JPH09512803A - 新規のペプチド作用物質およびその製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 化合物Me₂Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl・HClが記載される。これは、Z-Val-Val-MeVa-Pro-OR¹〔この場合、ＺおよびＲ¹は明細書中に記載の意味を有する〕から得られる。この化合物は、抗腫瘍形成活性を示す。

Description

【発明の詳細な説明】 新規のペプチド作用物質およびその製造 本発明は、新規のペプチド作用物質ならびにその製造および該作用物質の製造 に適当な出発物質に関する。 ＰＣＴ出願のＷＯ ９３／２３４２４には、重要な抗腫瘍形成活性を有するペ プチドを基礎とする作用物質が記載されている。次式： 〔式中、Ｍｅ₂ＶａｌはＮ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリンを表わし、ＭｅＶａｌは Ｎ−メチル−Ｌ−バリンを表わし、Ｂｚｌはベンジル基を表わす〕を有する記載 されたＰＣＴ出願の実施例２３４のペンタペプチドは、１つの特に良好な作用を 示す。 ペプチドは、記載されたＰＣＴ出願によれば、固体相法によりプロリンから出 発して製造することができる。この場合、作用物質は、劣悪な収量で汚染された 形で生成される。費用のかかるクロマトグラフィー処理による精製が必要とされ る。その上、固体相法は、 少量の物質量の製造にのみ適している。これまで、ＷＯ ９３／２３４２４の実 施例２３４の物質を結晶形で製造することは、成功しなかった。この作用物質は 、樹脂として存在する。それによって、溶剤残基の完全な分離は困難である。高 価な生成過程（噴霧乾燥、凍結乾燥）が必要とされる。物質の製剤学的な後処理 は、困難である。この物質の試験および導入のために、よりいっそう大量の物質 量が必要とされる。この物質の製造のために、作用物質をできるだけ結晶形で供 給する工業的に実現可能な方法が必要とされる。 ところで、作用物質をラセミ化なしに高い純度で生じ、したがって物質を困難 なしに結晶塩、塩酸塩、に変換することができる１つの方法が見出された。 本発明の対象は、式 Z-Val-Val-MeVal-Pro-OR¹ ＩＩ 〔式中、 Ｒ¹はＣ_1〜5−アルキル基を表わし、 Ｚはフェニル環が置換されていてもよいベンシルオキシカルボニル保護基を表わ す〕の化合物から、 Ａａ）Ｎ末端で保護基Ｚを分解し、こうして得られた化合物に対して １）遊離アミノ基をＮ末端で２回メチル化し、 ２）アルコキシ基−ＯＲ¹をＣ末端で加水分解し、かつ ３）こうして得られた式 Me₂Val-Val-MeVal-Pro-OH Ｖ の化合物をプロリンベンジルアミドＸＩＩとカップリングするかまたは Ｂａ）Ｃ末端でアルコキシ基−ＯＲ¹を除去し、 ｂ）こうして得られた式 Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH ＩＸ の化合物をプロリンベンジルアミドとカップリングし、こうして得られた式 Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl ＸＩ の化合物を １）Ｎ末端で保護基を遊離し、かつ ２）遊離アミノ基に対してＮ末端で２回メチル化し、 こうして得られた化合物を塩酸塩に変換することからなる、Me₂Val-Val-MeVal-P ro-Pro-NHBzl-HClの製造法である。 