JPH1010127A - 凝集イムノアッセイ法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 同じ品質のものが簡便な操作で得られるモノ
クローナル抗体を用い、被検試料中の抗原性物質を高分
子担体の凝集によって高い測定感度で測定できる凝集イ
ムノアッセイ法を提供する。 【解決手段】 被検試料中の抗原性物質（例、グリコヘ
モグロビンＡ１ｃ）を高分子担体（例、ラテックス粒
子）に吸着もしくは結合させた後、該抗原性物質に特異
的に反応するモノクローナル抗体（例、抗グリコヘモグ
ロビンＡ１ｃモノクローナル抗体）並びに、該モノクロ
ーナル抗体に選択的に結合するプロテインＡ、プロテイ
ンＡ様物質、プロテインＧ及びプロテインＧ様物質から
なる群より選ばれる少なくとも一種を更に反応させて、
高分子担体を選択的に凝集させることを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、生体試料などの液
体中における抗原性物質を、凝集反応を利用して免疫学
的に測定する方法（凝集イムノアッセイ法）に関する。

【０００２】

【従来の技術】高分子担体であるラテックス粒子に抗原
又は抗体を担持させた免疫測定用試薬を用いて、血清中
の抗体又は抗原との特異的抗原抗体反応によりラテック
ス粒子の免疫凝集反応を生じさせ、上記高分子担体の凝
集度を検出することにより血清中の抗体又は抗原を測定
することが、従来から免疫血清学的診断法の一つとして
行われており、例えばリウマチ因子、抗ストレプトリジ
ン−Ｏ（ＡＳＯ）、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）等
の検査に用いられている。

【０００３】ラテックス粒子を用いた免疫測定用試薬に
は、通常、抗体としてポリクローナル抗体が用いられて
いるが、ポリクローナル抗体は製造の段階で同じ品質の
ものを常に得ることは難しく、特異抗体に精製する段階
での該抗体の損失も大きい。

【０００４】上記問題点を解決する方法として、ポリク
ローナル抗体に代えてモノクローナル抗体を用いると品
質の一定した抗体を大量生産できる。モノクローナル抗
体を用いたラテックス凝集法として、特開平６−１６７
４９５号公報に、被検試料中の抗原性物質を不溶性担体
粒子に吸着もしくは結合させ、該抗原性物質に特異的に
反応するモノクローナル抗体を反応させた後に、該モノ
クローナル抗体に選択的に結合する第二抗体（モノクロ
ーナル抗体作成動物種以外の動物由来の、抗モノクロー
ナル抗体作成動物イムノグロブリン（ＩｇＧ）抗体）を
更に反応させて、不溶性担体粒子を選択的に凝集させる
ことを特徴とする凝集イムノアッセイ法が提案されてい
る。しかしながら、この方法には、感度が低い、第二抗
体の作成が動物から採取するので製造が難しく、同じ比
活性のものを安定に得るのが難しいという問題点があっ
た。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記欠点に
鑑み、同じ品質のものが簡便な操作で得られるモノクロ
ーナル抗体を用い、被検試料中の抗原性物質を高分子担
体の凝集によって高い測定感度で測定できる凝集イムノ
アッセイ法を提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】請求項１記載の凝集イム
ノアッセイ法（以下、請求項１記載の発明を本発明１と
いう）は、被検試料中の抗原性物質を高分子担体に吸着
もしくは結合させた後、該抗原性物質に特異的に反応す
るモノクローナル抗体並びに、該モノクローナル抗体に
選択的に結合するプロテインＡ、プロテインＡ様物質、
プロテインＧ及びプロテインＧ様物質からなる群より選
ばれる少なくとも一種を更に反応させて、高分子担体を
選択的に凝集させることを特徴とする。

【０００７】請求項２記載の凝集イムノアッセイ法（以
下、請求項２記載の発明を本発明２という）は、被検試
料中の抗原性物質を高分子担体に吸着もしくは結合させ
た後、該被検試料を洗浄により除去することなく、抗原
性物質に特異的に反応するモノクローナル抗体を反応さ
せる請求項１記載の凝集イムノアッセイ法である。

