JPH0965900A - Ｃｃｋ−ａ受容体遺伝子を用いる遺伝子診断方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】II型糖尿病患者のコレシストキニン（ＣＣ
Ｋ）−Ａ受容体遺伝子に存する欠失部位を用いたII型糖
尿病の遺伝子診断方法、II型糖尿病患者の組織における
ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子のｍＲＮＡの発現量を健常人の
それと比較することによるII型糖尿病の遺伝子診断方
法、胆石症患者の組織におけるＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子
のｍＲＮＡ発現量が低下しているかまたは全く発現して
いないことを指標とする胆石症の遺伝子診断方法。 【効果】本発明により、ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子を用い
てII型糖尿病や胆石症などのＣＣＫ−Ａ受容体の遺伝子
異常を伴う疾患の遺伝子診断方法が可能となった。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、コレシストキニン
（以下、ＣＣＫと略記する。）−Ａ受容体遺伝子を用い
るＣＣＫ−Ａ受容体の遺伝子異常を伴う疾患の遺伝子診
断方法に関する。更に詳しくは、該遺伝子を用いたII型
糖尿病や胆石症の遺伝子診断方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来より、II型糖尿病すなわち成人糖尿
病の発症には、遺伝的要因と環境的要因の双方が寄与す
ると考えられている。しかし、遺伝的要因の実態は依然
として明らかではない。また、糖尿病の研究には、糖尿
病ラット（ＤＭラット）のような実験動物が盛んに利用
されているが、その遺伝的要因の解明は未だ進まずその
研究の進展が期待されている。従って、II型糖尿病の診
断には、血糖値測定、血中インスリン測定、尿中ＣＰＲ
測定等が行われているのみであった。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ＣＣ
Ｋ−Ａ受容体遺伝子を用いてＣＣＫ−Ａ受容体の遺伝子
異常を伴う疾患の遺伝子診断方法を提供することにあ
る。即ち、II型糖尿病ラット（ＤＭラット）に特徴的で
あり、かつヒトII型糖尿病の原因と考えられる糖尿病発
症に関わるII型糖尿病遺伝子に関する本発明者らの最近
の成果に基づき、II型糖尿病患者のＣＣＫ−Ａ受容体遺
伝子に存する欠失部位を用いたII型糖尿病の遺伝子診断
方法を提供することにある。本発明の診断方法は、胆石
症または肥満を伴うII型糖尿病の診断にも有用であり、
さらにII型糖尿病の危険予知に有用である。さらに、本
発明は、胆石症患者の組織におけるＣＣＫ−Ａ受容体遺
伝子のｍＲＮＡ発現量が低下しているかまたは全く発現
していないことを指標とする胆石症の遺伝子診断方法を
提供する。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するため、II型糖尿病の動物モデルとして確立さ
れている Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty（ＯＬＥ
ＴＦ）ラットとＬＥＴＯラット（正常ラット）について
比較研究を進めたところ、両動物の膵臓中のインスリン
レベルにはほとんど差が見られず、組織学的にも差は見
られず、また膵臓中におけるＣＣＫ−Ｂ受容体遺伝子の
発現にも差が見られなかったが、ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝
子は正常ラットでは発現するのに対しII型糖尿病ラット
（ＯＬＥＴＦラット）では発現せず、ＣＣＫ−Ａ受容体
遺伝子の発現に顕著な相違がみられることを発見した。
そこで、本発明者らは、両動物の膵臓を用いて潅流実験
等を行い、インスリンの分泌に及ぼすＣＣＫの影響を調
べたところ、正常ラットではＣＣＫの添加によりインス
リン濃度の顕著な増加が見られたのに対し、II型糖尿病
ラットの膵臓の場合は、ＣＣＫの添加に全く応答を示さ
なかった。

【０００５】以上の知見から、II型糖尿病ラットにおけ
る膵臓内分泌障害の出現は、インスリン欠乏によるもの
ではなく、ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子の発現における欠陥
によるものであると判断された（Funakoshi, A. et a
l., Biochem. and Biophys. Res. Commun. 210, 787-79
6 (1995)) 。

【０００６】さらに、ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子の発現に
おける欠陥の原因を明らかにするため、正常ラットとII
型糖尿病ラットのＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子の遺伝子構造
を検討したところ、正常ラットのそれが５個のエキソン
からなるのに対し、II型糖尿病ラットのそれが３個のエ
キソンからなり、２個のエキソンの欠失があることを発
見した。従って、ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子の一部欠失が
II型糖尿病になる原因の一つであると判断された。本発
明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものであ
る。

【０００７】また、胆石症患者においては、II型糖尿病
でなくともＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子のｍＲＮＡ発現量が
意外にも低下しているか、あるいは全く発現していない
ことを見い出し、この知見に基づいて胆石症の遺伝子診
断方法をも完成させるに至った。

【０００８】なお、コレシストキニン（ＣＣＫ）は良く
知られた消化管ホルモンである。末梢組織や中枢神経系
に存在するその受容体は、構造的、機能的に関連のある
一群のペプチドへの親和性に基づき二つのサブタイプ
（ＣＣＫ−Ａ受容体およびＣＣＫ−Ｂ受容体）に分類さ
れている。すなわちＣＣＫ−Ａ受容体は同一のカルボキ
シル末端を有するペンタペプチドのサルフェート型に親
和性を有し、ＣＣＫ−Ｂ受容体は非サルフェート（Ｎ
Ｓ）型に親和性を有する。

【０００９】本発明の要旨は、（１） II型糖尿病患者
のＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子に存する欠失部位を用いたII
型糖尿病の遺伝子診断方法、（２） II型糖尿病が、胆
石症または肥満を伴うII型糖尿病である前記（１）記載
の遺伝子診断方法、並びに（３） ＣＣＫ−Ａ受容体遺
伝子に存する欠失部位が、配列表の配列番号：１に記載
の正常ラットＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子のうち、配列表の
配列番号：２に記載のエキソン１または配列表の配列番
号：３に記載のエキソン２を含む部分であることを特徴
とする前記（１）または（２）記載の遺伝子診断方法、
（４） II型糖尿病患者の組織におけるＣＣＫ−Ａ受容
体遺伝子のｍＲＮＡの発現量を健常人のそれと比較する
ことによるII型糖尿病の遺伝子診断方法、並びに（５）
胆石症患者の組織におけるＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子の
ｍＲＮＡ発現量が低下しているかまたは全く発現してい
ないことを指標とする胆石症の遺伝子診断方法、に関す
る。

