JPH0972906A - 腎・尿路系疾患の鑑別診断用キット - Google Patents
腎・尿路系疾患の鑑別診断用キットInfo
- Publication number
- JPH0972906A JPH0972906A JP25193995A JP25193995A JPH0972906A JP H0972906 A JPH0972906 A JP H0972906A JP 25193995 A JP25193995 A JP 25193995A JP 25193995 A JP25193995 A JP 25193995A JP H0972906 A JPH0972906 A JP H0972906A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- urinary tract
- urine
- cea
- myeloperoxidase
- urinary
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 腎・尿路系疾患を確実に鑑別診断できるキッ
トを提供する。 【解決手段】 尿中の白血球の顆粒内成分（Ｌｆ，ＭＰ
Ｏ）と、尿路系粘膜上皮細胞が産生するＣＥＡを測定対
象にして、腎・尿路系疾患の鑑別診断を行う。
トを提供する。 【解決手段】 尿中の白血球の顆粒内成分（Ｌｆ，ＭＰ
Ｏ）と、尿路系粘膜上皮細胞が産生するＣＥＡを測定対
象にして、腎・尿路系疾患の鑑別診断を行う。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、腎・尿路系疾患
の鑑別診断用キットに関し、特に、尿中のラクトフェリ
ン、ミエロペルオキシダーゼおよびＣＥＡを測定対象と
して、該項目を複合測定することにより、腎と下部尿路
系疾患を確実に鑑別診断するキットに関する。
の鑑別診断用キットに関し、特に、尿中のラクトフェリ
ン、ミエロペルオキシダーゼおよびＣＥＡを測定対象と
して、該項目を複合測定することにより、腎と下部尿路
系疾患を確実に鑑別診断するキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】腎・尿路系の疾患を診断する上で重要な
検査法として、尿沈渣がある。尿沈渣所見を十分得るこ
とによって、腎における組織学的変化が推定できる。例
えば、一般検尿で潜血反応が陽性の場合には、尿沈渣で
赤血球の有無とその形態を観察することによって、その
原因が血尿によるものか、他の色素尿によるものか、あ
るいは糸球体由来の血尿か、泌尿器科的疾患による血尿
か鑑別できる。つまりこの方法は尿中の赤血球を観察す
ることにより、腎・尿路系の疾患を鑑別しようとするも
のである。一方、腎疾患の早期発見のマーカーとして尿
中の微量蛋白を検出する方法が広く用いられている。ア
ルブミン、トランスフェリン、プレアルブミンが測定対
象とされ、特にトランスフェリンが腎の早期病変を反映
するとの評価がある。また、尿路感染症は主として細菌
の上行性感染により起こり、尿中に細菌とともに白血球
が出現するため、その診断には尿沈渣の鏡検や尿の細菌
学的検査が行われる。尿沈渣の鏡検（×４００）で白血
球が５コ／ＨＰＦ以上検出されれば尿路感染症の存在が
疑われ、膀胱や腎盂から直接得られた尿中に細菌を証明
すれば診断は確定するが、膀胱や腎盂を直接穿刺して採
尿することはむしろまれで、中間尿が採取されることが
多い。
検査法として、尿沈渣がある。尿沈渣所見を十分得るこ
とによって、腎における組織学的変化が推定できる。例
えば、一般検尿で潜血反応が陽性の場合には、尿沈渣で
赤血球の有無とその形態を観察することによって、その
原因が血尿によるものか、他の色素尿によるものか、あ
るいは糸球体由来の血尿か、泌尿器科的疾患による血尿
か鑑別できる。つまりこの方法は尿中の赤血球を観察す
ることにより、腎・尿路系の疾患を鑑別しようとするも
のである。一方、腎疾患の早期発見のマーカーとして尿
中の微量蛋白を検出する方法が広く用いられている。ア
ルブミン、トランスフェリン、プレアルブミンが測定対
象とされ、特にトランスフェリンが腎の早期病変を反映
するとの評価がある。また、尿路感染症は主として細菌
の上行性感染により起こり、尿中に細菌とともに白血球
が出現するため、その診断には尿沈渣の鏡検や尿の細菌
