成物。３．２１６位が置換されているとき、Ｇｌｙが２１６位でＡｌａの代わりに用いられている、請求項２に記載の布帛クリーニング組成物。４．置換が１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１９または２２０位のうち１以上で生じるとき、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１９または２２０位のいずれにおける置換アミノ酸もＡｓｐまたはＧｌｕであり、置換が２０４または２０８位の一方または双方で生じるとき、２０４または２１８位の置換アミノ酸はＧｌｕである（置換は好ましくは１９９、２００、２０１、２０２、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２または２１５位のうち１以上で、更に好ましくは２００、２０１、２０２、２０５または２０７位のうち１以上で生じる）ことで特徴付けられる、請求項２に記載の布帛クリーニング組成物。５．置換が、ａ．２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、ｂ．２１６位でＡｌａの代わりにＡｓｐ、またはｃ．２０３位でＶａｌの代わりにＧｌｕであることで特徴付けられる単一アミノ酸置換を有している、請求項１に記載の布帛クリーニング組成物。６．（ａ）野生型アミノ酸配列が１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９または２２０位のうち２以上で置換されていて、ｉ．置換が１９９位で生じるとき、１９９位の置換アミノ酸はＣｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 ii．置換が２００位で生じるとき、２００位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 iii.置換が２０１位で生じるとき、２０１位の置換アミノ酸はＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 iv．置換が２０２位で生じるとき、２０２位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｖ．置換が２０３位で生じるとき、２０３位の置換アミノ酸はＭｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 vi．置換が２０４位で生じるとき、２０４位の置換アミノ酸はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 vii.置換が２０５位で生じるとき、２０５位の置換アミノ酸はＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 viii．置換が２０６位で生じるとき、２０６位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 ix．置換が２０７位で生じるとき、２０７位の置換アミノ酸はＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｘ．置換が２０８位で生じるとき、２０８位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、ＡｓｎまたはＳｅｒであり、 xi．置換が２０９位で生じるとき、２０９位の置換アミノ酸はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xii.置換が２１０位で生じるとき、２１０位の置換アミノ酸はＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xiii．置換が２１１位で生じるとき、２１１位の置換アミノ酸はＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xiv.置換が２１２位で生じるとき、２１２位の置換アミノ酸はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xv．置換が２１３位で生じるとき、２１３位の置換アミノ酸はＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xvi.置換が２１４位で生じるとき、２１４位の置換アミノ酸はＰｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、ＡｓｎまたはＳｅｒであり、 xvii．置換が２１５位で生じるとき、２１５位の置換アミノ酸はＴｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xviii.置換が２１６位で生じるとき、２１６位の置換アミノ酸はＨｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xix.置換が２１７位で生じるとき、２１７位の置換アミノ酸はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xx．置換が２１８位で生じるとき、２１８位の置換アミノ酸はＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、 xxi.置換が２１９位で生じるとき、２１９位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、および xxii．置換が２２０位で生じるとき、２２０位の置換アミノ酸はＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであることで特徴付けられ、ＢＰＮ′変異体が野生型ズブチリシンＢＰＮ′と比較して不溶性基質に対する減少した吸着性と増加した加水分解性を有していることで特徴付けられる、野生型アミノ酸配列を含むＢＰＮ′変異体；および（ｂ）ＢＰＮ′変異体と適合する１種以上のクリーニング組成物物質を含んでなる、布帛クリーニング組成物。７．野生型ＢＰＮ′が２つの位置で置換されている、請求項６に記載の布帛クリーニング組成物。８．２つの置換が、ａ．２１０位でＰｒｏの代わりにＡｌａ、および２１５位でＧｌｙの代わりにＴｈｒ、ｂ．