JPH0967392A

JPH0967392A - ビニル化デオキシグアノシン誘導体

Info

Publication number: JPH0967392A
Application number: JP22764895A
Authority: JP
Inventors: Chikashi Nagatsugi; 史永次; Kengo Kamimura; 謙吾上村; Shoji Nakajima; 昌治中島; Minoru Maeda; 稔前田; Shigeki Sasaki; 茂貴佐々木
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1995-09-05
Filing date: 1995-09-05
Publication date: 1997-03-11
Anticipated expiration: 2015-09-05
Also published as: JP3965455B2

Abstract

(57)【要約】【解決手段】下記式(I):〔式中の記号は(1)R¹=H, R²=
H, t- ブチルジフェニルシリル(TBDPS) 等, R³= Ac；
(2)R¹=Me, R²=TBDPS, R³=Ac ；又は(3)R¹=TMS, R²=TBDP
S, R³=H, Ac, -P(O)(OH)H のいずれかを示す〕で表され
るビニル化デオキシグアノシン誘導体又はその塩。【化１】【効果】化学的に安定であり、シチジンなどの求核性分
子と反応して共有結合を形成できるので、クロスリンク
能を有するアンチセンスオリゴ核酸の製造用中間体とし
て有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はビニル化デオキシグ
アノシン誘導体又はその塩に関する。より詳細にいう
と、本発明は、核酸のクロスリンク剤あるいはクロスリ
ンク能を有するアンチセンスオリゴ核酸の製造に有用な
ビニル化デオキシグアノシン誘導体又はその塩に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】特定の遺伝子やメッセンジャーRNA (m-R
NA) などの核酸に対して、その核酸配列と相補的な塩基
配列を有するアンチセンスオリゴ核酸を特異的に結合さ
せ、遺伝子発現を抑制する方法が知られている。この方
法は、生化学的な実験ツールとして利用されるばかりで
はなく、本格的な遺伝子治療に応用できる可能性がある
ことから、生化学及び医学・薬学の分野において大きな
関心がもたれている。

【０００３】この方法を効率的に行うためには、相補的
結合により生成する二重鎖又は三重鎖複合体の安定化が
必要とされており、安定化のための種々の手段が提案さ
れている。その代表的なものとして、例えば、アルキル
化能を有する官能基をオリゴ核酸中に導入し、遺伝子DN
A やm-RNA などの標的核酸と共有結合しうる能力（クロ
スリンク能）を付与したアンチセンスオリゴ核酸が知ら
れている（例えば、Volssov, V.V. et al., Nucleic Ac
id Res., 14, 4065, 1986; Webb, T.R. et al., J. Am.
Chem. Soc., 108, 2764, 1986; Baker, B.F. et al.,
J. Am. Chem. Soc., 111, 2700, 1989などを参照）。

【０００４】しかしながら、このように修飾されたアン
チセンスオリゴ核酸の多くは、クロスリンク速度が遅い
という問題があり、また反応性が高いものは化学的安定
性が低いという欠点を有している。このようなアンチセ
ンスオリゴ核酸を生体に適用することは望ましくない(R
okita, S.E. et al., J. Am. Chem. Soc., 116, 1690,
1994）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、標的
核酸に効率的にクロスリンクする性質を有するアンチセ
ンスオリゴ核酸中の製造に有用な化合物を提供すること
にある。また、本発明の課題は、上記のような化合物で
あって、化学的に安定な化合物を提供することにある。
さらに本発明の別な課題は、上記の特徴を有する化合物
であって、生体に適用可能なアンチセンスオリゴ核酸の
製造に有用な化合物を提供することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、下記構造のビニル
化グアノシン誘導体が化学的に安定であり、かつ求核性
ヌクレオチドと容易に反応して強固なクロスリンクを形
成できることを見い出した。また、上記の化合物が、標
的遺伝子核酸に対して効率的にクロスリンクする性質を
有するアンチセンスオリゴ核酸の製造に有用であること
を見い出した。本発明はこれらの知見を基にして完成さ
れたものである。

【０００７】すなわち本発明は、下記式(I):

【化３】で示される化合物；上記化合物からなるアンチセンスオ
リゴ核酸製造用中間体；及びクロスリンク能を有するア
ンチセンスオリゴ核酸の製造に用いる上記製造用中間体
を提供するものである。

【０００８】

【発明の実施の形態】上記式(I) 中のR¹、R²、及びR
³は、下記の(1) 〜(3) のいずれかにより定義される。 (1)R¹ は水素原子を示し、R²は水素原子、tert- ブチル
ジフェニルシリル基、若しくは下記の式：

【化４】（式中、R⁴は水素原子若しくはジ（p-メトキシフェニ
ル）フェニルメチル基を示す）で示される基を示し、か
つR³はアセチル基を示す； (2) R¹はメチル基を示し、R²はtert- ブチルジフェニル
シリル基を示し、かつR³はアセチル基を示す；又は (3) R¹はトリメチルシリル基を示し、R²はtert- ブチル
ジフェニルシリル基を表し、かつR³は水素原子、アセチ
ル基、若しくは-P(O)(OH)Hを示す。