学的検査が行われる。尿沈渣の鏡検（×４００）で白血
球が５コ／ＨＰＦ以上検出されれば尿路感染症の存在が
疑われ、膀胱や腎盂から直接得られた尿中に細菌を証明
すれば診断は確定するが、膀胱や腎盂を直接穿刺して採
尿することはむしろまれで、中間尿が採取されることが
多い。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、尿沈渣
で尿中赤血球を観察することにより腎・尿路系の疾患を
鑑別する方法では、変形赤血球と非変形赤血球を形態で
見分ける作業が困難で技術的に熟練を要す。尿中の微量
蛋白を検出する腎病変の早期診断法についても感度的に
十分とはいえない。また、尿路感染症の診断法で尿中に
細菌を証明する方法については、一般的に用いられる検
体としての中間尿では尿道や外陰部の常在菌が混入する
可能性があるため、１０5 ＣＦＵ／ml以上を有意の細菌
尿とし１０3 ＣＦＵ／ml以下を汚染尿とすることが一般
的である。このため尿路感染症の診断には尿中細菌の定
量培養を行い、尿１ml中の細菌数を測定する必要があり
繁雑で一般的に行える検査とは言いがたい。さらに、尿
中の白血球も崩壊が激しいため沈渣鏡検法での成績の信
頼度は低い。この発明はこれらの問題点に着目してなさ
れたものであって、上記の従来の方法にかわる新しい検
査方法によって、腎・尿路系疾患の鑑別診断用キットを
提供することを目的とする。
で尿中赤血球を観察することにより腎・尿路系の疾患を
鑑別する方法では、変形赤血球と非変形赤血球を形態で
見分ける作業が困難で技術的に熟練を要す。尿中の微量
蛋白を検出する腎病変の早期診断法についても感度的に
十分とはいえない。また、尿路感染症の診断法で尿中に
細菌を証明する方法については、一般的に用いられる検
体としての中間尿では尿道や外陰部の常在菌が混入する
可能性があるため、１０5 ＣＦＵ／ml以上を有意の細菌
尿とし１０3 ＣＦＵ／ml以下を汚染尿とすることが一般
的である。このため尿路感染症の診断には尿中細菌の定
量培養を行い、尿１ml中の細菌数を測定する必要があり
繁雑で一般的に行える検査とは言いがたい。さらに、尿
中の白血球も崩壊が激しいため沈渣鏡検法での成績の信
頼度は低い。この発明はこれらの問題点に着目してなさ
れたものであって、上記の従来の方法にかわる新しい検
査方法によって、腎・尿路系疾患の鑑別診断用キットを
提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成する
為、この発明では、尿中の白血球の顆粒内成分と尿路系
粘膜上皮細胞が産生するＣＥＡを測定対象にしている。
顆粒内成分としては、ラクトフェリン、顆粒球エラスタ
ーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、リゾチーム、カテプシ
ンＧ、プロナーゼ３などが該当するが、特にラクトフェ
リンやミエロペルオキシダーゼを測定対象とすることが
望ましい。また、尿路系粘膜上皮細胞が産生するＣＥＡ
以外にも分泌型IgA が測定対象として考えられるが、病
原細菌の侵入を防御する成分としてはＣＥＡを測定対象
とすることが望ましい。なお、ラクトフェリンやミエロ
ペルオキシダーゼ、ＣＥＡを検出するには、酵素免疫法
（ＥＬＩＳＡ法）、放射免疫法（ＲＩＡ法）、発光酵素
免疫法、ラッテクス凝集反応、金コロイド法など日常、
多用されている免疫学的測定法を用いることができる。
為、この発明では、尿中の白血球の顆粒内成分と尿路系
粘膜上皮細胞が産生するＣＥＡを測定対象にしている。
顆粒内成分としては、ラクトフェリン、顆粒球エラスタ
ーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、リゾチーム、カテプシ
ンＧ、プロナーゼ３などが該当するが、特にラクトフェ
リンやミエロペルオキシダーゼを測定対象とすることが
望ましい。また、尿路系粘膜上皮細胞が産生するＣＥＡ
以外にも分泌型IgA が測定対象として考えられるが、病
原細菌の侵入を防御する成分としてはＣＥＡを測定対象
とすることが望ましい。なお、ラクトフェリンやミエロ
ペルオキシダーゼ、ＣＥＡを検出するには、酵素免疫法
（ＥＬＩＳＡ法）、放射免疫法（ＲＩＡ法）、発光酵素
免疫法、ラッテクス凝集反応、金コロイド法など日常、
