JPH10194979A

JPH10194979A - イムノグロブリンｅ抗体産生抑制剤

Info

Publication number: JPH10194979A
Application number: JP9013125A
Authority: JP
Inventors: Hitoshi Omori; 斉大森; Yoichi Oiso; 洋一大磯; Ryosuke Sugihara; 良介杉原
Original assignee: Tayca Corp
Current assignee: Tayca Corp
Priority date: 1997-01-07
Filing date: 1997-01-07
Publication date: 1998-07-28
Also published as: DE69810024T2; EP0894001A1; US6423320B1; ATE229339T1; US20020041885A1; DE69810024D1; WO1998030224A1; EP0894001B1

Abstract

(57)【要約】【課題】ＩｇＥ抗体産生を抑制できる薬剤を提供する
こと。【解決手段】クレブシエラ・オキシトカ又はクレブシ
エラ・ニューモニアの莢膜成分又はこれを酸、塩基若し
くは還元剤で処理することにより得ることのできる成分
を含有することを特徴とする、ＩｇＥ抗体産生抑制剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、クレブシエラ属細
菌特にクレブシエラ・オキシトカ（Klebsiella oxytoc
a）及びクレブシエラ・ニューモニア（Klebsiella pneu
moniae ）の莢膜より得られるイムノグロブリンＥ（Ｉ
ｇＥ）抗体産生抑制剤に、従ってＩ型アレルギーの予防
又は治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】アレルギーはＩ型ないしIV型に分類さ
れ、そのうち最も一般的に見られるのは、気管支喘息、
一部の蕁麻疹、アレルギー性鼻炎、アナフィラキシーな
どをもたらす１型アレルギーである。Ｉ型アレルギーは
ＩｇＥ抗体が関与する生体反応であるが、この型のアレ
ルギーにおける機序は、（１）生体が抗原に感作される
ことによりＩｇＥ抗体が産生され、（２）そのＩｇＥ抗
体がＩｇＥレセプターを介して肥満細胞及び好塩基球に
結合し、（３）抗原が再度侵入したとき、肥満細胞及び
好塩基球表面上に結合している先のＩｇＥ抗体と結合
し、それによりこれらの細胞のＩｇＥレセプター間に架
橋が形成され、（４）Ｃａイオン流入等の種々の反応を
経て、ヒスタミン、ロイコトリエン、好酸球遊走因子
（ＥＣＦ−Ａ）、血小板活性化因子（ＰＡＦ）等の化学
伝達物質が放出されることにより、症状が発現するとい
うものである。

【０００３】アレルギーに対して従来より知られている
抗アレルギー剤の殆どは、抗ヒスタミン薬や化学伝達物
質遊離抑制薬である。Ｉ型アレルギーの発生機序の最も
初期の段階であるＩｇＥ抗体の産生の抑制に基づくタイ
プの薬物は、この型のアレルギーに対する優れた薬剤を
もたらし得ると考えられるが、そのようなタイプの薬物
として十分な薬効のあるものは知られていない。ＩｇＥ
抗体の産生抑制能を幾らか有する抗アレルギー剤として
は、唯一アイピーディー〔ＩＰＤ−１１５１Ｔ、スプラ
タストトシレート）が知られているが〔バイオインダス
トリー（BIO INDUSTRY) 第13巻第12号第42-50 ページ
（1996年）〕、この化合物は極めて弱いＩｇＥ抗体産生
抑制作用を有するに過ぎない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】このような状況におい
て、本発明の目的は、ＩｇＥ抗体産生を抑制する作用の
ある薬剤を提供することである。この目的の下に本発明
者らは、種々の物質につき検討した結果、クレブシエラ
属細菌の莢膜より得られる成分が優れたＩｇＥ抗体産生
抑制作用を有することを見出し、更に検討を加えて本発
明に到達した。

