JPH10293129A - リン脂質中のエンドトキシン測定法 - Google Patents
リン脂質中のエンドトキシン測定法Info
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- JPH10293129A JPH10293129A JP10119797A JP10119797A JPH10293129A JP H10293129 A JPH10293129 A JP H10293129A JP 10119797 A JP10119797 A JP 10119797A JP 10119797 A JP10119797 A JP 10119797A JP H10293129 A JPH10293129 A JP H10293129A
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Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 リン脂質中のエンドトキシンをＬＡＬ成分を
用いた合成基質法で正確に測定する方法を提供する。 【解決手段】 リン脂質を陰イオン性高分子金属塩およ
びアルカリ金属塩を含有する水中に乳化または分散した
後、リン脂質を除去した残りの水のエンドトキシンを定
量することを特徴とするリン脂質中のエンドトキシン測
定方法。
用いた合成基質法で正確に測定する方法を提供する。 【解決手段】 リン脂質を陰イオン性高分子金属塩およ
びアルカリ金属塩を含有する水中に乳化または分散した
後、リン脂質を除去した残りの水のエンドトキシンを定
量することを特徴とするリン脂質中のエンドトキシン測
定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、リン脂質中のエン
ドトキシンの測定法に関するものである。
ドトキシンの測定法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】エンドトキシンは、致死性、発熱性、ア
ジュバント作用等、多彩な生物活性を示す他、グラム陰
性菌感染時のショックや、敗血症等、重篤な症状を引き
起こす物質として知られている。また発熱物質としては
最も強力なものであり、これの医薬品、血液製剤、ワク
チンへの混入は重大な副作用の原因となり、その混入の
度合いについて厳重な管理が必要となっている。リン脂
質は近年ドラッグ・デリバリー・システムの一つとして
リポソーム製剤への応用が医薬品メーカーにおいて精力
的に進められている。リポソーム製剤の投与方法として
は現在静脈注射投与が主流である。静脈注射投与する場
合、リポソーム製剤中のエンドトキシン量が非常に大き
な問題となるため、日本薬局方では発熱性物質の試験項
目を設け、製剤中のエンドトキシン量を規制している。
したがってリポソーム製剤の基材として用いられるリン
脂質中のエンドトキシンを測定する方法が求められてい
る。
ジュバント作用等、多彩な生物活性を示す他、グラム陰
性菌感染時のショックや、敗血症等、重篤な症状を引き
起こす物質として知られている。また発熱物質としては
最も強力なものであり、これの医薬品、血液製剤、ワク
チンへの混入は重大な副作用の原因となり、その混入の
度合いについて厳重な管理が必要となっている。リン脂
質は近年ドラッグ・デリバリー・システムの一つとして
リポソーム製剤への応用が医薬品メーカーにおいて精力
的に進められている。リポソーム製剤の投与方法として
は現在静脈注射投与が主流である。静脈注射投与する場
合、リポソーム製剤中のエンドトキシン量が非常に大き
な問題となるため、日本薬局方では発熱性物質の試験項
目を設け、製剤中のエンドトキシン量を規制している。
したがってリポソーム製剤の基材として用いられるリン
脂質中のエンドトキシンを測定する方法が求められてい
る。
【０００３】カブトガニ・アメボサイト・ライセート
（Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔ
ｅ、以下ＬＡＬと略す）成分を用いたエンドトキシンの
測定法としては、ゲル化法と合成基質法の二つが既に確
立されている。たとえば、ゲル化法としては、プレゲル
（Ｓ）〔生化学工業（株）〕やリムルス（ＨＳ）テスト
ワコー〔和光純薬工業（株）〕など、合成基質法として
は、トキシカラーシステムやエンドトキシンテスト−Ｄ
〔いずれも生化学工業（株）〕などがキット化され、市
販されている。
（Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔ
ｅ、以下ＬＡＬと略す）成分を用いたエンドトキシンの
測定法としては、ゲル化法と合成基質法の二つが既に確
立されている。たとえば、ゲル化法としては、プレゲル
（Ｓ）〔生化学工業（株）〕やリムルス（ＨＳ）テスト
ワコー〔和光純薬工業（株）〕など、合成基質法として
は、トキシカラーシステムやエンドトキシンテスト−Ｄ
〔いずれも生化学工業（株）〕などがキット化され、市
販されている。
【０００４】ゲル化法は、反応および測定時の振動に影
響されやすく、また測定に際して主観が入りやすい。さ
らに、定性的な試験法であるので、定量的にエンドトキ
シンの濃度を求めるには、試料の希釈系列を調整しなけ
ればならないという煩雑さがあるうえに、定量精度も低
いという難点がある。これに対して、合成基質法は、比
色定量を行うので、客観的な測定が可能であるととも
に、ゲル化法の数十倍以上の感度で定量できるすぐれた
方法である。しかし、これらの測定方法は、いずれも水
系で行うため、水に難溶性のリン脂質中のエンドトキシ
ン量を測定することは困難であった。
響されやすく、また測定に際して主観が入りやすい。さ
らに、定性的な試験法であるので、定量的にエンドトキ
シンの濃度を求めるには、試料の希釈系列を調整しなけ
ればならないという煩雑さがあるうえに、定量精度も低
いという難点がある。これに対して、合成基質法は、比
色定量を行うので、客観的な測定が可能であるととも
に、ゲル化法の数十倍以上の感度で定量できるすぐれた
方法である。しかし、これらの測定方法は、いずれも水
系で行うため、水に難溶性のリン脂質中のエンドトキシ
ン量を測定することは困難であった。
【０００５】リン脂質中のエンドトキシンの測定方法と
しては、特開平５−２３００８３号公報に開示されてい
る方法があるが、これは、リン脂質中のエンドトキシン
を水で抽出したのち、水からリン脂質を除去し、その水
に含まれるエンドトキシン量を測定する方法である。
しては、特開平５−２３００８３号公報に開示されてい
る方法があるが、これは、リン脂質中のエンドトキシン
を水で抽出したのち、水からリン脂質を除去し、その水
に含まれるエンドトキシン量を測定する方法である。
【０００６】ところが、特開平５−３２００４３号公報
には、リン脂質、コレステロール及び飽和脂肪酸からな
るリポソームまたは当該リポソームを含有する水溶液
が、エンドトキシン捕捉剤となることが示されており、
リン脂質が水中で形成するリポソームは、エンドトキシ
ンを捕捉する可能性があり、エンドトキシンが水中に完
全には抽出されず、正確な測定値が得られない恐れがあ
る。
には、リン脂質、コレステロール及び飽和脂肪酸からな
るリポソームまたは当該リポソームを含有する水溶液
