JPH0959164A - 抗炎症剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 炎症に対する治療効果及び予防効果に優れ、
副作用が低いと共に、安価に供給できる抗炎症剤を提供
する。 【解決手段】 リン酸基が導入されたキチン又はその塩
類を有効成分とする。また、リン酸基とカルボキシメチ
ル基が導入されたキチン又はその塩類を有効成分とす
る。そして、前記キチンが、カルボキシメチル基が導入
された後にリン酸基が導入されたキチンである。さら
に、前記リン酸基が、尿素を含有するジメチルホルムア
ミドを溶媒とし且つオルトリン酸をリン酸化剤としてキ
チンに導入されたリン酸基である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、炎症の治療や予
防等に有用な医薬である抗炎症剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】周知のように、炎症とは、微小循環系が
分布している組織に対し、外来性の異物、物理的エネル
ギー、損傷等の有害刺激が加わった場合に生じる局所性
の反応である。有害刺激の加わった組織の微小循環系は
一過性に収縮した後、拡大し、通常は閉じている毛細血
管床が開き、血流量が増加する。さらに、細静脈領域の
血管内皮細胞間隙が開くことにより、この間隙を通じて
血漿成分、多形核白血球、単球、リンパ球等の細胞成分
が組織間質へ浸出する血管透過亢進現象が起こる。これ
らの血漿成分、細胞成分によって生成される活性因子系
の作用により、組織細胞の増殖が促進され、修復へと導
かれるのである。

【０００３】しかしながら、炎症反応は、生体にとって
有利な反応ばかりではない。すなわち、組織間質に浸潤
した多数の多形核白血球や単球等が、蛋白分解酵素や活
性酸素等を放出することによって、肺、肝臓、腎臓等の
臓器、あるいは関節、筋肉等に対して損傷を引き起こす
ことがある。このような炎症反応により主要臓器が障害
を受けた場合、生体は重篤な状態に追い込まれることに
なる。例えば、近年、多発する傾向にある成人呼吸窮迫
症候群（ＡＲＤＳ）は、肺における多形核白血球の突発
的な組織間質への浸潤によって引き起こされる難病であ
り、その治療法が発症メカニズムの点から検討されてい
る。

【０００４】一般的に、上記のような炎症反応の治療や
予防等を目的とした従来の抗炎症剤としては、副腎皮質
ホルモン剤（ステロイド剤）や非ステロイド剤等が繁用
されており、その消炎メカニズムは、炎症細胞自体の機
能を抑制するもの、又は炎症産物を分解あるいは吸着し
て無毒化するものである。また、Ｓｉａｌｙｌ−Ｌｅｗ
ｉｓ Ｘ等の糖鎖を利用して血管内皮細胞の白血球接着
レセプターをブロックすることにより、白血球の組織間
質への浸潤を防止する研究（ＮＡＴＵＲＥ、３６４巻、
８号、１４９−１５１頁，発行所 Macmillan Magazines
Ltd. ）も行われている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
抗炎症剤においては、その治療効果が満足できるもので
はなかった。例えば、副腎皮質ホルモン剤（ステロイド
剤）においては、感染誘発、副腎皮質機能抑制等の副作
用が認められ、非ステロイド剤においても、ステロイド
剤と比較して毒性は低いものの、薬効の点で十分ではな
い。また、Ｓｉａｌｙｌ−Ｌｅｗｉｓ Ｘについては、
製造に手間が掛かり、値段も高価であるため、大量供給
が困難である等の問題点があった。

【０００６】この発明は、上記のような事情や問題点に
鑑みてなされたものであって、炎症に対する治療効果及
び予防効果に優れ、副作用が低いと共に、安価に供給で
きる抗炎症剤を提供することを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】すなわち、この発明の請
求項１記載の抗炎症剤は、リン酸基が導入されたキチン
又はその塩類を有効成分とするものである。請求項２記
載の抗炎症剤は、リン酸基とカルボキシメチル基が導入
されたキチン又はその塩類を有効成分とするものであ
る。請求項３記載の抗炎症剤は、請求項２記載の発明に
おいて、前記キチンが、カルボキシメチル基が導入され
た後にリン酸基が導入されたキチンであることを特徴と
するものである。請求項４記載の抗炎症剤は、請求項１
乃至３のいずれか記載の発明において、前記リン酸基
が、尿素を含有するジメチルホルムアミドを溶媒とし且
つオルトリン酸をリン酸化剤としてキチンに導入された
リン酸基であることを特徴とするものである。