多用されている免疫学的測定法を用いることができる。
【０００５】腎炎において、多数の湿潤細胞（白血球）
が糸球体内に集合することから、白血球の顆粒内成分の
うち、尿に排泄しやすい成分（この時白血球は糸球体で
崩壊するため尿中には排泄されない）と、排泄が困難な
成分があれば、排泄しやすい成分を測定することにより
腎の病変を早期に検出できると考えた。しかし、尿路感
染症時には尿路に白血球が多数湿潤するために、尿中に
は白血球の顆粒成分が全て存在することになるので、白
血球に存在を示すマーカー（腎炎時に糸球体に湿潤した
白血球の顆粒内成分のなかで尿に排泄されない成分が適
当）を設定する必要がある。この二種類の顆粒内成分を
同時に測定すれば、理論的には腎・尿路系病変の鑑別診
断が可能と考えられた。白血球顆粒内成分の中でラクト
フェリンが前者（尿中に排泄されやすい）として適当で
あり、ミエロペルオキシダーゼが後者（尿中に排泄され
ない、ミエロペルオキシダーゼは分子量が約１４０Ｋと
大きく、また糸球体基底膜のヒアルロン酸に付着するた
め尿中に排泄されない）として適当であることを発見し
た。
が糸球体内に集合することから、白血球の顆粒内成分の
うち、尿に排泄しやすい成分（この時白血球は糸球体で
崩壊するため尿中には排泄されない）と、排泄が困難な
成分があれば、排泄しやすい成分を測定することにより
腎の病変を早期に検出できると考えた。しかし、尿路感
染症時には尿路に白血球が多数湿潤するために、尿中に
は白血球の顆粒成分が全て存在することになるので、白
血球に存在を示すマーカー（腎炎時に糸球体に湿潤した
白血球の顆粒内成分のなかで尿に排泄されない成分が適
当）を設定する必要がある。この二種類の顆粒内成分を
同時に測定すれば、理論的には腎・尿路系病変の鑑別診
断が可能と考えられた。白血球顆粒内成分の中でラクト
フェリンが前者（尿中に排泄されやすい）として適当で
あり、ミエロペルオキシダーゼが後者（尿中に排泄され
ない、ミエロペルオキシダーゼは分子量が約１４０Ｋと
大きく、また糸球体基底膜のヒアルロン酸に付着するた
め尿中に排泄されない）として適当であることを発見し
た。
【０００６】若年者の腎疾患の早期診断法として学校検
尿が実施されている。この検診で発見される腎炎の発症
年齢は８０％の症例で１１〜１５才であることが知られ
ている。保育園児から高校生、社会人までの各年齢群に
ついて、尿中のラクトフェリンとミエロペルオキシダー
ゼを測定した結果、小学校４年生までの群（ｎ＝６４
０）では、尿中ラクトフェリンとミエロペルオキシダー
ゼが良好な相関をもって存在する（白血球の存在を意味
する）ことが解り、小学校５年生以上の群（ｎ＝７２
０）でミエロペルオキシダーゼは低値にもかかわらず、
ラクトフェリンが異常に高値を示す症例が認められた。
（図１） また尿中ラクトフェリン、ミエロペルオキシダーゼ共に
正常な群と、ミエロペルオキシダーゼが低値でラクトフ
ェリンのみ高値を示す群について尿中トランスフェリン
（腎炎の早期診断マーカーとして、蛋白成分のなかでは
最も感度が高いといわれている）濃度を比較した結果、
ラクトフェリンのみ高値群でトランスフェリンが有意に
高値を示した。（図２）この場合のトランスフェリン濃
度はいずれも正常範囲内であったことから、尿中ラクト
フェリン濃度を指標とする腎炎の早期診断の有用性が示
唆された。さらに尿中ミエロペルオキシダーゼが高値を
示す場合は尿路系（腎から下）に白血球が存在すること
を意味するが、尿路感染症による白血球の増多か否かの
鑑別にはＣＥＡを測定すれば良い。ＣＥＡは尿路系粘膜
上皮細胞で産生され、その役割は病原微生物が生体内に
侵入するのを防御する成分であるので、尿路感染症時に
は増加することが考えられる。尿中白血球陰性群と陽性
群について、尿中のＣＥＡ濃度を比較すると白血球陽性
群でＣＥＡ濃度が有意に高値を示した。（図３） 以上のごとく、尿中のラクトフェリンとミエロペルオキ
シダーゼ、ミエロペルオキシダーゼとＣＥＡを測定する
ことにより腎・尿路系の疾患が鑑別できる。
尿が実施されている。この検診で発見される腎炎の発症
年齢は８０％の症例で１１〜１５才であることが知られ
ている。保育園児から高校生、社会人までの各年齢群に
ついて、尿中のラクトフェリンとミエロペルオキシダー
ゼを測定した結果、小学校４年生までの群（ｎ＝６４
