JPH10231247A - 生体内毒素型細菌性感染症治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＡＤＰ−リボシル化阻害作用に基づく新しい
生体内毒素型細菌性感染症治療剤を提供する。 【解決手段】 一般式 【化１】 （式中、Ｒはハロゲン原子）で示されるカルボスチリル
誘導体またはその塩を有効成分とする生体内毒素型細菌
性感染症治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ＡＤＰ−リボシル
化阻害剤、特に、毒素原性大腸菌、サルモネラ属、病原
性ビブリオ（コレラ菌、腸炎ビブリオ）、赤痢菌などに
代表される生体内毒素型細菌による感染症、なかんづく
腸管感染症の治療剤に関する。さらに詳しくは、一般式
（Ｉ）

【化２】 ［式中、Ｒはハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭
素原子またはヨウ素原子）を意味し、該カルボスチリル
骨格上の置換基の置換位置は３位または４位であり、ま
たカルボスチリル骨格の３位と４位間の結合は１重結合
または２重結合を示す］で示されるカルボスチリル誘導
体またはその塩、好ましくは、２−(４−クロルベンゾ
イルアミノ)−３−(２−キノロン−４−イル)プロピオ
ン酸またはその塩を有効成分とするＡＤＰ−リボシル化
阻害活性に基づく、生体内毒素型細菌性感染症治療剤に
関する。

【０００２】

【従来の技術】上記一般式（Ｉ）で示されるカルボスチ
リル誘導体およびその製法は特公昭６３−３５６２３号
公報に記載されており、それらが抗潰瘍剤として有用で
あることも知られている。さらに特開平３−７４３２９
号公報にはそれらの化合物が胃炎治療剤としても有用で
あることが記載されている。１９９０年のＷＨＯの統計
によれば、世界中の全死亡者の１／３は感染症によって
占められ、その中でも急性呼吸器感染症、下痢症、結核
の死亡者が最も多く、この３疾患で年間死亡者数が１０
００万人に達していると言われている。近年の国際交通
の増加と高速化により、人々の各国間の往来は益々頻繁
になってきている。それに伴って問題になるのは、人の
移動と共に広がる重大疾患の拡散である。特に発生頻度
の高い、旅行者下痢症と呼ばれる腸管感染症には、毒素
原性大腸菌、サルモネラ属、病原性ビブリオ菌（コレラ
菌、腸炎ビブリオ）、赤痢菌、カンピロバクター属菌な
どの感染性疾患が挙げられる。

【０００３】コレラはコレラ菌の感染によって生じる激
しい水様性の下痢を主体とする非常に死亡率の高い疾患
である。この水様性下痢の発症機構は次のように考えら
れている。 １．経口摂取されたコレラ菌が小腸粘膜に付着・定着 ２．ＣＴ（コレラトキシン）を産生 ３．ＣＴが腸管上皮細胞のアデニレートサイクラーゼを
活性化 ４．ｃＡＭＰを上昇させる ５．ｃＡＭＰ依存性のＣＩ−チャネル（ＣＦＴＲ）を介
してコレラの主症状である水様性下痢を引き起こす。 すなわち、コレラ毒素や百日咳毒素はＧ蛋白質（グアニ
ンヌクレオチド（ＧＴＰとＧＤＰ）を特異的に結合する
蛋白質）をＡＤＰ−リボシル化することによってその下
流にある情報伝達を阻害する毒素である（病態生理、１
４（３）、１８１−１８６（１９９５）、飯田哲也、余
明順、本田武司）。毒素による細胞応答は、受容体刺激
が促進性（Ｇｓ）ならびに抑制性ＧＴＰ結合蛋白質（Ｇ
ｉ）を介して、アデニル酸シクラーゼ活性をそれぞれ増
加、抑制する系で、数多くの受容体にみられる。この系
より細胞内サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）濃度が増減
し、ｃＡＭＰ依存性蛋白質リン酸化酵素（Ａ−キナー
ゼ）活性が変化し、機能蛋白質のリン酸化により導かれ
る。ＡＤＰ−リボシル化に利用されるＮＡＤは、ＡＤＰ
リボースとニコチンアミドが結合した構造をもつが、こ
のＡＤＰリボース部が蛋白質へ転移する反応をＡＤＰ−
リボシル化という。この反応はジフテリア毒素が触媒す
る反応として１９６８年に発見された。ジフテリア毒素
の標的蛋白質はＥＦ２（ペプチド鎖伸長因子）で、ＥＦ
２はＡＤＰ−リボシル化されると機能を失うので、リボ
ゾーム上でペプチド鎖の伸長が止まり細胞死に至る。

