JPH10232205A - 亜鉛イオン測定方法及び測定試薬 - Google Patents
亜鉛イオン測定方法及び測定試薬Info
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- JPH10232205A JPH10232205A JP9052489A JP5248997A JPH10232205A JP H10232205 A JPH10232205 A JP H10232205A JP 9052489 A JP9052489 A JP 9052489A JP 5248997 A JP5248997 A JP 5248997A JP H10232205 A JPH10232205 A JP H10232205A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 室温下でも短時間で測定可能な、試料中の亜
鉛イオン濃度の測定方法及び測定試薬の提供。 【解決手段】 水溶性ポルフィリン化合物及びプリン骨
格又はピリミジン骨格を有する化合物を含む、試料中の
亜鉛イオンの測定試薬及びこれを用いた測定方法。
鉛イオン濃度の測定方法及び測定試薬の提供。 【解決手段】 水溶性ポルフィリン化合物及びプリン骨
格又はピリミジン骨格を有する化合物を含む、試料中の
亜鉛イオンの測定試薬及びこれを用いた測定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、亜鉛イオンを含む
試料に水溶性ポルフィリン化合物及びプリン骨格又はピ
リミジン骨格を有する化合物を添加し、形成された亜鉛
ポルフィリン錯体を測定することにより、試料中の亜鉛
イオンを測定する測定方法及び測定試薬に関し、短時間
で正確に測定が行える測定方法及び測定試薬であり、臨
床検査分野及び分析化学分野において特に重要である。
試料に水溶性ポルフィリン化合物及びプリン骨格又はピ
リミジン骨格を有する化合物を添加し、形成された亜鉛
ポルフィリン錯体を測定することにより、試料中の亜鉛
イオンを測定する測定方法及び測定試薬に関し、短時間
で正確に測定が行える測定方法及び測定試薬であり、臨
床検査分野及び分析化学分野において特に重要である。
【０００２】
【従来の技術】亜鉛イオンは、生体内の酸化還元に直接
関与し、体内物質の代謝、ＤＮＡの合成、またそれにつ
づくタンパク質の合成に深く関与して、生命の維持に重
要な役割を果たしている。また亜鉛イオンは、タンパク
質と結合して、糖尿病、癌、動脈硬化等の発症に関与す
る活性酸素種を消去し生体を防御する働きを担ってい
る。
関与し、体内物質の代謝、ＤＮＡの合成、またそれにつ
づくタンパク質の合成に深く関与して、生命の維持に重
要な役割を果たしている。また亜鉛イオンは、タンパク
質と結合して、糖尿病、癌、動脈硬化等の発症に関与す
る活性酸素種を消去し生体を防御する働きを担ってい
る。
【０００３】乳幼児の静脈栄養投与期の亜鉛イオン等の
微量元素の欠乏及び、また最近は、超極小未熟児におけ
る亜鉛イオンの欠乏が注目されている。
微量元素の欠乏及び、また最近は、超極小未熟児におけ
る亜鉛イオンの欠乏が注目されている。
【０００４】微量の亜鉛イオンの測定には主に原子吸光
装置が用いられてきた。しかしながら、この方法は、下
記の欠点を有する。 原子吸光装置は、大変高価であり、またその設置に
は広いスペースと、配管や換気装置が必要であり、設置
場所が制限される。 血清等の生体試料中の亜鉛イオンを原子吸光装置に
より測定するときは、生体試料中に含まれる種々の物質
（マトリックス）の影響を受けて、測定値に誤差が生じ
る場合がある。 原子吸光装置による測定は、電力消費量が非常に大
きいので、ランニングコストがかさむ。
装置が用いられてきた。しかしながら、この方法は、下
記の欠点を有する。 原子吸光装置は、大変高価であり、またその設置に
は広いスペースと、配管や換気装置が必要であり、設置
場所が制限される。 血清等の生体試料中の亜鉛イオンを原子吸光装置に
より測定するときは、生体試料中に含まれる種々の物質
（マトリックス）の影響を受けて、測定値に誤差が生じ
る場合がある。 原子吸光装置による測定は、電力消費量が非常に大
きいので、ランニングコストがかさむ。
【０００５】そのために、より高感度な測定方法とし
て、水溶性ポルフィリン化合物と錯体を形成させ、この
亜鉛ポルフィリン錯体を測定することにより試料中の亜
鉛イオンを測定する方法が開発された。この方法は、亜
鉛イオンと水溶性ポルフィリン化合物を混合し反応さ
せ、形成された亜鉛ポルフィリン錯体の吸光（例えば、
吸光度）又は蛍光（例えば、蛍光強度）を測定すること
により試料中の亜鉛イオンを測定するというものであ
る。この際、形成した亜鉛ポルフィリン錯体と未反応の
水溶性ポルフィリン化合物を分離するため、高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の分離方法も併用され
ている〔五十嵐，「超高感度分析試薬としてのポルフィ
リン」，BUNSEKI KAGAKU，４６巻，１〜２３頁，１９９
７年発行、田端，「金属ポルフィリンの生成反応機構−
触媒反応からの考察−」，Dojin News，４５号，３〜８
頁，１９８８年発行〕。