【００１０】

【発明の実施の形態】以下に本発明に用いられるII型糖
尿病遺伝子の欠失部位について詳細に説明する。 （１）本発明の診断方法の対象となる糖尿病遺伝子は、
ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子であり、正常ラットでは、配列
表の配列番号：１に記載の塩基配列を有するが、II型糖
尿病ラットにおいては、正常ラットのＣＣＫ−Ａ受容体
遺伝子の一部が欠失している。正常ラットのＣＣＫ−Ａ
受容体遺伝子のゲノム構造は、５個のエキソンからなる
ことが見い出された（図１参照）。これに対し、II型糖
尿病ラットのＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子は正常遺伝子の５
個のエキソンのうち２個、即ち、配列番号：２に記載の
塩基配列を有するエキソン１および配列番号：３に記載
の塩基配列を有するエキソン２を欠失しており、エキソ
ン３、４および５のみから構成されている（図２参
照）。II型糖尿病ラットがII型糖尿病を発症するメカニ
ズムは、これまで明らかにされていないが、このＣＣＫ
−Ａ受容体遺伝子の一部欠失がＣＣＫ−Ａ受容体発現に
生来的欠陥を与えることになり、それがII型糖尿病発症
の原因の１つとなっていることが本発明において初めて
確認された。以下にこれを裏付ける事実を説明する。

【００１１】（２）まず、II型糖尿病ラットが正常ラッ
トと異なり、ＣＣＫ−Ａ受容体の発現に欠陥があること
を示す。

【００１２】 成熟ラットの膵臓および脳並びに胎児
ラットの膵臓におけるＣＣＫ−Ａ受容体およびＣＣＫ−
Ｂ受容体のノ−ザントランスファー分析を行ったとこ
ろ、ＣＣＫ−Ａ受容体のコード領域の³²Ｐ標識ｃＤＮＡ
プローブは、正常な成熟ラットの膵臓からの2.7kb ｍＲ
ＮＡとハイブリダイズしたが、II型糖尿病成熟ラットお
よび胎児ラットの膵臓の場合は、ＣＣＫ−Ａ受容体のコ
ード領域のプローブとハイブリダイズする約 2.7 kb の
ｍＲＮＡは検出されなかった（Funakoshi, A. etal., B
iochem. and Biophys. Res. Commun. 210, 787-796 (19
95)）。

【００１３】 プライマーとして、ラットのＣＣＫ−
Ａ受容体プリカーサーｃＤＮＡまたはＣＣＫ−Ｂ受容体
プリカーサーｃＤＮＡのヌクレオチド配列に対応するセ
ンスプライマーおよびアンチセンスプライマーをそれぞ
れ用いて、ラット組織からのＣＣＫ−Ａ受容体およびＣ
ＣＫ−Ｂ受容体のｃＤＮＡのコード領域をポリメラーゼ
連鎖反応（ＰＣＲ）により増幅した。その結果、正常ラ
ットの膵臓ＲＮＡからは、予期されたサイズ（ＣＣＫ−
Ａ受容体プリカーサーｍＲＮＡから増幅されたＤＮＡに
対しては４９５塩基対）の増幅されたＤＮＡが得られた
が、II型糖尿病ラットからは相当するものは得られなか
った。また、成熟ラット膵臓中のＣＣＫ−Ａ受容体のＤ
ＮＡと同サイズのＤＮＡが、正常ラットの脳のＲＮＡか
らも増幅されたが、II型糖尿病ラットの脳からは得られ
なかった（Funakoshi, A. et al., Biochem. and Bioph
ys. Res. Commun. 210, 787-796 (1995)）。

【００１４】 ゲノムＤＮＡのサザンブロット分析に
よってもII型糖尿病ラットゲノムと正常ラットゲノムと
の間で明確な相違がみられた。すなわち、II型糖尿病ラ
ットおよび正常ラットのゲノムＤＮＡを、Kpn I 、 Sma
I、Pvu II、またはXba I といったような制限酵素によ
って消化し、ＣＣＫ−Ａ受容体のｃＤＮＡを用いたサザ
ンブロットハイブリダイゼーション分析にかけると、異
なった制限断片が得られた（Funakoshi, A. et al., Bi
ochem. and Biophys. Res. Commun. 210, 787-796 (199
5)）。この事実は、II型糖尿病ラットにおけるＣＣＫ−
Ａ受容体遺伝子の構造に変化が生じていることを示す。
以上説明した事実から明らかなように、II型糖尿病遺伝
子はII型糖尿病ラットの糖尿病発症の原因となってい
る。そして、このことはヒトにおけるII型糖尿病にも当
てはまると考えられる。

【００１５】（３）II型糖尿病および胆石症の遺伝子診
断 上記の知見から明らかなように、II型糖尿病の遺伝子診
断方法としては、例えば、次の方法を挙げることができ
る。 被検者のＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子（II型糖尿病遺伝
子）の解析を行い、II型糖尿病患者のＣＣＫ−Ａ受容体
遺伝子に存する欠失部位が含まれているか否かを検出す
る方法がある。ゲノムＤＮＡの解析にはサザンブロット
分析を行う。ヒトの場合はＰＣＲ−サザンブロット法が
好ましい。すなわち、被検者のＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子
を標的配列としてＰＣＲを行い、ＰＣＲ反応産物を電気
泳動にかけ、ついでナイロン膜にサザンブロットを行
い、得られたブロットをII型糖尿病患者のＣＣＫ−Ａ受
容体遺伝子に存する欠失部位に対応する³²Ｐ標識ｃＤＮ
Ａとハイブリダイズさせた後、具体的にはBiochemical
and Biophysical Research Communications 194(2), 8
11-818 (1993) の報告の第１図に記載されているヒトＣ
ＣＫ−Ａ受容体のｃＤＮＡクローンの塩基配列（図７に
示す）において、第１５４位から第２６５位まで（エキ
ソン１）、第２６６位から第５１７位まで（エキソン
２）、第５１８位から第７７９位まで（エキソン３）、
第７８０位から第９０７位まで（エキソン４）、そして
第９０８位から第１４４０位まで（エキソン５）の各Ｄ
ＮＡ断片を³²Ｐ標識してプローブとして用いてハイブリ
ダイズさせた後、オートラジオグラフィーにかけること
により、すべてのエキソンとハイブリダイズするものは
正常な配列であり、上記の５つのエキソンのうちのいず
れかとハイブリダイズしないものはII型糖尿病遺伝子で
あると診断することができる。