【０００４】コレラトキシンは典型的なＡ−Ｂ型毒素
で、活性を有するＡサブユニットと、レセプターへの結
合に関与するＢサブユニットからなる。Ａサブユニット
は２１.８ｋＤａのＡ１ペプチドと５.４ｋＤａのＡ２ペ
プチドがＳ−Ｓ結合したもので、一方のＢサブユニット
は１１.６ｋＤａでＡサブユニット１個に対してＢサブ
ユニット５個が結合している。コレラトキシンとしての
活性を発現するのはＡ１ペプチドであり、Ａ１ペプチド
とＡ２ペプチドのあいだのＳ−Ｓ結合の還元が必要であ
る。Ｂサブユニットが細胞膜上のＧＭ１ガングリオシド
をレセプターとして細胞に結合し、Ｂサブユニットを介
してＧＭ１に結合したＣＴが、エンドサイトーシス（en
docytosis）によって取り込まれる。コレラトキシンの
Ａ１ペプチドは三量体Ｇ蛋白質（Ｇｓ）のαサブユニッ
トをＡＤＰ−リボシル化し、このＡＤＰ−リボシル化さ
れたαサブユニットがエフェクターであるアデニレート
サイクラーゼを活性化する。コレラトキシン（Ａ１ペプ
チド）はＧｓのαサブユニットをＡＤＰ−リボシル化す
る（すなわち、Ａ１ペプチドはＮＡＤからＡＤＰリボー
ス基を切り出し、Ｇｓαの標的蛋白質に転移させるＡＤ
Ｐリボシルトランスフェラーゼ活性を有している）ので
あるが、このＣＴによるＧｓαのＡＤＰ−リボシル化
は、ＧｓαのＧＴＰａｓｅ活性を抑制するためアデニレ
ートサイクラーゼは活性化状態に維持され、その結果、
細胞内ｃＡＭＰ濃度が持続的に上昇する。このために、
腸管腔側細胞膜上のＮａ＋−Ｃｌ−共輸送系を介した水
分吸収が抑制されるとともに、Ｃｌ−チャネルを介した
Ｃｌ−イオンの分泌が促進され、総和として腸管腔への
過剰な体液分泌（下痢）が引き起こされる。従って、コ
レラ菌が産生するコレラトキシンの活性を阻害し、無毒
化することができれば、コレラの根本治療は可能になる
と考えられる。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】上記のような各種の毒
素型細菌性の腸管感染症疾患ではＡＤＰ−リボシル化が
関与しており、そのＡＤＰ−リボシルトランスフェラー
ゼを阻害することにより、かかる感染症の根本治療が可
能と考えられるため、そのようなＡＤＰ−リボシルトラ
ンスフェラーゼ阻害作用を有する薬物の開発が望まれて
いる。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記実情
に鑑み、ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ阻害作用
を有する薬物を見い出すべく種々研究を重ねた結果、前
記一般式（Ｉ）で示されるカルボスチリル誘導体、なか
んずく、２−(４−クロルベンゾイルアミノ)−３−(２
−キノロン−４−イル)プロピオン酸またはその塩が優
れたＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ阻害作用を有
し、生体内毒素型細菌性感染症の治療に有用であること
を見い出し、本発明を完成するに至った。しかして、本
発明は、前記一般式（Ｉ）で示されるカルボスチリル誘
導体、なかんずく２−（４−クロロベンゾイルアミノ）
−３−（２−キノロン−４−イル）プロピオン酸または
その塩を有効成分とする生体内毒素型細菌性感染症の治
療剤を提供するものである。本発明の生体内毒素型細菌
性感染症治療剤は、さらに前記一般式（Ｉ）で示される
カルボスチリル誘導体またはその塩と抗生物質を配合し
た配合剤の形態に調製することもできる。かかる配合剤
の形態に使用する抗生物質としては、例えばナフロキサ
シン、エノキサシン、オフロキサシン、シプロキサシ
ン、ロメフロキサシン、トスフロキサシン、スパフロキ
サシン、レボフロキサシン等のニューキノロン系抗生物
質；例えばテトラサイクリン、テトラサイクリンハイド
ロクロライド、テトラサイクリンメタホスファイト、オ
キシテトラサイクリンハイドロクロライド等のテトラサ
イクリン系抗生物質が例示できる。