て、水溶性ポルフィリン化合物と錯体を形成させ、この
亜鉛ポルフィリン錯体を測定することにより試料中の亜
鉛イオンを測定する方法が開発された。この方法は、亜
鉛イオンと水溶性ポルフィリン化合物を混合し反応さ
せ、形成された亜鉛ポルフィリン錯体の吸光（例えば、
吸光度）又は蛍光（例えば、蛍光強度）を測定すること
により試料中の亜鉛イオンを測定するというものであ
る。この際、形成した亜鉛ポルフィリン錯体と未反応の
水溶性ポルフィリン化合物を分離するため、高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の分離方法も併用され
ている〔五十嵐，「超高感度分析試薬としてのポルフィ
リン」，BUNSEKI KAGAKU，４６巻，１〜２３頁，１９９
７年発行、田端，「金属ポルフィリンの生成反応機構−
触媒反応からの考察−」，Dojin News，４５号，３〜８
頁，１９８８年発行〕。
【０００６】しかしながら、この水溶性ポルフィリン化
合物を使用する測定方法は、測定感度は高いものの、亜
鉛イオンと水溶性ポルフィリン化合物の錯体形成に時間
がかかり、例えば、室温下では１時間以上もかかり、臨
床検査、食品分析又は環境分析等の現場において日常の
分析手法として採用しうるものではなかった。また、水
銀及びピリジン、又はカドミウムと水溶性ポルフィリン
化合物との錯体を予め形成させて、試料中の亜鉛イオン
を短時間のうちに測定する方法も開発されたが、これら
の方法は毒性の高い物質を使用しなければならないの
で、測定者の健康上及び環境上好ましいものではなかっ
た。
合物を使用する測定方法は、測定感度は高いものの、亜
鉛イオンと水溶性ポルフィリン化合物の錯体形成に時間
がかかり、例えば、室温下では１時間以上もかかり、臨
床検査、食品分析又は環境分析等の現場において日常の
分析手法として採用しうるものではなかった。また、水
銀及びピリジン、又はカドミウムと水溶性ポルフィリン
化合物との錯体を予め形成させて、試料中の亜鉛イオン
を短時間のうちに測定する方法も開発されたが、これら
の方法は毒性の高い物質を使用しなければならないの
で、測定者の健康上及び環境上好ましいものではなかっ
た。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記のよう
な従来の試料中の亜鉛イオンの測定方法における問題点
を解決するために創案されたものであり、室温下にお
いても短時間で測定が行え、生体試料等の種々の物質
（マトリックス）を含む試料においても妨害を受けるこ
となく低濃度まで高感度に測定でき、有害な物質を使
用することなく測定が行え、特殊な装置を必要とせず
汎用されている装置で測定を行うことができ、簡便な
操作で正確に測定を行うことができる、試料中の亜鉛イ
オンの測定方法及び測定試薬を提供することを目的とす
る。
な従来の試料中の亜鉛イオンの測定方法における問題点
を解決するために創案されたものであり、室温下にお
いても短時間で測定が行え、生体試料等の種々の物質
（マトリックス）を含む試料においても妨害を受けるこ
となく低濃度まで高感度に測定でき、有害な物質を使
用することなく測定が行え、特殊な装置を必要とせず
汎用されている装置で測定を行うことができ、簡便な
操作で正確に測定を行うことができる、試料中の亜鉛イ
オンの測定方法及び測定試薬を提供することを目的とす
る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、亜鉛イオンを
含む試料に水溶性ポルフィリン化合物を添加して、形成
された亜鉛ポルフィリン錯体を測定することにより試料
中の亜鉛イオンを測定する方法において、亜鉛ポルフィ
リン錯体形成時にプリン骨格又はピリミジン骨格を有す
る化合物を共存させる、試料中の亜鉛イオンの測定方法
である。また、本発明は、水溶性ポルフィリン化合物及
びプリン骨格又はピリミジン骨格を有する化合物を含
む、試料中の亜鉛イオンの測定試薬である。
含む試料に水溶性ポルフィリン化合物を添加して、形成
された亜鉛ポルフィリン錯体を測定することにより試料
中の亜鉛イオンを測定する方法において、亜鉛ポルフィ
リン錯体形成時にプリン骨格又はピリミジン骨格を有す
る化合物を共存させる、試料中の亜鉛イオンの測定方法
である。また、本発明は、水溶性ポルフィリン化合物及
びプリン骨格又はピリミジン骨格を有する化合物を含
む、試料中の亜鉛イオンの測定試薬である。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の測定方法で用いられ、本
発明の測定試薬中に含まれる水溶性ポルフィリン化合物
は、試料中の亜鉛イオンと結合して亜鉛ポルフィリン錯
体を形成するものであれば特に限定されない。好ましい
ものとして、α，β，γ，δ−テトラキス（４−カルボ
キシフェニル）ポルフィン〔α，β，γ，δ-Tetrakis
(4-Carboxyphenyl)Porphine；ＴＣＰＰ〕、α，β，
γ，δ−テトラキス（４−スルホフェニル）ポルフィン
〔α，β，γ，δ-Tetrakis(4-Sulfophenyl)Porphine；
ＴＰＰＳ若しくはＴＰＰＳ4 〕、又はα，β，γ，δ−
テトラフェニルポルフィントリスルホン酸〔α，β，