【０００８】本発明１で使用される被検試料としては、
通常のイムノアッセイで使用される被検試料が挙げら
れ、好ましくは血液試料、血漿試料、血清試料などが挙
げられる。

【０００９】本発明１で使用される抗原性物質として
は、通常のイムノアッセイで使用される抗原性物質があ
げられ、好ましくは生体成分、ウイルス、細菌成分、薬
物などが挙げられる。更に、好ましくはグリコヘモグロ
ビンである。

【００１０】本発明１で使用される高分子担体は、通常
の高分子担体であり、例えば、不溶性アガロース、セル
ロース、不溶性デキストラン等の天然高分子担体、ポリ
スチレン、スチレンースチレンスルホン酸エステル共重
合体、酢酸ビニル−アクリル酸エステル共重合体等の合
成高分子担体などが挙げられ、特に合成高分子からなる
ラテックス粒子が好ましい。用いるラテックス粒子の平
均粒径は、測定方法、測定機器によって異なるが、０．
０５〜１．０μｍの範囲が好ましい。

【００１１】本発明１で使用される抗原性物質に特異的
に反応するモノクローナル抗体は，Ｋｏｅｈｌｅｒ ＆
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ （Ｎａｔｕｒｅ、２５６、４９５
〜４９７、１９７５）らの報告した細胞融合法により得
ることができる。この方法は公知であり、抗原性物質の
抗体産生細胞とミエローマ細胞とを細胞融合により目的
とするモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ産
生細胞を作成し、該ハイブリドーマ産生細胞をマウス腹
水中などで培養して、目的のモノクローナル抗体を得る
方法である。

【００１２】上記モノクローナル抗体は抗体溶液として
使用されるが、ハイブリドーマ産生細胞を増殖させた抗
体原液（例えば、マウス腹水）をグリシン緩衝液などの
緩衝液で２００〜１０００倍に希釈して使用されるのが
好ましい。

【００１３】本発明１で使用されるプロテインＡ、プロ
テインＡ様物質、プロテインＧ及びプロテインＧ様物質
からなる群より選ばれる少なくとも一種は、モノクロー
ナル抗体のＦｃ部位と結合する部位を２個以上有するも
のであり、プロテインＡとしては、天然のもの及び遺伝
子組み換えで得られたものが挙げられる。また、プロテ
インＧとしても、天然のもの及び遺伝子組み換えで得ら
れたものが挙げられる。プロテインＡ様物質とは、遺伝
子組換えによって作成された、プロテインＡのＦｃ結合
領域のオリゴマーが挙げられ、Ｆｃ結合領域が３量体、
４量体、５量体と多量体になるに従って、高分子担体の
凝集力が上がり、感度が上がる。プロテインＧ様物質と
は、遺伝子組換えによって作成された、プロテインＧの
Ｆｃ結合領域のオリゴマーが挙げられ、Ｆｃ結合領域が
３量体、４量体、５量体と多量体になるに従って、高分
子担体の凝集力が上がり、感度が上がる。

【００１４】上記プロテインＡ、プロテインＡ様物質、
プロテインＧ及びプロテインＧ様物質からなる群より選
ばれる少なくとも一種は、グリシン緩衝液などの緩衝液
に溶かされ０．０１〜１ｍｇ／ｍｌの濃度で使用される
のが好ましい。

【００１５】本発明１における抗原性物質とモノクロー
ナル抗体との反応条件、及びモノクローナル抗体とプロ
テインＡ、プロテインＡ様物質、プロテインＧ及びプロ
テインＧ様物質からなる群より選ばれる少なくとも一種
との反応条件は、通常の場合と同様であり、反応媒体と
しては、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液
などが使用される。反応系のｐＨは４．５〜９が好まし
い。反応温度は０〜５０℃が好ましく、４〜４０℃の範
囲が更に好ましい。反応時間は適宜決められ得る。

【００１６】本発明２で使用される被検試料、抗原性物
質、高分子担体、プロテインＡ、プロテインＡ様物質、
プロテインＧ及びプロテインＧ様物質などは、本発明１
で使用されるものと同様である。