が、エンドトキシン捕捉剤となることが示されており、
リン脂質が水中で形成するリポソームは、エンドトキシ
ンを捕捉する可能性があり、エンドトキシンが水中に完
全には抽出されず、正確な測定値が得られない恐れがあ
る。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記のよう
な従来技術の問題点を解決し、リン脂質中のエンドトキ
シンをＬＡＬ成分を用いた合成基質法で正確に測定する
方法を提供することを目的としている。
な従来技術の問題点を解決し、リン脂質中のエンドトキ
シンをＬＡＬ成分を用いた合成基質法で正確に測定する
方法を提供することを目的としている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、リン
脂質を陰イオン性高分子金属塩およびアルカリ金属塩を
含有する水中に乳化または分散した後、リン脂質を除去
した残りの水からエンドトキシンを定量することを特徴
とするリン脂質中のエンドトキシン測定方法である
脂質を陰イオン性高分子金属塩およびアルカリ金属塩を
含有する水中に乳化または分散した後、リン脂質を除去
した残りの水からエンドトキシンを定量することを特徴
とするリン脂質中のエンドトキシン測定方法である
【０００９】
【発明の実施の形態】エンドトキシンの測定を行うリン
脂質としては、特に制限されず、例えば大豆レシチン、
卵黄レシチン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジ
ミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホ
スファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコ
リンなど天然物由来または合成により得られたリン脂質
あるいはこれらが形成するリポソームが広く測定対象と
なる。リン脂質の水に対する割合は水１００重量部に対
して０．１〜５重量部、好ましくは０．５〜２重量部で
ある。０．１重量部未満ではエンドトキシンの測定精度
が悪くなり、５重量部を超えるとリン脂質と水の分離が
悪くなり、エンドトキシンの測定精度も悪くなる。
脂質としては、特に制限されず、例えば大豆レシチン、
卵黄レシチン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジ
ミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホ
スファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコ
リンなど天然物由来または合成により得られたリン脂質
あるいはこれらが形成するリポソームが広く測定対象と
なる。リン脂質の水に対する割合は水１００重量部に対
して０．１〜５重量部、好ましくは０．５〜２重量部で
ある。０．１重量部未満ではエンドトキシンの測定精度
が悪くなり、５重量部を超えるとリン脂質と水の分離が
悪くなり、エンドトキシンの測定精度も悪くなる。
【００１０】本発明に用いる陰イオン性高分子金属塩と
しては、ＬＡＬ成分とエンドトキシンの反応に影響を及
ぼさないものであれば良く、例えばポリアクリル酸ナト
リウム塩、ポリビニルスルホン酸ナトリウム塩、ポリス
チレンスルホン酸ナトリウム塩、スチレン・マレイン酸
共重合物ナトリウム塩、酢酸ビニル・マレイン酸共重合
物ナトリウム塩などが挙げられる。また、その分子量
は、重量平均分子量５００〜３００００、好ましくは重
量平均分子量１０００〜１００００であり、５００未満
あるいは３００００を超えると測定精度が悪くなる。使
用量は、水１００重量部に対して、０．０１〜０．５重
量部、好ましくは０．０２〜０．０４重量部であり、
０．０１重量部未満あるいは０．５重量部を超えると測
定精度が悪くなる。
しては、ＬＡＬ成分とエンドトキシンの反応に影響を及
ぼさないものであれば良く、例えばポリアクリル酸ナト
リウム塩、ポリビニルスルホン酸ナトリウム塩、ポリス
チレンスルホン酸ナトリウム塩、スチレン・マレイン酸
共重合物ナトリウム塩、酢酸ビニル・マレイン酸共重合
物ナトリウム塩などが挙げられる。また、その分子量
は、重量平均分子量５００〜３００００、好ましくは重
量平均分子量１０００〜１００００であり、５００未満
あるいは３００００を超えると測定精度が悪くなる。使
用量は、水１００重量部に対して、０．０１〜０．５重
量部、好ましくは０．０２〜０．０４重量部であり、
０．０１重量部未満あるいは０．５重量部を超えると測
定精度が悪くなる。
【００１１】本発明に用いるアルカリ金属塩としては、
弗化リチウム、弗化ナトリウム、弗化カリウム、塩化リ
チウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化リチウ
ム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、よう化リチウム、
よう化ナトリウム、よう化カリウムなどが挙げられる
が、好ましくは塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウムなどが挙げられる。使用量は、水１００重量部に
対して、０．０１〜２重量部の範囲で使用することが好
ましく、０．０１未満あるいは２重量部を超えると測定
精度が下がる傾向がある。
弗化リチウム、弗化ナトリウム、弗化カリウム、塩化リ
チウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化リチウ
ム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、よう化リチウム、
よう化ナトリウム、よう化カリウムなどが挙げられる
が、好ましくは塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウムなどが挙げられる。使用量は、水１００重量部に
対して、０．０１〜２重量部の範囲で使用することが好
ましく、０．０１未満あるいは２重量部を超えると測定
精度が下がる傾向がある。
【００１２】本発明に用いる水はエンドトキシンの含有
量が少ないものが好ましく、例えば蒸留水、注射用蒸留
水、生理食塩水などが挙げられるが、好ましくは塩化ナ
トリウムを含有している生理食塩水である。本発明にお
いて、リン脂質と水を乳化または分散する方法は、通常
用いられる撹拌機、乳化機などを使用することができ
る。リン脂質の除去は、濾過または遠心分離機によって
行う。たとえば遠心分離の場合、回転数は高いほど分離
がよくなり、分離効率および測定精度がよくなる。
量が少ないものが好ましく、例えば蒸留水、注射用蒸留
水、生理食塩水などが挙げられるが、好ましくは塩化ナ
トリウムを含有している生理食塩水である。本発明にお
いて、リン脂質と水を乳化または分散する方法は、通常
用いられる撹拌機、乳化機などを使用することができ
る。リン脂質の除去は、濾過または遠心分離機によって
行う。たとえば遠心分離の場合、回転数は高いほど分離
がよくなり、分離効率および測定精度がよくなる。
【００１３】
【発明の効果】本発明のリン脂質中のエンドトキシン測
定法により、エンドトキシンを高い精度で定量すること
ができる。
定法により、エンドトキシンを高い精度で定量すること