方法Ａは、次の反応式により進行する： 上記の反応式中の置換基は、本明細書中の全般に亘って次の意味を有している ： Ｒ¹：Ｃ_1〜5−アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル 、ｎ−ブチル、第三ブチル、イソブチル、ペンチル、特にメチルおよびエチル、 Ｒ²：第三ブチル、２−エチルヘキシル、Ｃ_1〜4−アルコキシ、例えばメトキシ 、エトキシ、イソブトキ シ、 Ｚ：フェニル環が場合によってはハロゲン、Ｃ_1〜4−アルキル、Ｃ_1〜4−アルコ キシ、Ｃ_1〜4−アシルオキシまたはニトロ、および殊に２−Ｃｌ、３−Ｃｌ、４ −Ｃｌ、４−Ｂｒ、４−ＣＨ₃Ｏ−、４−ＣＨ₃ＣＯＯ−、２−ＮＯ₂および４− ＮＯ₂によって置換されたベンジルオキシカルボニル、 Ｂｚｌ：ベンジル、 Ｍｅ：メチル。 テトラペプチドエステルＩＩは、適当な溶剤中、例えばメタノール、エタノー ル、イソプロパノール、ブタノールのようなアルコール、ＴＨＦ、ジオキサン、 ＭＴＢＥのようなエーテル、酢酸エチルエステルのようなエステルまたは氷酢酸 中で溶解される。例えばＰｄ／ＣまたはＰｔ／Ｃのような適当な触媒の添加後に 、０〜５０℃、有利に１０〜３０℃の温度で水素が導入される。水素の導入は、 常圧下または１０バールまでの高められた圧力下で行なうことができる。反応は 、或程度の排ガス流を許容する場合には、促進させることができる。水素導入の 終結後に、ホルムアルデヒド２〜５当量は、水溶液の形またはガス状またはパラ ホルムアルデヒドの形で添加される。引続き、さらに上記の条件下で水素は導入 される。その後に、触媒は 濾別される。ＩＶは、適当な溶剤または溶剤混合物からの塩酸塩としての結晶化 によって精製させることができる。この場合、イソプロパノール／メチル−第三 ブチルエーテルは有利であることが証明された。ＩＶ中のＺ−テトラペプチドエ ステルの痕跡は、抽出分離法によって除去することもできる。 エステルＩＶの鹸化は、適当な溶剤中、例えばメタノール、エタノール、イソ プロパノールのようなアルコール、ＭＴＢＥ、ＴＨＦ、ジオキサンのようなエー テル、トルオール、キシロールのような炭化水素、または１，２−ジクロルエタ ン、塩化メチレン、クロロホルムのような塩素化炭化水素中で水素の添加ありで および水素の添加なしにＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨのような適当な塩基を用い て行なうことができる。また、エステル分解は、酸によって行なうこともできる 。Ｒ¹＝第三ブチルについては、そのために特にＣＦ₃ＣＯ₃Ｈおよびジオキサン 中のＨＣｌの溶液が適当である。 得られたテトラペプチド酸Ｖは、次いでプロリンベンジルアミドＸＩＩとカッ プリングされ、ペンタペプチドＩに変換されなければならない。この種のカップ リング反応の場合には、ラセミ化が容易に生じる。従って、ペッティト（G．pet tit）他（J．Am．Chem．Soc．113，6692-6693(19910)）は、カップリング試薬Ｄ ＥＰＣ［（ＯＥｔ）₂ＰＯＣＮ］としてのテトラペ プチド酸を用いての類似のカップリングに使用している。ＤＥＰＣは、大量には 購買できない。従って、この方法は、有毒な燐試薬およびシアン化物試薬を用い る付加的な処理過程を必要とする。 シアン化物含有廃棄物は、廃棄物処理問題を引き起こす。従って、この方法は 、工業的な実施には不適当である。特に簡単に工業的な規模で実現させることが できるペプチドカップリング法は、混合無水物法である（例えば、J．Meienhofe r著、The Peptides，Analysis，Synthesis，Biology，第１巻，Academic Press ，Orlando，1979，第２６４〜３１４頁参照）。この場合、酸Ｖは、適当な塩基 、例えば第三アミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキ シルエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンで脱プロトン化され、ＶＩに変 わる。