【００１６】 II型糖尿病患者の組織におけるＣＣＫ
−Ａ受容体遺伝子のｍＲＮＡの発現量を健常人のそれと
比較する方法がある。この方法におけるｍＲＮＡの解析
には、当業者に周知のノーザンブロット法を行い、ＣＣ
Ｋ−Ａ受容体のｍＲＮＡが発現されていないことを確認
する。また、ＲＴ−ＰＣＲ法、ＲＦＬＰ法などを使用し
てもよい。

【００１７】なお、上記の方法は、ＣＣＫ−Ａ受容体が
全く発現していない場合のみならず、発現が低下してい
る場合でもII型糖尿病の診断に活用できる。ＣＣＫ−Ａ
受容体が遺伝子欠損により発現しないという上述の事象
は、発現低下の典型例である。ＣＣＫ−Ａ受容体の発現
低下は、ＣＣＫ−Ａ受容体の発現に関わる種々の要因に
より低下する。例えば、ＣＣＫ−Ａコード領域を支配す
るプロモーター領域の異常やなんらかのプロセッシング
異常等により、ＣＣＫ−Ａ受容体の発現の低下が観察さ
れる。従って、本発明はＣＣＫ−Ａ受容体の発現低下を
指標とする診断をも包含している。

【００１８】 実施例３、４に示すように、本発明者
らは同様の手法を用いてヒト胆石症患者の胆嚢における
ＣＣＫ−Ａ受容体の発現低下を確認した。このことから
ＣＣＫ−Ａ受容体機能の低下による胆嚢収縮不良が胆石
形成の一因である可能性が考えられた。従って、本発明
は、II型糖尿病を伴わない胆石症においても胆嚢におけ
るＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子のｍＲＮＡの発現量が低下し
ているか、全く発現していないかについて、前記のと
同様の方法でｍＲＮＡの解析を行なうことにより検出
し、胆石症の遺伝子診断を行なうことができる。

【００１９】本発明は糖尿病の診断のみならず、胆石症
あるいは肥満症を伴うII型糖尿病の診断にも有用であ
る。糖尿病、胆石症、肥満症に共通する事象は、これら
が過食を原因としていることである。従って、本発明は
過食が原因となる疾患の危険予知に有用である。即ち、
本発明によりＣＣＫ−Ａ受容体の発現低下（全く発現し
ない場合を含む。）が確認されたなら、食事療法によっ
て過食が原因となる疾患を予防することができる。

【００２０】

【実施例】以下に実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらの実施例等により何ら限定される
ものではない。

【００２１】実施例１（II型糖尿病ラットのＣＣＫ−Ａ
受容体遺伝子の配列決定） II型糖尿病ラットからのゲノムＤＮＡの調製 以下に用いられる一般的ＤＮＡ技法は、モレキュラー
クローニング ア ラボラトリー マニュアル（Ｔ．マ
ニアティス，１９８２年）に記載されている方法により
行った。大塚製薬から供与を受けたII型糖尿病雄ラット
の膵臓細胞を切除し、ゲノムＤＮＡを標準的フェノール
−クロロホルム法で調製した。

【００２２】 サザンブロット分析 II型糖尿病ラットのゲノムＤＮＡ１０μｇを制限酵素で
消化し、０．７％アガロースゲル電気泳動で分離し、ハ
イボンド−Ｎナイロン膜（アマシャム社製）上にブロッ
ティングした。このブロットを、³²ＰラベルＣＣＫ−Ａ
受容体全領域を含むｃＤＮＡ（Ｓ．Ａ．Ｗａｎｋ博士か
ら恵与されたもの）とハイブリダイズさせた。この膜を
ＳＤＳを含むＳＳＣで常法により洗浄した後オートラジ
オグラフィーを行った。

【００２３】 II型糖尿病ラットのゲノムＤＮＡライ
ブラリーの構築 上記のようにして得られたII型糖尿病ラットのゲノムＤ
ＮＡをＳａｕ３ＡＩで部分的に消化し、塩化ナトリウム
密度勾配超遠心にかけて分離した。１０ｋｂ〜２０ｋｂ
長のＤＮＡ断片を含む画分を採取し、ＢａｍＨＩ消化λ
ＥＭＢＬ３アームで連結した。ついでＧＩＧＡパックゴ
ールド（ストラタジーン社製）でパッキングした。この
II型糖尿病ラットのゲノムＤＮＡライブラリーは１．８
×１０⁶個の独立のファージクローンを含んでいた。

【００２４】 ゲノムＤＮＡクローンの単離 II型糖尿病ラットのゲノムＤＮＡライブラリーを、ゲノ
ムサザンブロッティングに用いたものと同じ³²Ｐラベル
ＣＣＫ−Ａ受容体ｃＤＮＡプローブでスクリーニングし
た。標準的プラークハイブリダイゼーション条件下で約
１．０×１０⁶個のファージクローンをスクリーニング
し、７個のポジティブファージクローンを単離し、さら
にサザンブロット分析および制限酵素マッピングにより
同定した。