γ，δ-Tetraphenylporphinetrisulfonic acid；ＴＰＰ
Ｓ3〕等が挙げられる。
発明の測定試薬中に含まれる水溶性ポルフィリン化合物
は、試料中の亜鉛イオンと結合して亜鉛ポルフィリン錯
体を形成するものであれば特に限定されない。好ましい
ものとして、α，β，γ，δ−テトラキス（４−カルボ
キシフェニル）ポルフィン〔α，β，γ，δ-Tetrakis
(4-Carboxyphenyl)Porphine；ＴＣＰＰ〕、α，β，
γ，δ−テトラキス（４−スルホフェニル）ポルフィン
〔α，β，γ，δ-Tetrakis(4-Sulfophenyl)Porphine；
ＴＰＰＳ若しくはＴＰＰＳ4 〕、又はα，β，γ，δ−
テトラフェニルポルフィントリスルホン酸〔α，β，
γ，δ-Tetraphenylporphinetrisulfonic acid；ＴＰＰ
Ｓ3〕等が挙げられる。
【００１０】本発明の測定方法で用いられ、本発明の測
定試薬中に含まれるプリン骨格又はピリミジン骨格を有
する化合物は特に限定されないが、好ましくは、核酸塩
基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシ
ル）、ヌクレオシド（例えば、アデノシン、グアノシ
ン、シチジン、チミジン、ウリジン、デオキシシチジ
ン）、尿酸、ヒポキサンチン、キサンチン、カフェイ
ン、テオブロミン、テオフィリン、オロト酸、チオウラ
シル、アロキサン、キサントシン、ワイオシン、ゼアト
シン及びイノシン等が挙げられる。
定試薬中に含まれるプリン骨格又はピリミジン骨格を有
する化合物は特に限定されないが、好ましくは、核酸塩
基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシ
ル）、ヌクレオシド（例えば、アデノシン、グアノシ
ン、シチジン、チミジン、ウリジン、デオキシシチジ
ン）、尿酸、ヒポキサンチン、キサンチン、カフェイ
ン、テオブロミン、テオフィリン、オロト酸、チオウラ
シル、アロキサン、キサントシン、ワイオシン、ゼアト
シン及びイノシン等が挙げられる。
【００１１】亜鉛イオンと水溶性ポルフィリン化合物の
錯体形成時に、プリン骨格又はピリミジン骨格を有する
化合物を共存させることにより、亜鉛ポルフィリン錯体
の形成反応が加速、促進される。この機構は現在のとこ
ろ定かではないが、試料中の亜鉛イオンがプリン骨格又
はピリミジン骨格を有する化合物に一旦配位結合し、こ
の亜鉛イオンを配位したプリン骨格又はピリミジン骨格
を有する化合物がパイ電子相互作用により水溶性ポルフ
ィリン化合物のポルフィリン環の表面に接近し、そして
亜鉛イオンをプリン骨格又はピリミジン骨格を有する化
合物から水溶性ポルフィリン化合物に受け渡すという機
構をとることにより、亜鉛ポルフィリン錯体の形成反応
が加速、促進されているのではないかと推察される。
錯体形成時に、プリン骨格又はピリミジン骨格を有する
化合物を共存させることにより、亜鉛ポルフィリン錯体
の形成反応が加速、促進される。この機構は現在のとこ
ろ定かではないが、試料中の亜鉛イオンがプリン骨格又
はピリミジン骨格を有する化合物に一旦配位結合し、こ
の亜鉛イオンを配位したプリン骨格又はピリミジン骨格
を有する化合物がパイ電子相互作用により水溶性ポルフ
ィリン化合物のポルフィリン環の表面に接近し、そして
亜鉛イオンをプリン骨格又はピリミジン骨格を有する化
合物から水溶性ポルフィリン化合物に受け渡すという機
構をとることにより、亜鉛ポルフィリン錯体の形成反応
が加速、促進されているのではないかと推察される。
【００１２】次に、試料中の亜鉛イオン濃度を測定する
手順について説明する。
手順について説明する。
【００１３】錯体形成反応工程 本発明により分析可能な試料は特に限定されず、場合に
より希釈又は濃縮して用いる。例えば、生体試料（血
液、血清、血漿、尿、髄液、精液、唾液、涙などの体
液、脳、肝臓、腎臓などの臓器の抽出液、毛髪、爪、皮
膚などの組織の抽出液、糞便）、食品（穀物、野菜、果
物、魚介類、加工食品）、飲料（水、茶、牛乳、果汁な
ど）及び環境分析用試料（飲料水、河川水、湖沼水、海
水、土壌など）などが挙げられる。上記試料（又は希釈
試料）に水溶性ポルフィリン化合物を添加し、同時にあ
るいは次いでプリン骨格又はピリミジン骨格を有する化
合物を添加し、混合する。
より希釈又は濃縮して用いる。例えば、生体試料（血
液、血清、血漿、尿、髄液、精液、唾液、涙などの体
液、脳、肝臓、腎臓などの臓器の抽出液、毛髪、爪、皮
膚などの組織の抽出液、糞便）、食品（穀物、野菜、果
物、魚介類、加工食品）、飲料（水、茶、牛乳、果汁な
ど）及び環境分析用試料（飲料水、河川水、湖沼水、海
水、土壌など）などが挙げられる。上記試料（又は希釈
試料）に水溶性ポルフィリン化合物を添加し、同時にあ
るいは次いでプリン骨格又はピリミジン骨格を有する化
合物を添加し、混合する。
【００１４】水溶性ポルフィリン化合物の反応混液中に
おける濃度は、反応混液中における試料由来の亜鉛イオ
ンの濃度の当量以上であればよく、好ましくは１０倍当
量以上である。例えば、ヒト血清試料中の亜鉛イオン濃
度の基準的な範囲は、１００ppb 〜１ppm 、つまり、
１．５μM 〜１５μM である。このような試料を蒸留水