２１４位でＴｙｒの代わりにＰｈｅ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＡｓｎ、ｃ．２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＬｅｕ、ｄ．２０５位でＩｌｅの代わりにＬｅｕ、および２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、ｅ．２０５位でＩｌｅの代わりにＬｅｕ、および２１６位でＡｌａの代わりにＡｓｐ、ｆ．２０６位でＧｌｎの代わりにＧｌｕ、および２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、ｇ．２１６位でＡｌａの代わりにＡｓｐ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＬｅｕ、またはｈ．２０６位でＧｌｎの代わりにＧｌｕ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＬｅｕであることで特徴付けられる、請求項７に記載の布帛クリーニング組成物。９．ａ．置換が２０６位で生じるとき、２０６位の置換アミノ酸がＧｌｕ、ＡｓｎまたはＳｅｒであり、ｂ．置換が２１０位で生じるとき、２１０位の置換アミノ酸がＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｃ．置換が２１１位で生じるとき、２１１位の置換アミノ酸がＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｄ．置換が２１４位で生じるとき、２１４位の置換アミノ酸がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、およびｅ．置換が２１５位で生じるとき、２１５位の置換アミノ酸がＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであることで特徴付けられる、請求項７に記載の布帛クリーニング組成物。１０．置換が１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９または２２０位で生じるとき、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９または２２０位のいずれにおける置換アミノ酸もＡｓｐまたはＧｌｕであり、置換が２１３位で生じるとき、２１３位の置換アミノ酸はＡｓｐである（置換は好ましくは１９９、２００、２０１、２０２、２０５、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２または２１５位のうち２以上で生じ、更に好ましくは置換が２００、２０１、２０２、２０５または２０７位のうち２以上で生じる）ことで特徴付けられる、請求項６に記載の布帛クリーニング組成物。１１．２１６位のＡｌａがＧｌｕまたはＡｓｐで置換され、２１７位でのＴｙｒがＬｅｕで置換されている、請求項６に記載の布帛クリーニング組成物。１２．野生型ＢＰＮ′が３つの位置で置換されている、請求項６に記載の布帛クリーニング組成物。１３．３つの置換が、ａ．２０６位でＧｌｎの代わりにＰｒｏ、２１１位でＧｌｙの代わりにＡｌａ、および２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、ｂ．２０５位でＩｌｅの代わりにＶａｌ、２１０位でＰｒｏの代わりにＡｌａ、および２１３位でＬｙｓの代わりにＧｌｕ、またはｃ．２０６位でＧｌｎの代わりにＧｌｕ、２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＬｅｕである、請求項１２に記載の布帛クリーニング組成物。１４．ａ．置換が２０６位で生じるとき、２０６位の置換アミノ酸がＡｓｎまたはＳｅｒであり、ｂ．置換が２１０位で生じるとき、２１０位の置換アミノ酸がＧｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｃ．置換が２１１位で生じるとき、２１１位の置換アミノ酸がＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｄ．置換が２１４位で生じるとき、２１４位の置換アミノ酸がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、およびｅ．置換が２１５位で生じるとき、２１５位の置換アミノ酸がＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕであることで特徴付けられる、請求項１２に記載の布帛クリーニング組成物。１５．野生型ＢＰＮ′が４つの位置または５つの位置で置換されている、請求項６に記載の布帛クリーニング組成物。１６．置換が、ａ．２０３位でＶａｌの代わりにＧｌｕ、２０６位でＧｌｎの代わりにＧｌｕ、２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＬｅｕ、ｂ．２０３位でＶａｌの代わりにＧｌｕ、２１０位でＰｒｏの代わりにＡｌａ、２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＬｅｕ、ｃ．２０３位でＶａｌの代わりにＧｌｕ、２０６位でＧｌｎの代わりにＧｌｕ、２１５位でＧｌｙの代わりにＴｈｒ、２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＬｅｕ、またはｄ．２０３位でＶａｌの代わりにＧｌｕ、２１０位でＰｒｏの代わりにＡｌａ、２１５位でＧｌｙの代わりにＴｈｒ、２１６位でＡｌａの代わりにＧｌｕ、および２１７位でＴｙｒの代わりにＬｅｕである、請求項１５に記載の布帛クリーニング組成物。１７．組成物が液体の形である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の布帛クリーニング組成物。１８．組成物が組成物の重量％で少くとも約５％の界面活性剤と少くとも約５％のビルダーを含んでなる、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の布帛クリーニング組成物。１９．クリーニングする必要のある布帛を請求項１〜１８のいずれか一項に記載された組成物と接触させることを含む、布帛をクリーニングするための方法。