【０００９】上記化合物は、酸付加塩又は塩基付加塩を
形成する場合があるが、このような塩も本発明の範囲に
包含される。本発明の化合物自体をクロスリンク剤とし
て生体に適用する場合や、生体に適用可能なアンチセン
スオリゴ核酸の製造のための製造中間体として用いる場
合には、塩としては生理的に許容されるものが好まし
い。塩基付加塩としては、例えば、トリエチルアミン、
ジメチルアミン、アンモニア、トリエチルアミン、若し
くはジエチルアミン等のアミン類の塩；又はナトリウ
ム、カリウム、カルシウム、若しくはマグネシウム等の
金属類の塩を挙げることができる。酸付加塩としては、
例えば、塩酸、硫酸、若しくは過塩素酸等の鉱酸類の
塩；又はシュウ酸、フマル酸、マレイン酸、酢酸、プロ
ピオン酸、メタンスルホン酸、若しくはp-トルエンスル
ホン酸等の有機酸等との塩を挙げることができる。

【００１０】本発明の化合物を以下の表１に具体的に示
す。表中、R²として「化４」と示されている場合には、
R²がチミジル酸誘導体の基（上記〔化４〕で示される
基）であり、該基におけるR⁴がそれぞれ表中に示された
ものであることを示す。また、表中、Ac、Me、Et、TBDP
S 、TMS 、及びDMTrは、それぞれ、アセチル基、メチル
基、エチル基、tert- ブチルジフェニルシリル基、トリ
メチルシリル基、及びジ(p-メトキシフェニル）フェニ
ルメチル基を表す（以下、本明細書中において同様であ
る）。

【００１１】

【表１】

【００１２】本発明化合物の製造方法の例を下記スキー
ムに従って説明するが、本発明の化合物の製造方法はこ
れらの方法に限定されることはない。スキーム中、X は
塩素原子、臭素原子、p-トルエンスルホニルオキシ基、
又はトリフルオロメタンスルホニルオキシ基などの脱離
基を表し、Met はトリブチルスズ、マグネシウムハライ
ド等の金属を表す（以下のスキームにおいて同様であ
る）。

【００１３】

【化５】

【００１４】化合物(2):ジクロロメタン若しくはクロロ
ホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、又はジメチルホ
ルムアミド若しくはジメチルスルホキシド等の非プロト
ン性極性溶媒等の適当な溶媒中、2'- デオキシグアノシ
ン(1) をトリエチルアミン、イミダゾール等の塩基の存
在下で0.2 〜10当量の塩化 tert-ブチルジフェニルシラ
ンと反応させることにより化合物(2) を製造することが
できる。通常の場合、反応は-20℃〜+150℃の温度で５
分間〜24時間行えばよい。

【００１５】化合物(3):ベンゼン若しくはトルエン等の
芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロ
ホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフ
ラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、又
はそれらの混合溶媒中で、化合物(2) を0.2 〜 100当量
の無水酢酸若しくは塩化アセチルなどのアセチル化剤と
ピリジン若しくはトリエチルアミン等の塩基存在下に反
応させるか、あるいは上記アセチル化剤を溶媒兼用で用
いて、必要により上記塩基存在下に反応させることによ
り、化合物(3) を製造することができる。通常の場合、
反応は０〜 150℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。

【００１６】化合物(4):ベンゼン若しくはトルエン等の
芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロ
ホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフ
ラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、ジ
メチルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性
溶媒、又はそれらの混合溶媒中で、化合物(3) を例え
ば、0.2 〜100当量のp-トルエンスルホニルクロリド、
メタンスルホニルクロリド、若しくはトリフルオロメタ
ンスルホニルクロリド、又はp-トルエンスルホン酸無水
物、メタンスルホン酸無水物、若しくはトリフルオロメ
タンスルホン酸無水物などのスルホニル化剤とピリジン
若しくはトリエチルアミン等の塩基存在下に反応させる
か、あるいは上記スルホニル化剤を溶媒兼用で用いて、
必要により上記塩基存在下に反応させることにより、化
合物(4) を製造することができる。通常の場合、反応は
０〜 150℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。上記反
応において、ジメチルアミノピリジン等の反応促進剤を
0.01〜10当量共存させてもよい。

【００１７】また、ベンゼン若しくはトルエン等の芳香
族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロホル
ム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン
若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、ジメチ
ルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性溶
媒、又はそれらの混合溶媒中、あるいは溶媒の非存在下
に、化合物(3) を0.2 〜 100当量のオキシ塩化リン、オ
キシ臭化リン、五塩化リン、若しくは塩化チオニル等の
ハロゲン化剤で処理することによっても化合物(4) を製
造することができる。通常の場合、反応は０〜 150℃の
温度で５分間〜24時間行えばよい。

