JPH10142226A - 動脈硬化症の測定用キット - Google Patents
動脈硬化症の測定用キットInfo
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- JPH10142226A JPH10142226A JP8317162A JP31716296A JPH10142226A JP H10142226 A JPH10142226 A JP H10142226A JP 8317162 A JP8317162 A JP 8317162A JP 31716296 A JP31716296 A JP 31716296A JP H10142226 A JPH10142226 A JP H10142226A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 血清中あるいは血漿中での濃度により、動脈
硬化症を確実に検出する測定用キットを提供する。 【解決手段】 動脈硬化症の成因である変性ＬＤＬと複
合体を形成した変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分
子複合体を測定対象にする。
硬化症を確実に検出する測定用キットを提供する。 【解決手段】 動脈硬化症の成因である変性ＬＤＬと複
合体を形成した変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分
子複合体を測定対象にする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、循環器疾患、糖
尿病などで生体内におこる動脈硬化の発症を測定する測
定用キットに関し、特に、血液中の変性ＬＤＬ・α１ア
ンチトリプシン高分子複合体を測定することにより生体
内の動脈硬化状態を測定する測定用キットに関する。
尿病などで生体内におこる動脈硬化の発症を測定する測
定用キットに関し、特に、血液中の変性ＬＤＬ・α１ア
ンチトリプシン高分子複合体を測定することにより生体
内の動脈硬化状態を測定する測定用キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、血液中で生体内の動脈硬化の状態
を測定する測定法はなく、血清中あるいは血漿中のリポ
蛋白(a) やレムナントコレステロールを測定対象とした
測定法があるが、これらは、いずれも動脈硬化のリスク
ファクターとして測定されている。
を測定する測定法はなく、血清中あるいは血漿中のリポ
蛋白(a) やレムナントコレステロールを測定対象とした
測定法があるが、これらは、いずれも動脈硬化のリスク
ファクターとして測定されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、近年、
上述の測定対象は、実際に生体内で発生する動脈硬化を
反映するものではないことが明らかになっており、よっ
て、血清中あるいは血漿中での上記測定対象の濃度は、
動脈硬化症を反映していないのが実情である。本発明
は、以上の問題点に着目してなされたものであって、従
来の測定対象に代わる新規な成分を測定することによっ
て、動脈硬化の発症を高精度に測定することのできる測
定用キットを提供することを目的とする。
上述の測定対象は、実際に生体内で発生する動脈硬化を
反映するものではないことが明らかになっており、よっ
て、血清中あるいは血漿中での上記測定対象の濃度は、
動脈硬化症を反映していないのが実情である。本発明
は、以上の問題点に着目してなされたものであって、従
来の測定対象に代わる新規な成分を測定することによっ
て、動脈硬化の発症を高精度に測定することのできる測
定用キットを提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】動脈硬化症の成因とし
て、変性（酸化）低比重リポ蛋白（ＬＤＬ）が知られて
いるが、本発明者は、生体内でＬＤＬが変性する過程に
おいて、α１アンチトリプシンは重合高分子体となり、
この変性ＬＤＬと複合体を形成して血液中に存在するこ
とを発見して本発明を完成した。すなわち、本発明で
は、動脈硬化症の成因である変性ＬＤＬと複合体を形成
した変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を
測定対象にしている。なお、血清中あるいは血漿中の変
性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を検出す
