JPH10309200A - 緩衝液組成 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 アルカリ域緩衝液において、炭酸水素イオン
を放出せしめる炭酸化合物を有効成分として含有せしめ
ることによる安定化された緩衝液組成物を提供する。 【解決手段】 ｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液（但
し、炭酸系緩衝液を除く）を用い、主成分としてアルカ
リ域にて酵素的反応を行なう酵素含有組成であって、炭
酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分とす
る緩衝液組成、及び当該緩衝液組成のｐＨ変動の抑制方
法。 【効果】 再現性の良好な酵素的測定用の組成物であ
り、緩衝液の濃度を低減した測定用の組成物となし得
る。
を放出せしめる炭酸化合物を有効成分として含有せしめ
ることによる安定化された緩衝液組成物を提供する。 【解決手段】 ｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液（但
し、炭酸系緩衝液を除く）を用い、主成分としてアルカ
リ域にて酵素的反応を行なう酵素含有組成であって、炭
酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分とす
る緩衝液組成、及び当該緩衝液組成のｐＨ変動の抑制方
法。 【効果】 再現性の良好な酵素的測定用の組成物であ
り、緩衝液の濃度を低減した測定用の組成物となし得
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ｐＨ８〜１１のア
ルカリ域緩衝液（但し、炭酸系緩衝液を除く）を用い、
主成分としてアルカリ域にて酵素的反応を行なう酵素含
有組成であって、炭酸水素イオンを放出せしめる炭酸化
合物を有効成分とする緩衝液組成、およびｐＨ８〜１１
のアルカリ域緩衝液（但し、炭酸系緩衝液を除く）を用
い、主成分としてアルカリ域にて酵素的反応を行なう酵
素含有組成であって、炭酸水素イオンを放出せしめる炭
酸化合物を有効成分として含有せしめることを特徴とす
る当該緩衝液組のｐＨ変動の抑制方法に関する。好まし
くは酵素的測定用の組成において、炭酸水素イオンを放
出せしめる炭酸化合物を有効成分とする緩衝液組成に関
するものであり、生化学分野における基本的に重要な緩
衝液組成であり、被検液、例えば、生体成分における基
質の測定や酵素活性の測定に重要な技術である。
ルカリ域緩衝液（但し、炭酸系緩衝液を除く）を用い、
主成分としてアルカリ域にて酵素的反応を行なう酵素含
有組成であって、炭酸水素イオンを放出せしめる炭酸化
合物を有効成分とする緩衝液組成、およびｐＨ８〜１１
のアルカリ域緩衝液（但し、炭酸系緩衝液を除く）を用
い、主成分としてアルカリ域にて酵素的反応を行なう酵
素含有組成であって、炭酸水素イオンを放出せしめる炭
酸化合物を有効成分として含有せしめることを特徴とす
る当該緩衝液組のｐＨ変動の抑制方法に関する。好まし
くは酵素的測定用の組成において、炭酸水素イオンを放
出せしめる炭酸化合物を有効成分とする緩衝液組成に関
するものであり、生化学分野における基本的に重要な緩
衝液組成であり、被検液、例えば、生体成分における基
質の測定や酵素活性の測定に重要な技術である。
【０００２】
【従来の技術】従来、緩衝液は、生化学反応、例えば酵
素的な基質の測定、基質を用いる酵素活性測定や酵素を
マーカーとした酵素活性測定に基づく免疫測定法などに
おいて、反応媒体のｐＨの変動を押さえるべく開発さ
れ、有機アミン系緩衝液、グッド緩衝液または生化学用
緩衝液などの多くの緩衝液が開発されてきた。
素的な基質の測定、基質を用いる酵素活性測定や酵素を
マーカーとした酵素活性測定に基づく免疫測定法などに
おいて、反応媒体のｐＨの変動を押さえるべく開発さ
れ、有機アミン系緩衝液、グッド緩衝液または生化学用
緩衝液などの多くの緩衝液が開発されてきた。
【０００３】有機アミン系緩衝液としては、例えば、ジ
エタノールアミン緩衝液、２−エチルアミノエタノール
緩衝液、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、
Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等が挙げられる。また、グ
ッド緩衝液としては、例えば、ＭＥＳ（２−（Ｎ−Ｍｏ
ｒｐｈｉｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａ
ｃｉｄ）緩衝液、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（Ｂｉｓ（２−ｈｙ
ｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｉｍｉｎｏｔｒｉｓ（ｈｙｄｒ
ｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈａｎｅ）緩衝液、ＡＤＡ
（Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｉｍｉｎｏｄｉａｃ
ｅｔｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＰＩＰＥＳ（Ｐｉｐｅｒ
ａｚｉｎｅ−Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ（２−ｅｔｈａｎｅｓｕ
ｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＡＣＥＳ（Ｎ−（２
−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅ
ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＭＯＰＳＯ（３
−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）−２−ｈｙｄｒｏｘｙ
ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、
ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙ
ｌ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ
ａｃｉｄ）緩衝液、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏ
ｌｉｎｏ）ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉ
ｄ）緩衝液、ＴＥＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍ
ｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎ
ｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＨＥＰＥＳ
（Ｎ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉ
ｎｅ−Ｎ’−２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃ
ｉｄ）緩衝液、ＤＩＰＳＯ（３−［Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２
−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏ］−２−ｈｙ
ｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉ
ｄ）緩衝液、ＴＡＰＳＯ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘ
ｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−
３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃ
ｉｄ）緩衝液、ＰＯＰＳＯ（Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−
Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅ
ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＨＥＰＰＳＯ
（Ｎ−２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉ
ｎｅ−Ｎ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅ−３−ｓ
ｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＥＰＰＳ（Ｎ−２
−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−
Ｎ’−３−ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉ
ｄ、別名ＨＥＰＰＳ）緩衝液、Ｔｒｉｃｉｎｅ（Ｔｒｉ
ｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌｇｌｙ
ｃｉｎｅ）緩衝液、Ｂｉｃｉｎｅ（Ｎ、Ｎ−Ｂｉｓ（２
−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｇｌｙｃｉｎｅ）緩衝
