JPH10276800A

JPH10276800A - 抗ウイルス剤の同定におけるｈｓｖ−１・ｕｌ−１５およびｖｐ５の使用

Info

Publication number: JPH10276800A
Application number: JP10084861A
Authority: JP
Inventors: Vecchio Alfred Del; アルフレッド・デル・ベッキオ
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1997-02-21
Filing date: 1998-02-23
Publication date: 1998-10-20
Also published as: EP0860700A2; CA2223032A1; EP0860700A3

Abstract

(57)【要約】【課題】ヘルペスウイルス科のメンバーに対して抗ウ
イルス活性を有する化合物の同定方法を提供する。本発
明方法により同定された化合物も提供する。【解決手段】単純ヘルペスウイルス−１のＵＬ１５遺
伝子産物およびＵＬ１９遺伝子産物（ＶＰ５）の間の相
互作用を阻害する化合物の同定を含む方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】一般的には、本発明は、抗ウ
イルス剤の分野に関し、詳細には、ヘルペス科のメンバ
ーに対して活性のある抗ウイルス剤の同定方法に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】ヘルペスウイルス科のメンバーはヒトの
病原体である単純ヘルペスウイルスタイプ１および２
（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、帯状疱疹ウイルス
（ＶＺＶ）、ヒト・サイトメガロウイルス（ＨＣＭ
Ｖ）、ヒト・ヘルペスウイルス６および７（ＨＨＶ−６
およびＨＨＶ−７）、エプステイン−バーウイルス（Ｅ
ＢＶ）［The Human Herpesvirus, ed. B. Roizman et a
l, Raven Press, NY (1993)に概説されている］、なら
びにカポジ肉腫ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）またはＨ
ＨＶ−８［P.S.Moore et al, J.Virol.,70:549-558 (19
96)］を包含する。これらのウイルスはすべて大型の、
直鎖状の、２本鎖ＤＮＡゲノムを有している［D.J.McGe
och, Annu.Rev.Microbiol.,43:235-265 (1989)］。提案
された回転円機構（rolling circle mechanism）によ
り、生産的感染の間にウイルスＤＮＡ複製が起こり、ウ
イルスゲノムのコンカテマーコピーを生じる。ウイルス
粒子の成熟中に、カプシド粒子が自己アッセンブリー
し、新たに複製されたウイルスＤＮＡが開裂されて単位
長さのゲノムとなり、次いで、空のカプシド（Ｂ−カプ
シド）中にパーッケージングされる［上で引用したThe
Human Herpesvirus，１１−６８ページ参照］。ＤＮＡ
開裂とウイルスＤＮＡのカプシド中へのパッケージング
のプロセスとは堅く結び付いていると考えられており、
ＤＮＡを開裂するがパッケージングしないウイルス変異
体は同定されていない。さらにそのうえ、ＤＮＡ開裂お
よびパッケージングのプロセスは空のカプシドの形成に
依存しており、カプシドのアッセンブリーまたは成熟を
妨害する変異によっては新たに複製されたコンカテマー
ウイルスＤＮＡは開裂されない［L.A.Tengelsen et al,
J.Virol.,67:34709-3480 (1993)に概説されている］。
ウイルスＤＮＡ中のシス−作用性配列は開裂およびパッ
ケージングに必要であることが知られているが、この開
裂／パッケージングおよびそれらの抽出機能に関与する
ウイルス蛋白は十分に特徴付けされていない。このプロ
セスに関与する遺伝子についての情報の大部分は、ＨＳ
Ｖ−１における温度感受性変異または遺伝子操作により
変異を用いた研究から得られている。D.R.Thomsen et a
l, J.Virol.,68:2442-2457 (1994)に概説されたカプシ
ドのアッセンブリーに必要な６個の遺伝子（ＵＬ１８、
ＵＬ１９、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ３５、および
ＵＬ３８）とともに、６個の他のウイルス遺伝子ＵＬ６
［C.Addison et al, Virol.,138:246-259 (1984)］、Ｕ
Ｌ１５［C.Addison et al, J.Gen.Virol.,71:2377-2384
(1990)］、ＵＬ２５［M.F.Al-Kobaisi et al, Virol.,
180:380-388 (1991)］、ＵＬ２８［G.Sherman and S.L.
Bachenheimer, Virol.,158:427-434 (1987)］、ＵＬ３
２［G.Sherman and S.L.Bachenheimer, Virol.,163:471
-480 (1988)］、およびＵＬ３３［Y.Chang, et al., J.
Virol.,70:3938-3946 (1996)］がＤＮＡ開裂およびパッ
ケージングに必要であることが示されている。

【０００３】ＵＬ１５およびＵＬ１９に関するゲノム配
列ならびにＵＬ１５およびＵＬ１９遺伝子産物に関する
配列はGeneBankから受託番号１４１１２（Ｄ００３１
７）として利用できる。さらに、ＵＬ１５およびＵＬ１
９配列は公表されている［それぞれ、J.Baines et al,
J.Virol.,68(12):8118-8124 (１９９４年１２月）およ
びPerry and Mcgeoch, J.Gen.Virol.,69:2381-2846 (19
88)］。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】現在のヘルペスウイル
ス感染の治療方法は、再発およびウイルス流出を防止す
るには不十分であることがわかている。さらに、これら
の治療法のいくつかは毒性があり、効果が最小限であ
る。そこで、ヘルペスウイルス科のメンバーの感染を治
療し予防することに有用な作用剤を同定する方法が必要
である。

【０００５】

【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】
１の態様において、本発明は、ヘルペスウイルス感染の
治療に有用な抗ウイルス剤の同定方法を提供する。該方
法は、ＨＳＶ−１ＵＬ１５またはその機能的誘導体も
しくは相同体を試験化合物と接触させることを包含す
る。次いで、ＨＳＶ−１ＶＰ５またはその機能的誘導
体もしくは相同体をＨＳＶ−１ＶＬ１５またはその誘
導体もしくは相同体と接触させる。次いで、ＵＬ１５ま
たはその誘導体もしくは相同体およびＶＰ５またはその
誘導体もしくは相同体の間の相互作用の阻害を調べるの
であるが、ここに阻害は、試験化合物が抗ウイルス剤で
あることを示すものである。

【０００６】もう１つの態様において、本発明は、ヘル
ペスウイルス感染の治療に有用な抗ウイルス剤の同定方
法を提供する。該方法は、ＨＳＶ−１ＶＰ５またはそ
の機能的誘導体もしくは相同体を試験化合物と接触させ
ることを包含する。次いで、ＨＳＶ−１ＵＬ１５また
はその機能的誘導体もしくは相同体をＨＳＶ−１ＶＰ
５またはその誘導体もしくは相同体と接触させる。次い
で、ＶＰ５またはその誘導体もしくは相同体およびＵＬ
１５またはその誘導体もしくは相同体の間の相互作用の
阻害を調べるのであるが、ここに阻害は、試験化合物が
抗ウイルス剤であることを示すものである。

【０００７】さらにもう１つの態様において、本発明、
ＵＬ１５／ＶＰ５複合体の機能を阻害する抗ウイルス剤
の同定方法を提供する。この方法は、試験化合物を含有
する試料をヘルペス感染細胞と接触させ、ウイルスの阻
害についてスクリーニングすることを包含する。次い
で、そのようにして同定された試験化合物を、ＵＬ１５
またはその機能的誘導体もしくは相同体およびＶＰ５ま
たはその機能的誘導体もしくは相同体を含む複合体の機
能をブロックする能力についてスクリーニングする。さ
らなる態様において、本発明は、上記方法により同定さ
れた化合物を提供する。

【０００８】本発明の他の態様ならびに利点を、さらに
以下の好ましい具体例についての詳細な説明において記
載する。

【０００９】本発明は、抗ウイルス剤の同定方法、詳細
には、ヘルペス科のメンバーの感染を予防し、治療する
ことに有用な作用剤を提供する。本発明方法は、ＵＬ１
５／ＶＰ５相互作用および／または機能を妨害する分子
を同定することを包含する。