【０００７】本発明の生体内毒素型細菌性感染症治療剤
は、前記一般式（Ｉ）で示されるカルボスチリル誘導体
またはその塩を、所望により上記抗生物質と共に、一般
的な医薬製剤の形態に調製される。そのような製剤は通
常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊
剤、表面活性剤、滑沢剤などの希釈剤あるいは賦形剤を
用いて調製される。この医薬製剤としては各種の形態が
治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとして錠
剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセ
ル剤、坐剤、注射剤(液剤、乳剤、懸濁剤等)、シロップ
剤などが挙げられる。また、樹脂などに配合して徐放性
を高めて使用することもできる。

【０００８】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプ
ン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ
酸などの賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シ
ロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カル
ボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロー
ス、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合
剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン
末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウ
ム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、
ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリ
ド、デンプン、乳糖などの崩壊剤、白糖、ステアリン、
カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤、第四級ア
ンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促
進剤、グリセリン、デンプンなどの保湿剤、デンプン、
乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸など
の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポ
リエチレングリコールなどの滑沢剤などが例示できる。
さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例え
ば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーテ
ィング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。

【０００９】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例え
ば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物
油、カオリン、タルクなどの賦形剤、アラビアゴム末、
トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤、ラ
ミナラン、カンテンなどの崩壊剤などが例示できる。坐
剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知の
ものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、
カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル
類、ゼラチン、半合成グリセライドなどを挙げることが
できる。

【００１０】注射剤として調製される場合には、液剤、
乳剤または懸濁剤として調製され、それらは、通常、殺
菌され、かつ血液と等張であるのが好ましい。これら液
剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形するのに際しては、
希釈剤としてこの分野において慣用されているものをす
べて使用でき、例えば水、エチルアルコール、プロピレ
ングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、
ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル類などを挙げることが
できる。なお、この場合等張性の溶液を調製するに充分
な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを該治療剤中
に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝
剤、無痛化剤などを、更に必要に応じて着色剤、保存
剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を該治療剤
中に含有せしめてもよい。

【００１１】本発明の薬剤に含有されるべきカルボスチ
リル誘導体（Ｉ）またはその塩の量はとくに限定されず
広範囲に選択されるが、通常全組成物中１〜７０重量
％、好ましくは５〜５０重量％である。本発明の薬剤の
投与方法は特定の治療目的のために特に選択される場合
の他はとくに制限はなく、各種製剤形態、患者の年令、
性別その他の条件、疾患の程度などに応じた方法で投与
される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒
剤、シロップ剤およびカプセル剤の場合には経口投与さ
れる。また注射剤の場合には単独であるいはブドウ糖、
アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与され、
さらには必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしく
は腹腔内投与される。坐剤の場合には直腸内投与され
る。

【００１２】本発明の薬剤の投与量は用法、患者の年
令、性別その他の条件、疾患の程度などにより適宜選択
されるが、通常カルボスチリル誘導体（Ｉ）またはその
塩の量は１日当り体重１kg当り０．６〜５０mgとするの
がよい、また、投与単位形態中に有効成分を１０〜１０
００mg含有せしめるのがよい。