【００２５】 ＤＮＡ配列解析 ＣＣＫ−Ａ受容体ｃＤＮＡプローブとハイブリダイズし
たＳａｌＩ消化ＤＮＡ断片をλＮ１５およびλＮ２５フ
ァージクローンから単離し、さらに塩基配列決定のため
にＤＮアーゼＩでランダムに消化しＭ１３ｍｐ１９にサ
ブクローニングした。ＤＮＡ配列決定は、ＡＢＩ Ｄｙ
ｅ Ｐｒｉｍｅｒ ＵｎｉＣｙｃｌｅシークェンシング
キットを用い、ＡＢＩモデル３７３Ａ ＤＮＡシークェ
ンサーで行い、得られた配列はインヘリット シークェ
ンス アナリシス システム（パーキン エルマー社
製）を用いて連結した。塩基配列解析はパーソナルコン
ピュータープログラム（ジーン ワークス、インテリジ
ェネティックス社製）を用いて行った。

【００２６】 上記の実験の結果、II型糖尿病ラット
のＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子の塩基配列として、図３に示
すように配列表の配列番号：１に記載した正常ラットの
塩基配列のうちの塩基配列番号−２３８２から４４６５
までが欠失した塩基配列を得た。この欠失部分にはエキ
ソン１（配列表の配列番号：２）とエキソン２（配列表
の配列番号：３）が含まれていた（図３）。

【００２７】実施例２（ラット組織からのＣＣＫ−Ａ受
容体遺伝子のＰＣＲ−サザンブロット分析によるII型糖
尿病ラットの診断） ｃＤＮＡの合成のために、ファースト−ストランドｃＤ
ＮＡ合成キット（ファルマシア バイオテク製）を用
い、１μｇのｍＲＮＡをＭＬＶの逆転写酵素と３７℃で
６０分間インキュベートした。ＣＣＫ−Ａ受容体プリカ
ーサーｃＤＮＡのコード領域を増幅するために、上記の
ｃＤＮＡ溶液、２．５ユニットの Taq DNAポリメラーゼ
（生化学工業製）、およびラットＣＣＫ−Ａ受容体プリ
カーサーｃＤＮＡのヌクレオチド配列に対応するセンス
プライマー（ヌクレオチド３１３−３３７、配列番号：
４）およびアンチセンスプライマー（ヌクレオチド１１
２９−１１０９、配列番号：５）の各５０ｐｍｏｌ、お
よび内部標準としてラットβ₂ ミクログロブリンプリカ
ーサーｃＤＮＡのヌクレオチド配列に対応するセンスプ
ライマー（ヌクレオチド２８４−３０３、配列番号：
６）およびアンチセンスプライマー（ヌクレオチド３７
３−３９２、配列番号：７）を含む反応混合液中でＰＣ
Ｒを４０サイクル行った。

【００２８】サイクルは、９６℃で３分間、５４℃で３
０秒間、７２℃で６０秒間を１サイクル、続いて９４℃
で３０秒間、５４℃で３分間、７２℃で３分間を４０サ
イクル行った。その反応生成物を NuSieveアガロース
（３％）ゲル電気泳動で分画し、ついで得られたゲルを
エチジウムブロミドで染色した。

【００２９】その結果、正常ラットの膵臓ＲＮＡから
は、４０サイクルのＰＣＲにより、予期されたサイズ
（ＣＣＫ−Ａ受容体プリカーサーｍＲＮＡから増幅され
たＤＮＡに対しては４９５塩基対、そしてβ₂ −ミクロ
グロブリンプリカーサーｍＲＮＡから増幅されたＤＮＡ
に対しては１０９塩基対）の二つの増幅されたＤＮＡが
得られたが、II型糖尿病ラットからは得られなかった
（図４）。また、成熟ラットの膵臓のＣＣＫ−Ａ受容体
のＤＮＡと同サイズのＤＮＡが正常ラットの脳のＲＮＡ
からも増幅されたが、II型糖尿病ラットの脳からは得ら
れなかった（図４）。

【００３０】得られたＤＮＡについて、ＰＣＲ−サザン
ブロット法を行った。 ＰＣＲ−サザンブロット法は次
のようにして行った。即ち、ＰＣＲ反応生成物を、 NuS
ieveアガロースゲル中で電気泳動的に分離し、ついでナ
イロン膜上にブロットした。得られたブロットを、ラッ
トのＣＣＫ−Ａ受容体の配列表の配列番号：２に記載の
エキソン１および／または配列表の配列番号：３に記載
のエキソン２を含む部分のコード領域の〔³²Ｐ〕標識ｃ
ＤＮＡプローブと３７℃で１２時間ハイブリダイズさ
せ、０．１％ＳＤＳを含むＳＳＣ液洗浄液を最終濃度
０．１×ＳＳＣまで順次薄めつつ６５℃で洗浄し、次い
で同様にオートラジオグラフにかけた。これにより、正
常ラットの場合は、０．５ｋｂの１本のハンブリダイズ
する断片が得られた。しかし、II型糖尿病ラットの場合
はプローブとハイブリダイズする断片は得られなかっ
た。

【００３１】実施例３（ヒト胆石症患者の胆嚢における
ＣＣＫ−Ａ受容体の発現低下） ノーザントランスファー法により、ヒト胆石症患者の胆
嚢におけるＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子の発現を健常人の胆
嚢におけるそれと比較した。対照として、アクチンｍＲ
ＮＡの発現をも検討した。ヒト胆石症患者の胆嚢は、い
ずれも手術時に摘出した。その結果は、図５に示すよう
に、アクチンｍＲＮＡの発現の場合は胆石症患者の胆嚢
と健常人の胆嚢との間に差は認められなかったが、ＣＣ
Ｋ−Ａ受容体ｍＲＮＡの発現の場合は、ヒト胆石症患者
において、顕著な発現の低下が認められた。本実施例に
おけるオートラジオグラフィーは、Biochemical and Bi
ophysicalResearch Communications 194(2), 811-818
(1993) の報告の第１図に記載されているヒトＣＣＫ−
Ａ受容体の全長ｃＤＮＡをプローブとして用いた。