また、式ＩＶのエステルは、ＮａＯＨ、ＫＯＨのような塩基を用いて直接 に塩ＶＩに変換することもできる。化合物ＶＩは、酸塩化物ＣｌＣＯＲ²を用い て式ＶＩＩの混合無水物に変換される。塩化ピバロイルとともに、例えば２−エ チルヘキサン酸クロリド、クロル蟻酸エチルエステル、クロル蟻酸メチルエステ ルおよびクロル蟻酸イソブチルエステルを使用してもよい。混合無水物は、極め て強いラセミ化傾向を有している（例えば、J．Meienhofer著、The Peptides、 第１巻、Academic Press，Orlando，1979，第２７９頁以降参照）。 ところで、意外なことに、混合無水物法により完全にラセミ化なしに反応させ ることができた。特に良好な結果は、Ｖおよび塩化ピバロイルから得られた混合 無水物を用いて達成された。新たに刊行された結果（N．L．Benoiton他、Can．J ．Chem．65，619-625(1987)）とは異なり、塩化ピバロイルとの反応、このこと は選択性および収量に関連する、によりクロル蟻酸エステルとの反応の場合より も良好な結果が生じる。混合無水物ＶＩＩの製造およびプロリンベンジルアミド との次のカップリングは、−２０〜＋５℃の温度で適当な溶剤中、例えばジオキ サン、ＮＭＰ、ＴＨＦ、トルオール、塩化メチレン、ジメチルホルムアミド中で 実施される。また、プロリンベンジルアミドＸＩＩの代わりに、この化合物の塩 、例えば硫酸水素塩、メチルスルホネート、塩酸塩または臭化水素塩を使用する こともできる。この場合には、さらに１当量の塩基、例えばトリエチルアミンを 添加しなければならない。ペプチドのカップリングおよび常用の抽出による後処 理の後に、粗製生成物は、適当な溶剤中、例えばトルオール、キシロールのよう な炭化水素、またはジエチルエーテル、ＴＨＦ、ジオキサン、メチル−第三ブチ ルエーテルのようなエーテル、アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン 、シクロヘキサノンのようなケトン、または塩化メチレン、クロロホルム、１， ２−ジクロルエタンのような塩素化溶剤中に溶解され る。ガス状ＨＣｌの導入または例えばＴＨＦ、メタノール、イソプロパノール、 ｎ−ペンタノール、ジイソプロピルエーテルのような適当な溶剤中のＨＣｌの溶 液の供給により、塩酸塩Ｉは沈殿される。この場合には、ペンタペプチドの遊離 塩基をまずメチルエチルケトンに溶解し、かつ引続きイソプロパノール中のＨＣ ｌの溶液を添加するような１つの方法が特に有効であることが証明された。 方法Ｂは、次の反応式により進行する： エステルＩＩの鹸化、混合無水物Ｘの製造およびＸＩへのペプチドカップリン グは、合成順序ＩＶ→Ｖ→ＶＩ→ＶＩＩ→Ｉと同様にして行なわれる。Ｚ保護基 の分解およびＩへのジメチル化は、反応ＩＩ→ＩＩＩ→ＩＶと同様にして行なわ れる。 また、変法Ｂの場合には、混合無水物法は、意外な ことに、ラセミ化なしに進行する。ベノイトン（Benoiton）によって刊行された 結果とは異なり、最高の収量は、酸ＩＸおよび塩化ピバロイルから得られた混合 無水物を用いて達成される。 ペプチドＩの製造に必要とされる出発物質ＩＩは、Z-Val-O-CO-R²（XIII）お よびVal-MeVal-Pro-OR¹（XIV）から得ることができる。 この新規方法は、作用物質Ｉを結晶形で供給する。ペプチドは、簡単な方法で 再結晶によってさらに精製することができる。費用のかかるクロマトグラフィー 処理による精製過程は、不必要である。 