【０００８】

【発明の実施の形態】次に、この発明の実施の形態につ
いて説明する。実施の形態に係る抗炎症剤は、リン酸基
が導入されたキチン又はその塩類を有効成分とするも
の、あるいはリン酸基とカルボキシメチル基が導入され
たキチン又はその塩類を有効成分とするものである。

【０００９】ここで、前記リン酸基が導入されたキチ
ン、及びリン酸基とカルボキシメチル基が導入されたキ
チンとは、構成単糖としてＮ−アセチル−Ｄ−グルコサ
ミンとＤ−グルコサミンを有し且つＤ−グルコサミンの
割合が２０％以下のもの、又はＮ−アセチル−Ｄ−グル
コサミンのみからなる多糖であるキチンに、リン酸基、
あるいはリン酸基とカルボキシメチル基を導入した構造
を有するものである。

【００１０】前記リン酸基が導入されたキチン、及びリ
ン酸基とカルボキシメチル基が導入されたキチンの製造
方法としては、例えばカニ、エビ等の甲殻、イカの軟甲
等から蛋白の除去、及び灰分の除去を行って抽出したキ
チンをリン酸化、あるいはリン酸化及びカルボキシメチ
ル化する方法を挙げることができる。

【００１１】前記リン酸化の方法としては、メタンスル
ホン酸を溶媒として五酸化二リンを用いる方法等、公知
の方法（例えば「キチン、キトサンハンドブック」，第
７章，「７．１０ その他」，キチン、キトサン研究会
編，１９９５年２月２５日１版１刷発行，技報堂出版）
を用いることができるが、特に、尿素を含有するジメチ
ルホルムアミドを溶媒とし、且つオルトリン酸をリン酸
化剤とする方法を用いた場合には、上記のメタンスルホ
ン酸のような強酸を使用せず、よりマイルドな条件でリ
ン酸基の導入を行うことができるので、リン酸基が導入
されたキチン、あるいはリン酸基とカルボキシメチル基
が導入されたキチンを、より高分子量で得ることができ
るという利点がある。このようにして、本発明品を高分
子量としておけば、生体内で代謝されにくいため、長期
間その効果を持続させることができる。

【００１２】また、前記カルボキシメチル化の方法とし
ては、キチンを高濃度の水酸化ナトリウム水溶液中でモ
ノクロロ酢酸と反応させる方法（「キチン、キトサンハ
ンドブック」，第７章，「７．１０ その他」，キチ
ン、キトサン研究会編，１９９５年２月２５日１版１刷
発行，技報堂出版）を挙げることができる。

【００１３】なお、リン酸基とカルボキシメチル基が導
入されたキチンを製造する場合におけるリン酸化とカル
ボキシメチル化の順序としては、カルボキシメチル化を
行った後にリン酸化を行うのが操作上、効率が良い。該
リン酸基とカルボキシメチル基が導入されたキチンは、
また、リン酸基が導入されたキチンと比較して生体適合
性が高く、より低毒性であるという利点を有している。

【００１４】また、上記のリン酸化やカルボキシメチル
化に際しては、リン酸化剤やカルボキシメチル化剤の添
加量、反応時間、反応温度等を適宜調節すれば、リン酸
基、あるいはカルボキシメチル基の置換度を調節するこ
とができる。

【００１５】ここで、リン酸基が導入されたキチンの構
成単糖当たりのリン酸基の置換度は、０．１〜２．０、
好ましくは０．１〜１．５の範囲であることが望まし
い。なお、構成単糖当たりのリン酸基の置換度が０．１
未満である場合は、水に溶けにくいため取り扱いが困難
であると共に、抗炎症剤としての効果も低いものであ
る。