で１０倍に希釈した血清試料５０μl を反応混液量５０
０μl の反応系で錯体形成させる場合には、この反応混
液中における亜鉛イオンの濃度は通常１５nM〜１５０nM
となるので、水溶性ポルフィリン化合物の反応混液中に
おける濃度は１５０nM以上であればよく、好ましくは
１．５μM 以上である。また、このプリン骨格又はピリ
ミジン骨格を有する化合物の反応混液中における濃度
（共存させる濃度）も特に限定されないが、好ましくは
０．１mM〜２０mMの範囲である。その他、反応時間に関
しては、水溶性ポルフィリン化合物の種類に応じて適宜
選択すればよく、例えばＴＣＰＰを用いた場合には３０
分以上、ＴＰＰＳを用いた場合には１０分以上確保する
ことが好ましい。
おける濃度は、反応混液中における試料由来の亜鉛イオ
ンの濃度の当量以上であればよく、好ましくは１０倍当
量以上である。例えば、ヒト血清試料中の亜鉛イオン濃
度の基準的な範囲は、１００ppb 〜１ppm 、つまり、
１．５μM 〜１５μM である。このような試料を蒸留水
で１０倍に希釈した血清試料５０μl を反応混液量５０
０μl の反応系で錯体形成させる場合には、この反応混
液中における亜鉛イオンの濃度は通常１５nM〜１５０nM
となるので、水溶性ポルフィリン化合物の反応混液中に
おける濃度は１５０nM以上であればよく、好ましくは
１．５μM 以上である。また、このプリン骨格又はピリ
ミジン骨格を有する化合物の反応混液中における濃度
（共存させる濃度）も特に限定されないが、好ましくは
０．１mM〜２０mMの範囲である。その他、反応時間に関
しては、水溶性ポルフィリン化合物の種類に応じて適宜
選択すればよく、例えばＴＣＰＰを用いた場合には３０
分以上、ＴＰＰＳを用いた場合には１０分以上確保する
ことが好ましい。
【００１５】亜鉛ポルフィリン錯体と未反応の水溶性ポ
ルフィリン化合物の分離工程 一般に用いられるクロマトグラフィー手法を用いて分離
を行うことができる。例えば、高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）、オープンカラムによる液体クロマト
グラフィー、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、ペー
パークロマトグラフィー、電気泳動又はキャピラリー電
気泳動等が挙げられる。特に、ＨＰＬＣを用いて分離操
作を行う場合、逆相、順相又はイオン交換等のモードを
用いて行うことができる。この際、流速は、直径が４．
６mmの汎用の分析用カラムの場合は、１ml/min程度が適
当であり、直径が１．５mmのセミマイクロタイプの分析
用カラムの場合は、１００μl/min 程度が適当である。
ルフィリン化合物の分離工程 一般に用いられるクロマトグラフィー手法を用いて分離
を行うことができる。例えば、高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）、オープンカラムによる液体クロマト
グラフィー、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、ペー
パークロマトグラフィー、電気泳動又はキャピラリー電
気泳動等が挙げられる。特に、ＨＰＬＣを用いて分離操
作を行う場合、逆相、順相又はイオン交換等のモードを
用いて行うことができる。この際、流速は、直径が４．
６mmの汎用の分析用カラムの場合は、１ml/min程度が適
当であり、直径が１．５mmのセミマイクロタイプの分析
用カラムの場合は、１００μl/min 程度が適当である。
【００１６】亜鉛ポルフィリン錯体の測定工程 試料中の亜鉛イオン濃度は、亜鉛ポルフィリン錯体の吸
光（例えば、吸光度）又は蛍光（例えば、蛍光強度）等
を測定することにより決定される。亜鉛ポルフィリン錯
体の測定においては、亜鉛ポルフィリン錯体の蛍光を測
定する方が、亜鉛ポルフィリン錯体の吸光を測定するよ
りも１０〜１００倍高感度である。亜鉛ポルフィリン錯
体の蛍光を測定する場合、励起波長及び輻射波長は水溶
性ポルフィリン化合物の種類に応じて適当な波長を選択
すればよい。例えば、ＴＣＰＰ及びＴＰＰＳのいずれの
場合も、励起波長４２２nm、輻射波長６０６nmを用いる
ことができる。亜鉛ポルフィリン錯体の吸光を測定する
場合、波長は水溶性ポルフィリン化合物の種類に応じて
適当な波長を選択すればよいが、非常に大きな分子吸光
係数を示すソーレー帯（Soret band）と呼ばれる４００
nm近辺の波長を用いると、得られる吸光が高くなるので
有利である。例えば、ＴＣＰＰの場合は４２９nm、ＴＰ
ＰＳの場合は４２０nmで吸光を測定する。
光（例えば、吸光度）又は蛍光（例えば、蛍光強度）等
を測定することにより決定される。亜鉛ポルフィリン錯
体の測定においては、亜鉛ポルフィリン錯体の蛍光を測
定する方が、亜鉛ポルフィリン錯体の吸光を測定するよ
りも１０〜１００倍高感度である。亜鉛ポルフィリン錯
体の蛍光を測定する場合、励起波長及び輻射波長は水溶
性ポルフィリン化合物の種類に応じて適当な波長を選択
すればよい。例えば、ＴＣＰＰ及びＴＰＰＳのいずれの
場合も、励起波長４２２nm、輻射波長６０６nmを用いる
ことができる。亜鉛ポルフィリン錯体の吸光を測定する
場合、波長は水溶性ポルフィリン化合物の種類に応じて