０）では、尿中ラクトフェリンとミエロペルオキシダー
ゼが良好な相関をもって存在する（白血球の存在を意味
する）ことが解り、小学校５年生以上の群（ｎ＝７２
０）でミエロペルオキシダーゼは低値にもかかわらず、
ラクトフェリンが異常に高値を示す症例が認められた。
（図１） また尿中ラクトフェリン、ミエロペルオキシダーゼ共に
正常な群と、ミエロペルオキシダーゼが低値でラクトフ
ェリンのみ高値を示す群について尿中トランスフェリン
（腎炎の早期診断マーカーとして、蛋白成分のなかでは
最も感度が高いといわれている）濃度を比較した結果、
ラクトフェリンのみ高値群でトランスフェリンが有意に
高値を示した。（図２）この場合のトランスフェリン濃
度はいずれも正常範囲内であったことから、尿中ラクト
フェリン濃度を指標とする腎炎の早期診断の有用性が示
唆された。さらに尿中ミエロペルオキシダーゼが高値を
示す場合は尿路系（腎から下）に白血球が存在すること
を意味するが、尿路感染症による白血球の増多か否かの
鑑別にはＣＥＡを測定すれば良い。ＣＥＡは尿路系粘膜
上皮細胞で産生され、その役割は病原微生物が生体内に
侵入するのを防御する成分であるので、尿路感染症時に
は増加することが考えられる。尿中白血球陰性群と陽性
群について、尿中のＣＥＡ濃度を比較すると白血球陽性
群でＣＥＡ濃度が有意に高値を示した。（図３） 以上のごとく、尿中のラクトフェリンとミエロペルオキ
シダーゼ、ミエロペルオキシダーゼとＣＥＡを測定する
ことにより腎・尿路系の疾患が鑑別できる。
【０００７】
（Ａ）尿試料の作成 トリトンＸ−１００を０．１％含む生理食塩水で２倍希
釈した尿を試料とした。 （Ｂ）ＥＬＩＳＡによるラクトフェリンの測定 〔マイクロプレートへの抗体の固相化〕マイクロプレー
ト（SUMILON,Japan ）の各wellに、抗ヒトラクトフェリ
ン抗体(DAKOPATTS,Denmark) ５μｇ／ｍｌを含む0.1 Ｍ
Tris緩衝液を100 μｌづつ分注し、一夜４℃で放置して
物理吸着させて表面に固相化する。 〔酵素標識抗体の
調整〕 別途、過ヨウ素酸法により、アルカリホスファターゼ
（Beehringer-Mannheim,FRG)を抗ヒトラクトフェリン抗
体に酵素標識して調整する。 〔尿中ラクトフェリン測定〕各wellに100 μｌの１％Ｂ
ＳＡ（Beehringer-Mannheim,FRG)を含むTris緩衝液(0.1
mol/l pH8.0)を分注し、次いで、５０μｌの尿試料を加
え、混和した後、３７℃で１時間反応させる。次にTwee
n ２０を0.05％含む脱イオン水で３回洗浄する。その
後、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトラクトフェリン
抗体溶液（１％ＢＳＡを含むトリス緩衝液）を各wellに
100 μｌづつ加え混和した後、３７℃で１時間反応さ
せ、先と同様に３回洗浄する。さらにＫｉｎｇ−Ｋｉｎ
ｇ法の基質緩衝液100 μｌを各wellに加え、３７℃で３
０分間反応させる。ここで基質緩衝液は、Sisodium Phe
nyl-phosphate(WAKO Junyaku Japan製)0.215g と4-ａmi
noantipyrine(WAKO Junyaku Japan 製)0.09gを、炭酸緩
衝液(0.05mol/l pH10.15)100mlに溶解したものである。
次いで、100 μｌの呈色液を各wellに加えて呈色させ
る。ここで呈色液は、200 ｍｌの脱イオン水に2.6gのホ
ウ酸(WAKO Junyaku Japan 製) を溶解させた後、0.38g
のPotassium ferricyande(WAKO Junyaku Japan製) を溶
解させたものである。最後に、各wellの呈色をマイクロ
プレート用比色計(Sanko Junyaku Japan製)を用いて510
/680nm の波長光で比色し、検量線から尿中のラクトフ
ェリン濃度を算出する。
釈した尿を試料とした。 （Ｂ）ＥＬＩＳＡによるラクトフェリンの測定 〔マイクロプレートへの抗体の固相化〕マイクロプレー
ト（SUMILON,Japan ）の各wellに、抗ヒトラクトフェリ
ン抗体(DAKOPATTS,Denmark) ５μｇ／ｍｌを含む0.1 Ｍ
Tris緩衝液を100 μｌづつ分注し、一夜４℃で放置して