【００３２】実施例４（ヒト胆石症患者の胆嚢における
ＣＣＫ−Ａ受容体の発現低下および発現不能） 実施例３と同様に３例の胆石症患者の末梢血よりＤＮＡ
を抽出し、サザーン法と、プロモーター領域を含む各エ
クソン部位のＰＣＲによる増幅を行い、ヒトにおける遺
伝子異常を検索した。さらに手術により、胆嚢組織を採
取してＣＣＫ−Ａ受容体ｍＲＮＡの発現量について検討
した。その結果、図６に示すように胆石症患者（No. ４
〜６）の胆嚢内ＣＣＫ−Ａ受容体ｍＲＮＡ量は正常胆嚢
（No. １〜３）に比べ、有意の発現低下を２例（No.
５、６）に認め、１例（No. ４）は正常に発現しなかっ
た。このＣＣＫ−Ａ受容体ｍＲＮＡが正常に発現しなか
ったNo. ４の例では図６に示すように異常サイズ(short
form)のものが発現し、スプライス異常が示唆された。
これらのことからＣＣＫ−Ａ受容体機能の低下による胆
嚢収縮不良が胆石形成の一因である可能性が考えられ
た。尚、本実施例におけるオートラジオグラフィーも実
施例３と同様に、Biochemical and Biophysical Resear
ch Communications 194(2), 811-818 (1993) の報告の
第１図に記載されているヒトＣＣＫ−Ａ受容体の全長ｃ
ＤＮＡをプローブとして用いた。

【００３３】実施例５（ヒトII型糖尿病診断におけるヒ
トＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子の利用) Biochemical and Biophysical Research Communication
s 194(2), 811-818 (1993) の報告の第１図に記載され
ているヒトＣＣＫ−Ａ受容体のｃＤＮＡの塩基配列にお
いて、第１５４位から第２６５位までがエキソン１、第
２６６位から第５１７位までがエキソン２、第５１８位
から第７７９位までがエキソン３、第７８０位から第９
０７位までがエキソン４、そして第９０８位から第１４
４０位までがエキソン５である。従って、ラットにおけ
る知見に基づき、ヒトの場合においても、ＣＣＫ−Ａ受
容体遺伝子のエキソン１〜エキソン５のそれぞれをプロ
ーブとして、ヒトII型糖尿病患者の膵臓におけるＣＣＫ
−Ａ受容体遺伝子の発現を調べることにより、プローブ
のいずれともハイブリダイズする正常なＣＣＫ−Ａ受容
体遺伝子が発現しないか、あるいは発現の低下したこと
を指標としてヒトII型糖尿病患者を発見することが可能
となる。

【００３４】

【発明の効果】本発明により、ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子
を用いてII型糖尿病や胆石症などのＣＣＫ−Ａ受容体の
遺伝子異常を伴う疾患の遺伝子診断方法が可能となっ
た。