適当な波長を選択すればよいが、非常に大きな分子吸光
係数を示すソーレー帯（Soret band）と呼ばれる４００
nm近辺の波長を用いると、得られる吸光が高くなるので
有利である。例えば、ＴＣＰＰの場合は４２９nm、ＴＰ
ＰＳの場合は４２０nmで吸光を測定する。
【００１７】
【発明の効果】本発明の試料中の亜鉛イオンの測定方法
及び測定試薬によれば、1.室温下においても短時間で測
定ができ、2.生体試料等の種々の物質（マトリックス）
を含む試料においても妨害を受けることなく低濃度(ppb
レベル）まで高感度に測定でき、3.有害な物質を使用す
ることなく測定でき、4.特殊な装置を必要とせず汎用さ
れている装置で測定でき、5.簡便な操作で正確に測定で
きる。
及び測定試薬によれば、1.室温下においても短時間で測
定ができ、2.生体試料等の種々の物質（マトリックス）
を含む試料においても妨害を受けることなく低濃度(ppb
レベル）まで高感度に測定でき、3.有害な物質を使用す
ることなく測定でき、4.特殊な装置を必要とせず汎用さ
れている装置で測定でき、5.簡便な操作で正確に測定で
きる。
【００１８】
【実施例】１．蛍光測定（ＴＣＰＰの使用例） ｉ）血清試料 １．８ppm の亜鉛イオンを含む血清試料について、図１
に示す手順により亜鉛ポルフィリン錯体形成反応を行わ
せ、そして表１に示す設定条件下で、ＨＰＬＣにより亜
鉛ポルフィリン錯体の分離及び測定を行い血清試料中の
亜鉛イオンを測定した。なお、プリン骨格又はピリミジ
ン骨格を有する化合物（反応促進剤）としてアデニンを
用いた。
に示す手順により亜鉛ポルフィリン錯体形成反応を行わ
せ、そして表１に示す設定条件下で、ＨＰＬＣにより亜
鉛ポルフィリン錯体の分離及び測定を行い血清試料中の
亜鉛イオンを測定した。なお、プリン骨格又はピリミジ
ン骨格を有する化合物（反応促進剤）としてアデニンを
用いた。
【００１９】
【表１】
【００２０】このクロマトグラムを図２（ａ）に示し
た。
た。
【００２１】ii）標準液試料 原子吸光測定用亜鉛イオン標準液（１，０００ppm)〔関
東化学社製〕を０．０１M 硝酸で希釈した、１．０ppm
の亜鉛イオンを含む標準液試料を、血清試料の代わりに
使用した以外は、上記ｉ）と同じ手順で試料中の亜鉛イ
オンを測定した。このクロマトグラムを図２（ｂ）に示
した。
東化学社製〕を０．０１M 硝酸で希釈した、１．０ppm
の亜鉛イオンを含む標準液試料を、血清試料の代わりに
使用した以外は、上記ｉ）と同じ手順で試料中の亜鉛イ
オンを測定した。このクロマトグラムを図２（ｂ）に示
した。
【００２２】iii)試薬ブランク ０．０１M 硝酸を、血清試料の代わりに使用した以外
は、上記ｉ）と同じ手順で測定を行った。このクロマト
グラムを図２（ｃ）に示した。
は、上記ｉ）と同じ手順で測定を行った。このクロマト
グラムを図２（ｃ）に示した。
【００２３】２．吸光測定 （１）ＴＰＰＳの使用例 ｉ）標準液試料 原子吸光測定用亜鉛イオン標準液（１，０００ppm)〔関
東化学社製〕を０．０１M 硝酸で希釈して、１．０ppm
の亜鉛イオンを含む標準液試料を調製した。この標準液
試料を図３に示す手順により亜鉛ポルフィリン錯体形成
反応を行わせ、そして表１に示す設定条件下で、ＨＰＬ
Ｃにより亜鉛ポルフィリン錯体の分離及び測定を行い標
準液試料中の亜鉛イオンを測定した。なお、プリン骨格
又はピリミジン骨格を有する化合物（反応促進剤）とし
てアデニンを用いた。このクロマトグラムを図４（ａ）
に示した。
東化学社製〕を０．０１M 硝酸で希釈して、１．０ppm
の亜鉛イオンを含む標準液試料を調製した。この標準液
試料を図３に示す手順により亜鉛ポルフィリン錯体形成
反応を行わせ、そして表１に示す設定条件下で、ＨＰＬ
Ｃにより亜鉛ポルフィリン錯体の分離及び測定を行い標
準液試料中の亜鉛イオンを測定した。なお、プリン骨格
又はピリミジン骨格を有する化合物（反応促進剤）とし
てアデニンを用いた。このクロマトグラムを図４（ａ）
に示した。
【００２４】ii）試薬ブランク ０．０１M 硝酸を、標準液試料の代わりに使用した以外
は、上記２．（１）ｉ）と同じ手順で測定を行った。ク
ロマトグラムを図４（ｂ）に示した。
は、上記２．（１）ｉ）と同じ手順で測定を行った。ク
ロマトグラムを図４（ｂ）に示した。
【００２５】（２）ＴＣＰＰの使用例 ｉ）標準液試料 原子吸光測定用亜鉛イオン標準液（１，０００ppm)〔関
東化学社製〕を０．０１M 硝酸で希釈して、１．０ppm
の亜鉛イオンを含む標準液試料を調製した。この標準液
試料を図５に示す手順により亜鉛ポルフィリン錯体形成
反応を行わせ、そして表１に示す設定条件下で、ＨＰＬ
Ｃにより亜鉛ポルフィリン錯体の分離及び測定を行い、
標準液試料中の亜鉛イオンを測定した。なお、プリン骨
格又はピリミジン骨格を有する化合物（反応促進剤）と
してアデニンを用いた。このクロマトグラムを図６
（ａ）に示した。
東化学社製〕を０．０１M 硝酸で希釈して、１．０ppm
の亜鉛イオンを含む標準液試料を調製した。この標準液
試料を図５に示す手順により亜鉛ポルフィリン錯体形成
反応を行わせ、そして表１に示す設定条件下で、ＨＰＬ
Ｃにより亜鉛ポルフィリン錯体の分離及び測定を行い、
標準液試料中の亜鉛イオンを測定した。なお、プリン骨