【００１０】便利のため、GeneBankにおいて提供される
ＵＬ１５およびＶＰ５のアミノ酸配列を、それぞれ配列
番号：１および配列番号：２に示す。しかしながら、本
発明はこれらの上記アミノ酸配列に使用に限定されな
い。

【００１１】本明細書の「結合分子」とは、ＵＬ１５蛋
白またはその機能的誘導体もしくは相同体に特異的と結
合または相互作用し、そして／あるいはＶＰ５またはそ
の機能的誘導体もしくは相同体と特異的に結合または相
互作用し、そして／あるいはＵＬ１５／ＶＰ５により形
成される複合体（またはその機能的誘導体もしくは相同
体）と結合または相互作用する分子またはイオンをい
う。かかる結合分子は、例えば、小型有機分子、ペプチ
ド、ポリペプチド、抗体、特に細胞内抗体、抗体蛋白お
よび他の抗体由来の試薬、化学的作用剤、核酸配列、酵
素基質、細胞膜成分および古典的受容体を包含する。Ｕ
Ｌ１５および／またはＵＬ１９遺伝子産物ならびにかか
る結合分子の間の相互作用は、結合分子の抗ウイルス活
性を示すものである。本発明方法により結合分子として
分子を同定する前においては、分子を試験化合物とい
う。

【００１２】本明細書の用語、ＵＬ１５またはＶＰ５の
「機能的誘導体」は、ペプチドをはじめとするこれらの
蛋白のフラグメントを包含する。望ましくは、ＵＬ１５
ペプチドはＶＰ５またはその機能的誘導体もしくは相同
体と複合体を形成する能力により（例えば、結合、ある
いは相互作用することにより）特徴づけられるものであ
り、ＶＰ５ペプチドはＵＬ１５またはその機能的誘導体
もしくは相同体と複合体を形成する能力により特徴づけ
られるものである。例えば、適当なフラグメントは、配
列番号：１のほぼアミノ酸１からほぼアミノ酸４０９、
および配列番号：１のほぼアミノ酸１からほぼアミノ酸
５０８に位置するＵＬ１５のフラグメントを包含する
が、これらに限らない。他の適当なＵＬ１５蛋白および
ペプチドは、ＵＬ１５遺伝子の他のスプライス変種によ
りコードされているものを包含する。同様に、ＶＰ５の
相同体および／またはペプチド（すなわち、フラグメン
ト）も本定義に包含される。また機能的誘導体は、タ
グ、例えばエピトープタグ、ポリＨｉｓタグ等、または
選択可能マーカーまたは本明細書記載の種々の方法に使
用される他の検出手段に融合した、あるいはこれらを付
して提供されるＵＬ１５およびＶＰ５蛋白およびペプチ
ドを包含する。適当なタグ、マーカーおよび他の検出手
段は当業者によく知られており、容易に選択されうる。

【００１３】さらに、融合パートナーに直接または間接
的に（すなわち、リンカーを介して）融合したこれらの
ＵＬ１５またはＶＰ５蛋白、あるいは好ましくはペプチ
ドを含む融合蛋白も機能的誘導体の定義に包含される。
発現および／または精製に便利なように、ペプチドに対
するリンカーおよび融合パートナを選択する。当業者は
適当なリンカーを容易に選択することができる。同様
に、適当な融合パートナー、例えばＧＳＴ、Ｇａｌ４，
ｌｅｘＡ、マルトース結合蛋白（ＭＢＰ）、ｌａｃＺ、
ｔｒｐ等を当業者は容易に選択することができる。ま
た、発現および／または精製を容易にするために修飾さ
れたＵＬ１５およびＶＰ５蛋白も機能的誘導体の定義に
包含される。

【００１４】本願については便利のため、ＵＬ１５およ
びＶＰ５を用いる。しかしながら、本発明方法におい
て、これらの蛋白のいずれかまたは両方の機能的誘導体
または相同体を容易に用いることができることが理解さ
れるはずである。

【００１５】理論に拘束されることを望まず、本発明者
らは、ＵＬ１５遺伝子産物が主要カプシド蛋白ＶＰ５
（ＵＬ１９の遺伝子産物）と特異的に相互作用すること
を見いだした。本明細書に示すように、組み換えバキュ
ロウイルス用いて発現されたＵＬ１５およびＶＰ５蛋白
を用いる実験は、これら２つのウイルス蛋白がこの相互
作用に十分であることを示す。さらにそのうえ、ＵＬ１
５のアミノ末端中に含まれる配列はこの相互作用にとり
重要であると思われる。この知見と、ＵＬ１５遺伝子お
よびその相同体がヘルペスウイルス科のメンバー中でも
っともよく保存されているという知識とを結び付けて、
本発明者らは本発明方法を開発することができた。便利
のため、明細書においてＵＬ１９よびＶＰ５について説
明する。しかしながら、説明したように、他のヒト・ヘ
ルペスウイルス（ＶＺＶ中のＯＲＦ４２／４５、ＨＣＭ
Ｖ中のＵＬ８９、ＥＢＶ中のＢＤ／ＢＧＲＦ１、および
ＨＨＶ−６中のＮＣＢＩｇｉ３２５４９６を包含するが
これらに限らない）中のＨＳＶ−１ＵＬ１５の機能的
誘導体もしくは相同体、あるいは適当な非ヒト・ヘルペ
スウイルスを用いて本明細書記載の方法を容易に行うこ
とができる。

【００１６】よって、本発明は、ヘルペスウイルス科の
メンバーに対して抗ウイルス化合物として活性のある作
用剤のスクリーニングおよび同定方法を提供する。ＵＬ
１５およびＶＰ５ならびにそれらの相同体はヘルペスウ
イルス科においてもっともよく保存された蛋白であるの
で、本発明方法により同定された抗ウイルス剤は、ａ、
ｂおよびｇヘルペスウイルスの予防および治療において
有用であると考えられる。しかしながら、本発明のいず
れの選択抗ウイルス剤も、別のサブグル−プ由来のウイ
ルスに対する活性よりも、これらのサブグループの１つ
の中のウイルスに対する活性が高い可能性がある。

【００１７】望ましくは、本発明方法は、蛋白−蛋白結
合を検出または測定するアッセイの使用を包含する。詳
細には、アッセイは、ＵＬ１５の結合部位に結合しこれ
を占領し、そのことによりＶＰ５への結合を妨害して、
正常なウイルス活性を妨害する分子を検出する。同様
に、ＶＰ５の結合部位に結合しこれを占領し、そのこと
によりＵＬ１５への結合を妨害し、正常なウイルス活性
を妨害する分子を検出するアッセイを用いることができ
る。もう１つの別法において、アッセイは、ＵＬ１５／
ＶＰ５複合体の機能を阻害する分子を同定するものであ
ってもよい。さらにもう１つの別法において、アッセイ
は、正常な結合部位とは異なるＵＬ１５またはＶＰ５上
の部位に結合し、それにもかかわらず、アロステリック
効果により、ＵＬ１５およびＶＰ５が相互作用し正常機
能を発揮する能力を抑制する分子を検出するものであっ
てもよい。

【００１８】詳細には、ＵＬ１５およびＶＰ５間の相互
作用を妨害し、あるいはそれらの機能を妨害する試験化
合物が本発明者らにより見いだされ、それらがヘルペス
ウイルス科の感染の治療および予防のための抗ウイルス
剤として有用でることが見いだされた。もっとも望まし
くは、試験化合物はＵＬ１５（またはＶＰ５）と相互作
用し、そのＶＰ５（またはＵＬ１５）との相互作用を阻
害するものである。よって、ＵＬ１５およびＶＰ５を用
いて、例えば、細胞、無細胞標品、化学的ライブラリ
ー、および天然産物の混合物中における小型分子基質お
よびリガンドの結合を同定し評価することができる。こ
れらの基質およびリガンドは天然基質およびリガンドで
あってもよく、構造上または機能上の模倣物であっても
よく、あるいは本来の結合とは無関係なものであっても
よい。例えば、本発明方法は、ＵＬ１５、ＶＰ５または
それらの部分に相捕的な構造を有する化合物を決定する
ための適当なコンピュータープログラムを使用し、蛋白
への競争的結合についてそれらの化合物をスクリーニン
グすることを包含する。

