JPH10179140A - １，５−アンヒドログルシトールを炭素源として利用する微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 １，５−アンヒドログルシトール（１，５−
ＡＧ）を炭素源として利用する微生物を提供する。 【解決手段】 本発明の微生物は、グルコースを炭素源
として利用せず、且つ１，５−ＡＧ及びその誘導体を炭
素源として利用できる微生物である。本発明の微生物の
産生する酵素等の蛋白質は１，５−ＡＧの酵素定量法に
有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規な微生物に関す
る。より詳細には、１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシト
ール（以下、１，５−ＡＧという）を炭素源として利用
する微生物に関する。

【０００２】

【従来の技術】１，５−ＡＧはグルコース類似の構造を
有するポリオールであり、ヒトでは血液、髄液、尿など
に存在する。糖尿病患者では１，５−ＡＧ濃度が低下す
ることが知られてため、１，５−ＡＧは糖尿病のマーカ
ーとして注目されている。従来、１，５−ＡＧはガスク
ロマトグラフィーにより定量されていた。しかし、この
方法で定量するには特別な装置が必要であり、また操作
が繁雑で熟練を要するため、臨床検査の分野で多数の検
体を測定するには支障があった。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】最近、１，５−ＡＧの
定量に酵素を用いた方法が報告されている。例えば特開
昭６３−１８５３９７号には、１，５−ＡＧを酸化する
酵素（ピラノースオキシダーゼ等）を用いて過酸化水素
を産生させ、生成した過酸化水素を指標として１，５−
ＡＧを定量する方法が開示されている。また特開昭６２
−７９７８０号も、類似の酸化酵素を用いる方法が開示
されている。しかし、上記の酸化酵素を用いる方法にお
いては、使用する酵素の基質特異性が低く、１，５−Ａ
Ｇのみならずグルコースなどにも作用する。臨床検査に
おける試料は、通常、糖類（特にグルコース）を多く含
有しており、このようなグルコースを多く含有する生体
試料中の１，５−ＡＧの定量を行う場合には、グルコー
スの影響を回避する必要がある。試料中のグルコースを
除去する方法としては、例えば前記特開昭６３−１８５
３９７号や特開平７−２３１７９６号では、強塩基性陰
イオン交換樹脂やホウ酸処理法が開示されている。また
特開平６−３４３４９２号では試料のｐＨを７未満に、
特開平５−３０４９９６号では同様にｐＨを７．２〜
８．５に調整する方法が開示されている。しかし、これ
らの方法はいずれも操作が繁雑であるという欠点があ
り、自動分析装置を用いて多数の検体を迅速に測定する
には不向きである。また、前記の酸化酵素を用いる方法
では、指標となる分子吸光係数が明らかでなく、更に生
体試料では試料中のビリルビンやアスコルビン酸などの
還元性物質の影響を受けるという問題がある。このよう
な問題から、１，５−ＡＧに高い特異性を有する酵素が
切望されている。本発明者等は従来の方法の問題点に鑑
み、１，５−ＡＧに高い特異性を有する酵素を見出すべ
く、１，５−ＡＧを炭素源として選択的に利用できる微
生物を鋭意スクリーニングした結果、１，５−ＡＧ及び
その誘導体を炭素源として選択的に利用でき、且つグル
コースを炭素源として利用できない微生物を見出した。
本発明はかかる知見に基づいてなされたもので、１，５
−ＡＧを炭素源として利用できる微生物を提供すること
を目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めになされた本発明の要旨は、 グルコースを炭素源として利用せず、且つ１，５−Ａ
Ｇ及びその誘導体を炭素源として利用するアシネトバク
ター属に属する微生物； 微生物が、アシネトバクター エスピー １２０３-７-
２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５８９３）である上記記載の微
生物； である。