物理吸着させて表面に固相化する。 〔酵素標識抗体の
調整〕 別途、過ヨウ素酸法により、アルカリホスファターゼ
（Beehringer-Mannheim,FRG)を抗ヒトラクトフェリン抗
体に酵素標識して調整する。 〔尿中ラクトフェリン測定〕各wellに100 μｌの１％Ｂ
ＳＡ（Beehringer-Mannheim,FRG)を含むTris緩衝液(0.1
mol/l pH8.0)を分注し、次いで、５０μｌの尿試料を加
え、混和した後、３７℃で１時間反応させる。次にTwee
n ２０を0.05％含む脱イオン水で３回洗浄する。その
後、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトラクトフェリン
抗体溶液（１％ＢＳＡを含むトリス緩衝液）を各wellに
100 μｌづつ加え混和した後、３７℃で１時間反応さ
せ、先と同様に３回洗浄する。さらにＫｉｎｇ−Ｋｉｎ
ｇ法の基質緩衝液100 μｌを各wellに加え、３７℃で３
０分間反応させる。ここで基質緩衝液は、Sisodium Phe
nyl-phosphate(WAKO Junyaku Japan製)0.215g と4-ａmi
noantipyrine(WAKO Junyaku Japan 製)0.09gを、炭酸緩
衝液(0.05mol/l pH10.15)100mlに溶解したものである。
次いで、100 μｌの呈色液を各wellに加えて呈色させ
る。ここで呈色液は、200 ｍｌの脱イオン水に2.6gのホ
ウ酸(WAKO Junyaku Japan 製) を溶解させた後、0.38g
のPotassium ferricyande(WAKO Junyaku Japan製) を溶
解させたものである。最後に、各wellの呈色をマイクロ
プレート用比色計(Sanko Junyaku Japan製)を用いて510
/680nm の波長光で比色し、検量線から尿中のラクトフ
ェリン濃度を算出する。
【０００８】（Ｃ）ミエロペルオキシダーゼの測定 〔マイクロプレートへの抗体の固相化〕マイクロプレー
ト(SUMILON,Japan) の各wellに、抗ヒトミエロペルオキ
シダーゼ抗体(DAKOPATTS,Denmark)5μg/ｍｌを含む0.1M
Tris 緩衝液を100 μｌづつ分注し、一夜４℃で放置し
て物理吸着させて表面に固相化する。 〔酵素標識抗体の調整〕別途、過ヨウ素酸法により、ア
ルカリホスファターゼ(Beehringer-Mannheim,FRG) を抗
ヒトミエロペルオキシダーゼ抗体に酵素標識して調整す
る。 〔尿中ミエロペルオキシダーゼ測定〕各wellに100 μｌ
の１％ＢＳＡ(Beehringer-Mannheim,FRG) を含むTris緩
衝液(0.1mol/l pH8.0)を分注し、次いで、５０μｌの尿
試料を加え、混和した後、３７℃で１時間反応させる。
次にTween ２０を0.05％含む脱イオン水で３回洗浄す
る。その後、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトミエロ
ペルオキシダーゼ抗体溶液（１％ＢＳＡを含むトリス緩
衝液）を各Wellに100 μｌづつ加え混和した後、３７℃
で１時間反応させ、先と同様に３回洗浄する。さらにＫ
ｉｎｇ−Ｋｉｎｇ法の基質緩衝液100 μｌを各wellに加
え、３７℃で３０分間反応させる。次いで、100 μｌの
呈色液を各wellに加えて呈色させる。最後に、各wellの
呈色をマイクロプレート用比色計(Sanko Junyaku Japan
製) を用いて510/680nm の波長光で比色し、検量線から
尿中のミエロペルオキシダーゼ濃度を算出する。
ト(SUMILON,Japan) の各wellに、抗ヒトミエロペルオキ
シダーゼ抗体(DAKOPATTS,Denmark)5μg/ｍｌを含む0.1M
Tris 緩衝液を100 μｌづつ分注し、一夜４℃で放置し
て物理吸着させて表面に固相化する。 〔酵素標識抗体の調整〕別途、過ヨウ素酸法により、ア
ルカリホスファターゼ(Beehringer-Mannheim,FRG) を抗
ヒトミエロペルオキシダーゼ抗体に酵素標識して調整す
る。 〔尿中ミエロペルオキシダーゼ測定〕各wellに100 μｌ
の１％ＢＳＡ(Beehringer-Mannheim,FRG) を含むTris緩