【００１９】小型分子アンタゴニストを同定するために
は、合成化合物、天然産物、およびペプチドをスクリー
ニングするための迅速かつ再現性のあるアッセイが望ま
しい。望ましくは、かかるアッセイは蛋白に基づくもの
であり、細胞に基づくアッセイのに場合には他のアッセ
イ成分による妨害からＵＬ１５および／またはＶＰ５を
隔絶するものである。望ましくは、アッセイは自動化で
きるものである。かかるアッセイは当業者によく知られ
ており、本発明を限定するものではない

【００２０】所望ならば、そして選択したアッセイによ
っては、ＵＬ１５（あるいは別の具体例ではＶＰ５）を
適当な表面に固定化してもよい。かかる固定化表面はよ
く知られている。例えば、湿潤可能な不活性ビーズを用
いてＵＬ１５（またはＶＰ５）との多価反応を容易にし
てもよい。別法として、ＵＬ１５（またはＶＰ５）に対
する抗体を用いてもよい。典型的には、ＵＬ１５（また
はＶＰ５）を含んでいる表面を、試験化合物含有溶液な
らびにＶＰ５（またはＵＬ１５）含有溶液と接触させ、
適当な検出系を用いて結合を測定する。適当な検出系は
ストレプトアビジン・セイヨウワサビペルオキシダーゼ
結合体、タグ、例えばフルオレセインによる直接結合を
包含する。他の系は当業者によく知られている。本発明
は、使用検出系によって限定されない。

【００２１】さらに、多数の分子が１の固定化支持体系
上に含まれている、慣用的方法に本発明方法を容易に適
用できる。かかる方法において、ＵＬ１５（または別の
具体例においてはＶＰ５）含有溶液を支持体に提供し、
次いで、ＶＰ５（またはＵＬ１５）含有溶液を提供す
る。よって、本発明方法は、化合物およびペプチドに基
づくライブラリーのスクリーニングを可能にする。

【００２２】本明細書記載のアッセイ方法は、ＵＬ１５
とＶＰ５との間の相互作用の阻害についてのスクリーニ
ングにおいて有用である。好ましい方法において、阻害
剤である可能性のある物質（すなわち、試験化合物）を
含有する溶液を固定化ＵＬ１５（あるいは、別の具体例
においてはＶＰ５）と接触させ、実質的に同時に固定化
ＵＬ１５（または固定化ＶＰ５）をＶＰ５（またはＵＬ
１５）含有溶液と接触させる。阻害剤を含有する溶液を
適当な源から得てもよく、源は、例えば生物培養上清抽
出液、天然源から集められた生物由来の抽出物、化合
物、ならびにそれらの混合物を包含する。もう１つの変
法において、ＶＰ５（またはＵＬ１５）を固定化された
ＵＬ１５（またはＶＰ５）に添加する前または後に阻害
剤溶液を添加してもよい。上記のごとく、ＵＬ１５また
はＶＰ５に対する相同体を用いて同様の方法を行っても
よい。

【００２３】適当なアッセイの一例は酵母２−ハイブリ
ッド系（yeast two-hybrid system）である。酵母２−
ハイブリッド系は、第１の試験蛋白（すなわち、ＵＬ１
５またはＶＰ５）および第２の試験蛋白（すなわち、Ｖ
Ｐ５またはＵＬ１５）の間の相互作用を転写アクチベー
ターの活性の再構築を用いて検出する方法を提供する。
該方法は米国特許第５２８３１７３号に開示されてお
り、試薬類はClontechおよびStratageneから市販されて
いる。簡単に説明すると、ＵＬ１５（またはＶＰ５）を
Ｇａｌ４転写因子ＤＮＡ結合ドメインに融合させ、酵母
細胞において発現させる。逆に、ＵＬ１５（またはＵＬ
１９）をＧａｌ４のトランスアクチベーションドメイン
に融合させてもよい。ＵＬ１５およびＶＰ５ドメインを
介する融合蛋白の相互作用はＧａｌ４活性の再構築なら
びにＧａｌ１−ｌａｃＺのごとき受容体遺伝子の発現の
トアンスアクチベーション（transactivation）を誘導
するであろう。

【００２４】適当なアッセイのもう１つの例として、酵
素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または他の免疫
アッセイフォーマットを用いてもよく、ＵＬ１５（また
は別の具体例においてはＶＰ５）を適当な表面に直接ま
たは間接的に固定化する。典型的には、かかる免疫アッ
セイは、特異的抗体（例えば、抗−ＵＬ１５または抗−
ＶＰ５）あるいはフィルター分離工程を伴った放射性標
識ＵＬ１５またはＶＰ５のインキュベーションの使用を
必要とする。ＵＬ１５／ＶＰ５複合体の形成を妨害また
は阻害する試験物質の存在下では、試験物質を欠く対照
と比較すると遊離ＵＬ１５またはＶＰ５の量の増加が見
られるであろう。

【００２５】さらにもう１つの方法は、結合パートナー
を求めてペプチドライブラリーをスクリーニングするこ
とを必要とする。組み換えされタグを付されたあるいは
標識されたＵＬ１５（または別の具体例においてはＶＰ
５）を用いて、ＵＬ１５（または別の具体例においては
ＶＰ５）と相互作用するペプチドをペプチドまたはホス
ホペプチドライブラリーから選択する。ペプチドの配列
決定は、相互作用する蛋白中に見いだされうるコンセン
サスペプチド配列の同定を導く。

【００２６】もう１つの方法は免疫アフィニティー精製
である。組み換えＵＬ１５（あるいはＶＰ５）を標識ま
たは未標識細胞抽出物とともにインキュベーションし、
抗−ＵＬ１５（または抗−ＶＰ５）抗体と免疫沈降させ
る。プロテインＡ−セファロースを用いて免疫沈降物を
回収し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析する。未標識蛋白
をビオチン化により標識し、ストレプトアビジンを用い
てＳＤＳゲル上で検出する。次いで、結合分子をＵＬ１
５／ＶＰ５相互作用の阻害について分析する。

【００２７】結合分子であると同定された試験化合物の
抗ウイルス活性についての評価を、標準的なアッセイを
用いて行うことができる。かかるアッセイは容易に当業
者に明らかであろう。かかるアッセイの例は、プラーク
減少アッセイおよびウイルス収量減少アッセイを包含す
るが、これらに限らない。

【００２８】本発明のさらにもう１つの態様において、
ＵＬ１５／ＶＰ５複合体の機能の阻害についてのスクリ
ーニングによる抗ウイルス剤同定方法は当業者によく知
られている。例えば、ＵＬ１５／ＶＰ５複合体を含有す
る無細胞系を用いてもよい。

【００２９】しかしながら、より望ましくは、細胞に基
づくアッセイをこれらのスクリーニングに用いる。例え
ば、宿主細胞を修飾して一時的または安定してＵＬ１５
および／またはＶＰ５を発現させてもよい。別法とし
て、本発明の好ましい具体例において、かかるアッセイ
はヘルペスウイルス感染細胞を用いるものである。次い
で、１種またはそれ以上の試験化合物を含有する試料を
感染細胞と接触させ、本明細書記載のごとき方法および
当該分野でよく知られた方法を用いて正常なヘルペスウ
イルスの機能の阻害を検出する。次いで、同定した試験
化合物を、ＵＬ１５およびＶＰ５を含む複合体に対する
阻害能についてスクリーニングする。この阻害は間接的
なもの、例えば化合物が複合体の機能を阻害するもので
あってもよく、あるいは直接的なもの、例えばＵＬ１５
またはＶＰ５の結合をブロックすることによるものであ
ってもよい。本明細書方法により同定された化合物は直
接または間接的に（例えば、機能的に）ＵＬ１５／ＶＰ
５を阻害するものであり、標準的方法を用いてそれらを
アッセイしてもよい。

【００３０】組成物さらに本発明は、本発明方法により同定された化合物な
らびにヘルペスウイルス科のメンバーの感染の予防また
は治療のための医薬組成物において有用な抗ウイルス剤
としての化合物の使用を提供する。