【０００５】

【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、クレ
ブシエラ・オキシトカ又はクレブシエラ・ニューモニア
の莢膜成分又はこれを酸、塩基若しくは還元剤で処理す
ることにより得ることのできる成分を含有することを特
徴とするＩｇＥ抗体産生抑制剤を提供する。

【０００６】ここに、クレブシエラ・オキシトカとして
特に好ましいのは、クレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３
株（受託番号ＦＥＲＭＢＰ−４６６９：通商産業省工
業技術院生命工学工業技術研究所）又はその変異株であ
る。またクレブシエラ・ニューモニアとして特に好まし
いのは、クレブシエラ・ニューモニアＫ１９株（Michel
Beurret et al., "Structural investigation of the
capsular polysaccharide from Klebsiella K19 by che
mical and N.M.R. analyses", Carbohydrate Research,
157:13-25(1986)．）又はその変異株である。

【０００７】これらの変異株は、クレブシエラ・オキシ
トカＴＮＭ３株又はクレブシエラ・ニューモニアＫ１９
株を、紫外線、Ｘ線などの放射線に暴露し、又は、エチ
ルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）等の化学的
突然変異誘発物質のような公知の突然変異誘発手段と接
触させることにより発生させることができる。

【０００８】これらの細菌の莢膜成分又はこれを酸、塩
基若しくは還元剤で処理することにより得ることのでき
る成分のＩｇＥ抗体産生抑制作用の有無及び強さは、後
述の方法により容易に測定することができる。

【０００９】クレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株及び
クレブシエラ・ニューモニアＫ１９株は、いずれも以下
の結合様式と構成モル比とを有する多糖類を莢膜成分と
して有する。すなわち：

【００１０】

【化５】

【００１１】〔式中、Ｌ−ＲｈａはＬ−ラムノース残
基、Ｄ−ＧａｌはＤ−ガラクトース残基、Ｄ−Ｇｌｃは
Ｄ−グルコース残基、そしてＤ−ＧｌｃＵＡはＤ−グル
クロン酸残基を表し、小括弧内の数字はグリコシド結合
の位置を示す。〕を繰り返し単位として有する多糖類で
あり、各構成単位であるこれらの単糖類残基の存在比
（モル比）は、それらの結合様式においても区別して、

【００１２】

【化６】

【００１３】＝0.8 〜1.2 ：1.6 〜2.4 ：0.8 〜1.2 ：
0.8 〜1.2 ：0.8 〜1.2 の範囲にある。

【００１４】本発明は、従って、クレブシエラ・オキシ
トカ又はクレブシエラ・ニューモニアの莢膜多糖類又は
これを酸、塩基若しくは還元剤で処理することにより得
ることのできるフラグメントを含有することを特徴とす
るＩｇＥ抗体産生抑制剤をも提供する。該莢膜多糖類
は、例えば湿熱滅菌処理又は超音波処理等によって莢膜
を菌体から遊離させ、菌体を例えば遠心により除去した
培養上清を限外濾過（例えばミリポア社製限外濾過膜：
分画分子量１×10⁵）して高分子量側に残存する成分と
して得ることができる。また莢膜成分のフラグメント化
による生成物は、莢膜成分の酸、塩基又は還元剤による
処理によって行うことができる。また還元剤による処理
は、培地に例えば硫酸鉄及びＥＤＴＡを加えることによ
り、培養しつつ行うこともできる。

【００１５】これらの細菌のうち、本発明において取り
分け好ましいのは、クレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３
株細菌である。

【００１６】本発明の莢膜成分を得るためのクレブシエ
ラ属細菌の培養は、一般的に次の方法に準じて行うこと
ができる。すなわち、培養のための培地としては、クレ
ブシエラ属細菌が生育でき、且つ、目的とする莢膜成分
を産生するに必要な炭素源及び窒素源、無機塩類、並び
に微量栄養源を含有する培地であればよく、それ以外に
は特に限定されない。