るには、酵素免疫法、ラテックス凝集法、発光酵素免疫
法や免疫クロマト法など、日常多用されている免疫学的
測定法を用いることができる。また、免疫学的組織染色
法を用いることもできる。
て、変性（酸化）低比重リポ蛋白（ＬＤＬ）が知られて
いるが、本発明者は、生体内でＬＤＬが変性する過程に
おいて、α１アンチトリプシンは重合高分子体となり、
この変性ＬＤＬと複合体を形成して血液中に存在するこ
とを発見して本発明を完成した。すなわち、本発明で
は、動脈硬化症の成因である変性ＬＤＬと複合体を形成
した変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を
測定対象にしている。なお、血清中あるいは血漿中の変
性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を検出す
るには、酵素免疫法、ラテックス凝集法、発光酵素免疫
法や免疫クロマト法など、日常多用されている免疫学的
測定法を用いることができる。また、免疫学的組織染色
法を用いることもできる。
【０００５】動脈硬化の成因である変性ＬＤＬは、生体
内で発生する活性酸素により酸化されたＬＤＬ、もしく
は、食品として摂取した脂質過酸化物ないしはその分解
産物が結合したＬＤＬであり、α１アンチトリプシン
は、この変性ＬＤＬによって高分子体となり変性ＬＤＬ
と複合体を形成し、変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン
高分子複合体として血液中に存在する。したがって、変
性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を検出す
ることは、動脈硬化の成因である変性ＬＤＬを検出する
ことである。本発明者は、実施例に示す抗ヒト高分子α
１アンチトリプシンモノクローナル抗体によって、この
変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を特異
的に検出できることを確認した。すなわち、図１に示す
ごとく、この抗体は、Nativeなα１アンチトリプシンは
検出せず、変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複
合体を特異的に検出した。
内で発生する活性酸素により酸化されたＬＤＬ、もしく
は、食品として摂取した脂質過酸化物ないしはその分解
産物が結合したＬＤＬであり、α１アンチトリプシン
は、この変性ＬＤＬによって高分子体となり変性ＬＤＬ
と複合体を形成し、変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン
高分子複合体として血液中に存在する。したがって、変
性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を検出す
ることは、動脈硬化の成因である変性ＬＤＬを検出する
ことである。本発明者は、実施例に示す抗ヒト高分子α
１アンチトリプシンモノクローナル抗体によって、この
変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を特異
的に検出できることを確認した。すなわち、図１に示す
ごとく、この抗体は、Nativeなα１アンチトリプシンは
検出せず、変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複
合体を特異的に検出した。
【０００６】また、図２のごとく、ゲル濾過分析におい
て、血液中の分子量52000 のNativeα１アンチトリプシ
ンと比較して、変性ＬＤＬによりα１アンチトリプシン
は高分子化し、変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分
子複合体を形成することを確認した。また、動脈硬化症
患者血清中にもこの変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン
高分子複合体が存在することを確認した。図３のごと
く、ヘモグロビンＡ1c高値糖尿病群あるいは高コレステ
ロール群において本発明法の値は高値を示した。以上の
ごとく、血清中あるいは血漿中において変性ＬＤＬ・α
１アンチトリプシン高分子複合体を測定することによ
り、生体内で発生している動脈硬化状態を測定できる。
つまり、血清中あるいは血漿中の変性ＬＤＬ・α１アン
チトリプシン高分子複合体を測定すれば、生体内の動脈
硬化状態を測定でき動脈硬化症の診断が可能となる。