【００１７】本発明２で使用される抗原性物質に特異的
に反応するモノクローナル抗体は，Ｋｏｅｈｌｅｒ ＆
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ （Ｎａｔｕｒｅ、２５６、４９５
〜４９７、１９７５）らの報告した細胞融合により得る
ことができ、高分子担体に吸着された抗原性物質に反応
し、遊離の抗原性物質に反応しないものである。このモ
ノクローナル抗体のスクリーニングは、９６穴プレート
に測定目的の抗原性物質を固相化させ、それにハイブリ
ドーマ細胞の培養上清を反応させ、更に酵素標識抗マウ
スイムノグロブリンを反応させるＥＬＩＳＡ法と、ラジ
オアイソトープで標識した抗原性物質にハイブリドーマ
細胞の培養上清を反応させるラジオイムノアッセイ法に
よって行い、ＥＬＡＩＳＡ法で反応し、ラジオイムノア
ッセイ法で反応しない抗体を得ることにより行う。

【００１８】本発明２における、抗原性物質とモノクロ
ーナル抗体との反応条件、及びモノクローナル抗体とプ
ロテインＡ、プロテインＡ様物質、プロテインＧ及びプ
ロテインＧ様物質からなる群より選ばれる少なくとも一
種との反応条件は、本発明１と同様である。

【００１９】本発明１の測定方法は、まず初めに、被検
試料中に上記高分子担体を添加して、試料中の抗原性物
質を高分子担体に吸着もしくは結合させて抗原性物質を
固相化する。次に、上記モノクローナル抗体並びにプロ
テインＡ、プロテインＡ様物質、プロテインＧ及びプロ
テインＧ様物質からなる群より選ばれる少なくとも一種
を、上記の固相化抗原性物質を含有する試料中に添加し
て、固相化抗原性物質とモノクローナル抗体との反応、
並びにモノクローナル抗体とプロテインＡ、プロテイン
Ａ様物質、プロテインＧ及びプロテインＧ様物質からな
る群より選ばれる少なくとも一種との反応を起こさせ
て、固相化抗原性物質−モノクローナル抗体−プロテイ
ンＡ、プロテインＡ様物質、プロテインＧ及びプロテイ
ンＧ様物質からなる群より選ばれる少なくとも一種−モ
ノクローナル抗体−固相化抗原物質の構造の複合体を作
成させることにより、高分子担体の凝集を生じせしめ
る。次に、この凝集の程度を、例えば、散乱光強度、吸
光度、透過光強度などにより光学的に測定する。測定の
波長としては３００〜２４００ｎｍが好ましく、測定装
置としては、自動分析装置を使用するのが好ましい。

【００２０】上記試料中の抗原性物質を高分子担体に吸
着もしくは結合させて抗原性物質を固相化するに際して
は、高分子担体の自己凝集防止のために緩衝液中で行う
のが好ましい。

【００２１】また、上記モノクローナル抗体並びにプロ
テインＡ、プロテインＡ様物質、プロテインＧ及びプロ
テインＧ様物質からなる群より選ばれる少なくとも一種
を、固相化抗原性物質を含有する試料中へ添加するに際
しては、モノクローナル抗体とプロテインＡ、プロテイ
ンＡ様物質、プロテインＧ及びプロテインＧ様物質から
なる群より選ばれる少なくとも一種とを、別々に添加し
ても良いが、非特異反応を減少させるために、予めモノ
クローナル抗体とプロテインＡ、プロテインＡ様物質、
プロテインＧ及びプロテインＧ様物質からなる群より選
ばれる少なくとも一種とを結合させたものを添加するの
が良い。

【００２２】本発明２の測定方法は、モノクローナル抗
体として高分子担体に吸着された測定目的の抗原性物質
に反応し、遊離の抗原性物質に反応しないものを使用す
ること、及び、被検試料中の抗原性物質を高分子担体に
吸着もしくは結合させた後、該被検試料を洗浄により除
去することなく、抗原性物質に特異的に反応するモノク
ローナル抗体を反応させることの他は、本発明１の測定
方法と同様である。

【００２３】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施例をグリコヘ
モグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の測定を例として、具
体的に説明する。