【００１７】炭素源としては、例えばグルコース、ラク
トース、マルトース、キシロース、マンニトール、サッ
カロース、ラムノース、アラビノース、トレハロース、
ラフィノース等が使用できる。

【００１８】窒素源としては、例えば硝酸塩、アンモニ
ウム塩、尿素等の合成化合物、ポリペプトン、コーンス
ティープリカー、酵母エキス、肉エキス、脱脂大豆抽出
物、ペプチド、アミノ酸等の天然有機物が使用できる。

【００１９】無機塩類としては、例えばリン酸塩、カリ
ウム塩、硫酸塩、マグネシウム塩等が使用できる。

【００２０】微量栄養源としては、例えば酵母エキス、
各種ビタミン類等が使用できる。

【００２１】培地には、更に必要に応じ、カルシウム
塩、マンガン塩等を添加してもよい。

【００２２】使用する培地は、固形培地でも液体培地で
もよい。液体培地を使用する場合には、静置培養でもよ
いが、目的とする莢膜成分を高収率で得るためには、振
とう培養又は通気攪拌培養の方がより好ましい。培養時
の培地ｐＨは、当該微生物の生育に適し且つ目的とする
莢膜成分の産生を妨げないｐＨである限り、特に限定さ
れないが、通常適切なｐＨは４〜８である。培養温度に
ついては、特に制限されないが、通常20〜35℃が好まし
い。培養時間は、目的とする莢膜成分の産生が最大にな
るように適宜設定されるが、通常好ましいのは１〜７日
間である。

【００２３】上記培養によって得られる培養物は、滅菌
後、精製せずにそのままＩｇＥ抗体産生抑制剤として使
用することが可能である。しかしながら、菌体を除去し
更には目的とする莢膜成分を精製して使用するのが一層
好ましい。菌体の除去は、例えば湿熱滅菌により莢膜を
菌体から遊離させた後、遠心分離や濾過を用いて常法に
従って行うことができる。また菌体除去後の培養液に、
メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン
等の水混和性有機溶媒を加えて沈殿を生じさせ、次いで
該沈殿物を水に溶解させた後、水に対して透析を行い、
その後、通風乾燥、熱風乾燥、噴霧乾燥、ドラム乾燥、
減圧乾燥、凍結乾燥などの方法により透析内液を乾燥さ
せる等の精製処理を行ってもよい。精製処理のために
は、これらの方法の他、限外濾過（例えばミリポア社製
の分画分子量１×10⁵のものを濃縮に使用できる。）を
行い、得られる濃縮液を乾燥工程に付す方法や、更に、
必要に応じ、イオン交換、ゲル濾過、アフィニティーな
どの各種のカラムクロマトグラフィー、第４級アンモニ
ウム塩による沈殿又は塩析、有機溶媒による沈殿等が用
いられる。

【００２４】また培養物自体又は上記で精製した莢膜成
分に対し、所望により還元剤の添加や酸・塩基加水分
解、加圧下での加温や超音波処理など各種の処理を施し
てもよい。酸・塩基加水分解については、培養操作完了
後の培養物に又は上記で精製した莢膜成分に、硫酸、塩
酸等の酸やアルカリなどを添加し且つ条件を調節するの
が好ましい。

【００２５】また、培養に際し、培養物中の莢膜成分産
生量が減少しない程度に、培地に還元剤を添加してもよ
い。この場合に使用する還元剤としては、例えば硫酸第
一鉄及び／又は塩化第一鉄と、エチレンジアミン四酢酸
との組み合わせが好ましい。