【０００５】

【発明の実施の形態】本発明による上記の微生物はグル
コースを炭素源として利用せず、且つ１，５−ＡＧ及び
その誘導体を炭素源として利用できる。従って、当該微
生物は、グルコースを基質として利用せず、且つ１，５
−ＡＧ及びその誘導体を基質として利用する酵素を産生
していると考えられ、かかる酵素は生体試料中の１，５
−ＡＧの定量に有用である。なお、上記の１，５−ＡＧ
誘導体としては、２−オキソ−１，５−ＡＧ、３−オキ
ソ−１，５−ＡＧ、４−オキソ−１，５−ＡＧ、５−オ
キソ−１，５−ＡＧ、６−オキソ−１，５−ＡＧ、リン
酸化１，５−ＡＧなどが例示できる。

【０００６】本発明の微生物の具体例である１２０３-
７-２株の菌学的性質は以下のとおりである。 (a)形態学的性状 1. 細胞の形及び大きさ： カン菌 2. 細胞の多形性の有無： なし 3. 運動性の有無： なし 4. 胞子の有無： なし 5. グラム染色性： 陰性

【０００７】(b)各培地における生育状態 1. 肉汁寒天平板培養： 乳白色／良好 2. 肉汁寒天斜面培養： 乳白色／良好 3. 肉汁液体培養： 乳白色／良好

【０００８】(c)生理学的性質 1. 硝酸塩の還元： 陰性 2. 脱窒反応： 陰性 3. ＶＰ反応： 陽性 4. インドールの生成： 陰性 5. 硫化水素の生成： 陰性 6. クエン酸の利用： 陽性 7. 色素の生成： 陰性 8. ウレアーゼ： 陰性 9. オキシダーゼ： 陰性 10. カタラーゼ： 陽性 11. 生育の範囲： ｐＨ６．０〜８．０／３０℃付近 12. 酸素に対する態度： 好気性 13. Ｏ-Ｆテスト: Oxidative 14. 下記の糖類からの酸の生成 Ｌ−アラビノース： 陽性 Ｄ−キシロース ： 陽性 Ｄ−グルコース ： 陽性 Ｄ−マンノース ： 陽性 Ｄ−フルクトース： 陰性 Ｄ−ガラクトース： 陽性 麦芽糖 ： 陰性 ショ糖 ： 陰性 乳糖 ： 陰性 トレハロース ： 陰性 Ｄ−ソルビット ： 陰性 Ｄ−マンニット ： 陰性 イノシット ： 陰性 グリセリン ： 陰性

【０００９】 (d)その他の諸性質 1. β-ガラクトシダーゼ： 陰性 2. アルギニンジヒドラーゼ： 陰性 3. リジンデカルボキシラーセ： 陰性 4. オルニチンデカルボキシラーゼ： 陰性 5. トリプトファンデアミナーゼ： 陰性 6. ゼラチナーゼ： 陰性 7. １，５−ＡＧ、クエン酸、エタノールでの増殖： 陽性 8. α−メチル−Ｄ−グルコシドでの増殖： 陰性

【００１０】以上の菌学的性質から、Bergey's Manual
of Determinative Bacteriology (Ninth Edition)に基
づいて検索したところ、本菌株はアシネトバクター(Aci
netobacter)属の細菌に比較的類似しているが、上記の
諸性質と一致するものは見出されなかった。そこで、本
発明菌はアシネトバクター属に属する新種の菌株と判断
し、アシネトバクター エスピー １２０３-７-２(Acine
tobacter sp. 1203-7-2)と命名した。また、この菌株
は、工業技術院生命工学工業技術研究所に「受託番号第
１５８９３号（ＦＥＲＭ Ｐ−１５８９３）」として寄
託されている。

【００１１】本発明菌の培養は、当該菌株が良好に生育
できるものであれば、いかなる培地及び培養条件であっ
てもよく、かかる培養により増殖させて必要量の菌体を
得ることができる。上記の培地は、適当な炭素源、窒素
源、無機イオン及びその他必要な成分を含有させること
ができる。培地の炭素源としては、１，５−ＡＧ、クエ
ン酸、エタノールなどが利用できる。また、窒素源とし
ては、ペプトン、酵母エキス、肉エキスなどの有機窒素
源、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの無機窒
素源が利用できる。更に、無機イオンとしては、リン酸
イオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシ
ウムイオン、鉄イオン、銅イオン、マンガンイオンなど
が利用できる。また、必要に応じて、培地には、ビタミ
ン類、細胞増殖因子などの成分を添加することもでき
る。