【００２４】（参考例１） ＨｂＡ１ｃ及びＨｂＡ０（ＨｂＡ０は、グルコース化さ
れていないヘモグロビン）の取得 ヒト血液を２５００ｒｐｍ、２０分間で遠心分離して血
漿蛋白を除去した後、赤血球ペレットの５倍量の生理食
塩水を加え、遠心洗浄を２回行った。次に、遠心後の赤
血球ペレットに等量の蒸留水を加え、溶血させた。次
に、１５０００ｒｐｍ、４５分間で高速遠心分離し、沈
殿物を除去した後、上清をＢｉｏ Ｒｅｘ７０カラム
（Ｂｉｏ Ｒａｄ社製）を用いて、Ｔｒｉｖｅｌｌｉら
の方法（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２８４，３５
３（１９７１））によりＨｂＡ１ｃとＨｂＡ０を分画し
た。

【００２５】（参考例２） ＨｂＡ１ｃβ鎖Ｎ末端のグリコペプチドエピトープに対
するモノクローナル抗体の作製 ヘモグロビンβ鎖のＮ末端アミノ酸配列に相当する下記
２種類のペプチドをペプチド合成機（Ａｐｐｌｉｄ Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製、Ｍｏｄｅｌ ４３０Ａ）を用
いて合成した。 １）Ｖａｌ（バリン）−Ｈｉｓ（ヒスチジン）−Ｌｅｕ
（ロイシン）−Ｔｈｒ（スレオニン）−Ｐｒｏ（プロリ
ン）−Ｃｙｓ（システイン） ２）Ｖａｌ（バリン）−Ｈｉｓ（ヒスチジン）−Ｌｅｕ
（ロイシン）−Ｃｙｓ（システイン）

【００２６】上記合成により得られた粗ペプチドを１ｍ
ｇ／ｍｌになるように純水に溶かして４℃に冷却した。
モル比１．５倍量の２，２’−ジチオジピリジンを撹拌
しながら滴下し、１０分間反応させて、システインのＳ
Ｈ基を保護した。凍結乾燥後、１％酢酸に溶かし、不溶
物を遠心除去した後、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５（１５×
９００ｍｍカラム）でゲルろ過して得たペプチド分画を
凍結乾燥した。このペプチドを酢酸に溶かしてピリジン
存在下でモル比２倍量のグルコースを添加し、室温で１
０日間撹拌した。攪拌後の溶液を下記の分離条件で高速
液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣという）にか
けてグリコペプチドを得、凍結乾燥した。

【００２７】分離条件 カラム：ＴＳＫｇｅｌ、ＯＤＳ−１２０Ａ（２１．５×
３００ｍｍ、東ソー社製） 移動相：１０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ
酢酸から６０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ
酢酸へのグラジエント 流 速：５ｍｌ／ｍｉｎ モニター：吸光度 ２８０ｎｍ

【００２８】凍結乾燥した上記ペプチドを０．１Ｍリン
酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．５）に溶かし、３倍量のＤ
ｉｔｈｏｔｈｒｅｉｔｏｌ（和光純薬社製）を加え、窒
素ガスに置換して２４時間反応させ、システイン保護基
を脱離し、塩酸でｐＨを５にし、吸光度を２１５ｎｍに
代えた以外は上記ＨＰＬＣの分離条件でグリコペプチド
を得た。

【００２９】このグリコペプチドに、スペーサーとして
Ｎ−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ６−ｍａｌｅｉｍｉｄ
ｏｃａｐｒｏａｔｅ（和光純薬社製）を用い、常法によ
りキャリアー蛋白（水溶性蛋白としてＴｈｙｒｏｇｌｏ
ｂｕｌｉｎ、不溶性蛋白としてＥｄｅｓｔｉｎ（ともに
Ｆｌｕｋａ社製）に結合させ、免疫原とした。

【００３０】上記免疫原１００μｇをフロインド完全ア
ジュバント（Ｄｉｆｃｏ社製）でミセル状にし、Ｂａｌ
ｂ／ｃマウス（８週令）の腹腔内に注射した。追加免疫
は免疫原をフロインド不完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ
社製）でミセルとし、１ヶ月の間隔で２回行った。細胞
融合の３日前に生理食塩水中の免疫原を皮下注射し、こ
れをブースターとした。