【００１３】

【発明の効果】本発明の化合物は、ＡＤＰ−リボシルト
ランスフェラーゼを阻害し、蛋白がＡＤＰ−リボシル化
されることによっておこる各種の病的症状を改善するこ
とができる。具体的には、たとえば、毒素原生大腸菌、
サルモネラ属、病原性ビブリオ菌（コレラ菌、腸炎ビブ
リオ）、赤痢菌、カンピロバクター属菌等の生体内毒素
型細菌による腸管感染症の下痢症状等の改善等が挙げら
れる。

【００１４】

【実施例】つぎに、製剤例および薬理試験を挙げて本発
明の薬剤をさらに具体的に説明する。

【００１５】製剤例１ ２−(４−クロルベンゾイルアミノ)−３−(２−キノロン− ４−イル)プロピオン酸 １５０g アビセル(商標名、旭化成(株)製) ４０g コーンスターチ ３０g ステアリン酸マグネシウム ２g ヒドロキシプロピルメチルセルロース １０g ポリエチレングリコール−６０００ ３g ヒマシ油 ４０g メタノール ４０g 本発明化合物、アビセル、コーンスターチおよびステア
リン酸マグネシウムを混合研磨後、糖衣Ｒ１０mmのキネ
で打錠する。得られた錠剤をヒドロキシプロピルメチル
セルロース、ポリエチレングリコール−６０００、ヒマ
シ油およびメタノールからなるフィルムコーティング剤
で被覆を行ないフィルムコーティング錠を製造する。

【００１６】製剤例２ ２−(４−クロルベンゾイルアミノ)−３−(２−キノロン− ４−イル)プロピオン酸 １５０g クエン酸 １.０g ラクトース ３３.５g リン酸二カルシウム ７０.０g プルロニックＦ−６８ ３０.０g ラウリル硫酸ナトリウム １５.０g ポリビニルピロリドン １５.０g ポリエチレングリコール(カルボワックス１５００) ４.５g ポリエチレングリコール(カルボワックス６０００) ４５.０g コーンスターチ ３０.０g 乾燥ラウリル硫酸ナトリウム ３.０g 乾燥ステアリン酸マグネシウム ３.０g エタノール 適 量

【００１７】本発明化合物、クエン酸、ラクトース、リ
ン酸二カルシウム、プルロニックＦ−６８およびラウリ
ル硫酸ナトリウムを混合する。上記混合物をＮo．６０
スクリーンでふるい、ポリビニルピロリドン、カルボワ
ックス１５００および６０００を含むアルコール性溶液
で湿式粒状化する。必要に応じてアルコールを添加して
粉末をペースト状塊にする。コーンスターチを添加し、
均一な粒子が形成されるまで混合を続ける。Ｎo.１０ス
クリーンを通過させ、トレイに入れ１００℃のオーブン
で１２〜１４時間乾燥する。乾燥粒子をＮo.１６スクリ
ーンでふるい、乾燥ラウリル硫酸ナトリウムおよび乾燥
ステアリン酸マグネシウムを加え混合し、打錠機で所望
の形状に圧縮する。上記の芯部をワニスで処理し、タル
クを散布し湿気の吸収を防止する。芯部の周囲に下塗り
層を被覆する。内服用のために十分な回数のワニス被覆
を行う。錠剤を完全に丸くかつ滑かにするためにさらに
下塗層および平滑被覆が適用される。所望の色合が得ら
れるまで着色被覆を行う。乾燥後、被覆錠剤を磨いて均
一な光沢の錠剤にする。

【００１８】製剤例３ ２−(４−クロルベンゾイルアミノ)−３−(２−キノロン− ４−イル)プロピオン酸 ５g ポリエチレングリコール(分子量:４０００) ０.３g 塩化ナトリウム ０.９g ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート ０.４g メタ重亜硫酸ナトリウム ０.１g メチル−パラベン ０.１８g プロピル−パラベン ０.０２ｇ 注射用蒸留水 １０．０ml