【００１６】また、リン酸基とカルボキシメチル基が導
入されたキチンの構成単糖当たりのリン酸基及びカルボ
キシメチル基の置換度は、共に０．０５〜１．９、好ま
しくは０．０５〜１．５の範囲が良く、且つ双方の置換
度の和が、構成単糖当たり０．１〜２．０の範囲である
ことが望ましい。なお、構成単糖当たりの双方の置換度
の和が０．１未満である場合は、水に溶けにくいため取
り扱いが困難であると共に、抗炎症剤としての効果も低
いものである。

【００１７】一方、リン酸基が導入されたキチンの塩、
及びリン酸基とカルボキシメチル基が導入されたキチン
の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウ
ム塩等の無機塩基との塩、及びジエタノールアミン塩、
シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基との
塩等、医学的に許容し得る塩が含まれる。

【００１８】なお、リン酸基が導入されたキチン又はそ
の塩類、あるいはリン酸基とカルボキシメチル基が導入
されたキチン又はその塩類の投与量は、生体内において
目的とする治療効果を生ずるに十分な量であり、一般に
体重１ｋｇ当たり０．０１〜２００ｍｇ、好ましくは
０．１〜１００ｍｇであり、必要に応じて、例えば１日
当たり１〜４回、あるいは１週間間隔等、任意の回数や
間隔で投与できるが、目安として、高分子量のもの（分
子量２００００以上）は３〜７日間隔、低分子量のもの
（分子量２００００以下）は数時間〜２日間隔で投与す
るのが望ましい。ここでいう分子量とは、標準物質とし
てプルランを用いたＨＰＬＣ分析より得られる数平均分
子量である。

【００１９】また、投与方法としては、経口、経気管、
肛門、鼻、局所（舌下を含む）、膣、注射（皮下、筋肉
内、静脈内、頭蓋内、脊髄腔内（硬膜外及びクモ膜下腔
内）、皮内、胸腔、及び腹腔を含む）、塗布等の任意の
方法をとることができるが、好ましい投与経路は、炎症
の部位や程度等により異なる。

【００２０】投与に際しては、リン酸基が導入されたキ
チン、あるいはリン酸基とカルボキシメチル基が導入さ
れたキチンを、上記の投与方法に適した有機又は無機の
個体、又は液体賦形剤等の医薬用担体と混合して製剤と
して投与することができる。このような製剤には、錠
剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の個体、及び液剤、乳
剤、懸濁剤等の液体や軟膏が含まれる。また、必要に応
じて補佐薬、安定剤、乳化剤、ｐＨ調節剤等の添加剤を
加えることもできる。

【００２１】上記のように構成されるリン酸基が導入さ
れたキチン又はその塩類、あるいはリン酸基とカルボキ
シメチル基が導入されたキチン又はその塩類を有効成分
とする抗炎症剤の作用効果については、現在のところ明
確に解明されてはいないが、上記のリン酸基が導入され
たキチン、リン酸基とカルボキシメチル基が導入された
キチン、又はこれらの塩類が、炎症反応における有害刺
激により引き起こされる白血球の血管内皮への接着を阻
害することによって、血管外への白血球の浸潤を抑制
し、炎症反応を抑えるものと考えられる。

【００２２】

【実施例】次に、実施例を挙げてこの発明を詳細に説明
するが、この発明はかかる実施例に限定されるものでは
ない。

【００２３】（実施例１）スルメイカの軟甲１０ｋｇを
フェザーミル（５ｍｍスクリーン通過）により粉砕し、
粉砕物を１規定の水酸化ナトリウム水溶液（３０リット
ル）に投入し、９０℃で１時間保持した後、洗液が中性
になるまで水洗し、続いて０．１規定の塩酸水溶液に１
時間浸漬した。次に再度、洗液が中性になるまで水洗し
た後、更に１規定の水酸化ナトリウム水溶液（９０℃）
中に１時間保持し、水洗後、オーブン（５０℃）で１０
時間乾燥し、精製イカキチン１．２ｋｇを得た。この精
製イカキチンを遠心流動化ミルにて粉砕し、１００メッ
シュ以下の微粉末に粉砕した。