【００３１】本発明方法により同定された抗ウイルス剤
を、ヘルペスウイルス感染を治療するために予防的また
は治療的に、好ましくは感染後に使用しうる医薬組成物
中に処方してもよい。結合分子／抗ウイルス剤の使用量
は投与様式、他の活性化合物の使用等により変更される
であろうが、一般的には、約１ｍｇないし１０ｍｇであ
り、約０．５ｍｌないし５ｍｌの適当な担体の溶液中に
処方される。よって、本発明抗ウイルス剤を、細胞、組
織または器官について使用する未滅菌または滅菌担体
（例えば、対象への投与に適した医薬担体）と混合して
用いてもよい。かかる組成物は、例えば、媒体添加剤ま
たは治療上有効量の本発明抗ウイルス剤および医薬上許
容される担体もしくは賦形剤を含んでなる。かかる担体
は、セイライン、緩衝化セイライン、デキストロース、
水、グリセロール、エタノールおよびそれらの混合物を
包含するが、これらに限らない。処方は投与様式に適し
たものとすべきである。とりわけ、例えば、局所、経
口、肛門、膣、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻か
ら、あるいは経皮的投与を包含する効果的かつ慣用的様
式で医薬組成物を投与してもよい。

【００３２】

【実施例】これらの実施例は本発明を例示するだけであ
り、本発明の範囲を限定するものではない。実施例１−ＵＬ１５遺伝子産物／ＶＰ５複合体の検出ＨＳＶ−１感染Vero細胞［ＡＴＣＣ，ＣＣＬ８１］から
ＵＬ１５を免疫沈降させ、種々のカプシド蛋白に対する
抗血清とともに免疫沈降物をイムノブロットした。より
詳細には、細胞１個あたり１０ＰＦＵのＨＳＶ−１でVe
ro細胞を感染させ［K.O.Smith, Proc.Soc.Exp.Biol.Me
d.,115:814-816 (1964);］、感染２０時間後に集めた。
リン酸塩緩衝化セイライン（ＰＢＳ）中で凍結融解を３
回行うことにより細胞を溶解し、次いで、遠心分離によ
りペレット状残渣を得た。正常なウサギ・血清およびセ
ファロース結合プロテインＡを用いて上清を前以て清澄
化した。得られた上清を５マイクロリットルのＵＬ１５
特異的抗血清（ＮＣ−１）［J.D.Baines, J.Virol., 68
(12):8118-8124 （１９９４年１２月）］とともに免疫
沈降させ、イムノブロットし、次いで、ＨＳＶ−１カプ
シド蛋白に対するＮＣ−１抗血清［G.H.Cohen et al,
J.Virol.,34(2):521-531 （１９８０年５月）］でプロ
ーブした。使用したＵＬ１５ポリクローナル抗体はＵＬ
１５蛋白のカルボキシ末端部分に対して指向されてお
り、分子量７５ｋＤおよび３５ｋＤの２種の蛋白と反応
することがすでに示されている［Bainesらの上記文
献］。ＨＳＶ−１感染Vero細胞からのＵＬ１５の免疫沈
降物は、主要カプシド蛋白ＶＰ５に対する抗血清と免疫
反応し、報告されたＶＰ５のサイズに対応した１５５ｋ
Ｄの蛋白を含むことが見いだされた。逆に、ＶＰ５をＨ
ＳＶ−１感染Vero細胞から免疫沈降させた場合にはＵＬ
１５に対する抗血清と免疫反応する７５ｋＤのバンドが
検出されたが、未感染細胞からの場合には検出されなか
った。さらにそのうえ、３５ｋＤのＵＬ１５蛋白はＶＰ
５免疫沈降物中に検出されず、かつ、ＵＬ１５蛋白は、
蔗糖密度勾配により精製したＨＳＶ−１カプシド標品中
に検出されず、ＵＬ１５がカプシド蛋白でないことが示
された。他のＨＳＶ−１カプシド蛋白に対する抗血清を
用いてＵＬ１５免疫沈降物のイムノブロットをプローブ
しても、これらの他の蛋白との同時免疫沈降は示されな
かった。このことは、この方法によっては検出できない
弱い相互作用によるものか、あるいはＵＬ１５免疫沈降
物中のカプシド蛋白が豊富でないことによるものと思わ
れる。なぜなら、ＶＰ２１およびＶＰ２４のごときいく
つかのカプシド遺伝子はカプシド中に大量に存在しない
からである。データは、ＨＳＶ−１感染細胞抽出物、Ｕ
Ｌ１５およびＶＰ５が一緒になって複合体を形成するこ
とを示す。

【００３３】実施例２−ＵＬ１５／ＶＰ５複合体の特徴
付け実施例１において同定されたＵＬ１５／ＶＰ５含有複合
体が他の蛋白を含むかどうか、ＵＬ１５およびＶＰ５が
複合体内で直接相互作用するかどうか、あるいは複合体
形成にはＵＬ１５およびＶＰ５のみで十分であるかどう
かを調べるために、以下の研究を行った。バキュロウイ
ルス発現系を用いてＵＬ１５およびＶＰ５を組み換え的
に発現させた。ＨＳＶ−１感染Vero細胞（ＫＯＳ）なら
びにＵＬ１５（ＶＰ５）遺伝子を含むｐＳＧ１０および
ｐＳＧ１６プラスミド［A.L.Goldin et al, J.Virol.,3
8(10):50-58 （１９８１年４月）に記載］からＵＬ１５
（ＶＰ５）遺伝子の読み枠（ＯＲＦｓ）を得た。プラス
ミドｐＳＧ１６［上記Goldinらの文献］を用いてＵＬ１
９のＯＲＦを同様にして得た。ＵＬ１５およびＵＬ１９
のＯＲＦｓをバキュロウイルス発現ベクターｐＶＬ１３
９３［Pharminogen］中にクローン化し、組み換えバキ
ュロウイルスの生産に用いた。細胞１個あたり感染の多
重度（ＭＯＩ）がそれぞれ５ＰＦＵのこれら２種の組み
換えバキュロウイルス（ＢＡＣ−ＵＬ１５およびＢＡＣ
−ＶＰ５）で感受性Ｓｔ９細胞［ＡＴＣＣ］を同時感染
させた。４８時間目に１ｍｌの試料バッファー中で直接
溶解させることにより全蛋白溶解物を調製した。未感染
Ｓｆ９細胞、野生型バキュロウイルスに感染した細胞、
野生型バキュロウイルスおよびＢＡＣ−ＵＬ１５に感染
した細胞、ならびに野生型バキュロウイルスおよびＢＡ
Ｃ−ＶＰ５に感染した細胞を対照として用いた。この試
料２４マイクロリットルを、０．１％ＳＤＳを含有す
る４−２０％勾配ポリアクリルアミドゲル上に負荷し、
トリス−グリシンバッファー中で電気泳動した。電気泳
動および電気トランスファー後、ゲルを免疫ブロット
し、ＶＰ５またはＵＬ１５に対するウサギ・ポリクロー
ナル抗血清（ＶＰ５に対する方はＮＣ１）でゲルをプロ
ーブした（ＵＬ１５抗血清またはＶＰ５抗血清を用い
て）。特異的に免疫反応性のある適当なサイズのバンド
（ＵＬ１５については７５ｋＤ、ＶＰ５については１５
５ｋＤ）がそれぞれのバキュロウイルスに感染した細胞
において観察されたが、未感染Ｓｆ９細胞または野生型
バキュロウイルスに感染したＳｆ９細胞においては観察
されなかった。