また、本発明は、Ｉを製造するための次の前駆物質にも関する： Z-Val-Val-MeVal-Pro-OR¹ ＩＩ Val-Val-MeVal-Pro-OR¹ ＩＩＩ Me₂Val-Val-MeVal-Pro-O-CO-R² ＶＩＩ Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH ＩＸ Z-Val-Val-MeVal-Pro-O-CO-R² Ｘ Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl ＸＩ 上記式中、 Ｒ¹およびＺは、請求項３に記載の意味を有し、Ｒ²は、第三ブチル、２−エチル ヘキシル、Ｃ_1〜4−アルコキシ、メトキシ、エトキシおよびイソブトキシを表わ す。 化合物Ｉは、硬い腫瘍（肺、胸、腸、膀胱、腸内、 子宮、前立腺の腫瘍）、白血病、リンパ腫および別の腫瘍形成性疾患に抗して有 効である。 次の実施例につき本発明を詳説する。 例１（方法Ａ） Ａ．出発物質の製造 ａ．Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe（II，R¹＝Me） ４００ ｌの水素化容器中に、メタノール３２０ ｌ中のZ-Val-MeVal-Pro-OM e（VIII）３９．６ｋｇ（８３．３モル）を５％のパラジウムカーボン４ｋｇと 一緒に装入した。引続き、冷却下に２０〜３０℃で、反応溶液中にエダクトがも はや検出されなくなるまで水素を導入した。触媒を容器内容物の放出の際に濾別 した。後処理のために、４００ ｌのエナメル製容器中で水ポンプ真空下に５０ ｌになるまで濃縮した。引続き、トルオール５０ ｌを供給し、２Ｎ ＨＣｌ ４０ ｌで抽出した。トルオール相をなお１回１Ｎ塩酸４０ ｌでさらに抽出 し、次いで放出した。捕集された酸性の水相を容器中に返送し、塩化メチレン４ ０ ｌを下層に敷き、引続き５０％の苛性ソーダ液の供給によって強力に撹拌し ながら冷却下にｐＨ９にもたらした。相分離後、塩化メチレン相を放出させ、水 相をなお２回塩化メチレン４０ ｌずつでさらに抽出した。生成物の捕集された 塩化メチレン溶液を水で中和されるまで洗浄する。引続き、塩化メチレン相を９ ０ ｌに濃縮する。Val-MeVal-Pro-OMe（XIV，R¹＝CH ₃ ）が得られた。 ２４．２ｋｇの収量＝８５．２％。 ４００ ｌの容器中に、Ｚ−バリン１７．８４ｋｇ（７０．８８モル）および 塩化メチレン１７０ ｌ中のトリエチルアミン４．５９ｋｇ（７４．４２モル） を溶解する。この溶液に−５〜−１０℃でピバリン酸クロリド８．５８ｋｇ（７ ０．８８モル）を供給する。−５℃で２時間の反応時間後、−５℃で塩化メチレ ン８６ ｌ中のVal-MeVal-Pro-OMe２４．２ｋｇの溶液を供給した。−５℃でさ らに２時間後、２０℃に昇温させ、この温度で１２時間撹拌した。後処理のため に、水５０ ｌを添加した。水相の分離後、有機相を１回２Ｎ塩酸４０ ｌで抽 出し、かつ２回２Ｎ苛性ソーダ液４０ ｌずつで抽出した。有機相を水で中和さ れるまで洗浄した後、溶剤の塩化メチレンを留去し、かつジイソプロピルエーテ ル３００ ｌによって置き換えた。生成物の油の乳濁液を生成物の結晶化のため に６０℃に昇温させ、接種結晶化を開始させ、かつ６０℃で７時間維持した。結 晶化を完結させるために、順次に５０℃で５時間および４０℃で５時間さらに撹 拌し、引続き２０℃に冷却した。結晶懸濁液を１２０ ｌの圧力フィルターによ り濾別し、かつ窒素流中で乾燥させた。 収量： ３２．２ｋｇ＝７９％ 融点： １３４〜１３５℃ ｂ．プロリンベンジルアミド塩酸塩（XII x HCl） Ｚ−プロリン９９．７ｇおよびＣＨ₂Ｃｌ₂ １ ｌ中のトリエチルアミン５８ ｍｌの溶液に−１０〜−１５℃でピバリン酸クロリド４８．２ｇを滴加した。− １０℃で４５分間さらに撹拌し、引続き−１０℃で０．５時間でＣＨ₂Ｃｌ₂５０ ０ｍｌ中のベンジルアミン４２．８ｇを添加した。引続き、ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液を２ 回水で洗浄し、２回１０％のＮａＨＣＯ₃水溶液５００ｍｌで洗浄し、２回水５ ００ｍｌで洗浄し、２回５％のクエン酸水溶液５００ｍｌで洗浄し、かつ２回水 ５００ｍｌで洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、かつ蒸発濃縮した。