【００１８】化合物(Ia):ベンゼン若しくはトルエン等
の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロ
ロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロ
フラン若しくはジオキサン等のエーテル系溶媒、ジメチ
ルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性溶
媒、又はそれらの混合溶媒中で、ビニルトリブチル錫若
しくはビニルマグネシウムブロミド等のビニル金属化合
物(5) 0.2 〜 100当量と化合物(4) とを0.0001〜１当量
の触媒の存在下に反応させることにより化合物(Ia)を製
造することができる。触媒としては、テトラキス（トリ
フェニルホスフィン）パラジウム若しくは塩化ビス（ト
リフェニルホスフィン）パラジウム等のパラジウム触
媒、又は塩化ビス（アセチルアセトナート）ニッケル等
のニッケル触媒を用いることができる。上記反応をピリ
ジン若しくはトリエチルアミン等の塩基存在下に行って
もよい。通常の場合、反応は０〜 150℃の温度で５分間
〜24時間行えばよい。

【００１９】化合物(Ib):テトラヒドロフラン若しくは
エーテル等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド、
水、若しくはメタノール等の極性溶媒、又はそれらの混
合溶媒中で、化合物(Ia)をフッ化テトラブチルアンモニ
ウム若しくはフッ化カリウム等の含フッ素化合物 0.2〜
100当量と反応させることにより化合物(Ib)を製造する
ことができる。通常の場合、反応は０〜 100℃の温度で
５分間〜24時間行えばよい。

【００２０】化合物(Ic):アセトニトリル、ジメチルホ
ルムアミド、若しくはジメチルスルホキシド等の適当な
溶媒中、化合物(Ib)を0.2 〜 100当量の1-テトラゾール
存在下に0.2 〜10当量のβ−シアノエチルホスホラミダ
イトデオキシチミン(6) と０〜 100℃で５分間〜24時間
反応させた後、得られた生成物とt-ブチルハイドロペル
オキシド若しくはクメンペルオキシド等の過酸化物とを
反応させることにより、化合物(Ic)を製造することがで
きる。通常の場合、反応は -20〜50℃で５分間〜24時間
程度行えばよい。

【００２１】化合物(Id):ベンゼン若しくはトルエン等
の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロ
ロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロ
フラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、
ジメチルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極
性溶媒、又はそれらの混合溶媒中、あるいは溶媒の非存
在下に、化合物(Ic)を0.2 〜 100当量のトリフルオロ酢
酸若しくはジクロロ酢酸等の有機酸、又は塩酸若しくは
硫酸等の鉱酸で処理することにより化合物(Id)を製造す
ることができる。反応は一般的に -20〜50℃の温度で５
分間〜24時間行えばよい。

【００２２】

【化６】

【００２３】化合物(IIa):スキーム１中の化合物(4) と
化合物(5) から化合物(Ia)を製造する反応の条件に準じ
て、化合物(4) と化合物(7) とを反応させることによ
り、化合物(IIa) を製造することができる（上記スキー
ム２を参照）。

【００２４】

【化７】

【００２５】化合物(IIIa)及び化合物(IIIb):スキーム
１中の化合物(4) と化合物(5) から化合物(Ia)を製造す
る反応の条件に準じて、化合物(4) と化合物(8) とを反
応させることにより、化合物(IIIa)を製造することがで
きる（上記スキーム３を参照）。テトラヒドロフラン若
しくはエーテル等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムア
ミド、水、若しくはメタノール等の極性溶媒、又はそれ
らの混合溶媒中で、化合物(IIIa)を 0.2〜 100当量の水
酸化ナトリウム若しくは水酸化カリウム等の金属水酸化
物と反応させることにより、化合物(IIIb)を製造するこ
とができる。反応は、一般的に０〜100 ℃の温度で５分
間〜24時間行えばよい。

【００２６】化合物(IIIc):ベンゼン若しくはトルエン
等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはク
ロロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒド
ロフラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶
媒、ジメチルホルムアミド等の極性溶媒、又はそれらの
混合溶媒中、0.5 〜50当量のN-メチルモルホリン若しく
はトリエチルアミン等の塩基存在下に、化合物(IIIb)を
リン化合物(9) と反応させた後、生成物にトリエチルア
ミンを作用させることにより化合物(IIIc)を製造するこ
とができる。リン化合物(9) は、例えば0.5 〜10当量の
三塩化リンと0.5 〜10当量の1,2,4-トリアゾールを -20
〜50℃で５分間〜24時間反応させることにより調製する
ことができる。通常の場合、上記反応は-100〜50℃の温
度で５分間〜48時間行えばよい。

【００２７】本発明の化合物は、シチジンやグアノシン
と速やかに付加体を形成することができるので、本発明
の化合物を製造中間体として用いることにより、遺伝子
DNAやm-RNA などの標的核酸に対して相補的に結合し、
かつ共有結合によるクロスリンクを形成するアンチセン
スオリゴ核酸を製造することができる。従って、本発明
の別の態様により、本発明の化合物からなるアンチセン
スオリゴ核酸製造用中間体、好ましくはクロスリンク能
を有するアンチセンスオリゴ核酸製造用中間体が提供さ
れる。また、上記化合物を製造用中間体として用いて製
造されたアンチセンスオリゴ核酸、好ましくはクロスリ
ンク能を有するアンチセンスオリゴ核酸も、本発明の範
囲に包含される。もっとも、本発明の上記化合物の用途
は、これらの用途に限定されることはない。