格又はピリミジン骨格を有する化合物（反応促進剤）と
してアデニンを用いた。このクロマトグラムを図６
（ａ）に示した。
【００２６】ii）試薬ブランク ０．０１M 硝酸を、標準液試料の代わりに使用した以外
は、上記２．（２）ｉ）と同じ手順で測定を行った。こ
のクロマトグラムを図６（ｂ）に示した。
は、上記２．（２）ｉ）と同じ手順で測定を行った。こ
のクロマトグラムを図６（ｂ）に示した。
【００２７】３．亜鉛ポルフィリン錯体形成反応時間の
検討 （１）蛍光測定（ＴＣＰＰの使用例）における反応時間
の検討 室温（２５℃）での放置時間を、５分間、３０分間、６
０分間、１２０分間、２４０分間とし、上記１．ｉ）〜
iii)の蛍光強度を測定し、これらの測定結果を図７に示
した。血清試料及び標準液試料のいずれにおいても、亜
鉛ポルフィリン錯体形成反応は３０分の時点で終了して
いた。
検討 （１）蛍光測定（ＴＣＰＰの使用例）における反応時間
の検討 室温（２５℃）での放置時間を、５分間、３０分間、６
０分間、１２０分間、２４０分間とし、上記１．ｉ）〜
iii)の蛍光強度を測定し、これらの測定結果を図７に示
した。血清試料及び標準液試料のいずれにおいても、亜
鉛ポルフィリン錯体形成反応は３０分の時点で終了して
いた。
【００２８】（２）吸光測定（ＴＰＰＳの使用例）にお
ける反応時間の検討 室温（２５℃）での放置時間を、１０分間、２０分間、
３０分間とし、上記２．（１）ｉ）の吸光測定を行っ
た。なお、比較のため、アデニン濃度が０mMのものも同
様の操作を行い、これらの測定結果を図８に示した。錯
体形成反応時にプリン骨格又はピリミジン骨格を有する
化合物（反応促進剤）であるアデニンが共存している場
合には、１０分以内に錯体形成反応が終了したが、アデ
ニンが共存していない場合は３０分経過しても反応は終
了しなかった。
ける反応時間の検討 室温（２５℃）での放置時間を、１０分間、２０分間、
３０分間とし、上記２．（１）ｉ）の吸光測定を行っ
た。なお、比較のため、アデニン濃度が０mMのものも同
様の操作を行い、これらの測定結果を図８に示した。錯
体形成反応時にプリン骨格又はピリミジン骨格を有する
化合物（反応促進剤）であるアデニンが共存している場
合には、１０分以内に錯体形成反応が終了したが、アデ
ニンが共存していない場合は３０分経過しても反応は終
了しなかった。
【００２９】（３）吸光測定（ＴＣＰＰの使用例）にお
ける反応時間の検討 室温（２５℃）での放置時間を、１０分間、２０分間、
３０分間、４０分間、５０分間、６０分間とし、上記
２．（２）ｉ）の吸光を測定した。また、比較のためア
デニン濃度が０mMのものも同様の操作を行い、これらの
測定結果を図９に示した。錯体形成反応時にプリン骨格
又はピリミジン骨格を有する化合物（反応促進剤）であ
るアデニンが共存している場合には、ほぼ２０分で錯体
形成反応が終了したが、アデニンが共存していない場合
は６０分経過しても反応は終了しなかった。
ける反応時間の検討 室温（２５℃）での放置時間を、１０分間、２０分間、
３０分間、４０分間、５０分間、６０分間とし、上記
２．（２）ｉ）の吸光を測定した。また、比較のためア
デニン濃度が０mMのものも同様の操作を行い、これらの
測定結果を図９に示した。錯体形成反応時にプリン骨格
又はピリミジン骨格を有する化合物（反応促進剤）であ
るアデニンが共存している場合には、ほぼ２０分で錯体
形成反応が終了したが、アデニンが共存していない場合
は６０分経過しても反応は終了しなかった。
【００３０】４．各種反応促進剤の錯体形成反応促進効
果 反応促進剤（プリン骨格又はピリミジン骨格を有する化
合物）として、アデニン、及びアデニンの代わりに、ア
デノシン、グアニン、グアノシン、チミン、チミジン、
シトシン、シチジン、ウリジン、尿酸、イノシン、アデ
ノシン一リン酸をそれぞれ用い、上記２．（１）ｉ）及
び上記２．（２）ｉ）の吸光を測定した。また、比較の
ため反応促進剤の濃度を０mMとした対照についても同様
にして操作を行った。なお、共存による錯体形成反応促
進効果を示す数値（パーセント）は以下のようにして求
めた。 （１）ＴＰＰＳの場合は１０分間、ＴＣＣＰの場合は３
０分間錯体形成反応を行った標準液試料のピークの面積
から対照のピークの面積を差し引いた値を求める。 （２）次に、反応促進剤がアデニンである場合の上記
（１）の値を１００％として、各種反応促進剤における
上記（１）の値を相対値（パーセント）で表す。（反応
促進剤がアデニンである時に、錯体形成反応が終了して
平衡に達していることは確認している。） これらの各種反応促進剤の錯体形成反応促進効果の測定
結果を表２に示した。
果 反応促進剤（プリン骨格又はピリミジン骨格を有する化
合物）として、アデニン、及びアデニンの代わりに、ア
デノシン、グアニン、グアノシン、チミン、チミジン、
シトシン、シチジン、ウリジン、尿酸、イノシン、アデ
ノシン一リン酸をそれぞれ用い、上記２．（１）ｉ）及
び上記２．（２）ｉ）の吸光を測定した。また、比較の
ため反応促進剤の濃度を０mMとした対照についても同様
にして操作を行った。なお、共存による錯体形成反応促
進効果を示す数値（パーセント）は以下のようにして求
めた。 （１）ＴＰＰＳの場合は１０分間、ＴＣＣＰの場合は３