液、ＴＡＰＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈ
ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓ
ｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＣＨＥＳ（２−
（Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕ
ｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＣＡＰＳＯ（３−Ｎ
−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏ−２−ｈｙｄｒｏｘ
ｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝
液、ＣＡＰＳ（３−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏｐ
ｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液等が
挙げられる。
エタノールアミン緩衝液、２−エチルアミノエタノール
緩衝液、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、
Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等が挙げられる。また、グ
ッド緩衝液としては、例えば、ＭＥＳ（２−（Ｎ−Ｍｏ
ｒｐｈｉｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａ
ｃｉｄ）緩衝液、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（Ｂｉｓ（２−ｈｙ
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ｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈａｎｅ）緩衝液、ＡＤＡ
（Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｉｍｉｎｏｄｉａｃ
ｅｔｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＰＩＰＥＳ（Ｐｉｐｅｒ
ａｚｉｎｅ−Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ（２−ｅｔｈａｎｅｓｕ
ｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＡＣＥＳ（Ｎ−（２
−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅ
ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＭＯＰＳＯ（３
−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）−２−ｈｙｄｒｏｘｙ
ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、
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ｌ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ
ａｃｉｄ）緩衝液、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏ
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ｄ）緩衝液、ＴＥＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍ
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ｎｅ−Ｎ’−２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃ
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ｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉ
ｄ）緩衝液、ＴＡＰＳＯ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘ
ｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−
３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃ
ｉｄ）緩衝液、ＰＯＰＳＯ（Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−
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ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＨＥＰＰＳＯ
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ｃｉｎｅ）緩衝液、Ｂｉｃｉｎｅ（Ｎ、Ｎ−Ｂｉｓ（２
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液、ＴＡＰＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈ
ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓ
ｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＣＨＥＳ（２−
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ｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＣＡＰＳＯ（３−Ｎ
−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏ−２−ｈｙｄｒｏｘ
ｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝
液、ＣＡＰＳ（３−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏｐ
ｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液等が
挙げられる。
【０００４】さらに、上記以外の緩衝能を有する生化学
用緩衝液としては、例えば、クエン酸−第２リン酸ナト
リウム系、塩酸−ベロナールナトリウム−酢酸ナトリウ
ム系、第１リン酸カリウム−第２リン酸ナトリウム系、
第１リン酸カリウム−ホウ砂系、第１リン酸カリウム−
水酸化ナトリウム系、塩酸−コリジン系、塩酸−ベロナ
ールナトリウム系、塩酸−トリスアミノメタン系、塩酸
−ホウ砂系、ホウ酸−炭酸ナトリウム系、ホウ酸−ホウ
砂系、塩酸−アミノメチルプロパンジオール系、塩化ア
ンモニウム−アンモニア系、グリシン−水酸化ナトリウ
ム系、ホウ酸−水酸化ナトリウム系、塩酸−ジメチルグ
リシンナトリウム系、ホウ砂−水酸化ナトリウム系、ホ
ウ砂−炭酸ナトリウム系、セーレンセン緩衝液、グリシ
ン−塩化ナトリウム−塩酸系、第２クエン酸ナトリウム
−塩酸系、第２クエン酸ナトリウム−水酸化ナトリウム
系、ホウ砂−塩化ナトリウム系、ミカエリス緩衝液、ベ
ロナールナトリウム−酢酸ナトリウム−塩酸系、クラー
ク−ルブス緩衝液、ホウ酸−塩化カリウム−水酸化ナト
リウム系、アトキンス−パンチン緩衝液、パリティッシ
ュ緩衝液、コルトホフ緩衝液、マックイルベイン緩衝
液、ハスチング−センドロイ緩衝液、ブリトン−ロビン
ソン緩衝液、グッド緩衝液、マレイン酸塩緩衝液、トリ
ス−マレイン酸塩緩衝液、ベロナール緩衝液、ベロナー
ル−酢酸塩緩衝液などが挙げられ、何らこれらに限定さ
れるものではない。
用緩衝液としては、例えば、クエン酸−第２リン酸ナト
リウム系、塩酸−ベロナールナトリウム−酢酸ナトリウ
ム系、第１リン酸カリウム−第２リン酸ナトリウム系、
第１リン酸カリウム−ホウ砂系、第１リン酸カリウム−
水酸化ナトリウム系、塩酸−コリジン系、塩酸−ベロナ
ールナトリウム系、塩酸−トリスアミノメタン系、塩酸
−ホウ砂系、ホウ酸−炭酸ナトリウム系、ホウ酸−ホウ
砂系、塩酸−アミノメチルプロパンジオール系、塩化ア
ンモニウム−アンモニア系、グリシン−水酸化ナトリウ
ム系、ホウ酸−水酸化ナトリウム系、塩酸−ジメチルグ
リシンナトリウム系、ホウ砂−水酸化ナトリウム系、ホ
ウ砂−炭酸ナトリウム系、セーレンセン緩衝液、グリシ
ン−塩化ナトリウム−塩酸系、第２クエン酸ナトリウム
−塩酸系、第２クエン酸ナトリウム−水酸化ナトリウム
系、ホウ砂−塩化ナトリウム系、ミカエリス緩衝液、ベ
ロナールナトリウム−酢酸ナトリウム−塩酸系、クラー
ク−ルブス緩衝液、ホウ酸−塩化カリウム−水酸化ナト
リウム系、アトキンス−パンチン緩衝液、パリティッシ
ュ緩衝液、コルトホフ緩衝液、マックイルベイン緩衝
液、ハスチング−センドロイ緩衝液、ブリトン−ロビン
ソン緩衝液、グッド緩衝液、マレイン酸塩緩衝液、トリ
ス−マレイン酸塩緩衝液、ベロナール緩衝液、ベロナー
ル−酢酸塩緩衝液などが挙げられ、何らこれらに限定さ
れるものではない。
【０００５】従来の生化学検査、例えば、アルカリフォ