【００２８】以下、本発明を実施例によりさらに具体的
に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定され
ることはない。また、上記の一般的な製造方法の説明及
び下記の実施例に記載した試薬や反応条件には適宜の修
飾や改変が可能であることはいうまでもない。なお、実
施例中の化合物番号は上記スキーム中の化合物番号に対
応している。

【００２９】

【実施例】

例１：5'-O-tert-ブチルジフェニルシリル-2'-デオキシ
グアノシン(2) アルゴン気流下、2'- デオキシグアノシン (2.0 g 、7.
2 mmol) の無水 DMF (30 ml)懸濁液に t- ブチルクロロ
ジフェニルシラン (3.0 ml、12 mmol)とイミダゾール
(1.5 g 、21 mmol)を加え、室温にて５時間攪拌した。
５時間後、反応層に水 (30 ml)を加えて得られた結晶を
濾取し、酢酸エチルで洗浄した。メタノールから再結晶
し、化合物(2) を無色粉末状結晶として得た (1.5 g 、
3.0 mmol、収率 41%) 。m.p.: 163-166 ℃。

【００３０】¹H-NMR (DMSO-d6) δ 10.60 (1H,brs),
7.80 (1H,s), 7.7-7.3 (10H,m), 6.48(2H,s), 6.14 (1
H,t,J=6.6Hz), 5.38 (1H,d,J=4.0Hz), 4.50-4.40 (1H,
m), 3.95-3.65 (2H,s), 2.65-2.45 (1H,m), 2.35-2.20
(1H,m), 0.99 (9H,s) IR (cm^-1, neat) : 3600-2700, 1680, 1630 FABMS (m/z) : 506(M+1)⁺, 528(M+23) ⁺

【００３１】例２：3'-O- アセチル-5'-O-tert- ブチル
ジフェニルシリル-2'-デオキシグアノシン(3) アルゴン気流下、化合物(2) (870 mg 、1.7 mmol) の無
水ピリジン (35 ml)溶液に無水酢酸 (0.8 ml、8.5 mmo
l) を加え、85℃で攪拌を行った。５時間後、反応層を
酢酸エチル (50 ml)で希釈し、水 (20 ml ×2)及び飽和
食塩水 (20 ml)で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、
減圧下留去した。残渣をアセトニトリルから再結晶し
化合物(3) を無色粉末状結晶として得た (651 mg、1.2
mmol、収率70%) 。m.p.: 226-229 ℃。

【００３２】¹H-NMR (CDCl₃) δ 12.01 (1H,brs), 7.8
0-7.30 (10H,m), 6.23 (3H,dd,J=8.7,5.8Hz), 5.53 (1
H,d,J=5.9Hz), 4.20 (1H,m), 3.89 (2H,d,J=3.6Hz), 2.
85-2.70 (1H,m), 2.60-2.45 (1H,m), 2.10 (3H,s), 0.9
9 (9H,s) IR (cm^-1, neat) : 3500-2600, 1740, 1680, 1600 FABMS (m/z) : 548(M+1)⁺, 570(M+23) ⁺

【００３３】例３：3'-O- アセチル-5'-O-tert- ブチル
ジフェニルシリル -6-O-p-トルエンスルホニル-2'-デオ
キシグアノシン(4) アルゴン気流下、化合物(3) (625 mg 、1.14 mmol)の無
水ジクロロメタン (15ml)溶液を０℃に冷却し、トリエ
チルアミン (0.5 ml、3.59 mmol)、p-トルエンスルホニ
ルクロリド (1.08 g、5.65 mmol)及びジメチルアミノピ
リジン (43.3 mg 、0.355 mmol) を加えて攪拌を行っ
た。20時間後、反応層をクロロホルム (15ml)で希釈
し、有機層を水 (10 ml)で洗浄、水層をクロロホルム
(10 ml ×2)で逆抽出した。有機層を合わせて、無水硫
酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー (FL-60D、クロロホルム
−酢酸エチル 9:1→4:1)にて精製し化合物(4) を無色
カラメル状物質として得た (800mg、1.14 mmol 、収率
100%)。

【００３４】¹H-NMR (CDCl₃) δ 8.02 (2H,d,J=8.3H
z), 7.87 (1H,s), 7.70-7.60 (4H,m), 7.50-7.30 (8H,
m), 6.26 (1H,dd,J=8.7, 5.4Hz), 5.55 (1H,m), 4.91
(2H,s), 4.25-4.15 (1H,m), 3.90 (2H,m), 2.90-2.75
(1H,m), 2.60-2.40 (1H,m), 2.45 (3H,s), 2.11 (3H,
s), 1.06 (9H,s) IR (cm^-1, neat) : 3600-3000, 1740, 1620 FABMS (m/z) : 702(M+1)⁺, 644(M-57) ⁺ HR-FABMS (m/z) :C₃₀H₃₆N₅O₄Si(M+1) ⁺：計算値 558.253 測定値 558.2535