衝液(0.1mol/l pH8.0)を分注し、次いで、５０μｌの尿
試料を加え、混和した後、３７℃で１時間反応させる。
次にTween ２０を0.05％含む脱イオン水で３回洗浄す
る。その後、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトミエロ
ペルオキシダーゼ抗体溶液（１％ＢＳＡを含むトリス緩
衝液）を各Wellに100 μｌづつ加え混和した後、３７℃
で１時間反応させ、先と同様に３回洗浄する。さらにＫ
ｉｎｇ−Ｋｉｎｇ法の基質緩衝液100 μｌを各wellに加
え、３７℃で３０分間反応させる。次いで、100 μｌの
呈色液を各wellに加えて呈色させる。最後に、各wellの
呈色をマイクロプレート用比色計(Sanko Junyaku Japan
製) を用いて510/680nm の波長光で比色し、検量線から
尿中のミエロペルオキシダーゼ濃度を算出する。
【０００９】（Ｄ）尿中ＣＥＡの測定 〔マイクロプレートへの抗体の固相化〕マイクロプレー
ト(SUMILON,Japan) の各wellに、抗ヒトＣＥＡモノクロ
ーナル抗体（特殊免疫、ＮＣＡと交差反応を示さない）
５μｇ／ｍｌを含む0.1M Tris緩衝液を100 μｌづつ分
注し、一夜４℃で放置させて表面に固相化する。 〔酵素標識抗体の調整〕別途、過ヨウ素酸法により、ア
ルカリホスファターゼ(Beehringer-Mannheim,FRG) を抗
ヒトＣＥＡ抗体(DAKOPATTS,Denmark) に酵素標識して調
整する。 〔尿中ＣＥＡ測定〕各ｗｅllに100 μｌの１％ＢＳＡ(B
eehringer-Mannheim,FRG) を含むTris緩衝液(0.1mol/l
pH8.0)を分注し、次いで、５０μｌの尿試料を加え、混
和した後、３７℃で１時間反応させる。次にTween ２０
を0.05％含む脱イオン水で３回洗浄する。その後、アル
カリホスファターゼ標識抗ヒトＣＥＡ抗体溶液（１％Ｂ
ＡＥを含むトリス緩衝液）を各wellに100 μｌづつ加え
混和した後３７℃で１時間反応させ、先と同様に３回洗
浄する。さらにＫｉｎｇ−Ｋｉｎｇ法の基質緩衝液100
μｌを各wellに加え、３７℃で３０分間反応させる。次
いで、100 μｌの呈色液を各wellに加えて呈色させる。
最後に、各wellの呈色をマイクロプレート用比色計(San
ko Junyaku Japan製) を用いて510/680nm の波長光で比
色し、検量線から尿中のＣＥＡ濃度を算出する。
ト(SUMILON,Japan) の各wellに、抗ヒトＣＥＡモノクロ
ーナル抗体（特殊免疫、ＮＣＡと交差反応を示さない）
５μｇ／ｍｌを含む0.1M Tris緩衝液を100 μｌづつ分
注し、一夜４℃で放置させて表面に固相化する。 〔酵素標識抗体の調整〕別途、過ヨウ素酸法により、ア
ルカリホスファターゼ(Beehringer-Mannheim,FRG) を抗
ヒトＣＥＡ抗体(DAKOPATTS,Denmark) に酵素標識して調
整する。 〔尿中ＣＥＡ測定〕各ｗｅllに100 μｌの１％ＢＳＡ(B
eehringer-Mannheim,FRG) を含むTris緩衝液(0.1mol/l
pH8.0)を分注し、次いで、５０μｌの尿試料を加え、混
和した後、３７℃で１時間反応させる。次にTween ２０
を0.05％含む脱イオン水で３回洗浄する。その後、アル
カリホスファターゼ標識抗ヒトＣＥＡ抗体溶液（１％Ｂ
ＡＥを含むトリス緩衝液）を各wellに100 μｌづつ加え
混和した後３７℃で１時間反応させ、先と同様に３回洗
浄する。さらにＫｉｎｇ−Ｋｉｎｇ法の基質緩衝液100
μｌを各wellに加え、３７℃で３０分間反応させる。次
いで、100 μｌの呈色液を各wellに加えて呈色させる。
最後に、各wellの呈色をマイクロプレート用比色計(San
ko Junyaku Japan製) を用いて510/680nm の波長光で比
色し、検量線から尿中のＣＥＡ濃度を算出する。
【００１０】（Ｅ）尿中ミエロペルオキシダーゼ、ラク
トフェリン、ＣＥＡカットオフ値 健常人尿中のミエロペルオキシダーゼ濃度は27.0±34.1
ng/ml であり、カットオフ値は95ng/ml と設定した。尿
中ラクトフェリン濃度は31.1±36.2ng/ml でありカット
オフ値は105ng/mlと設定した。また尿中ＣＥＡ濃度は3.