スファターゼの活性測定は、アルカリ域緩衝液としてジ
エタノールアミン緩衝液や２−エチルアミノエタノール
緩衝液等を用いて行われてきたが（臨床化学１９
（２）、ｐ２１３−２２７、１９９０年）、ｐＨの僅か
な変化でも、酵素の活性値が大きく変動することが知ら
れてきた。
スファターゼの活性測定は、アルカリ域緩衝液としてジ
エタノールアミン緩衝液や２−エチルアミノエタノール
緩衝液等を用いて行われてきたが（臨床化学１９
（２）、ｐ２１３−２２７、１９９０年）、ｐＨの僅か
な変化でも、酵素の活性値が大きく変動することが知ら
れてきた。
【０００６】また、アルカリ域緩衝液を開封保存した後
当該アルカリ域緩衝液を用いて、３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸測定やアルカリフ
ォスファターゼ活性測定を行うと、胆汁酸測定値やアル
カリフォスファターゼ活性値の変動が見られ、再現性に
乏しい問題があった。
当該アルカリ域緩衝液を用いて、３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸測定やアルカリフ
ォスファターゼ活性測定を行うと、胆汁酸測定値やアル
カリフォスファターゼ活性値の変動が見られ、再現性に
乏しい問題があった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】このように、緩衝液を
開封保存した場合、原因は不明であるが、緩衝液のｐＨ
が変動し、一定のｐＨを得ることが非常に困難である。
特に、アルカリ域緩衝液を開封保存した場合は、ｐＨの
低下が起こり、例えば、酵素活性を測定する場合は、酵
素の反応性の劣化が生じる欠点があった。従って、ｐＨ
８〜１１のアルカリ緩衝液にて、例えば生体成分である
基質の酵素的測定や酵素活性測定などの酵素反応を伴う
酵素的測定のための酵素活性の劣化を生じさせない緩衝
液の開発が本発明の目的である。
開封保存した場合、原因は不明であるが、緩衝液のｐＨ
が変動し、一定のｐＨを得ることが非常に困難である。
特に、アルカリ域緩衝液を開封保存した場合は、ｐＨの
低下が起こり、例えば、酵素活性を測定する場合は、酵
素の反応性の劣化が生じる欠点があった。従って、ｐＨ
８〜１１のアルカリ緩衝液にて、例えば生体成分である
基質の酵素的測定や酵素活性測定などの酵素反応を伴う
酵素的測定のための酵素活性の劣化を生じさせない緩衝
液の開発が本発明の目的である。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、炭酸水素ナトリウムまたは炭酸水素カリウムが
ｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液を用い、アルカリ域に
て酵素的反応を伴う組成の酵素の反応性を安定化させる
こと見いだした。即ち、本発明は、アルカリ域にて酵素
的反応を行なう酵素の一つである３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸測定において、通
常の０．２Ｍジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．２）
を用いて胆汁酸測定を行うと、開封保存した当該緩衝液
で、経時的に測定値の低下が観察されたことから、種々
の検討を加えた結果、炭酸水素ナトリウムまたは炭酸水
素カリウムを当該緩衝液に含有せしめると、胆汁酸の測
定値の低下が非常に改善され、再現性の良好な測定結果
が得られることを見いだした。
の結果、炭酸水素ナトリウムまたは炭酸水素カリウムが
ｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液を用い、アルカリ域に
て酵素的反応を伴う組成の酵素の反応性を安定化させる
こと見いだした。即ち、本発明は、アルカリ域にて酵素
的反応を行なう酵素の一つである３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸測定において、通
常の０．２Ｍジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．２）
を用いて胆汁酸測定を行うと、開封保存した当該緩衝液
で、経時的に測定値の低下が観察されたことから、種々
の検討を加えた結果、炭酸水素ナトリウムまたは炭酸水
素カリウムを当該緩衝液に含有せしめると、胆汁酸の測
定値の低下が非常に改善され、再現性の良好な測定結果
が得られることを見いだした。
【０００９】同様に、アルカリ域にて酵素的反応を行な
う酵素の例示としてのアルカリフォスファターゼの活性
測定を０．２Ｍジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．
２）を用いて、活性測定を行うと、開封保存した当該緩
衝液で、経時的に測定値の低下が観察されたが、上記し
たような炭酸水素ナトリウムまたは炭酸水素カリウムを
当該緩衝液に含有せしめると、アルカリフォスファター
ゼの活性値の低下が劇的に軽減されることを見いだし
た。
う酵素の例示としてのアルカリフォスファターゼの活性
測定を０．２Ｍジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．
２）を用いて、活性測定を行うと、開封保存した当該緩
衝液で、経時的に測定値の低下が観察されたが、上記し
たような炭酸水素ナトリウムまたは炭酸水素カリウムを
当該緩衝液に含有せしめると、アルカリフォスファター
ゼの活性値の低下が劇的に軽減されることを見いだし
た。
【００１０】さらに、本発明においてｐＨ８〜１１のア
ルカリ域緩衝液を用いる組成において、炭酸水素ナトリ
ウムや炭酸水素カリウム等の炭酸水素イオンを放出せし
める炭酸化合物を用いることにより再現性良く測定し得
るもので、この炭酸水素イオンを放出せしめるカルシウ
ムやマグネシウムの炭酸化合物も同様に良好な結果を示
すことを見い出し、その結果、従来の炭酸水素イオンを
含有していないアルカリ域緩衝液組成に比べて開封条件
下において格段に酵素的測定における再現性が向上した
ことを見出した。
ルカリ域緩衝液を用いる組成において、炭酸水素ナトリ
ウムや炭酸水素カリウム等の炭酸水素イオンを放出せし
める炭酸化合物を用いることにより再現性良く測定し得
るもので、この炭酸水素イオンを放出せしめるカルシウ
ムやマグネシウムの炭酸化合物も同様に良好な結果を示
すことを見い出し、その結果、従来の炭酸水素イオンを
含有していないアルカリ域緩衝液組成に比べて開封条件
下において格段に酵素的測定における再現性が向上した
ことを見出した。
【００１１】本発明は上記の知見により完成されたもの
であって、ｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液（但し、炭
酸系緩衝液を除く）を用い、主成分としてアルカリ域に
て酵素的反応を行なう酵素含有組成であって、炭酸水素
イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分とする緩衝
液組成、およびｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液（但
し、炭酸系緩衝液を除く）を用い、主成分としてアルカ
リ域にて酵素的反応を行なう酵素含有組成であって、炭
酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分とし
て含有せしめることを特徴とする当該緩衝液組のｐＨ変
動の抑制方法であって、例えば３αヒドロキシステロイ
ドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸の安定的測定やアル
カリフォスファターゼの活性の安定的測定などの酵素的
測定用の緩衝液組成に用いることを可能となし、本発明
の炭酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分
として含有せしめた緩衝液組成は、酵素反応を伴う基質
または酵素活性の測定のための酵素的測定用の組成とし
て好適に使用できることを見出した。
であって、ｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液（但し、炭
酸系緩衝液を除く）を用い、主成分としてアルカリ域に
て酵素的反応を行なう酵素含有組成であって、炭酸水素
イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分とする緩衝
液組成、およびｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液（但
し、炭酸系緩衝液を除く）を用い、主成分としてアルカ
リ域にて酵素的反応を行なう酵素含有組成であって、炭
酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分とし
て含有せしめることを特徴とする当該緩衝液組のｐＨ変
動の抑制方法であって、例えば３αヒドロキシステロイ
ドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸の安定的測定やアル
カリフォスファターゼの活性の安定的測定などの酵素的
測定用の緩衝液組成に用いることを可能となし、本発明
の炭酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分
として含有せしめた緩衝液組成は、酵素反応を伴う基質
または酵素活性の測定のための酵素的測定用の組成とし
て好適に使用できることを見出した。
【００１２】本発明のアルカリ域緩衝液（但し、炭酸系