【００３５】例４：9-(3-O- アセチル-5-O-tert-ブチル
ジフェニルシリル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシ
ル)-2-アミノ -6-ビニルプリン(Ia) アルゴン気流下、化合物(4) (320 mg 、0.46 mmol)の無
水ジオキサン (5 ml)溶液に塩化リチウム (40 mg 、0.9
4 mmol)及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パ
ラジウム(0) (110 mg 、0.095 mmol) を加えて室温にて
攪拌した。30分後、ビニルトリ (n-ブチル）錫 (760 μ
l 、2.3 mmol) を加えて、加熱還流した。90分後、反応
層を酢酸エチル-10%アンモニア水 (30 ml: 3 ml)にあ
け、有機層を 10%アンモニウム水 (3 ml) 、飽和食塩水
(3 ml×2) で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減
圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー(クロロホルム−酢酸エチル 4:1) にて精製し化合
物(Ia)を淡黄色カラメル状物質として得た (150 mg、0.
27 mmol 、収率 59%) 。

【００３６】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.93 (1H,s), 7.75-
7.30 (10H,m), 7.13 (1H,dd,J=17.6, 10.7Hz), 6.86 (1
H,dd,J=17.6, 1.9Hz), 6.34 (1H,dd,J=8.9, 5.6Hz), 5.
85 (1H,dd,J=10.7, 1.9Hz), 5.56 (1H,m), 4.87 (2H,
s), 4.20 (1H,m), 3.90 (2H,m), 2.95-2.75 (1H,m), 2.
60-2.50 (1H,m), 2.12 (3H,s), 1.07 (9H,s) IR (cm^-1, neat) : 3600-3100, 1740, 1600 FABMS (m/z) : 558(M+1)⁺, 500(M-57) ⁺ HR-FABMS (m/z) :C₃₀H₃₆N₅O₄Si(M+1) ⁺：計算値 558.2537 測定値 558.2535

【００３７】例５：9-(3-O- アセチル -2-デオキシ -β
-D- リボフラノシル)-2-アミノ -6-ビニルプリン(Ib) アルゴン気流下、化合物(Ia) (25 mg 、46μmol)の無水
テトラヒドロフラン (0.1 ml) 溶液を０℃に冷却し、テ
トラブチルアンモニウムフルオリド(100μl 、100 μmo
l 、THF 中 1M 溶液）を滴下した。１時間後、反応層を
シリカゲルカラムクロマトグラフィー (FL-60D、ヘキサ
ン−酢酸エチル 9:1) にて精製し化合物(Ib)を無色油状
物質として得た (14 mg 、44μmol 、収率 98%) 。

【００３８】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.77 (1H,s), 7.12
(1H,dd,J=17.5, 10.9Hz), 6.89 (1H,dd,J=17.6, 1.8H
z), 6.21 (1H,dd,J=9.9, 5.6Hz), 5.89 (1H,dd,J=10.6,
2.0Hz),5.53 (1H,d,J=5.6Hz), 5.07 (2H,brs), 4.25
(1H,m), 3.20 (1H,dd,J=9.2, 5.0Hz), 2.38 (1H,dd,J=1
4.0, 5.4Hz), 2.13 (3H,s) IR (cm^-1,neat) : 3350, 3200, 1730 FABMS (m/z) : 320(M+1)⁺, 550(M-31) ⁺

【００３９】例６：5'-O- ジ（パラメトキシフェニル）
フェニルメチルチミジリル-(3'-5')-9-(3-O-アセチル -
2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ -6-ビニ
ルプリン-3'-[P- β-(シアノエチル）エステル(Ic) アルゴン気流下、化合物(Ib) (24 mg 、75μmol)とT-ベ
ータアミダイト(84 mg、110 μmol)の無水アセトニトリ
ル (0.5 ml) 溶液に、1-テトラゾール(6) (73mg、90μm
ol)を加えて室温にて攪拌を行った。２時間攪拌後、反
応層を０℃に冷却し、t-ブチルヒドロパーオキサイド
(16μl 、86μmol 、トルエン中 5.4M 溶液）を加えて
攪拌を続けた。２時間後、不溶物を濾去し減圧下溶媒留
去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
(FL-60D、クロロホルム−メタノール99:1 →95:5) にて
精製し化合物(Ic)を無色油状物質として得た (29 mg 、
30μmol 、収率 40%) 。