て、血液中の分子量52000 のNativeα１アンチトリプシ
ンと比較して、変性ＬＤＬによりα１アンチトリプシン
は高分子化し、変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分
子複合体を形成することを確認した。また、動脈硬化症
患者血清中にもこの変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン
高分子複合体が存在することを確認した。図３のごと
く、ヘモグロビンＡ1c高値糖尿病群あるいは高コレステ
ロール群において本発明法の値は高値を示した。以上の
ごとく、血清中あるいは血漿中において変性ＬＤＬ・α
１アンチトリプシン高分子複合体を測定することによ
り、生体内で発生している動脈硬化状態を測定できる。
つまり、血清中あるいは血漿中の変性ＬＤＬ・α１アン
チトリプシン高分子複合体を測定すれば、生体内の動脈
硬化状態を測定でき動脈硬化症の診断が可能となる。
【０００７】
【実施例】実施例としてモノクローナル抗体作製法を示
す。 １．抗ヒト高分子α１アンチトリプシンモノクローナル
抗体の作製法 〔抗原の調整〕精製α１アンチトリプシンを調整した。 〔動物への免疫〕この抗原をリン酸緩衝生理食塩液で１
mg/ml 溶液となるように調整し、この溶液とフロインド
アジュバンドを等量混合して得られるエマルジョンを、
６週令のマウス(Balb/Ｃ系マウス) の腹腔内に500 μｌ
投与した。この作業を２週間おきに計３回免疫を行っ
た。 〔細胞融合〕最終免疫後４日目にこのマウスの脾臓から
採取した脾リンパ球細胞をマウス骨髄腫細胞(P3-X63-Ag
8-U1) と融合させた。融合方法は５０％ポリエチレング
リコール4000溶液を融合促進剤として用い、融合促進剤
の添加、混合及び希釈の各操作からなる融合時間を１０
分間、３７℃で行った。次に、ＨＡＴ培地（ヒポキサン
チン・アミノプテリン・チミジン・１０％ウシ胎児血清
を含むＲＰＭＩ培地）に融合終了後の融合細胞を分散さ
せ、ついで、１０枚の９６穴マイクロプレートの各ウエ
ルに２００μｌ分注し、３７℃、５％炭酸ガス存在下で
培養した。
す。 １．抗ヒト高分子α１アンチトリプシンモノクローナル
抗体の作製法 〔抗原の調整〕精製α１アンチトリプシンを調整した。 〔動物への免疫〕この抗原をリン酸緩衝生理食塩液で１
mg/ml 溶液となるように調整し、この溶液とフロインド
アジュバンドを等量混合して得られるエマルジョンを、
６週令のマウス(Balb/Ｃ系マウス) の腹腔内に500 μｌ
投与した。この作業を２週間おきに計３回免疫を行っ
た。 〔細胞融合〕最終免疫後４日目にこのマウスの脾臓から
採取した脾リンパ球細胞をマウス骨髄腫細胞(P3-X63-Ag
8-U1) と融合させた。融合方法は５０％ポリエチレング
リコール4000溶液を融合促進剤として用い、融合促進剤
の添加、混合及び希釈の各操作からなる融合時間を１０
分間、３７℃で行った。次に、ＨＡＴ培地（ヒポキサン
チン・アミノプテリン・チミジン・１０％ウシ胎児血清
を含むＲＰＭＩ培地）に融合終了後の融合細胞を分散さ
せ、ついで、１０枚の９６穴マイクロプレートの各ウエ
ルに２００μｌ分注し、３７℃、５％炭酸ガス存在下で
培養した。
【０００８】〔抗ヒト高分子α１アンチトリプシンモノ
クローナル抗体産生ハイブリドーマの選択及び単一化〕
約１週間後、各ウエルのＨＡＴ培地を１００μｌ吸引
し、ＨＴ培地（ヒポキサンチン・チミジン・１０％ウシ
胎児血清を含むＲＰＭＩ培地）を各ウエルに分注し、２
〜３日後、抗体産生ハイブリドーマの選択を行った。選
択方法は、高分子α１アンチトリプシンを固定化した９
６穴マイクロプレートに、各ウエルのハイブリドーマ形
成コロニーの培養上清を１００μｌ分注して反応させ、
ついで洗浄後、ペルオキシダーゼ標識抗マウスイムノグ
ロブリン抗体を１００μｌ添加し、反応後洗浄を行い目
的とする抗体をペルオキシダーゼ活性にて検出した。次
に、抗体産生を示したコロニーを回収し、限界希釈法に
てハイブリドーマの単一コロニーを得るようにクローニ
ングを行った。その方法は、回収したコロニーをＨＴ培
地で希釈し、９６穴マイクロプレートの各ウエルにハイ
ブリドーマがウエル当たり１個以下となるようにフィー
ダー細胞と共に散布した。以上の操作を２回行い、モノ
クローン化された抗ヒト高分子α１アンチトリプシン抗
体産生ハイブリドーマを得た。 〔抗ヒト高分子α１アンチトリプシンモノクローナル抗
体の腹水化〕８週令のマウス（Balb/C系マウス）の腹腔
内にプリスタン（免疫抑制剤）を投与した。３〜７日後