０分間錯体形成反応を行った標準液試料のピークの面積
から対照のピークの面積を差し引いた値を求める。 （２）次に、反応促進剤がアデニンである場合の上記
（１）の値を１００％として、各種反応促進剤における
上記（１）の値を相対値（パーセント）で表す。（反応
促進剤がアデニンである時に、錯体形成反応が終了して
平衡に達していることは確認している。） これらの各種反応促進剤の錯体形成反応促進効果の測定
結果を表２に示した。
【００３１】
【表２】
【００３２】反応促進剤（プリン骨格又はピリミジン骨
格を有する化合物）を錯体形成反応時に共存させること
により、これらの化合物を共存させない対照に比べて、
ピークの面積が増大したこと、つまり亜鉛ポルフィリン
錯体形成反応が促進されたことが分かる。
格を有する化合物）を錯体形成反応時に共存させること
により、これらの化合物を共存させない対照に比べて、
ピークの面積が増大したこと、つまり亜鉛ポルフィリン
錯体形成反応が促進されたことが分かる。
【００３３】５．検量線の直線性の検討 （１）ＴＰＰＳの使用例 ２００ppb 、４００ppb 、６００ppb 、８００ppb 及び
１，０００ppb の亜鉛イオンを含む標準液試料並びに試
料ブランク（０．０１M 硝酸）をそれぞれ調製し、上記
２．（１）ｉ）の吸光測定を行い、これらの測定結果を
図１０に示した。０〜１，０００ppb の間において検量
線に直線性があり、定量的に測定が行えることが確認さ
れた。
１，０００ppb の亜鉛イオンを含む標準液試料並びに試
料ブランク（０．０１M 硝酸）をそれぞれ調製し、上記
２．（１）ｉ）の吸光測定を行い、これらの測定結果を
図１０に示した。０〜１，０００ppb の間において検量
線に直線性があり、定量的に測定が行えることが確認さ
れた。
【００３４】（２）ＴＣＣＰの使用例 ２００ppb 、４００ppb 、６００ppb 、８００ppb 及び
１，０００ppb の亜鉛イオンを含む標準液試料並びに試
料ブランク（０．０１M 硝酸）をそれぞれ調製し、上記
２．（２）ｉ）の吸光を測定し、これらの測定結果を図
１１に示した。０〜１，０００ppb の間において検量線
に直線性があり、定量的に測定が行えることが確認され
た。
１，０００ppb の亜鉛イオンを含む標準液試料並びに試
料ブランク（０．０１M 硝酸）をそれぞれ調製し、上記
２．（２）ｉ）の吸光を測定し、これらの測定結果を図
１１に示した。０〜１，０００ppb の間において検量線
に直線性があり、定量的に測定が行えることが確認され
た。
【００３５】
【図１】各種試料の処理手順を示した図である。
【図２】蛍光強度に関する、各種試料のクロマトグラム
である（ＴＣＰＰ使用）。
である（ＴＣＰＰ使用）。
【図３】標準液試料の処理手順を示した図である（ＴＰ
ＰＳ使用）。
ＰＳ使用）。
【図４】吸光に関する、標準液試料のクロマトグラムで
ある（ＴＰＰＳ使用）。
ある（ＴＰＰＳ使用）。
【図５】標準液試料の処理手順を示した図である（ＴＣ
ＰＰ使用）。
ＰＰ使用）。
【図６】吸光に関する、標準液試料のクロマトグラムで
ある（ＴＣＰＰ使用）。
ある（ＴＣＰＰ使用）。
【図７】各種試料における、蛍光強度と錯体形成反応時
間との関係を示した図である（ＴＣＰＰ使用）。
間との関係を示した図である（ＴＣＰＰ使用）。
【図８】吸光と錯体形成反応時間との関係を示した図で
ある（ＴＰＰＳ使用）。
ある（ＴＰＰＳ使用）。
【図９】吸光と錯体形成反応時間との関係を示した図で
ある（ＴＣＰＰ使用）。
ある（ＴＣＰＰ使用）。
【図１０】各種濃度の標準液試料についての検量線の直
線性を示した図である（ＴＰＰＳ使用）。
線性を示した図である（ＴＰＰＳ使用）。
【図１１】各種濃度の標準液試料についての検量線の直
線性を示した図である（ＴＣＰＰ使用）。
線性を示した図である（ＴＣＰＰ使用）。
Claims (15)
- 【請求項１】 亜鉛イオンを含む試料に水溶性ポルフィ
リン化合物を添加して、形成された亜鉛ポルフィリン錯
体を測定することにより試料中の亜鉛イオンを測定する
方法において、亜鉛ポルフィリン錯体形成時にプリン骨
格又はピリミジン骨格を有する化合物を共存させること
を特徴とする、試料中の亜鉛イオンの測定方法。 - 【請求項２】 形成された亜鉛ポルフィリン錯体の測定
が、この亜鉛ポルフィリン錯体の吸光又は蛍光を測定す
ることにより行うものである、請求項１記載の測定方
法。 - 【請求項３】 プリン骨格又はピリミジン骨格を有する
化合物が、核酸塩基である、請求項１又は２記載の測定
方法。 - 【請求項４】 プリン骨格又はピリミジン骨格を有する
化合物が、ヌクレオシドである、請求項１又は２記載の
測定方法。 - 【請求項５】 ヌクレオシドが、アデノシン、グアノシ
ン、シチジン、チミジン又はウリジンである、請求項４
記載の測定方法。 - 【請求項６】 プリン骨格又はピリミジン骨格を有する
化合物が、尿酸、ヒポキサンチン又はイノシンである、
請求項１又は２記載の測定方法。 - 【請求項７】 水溶性ポルフィリン化合物が、α，β，
γ，δ−テトラキス（４−カルボキシフェニル）ポルフ
ィンである、請求項１〜６のいずれか１項記載の測定方
法。 - 【請求項８】 水溶性ポルフィリン化合物が、α，β，
γ，δ−テトラキス（４−スルホフェニル）ポルフィン