【００３５】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：10914 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 起原 生物名：正常ラット 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 AGCATTCGGT TCCCTCAGTG GGAAACTTGT ACACAATGGG TGCGAGGGAT ACCTAGCAAA 60 TAGATCAGGT CATAATACAC TTGGACAAAC CAGTCAAAAA CACAGATGTT CAGACTAAGG 120 CCAGTTGTAT AGTGAACAGT GAGGGACTTT TAAATATTGT GTAACTTCCT AAAATAAATC 180 CAGGCCCCTG AACATGTCTC TCACACTCCT CCCCGCTCCC GACATTCCCT AACTTATTCC 240 TACTTCTGTT GTTCAAACAG GCCAATCTCA TTACTGCCTA AGACCCAGAG GTAACCTCTG 300 CAAAAAATGT TGTGTCTCCT GTTGGAAGCT TTCTTATTTA CCCCTCAGAT CTTACACCAC 360 CAGTACCCCA GACCCCTACC AGGGAGGCTG CAATCCTTTC CTTCTCATCC TGGAAGGCTT 420 GAAAAGCACT CAGCAAATGG TTGACTCTTG GTGAACAGGT CTGAGTGGAC AAAGCAAAAA 480 ACAAACAAAA TAAACAAACG TGAATAAAAA CATTGCTGAT TTCTATAGTA TTAAGGACCT 540 AGGAATCTGT ATTCAGAAGA GTCCCCATTT CTGGTTAACA AGGGCAGAGA GAGACCACAA 600 GCCACAGAAC CGTGCTTGGT AACACCTTAA CAACCAGCAG TTCTCTCCGT ACACATTGCT 660 GGGCAAGGCT CCAAAGCTAA AAGGCACTAA TTGCTGTATA TAAGGAGATA GGAATGCAGT 720 CCTTCTGTGT CCCTTAGTCC TGATGGTCTG CATTATCGGA TCTGTTACCT TGTTAATTGA 780 TGCTGTCTCT CACAGTTCAG GTCTCACTCT GAATATGTCT GGGACAATGA CAGGCAGAGG 840 GGAGAGGTAA TAATTGGAGT TCTCTCTCTG TCTCTCTCTC TCTCTCTCTC TCTCTCTCTC 900 TCTCTCTCTC CACACTCGTG TGTGTGTGTG TGTGTGTGTC GCGCGCGCGC ACGCGAGCAC 960 ACATGCACGC ATGCAGATGT GTCCCCATTC TGGGAAGGGT TAATATGCAG CCAGCTCTGC 1020 CTGTGTTCAG GGCCTCAGCC TGGCCCAGGA GTGGGAGGGG TGGGCCTGGA AGGTGGAGTG 1080 GAGCAGGCTT GACTTGCACA GGCTGCCTTC TCCCCACAGG AGTGCAAATG CTTGCCCAGA 1140 TGCTCTGAGA ATGGCGAACT CAAGTTGCCT TTAGGAATGG CTGCAAAGCC CACACCTGGA 1200 AATCTCCCCC TCCCTGCTCC TCCACGGCAG GTTGCATTTG GGAGACTCTG TGATCATTAG 1260 AGGAGAGAGA CAGGA ATG AGC CAT TCA CCA GCT CGC CAG CAC TTG GTA GAA 1311 Met Ser His Ser Pro Ala Arg Gln His Leu Val Glu 5 10 AGC AGC AGG ATG GAC GTG GTC GAC AGC CTT CTT ATG AAT GGG AGC AAC 1359 Ser Ser Arg Met Asp Val Val Asp Ser Leu Leu Met Asn Gly Ser Asn 15 20 25 ATC ACT CCC CCC TGT GAA CTC GGA CTG GAA AAT GAG ACG CTT TTC TGC 1407 Ile Thr Pro Pro Cys Glu Leu Gly Leu Glu Asn Glu Thr Leu Phe Cys 30 35 40 TTG GAT CAA CCT CAA CCT TCA AAA GGTAGGTGCC AGACACTATG ATTAGAATTC 1461 Leu Asp Gln Pro Gln Pro Ser Lys G 45 50 AGAAAACTAC CGAGTTAAGG GAGATATAGC AACAGCAAGG CTAATTGAAA TATACATGC 1521 ATGAAATATA CA------- 527 bp -------GGACATCA TCAGGAACTA AGCACTCCC 2088 TTGGGGGCTT AAGGTTTTTA ACATTCTGCC CTCTAAACCC CCCATCCCTC CAACTCTCC 2148 CCTTCACTCC GCAG AG TGG CAG TCT GCA CTG CAG ATT CTC CTG TAC TCC 2197 Glu Trp Gln Ser Ala Leu Gln Ile Leu Leu Tyr Ser 55 60 ATC ATA TTC CTT CTC AGT GTG CTG GGG AAC ACG CTG GTT ATA ACG GTG 2245 Ile Ile Phe Leu Leu Ser Val Leu Gly Asn Thr Leu Val Ile Thr Val 65 70 75 80 CTG ATT CGA AAC AAG AGG ATG CGG ACG GTC ACC AAC ATC TTC CTG CTG 2293 Leu Ile Arg Asn Lys Arg Met Arg Thr Val Thr Asn Ile Phe Leu Leu 85 90 95 TCC CTG GCT GTC AGT GAC CTC ATG CTC TGC CTC TTC TGC ATG CCG TTC 2341 Ser Leu Ala Val Ser Asp Leu Met Leu Cys Leu Phe Cys Met Pro Phe 100 105 110 AAC CTC ATC CCC AAC CTG CTC AAG GAT TTC ATC TTC GGA AGT GCC GTG 2389 Asn Leu Ile Pro Asn Leu Leu Lys Asp Phe Ile Phe Gly Ser Ala Val 115 120 125 TGC AAG ACT ACC ACC TAC TTC ATG GGTGAGTCCT GCAGGTGTCT GTGGACAGGG 2443 Cys Lys Thr Thr Thr Tyr Phe Met G 130 135 CTTATCCCCC CACACACCCC TTTGTCAGCC CCTTGATGGT CACAGCAGAC AGACCCTGTT 2503 GGGTTCCAAA A ----- 2910 bp ------TCTCAGGCA ATTCTAAACT GCAGTTCTGA 5453 TACATTTAAG CTAATGTACA AATAAACTTT GGAGTCAACA CCTGAGTACC AACCCTCTTT 5513 GTTCCTCTCA GGC ACT TCC GTG AGC GTT TCC ACC TTC AAC CTG GTA GCC 5562 ly Thr Ser Val Ser Val Ser Thr Phe Asn Leu Val Ala 140 145 ATC TCT CTG GAG AGA TAT GGC GCC ATC TGC AGA CCC CTA CAG TCC CGC 5610 Ile Ser Leu Glu Arg Tyr Gly Ala Ile Cys Arg Pro Leu Gln Ser Arg 150 155 160 165 GTC TGG CAA ACA AAG TCC CAT GCT TTG AAG GTC ATC GCT GCC ACC TGG 5658 Val Trp Gln Thr Lys Ser His Ala Leu Lys Val Ile Ala Ala Thr Trp 170 175 180 TGC CTC TCC TTT ACC ATC ATG ACT CCG TAC CCC ATT TAC AGC AAC TTG 5706 Cys Leu Ser Phe Thr Ile Met Thr Pro Tyr Pro Ile Tyr Ser Asn Leu 185 190 195 GTG CCT TTT ACT AAA AAT AAT AAC CAG ACG GCG AAC ATG TGC CGC TTC 5754 Val Pro Phe Thr Lys Asn Asn Asn Gln Thr Ala Asn Met Cys Arg Phe 200 205 210 CTG TTG CCA AGT GAC GCT ATG CAG CAG TCC TGG TAAGGCAGTG CACTTCGCTC 5914 Leu Leu Pro Ser Asp Ala Met Gln