【００２６】このようにして得られる莢膜成分である多
糖類及びその酸、塩基若しくは還元剤による処理により
得られるフラグメントは、後述の各試験例に記述したよ
うに、ＩｇＥ抗体産生抑制作用を有している。従って、
それらはＩｇＥ抗体産生抑制剤として、従ってまたＩ型
アレルギーの予防又は治療剤として使用することができ
る。これらの成分について行ったラット経口での急性毒
性試験により、５ｇ／ｋｇの投与によっても死亡例がな
く、体重増加も対称群と同等であり、しかも、外観や剖
検上も全く異常は認められないことが明らかにされた。
従ってこれらの成分の経口投与における安全性は高いと
考えられる。

【００２７】

【実施例】以下、本発明を幾つかの典型的な実施例及び
試験例により更に詳細に説明するが、本発明は、これら
の実施例に限定されることを意図するものでない。

【００２８】〔実施例１〕クレブシエラ属細菌の培
養及び莢膜成分の回収 500 ｍＬ容の坂口フラスコに、表１に示す組成の培地10
0 ｍＬを入れ、121 ℃にて20分間湿熱滅菌後、表２に示
す組成の培地を用いて試験管にて３日間液体振とう培養
していたクレブシエラ・オキシトカＴＮＭ３株（ＦＥＲ
ＭＢＰ−４６６９）を、一白金耳分植菌し、振とう数
毎分110 ストロークで28℃にて１日の間レシプロ振とう
培養を行った。

【００２９】

【表１】〔培地組成（重量％）〕グルコース２％ポリペプトン 0.1 ％リン酸一水素カリウム 0.15 ％硫酸マグネシウム・７水和物 0.05 ％ビタミンＢ₁ 0.0005 ％ビオチン 0.000006 ％パントテン酸カルシウム 0.001 ％ニコチンアミド 0.0005 ％ｐＨ６．５

【００３０】

【表２】〔培地組成（重量％）〕グルコース４％ポリペプトン 0.1 ％リン酸一水素カリウム 0.15 ％硫酸マグネシウム・７水和物 0.05 ％ビタミンＢ₁ 0.0005 ％ビオチン 0.000006 ％パントテン酸カルシウム 0.001 ％ニコチンアミド 0.0005 ％ｐＨ７

【００３１】表２に示した組成よりなる培地８Ｌを入れ
て前記と同様の滅菌処理を行った15Ｌ容のジャーファー
メンターに、上記で得られた培養物400 ｍＬを接種し、
28℃、通気量５Ｌ／分の条件下に、５Ｍ水酸化ナトリウ
ム水溶液を用いて系のｐＨを７に保ちながら、95時間通
気攪拌培養を行った。なお回転数は、培養24時間までは
200 ｒｐｍ、それ以降33時間までは400 ｒｐｍ、それ以
降95時間までは700 ｒｐｍとした。

【００３２】得られた培養物のｐＨを、10％の硫酸で4.
5 に調整し、121 ℃にて60分間湿熱滅菌して莢膜成分を
菌体から遊離させた後、遠心分離により菌体を粗く除去
し、更に上清を0.45μｍのメンブランフィルターに通し
て菌体を除去した。得られた除菌液について、残留培地
成分等が除去されるまで、クロスフロー方式の限外濾過
を繰り返した。限外濾過には、ミリポア製の限外濾過膜
（分画分子量：１×10⁵）を使用した。限外濾過膜を通
過しなかった濃縮液を凍結乾燥し、培地１Ｌ当たり、莢
膜多糖類を主体とする抽出物21ｇを得た。

【００３３】〔実施例２〕クレブシエラ属細菌の莢膜
多糖類のフラグメント化実施例１と同様に処理して得た10ｇの莢膜成分を、ｐＨ
4.5 に調製した緩衝液に溶解させ、121 ℃×25分間の条
件下に緩やかな酸加水分解を行った後、10Ｍ水酸化ナト
リウムでｐＨを12.5に調整し、室温下に５時間放置し、
分解物が除去されるまでクロスフロー方式の限外濾過
（ミリポア社製限外濾過膜：分画分子量１×１０⁵）を
繰り返した。濃縮液を陽イオン交換樹脂によって脱塩処
理した後、水酸化ナトリウムでｐＨを6.8 に調整し、凍
結乾燥して、莢膜成分のフラグメント化による生成物約
７ｇを得た。