【００４０】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.86 (1H,s), 7.53
(0.5H,d,J=0.99Hz), 7.46 (0.5H,d,J=13Hz), 7.42-7.17
(10H,m), 7.10 (1H,ddd,J=17.5, 10.9, 2.6Hz), 6.90-
6.77 (4H,m), 6.44-6.33 (1H,m), 6.30-6.23 (1H,m),
5.84 (1H,ddd,J=10.9, 3.6, 1.98Hz), 5.47 (1H,dd,J=1
5.8, 5.3Hz), 5.35-5.25 (3H,m), 5.22-5.10 (1H,m),
4.60-4.05 (6H,m), 3.79 (6H,s), 3.55-3.27 (3H,m),
2.72-2.24 (5H,m), 2.12 (1.5H,s), 2.11 (1.5H,s), 1.
41 (1.5H,d,J=0.99Hz), 1.38 (1.5H,d,J=0.99Hz) IR (cm^-1,neat) : 3480, 3340, 3200, 1740, 1690, 160
0 FABMS (m/z) : 979(M+1)⁺

【００４１】例７：チミジリル-(3'-5')-9-(3-O-アセチ
ル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ -6-
ビニルプリン-3'-[P- β-(シアノエチル）エステル(Id) 化合物(Ic) (2.0 mg、2.0 μmol)に、 CHCl₃ 0.1 ml 中
のトリフルオロ酢酸 (0.2 ml、3 μmol)を滴下した。５
分後、反応層にエーテル (ca. 1 ml) を加えて、析出す
る結晶を濾取し、化合物(Id)を無色粉状物質として得た
(0.6 mg、0.9μmol 、収率 45%) 。

【００４２】¹H-NMR (CDCl₃) δ 8.36 (0.5H,s), 8.32
(0.5H,s), 7.44 (0.5H,s), 7.43 (0.5H,s), 7.12-7.03
(1H,m), 6.35-6.26 (1H,m), 6.22-6.13 (1H,m), 6.06-
5.96 (1H,m), 5.58-5.48 (1H,m), 5.22-5.03 (1H,m),
4.63-4.17 (7H,m), 3.91-3.73 (3H,m), 3.54-3.19 (3H,
m), 2.82-2.72 (2H,m), 2.60-2.36 (2H,m), 2.16 (1.5
H,s), 2.15 (1.5H,s), 1.91 (1.5H,d,J=0.99Hz), 1.89
(1.5H,d,J=0.99Hz) FABMS (m/z) : 677(M+1)⁺

【００４３】例８：9-(3-O- アセチル-5-O-tert-ブチル
ジフェニルシリル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシ
ル)-2-アミノ -6-メチルビニルプリン(IIa) アルゴン気流下、化合物(4) (350 mg 、0.5 mmol) の無
水ジオキサン (5 ml)溶液に塩化リチウム (42 mg 、1.0
mmol) 及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パ
ラジウム(0) (116 mg 、0.1 mmol) を加え室温にて攪拌
した。30分後、メチルビニルトリ (n-ブチル）錫 (800
μl 、2.5 mmol、cis/trans=2.5/1)を加えて、加熱還流
した。６時間後、反応層を酢酸エチル (100 ml) にあ
け、有機層を 10%アンモニウム水 (30 ml)、飽和食塩水
(30 ml×2)で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧
下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー (クロロホルム−メタノール = 99:1)にて精製し化合
物(IIa) を淡黄色カラメル状物質として得た (238 mg、
0.42 mmol 、収率 84%) 。

【００４４】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.90 (1H,s), 7.68-
7.63 (4H,m), 7.51-7.32 (6.6H,m), 6.87 (0.4H,dq,J=1
1.2, 2.0Hz), 6.83 (0.6H,dq,J=15.5, 1.6Hz), 6.28
(0.4H,dq,J=11.5, 7.2Hz), 6.38 (1H,t,J=6.3Hz), 5.55
(1H,d,J=4.6Hz), 4.83 (1H,bs),4.19 (1H,dd,J=3.3,
2.0Hz), 3.91-3.89 (2H,m), 2.94-2.81 (1H,m), 2.56-
2.51(1H,m), 2.25 (3H,dd,J=1.7, 7.6Hz), 2.02 (3H,d
d,J=1.7, 6.9Hz), 2.02 (3H,s), 1.06 (9H,s) IR (cm^-1,neat) : 3500, 1740, 1600 FABMS (m/z) : 572(M+1)⁺, 514(M-57) ⁺

【００４５】例９：9-(3-O- アセチル-5-O-tert-ブチル
ジフェニルシリル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシ
ル)-2-アミノ-6-(2-トリメチルシリルビニル）プリン(I
IIa) アルゴン気流下、化合物(4) (104 mg 、0.15 mmol)の無
水ジオキサン (2 ml)溶液に塩化リチウム (13 mg 、0.3
mmol) 及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パ
ラジウム(0) (35 mg、0.03 mmol)を加え室温にて攪拌し
た。30分後、トリメチルシリルビニルトリ (n-ブチル）
錫 (1.7 ml、1.5 mmol) を加えて、加熱還流した。１時
間後、反応層を酢酸エチル (50 ml)にあけ、有機層を 1
0%アンモニウム水 (10 ml)、飽和食塩水 (10 ml ×2)で
洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン
−酢酸エチル 20:1 →10:1) にて精製し化合物(IIIa)を
淡黄色カラメル状物質として得た (80 mg 、0.13 mmol
、収率 87%) 。