ができる。
【００１４】
【実施例】つぎに、実施例によって本発明を具体的に説
明する。なお、実施例で使用した器具は、すべて２５０
℃、５時間の加熱滅菌処理を行ったものを用いた。ま
た、測定結果に用いた「ＥＵ」はエンドトキシン単位
で、エンドトキシンによるＬＡＬのゲル化活性を表す単
位である。
明する。なお、実施例で使用した器具は、すべて２５０
℃、５時間の加熱滅菌処理を行ったものを用いた。ま
た、測定結果に用いた「ＥＵ」はエンドトキシン単位
で、エンドトキシンによるＬＡＬのゲル化活性を表す単
位である。
【００１５】実施例１ １００ｍｌのスクリュー管に、ポリアクリル酸ナトリウ
ム塩水溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２
００、４５重量％）６０μｌを取り、生理食塩水（塩化
ナトリウム０．９重量％含有、大塚製薬（株）製）を加
えて全量を６０ｍｌとし試験液１を得た。この試験液１
の１０ｍｌにジパルミトイルホスファチジルコリン（以
下、ＤＰＰＣと略す）１００ｍｇを添加して、ボルテッ
クスミキサーで撹拌したのち、３０分間超音波処理（シ
ャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化した。この乳化
物を遠心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ−２０００Ｃ）
を用いて５０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、ＤＰＰ
Ｃを除去した水を得た。これを試験液２とする。また、
これとは別に５０ｍｌのスクリュー管３本にエンドトキ
シン水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、
５０μｌ、１００μｌを取り、試験液１を加えてそれぞ
れ全量を１０ｍｌとし、さらにＤＰＰＣ１００ｍｇを添
加して、上記と同様の操作により、ＤＰＰＣを除去した
水をそれぞれ調製した。得られた各試験液を順に試験液
３（エンドトキシン含有量０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験
液４（エンドトキシン含有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試
験液５（エンドトキシン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）と
し、試験液１から試験液５の各１００μｌを用い、トキ
シカラーシステム（生化学工業（株）製）の操作方法に
従い、５４５ｎｍで比色定量を行った。結果を表１に示
す。
ム塩水溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２
００、４５重量％）６０μｌを取り、生理食塩水（塩化
ナトリウム０．９重量％含有、大塚製薬（株）製）を加
えて全量を６０ｍｌとし試験液１を得た。この試験液１
の１０ｍｌにジパルミトイルホスファチジルコリン（以
下、ＤＰＰＣと略す）１００ｍｇを添加して、ボルテッ
クスミキサーで撹拌したのち、３０分間超音波処理（シ
ャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化した。この乳化
物を遠心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ−２０００Ｃ）
を用いて５０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、ＤＰＰ
Ｃを除去した水を得た。これを試験液２とする。また、
これとは別に５０ｍｌのスクリュー管３本にエンドトキ
シン水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、
５０μｌ、１００μｌを取り、試験液１を加えてそれぞ
れ全量を１０ｍｌとし、さらにＤＰＰＣ１００ｍｇを添
加して、上記と同様の操作により、ＤＰＰＣを除去した
水をそれぞれ調製した。得られた各試験液を順に試験液
３（エンドトキシン含有量０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験
液４（エンドトキシン含有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試
験液５（エンドトキシン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）と
し、試験液１から試験液５の各１００μｌを用い、トキ
シカラーシステム（生化学工業（株）製）の操作方法に
従い、５４５ｎｍで比色定量を行った。結果を表１に示
す。
【００１６】
【表１】
【００１７】表１から明らかなように、添加したエンド
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシンの測定法により、サンプル中のエンド
トキシンを簡便に測定することができた。
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシンの測定法により、サンプル中のエンド
トキシンを簡便に測定することができた。
【００１８】実施例２ ５０ｍｌのスクリュー管３本に、エンドトキシン水溶液
（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、５０μｌ、
１００μｌ取り、生理食塩水（塩化ナトリウム０．９重
量％含有、大塚製薬（株）製）にて全量を１０ｍｌとし
た。さらにそれぞれＤＰＰＣ１００ｍｇを添加して、ボ
ルテックスミキサーで撹拌したのち、３０分間超音波処
理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化し、それ
ぞれ０．０２ＥＵ／ｍｌ、０．０５ＥＵ／ｍｌ、０．１
ＥＵ／ｍｌの濃度でエンドトキシンを含有するＤＰＰＣ
リポソーム溶液３種を得た。この３種のＤＰＰＣリポソ
ーム溶液にそれぞれポリアクリル酸ナトリウム塩水溶液
（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２００、４５
重量％）１０μｌを添加し混合後２０分間超音波処理
（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）を行い、上記と同様
の操作により、ＤＰＰＣを除去した水をそれぞれ調製し
た。得られた各試験液を順に試験液６（エンドトキシン
含有量０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験液７（エンドトキシ
ン含有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液８（エンドトキ
シン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、それぞれ１００μ
ｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工業（株）
製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量を行っ