【００３４】実施例３−ＵＬ１５：ＶＰ５複合体の特異
性ＶＰ５はむしろ大型の蛋白（１５５ｋＤ）であるので、
ＵＬ１５：ＶＰ５複合体形成が２種の蛋白の非特異的
結合によるものであるかどうかを調べることが重要であ
る。この問題に取り組むために、カップルド転写／翻訳
（coupled transcription/translation）によりＵＬ１
５およびいくつかの他の無関係なポリペプチドをインビ
トロ合成し、以下のようにしてバキュロウイルスにより
発現されたＶＰ５との相互作用能について試験した。Ｕ
Ｌ１５の読み枠を含む鋳型ＤＮＡｓ、ならびに負の対照
としてＨＳＶ−１ＵＬ１２（アルカリ性エキソヌクレア
ーゼ）、ヒト・パピローマウイルス（ＨＰＶ）タイプ６
ｂＥ１（ＨＰＶ−６ｂＥ１）、ＨＰＶ−１６Ｅ１、ＨＰ
Ｖ−１８Ｅ２、およびＨＰＶ−１６Ｅ２蛋白の読み枠を
用いて、５０マイクロリットルの合成反応系でそれらの
放射性標識蛋白をインビトロ合成した。反応系のごく一
部（１０分の１）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析してこ
れらの蛋白の発現を確認した。ＶＰ５がこれらの蛋白と
相互作用するかどうかを調べるために、反応系の残り
を、ＢＡＣ−ＶＰ５感染Ｓｆ９細胞から調製した抽出物
５０μｌと混合し、ＶＰ５抗血清を免疫沈降させ、次い
で、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。バックグラウン
ド量のＨＰＶ−６ｂＥ１、ＨＰＶ−１６Ｅ１、およびＨ
ＰＶ−１６Ｅ２蛋白がＶＰ５と同時免疫沈降したが、約
１０倍量のＵＬ１５はＶＰ５と同時免疫沈降し、ＵＬ１
５およびＶＰ５の相互作用がＶＰ５との特異的相互作用
によることが示唆された。

【００３５】実施例４−ＶＰ５と相互作用するＵＬ１５
の領域の同定ＵＬ１５のいずれの領域がＶＰ５との複合体形成に関与
しているかを調べるために、カルボキシ末端を切断した
一連のＵＬ１５ポリペプチドをカップルド転写／翻訳に
よりインビトロ合成し、ＶＰ５との相互作用能について
試験した。アミノ酸４０９−７３５［配列番号：１］を
含む末端切断されたＵＬ１５蛋白はＶＰ５と同時免疫沈
降する能力をまだ有していた。しかしながら、さらに１
−４０９のアミノ酸［配列番号：１］を欠失したＵＬ１
５蛋白はＶＰ５と相互作用できず、ＵＬ１５のアミノ末
端のアミノ酸がＶＰ５との相互作用に重要であることが
示唆される。７５ｋＤ蛋白のアミノ末端を欠いていてカ
ルボキシ末端領域のみを共有しているＵＬ１５の３５ｋ
Ｄ形態はＶＰ５と同時免疫沈降しないという観察結果に
よってもこの知見が確認される。実施例１−４に示すデ
ータは、ＵＬ１５遺伝子からの７５ｋＤ蛋白は主要カプ
シド蛋白ＶＰ５と免疫沈降することを示す。この相互作
用は、ターミナーゼ複合体を空のカプシドに連結する手
段を提供するかもしれず、その結果、新たに複製された
ＤＮＡが容易にパッケージングされうる。ＵＬ１５配列
の調査により、ＵＬ２６プロテアーゼのための潜在的開
裂部位がアミノ酸３３２−３３９［配列番号：１］に存
在することが明らかとなった。この部位がＵＬ２６プロ
テアーゼの真の基質であるならば、３５ｋＤ蛋白の生成
について説明でき、さらにＵＬ１５ターミナーゼ活性を
不活性化し、ＤＮＡパッケージングの完了をシグナリン
グしうる手段が提供される。

【００３６】実施例５−ＶＰ５とＵＬ１５との相互作用
をブロックする分子のスクリーニングにおけるＵＬ１５
およびＶＰ５蛋白の適用下記アッセイフォーマットを用いて、化合物および天然
産物の大型のバンクをスクリーニングすることにより、
ＵＬ１５：ＶＰ５結合を阻害する分子を同定することが
できる。アッセイの単純化よび検出の容易化のためにＶ
Ｐ５蛋白をビオチン化する。本質的にAvidin-Biotin Ch
emistry:A handbook, M.D.Savage et al., Pierce Chem
ical Company (1992)に記載されたようにしてビオチン
化を行う。コーティング後のすべてのアッセイ工程を室
温で行う。９６ウェルマイクロタイタープレート（Immu
nlon 4, Dynatech Laboratories）のウェルを、ウェル
１個あたり１００μｌの０．１Ｍ重炭酸ナトリウム，ｐ
Ｈ９．４中のＵＬ１５遺伝子産物（２ｍｇ／ｍｌ）でコ
ーティングし、一晩４℃でインキュベーションする。そ
の直後、試験化合物希釈液（１０ｍｌ）を添加する。化
合物を１００倍アッセイ濃度としてジメチルスルホキシ
ド（ＤＭＳＯ）に溶解し、次いで、５０％ＤＭＳＯ／
５０％Ｈ₂Ｏで希釈して１０倍濃度のストック溶液とす
る。ウェルをＰＢＳ（リン酸塩緩衝化セイライン）で洗
浄し、ＰＢＳ中０．５％ゼラチンで１時間ブロックす
る。さらにＰＢＳで洗浄後、１ｍｇ／ｍｌＢＳＡ、
０．０５％ツインを含有するＰＢＳを用いてウェル中に
おいて直接ビオチン化ＶＰ５を系列希釈して最終体積
０．１ｍｌとし、次いで、１時間インキュベーションし
た。ウェルをＰＢＳで洗浄し、１：２０００希釈率で
０．１ｍｌのストレプトアビジン−ＨＲＰ（セイヨウワ
サビペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジン（Southe
rn Biotech））を添加して１時間置き、次いで洗浄し、
１００μｌのＡＢＴＳ基質（Kierkegaard and Perry La
boratories Inc., Maryland）を用いて発色させ、４０
５ｎｍにおいて測定することにより結合ＶＰ５蛋白を測
定する。いくつかの場合、吸光度測定前に１００μｌの
１％ＳＤＳを添加することにより発色反応を停止す
る。

【００３７】本発明についての多くの修飾および変更が
上記明細書中に包含され、当業者に明らかであると考え
られる。本発明組成物および方法に対するかかる修飾お
よび変更は添付した請求の範囲に包含されると確信す
る。

【００３８】

【配列表】

【００３９】（１）一般的情報：（ｉ）出願人：デル，ベッキオ・アルフレッド・エム（ｉｉ）発明の名称：抗ウイルス剤の同定におけるＨ
ＳＶ−１・ＵＬ−１５およびＶＰ５の使用（ｉｉｉ）配列の数：２（ｖｉ）連絡先：（Ａ）宛て名：スミスクライン・ビーチャム・コーポレ
イション（Ｂ）通り名：スウェードランド・ロード７０９番（Ｃ）都市名：キング・オブ・プルシア（Ｄ）州名：ペンシルベニア（Ｅ）国名：アメリカ合衆国（Ｆ）ＺＩＰ：１９４０６−２７９９（ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム：（Ａ）媒体タイプ：フロッピーディスク（Ｂ）コンピューター：ＩＢＭＰＣコンパチブル（Ｃ）作動システム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ（Ｄ）ソフトウェア：PatentIn Release #1.0, Version
#1.30 （ｖｉ）本願のデータ：（Ａ）出願番号：ＵＳ（Ｂ）出願日：（Ｃ）分類：（ｖｉｉｉ）代理人等の情報：（Ａ）氏名：ディナー，ダラ・エル（Ｂ）登録番号：３３６８０（Ｃ）代理人等における処理番号：Ｐ５０６１７Ｐ（ｘｉ）テレコミュニケーションの情報：（Ａ）電話番号：６１０−２７０−４８００（Ｂ）ファックス番号：６１０−２７０−４０２６