【００４６】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.95 (1H,s), 7.73
(1H,d,J=19.1Hz), 7.68-7.64 (4H,m),7.45-7.33 (6H,
m), 7.36 (1H,d,J=19.1Hz), 6.34 (1H,dd,J=8.9, 5.3H
z), 5.57(1H,bd,J=6.3Hz), 4.97 (2H,b), 4.91 (1H,d,J
=2.0Hz), 3.92-3.90 (2H,m), 2.88-2.79 (1H,m), 2.56-
2.49 (1H,m), 2.12 (3H,s), 1.08 (9H,s), 0.21 (9H,s) IR (cm^-1,neat) : 3300, 1740, 1595, 1570 FABMS (m/z) : 630(M+1)⁺

【００４７】例10：9-(5-O-tert-ブチルジフェニルシリ
ル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ-6-
(2-トリメチルシリルビニル）プリン(IIIb) 化合物(IIIa) (72 mg 、0.11 mmol)のメタノール (1.0
ml) 溶液に炭酸カリウム (110 mg、0.8 mmol) を加え室
温にて30分間攪拌した。反応層を塩化メチレン(30 ml)
で希釈し飽和塩化アンモニウム水溶液 (10 ml)、飽和食
塩水 (10 ml)で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減
圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー (クロロホルム−メタノール = 98:2 → 95:5)にて
精製し化合物(IIIb)を淡黄色油状物質として得た (67 m
g 、0.11 mmol 、収率 100%)。

【００４８】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.90 (1H,s), 7.71
(1H,d,J=19.1Hz), 7.68-7.64 (4H,m),7.45-7.33 (6H,
m), 7.34 (1H,d,J=19.1Hz), 4.81 (2H,bs), 4.70 (1H,d
t,J=3.0,2.6Hz), 4.10 (1H,dd,J=7.3, 4.3Hz), 3.87 (1
H,dd,J=10.9, 5.3Hz), 3.81 (1H,dd,J=11.2, 4.3Hz),
2.70 (1H,dt,J=13.5, 7.3Hz), 2.44 (1H,ddd,J=13.2,
5.9, 3.3Hz), 1.07 (9H,m), 0.20 (9H,s) IR (cm^-1,neat) : 3500, 1605, 1590 FABMS (m/z) : 588(M+1)⁺, 530(M-57)

【００４９】例11：9-(5-O-tert-ブチルジフェニルシリ
ル -2-デオキシ -3-O-H-ホスホネート-β-D- リボフラ
ノシル)-2-アミノ-6-(2-トリメチルシリルビニル）プリ
ン・トリエチルアンモニウム塩(IIIc) アルゴン気流下、三塩化リン (4.4 μl 、0.05 mmol)を
塩化メチレン (1.5 ml) に溶かし、室温中で N- メチル
モルホリン (4.4 μl 、0.05 mmol) 1,2,4- トリアゾー
ルを加え室温で30分間攪拌した。反応液を -78℃に冷却
し、化合物(IIIb) (11 mg 、0.03 mmol)の塩化メチレン
(0.5 ml) 溶液を滴下し -60℃で10時間攪拌後、TEABバ
ッファー(10 ml) 中に注ぎ分離、水層を塩化メチレン
(30 ml)で４回抽出、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減
圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー (クロロホルム−トリエチルアミン = 98:2 →クロ
ロホルム−メタノール−トリエチルアミン = 88:10:2)
にて精製し化合物(IIIc)を淡黄色油状物質として得た
(14 mg 、0.02 mmol 、収率 73%) 。

【００５０】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.91 (1H,s), 7.68
(1H,d,J=19.1Hz), 7.68-7.64 (4H,m),7.45-7.33 (6H,
m), 7.33 (1H,d,J=19.1Hz), 6.37 (1H,dd,J=8.2, 6.3H
z), 5.12-5.10 (1H,m), 4.93 (2H,bs), 4.30 (1H,dd,J=
6.3, 3.6Hz), 3.91 (1H,dd,J=11.2, 4.3Hz), 3.82 (1H,
dd,J=11.2, 4.0Hz), 3.05-2.73 (2H,m), 3.07 (6H,q,J=
7.3Hz), 1.34 (9H,t,J=7.3Hz), 1.03 (9H,s), 0.18 (9
H,s) IR (cm^-1,neat) : 3500, 1605, 1590 FABMS (m/z) : 652(M+1)⁺, 594(M-57)

【００５１】例12：本発明の化合物のクロスリンク剤と
しての機能本発明のビニル化デオキシグアノシン誘導体のクロスリ
ンク剤としての機能評価を行った。下記のスキームに従
い、本発明の化合物(IIa) 及び(IIIa)を用いて、ビニル
化デオキシグアノシン誘導体とヒドロキシルアミンとを
反応させ、ビニル化デオキシグアノシン誘導体の半減期
(t_1/2)を求めた。反応条件の詳細は以下のとおりであ
る。その結果、化合物IIa のt_1/2は１時間であり、化合
物(IIIa)のt_1/2は18時間以上であった。