緩衝液を除く）を含有する組成としては、ｐＨ領域とし
てｐＨが８〜１１の範囲で大いに有効であり、その緩衝
液としては、例えば、ｐＨ８〜１１の間に適宜に調整で
きる有機アミン系緩衝液、グッド緩衝液やその他に、ク
エン酸−第２リン酸ナトリウム系、塩酸−ベロナールナ
トリウム−酢酸ナトリウム系、第１リン酸カリウム−第
２リン酸ナトリウム系、第１リン酸カリウム−ホウ砂
系、第１リン酸カリウム−水酸化ナトリウム系、塩酸−
コリジン系、塩酸−ベロナールナトリウム系、塩酸−ト
リスアミノメタン系、塩酸−ホウ砂系、ホウ酸−炭酸ナ
トリウム系、ホウ酸−ホウ砂系、塩酸−アミノメチルプ
ロパンジオール系、塩化アンモニウム−アンモニア系、
グリシン−水酸化ナトリウム系、ホウ酸−水酸化ナトリ
ウム系、塩酸−ジメチルグリシンナトリウム系、ホウ砂
−水酸化ナトリウム系、ホウ砂−炭酸ナトリウム系、セ
ーレンセン緩衝液、グリシン−塩化ナトリウム−塩酸
系、第２クエン酸ナトリウム−塩酸系、第２クエン酸ナ
トリウム−水酸化ナトリウム系、ホウ砂−塩化ナトリウ
ム系、ミカエリス緩衝液、ベロナールナトリウム−酢酸
ナトリウム−塩酸系、クラーク−ルブス緩衝液、ホウ酸
−塩化カリウム−水酸化ナトリウム系、アトキンス−パ
ンチン緩衝液、パリティッシュ緩衝液、コルトホフ緩衝
液、マックイルベイン緩衝液、ハスチング−センドロイ
緩衝液、ブリトン−ロビンソン緩衝液、マレイン酸塩緩
衝液、トリス−マレイン酸塩緩衝液、ベロナール緩衝
液、ベロナール−酢酸塩緩衝液などの生化学用緩衝液な
どが挙げられ、これらの緩衝液以外であっても、ｐＨ８
〜１１のアルカリ域にて緩衝能を有するものであれば何
ら限定されない。
緩衝液を除く）を含有する組成としては、ｐＨ領域とし
てｐＨが８〜１１の範囲で大いに有効であり、その緩衝
液としては、例えば、ｐＨ８〜１１の間に適宜に調整で
きる有機アミン系緩衝液、グッド緩衝液やその他に、ク
エン酸−第２リン酸ナトリウム系、塩酸−ベロナールナ
トリウム−酢酸ナトリウム系、第１リン酸カリウム−第
２リン酸ナトリウム系、第１リン酸カリウム−ホウ砂
系、第１リン酸カリウム−水酸化ナトリウム系、塩酸−
コリジン系、塩酸−ベロナールナトリウム系、塩酸−ト
リスアミノメタン系、塩酸−ホウ砂系、ホウ酸−炭酸ナ
トリウム系、ホウ酸−ホウ砂系、塩酸−アミノメチルプ
ロパンジオール系、塩化アンモニウム−アンモニア系、
グリシン−水酸化ナトリウム系、ホウ酸−水酸化ナトリ
ウム系、塩酸−ジメチルグリシンナトリウム系、ホウ砂
−水酸化ナトリウム系、ホウ砂−炭酸ナトリウム系、セ
ーレンセン緩衝液、グリシン−塩化ナトリウム−塩酸
系、第２クエン酸ナトリウム−塩酸系、第２クエン酸ナ
トリウム−水酸化ナトリウム系、ホウ砂−塩化ナトリウ
ム系、ミカエリス緩衝液、ベロナールナトリウム−酢酸
ナトリウム−塩酸系、クラーク−ルブス緩衝液、ホウ酸
−塩化カリウム−水酸化ナトリウム系、アトキンス−パ
ンチン緩衝液、パリティッシュ緩衝液、コルトホフ緩衝
液、マックイルベイン緩衝液、ハスチング−センドロイ
緩衝液、ブリトン−ロビンソン緩衝液、マレイン酸塩緩
衝液、トリス−マレイン酸塩緩衝液、ベロナール緩衝
液、ベロナール−酢酸塩緩衝液などの生化学用緩衝液な
どが挙げられ、これらの緩衝液以外であっても、ｐＨ８
〜１１のアルカリ域にて緩衝能を有するものであれば何
ら限定されない。
【００１３】また、有機アミン系緩衝液としては、例え
ば、ジエタノールアミン緩衝液、２−エチルアミノエタ
ノール緩衝液、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノ
ール、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等が挙げられる。さ
らに、グッド緩衝液としては、例えば、ＭＥＳ（２−
（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｉｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏ
ｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（Ｂｉｓ
（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｉｍｉｎｏｔｒｉｓ
（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈａｎｅ）緩衝
液、ＡＤＡ（Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｉｍｉｎ
ｏｄｉａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＰＩＰＥＳ
（Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ（２−ｅｔ
ｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＡＣＥ
Ｓ（Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）−２−ａｍｉｎｏ
ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、Ｍ
ＯＰＳＯ（３−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）−２−ｈ
ｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉ
ｄ）緩衝液、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏ
ｘｙｅｔｈｙｌ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌ
ｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−
Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉ
ｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＴＥＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄ
ｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ａｍｉｎｏ
ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、Ｈ
ＥＰＥＳ（Ｎ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅ
ｒａｚｉｎｅ−Ｎ’−２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉ
ｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＤＩＰＳＯ（３−［Ｎ，Ｎ−Ｂ
ｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏ］−
２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ
ａｃｉｄ）緩衝液、ＴＡＰＳＯ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄ
ｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ｈｙｄｒｏ
ｘｙ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ
ａｃｉｄ）緩衝液、ＰＯＰＳＯ（Ｐｉｐｅｒａｚｉｎ
ｅ−Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａ
ｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＨＥＰＰＳ
Ｏ（Ｎ−２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚ
ｉｎｅ−Ｎ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅ−３−
ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＥＰＰＳ（Ｎ−
２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−
Ｎ’−３−ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉ
ｄ、別名ＨＥＰＰＳ）緩衝液、Ｔｒｉｃｉｎｅ（Ｔｒｉ
ｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌｇｌｙ
ｃｉｎｅ）緩衝液、Ｂｉｃｉｎｅ（Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２
−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｇｌｙｃｉｎｅ）緩衝
液、ＴＡＰＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈ
ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓ
ｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＣＨＥＳ（２−
（Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕ
ｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＣＡＰＳＯ（３−Ｎ
−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏ−２−ｈｙｄｒｏｘ
ｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝
液、ＣＡＰＳ（３−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏｐ
ｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液等が
挙げられる。
ば、ジエタノールアミン緩衝液、２−エチルアミノエタ
ノール緩衝液、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノ
ール、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン等が挙げられる。さ
らに、グッド緩衝液としては、例えば、ＭＥＳ（２−
（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｉｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏ
ｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（Ｂｉｓ
（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｉｍｉｎｏｔｒｉｓ
（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈａｎｅ）緩衝
液、ＡＤＡ（Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｉｍｉｎ
ｏｄｉａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＰＩＰＥＳ
（Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ（２−ｅｔ
ｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＡＣＥ
Ｓ（Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）−２−ａｍｉｎｏ
ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、Ｍ
ＯＰＳＯ（３−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）−２−ｈ
ｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉ
ｄ）緩衝液、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏ
ｘｙｅｔｈｙｌ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌ
ｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−
Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉ
ｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＴＥＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄ
ｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ａｍｉｎｏ
ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、Ｈ
ＥＰＥＳ（Ｎ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅ
ｒａｚｉｎｅ−Ｎ’−２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉ
ｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＤＩＰＳＯ（３−［Ｎ，Ｎ−Ｂ
ｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏ］−
２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ
ａｃｉｄ）緩衝液、ＴＡＰＳＯ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄ
ｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ｈｙｄｒｏ
ｘｙ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ
ａｃｉｄ）緩衝液、ＰＯＰＳＯ（Ｐｉｐｅｒａｚｉｎ
ｅ−Ｎ，Ｎ’−ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａ
ｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＨＥＰＰＳ
Ｏ（Ｎ−２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚ
ｉｎｅ−Ｎ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐａｎｅ−３−
ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＥＰＰＳ（Ｎ−
２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−
Ｎ’−３−ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉ
ｄ、別名ＨＥＰＰＳ）緩衝液、Ｔｒｉｃｉｎｅ（Ｔｒｉ
ｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌｇｌｙ
ｃｉｎｅ）緩衝液、Ｂｉｃｉｎｅ（Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２
−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｇｌｙｃｉｎｅ）緩衝
液、ＴＡＰＳ（Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈ
ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓ
ｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＣＨＥＳ（２−
（Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕ
ｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液、ＣＡＰＳＯ（３−Ｎ
−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏ−２−ｈｙｄｒｏｘ
ｙｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝
液、ＣＡＰＳ（３−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｍｉｎｏｐ
ｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）緩衝液等が
挙げられる。
【００１４】なお、本発明のアルカリ域緩衝液において
は炭酸系緩衝液を除くものであり、この炭酸系緩衝液と
しては、例えば炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムの
緩衝液またはそれらのカリウム塩による緩衝液などであ
り、炭酸塩に基づく緩衝液を意味し、本発明におけるア
ルカリ域緩衝液とは別途に炭酸水素イオンを放出せしめ
る炭酸化合物を有効成分とするｐＨ変動抑制剤として含
有せしめるものと区別する目的のものである。
は炭酸系緩衝液を除くものであり、この炭酸系緩衝液と
しては、例えば炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムの
緩衝液またはそれらのカリウム塩による緩衝液などであ
り、炭酸塩に基づく緩衝液を意味し、本発明におけるア
ルカリ域緩衝液とは別途に炭酸水素イオンを放出せしめ
る炭酸化合物を有効成分とするｐＨ変動抑制剤として含
有せしめるものと区別する目的のものである。
【００１５】アルカリ域緩衝液を用いる組成として、当
該アルカリ域緩衝液として、有機アミン系緩衝液を用い
る場合は、２０ｍＭ〜２Ｍの濃度、好ましくは２０ｍＭ
〜１Ｍの濃度、最適には２０ｍＭ〜５００ｍＭの濃度に
調整した水性媒体として用いれば良い。また、好適な水
性媒体としては水、具体的には精製水が挙げられ、適宜
に補酵素、可溶性塩類、界面活性剤、安定化剤や防腐剤
などを含有してもよい。
該アルカリ域緩衝液として、有機アミン系緩衝液を用い
る場合は、２０ｍＭ〜２Ｍの濃度、好ましくは２０ｍＭ
〜１Ｍの濃度、最適には２０ｍＭ〜５００ｍＭの濃度に
調整した水性媒体として用いれば良い。また、好適な水
性媒体としては水、具体的には精製水が挙げられ、適宜
に補酵素、可溶性塩類、界面活性剤、安定化剤や防腐剤
などを含有してもよい。
【００１６】また、アルカリ域緩衝液を含有する組成と