【００３４】〔実施例３〕クレブシエラ属細菌の培養
中フラグメント化及びフラグメント化生成物の回収レシプロ振とう培養処理まで実施例１と同様に操作を行
った後、表３に示す組成の培地６Ｌを入れて実施例１に
記載したのと同様な滅菌処理を行った10Ｌ容のジャーフ
ァーメンターに、得られた培養液400 ｍＬを接種し、28
℃にて、培養21時間までは通気量3.6 Ｌ／分、培養21時
間以降は4.8 Ｌ／分の条件下に、５Ｍ水酸化ナトリウム
水溶液を使用して、系のｐＨを７に維持しつつ、86時間
通気攪拌培養を行った。なお、回転数は、培養20時間ま
では250 ｒｐｍ、それ以降36時間までは500 ｒｐｍ、そ
れ以降86時間までは650 ｒｐｍとした。

【００３５】

【表３】〔培地組成（重量％）〕グルコース２％硫酸アンモニウム 0.06 ％リン酸一水素カリウム 0.15 ％硫酸マグネシウム・７水和物 0.05 ％硫酸鉄・７水和物 0.003 ％エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム・２水和物 0.01 ％ビタミンＢ₁ 0.0005 ％ビオチン 0.000006 ％パントテン酸カルシウム 0.001 ％ニコチンアミド 0.0005 ％ｐＨ７

【００３６】得られた培養物を、121 ℃にて20分間湿熱
滅菌後、遠心分離により菌体を除去した。得られた培養
上清分について、残留培地成分等が除去されるまで、ク
ロスフロー方式の限外濾過を繰り返した。限外濾過に
は、ミリポア社製限外濾過膜（分画分子量：１×10⁵）
を用いた。限外濾過膜を通過しなかった濃縮液を凍結乾
燥し、培地１Ｌ当たり莢膜多糖類からのフラグメントを
主体とする生成物9.6 ｇを得た。

【００３７】〔抗原特異的抗体産生の抑制作用の測定〕１．サンプルの調製上記の実施例で得られた各生成物を濃度１重量％の水溶
液とし、その水溶液に各々陽イオン交換樹脂を添加し
て、培養物中に含まれる酸性基の対イオンを水素イオン
とした後、樹脂を濾去し、濾液を水酸化ナトリウムで中
和して対イオンをナトリウムイオンに置換した。その
後、ポアサイズ0.2 μｍのメンブランフィルターで濾過
した後、凍結乾燥し、得られた各サンプルを以下の実験
に供した。

【００３８】〔試験例１〕抗原特異的抗体産生抑制作
用の測定８週齢の雄性マウス（ＢＤＦ１、５〜６匹／群）を用
い、抗原としてキーホルリンペットヘモシアニンをトリ
ニトロフェノールと反応させて調製したＴＮＰ−ＫＬＨ
の10μｇと、アジュバントとしての水酸化アルミニウム
２ｍｇとの混合物を含有する生理食塩水0.2 ｍＬを腹腔
内に注射して感作した。

【００３９】また、実施例３で得た莢膜多糖類からのフ
ラグメントを主体とする生成物を生理食塩水に溶解させ
上記ＢＤＦ１マウスに対して、投与量が100 ｍｇ／ｋｇ
になるように調製した溶液150 μＬを、感作の前日から
感作の３日後まで、計５回背部皮下に投与した。対照群
には上記多糖類溶液の代わりに生理食塩水を用いた。10
日後に全採血して、抗ＴＮＰ−ＩｇＥ抗体産生量を測定
した。

【００４０】抗ＴＮＰ−ＩｇＥ抗体産生量の測定は、Oh
omori, H., Immunol. Lett., 23: 251-256 (1990) に報
告されているＥＬＩＳＡ法に従い次の通りに行った。