Gln Ser Tr 215 220 CTCCTTTACA ATAAAGCTAG TCTAAGTTAG CAGTGTGAGG GACCGGAAAG CCTTACCAGA 5974 TGACTATGAG TCAGATATC------ 1800 bp -------AAATTAACGT GTCTGCTCAC 7813 ACCACCTCAC CCTCGTCATT CCCGCCCATC AGAACATGAA GGTCCAGAGT CACTAATTAG 7873 ATTTCTTTTA ATTGTATTAG G CAA ACA TTC CTG CTA CTC ATC CTC TTT CTT 7924 p Gln Thr Phe Leu Leu Leu Ile Leu Phe Leu 225 230 CTC CCT GGG ATT GTG ATG GTG GTG GCC TAC GGG TTG ATC TCT CTG GAA 7972 Leu Pro Gly Ile Val Met Val Val Ala Tyr Gly Leu Ile Ser Leu Glu 235 240 245 250 CTC TAC CAA GGA ATC AAA TTT GAT GCC AGC CAG AAG AAA TCT GCT AAA 8020 Leu Tyr Gln Gly Ile Lys Phe Asp Ala Ser Gln Lys Lys Ser Ala Lys 255 260 265 GGT ACTGATCTTT GGGCTGGATA TTTATTCCAA AAGAGCTCAA GAGCTTTCTT 8073 G TGTAAGTTAG CTAGAAGGAC TCAGGATATA TGGAGCACGT GCTGGAAA---------- 8121 -- 734 bp -----TCCAGCTCAA GTTCCTGGAT TGGGGGTAGT CAGGGGCTTT 8895 ACGTCTTCTC TCTGGCATGA CTTGTCCTGA ACACTAAAAT GATGTCCCTT TCCCACCCAG 8955 AG AAG AAG CCG AGC ACT GGC AGC AGC ACC CGA TAT GAG GAT AGT GAT 9002 lu Lys Lys Pro Ser Thr Gly Ser Ser Thr Arg Tyr Glu Asp Ser Asp 270 275 280 GGC TGT TAC TTG CAG AAG TCC CGG CCC CCG AGG AAG CTG GAG CTT CAG 9050 Gly Cys Tyr Leu Gln Lys Ser Arg Pro Pro Arg Lys Leu Glu Leu Gln 285 290 295 CAG CTG TCT AGC GGC AGC GGT GGC AGC AGA CTC AAC CGG ATC AGG AGC 9098 Gln Leu Ser Ser Gly Ser Gly Gly Ser Arg Leu Asn Arg Ile Arg Ser 300 305 310 AGC AGT TCA GCT GCC AAC CTG ATA GCC AAG AAG CGC GTG ATC CGC ATG 9146 Ser Ser Ser Ala Ala Asn Leu Ile Ala Lys Lys Arg Val Ile Arg Met 315 320 325 330 CTC ATT GTC ATC GTG GTC CTC TTC TTC CTG TGC TGG ATG CCC ATC TTC 9194 Leu Ile Val Ile Val Val Leu Phe Phe Leu Cys Trp Met Pro Ile Phe 335 340 345 AGC GCC AAC GCC TGG CGG GCA TAT GAC ACG GTT TCT GCC GAG AAG CAC 9242 Ser Ala Asn Ala Trp Arg Ala Tyr Asp Thr Val Ser Ala Glu Lys His 350 355 360 CTC TCA GGG ACT CCC ATC TCC TTC ATC CTC CTC CTC TCC TAC ACC TCC 9290 Leu Ser Gly Thr Pro Ile Ser Phe Ile Leu Leu Leu Ser Tyr Thr Ser 365 370 375 TCC TGT GTT AAC CCC ATC ATC TAT TGC TTC ATG AAC AAA CGC TTT CGC 9338 Ser Cys Val Asn Pro Ile Ile Tyr Cys Phe Met Asn Lys Arg Phe Arg 380 385 390 CTG GGC TTC ATG GCC ACC TTC CCT TGT TGC CCG AAT CCC GGT CCC CCA 9386 Leu Gly Phe Met Ala Thr Phe Pro Cys Cys Pro Asn Pro Gly Pro Pro 395 400 405 410 GGG GTG AGA GGA GAG GTG GGA GAG GAG GAG GAT GGG AGG ACC ATA AGG 9434 Gly Val Arg Gly Glu Val Gly Glu Glu Glu Asp Gly Arg Thr Ile Arg 415 420 425 GCA TTG CTG TCC AGG TAT TCC TAC AGC CAC ATG AGC ACC TCT GCT CCA 9482 Ala Leu Leu Ser Arg Tyr Ser Tyr Ser His Met Ser Thr Ser Ala Pro 430 435 440 CCC CCC TGAACTCCAC CTGGTCCACT GCTGCAGCAG GAAGGAGGGG ACCGGGGAGC 9538 Pro Pro### AAGGAGGAAG AGGAAGTGGG AGGAAAGGAG AGGGAAGACC CATTTCTCAC GGCGATTCTT 9598 CAATGTCTGC TTTTCATCCT TCACAAAGTT CCAGAAGGAA CCTAAGGTGG GGTCATGAAA 9658 ACGCCAAGAC ATTTTCCATA ATGTTTACCA TGGGAGAGAC CTCAGCAGGC CGGTGATAAG 9718 AGCCCCACTG GGCTCATGCG ACAAATGTCA CTGACAAGTC CATGTTCAAA ATGGAGGTGT 9778 AGACTTTGAT GAGCTTTAGA ATTTTCTAGA ACAGCCCAGG TGAAGTGTCT CTATAGTGAC 9838 ACACTGCTGT TCTCTGCTTC TGCTCCTGTA GAATTATGGC CCTCCCCAGG AAACCCATGC 9898 CTCCTTCCTA TGTACTCACT ACAACTACAC ACCTTCTCAT GGCCACCAAG GACACATGGG 9958 ACACACACAC CTCCTCTGGC CACGTCTGAA TATGGGAATA GTCTGACAAT TTTTAAAGCT10018 TGAGGTTGGC CAAGTACACT CATGGGTGTA AGCTGGGGTC ATCATCAGAA AACCAAGAAT10078 GTGTCTAAAA GACAGGTTTT AGAATTTTTA TTTCTACAAA GGAAAGCGTG TGCAAGGCCA10138 GTAGCCAGAA GGACTGTTTT CTGTCAGCAA TGTCAAGCTG CAGAAGGGAG GGTGATCTAT10198 ACGGTGTAAT CTCTCCTCTG TATCTAACCC CACAACATTT TTTTTTACCT CAACTTAATT10258 TCGTGTGTTC ACCTGTATTT CCTCCTTTCC AGAAACACCT CCAGGTAAGA AGGGATATGT10318 ACATACCAGG GCAAGGGTGG TAACATGTGT AGTCAGTCCC CAAGGAACAC TGGCATGCTG10378 GGACTCAGTT AATAAGTAGC TTTGAATGCC AAAACTATGT ATGCTTTTAA GTACTGTTGA10438 TGTAGCTCTT GGTAATTTGG CTCAGTGTGT GTGTGTGTGT GTATGTGTGT GTGTGTGATC10498 TGAACATATG GCTACATTAT GTGTGTGTTA ATAACTTGTA AGTGGATATT GGAATTCAAC10558 AAATGTCATC ATTCTTCCAT AAAAGTTGGA GTATCGTGTG AGCTTCATTT CTTTGAAAAA10618 TTAGTGTTGA AAATACTGAA CTCTGAGAAC TCTGTTTAAA AACTGAAATA AATTACACAA10678 TGAGGGAGAC CATTTCTAGA TACCATGTAC GATCCAGTGT ACCAAGCACA CACTTCGGCT10738 CCCTTCCTCC CTCCCTCCCT TCATTCTTCT TCCTTGCACG TTATTGTCTT GTTTACTAAA10798 AAGAGTTAGT ATGAACCTTT CCAACAGAAA CAAGTTTGTA CGCGCATGTG GAAACTAAAA10858 AATATGCAAA GAAAAGGATC CAAGGCAAGT AAGTTCATTG CTGCGAAGCT GTCGAC 10914