【００１９】上記パラベン類、メタ重亜硫酸ナトリウム
および塩化ナトリウムを撹拌しながら８０℃で上記の約
半量の蒸留水に溶解する。得られた溶液を４０℃まで冷
却し、本発明化合物、つぎにポリエチレングリコールお
よびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートをそ
の溶液中に溶解する。次にその溶液に注射用蒸留水を加
えて最終の容量に調製し、適当なフィルターペーパーを
用いて滅菌濾過することにより滅菌して、注射剤を調製
する。

【００２０】［薬理試験］ アグマチンアッセイ アグマチンアッセイは、野田らの報告した方法（Kato
I., Noda M.; ADP-ribosylation of cell membrane pro
teins by staphylococcal α-toxin and leukocidin in
rabbit erythrocytes and polymorophonuclear leukoc
ytes; EFBS Lett., 1989, 281, 185-190）を用いておこ
なった。すなわち、５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７.５）〔５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１００μＭ グアノ
シン−３−リン酸（ＧＴＰ）、１００μＭ［アデニン−
¹⁴Ｃ］ＮＡＤ（６００００ｃｐｍ）、２０ｍＭ ジチオ
スレイトール（ＤＴＴ）、２０ｍＭアグマチンおよび卵
白アルブミン（０.１ｍｇ／ｍｌ）を含有〕に１μｇの
コレラトキシンＡサブユニット（ＣＴＡ）および被検試
料を混合し（全量３００μｌ）、３０℃で３時間作用さ
せた。この反応液から５０μｌ採取し、０.５×２ｃｍ
のカラムにつめたダウエック（Dowec）ＡＧ１−Ｘ２
（バイオラド社製）に通して未反応の［アデニン−
¹⁴Ｃ］ＮＡＤを除き、形成される［アデニン−¹⁴Ｃ］Ａ
ＤＰ−リボシル化アグマチンのカウントを測定した、こ
の［アデニン−¹⁴Ｃ］ＡＤＰ−リボシル化アグマチンの
形成を指標に、被検試料によるＡＤＰ−リボシルトラン
スフェラーゼ活性の阻害率を求めた。上記試験におい
て、試験化合物として本発明化合物の２−（４−クロロ
ベンゾイルアミノ）−３−（２−キノロン−４−イル）
プロピオン酸を用い、上記反応系に０〜５.０ｍＭ水溶
液として添加、反応させた。また対照として蒸留水を用
いた。試験化合物のＡＤＰ−リボシルトランスフェラー
ゼ活性は、対照の値を１００％として算出した相対活性
で示した。その結果を表１に示す。その結果から明らか
なように、本発明化合物はＡＤＰ−リボシルトランスフ
ェラーゼ阻害作用を有する。

【００２１】

【表１】 試験化合物濃度（ｍＭ） 相対活性（％）±ＳＤ ０ １００ ±３.６ ０.２ ９８.８±８.６ ０.５ ９２.７±３.３ １.０ ９１.６±１.９ ２.０ ７０.１±２.３ ５.０ １６.５±０.２

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 ［式中、Ｒはハロゲン原子を意味し、該カルボスチリル
   骨格上の置換基の置換位置は３位または４位であり、ま
   たカルボスチリル骨格の３位と４位間の結合は１重結合
   または２重結合を示す］で示されるカルボスチリル誘導
   体またはその塩を有効成分とする生体内毒素型細菌性感
   染症治療剤。
2. 【請求項２】 有効成分が２−(４−クロルベンゾイル
   アミノ)−３−(２−キノロン−４−イル)プロピオン酸
   またはその塩である請求項１に記載の生体内毒素型細菌
   性感染症治療剤。
3. 【請求項３】 該感染症が生体内毒素型細菌性腸管感染
   症である請求項２に記載の治療剤。
4. 【請求項４】 ２−（４−クロロベンゾイルアミノ）−
   ３−（２−キノロン−４−イル）プロピオン酸またはそ
   の塩および抗生物質を有効成分とする生体内毒素型細菌
   性腸管感染症治療剤。