【００５２】

【化８】

【００５３】例13：化合物(IIa) とヒドロキシルアミン
塩酸塩との付加体(10) 化合物(IIa) (30 mg、70μmol)のエタノール (7.0 ml)
溶液にヒドロキシルアミン塩酸塩 (24 mg 、350 μmol)
を加え、室温にて攪拌した。24時間後、溶媒を減圧下留
去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
(FL-60D、クロロホルム→クロロホルム−メタノール 9
5:5)にて精製して付加体(10)を黄色油状物質として得た
(16 mg 、26μmol 、収率 38%) 。

【００５４】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.93 (1H,s), 7.68-
7.63 (4H,m), 7.51-7.32 (6H,m), 6.33-6.27 (1H,m),
5.75 (2H,bs), 5.53 (1H,d,J=5.9Hz), 4.18 (1H,t,J=1.
7Hz), 3.92-3.85 (3H,m), 3.52 (1H,d,J=16.5Hz), 3.36
-3.28 (1H,m), 2.78-2.71 (1H,m), 2.57-2.49 (1H,m),
2.11 (3H,s), 1.52 (3H,d,J=6.6Hz), 1.02 (9H,s),IR
(cm^-1,neat) : 3500, 1720, 1600 FABMS (m/z) : 605(M⁺+1) 、 572(M⁺-33) HR-FABMS (m/z) :C₃₁H₄₁N₆O₅Si(M⁺+1) ：計算値 605.2908 測定値 605.2910

【００５５】例14：化合物(IIIa)とヒドロキシルアミン
塩酸塩との付加体(11) 化合物(IIIa) (10 mg 、1.6 μmol)のエタノール (1 m
l) 溶液にヒドロキシルアミン塩酸塩 (5.5 mg、8 μmol
、エタノール 0.5 ml 中) を加え、室温にて攪拌し
た。24時間後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー (FL-60D、クロロホルム→
クロロホルム−メタノール 95:5)にて精製し付加体(11)
を無色油状物質(cis体＋trans 体混合物) として得た
(4.0 mg、0.68μmol 、収率 44%) 。

【００５６】¹H-NMR (CDCl₃) δ 7.92 (1H,s), 7.18
(1H,t,J=4.9Hz), 7.75 (1H,t,J=5.9Hz,minor), 7.68-7.
63 (4H,m), 7.51-7.32 (6H,m), 6.31 (1H,dd,J=5.6, 8.
9Hz), 5.56 (1H,d,J=5.9Hz), 5.01 (2H,bs), 4.19 (1H,
dd,J=3.3, 2.0Hz), 4.15 (2H,d,J=4.9Hz), 3.94 (2H,d,
J=6.3Hz,minor), 3.91-3.89 (2H,m), 2.94-2.81 (1H,
m),2.56-2.51 (1H,m), 2.12 (3H,s), 1.07 (9H,s), IR (cm^-1,neat) : 3600-3300, 1605, 1590 FABMS (m/z) : 589(M⁺+1) 、 573(M⁺-15) HR-FABMS (m/z) :C₃₀H₃₇N₆O₅Si(M⁺+1) ：計算値 589.2600 測定値 589.2595

【００５７】

【発明の効果】本発明の化合物は化学的に安定であり、
かつシチジンやグアノシンなどの求核性分子と容易に反
応して共有結合を形成する性質を有している。本発明の
化合物を製造用中間体として用いると、クロスリンク能
を有するアンチセンスオリゴ核酸を製造することができ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者前田稔福岡県福岡市東区香住ケ丘３−24−21 (72)発明者佐々木茂貴福岡県粕屋郡古賀町千鳥１−３−６−301

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記式(I): 【化１】〔式中のR¹、R²、及びR³は下記(1) 〜(3) のいずれかに
より定義される： (1)R¹ は水素原子を示し、R²は水素原子、tert- ブチル
ジフェニルシリル基、若しくは下記の式：【化２】（式中、R⁴は水素原子若しくはジ（p-メトキシフェニ
ル）フェニルメチル基を示す）で示される基を示し、か
つR³はアセチル基を示す； (2) R¹はメチル基を示し、R²はtert- ブチルジフェニル
シリル基を示し、かつR³はアセチル基を示す；又は (3) R¹はトリメチルシリル基を示し、R²はtert- ブチル
ジフェニルシリル基を表し、かつR³は水素原子、アセチ
ル基、若しくは-P(O)(OH)Hを示す〕で表されるビニル化
デオキシグアノシン誘導体又はその塩。
【請求項２】請求項１に記載のビニル化デオキシグア
ノシン誘導体からなるアンチセンスオリゴ核酸製造用中
間体。
【請求項３】クロスリンク能を有するアンチセンスオ
リゴ核酸の製造に用いる請求項２に記載の製造用中間
体。
【請求項４】請求項１に記載の化合物を用いて製造さ
れたアンチセンスオリゴ核酸。
【請求項５】クロスリンク能を有する請求項４に記載
のアンチセンスオリゴ核酸。