【００３１】免疫したマウスの脾臓から脾臓細胞をと
り、これをマウス・ミエローマ株細胞ＰＡＩ（癌研究リ
サーチソースバンク（ＪＣＲＢ））と１０：１の割合で
混合し、ポリエチレングリコール４０００で細胞を融合
させた。ＨＡＴ培地に細胞を浮遊させ、９６穴プレート
にまき、融合細胞がクローン増殖してくるのを待った。

【００３２】目的のモノクローナル抗体産生ハイブリド
ーマのスクリーニングには、予め、ＨｂＡ１ｃ（参考例
１で得たもの）を固相化した９６穴ＥＬＩＳＡ用プレー
ト（ＮＵＮＣ−ＩＭＭＵＮＯＰＬＡＴＥ、ＭＡＸＩＳＯ
ＲＰ Ｆ９６（４−４２４０４））及びＨｂＡ０（参考
例１で得たもの）を固相化した９６穴ＥＬＩＳＡ用プレ
ート（材料名は前記と同様）を用いた。この固相化プレ
ートの作製は、プレートの各ウエルに、ＨｂＡ１ｃを５
μｇ／ｍｌ濃度で溶解した５０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐ
Ｈ５．６）を５０μｌづつ分注し、このプレートを４℃
で一晩放置することにより行った。また、上記のＨｂＡ
１ｃをＨｂＡ０に代えたことの他は、同様にしてＨｂＡ
０固相化プレートを作製した。

【００３３】スクリーニング法を、以下、具体的に示
す。まず、上記のＨｂＡ１ｃ固定化プレート及びＨｂＡ
０固定化プレートをＰＢＳ−Ｔ（０．０１Ｍリン酸緩衝
液、ｐＨ６．８／０．１５Ｍ ＮａＣｌ／０．１％ツイ
ーン２０）で４回洗浄した後、上記の融合細胞がクロー
ン増殖してきた培養上清５０μｌを加え、室温で２時間
放置して反応させた。ＰＢＳ−Ｔで４回洗浄した後、ペ
ルオキシダ−ゼ標識抗マウスＩｇＧ（ＣＡＰＰＥＬ社
製）をＰＢＳ−Ｔで２５００倍希釈したものを、５０μ
ｌ加え、室温で１時間反応させた。ＰＢＳ−Ｔで４回洗
浄後、０．１％ｏ−フェニレンジアミン／リン酸−クエ
ン酸緩衝液（クエン酸１水和物７．３ｇ、リン酸２ナト
リウム１２水和物２３．９ｇ、純水１０００ｍｌ／０．
００３％Ｈ₂Ｏ₂ ）を１００μｌ加え、室温で３０分間
反応させた後、２Ｎ硫酸を５０μｌ加え、酵素反応を停
止させた。次いで、イムノプレートリ−ダー（ダイナテ
ック社製、ＭＲ５０００）を用いて上記酵素反応後の溶
液の４９０ｎｍにおける吸光度を測った。

【００３４】上記スクリーニング法により、ＨｂＡ１ｃ
と反応し、ＨｂＡ０とは反応しないモノクローナル抗体
を産生するハイブリドーマを選別し、クローン化した。

【００３５】得られたクローンを大量培養後、予め１週
間前にプリスタン（シグマ社製）１ｍｌを腹腔内注射し
たＢａｌｂ／ｃマウス（９週令）にハイブリドーマ１×
１０ ⁷ ｃｅｌｌｓを生理食塩水とともに腹腔注射し、腹
水が腹腔内に充満したところで、モノクローナル抗体を
腹水として採取した。

【００３６】（参考例３） 被検試料希釈液の調製 ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５）（和光純薬
工業社製）に、牛血清アルブミンを０．２５％（Ｗ／
Ｖ）、ポリエチレングリコール６０００（ＰＥＧ６００
０、平均分子量７５００、ナカライテスク社製）を２．
５％（Ｗ／Ｖ）となるように溶解し、被検試料希釈液を
調製した。

【００３７】（実施例１）ヒトから採取した全血５０μ
ｌに蒸留水２ｍｌを加えて溶血させて、溶血原液を調製
し、更にグリシン緩衝液（以下、ＧＢＳという。０．０
５Ｍグリシン、ｐＨ８．２／０．１５Ｍ ＮａＣｌ／
０．０２％ＮａＮ₃ ）で８倍、１６倍、３２倍及び６４
倍に希釈して被検試料とした。