酢酸エステル ２００ｍｌ中に引き取られた残留物１２０ｇが残留した。酢酸エステル溶液に１ Ｎヘプタン１．２ ｌを添加し、１時間撹拌し、吸引濾過し、かつ５０℃で真空 中で乾燥した。 収量：１１０ｇ、８１．３％ 融点：９３〜９４℃ こうして得られたＺ−プロリンベンジルアミド１１０ｇをメタノール１．５ ｌ中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ ０．５ｇ（１０％）の添加後、水素を導入した。こ の溶液に室温で１．５時間でＨ₂ ０．５ ｌを入れた。こうして得られたプロ リンベンジルアミド４１３ｇをイソプロパノール４００ｍｌ中に溶解した。イソ プロパノール中のＨＣｌの飽和溶液６３０ｍｌを添加し、生成された懸濁液を０ 〜５℃で２時間撹拌し、吸 引濾過し、かつ２回イソプロパノール２５０ｍｌで洗浄した。プロリンベンジル アミド４０１ｇが得られた；α_Ｄ ^２０：−４５° Ｂ．最終生成物の製造 ａ．１ Me₂Val-Val-MeVal-Pro-OMe x HCl（IV x HCl,R¹＝Me） ４００ ｌの水素化容器中に、Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe（II,R¹＝Me）２０ｋ ｇ（３４．８モル）をメタノール２００ ｌ中の５％のパラジウムカーボン２ｋ ｇと一緒に装入した。引続き、冷却下に２０℃で、反応溶液中にエダクトがもは や検出されなくなるまで水素を導入した。引続き、３７％のホルムアルデヒド水 溶液８．４６ｋｇ（１０４モル）を添加し、水素の導入が終結するまで２０℃で さらに水素添加した。触媒を容器内容物の放出の際に濾別した。後処理のために 、４００ ｌのエナメル製容器中で水ポンプ真空下に５０ ｌになるまで濃縮し た。その後に、イソプロパノール２００ ｌを供給し、かつ再び５０ ｌに濃縮 した。引続き、メチル−第三ブチルエーテル１３５ ｌ中に溶解し、かつ冷却下 に２０℃で１当量のイソプロパノール性ＨＣｌを添加した。生成された懸濁液を なお２０℃で３〜４時間さらに撹拌し、０〜５℃で２時間さらに撹拌し、ついで １２０ ｌの圧力フィルターにより濾過した。フィルターケーキを１回新しいメ チル−第三ブチルエーテル５０ ｌで洗浄した。 収量：１６．２ｋｇ＝９２．３％ 融点：２２４℃（分解） ａ．２ 中間段階Val-Val-MeVal-Pro-OMe（III,R¹＝CH₃）は、第１の水素添加過程後に 次のように後処理した場合には、同様に分離可能であった： 反応溶液を触媒から分離し、かつ蒸発濃縮した。残留物を酢酸エステル中に引 き取った。酢酸エステル溶液を２回２Ｎ塩酸で抽出した。酸性の水相を苛性ソー ダ液でｐＨ９に調節し、かつ２回塩化メチレンで抽出した。引続き、塩化メチレ ン相を中和されるまで洗浄し、かつ蒸発濃縮した。 ＨＰＬＣ ９６．８％ ａ．３ Me₂Val-Val-MeVal-Pro-OMe x HCl（IV x HCl,R＝Me）の製造は、中間段階Z-Va l-Val-MeVal-Pro-OMe（II,R¹＝Me）の分離および精製を断念するような次の製造 法により行なうこともできる： ４ ｌのフラスコ中でＺ−バリン１２８ｇ（０．５ １モル）およびトリエチルアミン５５．１ｇ（０．５４モル）を塩化メチレン１ ．２ ｌ中に溶解した。この溶液に−５℃〜−１０℃でピバリン酸クロリド６２ ．１ｇ（０．５１モル）を供給した。−５℃で２時間の反応時間後、塩化メチレ ン０．８ ｌ中のVal-MeVal-Pro-OMe１７４．６ｇ（０．５１モル）の溶液を供 給し、さらに−５℃で２時間撹拌し、次いで２０℃に昇温させた後さらに２時間 撹拌した。その後に、このバッチ量に水３７０ｍｌを添加した。