【００４０】（２）配列番号：１に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：７３５アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：（Ｄ）トポロジー：不明（ｉｉ）配列の種類：蛋白（ｘｉ）配列の記載：配列番号：１： Met Phe Gly Gln Gln Leu Ala Ser Asp Val Gln Gln Tyr Leu Glu Arg 1 5 10 15 Leu Glu Lys Gln Arg Gln Leu Lys Val Gly Ala Asp Glu Ala Ser Ala 20 25 30 Gly Leu Thr Met Gly Gly Asp Ala Leu Arg Val Pro Phe Leu Asp Phe 35 40 45 Ala Thr Ala Thr Pro Lys Arg His Gln Thr Val Val Pro Gly Val Gly 50 55 60 Thr Leu His Asp Cys Cys Glu His Ser Pro Leu Phe Ser Ala Val Ala 65 70 75 80 Arg Arg Leu Leu Phe Asn Ser Leu Val Pro Ala Gln Leu Lys Gly Arg 85 90 95 Asp Phe Gly Gly Asp His Thr Ala Lys Leu Glu Phe Leu Ala Pro Glu 100 105 110 Leu Val Arg Ala Val Ala Arg Leu Arg Phe Lys Glu Cys Ala Pro Ala 115 120 125 Asp Val Val Pro Gln Arg Asn Ala Tyr Tyr Ser Val Leu Asn Thr Phe 130 135 140 Gln Ala Leu His Arg Ser Glu Ala Phe Arg Gln Leu Val His Phe Val 145 150 155 160 Arg Asp Phe Ala Gln Leu Leu Lys Thr Ser Phe Arg Ala Ser Ser Leu 165 170 175 Thr Glu Thr Thr Gly Pro Pro Lys Lys Arg Ala Lys Val Asp Val Ala 180 185 190 Thr His Gly Arg Thr Tyr Gly Thr Leu Glu Leu Phe Gln Lys Met Ile 195 200 205 Leu Met His Ala Thr Tyr Phe Leu Ala Ala Val Leu Leu Gly Asp His 210 215 220 Ala Glu Gln Val Asn Thr Phe Leu Arg Leu Val Phe Glu Ile Pro Leu 225 230 235 240 Phe Ser Asp Ala Ala Val Arg His Phe Arg Gln Arg Ala Thr Val Phe 245 250 255 Leu Val Pro Arg Arg His Gly Lys Thr Trp Phe Leu Val Pro Leu Ile 260 265 270 Ala Leu Ser Leu Ala Ser Phe Arg Gly Ile Lys Ile Gly Tyr Thr Ala 275 280 285 His Ile Arg Lys Ala Thr Glu Pro Val Phe Glu Glu Ile Asp Ala Cys 290 295 300 Leu Arg Gly Trp Phe Gly Ser Ala Arg Val Asp His Val Lys Gly Glu 305 310 315 320 Thr Ile Ser Phe Ser Phe Pro Asp Gly Ser Arg Ser Thr Ile Val Phe 325 330 335 Ala Ser Ser His Asn Thr Asn Gly Ile Arg Gly Gln Asp Phe Asn Leu 340 345 350 Leu Phe Val Asp Glu Ala Asn Phe Ile Arg Pro Asp Ala Val Gln Thr 355 360 365 Ile Met Gly Phe Leu Asn Gln Ala Asn Cys Lys Ile Ile Phe Val Ser 370 375 380 Ser Thr Asn Thr Gly Lys Ala Ser Thr Ser Phe Leu Tyr Asn Leu Arg 385 390 395 400 Gly Ala Ala Asp Glu Leu Leu Asn Val Val Thr Tyr Ile Cys Asp Asp 405 410 415 His Met Pro Arg Val Val Thr His Thr Asn Ala Thr Ala Cys Ser Cys 420 425 430 Tyr Ile Leu Asn Lys Pro Val Phe Ile Thr Met Asp Gly Ala Val Arg 435 440 445 Arg Thr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Asp Ser Phe Met Gln Glu Ile Ile 450 455 460 Gly Gly Gln Ala Arg Glu Thr Gly Asp Asp Arg Pro Val Leu Thr Lys 465 470 475 480 Ser Ala Gly Glu Arg Phe Leu Leu Tyr Arg Pro Ser Thr Thr Thr Asn 485 490 495 Ser Gly Leu Met Ala Pro Asp Leu Tyr Val Tyr Val Asp Pro Ala Phe 500 505 510 Thr Ala Asn Thr Arg Ala Ser Gly Thr Gly Val Ala Val Val Gly Arg 515 520 525 Tyr Arg Asp Asp Tyr Ile Ile Phe Ala Leu Glu His Phe Phe Leu Arg 530 535 540 Ala Leu Thr Gly Ser Ala Pro Ala Asp Ile Ala Arg Cys Val Val His 545 550 555 560 Ser Leu Thr Gln Val Leu Ala Leu His Pro Gly Ala Phe Arg Gly Val 565 570 575 Arg Val Ala Val Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asp Ser Ala Val Ala Ile 580 585 590 Ala Thr His Val His Thr Glu Met His Arg Leu Leu Ala Ser Glu Gly 595 600 605 Ala Asp Ala Gly Ser Gly Pro Glu Leu Leu Phe Tyr His Cys Glu Pro 610 615 620 Pro Gly Ser Ala Val Leu Tyr Pro Phe Phe Leu Leu Asn Lys Gln Lys 625 630 635 640 Thr Pro Ala Phe Glu His Phe Ile Lys Lys Phe Asn Ser Gly Gly Val 645 650 655 Met Ala Ser Gln Glu Ile Val Ser Ala Thr Val Arg Leu Gln Thr Asp 660 665 670 Pro Val Glu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Asn Asn Leu Thr Glu Thr Val 675 680 685 Ser Pro Asn Thr Asp Val Arg Thr Tyr Ser Gly Lys Arg Asn Gly Ala 690 695 700 Ser Asp Asp Leu Met Val Ala Val Ile Met Ala Ile Tyr Leu Ala Ala 705 710 715 720 Gln Ala Gly Pro Pro His Thr Phe Ala Pro Ile Thr Arg Val Ser 725 730 735