に抗体産生ハイブリドーマを腹腔内に投与し、約７日後
にマウスの腹腔から腹水化された抗体を回収した。 〔抗体の精製〕腹水化して得られた抗体を５０％硫酸ア
ンモニウムで２回塩折分離を行い、リン酸緩衝生理食塩
液にて透析して精製した。
クローナル抗体産生ハイブリドーマの選択及び単一化〕
約１週間後、各ウエルのＨＡＴ培地を１００μｌ吸引
し、ＨＴ培地（ヒポキサンチン・チミジン・１０％ウシ
胎児血清を含むＲＰＭＩ培地）を各ウエルに分注し、２
〜３日後、抗体産生ハイブリドーマの選択を行った。選
択方法は、高分子α１アンチトリプシンを固定化した９
６穴マイクロプレートに、各ウエルのハイブリドーマ形
成コロニーの培養上清を１００μｌ分注して反応させ、
ついで洗浄後、ペルオキシダーゼ標識抗マウスイムノグ
ロブリン抗体を１００μｌ添加し、反応後洗浄を行い目
的とする抗体をペルオキシダーゼ活性にて検出した。次
に、抗体産生を示したコロニーを回収し、限界希釈法に
てハイブリドーマの単一コロニーを得るようにクローニ
ングを行った。その方法は、回収したコロニーをＨＴ培
地で希釈し、９６穴マイクロプレートの各ウエルにハイ
ブリドーマがウエル当たり１個以下となるようにフィー
ダー細胞と共に散布した。以上の操作を２回行い、モノ
クローン化された抗ヒト高分子α１アンチトリプシン抗
体産生ハイブリドーマを得た。 〔抗ヒト高分子α１アンチトリプシンモノクローナル抗
体の腹水化〕８週令のマウス（Balb/C系マウス）の腹腔
内にプリスタン（免疫抑制剤）を投与した。３〜７日後
に抗体産生ハイブリドーマを腹腔内に投与し、約７日後
にマウスの腹腔から腹水化された抗体を回収した。 〔抗体の精製〕腹水化して得られた抗体を５０％硫酸ア
ンモニウムで２回塩折分離を行い、リン酸緩衝生理食塩
液にて透析して精製した。
【０００９】次に、酵素免疫法(ELISA) による測定対象
の測定法を示す。 ２．変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体の
測定 〔マイクロプレートへの抗体の固相化〕マイクロプレー
ト(SUMILON,Japan) の各Wellに、抗ヒト高分子α１アン
チトリプシンモノクローナル抗体５μｇ／mlを含む0.1M
Tris緩衝液を１００μｌずつ分注し、１液４℃で放置し
て抗体を吸着させる。 〔ビオチン標識抗体の調整〕別途、抗ヒトα１アンチト
リプシン抗体(DAKOPATTS,Demmark) あるいは抗ヒトApo
B 抗体をペプシンと２メルカプトエタノールアミンによ
りFab'とし、BiotinMaleimideをこのFab'に標識して調
整する。
の測定法を示す。 ２．変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体の
測定 〔マイクロプレートへの抗体の固相化〕マイクロプレー
ト(SUMILON,Japan) の各Wellに、抗ヒト高分子α１アン
チトリプシンモノクローナル抗体５μｇ／mlを含む0.1M
Tris緩衝液を１００μｌずつ分注し、１液４℃で放置し
て抗体を吸着させる。 〔ビオチン標識抗体の調整〕別途、抗ヒトα１アンチト
リプシン抗体(DAKOPATTS,Demmark) あるいは抗ヒトApo
B 抗体をペプシンと２メルカプトエタノールアミンによ
りFab'とし、BiotinMaleimideをこのFab'に標識して調
整する。
【００１０】〔血清中あるいは血漿中変性ＬＤＬ・α１
アンチトリプシン高分子複合体の測定〕各Wellに１００
μｌの１％カゼインを含むTris緩衝液(0.1M,pH8.0)を分
注、ついで５０μｌの血清あるいは血漿を加え混和した
後、３７℃で２時間反応させる。次に、Tween20 を0.05
％含む燐酸緩衝液(0.02M,pH7.4) で３回洗浄する。その
後、ビオチン標識抗ヒトα１アンチトリプシンFab'抗体
溶液あるいはビオチン標識抗ヒトApo B Fab'抗体溶液
（１％カゼインを含むTris緩衝液）を各Wellに１００μ
ずつ加え混和した後、３７℃で１時間反応させ、先と同
様に３回洗浄する。さらにアビジン化ペルオキシダーゼ
溶液（１％カゼインを含むTris緩衝液）を各Wellに１０
０μｌずつ加え混和した後、３７℃で３０分反応させ、
先と同様に３回洗浄する。基質発色液は1.66mmol/l TMB
Z （同仁化学）をメタノールで溶解後、メタノール濃度
が５０％となるように0.2mol/lトリス溶液を加えた基質
溶液と、0.02％H202を含む35mmol/lクエン酸溶液とを等