た。結果を表２に示す。
（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、５０μｌ、
１００μｌ取り、生理食塩水（塩化ナトリウム０．９重
量％含有、大塚製薬（株）製）にて全量を１０ｍｌとし
た。さらにそれぞれＤＰＰＣ１００ｍｇを添加して、ボ
ルテックスミキサーで撹拌したのち、３０分間超音波処
理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化し、それ
ぞれ０．０２ＥＵ／ｍｌ、０．０５ＥＵ／ｍｌ、０．１
ＥＵ／ｍｌの濃度でエンドトキシンを含有するＤＰＰＣ
リポソーム溶液３種を得た。この３種のＤＰＰＣリポソ
ーム溶液にそれぞれポリアクリル酸ナトリウム塩水溶液
（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２００、４５
重量％）１０μｌを添加し混合後２０分間超音波処理
（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）を行い、上記と同様
の操作により、ＤＰＰＣを除去した水をそれぞれ調製し
た。得られた各試験液を順に試験液６（エンドトキシン
含有量０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験液７（エンドトキシ
ン含有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液８（エンドトキ
シン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、それぞれ１００μ
ｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工業（株）
製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量を行っ
た。結果を表２に示す。
【００１９】
【表２】
【００２０】表２から明らかなように、添加したエンド
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシン測定法により、リポソーム中に含有さ
れたエンドトキシンを簡便に測定することができた。
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシン測定法により、リポソーム中に含有さ
れたエンドトキシンを簡便に測定することができた。
【００２１】比較例１ ５０ｍｌのスクリュー管に、注射用蒸留水（大塚製薬
（株）製）１０ｍｌを取り、ＤＰＰＣ１００ｍｇを添加
して、ボルテックスミキサーで撹拌したのち、３０分間
超音波処理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化
した。この乳化物を遠心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ
−２０００Ｃ）を用いて５０００ｒｐｍ、３０分間遠心
分離し、ＤＰＰＣを除去した水を得た。これを試験液１
０とする。また、これとは別に５０ｍｌのスクリュー管
３本に、エンドトキシン水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）を
それぞれ２０μｌ、５０μｌ、１００μｌ取り、注射用
蒸留水（大塚製薬（株）製）にて全量を１０ｍｌとし、
ＤＰＰＣ１００ｍｇを添加して、上記と同様の操作によ
り、ＤＰＰＣを除去した水をそれぞれ調製した。得られ
た各試験液を順に試験液１１（エンドトキシン含有量
０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験液１２（エンドトキシン含
有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液１３（エンドトキシ
ン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、試験液１０から試験
液１３の各１００μｌを用い、トキシカラーシステム
（生化学工業（株）製）の操作方法に従い、５４５ｎｍ
で比色定量を行った。結果を表３に示す。
（株）製）１０ｍｌを取り、ＤＰＰＣ１００ｍｇを添加
して、ボルテックスミキサーで撹拌したのち、３０分間
超音波処理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化
した。この乳化物を遠心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ
−２０００Ｃ）を用いて５０００ｒｐｍ、３０分間遠心
分離し、ＤＰＰＣを除去した水を得た。これを試験液１
０とする。また、これとは別に５０ｍｌのスクリュー管
３本に、エンドトキシン水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）を
それぞれ２０μｌ、５０μｌ、１００μｌ取り、注射用
蒸留水（大塚製薬（株）製）にて全量を１０ｍｌとし、
ＤＰＰＣ１００ｍｇを添加して、上記と同様の操作によ
り、ＤＰＰＣを除去した水をそれぞれ調製した。得られ
た各試験液を順に試験液１１（エンドトキシン含有量
０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験液１２（エンドトキシン含
有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液１３（エンドトキシ
ン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、試験液１０から試験
液１３の各１００μｌを用い、トキシカラーシステム
（生化学工業（株）製）の操作方法に従い、５４５ｎｍ
で比色定量を行った。結果を表３に示す。
【００２２】
【表３】
【００２３】表３から明らかなように、陰イオン性高分
子金属塩およびアルカリ金属塩非存在下では、添加した
エンドトキシンの検出率は１０〜１５％と低く、正確な
測定値が得られないことがわかる。
子金属塩およびアルカリ金属塩非存在下では、添加した
エンドトキシンの検出率は１０〜１５％と低く、正確な
測定値が得られないことがわかる。
【００２４】比較例２ １００ｍｌのスクリュー管に、注射用蒸留水（大塚製薬
（株）製）６０ｍｌを取り、ポリアクリル酸ナトリウム
塩水溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２０
０、４５重量％）６０μｌを添加し混合して試験液１４
を得た。この試験液１４の１０ｍｌにＤＰＰＣ１００ｍ
ｇを添加して、ボルテックスミキサーで撹拌したのち、
３０分間超音波処理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）
して乳化した。この乳化物を遠心分離機（国産遠心機
（株）製Ｈ−２０００Ｃ）を用いて５０００ｒｐｍ、３
０分間遠心分離し、ＤＰＰＣを除去した水を得た。これ
を試験液１５とする。また、これとは別に５０ｍｌのス
クリュー管３本にエンドトキシン水溶液（１００ＥＵ／
ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、５０μｌ、１００μｌ取