して、当該アルカリ域緩衝液として、グッド緩衝液また
は生化学用緩衝液を用いる場合は、２０ｍＭ〜１Ｍの濃
度、好ましくは２０ｍＭ〜５００ｍＭの濃度、最適には
２０ｍＭ〜３００ｍＭの濃度に調整して用いれば良い。
さらに本発明における、主成分としてアルカリ域にて酵
素的反応を行なう酵素としては、上記の緩衝液のｐＨ８
〜１１のアルカリ域にて当該基質に対して酵素作用を触
媒し得るものであれば何ら限定されるものでなく、例え
ば酵素の至適ｐＨや安定ｐＨが酸性域にあっても目的の
酵素作用をｐＨ８〜１１のアルカリ域にて当該基質に対
して酵素作用を触媒し得るものであってもよく、好まし
くは酵素の至適ｐＨや安定ｐＨのいずれか、または両方
がアルカリ域にあって目的の酵素作用をｐＨ８〜１１の
アルカリ域にて当該基質に対して酵素作用を触媒し得る
ものであり、好適には３αヒドロキシステロイドデヒド
ロゲナーゼ、７αヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼ、１１αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、１
６αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、１７αヒ
ドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、２１αヒドロキ
システロイドデヒドロゲナーゼなどのステロイドデヒド
ロゲナーゼやアルカリフォスファターゼなどの酵素の至
適ｐＨや安定ｐＨのいずれか、または両方がアルカリ域
にある酵素が挙げられ、さらに例えばアルコールデヒド
ロゲナーゼ（基質：エタノール、補酵素：ＮＡＤ、緩衝
液ｐＨ８．５〜８．８）、ラクテートデヒドロゲナーゼ
（基質：乳酸、補酵素：ＮＡＤ、緩衝液ｐＨ９〜１
０）、ガラクトースデヒドロゲナーゼ（基質：ガラクト
ース、補酵素：ＮＡＤ、至適ｐＨ８〜９）が挙げられ
る。
して、当該アルカリ域緩衝液として、グッド緩衝液また
は生化学用緩衝液を用いる場合は、２０ｍＭ〜１Ｍの濃
度、好ましくは２０ｍＭ〜５００ｍＭの濃度、最適には
２０ｍＭ〜３００ｍＭの濃度に調整して用いれば良い。
さらに本発明における、主成分としてアルカリ域にて酵
素的反応を行なう酵素としては、上記の緩衝液のｐＨ８
〜１１のアルカリ域にて当該基質に対して酵素作用を触
媒し得るものであれば何ら限定されるものでなく、例え
ば酵素の至適ｐＨや安定ｐＨが酸性域にあっても目的の
酵素作用をｐＨ８〜１１のアルカリ域にて当該基質に対
して酵素作用を触媒し得るものであってもよく、好まし
くは酵素の至適ｐＨや安定ｐＨのいずれか、または両方
がアルカリ域にあって目的の酵素作用をｐＨ８〜１１の
アルカリ域にて当該基質に対して酵素作用を触媒し得る
ものであり、好適には３αヒドロキシステロイドデヒド
ロゲナーゼ、７αヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼ、１１αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、１
６αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、１７αヒ
ドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、２１αヒドロキ
システロイドデヒドロゲナーゼなどのステロイドデヒド
ロゲナーゼやアルカリフォスファターゼなどの酵素の至
適ｐＨや安定ｐＨのいずれか、または両方がアルカリ域
にある酵素が挙げられ、さらに例えばアルコールデヒド
ロゲナーゼ（基質：エタノール、補酵素：ＮＡＤ、緩衝
液ｐＨ８．５〜８．８）、ラクテートデヒドロゲナーゼ
（基質：乳酸、補酵素：ＮＡＤ、緩衝液ｐＨ９〜１
０）、ガラクトースデヒドロゲナーゼ（基質：ガラクト
ース、補酵素：ＮＡＤ、至適ｐＨ８〜９）が挙げられ
る。
【００１７】また当該酵素としては、例えば胆汁酸であ
る基質の測定の目的としての酵素である３αヒドロキシ
ステロイドデヒドロゲナーゼの使用形態でもよく、また
例えばアルカリフォスファターゼを生体内酵素活性測定
の目的とする使用形態でもよく、さらに例えばアルカリ
フォスファターゼを免疫測定における酵素マーカーとし
て酵素活性測定の目的とする使用形態でもよいものであ
る。
る基質の測定の目的としての酵素である３αヒドロキシ
ステロイドデヒドロゲナーゼの使用形態でもよく、また
例えばアルカリフォスファターゼを生体内酵素活性測定
の目的とする使用形態でもよく、さらに例えばアルカリ
フォスファターゼを免疫測定における酵素マーカーとし
て酵素活性測定の目的とする使用形態でもよいものであ
る。
【００１８】従ってまた、本発明の緩衝液組成に含有さ
れる酵素の量としては、基質の測定の目的、生体内酵素
活性測定の目的、免疫測定における酵素マーカーの酵素
活性測定の目的によって、適宜異なるものである。基質
の測定の目的における緩衝液組成に含有される酵素の量
としては、例えば、緩衝液組成中０．００１〜２００単
位、好ましくは０．０５〜１００単位であり、また生体
内酵素活性測定の目的における緩衝液組成に含有される
酵素の量としては、生体内酵素の量に依存するものであ
るが、例えば緩衝液組成中０．０００１〜２００単位、
好ましくは０．０１〜１００単位であり、免疫測定にお
ける酵素マーカーの酵素活性測定の目的における緩衝液
組成に含有される酵素の量としては極めて微量であり、
例えば緩衝液組成中０．０００１ｍ単位〜１単位、好ま
しくは０．００１ｍ単位〜０．５単位である。
れる酵素の量としては、基質の測定の目的、生体内酵素
活性測定の目的、免疫測定における酵素マーカーの酵素
活性測定の目的によって、適宜異なるものである。基質
の測定の目的における緩衝液組成に含有される酵素の量
としては、例えば、緩衝液組成中０．００１〜２００単
位、好ましくは０．０５〜１００単位であり、また生体
内酵素活性測定の目的における緩衝液組成に含有される
酵素の量としては、生体内酵素の量に依存するものであ
るが、例えば緩衝液組成中０．０００１〜２００単位、
好ましくは０．０１〜１００単位であり、免疫測定にお
ける酵素マーカーの酵素活性測定の目的における緩衝液
組成に含有される酵素の量としては極めて微量であり、
例えば緩衝液組成中０．０００１ｍ単位〜１単位、好ま
しくは０．００１ｍ単位〜０．５単位である。
【００１９】以下に、本発明について詳しく説明する
が、特に限定されるものではない。炭酸水素イオンを放
出せしめる炭酸化合物として、例えば炭酸水素ナトリウ
ムをアルカリ域緩衝液、例えばジエタノールアミン緩衝
液に加えて調整するに当たっては、下記の如く行えば良
い。即ち、ジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．２）の
調製は、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）（和光純薬工業
社製）２０．８２７ｇを精製水に溶解させる。次いで、
適宜にデヒドロゲナーゼなどの酵素的測定のための補酵
素、安定化剤や防腐剤、例えば６．６ｍｍｏｌのＮＡＤ
Ｈ、１．３ｇのデキストラン、０．７ｇのＢＳＡ（牛血
清アルブミン）、および０．５ｇのＮａＮ3 を添加し、
さらに炭酸水素ナトリウムを０ｇ、４．２ｇ、８．４
ｇ、１２．６ｇ、１６．８ｇ、あるいは２１．０ｇを添
加し、３０℃でｐＨを計測しながら、１ＮのＨＣｌある
いは１ＮのＮａＯＨを加え、ｐＨを９．２に合わせ、精
製水で全量を１，０００ｍｌとし、それぞれ０．２Ｍの
ＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、５０ｍＭ炭酸水素ナト
リウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、
１００ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩
衝液（ｐＨ９．２０）、１５０ｍＭ炭酸水素ナトリウム
添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、２００
ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液
（ｐＨ９．２０）、２５０ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加
０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）を調製する。
が、特に限定されるものではない。炭酸水素イオンを放
出せしめる炭酸化合物として、例えば炭酸水素ナトリウ
ムをアルカリ域緩衝液、例えばジエタノールアミン緩衝
液に加えて調整するに当たっては、下記の如く行えば良
い。即ち、ジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．２）の
調製は、ジエタノールアミン（ＤＥＡ）（和光純薬工業
社製）２０．８２７ｇを精製水に溶解させる。次いで、
適宜にデヒドロゲナーゼなどの酵素的測定のための補酵
素、安定化剤や防腐剤、例えば６．６ｍｍｏｌのＮＡＤ
Ｈ、１．３ｇのデキストラン、０．７ｇのＢＳＡ（牛血
清アルブミン）、および０．５ｇのＮａＮ3 を添加し、
さらに炭酸水素ナトリウムを０ｇ、４．２ｇ、８．４
ｇ、１２．６ｇ、１６．８ｇ、あるいは２１．０ｇを添
加し、３０℃でｐＨを計測しながら、１ＮのＨＣｌある
いは１ＮのＮａＯＨを加え、ｐＨを９．２に合わせ、精
製水で全量を１，０００ｍｌとし、それぞれ０．２Ｍの
ＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、５０ｍＭ炭酸水素ナト
リウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、
１００ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩
衝液（ｐＨ９．２０）、１５０ｍＭ炭酸水素ナトリウム
添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、２００
ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液
（ｐＨ９．２０）、２５０ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加
０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）を調製する。
【００２０】この場合、有機アミン系緩衝液の１つであ
るジエタノールアミン緩衝液への炭酸水素ナトリウムな
どの炭酸化合物の添加濃度はモル濃度において１０ｍＭ
〜１Ｍであれば良く、望ましくは２０ｍＭ〜５００ｍＭ
であれば良い。また、グッド緩衝液、例えば、Ｂｉｃｉ
ｎｅ緩衝液に、同様に炭酸水素ナトリウムなどの炭酸化
合物の添加濃度は１０ｍＭ〜１Ｍであり、望ましく２０
ｍＭ〜５００ｍＭであれば良い。
るジエタノールアミン緩衝液への炭酸水素ナトリウムな
どの炭酸化合物の添加濃度はモル濃度において１０ｍＭ
〜１Ｍであれば良く、望ましくは２０ｍＭ〜５００ｍＭ
であれば良い。また、グッド緩衝液、例えば、Ｂｉｃｉ
ｎｅ緩衝液に、同様に炭酸水素ナトリウムなどの炭酸化
合物の添加濃度は１０ｍＭ〜１Ｍであり、望ましく２０
ｍＭ〜５００ｍＭであれば良い。
【００２１】このようにして作製したアルカリ域緩衝液
を含有する組成物、例えば、３μｌ〜５ｍｌの適宜な量
に、生体成分における基質の測定用の酵素、例えばＮＡ
ＤやＮＡＤＰまたはそれらの還元型であるＮＡＤＨやＮ
ＡＤＰＨ、チオ−ＮＡＤやチオ−ＮＡＤＰまたはそれら
の還元型であるチオ−ＮＡＤＨやチオ−ＮＡＤＰＨなど
の補酵素を利用する種々のデヒドロゲナーゼ、好適には
３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼなどの酵素
を０．１〜１００Ｕ／ｍｌ添加し、開封保存しても、そ
の後に例えば２０〜４０℃にてレートアッセイやエンド
ポイントアッセイを行なっても、３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸測定の安定的な測
定が可能となる。
を含有する組成物、例えば、３μｌ〜５ｍｌの適宜な量
に、生体成分における基質の測定用の酵素、例えばＮＡ
ＤやＮＡＤＰまたはそれらの還元型であるＮＡＤＨやＮ
ＡＤＰＨ、チオ−ＮＡＤやチオ−ＮＡＤＰまたはそれら
の還元型であるチオ−ＮＡＤＨやチオ−ＮＡＤＰＨなど
の補酵素を利用する種々のデヒドロゲナーゼ、好適には
３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼなどの酵素
を０．１〜１００Ｕ／ｍｌ添加し、開封保存しても、そ
の後に例えば２０〜４０℃にてレートアッセイやエンド
ポイントアッセイを行なっても、３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸測定の安定的な測
定が可能となる。
【００２２】例えば、３αヒドロキシステロイドデヒド
ロゲナーゼ活性測定または基質の測定は以下のように行
えばよい。反応液（４０ｍＭトリス−塩酸緩衝液ｐＨ
８．０、１ｍＭＮＡＤ（興人化学社製）、０．０２５％
ニトロテトラゾリウムブルー（ＮＴＢ；同仁化学社
製）、５Ｕ／ｍｌジアホラーゼ（旭化成工業社製）、
０．４％トリトンＸ−１００（米山化学社製）含む溶
液）０．５ｍｌに、０．０２ｍｌの酵素液を添加し、３
７℃で予備加温した後、基質溶液（メタノールで溶解し
た２０ｍＭアンドロステロン（シグマ社製）溶液）を
０．０２５ｍｌ添加し、３７℃、５分間、反応させた
後、反応停止液（０．５％ドデシル硫酸ナトリウム（和
光純薬工業社製））２．５ｍｌを添加し、反応において
生成された色素を５５０ｎｍ付近の吸光度にて測定し、
３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性または
基質であるアンドロステロンを測定できる。
ロゲナーゼ活性測定または基質の測定は以下のように行
えばよい。反応液（４０ｍＭトリス−塩酸緩衝液ｐＨ
８．０、１ｍＭＮＡＤ（興人化学社製）、０．０２５％
ニトロテトラゾリウムブルー（ＮＴＢ；同仁化学社
製）、５Ｕ／ｍｌジアホラーゼ（旭化成工業社製）、
０．４％トリトンＸ−１００（米山化学社製）含む溶
液）０．５ｍｌに、０．０２ｍｌの酵素液を添加し、３
７℃で予備加温した後、基質溶液（メタノールで溶解し
た２０ｍＭアンドロステロン（シグマ社製）溶液）を
０．０２５ｍｌ添加し、３７℃、５分間、反応させた
後、反応停止液（０．５％ドデシル硫酸ナトリウム（和
光純薬工業社製））２．５ｍｌを添加し、反応において
生成された色素を５５０ｎｍ付近の吸光度にて測定し、
３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性または
基質であるアンドロステロンを測定できる。
【００２３】さらに、３αヒドロキシステロイドデヒド
ロゲナーゼを用いた胆汁酸測定の例示としては、Ｒ１溶
液（３０ｍＭグリシン、１．３５ｍＭチオ−ＮＡＤ（オ
リエンタル酵母工業社製）、０．８％塩化ナトリウム、
０．１％トリトンＸ１００および０．０５％ＮａＮ3 を
含むｐＨ４．０溶液）１．３０ｍｌに、胆汁酸溶液０．
０１５ｍｌを添加し、３７℃、５分間反応させた後、Ｒ
２溶液（２００ｍＭジエタノールアミン、６．６ｍＭＮ
ＡＤＨ、９．５Ｕ／ｍｌ３αヒドロキシステロイドデヒ
ドロゲナーゼ（旭化成工業社製）および０．０５％Ｎａ
Ｎ3 を含むｐＨ９．２溶液）０．６５ｍｌを添加し、３
７℃、２分後から、レートアッセイ法にて、デヒドロゲ
ナーゼを用いた可逆反応に基づく酵素サイクリングの反
応にて生成されたチオ−ＮＡＤＨの量を４００ｎｍ付近
の吸光度にて測定するか、反応にて減少したＮＡＤＨの
量を３４０ｎｍ付近の吸光度にて測定などの吸光度変化
量を測定すれば良い。
ロゲナーゼを用いた胆汁酸測定の例示としては、Ｒ１溶
液（３０ｍＭグリシン、１．３５ｍＭチオ−ＮＡＤ（オ
リエンタル酵母工業社製）、０．８％塩化ナトリウム、
０．１％トリトンＸ１００および０．０５％ＮａＮ3 を
含むｐＨ４．０溶液）１．３０ｍｌに、胆汁酸溶液０．
０１５ｍｌを添加し、３７℃、５分間反応させた後、Ｒ
２溶液（２００ｍＭジエタノールアミン、６．６ｍＭＮ
ＡＤＨ、９．５Ｕ／ｍｌ３αヒドロキシステロイドデヒ
ドロゲナーゼ（旭化成工業社製）および０．０５％Ｎａ
Ｎ3 を含むｐＨ９．２溶液）０．６５ｍｌを添加し、３
７℃、２分後から、レートアッセイ法にて、デヒドロゲ
ナーゼを用いた可逆反応に基づく酵素サイクリングの反
応にて生成されたチオ−ＮＡＤＨの量を４００ｎｍ付近
の吸光度にて測定するか、反応にて減少したＮＡＤＨの
量を３４０ｎｍ付近の吸光度にて測定などの吸光度変化
量を測定すれば良い。
【００２４】同様にして、既知濃度の胆汁酸溶液（シグ
マ社製グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）０．
０９４ｇを１００ｍｌに溶解し、その後４０倍希釈し５
０μＭに調製した溶液）を測定し、既知濃度の胆汁酸溶
液の吸光度変化量から、胆汁酸濃度を算出することがで
きる。上記の方法にて、Ｒ２溶液を、４℃にて開封保存
し、酵素添加後、０（初期値）、７、１４、２１、２
６、５１日目で、３αヒドロキシステロイドデヒドロゲ
ナーゼの残存活性、Ｒ２溶液のｐＨ及び各種基質に対す
る感度を測定する。基質は、ＧＣＤＣＡ（シグマ社
製）、セロノルム（第一化学薬品工業社製）、パソノル
ムＬ（第一化学薬品工業社製）及びパソノルムＨ（第一
化学薬品工業社製）等を用いればよい。
マ社製グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）０．
０９４ｇを１００ｍｌに溶解し、その後４０倍希釈し５
０μＭに調製した溶液）を測定し、既知濃度の胆汁酸溶
液の吸光度変化量から、胆汁酸濃度を算出することがで
きる。上記の方法にて、Ｒ２溶液を、４℃にて開封保存
し、酵素添加後、０（初期値）、７、１４、２１、２
６、５１日目で、３αヒドロキシステロイドデヒドロゲ
ナーゼの残存活性、Ｒ２溶液のｐＨ及び各種基質に対す
る感度を測定する。基質は、ＧＣＤＣＡ（シグマ社
製）、セロノルム（第一化学薬品工業社製）、パソノル
ムＬ（第一化学薬品工業社製）及びパソノルムＨ（第一
化学薬品工業社製）等を用いればよい。
【００２５】また、同様にアルカリ域緩衝液としてＢｉ
ｃｉｎｅを用いる場合は以下の様に行えば良い。即ち、
３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを用いた胆
汁酸測定は、Ｒ２溶液（１００ｍＭＢｉｃｉｎｅ（同仁
化学社製）緩衝液、６．６ｍＭＮＡＤＨ、９．５Ｕ／ｍ
ｌ３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（旭化成
工業社製）および０．０５％ＮａＮ3 を含むｐＨ９．０
の溶液）に炭酸水素ナトリウムを０〜５０ｍＭ添加し、
４℃にて開封保存し、添加後、０（初期値）、２１日目
で、３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの残存
活性及び各種基質に対する感度を測定する。