量づつ混和した溶液１００μｌを各Wellに加え、室温で
１０分放置後、反応停止液（2.5mol/lリン酸溶液）１０
０μｌを各Wellに加える。マイクロプレート用比色計を
用いて450/630nm の波長で比色し吸光度を算出する。
アンチトリプシン高分子複合体の測定〕各Wellに１００
μｌの１％カゼインを含むTris緩衝液(0.1M,pH8.0)を分
注、ついで５０μｌの血清あるいは血漿を加え混和した
後、３７℃で２時間反応させる。次に、Tween20 を0.05
％含む燐酸緩衝液(0.02M,pH7.4) で３回洗浄する。その
後、ビオチン標識抗ヒトα１アンチトリプシンFab'抗体
溶液あるいはビオチン標識抗ヒトApo B Fab'抗体溶液
（１％カゼインを含むTris緩衝液）を各Wellに１００μ
ずつ加え混和した後、３７℃で１時間反応させ、先と同
様に３回洗浄する。さらにアビジン化ペルオキシダーゼ
溶液（１％カゼインを含むTris緩衝液）を各Wellに１０
０μｌずつ加え混和した後、３７℃で３０分反応させ、
先と同様に３回洗浄する。基質発色液は1.66mmol/l TMB
Z （同仁化学）をメタノールで溶解後、メタノール濃度
が５０％となるように0.2mol/lトリス溶液を加えた基質
溶液と、0.02％H202を含む35mmol/lクエン酸溶液とを等
量づつ混和した溶液１００μｌを各Wellに加え、室温で
１０分放置後、反応停止液（2.5mol/lリン酸溶液）１０
０μｌを各Wellに加える。マイクロプレート用比色計を
用いて450/630nm の波長で比色し吸光度を算出する。
【図１】各試料による変性ＬＤＬ・α１アンチトリプシ
ン高分子複合体測定系の反応特性を示す図面である。
ン高分子複合体測定系の反応特性を示す図面である。
【図２】変性ＬＤＬによる変性ＬＤＬ・α１アンチトリ
プシン高分子複合体の形成と動脈硬化症患者血清中の変
性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を示す図
面である。
プシン高分子複合体の形成と動脈硬化症患者血清中の変
性ＬＤＬ・α１アンチトリプシン高分子複合体を示す図
面である。
【図３】ヘモグロビンＡ１ｃ高値糖尿病群あるいは高コ
レステロール群における本発明法の値を示した図面であ
る。
レステロール群における本発明法の値を示した図面であ
る。
Claims (2)
- 【請求項１】 血清中あるいは血漿中の変性ＬＤＬ・α
１アンチトリプシン高分子複合体を測定対象とすること
を特徴とする動脈硬化症の測定用キット。 - 【請求項２】 酵素免疫法、ラテックス凝集反応、イム
ノクロマト法などの免疫学的測定法、または免疫学的組
織染色法を用いることを特徴とする請求項１に記載の動
脈硬化症の測定用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08317162A JP3142786B2 (ja) | 1996-11-12 | 1996-11-12 | 動脈硬化症の測定用キット及びこれに用いる抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08317162A JP3142786B2 (ja) | 1996-11-12 | 1996-11-12 | 動脈硬化症の測定用キット及びこれに用いる抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10142226A true JPH10142226A (ja) | 1998-05-29 |
| JP3142786B2 JP3142786B2 (ja) | 2001-03-07 |
Family
ID=18085154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP08317162A Expired - Lifetime JP3142786B2 (ja) | 1996-11-12 | 1996-11-12 | 動脈硬化症の測定用キット及びこれに用いる抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3142786B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1070962A3 (en) * | 1999-07-22 | 2001-05-23 | Ikagaku Co., Ltd. | Method for detecting low density lipoprotein (LDL) or denatured low density lipoprotein in blood |