【００３６】配列番号：２ 配列の長さ：157 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 起原 生物名：正常ラット 配列の特徴 特徴を表す記号：ｅｘｏｎ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ATG AGC CAT TCA CCA GCT CGC CAG CAC TTG GTA GAA AGC AGC AGG ATG 48 Met Ser His Ser Pro Ala Arg Gln His Leu Val Glu Ser Ser Arg Met 5 10 15 GAC GTG GTC GAC AGC CTT CTT ATG AAT GGG AGC AAC ATC ACT CCC CCC 96 Asp Val Val Asp Ser Leu Leu Met Asn Gly Ser Asn Ile Thr Pro Pro 20 25 30 TGT GAA CTC GGA CTG GAA AAT GAG ACG CTT TTC TGC TTG GAT CAA CCT 144 Cys Glu Leu Gly Leu Glu Asn Glu Thr Leu Phe Cys Leu Asp Gln Pro 35 40 45 CAA CCT TCA AAA G 157 Gln Pro Ser Lys G 50

【００３７】配列番号：３ 配列の長さ：291 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 起原 生物名：正常ラット 配列の特徴 特徴を表す記号：ｅｘｏｎ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 AG TGG CAG TCT GCA CTG CAG ATT CTC CTG TAC TCC ATC ATA TTC CTT 47 Glu Trp Gln Ser Ala Leu Gln Ile Leu Leu Tyr Ser Ile Ile Phe Leu 5 10 15 CTC AGT GTG CTG GGG AAC ACG CTG GTT ATA ACG GTG CTG ATT CGA AAC 95 Leu Ser Val Leu Gly Asn Thr Leu Val Ile Thr Val Leu Ile Arg Asn 20 25 30 AAG AGG ATG CGG ACG GTC ACC AAC ATC TTC CTG CTG TCC CTG GCT GTC 143 Lys Arg Met Arg Thr Val Thr Asn Ile Phe Leu Leu Ser Leu Ala Val 30 35 40 AGT GAC CTC ATG CTC TGC CTC TTC TGC ATG CCG TTC AAC CTC ATC CCC 191 Ser Asp Leu Met Leu Cys Leu Phe Cys Met Pro Phe Asn Leu Ile Pro 45 50 55 60 AAC CTG CTC AAG GAT TTC ATC TTC GGA AGT GCC GTG TGC AAG ACT ACC 239 Asn Leu Leu Lys Asp Phe Ile Phe Gly Ser Ala Val Cys Lys Thr Thr 65 70 75 ACC TAC TTC ATG GGTGAGTCCT GCAGGTGTCT GTGGACAGGG 291 Thr Tyr Phe Met G 80

【００３８】配列番号：４ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 AGTCTGCACT GCAGATTCTC C 21

【００３９】配列番号：５ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 GCTTCTTGGC TATCAGGTTG G 21

【００４０】配列番号：６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ACCGAGACCG ATGTATATGC 20

【００４１】配列番号：７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 TGATTCAGAG CTCCATAGAG 20

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、正常ラットのＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子
のゲノム構造を示す。

【図２】図２は、糖尿病ラット（II型糖尿病ラット）の
ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子のゲノム構造を示す。

【図３】図３は、正常ラットのＣＣＫ−Ａ受容体プリカ
ーサー遺伝子と比べた場合のII型糖尿病ラットのＣＣＫ
−Ａ受容体プリカーサー遺伝子の欠失塩基配列部分を示
す図である。

【図４】図４は、ラット組織におけるＣＣＫ−Ａ受容体
プリカーサー遺伝子の発現を示す電気泳動図である。Ｍ
（マーカー）は Hap II で消化した pUC19を示す。レー
ン１は正常ラットの膵臓を、２はII型糖尿病ラットの膵
臓を、３は正常ラットの脳を、そして４はII型糖尿病ラ
ットの脳を示す。

【図５】図５は、実施例３におけるノーザントランスフ
ァー分析による、胆石症患者の胆嚢におけるＣＣＫ−Ａ
受容体遺伝子の発現を示す電気泳動図である。１は健常
人の胆嚢、２は胆石症患者Ａの胆嚢、３は胆石症患者Ｂ
の胆嚢についての結果を示す。

【図６】図６は、実施例４におけるノーザントランスフ
ァー分析による、胆石症患者の胆嚢におけるＣＣＫ−Ａ
受容体遺伝子の発現を示す電気泳動図である。１〜３は
健常人の胆嚢、４〜６は胆石症患者の胆嚢についての結
果を示す。

【図７】図７は、ヒトＣＣＫ−Ａ受容体の全長ｃＤＮＡ
を示す図である。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 II型糖尿病患者のコレシストキニン（Ｃ
   ＣＫ）−Ａ受容体遺伝子に存する欠失部位を用いたII型
   糖尿病の遺伝子診断方法。
2. 【請求項２】 II型糖尿病が、胆石症または肥満を伴う
   II型糖尿病である請求項１記載の遺伝子診断方法。
3. 【請求項３】 ＣＣＫ−Ａ受容体遺伝子に存する欠失部
   位が、配列表の配列番号：１に記載の正常なＣＣＫ−Ａ
   受容体遺伝子のうち、配列表の配列番号：２に記載のエ
   キソン１または配列表の配列番号：３に記載のエキソン
   ２を含む部分であることを特徴とする請求項１または請
   求項２記載の遺伝子診断方法。
4. 【請求項４】 II型糖尿病患者の組織におけるＣＣＫ−
   Ａ受容体遺伝子のｍＲＮＡの発現量を健常人のそれと比
   較することによるII型糖尿病の遺伝子診断方法。
5. 【請求項５】 胆石症患者の組織におけるＣＣＫ−Ａ受
   容体遺伝子のｍＲＮＡ発現量が低下しているかまたは全
   く発現していないことを指標とする胆石症の遺伝子診断
   方法。