【００２４】そして、ジメチルホルムアミド１５０ｍｌ
に尿素１５０ｇを加え、１００℃に加温して溶解させた
溶液に、前記微粉末状キチン１０ｇを加えて分散させ
た。別に、８５％リン酸３０ｍｌに五酸化リンを１２ｇ
加え、１５時間還流して脱水した後、室温まで放冷する
ことによってオルトリン酸を調製した。このオルトリン
酸２６ｍｌを前記キチンのジメチルホルムアミド分散液
に加え、１５０℃にて３時間撹拌してキチンにリン酸基
を導入した。この反応溶液に脱イオン水１０００ｍｌを
加え、リン酸基が導入されたキチンを溶解させた後、こ
の溶液を１０規定の水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐ
Ｈを１１に調整し、不溶部を遠心分離にて除去し、上澄
み液を１０日間透析した。さらに、透析後の溶液を濃縮
し、凍結乾燥を行ってリン酸基が導入されたキチンのナ
トリウム塩、約１２ｇを得た。

【００２５】得られたリン酸基が導入されたキチンのナ
トリウム塩を３ｍｇ量り取り、濃硫酸１．５ｍｌ、過塩
素酸０．５ｍｌを加えて１００℃で２．５時間分解を行
った。反応溶液を冷却後、脱イオン水で希釈して５０ｍ
ｌとし、試料溶液とした。この試料溶液を１０ｍｌ取
り、これに５Ｎ硫酸３．４ｍｌ、アミドール試液（２，
４−ジアミノフェノール二塩酸塩０．５ｇと亜硫酸ナト
リウム１０．０ｇを脱イオン水に溶解させて５０ｍｌと
したもの）２ｍｌ、モリブデン試薬（モリブデン酸アン
モニウム８．３ｇを脱イオン水に溶解させて１００ｍｌ
としたもの）２ｍｌをそれぞれ加え、２０分間放置し
た。次いで、７６０ｎｍでの吸光度を測定し、リン酸二
水素カリウムを標準物質とした検量線よりリン含有量を
求め、置換度を算出した結果、１．３であった。分子量
は、標準物質としてプルランを用いたＨＰＬＣ分析の結
果、約９７０００であった。

【００２６】上記のようにして製造したリン酸基が導入
されたキチンのナトリウム塩を、生理食塩水に５ｍｇ／
ｍｌの濃度で溶解させ、１規定の塩酸及び１規定の水酸
化ナトリウムでｐＨを７．４に調製し、体重２．８ｋ
ｇ、２歳の雑種、雌猫の口内炎の治療に使用した。

【００２７】上記により調製したリン酸基が導入された
キチンの溶液３ｍｌを７日間隔で橈側皮静脈に投与（体
重１ｋｇ当たり約５．４ｍｇ投与）したところ、血中の
白血球数が、投与開始前では３２０００個／μｌであっ
たのが、投与開始後１週間で１１２００個／μｌと正常
値を示し、投与開始後２週間で口内炎の症状が完全に消
失していた。なお、投与を開始した直後、若干の発疹を
生じることがあったが、一過性の症状であり、重度の副
作用あるいは毒性と思われる症状は観察されなかった。

【００２８】（実施例２）上記実施例１で製造した精製
イカキチンの微粉末２０ｇを、４℃にて、０．２％のド
デシル硫酸ナトリウムを含む６０％の水酸化ナトリウム
水溶液８０ｍｌに分散させ、４℃を保持したまま１時間
撹拌して粘稠な溶液とした。この粘稠な溶液をマイナス
２０℃で約１０時間凍結した後、イソプロピルアルコー
ル２００ｍｌを添加し、室温になるまで徐々に加温して
凍結させた粘稠な溶液を徐々に融解させた。次いで、融
解させた溶液を十分に撹拌しながら、反応系が中和され
るまでモノクロロ酢酸を数回に分けて加え、生じた生成
物を濾過して集め、エタノール５００ｍｌで洗浄した。
この生成物を５００ｍｌの脱イオン水に溶解させ、不溶
部を遠心分離によって除去した後、２０００ｍｌのアセ
トン中に滴下して沈殿を生成させた。この沈殿を濾過に
よって回収し、再度脱イオン水５００ｍｌに溶解させた
後、１２日間透析した。さらに、透析後の溶液を濃縮
し、凍結乾燥を行ってカルボキシメチル基が導入された
キチン、約１５．３ｇを得た。

【００２９】得られたカルボキシメチル基が導入された
キチンの置換度は、元素分析の結果より０．６であり、
分子量は、標準物質としてプルランを用いたＨＰＬＣ分
析の結果より約１９００００であった。

【００３０】上記により調製したカルボキシメチル基が
導入されたキチン１０ｇを用い、反応時間を１時間とし
た以外は実施例１と同様にして、カルボキシメチル基が
導入されたキチンにさらにリン酸基を導入し、リン酸基
とカルボキシメチル基が導入されたキチンのナトリウム
塩、約１０．８ｇを得た。

【００３１】得られたリン酸基とカルボキシメチル基が
導入されたキチンのリン酸基の置換度は、実施例１と同
様の方法で算出した結果、０．５であり、分子量は、上
記と同様のＨＰＬＣ分析の結果、約１１３０００であっ
た。

【００３２】上記のようにして製造したリン酸基とカル
ボキシメチル基が導入されたキチンのナトリウム塩を、
生理食塩水に５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させ、１規定の
塩酸及び１規定の水酸化ナトリウムでｐＨを７．２に調
製し、腎炎の症状を呈していた体重３．２ｋｇ、３歳の
雑種、雌猫の治療に用いた。なお、治療の全過程を通じ
て併用薬は使用しなかった。

【００３３】治療開始前に血液生化学検査をＶＩＳＩＯ
Ｎシステム（ダイナボット株式会社製）を用いて行った
ところ、血中尿素窒素量（ＢＵＮ）が１６２．３ｍｇ／
ｄｌ、血中クレアチニン量が８．１ｍｇ／ｄｌと尿毒症
を併発していた。上記により調製したリン酸基とカルボ
キシメチル基が導入されたキチンの溶液４ｍｌを、３日
間隔で橈側皮静脈に投与（体重１ｋｇ当たり約６．３ｍ
ｇ投与）した結果、投与開始後３日目でＢＵＮが８９．
３ｍｇ／ｄｌ、血中クレアチニン量が５．１ｍｇ／ｄｌ
と改善し、６日目にはＢＵＮが２１．４ｍｇ／ｄｌ、血
中クレアチニン量が１．３ｍｇ／ｄｌと正常値を示し、
炎症症状が消失した。また、治療の全過程を通じて、リ
ン酸基とカルボキシメチル基が導入されたキチンを投与
することによる副作用あるいは毒性と思われる症状は観
察されなかった。

【００３４】（実施例３）上記実施例２で製造したリン
酸基とカルボキシメチル基が導入されたキチンを、生理
食塩水に１０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させ、体重７９０
ｋｇ、３歳のホルスタインの右前膝関節に発症した関節
炎の治療に使用した。

【００３５】上記により調製したリン酸基とカルボキシ
メチル基が導入されたキチンの溶液１５ｍｌを、炎症部
皮下に４日間隔で２回投与（体重１ｋｇ当たり０．２ｍ
ｇ投与）したところ、９日目には炎症症状は完全に消失
していた。また、治療の全過程を通じて、リン酸基とカ
ルボキシメチル基が導入されたキチンを投与することに
よる副作用あるいは毒性と思われる症状は観察されなか
った。