り、試験液１４にて全量を１０ｍｌとし、ＤＰＰＣ１０
０ｍｇを添加して、上記と同様の操作により、ＤＰＰＣ
を除去した水をそれぞれ調製した。得られた各試験液を
順に試験液１６（エンドトキシン含有量０．０２ＥＵ／
ｍｌ）、試験液１７（エンドトキシン含有量０．０５Ｅ
Ｕ／ｍｌ）、試験液１８（エンドトキシン含有量０．１
ＥＵ／ｍｌ）とし、試験液１４から試験液１８の各１０
０μｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工業
（株）製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量を
行った。結果を表４に示す。
（株）製）６０ｍｌを取り、ポリアクリル酸ナトリウム
塩水溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２０
０、４５重量％）６０μｌを添加し混合して試験液１４
を得た。この試験液１４の１０ｍｌにＤＰＰＣ１００ｍ
ｇを添加して、ボルテックスミキサーで撹拌したのち、
３０分間超音波処理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）
して乳化した。この乳化物を遠心分離機（国産遠心機
（株）製Ｈ−２０００Ｃ）を用いて５０００ｒｐｍ、３
０分間遠心分離し、ＤＰＰＣを除去した水を得た。これ
を試験液１５とする。また、これとは別に５０ｍｌのス
クリュー管３本にエンドトキシン水溶液（１００ＥＵ／
ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、５０μｌ、１００μｌ取
り、試験液１４にて全量を１０ｍｌとし、ＤＰＰＣ１０
０ｍｇを添加して、上記と同様の操作により、ＤＰＰＣ
を除去した水をそれぞれ調製した。得られた各試験液を
順に試験液１６（エンドトキシン含有量０．０２ＥＵ／
ｍｌ）、試験液１７（エンドトキシン含有量０．０５Ｅ
Ｕ／ｍｌ）、試験液１８（エンドトキシン含有量０．１
ＥＵ／ｍｌ）とし、試験液１４から試験液１８の各１０
０μｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工業
（株）製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量を
行った。結果を表４に示す。
【００２５】
【表４】
【００２６】表４から明らかなように、アルカリ金属塩
非存在下では、添加したエンドトキシンの検出率は２５
％前後と低く、正確な測定値が得られないことがわか
る。
非存在下では、添加したエンドトキシンの検出率は２５
％前後と低く、正確な測定値が得られないことがわか
る。
【００２７】比較例３ ５０ｍｌのスクリュー管に、生理食塩水（塩化ナトリウ
ム０．９重量％含有、大塚製薬（株）製）１０ｍｌを取
り、ＤＰＰＣ１００ｍｇを添加して、ボルテックスミキ
サーで撹拌したのち、３０分間超音波処理（シャープ
（株）製ＵＴ−１０５）して乳化した。この乳化物を遠
心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ−２０００Ｃ）を用い
て５０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、ＤＰＰＣを除
去した水を得た。これを試験液１９とする。また、これ
とは別に５０ｍｌのスクリュー管３本にエンドトキシン
水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、５０
μｌ、１００μｌ取り、生理食塩水（塩化ナトリウム
０．９重量％含有、大塚製薬（株）製）にて全量を１０
ｍｌとし、ＤＰＰＣ１００ｍｇを添加して、上記と同様
の操作により、ＤＰＰＣを除去した水をそれぞれ調製し
た。得られた各試験液を順に試験液２０（エンドトキシ
ン含有量０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験液２１（エンドト
キシン含有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液２２（エン
ドトキシン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、試験液１９
から試験液２２の各１００μｌを用い、トキシカラーシ
ステム（生化学工業（株）製）の操作方法に従い、５４
５ｎｍで比色定量を行った。。結果を表５に示す。
ム０．９重量％含有、大塚製薬（株）製）１０ｍｌを取
り、ＤＰＰＣ１００ｍｇを添加して、ボルテックスミキ
サーで撹拌したのち、３０分間超音波処理（シャープ
（株）製ＵＴ−１０５）して乳化した。この乳化物を遠
心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ−２０００Ｃ）を用い
て５０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、ＤＰＰＣを除
去した水を得た。これを試験液１９とする。また、これ
とは別に５０ｍｌのスクリュー管３本にエンドトキシン
水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、５０
μｌ、１００μｌ取り、生理食塩水（塩化ナトリウム
０．９重量％含有、大塚製薬（株）製）にて全量を１０
ｍｌとし、ＤＰＰＣ１００ｍｇを添加して、上記と同様
の操作により、ＤＰＰＣを除去した水をそれぞれ調製し
た。得られた各試験液を順に試験液２０（エンドトキシ
ン含有量０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験液２１（エンドト
キシン含有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液２２（エン
ドトキシン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、試験液１９
から試験液２２の各１００μｌを用い、トキシカラーシ
ステム（生化学工業（株）製）の操作方法に従い、５４
５ｎｍで比色定量を行った。。結果を表５に示す。
【００２８】
【表５】
【００２９】表５から明らかなように、陰イオン性高分
子金属塩非存在下では、添加したエンドトキシンの検出
率は２０〜３０％と低く、正確な測定値が得られないこ
とがわかる。
子金属塩非存在下では、添加したエンドトキシンの検出
率は２０〜３０％と低く、正確な測定値が得られないこ
とがわかる。
【００３０】実施例３ １００ｍｌのスクリュー管に、ポリアクリル酸ナトリウ
ム塩水溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２
００、４５重量％）６０μｌを取り、生理食塩水（塩化
ナトリウム０．９重量％含有、大塚製薬（株）製）を加
えて全量を６０ｍｌとし試験液２３を得た。この試験液
２３の１０ｍｌにジステアロイルホスファチジルコリン
（以下、ＤＳＰＣと略す）１００ｍｇを添加して、ボル
テックスミキサーで撹拌したのち、３０分間超音波処理
（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化した。この