相分離後、塩化 メチレン相を１回２Ｎ塩酸２９０ｍｌで洗浄し、２回２Ｎ苛性ソーダ液２９０ｍ ｌずつで洗浄し、かつ３回水３７０ｍｌで洗浄した。引続き、溶剤の塩化メチレ ンを蒸発させ、かつメタノール３ ｌによって置き換えた。この溶液に水１１０ ｍｌ中の５％のパラジウムカーボン３０ｇの懸濁液を添加し、２５℃でガス化撹 拌装置および水素ビュレットを用いて１当量の水素が導入されるまで水素添加し た。その後に、３７％のホルムアルデヒド水溶液１２３ｇ（１．５３モル）を添 加し、さらに２当量の水素がさらに導入されるまで水素添加した。その後に、触 媒を分離し、かつ回転蒸発器で蒸発濃縮した。残留する油をイソプロパノール６ ７０ｍｌおよびメチル−第三ブチルエーテル２．６ ｌ中に溶解した。この溶液 に１当量のイソプロパノール性ＨＣｌを添加した。生成された懸濁液を２０℃で １２時間に亘ってさらに撹拌し、次いで吸引濾過した 。フィルターケーキを僅かなメチル−第三ブチルエーテルで洗浄し、引続き４０ ℃で真空乾燥箱中で乾燥させた。 収量：１８２．８ｇ＝７１％ 融点：２２４℃（分解） ｂ．Me₂Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl x HCl （I） ４００ ｌの容器中でMe₂Val-Val-MeVal-Pro-OMe x HCl(IV x HCCl,R¹＝CH₃) １５．９ｋｇ（３１．５モル）をトルオール１４０ ｌおよびメタノール１５ ｌと一緒に装入した。そのために、水酸化ナトリウムペレット３．１５ｋｇ（７ ６．３８モル）を添加した。完全な鹸化後、即ち２０℃で３時間後、イソプロパ ノール性ＨＣｌの添加によって中和した。引続き、トルオールを用いての共沸蒸 留で１００ミリバールでアルコールおよび水がなくなるまで蒸留した。留去され た溶剤を連続的にトルオールによって置き換えた。引続き、塩化メチレン８０ ｌおよびトリエチルアミン６．４４ｋｇ（６３．０モル）（含量：９９％）を添 加し、−５℃に冷却し、かつこの温度でピバリン酸クロリド３．８４ｋｇ（３１ ．５モル）を供給した。２時間の反応時間後、−５℃〜０℃でＰｒｏ−ＮＨＢｚ ｌｘＨＣｌ ７・６ｋｇ（３１．５モル）を滴加した。２時間後、−５℃で２０ ℃に昇温させ、なおさらに６時間反応させた。引続き、５００ミリバールで添加 された塩化メチレンを留去し、かつトルオール８０ ｌを添加した。その後に、水５０ ｌを添加し、水相のｐＨ値をｐＨ９に調節し た。強力な撹拌後、水相を分離し、有機相を１回水２５ ｌでさらに洗浄した。 引続き、有機相を２回２Ｎ塩酸５０ ｌずつで抽出した。生成物を酸性の水相か ら９へのｐＨの調節後に塩化メチレン５０ ｌずつで３回抽出することによって 再抽出した。塩化メチレン相を水で中和されるまで洗浄した後、塩化メチレンを 留去し、かつメチルエチルケトン１８０ ｌによって置き換えた。この溶液を４ ０℃に昇温させ、１当量（３１．５モル）のイソプロパノール性ＨＣｌを添加し た。生成された懸濁液を６０℃に昇温させ、引続きさらに熱を供給することなく １２時間撹拌した。引続き、２０℃に冷却し、かつさらに５時間撹拌した。その 後に、５℃に冷却し、かつ１２０ ｌの圧力フィルターにより濾過した。フィル ターケーキを５℃の冷たい新しいメチルエチルケトン６０ ｌで洗浄した。フィ ルター上での前乾燥後、生成物を真空乾燥箱中で４０℃で重量が一定になるまで 乾燥させた。 収量：１４．３６ｋｇ＝６７％ 融点：２１４℃（分解） 例２（方法Ｂ） ａ．Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH(IX) ２ ｌのフラスコ中でZ-Val-Val-MeVal-Pro-OMe(II，R1＝Me,例１Ａａ)１１７ ｇ（０．２モル）をメタノ ール９００ｍｌおよび水４７．５ｍｌ中に溶解した。引続き、水酸化ナトリウム ペレット１８ｇ（０．