【００３６】（実施例４）本願発明者らは、キトサンを
犬の皮下に体重１ｋｇ当たり２００ｍｇ投与することに
より、キトサン投与後３日以内に肺に炎症が生じ、極度
に肺血管の透過性が亢進する結果、肺胞内への血漿成分
や細胞成分の重度な浸潤が起こり、肺水腫による呼吸困
難を発生することを確認している（第８回，キチン、キ
トサンシンポジウム講演要旨集，２９〜３０頁）。そこ
で、犬の肺に炎症を生じさせるためにキトサンを投与
し、この症例の治療に、リン酸基が導入されたキチンを
使用した。なお、治療の全過程を通じて併用薬は使用し
なかった。

【００３７】健康な体重１０．５ｋｇの雄の雑種犬に、
キトサン粉末を５０ｍｇ／ｍｌの濃度になるようにリン
酸緩衝液に分散させた懸濁液４２ｍｌ（体重１ｋｇ当た
り２００ｍｇ投与）を頸部皮下に投与し、キトサン投与
直後に、実施例１にて調製したリン酸基が導入されたキ
チンのナトリウム塩を生理食塩水に５ｍｇ／ｍｌの濃度
で溶解し、１規定の塩酸でｐＨを７．２に調製した溶液
２１ｍｌ（体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ投与）を静脈内に
投与した。

【００３８】キトサン、及びリン酸基が導入されたキチ
ンを投与して４日目までは、臨床的な症状は見られなか
った。投与後４日目に共試犬を安楽死させ、肺を摘出し
て組織を観察したところ、肺胞内の出血もなく、健康な
肺の像を呈していた。

【００３９】（比較例１）健康な体重１０ｋｇの雄のビ
ーグル犬に、キトサン粉末を５０ｍｇ／ｍｌの濃度にな
るようにリン酸緩衝液に分散させた懸濁液４０ｍｌ（体
重１ｋｇ当たり２００ｍｇ投与）を頸部皮下に投与し
た。

【００４０】キトサンを投与して２日目より食欲減退、
しゅう明、呼吸困難を呈した。投与後４日目に共試犬を
安楽死させ、肺を摘出して組織を観察したところ、血漿
成分及び細胞成分の肺組織内への重度な浸潤、多量の出
血、気管支内への浸出液の貯留、無気肺化が起こってい
た。

【００４１】

【発明の効果】以上のように、請求項１記載の抗炎症剤
によれば、炎症に対する治療効果及び予防効果に優れ、
副作用が低いと共に、製造が容易であるので安価に供給
することができる。

【００４２】請求項２記載の抗炎症剤によれば、上記の
効果に加え、リン酸基とカルボキシメチル基が導入され
たキチンが、リン酸基が導入されたキチンより生体適合
性が高いため、より低毒性の抗炎症剤を供給することが
できる。

【００４３】請求項３記載の抗炎症剤によれば、キチン
をカルボキシメチル化した後にリン酸化を行うので、リ
ン酸基とカルボキシメチル基が導入されたキチンを効率
的に製造することができる。

【００４４】請求項４記載の抗炎症剤によれば、キチン
をリン酸化するに際して、尿素を含有するジメチルホル
ムアミドを溶媒とし且つオルトリン酸をリン酸化剤とす
ることによって、よりマイルドな条件でキチンへのリン
酸基の導入を行えるようにしたので、生体内で代謝され
にくいより高分子量の抗炎症剤を得ることができると共
に、このように抗炎症剤を高分子量としておけば、生体
内での残留時間が長く、長期間その効果を持続させるこ
とができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 宮崎 聡 鳥取県鳥取市湖山町東５丁目133番地 サ ンファイブ株式会社内

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 リン酸基が導入されたキチン又はその塩
   類を有効成分とする抗炎症剤。
2. 【請求項２】 リン酸基とカルボキシメチル基が導入さ
   れたキチン又はその塩類を有効成分とする抗炎症剤。
3. 【請求項３】 前記キチンが、カルボキシメチル基が導
   入された後にリン酸基が導入されたキチンである請求項
   ２記載の抗炎症剤。
4. 【請求項４】 前記リン酸基が、尿素を含有するジメチ
   ルホルムアミドを溶媒とし且つオルトリン酸をリン酸化
   剤としてキチンに導入されたリン酸基である請求項１乃
   至３のいずれか記載の抗炎症剤。