【００３８】ポリスチレン試験管中に、上記被検試料１
００μｌをとり、これに粒径０．０８７μｍのポリスチ
レンラテックス（積水化学工業社製）をＧＢＳで希釈し
て０．１５重量％濃度としたラテックス懸濁液を３００
μｌ加え、室温で５分間放置して、上記ラテックスに被
検試料中のＨｂＡ１ｃを吸着させた（このものを、Ｈｂ
Ａ１ｃ−ラテックス吸着液という）。

【００３９】予め、参考例２で得た抗ＨｂＡ１ｃモノク
ローナル抗体をツイーン２０ ０．３％含有ＧＢＳ（以
下、ＧＢＳ−Ｔという）で６００倍に希釈したものの２
００μｌと、プロテインＡ（和光純薬社製）１ｍｇをＧ
ＢＳ−Ｔ１０ｍｌに溶かしたものの２５μｌとを、３７
℃で２０分間反応させ、抗ＨｂＡ１ｃモノクローナル抗
体−プロテインＡ結合体を作製しておいた（以下、抗体
反応液という）。

【００４０】生化学自動分析装置（日立７０５０型、日
立製作所社製）により、上記抗体反応液２０μｌに、参
考例３で調製された被検試料希釈液３５０μｌと上記Ｈ
ｂＡ１ｃ−ラテックス吸着液５０μｌの割合で添加して
測定した。測定温度は３７℃とした。反応量は、ＨｂＡ
１ｃ−ラテックス吸着液の添加後８０秒から３２０秒の
間の吸光度（測定波長５７０ｎｍ）変化量を測定するこ
とにより行った。得られた吸光度変化量を表１に示し
た。

【００４１】（実施例２）実施例１における、プロテイ
ンＡ（和光純薬社製）の代わりに、ＩｇＧ結合領域組み
換えプロテインＡ（シグマ社製）を使用したことの他
は、実施例１と同様に操作した。得られた吸光度変化量
を表１に示した。

【００４２】（比較例１）実施例１における、プロテイ
ンＡ（和光純薬社製）の代わりに、ウサギ抗マウスＩｇ
Ｇ抗体（カッペル社製）を使用したことの他は、実施例
１と同様に操作した。得られた吸光度変化量を表１に示
した。

【００４３】

【表１】

【００４４】

【発明の効果】本発明１の凝集イムノアッセイ法の構成
は、上記の通りであり、被検試料中の抗原性物質を高分
子担体に吸着もしくは結合させた後、同じ品質のものが
簡便な操作で得られ、かつ該抗原性物質に特異的に反応
するモノクローナル抗体並びに、該モノクローナル抗体
に選択的に結合するプロテインＡ、プロテインＡ様物
質、プロテインＧ及びプロテインＧ様物質からなる群よ
り選ばれる少なくとも一種を更に反応させて、高分子担
体を選択的に凝集させるので、高い測定感度で測定でき
る凝集イムノアッセイ法を提供する。本発明２の凝集イ
ムノアッセイ法の構成は、上記の通りであり、被検試料
中の抗原性物質を高分子担体に吸着もしくは結合させた
後、該被検試料を洗浄により除去することなく、抗原性
物質に特異的に反応するモノクローナル抗体を反応させ
る請求項１記載の凝集イムノアッセイ法であるので、よ
り簡便に、高い測定感度で測定できる凝集イムノアッセ
イ法を提供する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 被検試料中の抗原性物質を高分子担体に
   吸着もしくは結合させた後、該抗原性物質に特異的に反
   応するモノクローナル抗体並びに、該モノクローナル抗
   体に選択的に結合するプロテインＡ、プロテインＡ様物
   質、プロテインＧ及びプロテインＧ様物質からなる群よ
   り選ばれる少なくとも一種を更に反応させて、高分子担
   体を選択的に凝集させることを特徴とする凝集イムノア
   ッセイ法。
2. 【請求項２】 被検試料中の抗原性物質を高分子担体に
   吸着もしくは結合させた後、該被検試料を洗浄により除
   去することなく、抗原性物質に特異的に反応するモノク
   ローナル抗体を反応させる請求項１記載の凝集イムノア
   ッセイ法。