乳化物を遠心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ−２０００
Ｃ）を用いて５０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、Ｄ
ＳＰＣを除去した水を得た。これを試験液２４とする。
また、これとは別に５０ｍｌのスクリュー管３本にエン
ドトキシン水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０
μｌ、５０μｌ、１００μｌを取り、試験液２３を加え
てそれぞれ全量を１０ｍｌとし、さらにＤＳＰＣ１００
ｍｇを添加して、上記と同様の操作により、ＤＳＰＣを
除去した水をそれぞれ調製した。得られた各試験液を順
に試験液２５（エンドトキシン含有量０．０２ＥＵ／ｍ
ｌ）、試験液２６（エンドトキシン含有量０．０５ＥＵ
／ｍｌ）、試験液２７（エンドトキシン含有量０．１Ｅ
Ｕ／ｍｌ）とし、試験液２３から試験液２７の各１００
μｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工業（株）
製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量を行っ
た。。結果を表６に示す。
ム塩水溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２
００、４５重量％）６０μｌを取り、生理食塩水（塩化
ナトリウム０．９重量％含有、大塚製薬（株）製）を加
えて全量を６０ｍｌとし試験液２３を得た。この試験液
２３の１０ｍｌにジステアロイルホスファチジルコリン
（以下、ＤＳＰＣと略す）１００ｍｇを添加して、ボル
テックスミキサーで撹拌したのち、３０分間超音波処理
（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化した。この
乳化物を遠心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ−２０００
Ｃ）を用いて５０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、Ｄ
ＳＰＣを除去した水を得た。これを試験液２４とする。
また、これとは別に５０ｍｌのスクリュー管３本にエン
ドトキシン水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０
μｌ、５０μｌ、１００μｌを取り、試験液２３を加え
てそれぞれ全量を１０ｍｌとし、さらにＤＳＰＣ１００
ｍｇを添加して、上記と同様の操作により、ＤＳＰＣを
除去した水をそれぞれ調製した。得られた各試験液を順
に試験液２５（エンドトキシン含有量０．０２ＥＵ／ｍ
ｌ）、試験液２６（エンドトキシン含有量０．０５ＥＵ
／ｍｌ）、試験液２７（エンドトキシン含有量０．１Ｅ
Ｕ／ｍｌ）とし、試験液２３から試験液２７の各１００
μｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工業（株）
製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量を行っ
た。。結果を表６に示す。
【００３１】
【表６】
【００３２】表６から明らかなように、添加したエンド
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシンの測定法により、サンプル中のエンド
トキシンを簡便に測定することができた。
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシンの測定法により、サンプル中のエンド
トキシンを簡便に測定することができた。
【００３３】実施例４ ５０ｍｌのスクリュー管３本に、エンドトキシン水溶液
（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、５０μｌ、
１００μｌを取り、生理食塩水（塩化ナトリウム０．９
重量％含有、大塚製薬（株）製）にて全量を１０ｍｌと
した。さらにそれぞれＤＳＰＣ１００ｍｇを添加して、
ボルテックスミキサーで撹拌したのち、３０分間超音波
処理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化し、そ
れぞれ０．０２ＥＵ／ｍｌ、０．０５ＥＵ／ｍｌ、０．
１ＥＵ／ｍｌの濃度でエンドトキシンを含有するＤＳＰ
Ｃリポソーム溶液３種を得た。この３種のＤＳＰＣリポ
ソーム溶液にそれぞれポリアクリル酸ナトリウム水溶液
（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２００、４５
重量％）１０μｌを添加し混合後２０分間超音波処理
（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）を行い、上記と同様
の操作により、ＤＳＰＣを除去した水をそれぞれ調製し
た。得られた各試験液を順に試験液２８（エンドトキシ
ン含有量０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験液２９（エンドト
キシン含有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液３０（エン
ドトキシン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、それぞれ１
００μｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工業
（株）製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量を
行った。結果を表７に示す。
（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれぞれ２０μｌ、５０μｌ、
１００μｌを取り、生理食塩水（塩化ナトリウム０．９
重量％含有、大塚製薬（株）製）にて全量を１０ｍｌと
した。さらにそれぞれＤＳＰＣ１００ｍｇを添加して、
ボルテックスミキサーで撹拌したのち、３０分間超音波
処理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化し、そ
れぞれ０．０２ＥＵ／ｍｌ、０．０５ＥＵ／ｍｌ、０．
１ＥＵ／ｍｌの濃度でエンドトキシンを含有するＤＳＰ
Ｃリポソーム溶液３種を得た。この３種のＤＳＰＣリポ
ソーム溶液にそれぞれポリアクリル酸ナトリウム水溶液
（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２００、４５
重量％）１０μｌを添加し混合後２０分間超音波処理
（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）を行い、上記と同様
の操作により、ＤＳＰＣを除去した水をそれぞれ調製し
た。得られた各試験液を順に試験液２８（エンドトキシ
ン含有量０．０２ＥＵ／ｍｌ）、試験液２９（エンドト
キシン含有量０．０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液３０（エン