【００４１】１．ラット由来抗マウスＩｇＥ抗体コーテ
ィングプレートの調製：６ＨＤ５（商品名：ヤマサ社
製、ラット由来抗マウスＩｇＥ抗体）を20μｇ／ｍＬの
濃度になるように下記のＡ１緩衝液で希釈し、96穴のプ
レートに50μＬずつ添加した後、４℃にて12時間放置し
てコーティングした。上清を取り除き、0.2 重量％の濃
度になるようにＡ１緩衝液で希釈したＢＳＡ液（牛血清
アルブミン）を、それぞれ250 μＬずつ添加した後、更
に４℃にて12時間放置しブロッキングした。上清を取り
除き、試験に用いた。

【００４２】

【表４】〔Ａ１緩衝液〕リン酸二ナトリウム・１２水和物 2.1 ｇリン酸一ナトリウム・２水和物 0.59 ｇアジ化ナトリウム 0.96 ｇ塩化マグネシウム・６水和物 0.195 ｇ塩化ナトリウム 5.6 ｇ蒸留水 960 ｍＬ

【００４３】２．サンプル処理：0.1 重量％の濃度にな
るように下記のＡ２緩衝液で希釈したＢＳＡ液を用い
て、予めサンプルを後述の蛍光度測定が可能となる適切
な範囲内の濃度に希釈しておき、これを上述のプレート
に50μＬずつ添加した後、４℃にて12時間放置し反応さ
せた。上清を取り除き、0.01重量％の濃度になるようＡ
２緩衝液で希釈したＢＳＡ液で２回洗浄した後、予め0.
1 重量％濃度になるようＡ２緩衝液で希釈したＢＳＡ液
を用いて適切な濃度（およそ数μｇ／ｍＬ）に調製して
おいてたＴＮＰ−β−ガラクトシダーゼ液を、50μＬず
つ添加した後、４℃にて４時間放置し反応させた。上清
を取り除き、0.02容量％の濃度になるようＡ２緩衝液で
希釈しておいたＴｗｅｅｎ20液で３回洗浄した。

【００４４】

【表５】〔Ａ２緩衝液〕Ａ１緩衝液 100 ｍＬ塩化ナトリウム 1.25ｇ

【００４５】これに、予めＤＭＦ（ジメチルホルムアミ
ド）原液10ｍｇ／ｍＬの濃度に調製しておいた４−ＭＵ
Ｇ（メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド）
を、0.1 重量％の濃度になるようにＡ１緩衝液で希釈し
たＢＳＡ液で100 倍に希釈したものを100 ｍＬずつ添加
した。37℃にて45分間反応させた後、0.1 Ｍのグリシン
緩衝液（ｐＨ10.3）を100 μＬずつ添加し反応を停止さ
せた後、蛍光度測定（励起波長365 ｎｍ、蛍光波長450
ｎｍ）を行った。

【００４６】上記において、特に温度を記載していない
操作については、全て氷冷下でおこなった。

【００４７】また検量線を作るため、既知濃度の抗ＴＮ
Ｐ−ＩｇＥ抗体を用いて同様の操作を行った。

【００４８】ＩｇＥ抗体産生抑制率は、次の式により算
出した。結果は表６に示す。

【００４９】ＩｇＥ抗体産生抑制率（％）＝〔（Ｃ−
Ｓ）／Ｃ〕×100

【００５０】〔ここに、Ｃ：対照における抗ＴＮＰ−Ｉ
ｇＥ抗体産生量、Ｓ：被検試料投与群における抗ＴＮＰ
−ＩｇＥ抗体産生量〕

【００５１】〔試験例２〕実施例１で得た莢膜多糖類を
主体とする抽出物を用い、感作９日後に全採血を行った
以外は、試験例１と同様の操作を行い、抗ＴＮＰ−Ｉｇ
Ｅ抗体産生抑制率を測定した。結果は表６に示す。