である、請求項１〜６のいずれか１項記載の測定方法。 - 【請求項９】 水溶性ポルフィリン化合物及びプリン骨
格又はピリミジン骨格を有する化合物を含むことを特徴
とする、試料中の亜鉛イオンの測定試薬。 - 【請求項１０】 プリン骨格又はピリミジン骨格を有す
る化合物が、核酸塩基である、請求項９記載の測定試
薬。 - 【請求項１１】 プリン骨格又はピリミジン骨格を有す
る化合物が、ヌクレオシドである、請求項９記載の測定
試薬。 - 【請求項１２】 ヌクレオシドが、アデノシン、グアノ
シン、シチジン、チミジン又はウリジンである、請求項
１１記載の測定試薬。 - 【請求項１３】 プリン骨格又はピリミジン骨格を有す
る化合物が、尿酸、ヒポキサンチン又はイノシンであ
る、請求項９記載の測定試薬。 - 【請求項１４】 水溶性ポルフィリン化合物が、α，
β，γ，δ−テトラキス（４−カルボキシフェニル）ポ
ルフィンである、請求項９〜１３のいずれか１項記載の
測定試薬。 - 【請求項１５】 水溶性ポルフィリン化合物が、α，
β，γ，δ−テトラキス（４−スルホフェニル）ポルフ
ィンである、請求項９〜１３のいずれか１項記載の測定
試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9052489A JPH10232205A (ja) | 1997-02-19 | 1997-02-19 | 亜鉛イオン測定方法及び測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9052489A JPH10232205A (ja) | 1997-02-19 | 1997-02-19 | 亜鉛イオン測定方法及び測定試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10232205A true JPH10232205A (ja) | 1998-09-02 |
Family
ID=12916138
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9052489A Withdrawn JPH10232205A (ja) | 1997-02-19 | 1997-02-19 | 亜鉛イオン測定方法及び測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10232205A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006242691A (ja) * | 2005-03-02 | 2006-09-14 | Kowa Co | 鉛濃度の測定法 |
| JP2010276567A (ja) * | 2009-06-01 | 2010-12-09 | Kowa Co | 有害金属測定試薬及び測定方法 |
| CN102735662A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-10-17 | 贵州大学 | 一种锌离子的高灵敏、高选择荧光发射光谱分析法 |
| CN104597015A (zh) * | 2015-01-09 | 2015-05-06 | 东南大学 | 锌离子检测用量子点比率荧光探针及其检测方法 |
| CN113234235A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-08-10 | 浙江理工大学 | 一种用于检测铅的中-四(4-羧基苯基)锌卟啉-mof材料的制备方法 |
-
1997
- 1997-02-19 JP JP9052489A patent/JPH10232205A/ja not_active Withdrawn
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006242691A (ja) * | 2005-03-02 | 2006-09-14 | Kowa Co | 鉛濃度の測定法 |
| JP2010276567A (ja) * | 2009-06-01 | 2010-12-09 | Kowa Co | 有害金属測定試薬及び測定方法 |
| CN102735662A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-10-17 | 贵州大学 | 一种锌离子的高灵敏、高选择荧光发射光谱分析法 |
| CN104597015A (zh) * | 2015-01-09 | 2015-05-06 | 东南大学 | 锌离子检测用量子点比率荧光探针及其检测方法 |
| CN113234235A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-08-10 | 浙江理工大学 | 一种用于检测铅的中-四(4-羧基苯基)锌卟啉-mof材料的制备方法 |
| CN113234235B (zh) * | 2021-06-22 | 2022-04-01 | 浙江理工大学 | 一种用于检测铅的中-四(4-羧基苯基)锌卟啉-mof材料的制备方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20040511 |