8 ±2.1ng/mlであり、カットオフ値は8.0ng/mlと設定し
た。 （Ｆ）判定 尿中ラクトフェリン濃度と、尿中ミエロペルオキシダ
ーゼ濃度の測定結果から、以下の(a) 〜(c) に振り分け
る。 (a) 尿中ラクトフェリン濃度(Lf)が105ng/ml以下で、尿
中ミエロペルオキシダーゼ濃度(MPO) が95ng/ml 以下の
場合は、正常と判定する。 (b) 尿中ラクトフェリン濃度(Lf)が105ng/ml以上で、尿
中ミエロペルオキシダーゼ濃度(MPO) が95ng/ml 以下の
場合であって、MPO/Lfが0.2 未満であれば、腎炎の可能
性が大であると判定する。 (c) 尿中ラクトフェリン濃度(Lf)が105ng/ml以上で、尿
中ミエロペルオキシダーゼ濃度(MPO) が95ng/ml 以下の
場合は、尿路感染症の疑いがある。 上記した(c) の場合には、さらに尿中ＣＥＡ濃度を測
定して、これが8.0ng/ml以上であれば、尿路感染症の可
能性が大であると判定する。 なお、予め尿路感染症と診断がついている場合は、Ｍ
ＰＯとＣＥＡのみを測定して経過観察をする。
トフェリン、ＣＥＡカットオフ値 健常人尿中のミエロペルオキシダーゼ濃度は27.0±34.1
ng/ml であり、カットオフ値は95ng/ml と設定した。尿
中ラクトフェリン濃度は31.1±36.2ng/ml でありカット
オフ値は105ng/mlと設定した。また尿中ＣＥＡ濃度は3.
8 ±2.1ng/mlであり、カットオフ値は8.0ng/mlと設定し
た。 （Ｆ）判定 尿中ラクトフェリン濃度と、尿中ミエロペルオキシダ
ーゼ濃度の測定結果から、以下の(a) 〜(c) に振り分け
る。 (a) 尿中ラクトフェリン濃度(Lf)が105ng/ml以下で、尿
中ミエロペルオキシダーゼ濃度(MPO) が95ng/ml 以下の
場合は、正常と判定する。 (b) 尿中ラクトフェリン濃度(Lf)が105ng/ml以上で、尿
中ミエロペルオキシダーゼ濃度(MPO) が95ng/ml 以下の
場合であって、MPO/Lfが0.2 未満であれば、腎炎の可能
性が大であると判定する。 (c) 尿中ラクトフェリン濃度(Lf)が105ng/ml以上で、尿
中ミエロペルオキシダーゼ濃度(MPO) が95ng/ml 以下の
場合は、尿路感染症の疑いがある。 上記した(c) の場合には、さらに尿中ＣＥＡ濃度を測
定して、これが8.0ng/ml以上であれば、尿路感染症の可
能性が大であると判定する。 なお、予め尿路感染症と診断がついている場合は、Ｍ
ＰＯとＣＥＡのみを測定して経過観察をする。
【００１１】
【発明の効果】以上説明したように、尿中の白血球の顆
粒内成分、特にラクトフェリンやミエロペルオキシダー
ゼおよびＣＥＡを測定対象として、組み合わせ測定すれ
ば、腎・尿路系疾患の鑑別診断が可能である。
粒内成分、特にラクトフェリンやミエロペルオキシダー
ゼおよびＣＥＡを測定対象として、組み合わせ測定すれ
ば、腎・尿路系疾患の鑑別診断が可能である。
【図１】尿中ラクトフェリンとミエロペルオキシダーゼ
の相関図である。
の相関図である。
【図２】尿中ラクトフェリン濃度と尿中トランスフェリ
ン濃度の関係を図示したものである。
ン濃度の関係を図示したものである。
【図３】尿中白血球陰性群と陽性群について、尿中のＣ
ＥＡ濃度を比較した結果を図示したものである。
ＥＡ濃度を比較した結果を図示したものである。
Claims (6)
- 【請求項１】 尿中の白血球の顆粒内成分およびCarcin
oembryonic antigen（ＣＥＡ）を測定対象にすることを
特徴とする腎・尿路系疾患の鑑別診断用キット。 - 【請求項２】 尿中ラクトフェリン、ミエロペルオキシ
ダーゼおよびＣＥＡを測定対象にすることを特徴とする
請求項１に記載の腎・尿路系疾患の鑑別診断用キット。 - 【請求項３】 酵素免疫法やラテックス凝集反応、イム
ノクロマト法などの免疫学的測定法を用いることを特徴
とする請求項１または請求項２に記載の腎・尿路系疾患
の鑑別診断用キット。 - 【請求項４】 少なくとも、抗ラクトフェリン抗体と酵
素標識抗ラクトフェリン抗体および抗ヒトミエロペルオ
キシダーゼ抗体と酵素標識抗ヒトミエロペルオキシダー
ゼ抗体と前記酵素測定用の試薬とを備え、免疫学的測定
法によって尿中ラクトフェリンおよびミエロペルオキシ
ダーゼ濃度を測定して尿路系疾患の診断をすることを特
徴とする腎・尿路系疾患鑑別診断用キット。 - 【請求項５】 少なくとも、抗ヒトミエロペルオキシダ
ーゼ抗体と酵素標識抗ヒトミエロペルオキシダーゼ抗体
および抗ヒトＣＥＡ抗体と酵素標識ＣＥＡ抗体と前記酵
素測定用の試薬とを備え、免疫学的測定法によって尿中
のミエロペルオキシダーゼおよびＣＥＡ濃度を測定して
尿路系疾患の診断をすることを特徴とする腎・尿路系疾
患鑑別診断用キット。 - 【請求項６】 尿中ミエロペルオキシダーゼ濃度、尿中