【００４１】（２）配列番号：２に関する情報：（ｉ）配列の特徴：（Ａ）配列の長さ：１３７４アミノ酸（Ｂ）配列の型：アミノ酸（Ｃ）鎖の数：（Ｄ）トポロジー：不明（ｉｉ）配列の種類：蛋白（ｘｉ）配列の記載：配列番号：２： Met Ala Ala Pro Asn Arg Asp Pro Pro Gly Tyr Arg Tyr Ala Ala Ala 1 5 10 15 Met Val Pro Thr Gly Ser Leu Leu Ser Thr Ile Glu Val Ala Ser His 20 25 30 Arg Arg Leu Phe Asp Phe Phe Ser Arg Val Arg Ser Asp Ala Asn Ser 35 40 45 Leu Tyr Asp Val Glu Phe Asp Ala Leu Leu Gly Ser Tyr Cys Asn Thr 50 55 60 Leu Ser Leu Val Arg Phe Leu Glu Leu Gly Leu Ser Val Ala Cys Val 65 70 75 80 Cys Thr Lys Phe Pro Glu Leu Ala Tyr Met Asn Glu Gly Arg Val Gln 85 90 95 Phe Glu Val His Gln Pro Leu Ile Ala Arg Asp Gly Pro His Pro Ile 100 105 110 Glu Gln Pro Thr His Asn Tyr Met Thr Lys Ile Ile Asp Arg Arg Ala 115 120 125 Leu Asn Ala Ala Phe Ser Leu Ala Thr Glu Ala Ile Ala Leu Leu Thr 130 135 140 Gly Glu Ala Leu Asp Gly Thr Gly Ile Gly Ala His Arg Gln Leu Arg 145 150 155 160 Ala Ile Gln Gln Leu Ala Arg Asn Val Gln Ala Val Leu Gly Ala Phe 165 170 175 Glu Arg Gly Thr Ala Asp Gln Met Leu His Val Leu Leu Glu Lys Ala 180 185 190 Pro Pro Leu Ala Leu Leu Leu Pro Met Gln Arg Tyr Leu Asp Asn Gly 195 200 205 Arg Leu Ala Thr Arg Val Ala Arg Ala Thr Leu Val Ala Glu Leu Lys 210 215 220 Arg Ser Phe Cys Glu Thr Ser Phe Phe Leu Gly Lys Ala Gly His Arg 225 230 235 240 Arg Glu Ala Val Glu Ala Trp Leu Val Asp Leu Thr Thr Ala Thr Gln 245 250 255 Pro Ser Val Ala Val Pro Arg Leu Thr His Ala Asp Thr Arg Gly Arg 260 265 270 Pro Val Asp Gly Val Leu Val Thr Thr Ala Pro Ile Lys Gln Arg Leu 275 280 285 Leu Gln Ser Phe Leu Lys Val Glu Asp Thr Glu Ala Asp Val Pro Val 290 295 300 Thr Tyr Gly Glu Met Val Leu Asn Gly Ala Asn Leu Val Thr Ala Leu 305 310 315 320 Val Met Gly Lys Ala Val Arg Ser Leu Asp Asp Val Gly Arg His Leu 325 330 335 Leu Glu Met Gln Glu Glu Gln Leu Asp Leu Asn Arg Gln Thr Leu Asp 340 345 350 Glu Leu Glu Ser Ala Pro Gln Thr Thr Arg Val Arg Ala Asp Leu Val 355 360 365 Ser Ile Gly Glu Lys Leu Val Phe Leu Glu Ala Leu Glu Lys Arg Ile 370 375 380 Tyr Ala Ala Thr Asn Val Pro Tyr Pro Leu Val Gly Ala Met Asp Leu 385 390 395 400 Thr Phe Val Leu Pro Leu Gly Leu Phe Asn Pro Val Met Glu Arg Phe 405 410 415 Ala Ala His Ala Gly Asp Leu Val Pro Ala Pro Gly His Pro Asp Pro 420 425 430 Arg Ala Phe Pro Pro Arg Gln Leu Phe Phe Trp Gly Lys Asp Arg Gln 435 440 445 Val Leu Arg Leu Ser Leu Glu His Ala Ile Gly Thr Val Cys His Pro 450 455 460 Ser Leu Met Asn Val Asp Ala Ala Val Gly Gly Leu Asn Arg Asp Pro 465 470 475 480 Val Glu Ala Ala Asn Pro Tyr Gly Ala Tyr Val Ala Ala Pro Ala Gly 485 490 495 Pro Ala Ala Asp Met Gln Gln Leu Phe Leu Asn Ala Trp Gly Gln Arg 500 505 510 Leu Ala His Gly Arg Val Arg Trp Val Ala Glu Gly Gln Met Thr Pro 515 520 525 Glu Gln Phe Met Gln Pro Asp Asn Ala Asn Leu Ala Leu Glu Leu His 530 535 540 Pro Ala Phe Asp Phe Phe Val Gly Val Ala Asp Val Glu Leu Pro Gly 545 550 555 560 Gly Asp Val Pro Pro Ala Gly Pro Gly Glu Ile Gln Ala Thr Trp Arg 565 570 575 Val Val Asn Gly Asn Leu Pro Leu Ala Leu Cys Pro Ala Ala Phe Arg 580 585 590 Asp Ala Arg Gly Leu Glu Leu Gly Val Gly Arg His Ala Met Ala Pro 595 600 605 Ala Thr Ile Ala Ala Val Arg Gly Ala Phe Asp Asp Arg Asn Tyr Pro 610 615 620 Ala Val Phe Tyr Leu Leu Gln Ala Ala Ile His Gly Ser Glu His Val 625 630 635 640 Phe Cys Ala Leu Ala Arg Leu Val Val Gln Cys Ile Thr Ser Tyr Trp 645 650 655 Asn Asn Thr Arg Cys Ala Ala Phe Val Asn Asp Tyr Ser Leu Val Ser 660 665 670 Tyr Val Val Thr Tyr Leu Gly Gly Asp Leu Pro Glu Glu Cys Met Ala 675 680 685 Val Tyr Arg Asp Leu Val Ala His Val Glu Ala Leu Ala Gln Leu Val 690 695 700 Asp Asp Phe Thr Leu Thr Gly Pro Glu Leu Gly Gly Gln Ala Gln Ala 705 710 715 720 Glu Leu Asn His Leu Met Arg Asp Pro Ala Leu Leu Pro Pro Leu Val 725 730 735 Trp Asp Cys Asp Ala Leu Met Arg Arg Ala Ala Leu Asp Arg His Arg 740 745 750 Asp Cys Arg Val Ser Ala Gly Gly His Asp Pro Val Tyr Ala Ala Ala 755 760 765 Cys Asn Val Ala Thr Ala Asp Phe Asn Arg Asn Asp Gly Gln Leu Leu 770 775 780 His Asn Thr Gln Ala Arg Ala Ala Asp Ala Ala Asp Asp Arg Pro His 785 790 795 800 Arg Gly Ala Asp Trp Thr Val His His Lys Ile Tyr Tyr Tyr Val Met 805 810 815 Val Pro Ala Phe Ser Arg Gly Arg Cys Cys Thr Ala Gly Val Arg Phe 820 825 830 Asp Arg Val Tyr Ala Thr Leu Gln Asn Met Val Val Pro Glu Ile Ala 835 840 845 Pro Gly Glu Glu Cys Pro Ser Asp Pro Val Thr Asp Pro Ala His Pro 850 855 860 Leu His Pro Ala Asn Leu Val Ala Asn Thr Val Asn Ala Met Phe His 865 870 875 880 Asn Gly Arg Val Val Val Asp Gly Pro Ala Met Leu Thr Leu Gln Val 885 890 895 Leu Ala His Asn Met Ala Glu Arg Thr Thr Ala Leu Leu Cys Ser Ala 900 905 910 Ala Pro Asp Ala Gly Ala Asn Thr Ala Ser Thr Thr Asn Met Arg Ile 915 920 925 Phe Asp Gly Ala Leu His Ala Gly Ile Leu Leu Met Ala Pro Gln His 930 935 940 Leu Asp His Thr Ile Gln Asn Gly Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Pro Val 945 950 955 960 His Ala Leu Phe Ala Gly Ala Asp His Val Ala Asn Ala Pro Asn Phe 965 970 975 Pro Pro Ala Leu Arg Asp Leu Ser Arg Gln Val Pro Leu Val Pro Pro 980 985 990 Ala Leu Gly Ala Asn Tyr Phe Ser Ser Ile Arg Gln Pro Val Val Gln 995 1000 1005 His Val Arg Glu Ser Ala Ala Gly Glu Asn Ala Leu Thr Tyr Ala Leu 1010 1015 1020 Met Ala Gly Tyr Phe Lys Ile Ser Pro Val Ala Leu His His Gln Leu 1025 1030 1035 1040 Lys Thr Gly Leu His Pro Gly Phe Gly Phe Thr Val Val Arg Gln Asp 1045 1050 1055 Arg Phe Val Thr Glu Asn Val Leu Phe Ser Glu Arg Ala Ser Glu Ala 1060 1065 1070 Tyr Phe Leu Gly Gln Leu Gln Val Ala Arg His Glu Thr Gly Gly Gly 1075 1080 1085 Val Asn Phe Thr Leu Thr Gln Pro Arg Ala Asn Val Asp Leu Gly Val 1090 1095 1100 Gly Tyr Thr Ala Val Val Ala Thr Ala Thr Val Arg Asn Pro Val Thr 1105 1110 1115 1120 Asp Met Gly Asn Leu Pro Gln Asn Phe Tyr Leu Gly Arg Gly Ala Pro 1125 1130 1135 Pro Leu Leu Asp Asn Ala Ala Ala Val Tyr Leu Arg Asn Ala Val Val 1140 1145 1150 Ala Gly Asn Arg Leu Gly Pro Ala Gln Pro Val Pro Val Phe Gly Cys 1155 1160 1165 Ala Gln Val Pro Arg Arg Ala Gly Met Asp His Gly Gln Asp Ala Val 1170 1175 1180 Cys Glu Phe Ile Ala Thr Pro Val Ser Thr Asp Val Asn Tyr Phe Arg 1185 1190 1195 1200 Arg Pro Cys Asn Pro Arg Gly Arg Ala Ala Gly Gly Val Tyr Ala Gly 1205 1210 1215 Asp Lys Glu Gly Asp Val Thr Ala Leu Met Tyr Asp His Gly Gln Ser 1220 1225 1230 Asp Pro Ser Arg Ala Phe Ala Ala Thr Ala Asn Pro Trp Ala Ser Gln 1235 1240 1245 Arg Phe Ser Tyr Gly Asp Leu Leu Tyr Asn Gly Ala Tyr His Leu Asn 1250 1255 1260 Gly Ala Ser Pro Val Leu Ser Pro Cys Phe Lys Phe Phe Thr Ser Ala 1265 1270 1275 1280 Asp Ile Ala Ala Lys His Arg Cys Leu Glu Arg Leu Ile Val Glu Thr 1285 1290 1295 Gly Ser Ala Val Ser Thr Ala Thr Ala Ala Ser Asp Val Gln Phe Lys 1300 1305 1310 Arg Pro Pro Gly Cys Arg Glu Leu Val Glu Asp Pro Cys Gly Leu Phe 1315 1320 1325 Gln Glu Ala Tyr Pro Leu Thr Cys Ala Ser Asp Pro Ala Leu Leu Arg 1330 1335 1340 Ser Ala Arg Asn Gly Glu Ala His Ala Arg Glu Thr His Phe Ala Gln 1345 1350 1355 1360 Tyr Leu Val Tyr Asp Ala Ser Pro Leu Lys Gly Leu Ala Leu 1365 1370