【００５２】〔試験例３〕実施例２で得た莢膜成分のフ
ラグメント化による生成物を用い、投与期間を感作の前
日から２日後までとし感作９日後に全採血を行った以外
は、実施例１と同様の操作を行い、抗ＴＮＰ−ＩｇＥ抗
体産生抑制率を測定した。結果は表６に示す。

【００５３】〔試験例４〕抗原接種後からの培養物投
与実施例２で得た莢膜成分のフラグメント化による生成物
を用い、被検試料及び生理食塩水（対照）の投与を、感
作後１〜４日にかけて計４回投与し、感作９日後に全採
血を行った以外は、実施例１と同様の操作を行い、抗Ｔ
ＮＰ−ＩｇＥ抗体産生抑制率を測定した。結果は表６に
示す。

【００５４】〔試験例５〕経口投与製造例２で得た莢膜成分のフラグメント化による生成物
を生理食塩水に溶解させて、ＢＤＦ１マウスに対し投与
量が100 ｍｇ／ｋｇになるように調製した溶液150 μＬ
を、マウスに感作当日から感作後３日まで計４回経口投
与し、感作９日後に全採血を行った以外は、実施例１と
同様の操作を行い、抗ＴＮＰ−ＩｇＥ抗体産生抑制率を
測定した。結果は表６に示す。

【００５５】〔試験例６〕実施例２で得た得た莢膜成分
のフラグメント化による生成物を生理食塩水に溶解させ
て、ＢＫＦ１マウスに対し投与長が50ｍｇ／ｋｇになる
ように調製した溶液150 μＬを、マウスに感作当日から
感作後３日まで計４回皮下投与し、感作９日後に全採血
を行った以外は、実施例１と同様の操作を行い、抗ＴＮ
Ｐ−ＩｇＥ抗体産生抑制率を測定した。結果は表６に示
す。

【００５６】〔試験例１〜６の結果〕上記の試験例１〜
６について得られた、被検試料及び対照についての抗Ｔ
ＮＰ−ＩｇＥ抗体産生量平均値〔μｇ／ｍＬ〕、及び抗
体産生抑制率を以下の表６にまとめて示す。

【００５７】

【表６】

【００５８】試験例１〜４の結果が示すように、クレブ
シエラ属細菌の莢膜成分又はそのフラグメント化生成物
の皮下投与により、抗ＴＮＰ−ＩｇＥ抗体の産生が高い
抑制率を以て抑えられている。また試験例１〜３と試験
例４との比較から、これらの成分によるＩｇＥ抗体産生
抑制効果は、これらの成分の投与が抗原による感作の後
に開始されても、感作の前に開始された場合と同等であ
ることが分かる。このことは、これらの成分をＩｇＥ抗
体産生抑制剤として使用する上で極めて有利である。ま
た試験例５についての結果に見られるように、経口投与
によってもＩｇＥ抗体産生抑制効果が得られている。こ
のことはこれらの成分が、経口剤の形態でもＩｇＥ抗体
産生抑制剤として、従ってＩ型アレルギー予防又は治療
剤として使用し得ることを示している。

【００５９】〔試験例７〕抗原性試験試験例２及び３で使用したＢＤＦ１マウスの１群（５〜
６匹）から得た血清を、各試験例ごとに等量ずつ混合し
た。これらの血清の抗原性を、免疫学実験入門（学会出
版センター）１２５〜１２６頁記載されているPassive
Hemaggulutination 法（タンニン酸法）を用いて調べ
た。陽性対照として、８週齢の雄性ＢＤＦ１マウスに、
100 μｇの卵白アルブミンをアジュバントとしての水酸
化アルミニウム２ｍｇと混合して腹腔内注射して感作
し、９日後に採血した血清を用いた。また陰性対照につ
いては、卵白アルブミンの代わりにリン酸緩衝食塩水を
用いて同様に操作して得た血清を用いた。次の表に結果
を示す。