【００１２】本発明菌の培養方法としては、常法に準
じ、振盪培養法などの液体培地を用いる培養方法、寒天
培地などの固体培地を用いる培養方法が利用でき、好気
的条件下に行われる。培養温度は２５〜４０℃、好まし
くは３０℃付近、培養途中のｐＨは６〜８、好ましくは
７付近にて行われる。培養日数としては、菌体量、培地
組成などに応じて適宜設定できるが、通常１〜２日、好
ましくは１日である。

【００１３】

【発明の効果】本発明菌は、グルコースを炭素源として
利用せず、且つ１，５−ＡＧ及びその誘導体を炭素源と
して利用できるので、本発明菌の産生する酵素等の蛋白
質は１，５−ＡＧの酵素定量法に有用である。従って、
当該酵素等の蛋白質を利用すると、試料中のグルコース
の影響を回避するために従来行われていた樹脂処理、ホ
ウ酸処理、ｐＨ処理などの煩雑な前処理を必要としない
ので、自動分析装置に好適に利用できる。

【００１４】

【実施例】以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に
説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもの
ではない。 実施例１菌株の取得 唯一の炭素源として１，５−ＡＧを０．４ｗ／ｖ％添加
したＭ９最少培地に、土壌、海水又は淡水試料を加え、
３０℃で好気的に培養した。これを寒天培地にプレーテ
ィングし、コロニーを単離した。その結果、１，５−Ａ
Ｇを唯一の炭素源として増殖できる細菌を約４０株単離
できた。それらの菌株を、唯一の炭素源としてグルコー
スを含有するＭ９最少培地でスクリーニングした結果、
炭素源としてグルコースを含有する培地では増殖できな
い株が１つ見出された（アシネトバクター エスピー １
２０３-７-２株；以下、１２０３-７-２株という）。

【００１５】実施例２１２０３-７-２株の炭素源の検討 各種炭素源を添加したＭ９最少培地で１２０３-７-２株
を好気的に培養した。菌の増殖は、６６０ｎｍの吸光度
の増加を指標に測定した。その結果、１２０３-７-２株
は、１，５−ＡＧ、クエン酸又はエタノールを唯一の炭
素源として増殖した。しかし、糖類（グルコース、マン
ノース、ソルボース、フルクトース、アラビノース、リ
ボース、ガラクトース、キシロース、ラクトース、トレ
ハロース、２−デオキシグルコース、３−Ｏ−メチルグ
ルコース）、多価アルコール（マンニトール、グリセロ
ール）、有機酸（グルコン酸、酢酸）、アミノ酸（グリ
シン）を唯一の炭素源として培養した場合には、全く増
殖しなかった。図１に、１，５−ＡＧ、クエン酸、エタ
ノール又はグルコースを含有する培地での１２０３-７-
２株の増殖の経時変化を示す。図に示されるように、１
２０３-７-２株はグルコースを炭素源として利用するこ
とができず、１，５−ＡＧを炭素源として選択的に利用
できることが判明した。

【図面の簡単な説明】

【図１】１，５−ＡＧ、クエン酸、エタノール又はグル
コースを含有するＭ９最少培地での１２０３-７-２株の
増殖の経時変化を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 渡津 吉史 神戸市西区室谷１丁目１−２ 国際試薬株 式会社研究開発センター内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 グルコースを炭素源として利用せず、
   且つ１，５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール及びその誘
   導体を炭素源として利用するアシネトバクター属に属す
   る微生物。
2. 【請求項２】 微生物が、アシネトバクター エスピ
   ー １２０３-７-２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５８９３）である
   請求項１記載の微生物。