ドトキシン含有量０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、それぞれ１
００μｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工業
（株）製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量を
行った。結果を表７に示す。
【００３４】
【表７】
【００３５】表７から明らかなように、添加したエンド
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシンの測定法により、リポソーム中に含有
されたエンドトキシンを簡便に測定することができた。
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシンの測定法により、リポソーム中に含有
されたエンドトキシンを簡便に測定することができた。
【００３６】実施例５ １００ｍｌのスクリュー管に、ポリアクリル酸ナトリウ
ム塩水溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２
００、４５重量％）６０μｌを取り、０．４５％塩化ナ
トリウム水溶液［生理食塩水（大塚製薬（株）製）と注
射用蒸留水（大塚製薬（株）製）を１：１の重量比で混
合］を加えて全量を６０ｍｌとし試験液３１を得た。こ
の試験液３１の１０ｍｌにジミリストイルホスファチジ
ルコリン（以下、ＤＭＰＣと略す）１００ｍｇを添加し
て、ボルテックスミキサーで撹拌したのち、３０分間超
音波処理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化し
た。この乳化物を遠心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ−
２０００Ｃ）を用いて５０００ｒｐｍ、３０分間遠心分
離し、ＤＭＰＣを除去した水を得た。これを試験液３２
とする。また、これとは別に５０ｍｌのスクリュー管３
本にエンドトキシン水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれ
ぞれ２０μｌ、５０μｌ、１００μｌを取り、試験液３
１を加えてそれぞれ全量を１０ｍｌとし、さらにＤＭＰ
Ｃ１００ｍｇを添加して、上記と同様の操作により、Ｄ
ＭＰＣを除去した水をそれぞれ調製した。得られた各試
験液を順に試験液３３（エンドトキシン含有量０．０２
ＥＵ／ｍｌ）、試験液３４（エンドトキシン含有量０．
０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液３５（エンドトキシン含有量
０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、試験液３１から試験液３５の
各１００μｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工
業（株）製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量
を行った。結果を表８に示す。
ム塩水溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、重量平均分子量１２
００、４５重量％）６０μｌを取り、０．４５％塩化ナ
トリウム水溶液［生理食塩水（大塚製薬（株）製）と注
射用蒸留水（大塚製薬（株）製）を１：１の重量比で混
合］を加えて全量を６０ｍｌとし試験液３１を得た。こ
の試験液３１の１０ｍｌにジミリストイルホスファチジ
ルコリン（以下、ＤＭＰＣと略す）１００ｍｇを添加し
て、ボルテックスミキサーで撹拌したのち、３０分間超
音波処理（シャープ（株）製ＵＴ−１０５）して乳化し
た。この乳化物を遠心分離機（国産遠心機（株）製Ｈ−
２０００Ｃ）を用いて５０００ｒｐｍ、３０分間遠心分
離し、ＤＭＰＣを除去した水を得た。これを試験液３２
とする。また、これとは別に５０ｍｌのスクリュー管３
本にエンドトキシン水溶液（１００ＥＵ／ｍｌ）をそれ
ぞれ２０μｌ、５０μｌ、１００μｌを取り、試験液３
１を加えてそれぞれ全量を１０ｍｌとし、さらにＤＭＰ
Ｃ１００ｍｇを添加して、上記と同様の操作により、Ｄ
ＭＰＣを除去した水をそれぞれ調製した。得られた各試
験液を順に試験液３３（エンドトキシン含有量０．０２
ＥＵ／ｍｌ）、試験液３４（エンドトキシン含有量０．
０５ＥＵ／ｍｌ）、試験液３５（エンドトキシン含有量
０．１ＥＵ／ｍｌ）とし、試験液３１から試験液３５の
各１００μｌを用い、トキシカラーシステム（生化学工
業（株）製）の操作方法に従い、５４５ｎｍで比色定量
を行った。結果を表８に示す。
【００３７】
【表８】
【００３８】表８から明らかなように、添加したエンド
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシンの測定法により、サンプル中のエンド
トキシンを簡便に測定することができた。
トキシンは良好に測定されており、本発明のリン脂質中
のエンドトキシンの測定法により、サンプル中のエンド
トキシンを簡便に測定することができた。
Claims (1)
- 【請求項１】リン脂質を陰イオン性高分子金属塩および
アルカリ金属塩を含有する水中に乳化または分散した
後、リン脂質を除去した残りの水からエンドトキシンを
定量することを特徴とするリン脂質中のエンドトキシン
測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10119797A JPH10293129A (ja) | 1997-04-18 | 1997-04-18 | リン脂質中のエンドトキシン測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10119797A JPH10293129A (ja) | 1997-04-18 | 1997-04-18 | リン脂質中のエンドトキシン測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10293129A true JPH10293129A (ja) | 1998-11-04 |
Family
ID=14294224
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10119797A Pending JPH10293129A (ja) | 1997-04-18 | 1997-04-18 | リン脂質中のエンドトキシン測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10293129A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006080448A1 (ja) * | 2005-01-27 | 2006-08-03 | Seikagaku Corporation | リムルス測定用前処理剤 |
| US7129227B1 (en) | 1994-08-29 | 2006-10-31 | Wake Forest University | Lipid analogs for treating viral infections |