４５モル）を添加し、かつ２０℃で１２時間撹拌した。後 処理のために、水２５０ｍｌを添加し、メタノールを留去した。その後に、澄明 な相分離が生じるような程度に多量の酢酸エステルを添加した（約５００ｍｌ） 。酢酸エステルを分離した。水相を塩酸でｐＨ１の酸性にし、かつ２回塩化メチ レン５００ｍｌで抽出した。引続き、有機相を乾燥するまで蒸発濃縮した。 収量：１０５ｇ＝９６．４％ ｂ．Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl(XI) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH５ｇ（８，７５ミリモル）（ＩＸ）をＣＨ₂Ｃｌ₂５０ ｍｌ中に溶解し、トリエチルアミン１．７９ｇ（１７．５ミリモル）を滴加し、 １０℃に冷却し、かつこの温度でピバリン酸クロリド１．０８ｇ（８．７５ミリ モル）を滴加した。１０℃で２時間の撹拌後、この温度でメタノール１０ｍｌ中 のＰｒｏ−ＮＨＢｚｌｘＨＣｌ ２．１１ｇ（８．７５ミリモル）を滴加し、１ ０℃で２時間さらに撹拌し、かつ室温で一晩中さらに撹拌した。 この反応混合物を３回水５０ｍｌずつで洗浄し、１ 回ｐＨ９で水５０ｍｌで洗浄し、かつなお２回水５０ｍｌずつで洗浄した。塩化 メチレン溶液を回転分離した。残留物として、白色の結晶性生成物５．３ｇ（８ １．４％）が残留した（純度：８８．７％）。 融点：１１８〜１２２℃ ｃ．Me₂Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl x HCl （I） Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl １２ｇ(XI)をメタノール２００ｍｌ中に溶 解した。そのために、５％のパラジウムカーボン２ｇ（水２０ｍｌで懸濁させた ）を添加し、かつ水素の導入が終結するまで２０℃で水素添加した。引続き、３ ７％のホルムアルデヒド水溶液６．５ｇを添加し、かつさらに水素の導入が終結 するまでさらに水素添加した。その後に、触媒を分離し、反応溶液を蒸発濃縮さ せた。残留物をトルオール中に入れ、再び蒸発濃縮させ、再びトルオール２００ ｍｌを添加し、かつ濾過した。引続き、トルオール性溶液を２回２Ｎ塩酸５０ｍ ｌで抽出した。酸性の水相を苛性ソーダ液でｐＨ９にもたらし、かつ３回塩化メ チレン５０ｍｌで抽出した。塩化メチレン相を水で中和するまで洗浄し、かつ蒸 発濃縮させた。粗製塩基をメチルエチルケトン１５０ｍｌおよびイソプロパノー ル７，５ｍｌの溶液中に引き取った。この溶液から２５％のイソプロパノール性 ＨＣｌ ４ｇの添加によって４０℃で生成物の塩を沈殿させた。懸濁液を２０℃ で３時間さらに撹拌し、０〜５℃で１時間さらに撹拌 し、かつ引続き吸引濾過した。 収量：７．１ｇ 含量：９９．１％（ＨＰＬＣ−面百分率） 融点：２１４℃（分解）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｃ Ａ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＵＡ， ＵＳ (72)発明者 エルンスト ブッシュマン ドイツ連邦共和国 Ｄ−67069 ルートヴ ィッヒスハーフェン ゲオルク−ルートヴ ィッヒ−クレープス−シュトラーセ 10 (72)発明者 アンドレアス ハウプト アメリカ合衆国 01581 マサチューセッ ツ ウエストボロー ローズウッド プレ イス ２ (72)発明者 ロタール ヤニチュケ ドイツ連邦共和国 Ｄ−67259 クライン ニーデスハイム ヴォルムザー ガッセ ９アー (72)発明者 ベルント ヤンセン ドイツ連邦共和国 Ｄ−67063 ルートヴ ィッヒスハーフェン ロイシュナーシュト ラーセ 18アー (72)発明者 ウルリッヒ カール ドイツ連邦共和国 Ｄ−67061 ルートヴ ィッヒスハーフェン グリューナーシュト ラーセ ７ (72)発明者 アンドレアス クリング ドイツ連邦共和国 Ｄ−68239 マンハイ ム リーゲラー ヴェーク 14 (72)発明者 シュテファン ミュラー ドイツ連邦共和国 Ｄ−67346 シュパイ アー クロスヴェーク ７ (72)発明者 ベルント デ ポッツォリ ドイツ連邦共和国 Ｄ−67098 バート デュルクハイム フィギリエンシュトラー セ 10アー (72)発明者 クルト リッター ドイツ連邦共和国 Ｄ−69115 ハイデル ベルク アルベルト−マイス−シュトラー セ 12 (72)発明者 マルコ ティエス ドイツ連邦共和国 Ｄ−67061 ルートヴ ィッヒスハーフェン メンデルゾーンシュ トラーセ 31 (72)発明者 トーマス ツィールケ ドイツ連邦共和国 Ｄ−67459 ベール− イッゲルハイム アカツィエンシュトラー セ 12

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．Me₂Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl・HCl （I）。 ２．結晶形のMe₂Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl・HCl （I）。 ３．Me₂Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl・HClを製造する方法において、 式ＩＩ Z-Val-Val-MeVal-Pro-OR¹ ＩＩ 〔式中、 Ｒ¹はＣ_1〜5−アルキル基を表わし、 Ｚはフェニル環が置換されていてもよいベンシルオキシカルボニル保護基を表 わす〕の化合物から、 Ａａ）Ｎ末端で保護基Ｚを分解し、こうして得られた化合物に対して １）遊離アミノ基をＮ末端で２回メチル化し、 ２）アルコキシ基−ＯＲ¹をＣ末端で加水分解し、かつ ３）こうして得られた式 Me₂Val-Val-MeVal-Pro-OH Ｖ の化合物をプロリンベンジルアミドＸＩＩとカップリングするかまたは Ｂａ）Ｃ末端でアルコキシ基−ＯＲ¹を除去し、 ｂ）こうして得られた式 Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH ＩＸ の化合物をプロリンベンジルアミドとカップリングし、こうして得られた式 Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl ＸＩ の化合物を １）Ｎ末端で保護基を遊離し、かつ ２）遊離アミノ基に対してＮ末端で２回メチル化し、 こうして得られた化合物を塩酸塩に変換することを特徴とする、Me₂Val-Val-M eVal-Pro-Pro-NHBzl・HClの製造法。 ４．式ＶもしくはＩＸのテトラペプチドカルボン酸をプロリンベンジルアミドと のカップリングのためにまずピバリン酸と混合した無水物に変換する、請求項３ 記載の方法。 ５．式 Z-Val-Val-MeVal-Pro-OR 1 ＩＩ Val-Val-MeVal-Pro-OR¹ ＩＩＩ Me₂Val-Val-MeVal-Pro-O-CO-R² ＶＩＩ Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH ＩＸ Z-Val-Val-MeVal-Pro-O-CO-R² Ｘ Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHBzl ＸＩ 〔上記式中、 Ｒ¹およびＺは、請求項３に記載の意味を有し、 Ｒ²は、第三ブチル、２−エチルヘキシル、Ｃ₁〜₄−アルコキシ、メトキシ、 エトキシおよびイソブ トキシを表わす〕の請求項１に記載の化合物Ｉを製造するための前駆生成物。