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＧ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｇ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＹ 33/569 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記工程：（ａ）単純ヘルペスウイルス−１（ＨＳＶ−１）のＵＬ
１５またはその機能的誘導体もしくは相同体を得て、（ｂ）ＵＬ１５またはその誘導体もしくは相同体を試験
化合物と接触させ、（ｃ）ＨＳＶ−１のＶＰ５またはその機能的誘導体もし
くは相同体を得て、次いで、（ｄ）ＵＬ１５またはその誘導体もしくは相同体および
ＶＰ５またはその誘導体もしくは相同体の間の相互作用
に対する阻害をスクリーニングすることを特徴とするヘ
ルペスウイルス感染の治療に有用な抗ウイルス剤の同定
方法であって、該阻害により、試験化合物が抗ウイルス
剤であることが示される方法。
【請求項２】下記工程：（ａ）単純ヘルペスウイルス−１（ＨＳＶ−１）のＶＰ
５またはその機能的誘導体もしくは相同体を得て、（ｂ）ＶＰ５またはその誘導体もしくは相同体を試験化
合物と接触させ、（ｃ）ＨＳＶ−１のＵＬ１５またはその機能的誘導体も
しくは相同体を得て、次いで、（ｄ）ＶＰ５またはその誘導体もしくは相同体およびＵ
Ｌ１５またはその誘導体もしくは相同体の間の相互作用
に対する阻害をスクリーニングすることを特徴とするヘ
ルペスウイルス感染の治療に有用な抗ウイルス剤の同定
方法であって、該阻害により、試験化合物が抗ウイルス
剤であることが示される方法。
【請求項３】ＵＬ１５またはその機能的誘導体もしく
は相同体およびＶＰ５またはその機能的誘導体もしくは
相同体を含むＵＬ１５／ＶＰ５複合体を試験化合物と接
触させる請求項１または２記載の方法。
【請求項４】試験化合物がＵＬ１５／ＶＰ５複合体と
結合する請求項１または２記載の方法。
【請求項５】試験化合物がＵＬ１５またはその機能的
誘導体もしくは相同体と結合する請求項１または２記載
の方法。
【請求項６】試験化合物がＶＰ５またはその機能的誘
導体もしくは相同体と結合する請求項１または２記載の
方法。
【請求項７】ＵＬ１５の機能的誘導体が（ａ）配列番号：１、（ｂ）配列番号：１由来のペプチド、（ｃ）（ａ）もしくは（ｂ）および選択融合パートナー
を含む融合蛋白、ならびに（ｄ）（ａ）もしくは（ｂ）および選択マーカーもしく
はタグを含む、タグを付した蛋白からなる群より選択さ
れる請求項１または２記載の方法。
【請求項８】ＵＬ１５ペプチドが（ａ）配列番号：１
のほぼアミノ酸１からほぼアミノ酸４０９まで、および
（ｂ）配列番号：１のほぼアミノ酸１からほぼアミノ酸
５０８までからなる群より選択される請求項７記載の方
法。
【請求項９】融合パートナーがＧＳＴ、Ｇａｌ４、ｌ
ｅｘＡ、マルトース結合蛋白、ｌａｃＺ、およびＴｒｐ
からなる群より選択される請求項７記載の方法。
【請求項１０】ＶＰ５の機能的誘導体が（ａ）配列番号：２、（ｂ）配列番号：２由来の配列、（ｃ）（ａ）もしくは（ｂ）および選択融合パートナー
を含む融合蛋白、ならびに（ｄ）（ａ）もしくは（ｂ）および選択マーカーもしく
はエピトープタグを含む、タグを付した蛋白からなる群
より選択される請求項１または２記載の方法。
【請求項１１】ＵＬ１５相同体が帯状疱疹ウイルスの
ＯＲＦ４２／４５、ヒト・サイトメガロウイルスのＵＬ８９、エプステイン−バーウイルスのＢＤ／ＢＧＲＦ１、およ
びＮＣＢＩｇｉ３２５４９６中のヒト・ヘルペスウイル
ス６からなる群より選択される請求項１または２記載の
方法。
【請求項１２】ＵＬ１５が固体支持体上に固定化され
る請求項１または２記載の方法。
【請求項１３】ＶＰ５が固体支持体上に固定化される
請求項１または２記載の方法。
【請求項１４】該スクリーニングが酵母２−ハイブリ
ッドスクリーニングである請求項１または２記載の方
法。
【請求項１５】該スクリーニングが酵素結合免疫吸着
アッセイである請求項１または２記載の方法。
【請求項１６】試験化合物が固体支持体上に固定化さ
れる請求項１または２記載の方法。
【請求項１７】該試験化合物が化学的作用剤である請
求項１または２記載の方法。
【請求項１８】該試験化合物がポリペプチドである請
求項１または２記載の方法。
【請求項１９】該試験化合物が細胞内抗体である請求
項１または２記載の方法。
【請求項２０】工程（ｂ）および（ｃ）が実質的に同
時に行われる請求項１または２記載の方法。
【請求項２１】請求項１または２記載の方法により同
定される化合物。
【請求項２２】請求項２１記載の化合物および医薬上
許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２３】ＵＬ１５またはその機能的誘導体もし
くは相同体およびＶＰ５またはその機能的誘導体もしく
は相同体を含むＵＬ１５／ＶＰ５複合体を機能的に阻害
する抗ウイルス剤を同定する方法であって、下記工程：（ａ）ヘルペスウイルスに感染した細胞を得て、（ｂ）試験化合物を含有する試料をヘルペス感染細胞と
接触させ、（ｃ）ヘルペスウイルスを阻害する試験化合物を同定
し、次いで、（ｄ）（ｃ）において同定された試験化合物を、ＵＬ１
５／ＶＰ５複合体の機能をブロックする能力についてス
クリーニングすることを特徴とする方法。
【請求項２４】ＵＬ１５またはその機能的誘導体もし
くは相同体およびＶＰ５またはその機能的誘導体もしく
は相同体を含むＵＬ１５／ＶＰ５複合体を機能的に阻害
する抗ウイルス剤を同定する方法であって、下記工程：（ａ）ＵＬ１５／ＶＰ５複合体を含有する無細胞系を得
て、（ｂ）試験化合物を含有する試料を該複合体と接触さ
せ、次いで、（ｃ）ＵＬ１５／ＶＰ５複合体の機能を阻害する試験化
合物を同定することを特徴とする方法。
【請求項２５】ＵＬ１５またはその機能的誘導体もし
くは相同体およびＶＰ５またはその機能的誘導体もしく
は相同体を含むＵＬ１５／ＶＰ５複合体を機能的に阻害
する抗ウイルス剤を同定する方法であって、下記工程：（ａ）ＵＬ１５およびＶＰ５を発現する細胞を得て、（ｂ）試験化合物を含有する試料をＵＬ１５、ＶＰ５を
発現する細胞と接触させ、次いで、（ｃ）ＵＬ１５／ＶＰ５複合体の機能を阻害する試験化
合物を同定することを特徴とする方法。
【請求項２６】請求項２３ないし２５のいずれかによ
り同定される抗ウイルス剤。