| JP2010019686A (ja) * | 2008-07-10 | 2010-01-28 | Biomarker Science:Kk | 動脈硬化改善・予防効果の評価方法及び評価用キット、並びに、物質のスクリーニング方法 |
| WO2010018870A1 (ja) | 2008-08-15 | 2010-02-18 | 藤倉化成株式会社 | 動脈硬化診断用ポリペプチドマーカー、及び該マーカー等を用いる動脈硬化の検出方法、並びに動脈硬化診断用キット |
| JP2010190804A (ja) * | 2009-02-19 | 2010-09-02 | Biomarker Science:Kk | 動脈硬化改善・予防効果の評価方法及び評価用キット、並びに、物質のスクリーニング方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995009363A1 (en) * | 1993-09-29 | 1995-04-06 | Yamasa Corporation | Method of assaying oxidized lipoprotein and application thereof |
-
1996
- 1996-11-12 JP JP08317162A patent/JP3142786B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995009363A1 (en) * | 1993-09-29 | 1995-04-06 | Yamasa Corporation | Method of assaying oxidized lipoprotein and application thereof |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1070962A3 (en) * | 1999-07-22 | 2001-05-23 | Ikagaku Co., Ltd. | Method for detecting low density lipoprotein (LDL) or denatured low density lipoprotein in blood |
| JP2010019686A (ja) * | 2008-07-10 | 2010-01-28 | Biomarker Science:Kk | 動脈硬化改善・予防効果の評価方法及び評価用キット、並びに、物質のスクリーニング方法 |
| WO2010018870A1 (ja) | 2008-08-15 | 2010-02-18 | 藤倉化成株式会社 | 動脈硬化診断用ポリペプチドマーカー、及び該マーカー等を用いる動脈硬化の検出方法、並びに動脈硬化診断用キット |
| EP3021121A1 (en) | 2008-08-15 | 2016-05-18 | Fujikura Kasei Co., Ltd. | Polypeptide marker for diagnosis of arteriosclerosis, method for detection of arteriosclerosis by using the maker or the like, and kit for diagnosis of arteriosclerosis |
| US9366681B2 (en) | 2008-08-15 | 2016-06-14 | Fujikura Kasei Co., Ltd. | Polypeptide marker for diagnosis of arteriosclerosis, method for detection of arteriosclerosis by using the maker or the like, and kit for diagnosis of arteriosclerosis |
| JP2010190804A (ja) * | 2009-02-19 | 2010-09-02 | Biomarker Science:Kk | 動脈硬化改善・予防効果の評価方法及び評価用キット、並びに、物質のスクリーニング方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3142786B2 (ja) | 2001-03-07 |
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