ラクトフェリン濃度、及び尿中ＣＥＡ濃度の各カットオ
フ値を、95ng/ml 、105ng/ml、及び8.0ng/ml程度にする
ことを特徴とする請求項４又は請求項５に記載の腎・尿
路系疾患鑑別診断用キット。
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|---|---|---|---|
| JP25193995A JP3569577B2 (ja) | 1995-09-04 | 1995-09-04 | 腎・尿路系疾患の鑑別診断用キット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25193995A JP3569577B2 (ja) | 1995-09-04 | 1995-09-04 | 腎・尿路系疾患の鑑別診断用キット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0972906A true JPH0972906A (ja) | 1997-03-18 |
| JP3569577B2 JP3569577B2 (ja) | 2004-09-22 |
Family
ID=17230230
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25193995A Expired - Fee Related JP3569577B2 (ja) | 1995-09-04 | 1995-09-04 | 腎・尿路系疾患の鑑別診断用キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3569577B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6599713B1 (en) | 1999-03-29 | 2003-07-29 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Method for quantitating leukocyte count in whole blood sample |
| JP2010237001A (ja) * | 2009-03-31 | 2010-10-21 | Sysmex Corp | 腎疾患診断支援装置およびコンピュータプログラム |
| JP2014139569A (ja) * | 2008-10-21 | 2014-07-31 | Astute Medical Inc | 腎損傷および腎不全の診断および予後のための方法および組成物 |
| CN106546752A (zh) * | 2009-02-06 | 2017-03-29 | 阿斯图特医药公司 | 肾损伤和肾衰竭的诊断及预后 |
| US10823742B2 (en) | 2010-06-23 | 2020-11-03 | Astute Medical, Inc. | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure |
| US11346846B2 (en) | 2017-02-06 | 2022-05-31 | Astute Medical, Inc. | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure |
-
1995
- 1995-09-04 JP JP25193995A patent/JP3569577B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6599713B1 (en) | 1999-03-29 | 2003-07-29 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Method for quantitating leukocyte count in whole blood sample |
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| US11754566B2 (en) | 2008-10-21 | 2023-09-12 | Astute Medical, Inc. | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure |
| CN106546752A (zh) * | 2009-02-06 | 2017-03-29 | 阿斯图特医药公司 | 肾损伤和肾衰竭的诊断及预后 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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