| US7294619B2 (en) | 1994-08-29 | 2007-11-13 | Wake Forest University | Lipid analogs for inhibiting the activity of hepatitis B antigen |
| WO2009148141A1 (ja) | 2008-06-06 | 2009-12-10 | 旭硝子株式会社 | 板ガラスの製造装置及び板ガラスの製造方法 |
| WO2010104180A1 (ja) | 2009-03-13 | 2010-09-16 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| WO2011104871A1 (ja) | 2010-02-26 | 2011-09-01 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定用試薬キット |
| WO2012102353A1 (ja) | 2011-01-26 | 2012-08-02 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定装置 |
| US8697351B2 (en) | 2008-07-30 | 2014-04-15 | Kowa Company, Ltd. | Method for measurement of physiologically active substance derived from organism and measurement apparatus |
| US8790885B2 (en) | 2009-02-19 | 2014-07-29 | Kowa Company, Ltd. | Coagulogen raw material, process for producing the same, and method and apparatus for measuring physiologically active substance of biological origin using the same |
-
1997
- 1997-04-18 JP JP10119797A patent/JPH10293129A/ja active Pending
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8106032B2 (en) | 1994-08-29 | 2012-01-31 | Wake Forest University | Lipid analogs for combating tumors |
| US7129227B1 (en) | 1994-08-29 | 2006-10-31 | Wake Forest University | Lipid analogs for treating viral infections |
| US7141557B2 (en) | 1994-08-29 | 2006-11-28 | Wake Forest University | Lipid analogs for treating viral infections |
| US7294620B2 (en) | 1994-08-29 | 2007-11-13 | Wake Forest University | Lipid analogs for inhibiting HIV-1 activity |
| US7294621B2 (en) | 1994-08-29 | 2007-11-13 | Wake Forest University | Lipid analogs for combating tumors |
| US7294619B2 (en) | 1994-08-29 | 2007-11-13 | Wake Forest University | Lipid analogs for inhibiting the activity of hepatitis B antigen |
| US7867722B2 (en) | 2005-01-27 | 2011-01-11 | Seikagaku Corporation | Pretreatment agent for limulus test |
| WO2006080448A1 (ja) * | 2005-01-27 | 2006-08-03 | Seikagaku Corporation | リムルス測定用前処理剤 |
| JP2012112980A (ja) * | 2005-01-27 | 2012-06-14 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | リムルス測定用前処理剤 |
| WO2009148141A1 (ja) | 2008-06-06 | 2009-12-10 | 旭硝子株式会社 | 板ガラスの製造装置及び板ガラスの製造方法 |
| US8697351B2 (en) | 2008-07-30 | 2014-04-15 | Kowa Company, Ltd. | Method for measurement of physiologically active substance derived from organism and measurement apparatus |
| US8790885B2 (en) | 2009-02-19 | 2014-07-29 | Kowa Company, Ltd. | Coagulogen raw material, process for producing the same, and method and apparatus for measuring physiologically active substance of biological origin using the same |
| WO2010104180A1 (ja) | 2009-03-13 | 2010-09-16 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| US8507282B2 (en) | 2009-03-13 | 2013-08-13 | Kowa Company, Ltd. | Method for measuring physiologically active substance of biological origin, program for implementing the same, and apparatus for measuring physiologically active substance of biological origin |
| WO2011104871A1 (ja) | 2010-02-26 | 2011-09-01 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定用試薬キット |
| WO2012102353A1 (ja) | 2011-01-26 | 2012-08-02 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定装置 |
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