【００６０】

【表７】

【００６１】表７に示す通り、上記クレブシエラ属細菌
の莢膜成分及びそのフラグメント化生成物には抗原性は
認められなかった。従ってこの面においても本発明のＩ
ｇＥ産生抑制剤は安全性が高いと考えられる。

【００６２】

【発明の効果】以上の通り、本発明の、クレブシエラ属
細菌の莢膜成分又はそのフラグメント化による生成物
は、ヒトを含む哺乳類におけるＩｇＥ抗体産生を抑制す
るために使用することができる。また本発明は、これら
の成分を含有するＩｇＥ抗体産生抑制剤を、従って、Ｉ
型アレルギーの予防・治療剤を提供することができる。

フロントページの続き (72)発明者杉原良介大阪市大正区船町１丁目３番47号テイカ株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】クレブシエラ・オキシトカ又はクレブシエ
ラ・ニューモニアの莢膜成分又はこれを酸、塩基若しく
は還元剤で処理することにより得ることのできる成分を
含有することを特徴とする、ＩｇＥ抗体産生抑制剤。
【請求項２】クレブシエラ・オキシトカ又はクレブシエ
ラ・ニューモニアの莢膜多糖類又はこれを酸、塩基若し
くは還元剤で処理することにより得ることのできるフラ
グメントを含有することを特徴とする、ＩｇＥ抗体産生
抑制剤。
【請求項３】該多糖類が構造【化１】〔式中、Ｌ−ＲｈａはＬ−ラムノース残基、Ｄ−Ｇａｌ
はＤ−ガラクトース残基、Ｄ−ＧｌｃはＤ−グルコース
残基、そしてＤ−ＧｌｃＵＡはＤ−グルクロン酸残基を
表し、小括弧内の数字はグリコシド結合の位置を示
す。〕を繰り返し単位として有し、かつ各構成単位であ
るこれらの単糖類残基の存在比（モル比）が、それらの
結合様式においても区別して、【化２】＝0.8 〜1.2 ：1.6 〜2.4 ：0.8 〜1.2 ：0.8 〜1.2 ：
0.8 〜1.2 の範囲にあることを特徴とする、請求項２の
ＩｇＥ抗体産生抑制剤。
【請求項４】請求項１乃至３の何れかのＩｇＥ抗体産生
抑制剤よりなる、Ｉ型アレルギー予防又は治療剤。
【請求項５】哺乳動物におけるＩｇＥ抗体産生を抑制す
るための、クレブシエラ・オキシトカ又はクレブシエラ
・ニューモニアの莢膜成分又はこれを酸、塩基若しくは
還元剤で処理することにより得ることのできる成分の使
用。
【請求項６】哺乳動物におけるＩｇＥ抗体産生を抑制す
るための、クレブシエラ・オキシトカ又はクレブシエラ
・ニューモニアの莢膜多糖類又はこれを酸、塩基若しく
は還元剤で処理することにより得ることのできるフラグ
メントの使用。
【請求項７】該多糖類が構造【化３】〔式中、Ｌ−ＲｈａはＬ−ラムノース残基、Ｄ−Ｇａｌ
はＤ−ガラクトース残基、Ｄ−ＧｌｃはＤ−グルコース
残基、そしてＤ−ＧｌｃＵＡはＤ−グルクロン酸残基を
表し、小括弧内の数字はグリコシド結合の位置を示
す。〕を繰り返し単位として有し、かつ各構成単位であ
るこれらの単糖類残基の存在比（モル比）が、それらの
結合様式においても区別して、【化４】＝0.8 〜1.2 ：1.6 〜2.4 ：0.8 〜1.2 ：0.8 〜1.2 ：
0.8 〜1.2 の範囲にあることを特徴とする、請求項６の
使用。