ｃｉｎｅを用いる場合は以下の様に行えば良い。即ち、
３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを用いた胆
汁酸測定は、Ｒ２溶液（１００ｍＭＢｉｃｉｎｅ（同仁
化学社製）緩衝液、６．６ｍＭＮＡＤＨ、９．５Ｕ／ｍ
ｌ３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（旭化成
工業社製）および０．０５％ＮａＮ3 を含むｐＨ９．０
の溶液）に炭酸水素ナトリウムを０〜５０ｍＭ添加し、
４℃にて開封保存し、添加後、０（初期値）、２１日目
で、３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの残存
活性及び各種基質に対する感度を測定する。
【００２６】また、ジエタノールアミン緩衝液でのアル
カリフォスファターゼの活性測定は、例えば、以下の様
に行う。溶液（２００ｍＭジエタノールアミンに炭酸水
素ナトリウムを０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．０
３）、２００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．１１）、
５００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．０８）、６００
ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．１０）または８００ｍ
Ｍ（最終的な溶液のｐＨ１０．１０）を含有せしめた溶
液）を４℃にて開封保存し、保存後１４日目で、アルカ
リフォスファターゼの活性を測定する。アルカリフォス
ファターゼの活性測定は、開封保存した当該溶液１ｍｌ
にアルカリフォスファターゼ基質であるｐ−ニトロフェ
ニルリン酸二ナトリウムを１５ｍＭの濃度で添加し、次
いでアルカリフォスファターゼ含有市販の管理血清であ
るセラクリアＮ（日本商事社製）２０μｌを添加する。
３７℃、１分後から、レートアッセイ法にて、活性を算
出する。
カリフォスファターゼの活性測定は、例えば、以下の様
に行う。溶液（２００ｍＭジエタノールアミンに炭酸水
素ナトリウムを０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．０
３）、２００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．１１）、
５００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．０８）、６００
ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．１０）または８００ｍ
Ｍ（最終的な溶液のｐＨ１０．１０）を含有せしめた溶
液）を４℃にて開封保存し、保存後１４日目で、アルカ
リフォスファターゼの活性を測定する。アルカリフォス
ファターゼの活性測定は、開封保存した当該溶液１ｍｌ
にアルカリフォスファターゼ基質であるｐ−ニトロフェ
ニルリン酸二ナトリウムを１５ｍＭの濃度で添加し、次
いでアルカリフォスファターゼ含有市販の管理血清であ
るセラクリアＮ（日本商事社製）２０μｌを添加する。
３７℃、１分後から、レートアッセイ法にて、活性を算
出する。
【００２７】また、アルカリ域緩衝液として、グッド緩
衝液、例えばＴｒｉｃｉｎｅ緩衝液を用いる場合は以下
の様に行えば良い。溶液（１００ｍＭＴｒｉｃｉｎｅ
（同仁化学社製）緩衝液に炭酸水素ナトリウムを０ｍＭ
（最終的な溶液のｐＨ９．８０）、１００ｍＭ（最終的
な溶液のｐＨ９．８２）、２００ｍＭ（最終的な溶液の
ｐＨ９．８１）、３００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．
８３）、４００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８２）ま
たは５００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８０）を含有
せしめた溶液）を４℃にて開封保存し、１４日目で、ア
ルカリフォスファターゼの活性を前述したように測定す
る。
衝液、例えばＴｒｉｃｉｎｅ緩衝液を用いる場合は以下
の様に行えば良い。溶液（１００ｍＭＴｒｉｃｉｎｅ
（同仁化学社製）緩衝液に炭酸水素ナトリウムを０ｍＭ
（最終的な溶液のｐＨ９．８０）、１００ｍＭ（最終的
な溶液のｐＨ９．８２）、２００ｍＭ（最終的な溶液の
ｐＨ９．８１）、３００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．
８３）、４００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８２）ま
たは５００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８０）を含有
せしめた溶液）を４℃にて開封保存し、１４日目で、ア
ルカリフォスファターゼの活性を前述したように測定す
る。
【００２８】炭酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物
としては、アルカリ金属化合物やアルカリ土類金属化合
物があり、例えば、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリ
ウム、炭酸水素マグネシウムや炭酸水素カルシウム等が
挙げられる。
としては、アルカリ金属化合物やアルカリ土類金属化合
物があり、例えば、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリ
ウム、炭酸水素マグネシウムや炭酸水素カルシウム等が
挙げられる。
【００２９】
【発明の実施の形態】つぎに実施例にもとづいて本発明
を説明するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。
を説明するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。
【００３０】
【実施例１】 ジエタノールアミン緩衝液の調製 ジエタノールアミン（ＤＥＡ）（和光純薬工業株式会社
製）２０．８２７ｇを精製水に溶解させ、６．６ｍｍｏ
ｌのＮＡＤＨ、１．３ｇのデキストラン、０．７ｇのＢ
ＳＡ、および０．５ｇのＮａＮ3 を添加し、炭酸水素ナ
トリウムを０ｇ、４．２ｇ、８．４ｇ、１２．６ｇ、１
６．８ｇ、あるいは２１．０ｇを添加し、３０℃でｐＨ
を計測しながら、１ＮのＨＣｌを加え、ｐＨを９．２に
合わせ、精製水で全量を１，０００ｍｌとし、それぞれ
０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、５０ｍＭ炭
酸水素ナトリウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ
９．２０）、１００ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加０．２
ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、１５０ｍＭ炭酸水
素ナトリウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２
０）、２００ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加０．２ＭのＤ
ＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、２５０ｍＭ炭酸水素ナト
リウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）を
調製した。
製）２０．８２７ｇを精製水に溶解させ、６．６ｍｍｏ
ｌのＮＡＤＨ、１．３ｇのデキストラン、０．７ｇのＢ
ＳＡ、および０．５ｇのＮａＮ3 を添加し、炭酸水素ナ
トリウムを０ｇ、４．２ｇ、８．４ｇ、１２．６ｇ、１
６．８ｇ、あるいは２１．０ｇを添加し、３０℃でｐＨ
を計測しながら、１ＮのＨＣｌを加え、ｐＨを９．２に
合わせ、精製水で全量を１，０００ｍｌとし、それぞれ
０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、５０ｍＭ炭
酸水素ナトリウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ
９．２０）、１００ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加０．２
ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、１５０ｍＭ炭酸水
素ナトリウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２
０）、２００ｍＭ炭酸水素ナトリウム添加０．２ＭのＤ
ＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）、２５０ｍＭ炭酸水素ナト
リウム添加０．２ＭのＤＥＡ緩衝液（ｐＨ９．２０）を
調製した。
【００３１】
【実施例２】 （１）３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性
測定 反応液（４０ｍＭトリス−塩酸緩衝液ｐＨ８．０、１ｍ
ＭＮＡＤ（興人化学社製）、０．０２５％ニトロテトラ
ゾリウムブルー（ＮＴＢ；同仁化学社製）、５Ｕ／ｍｌ
ジアホラーゼ（旭化成工業社製）、０．４％トリトンＸ
ー１００（米山化学社製）含む溶液）０．５ｍｌに、
０．０２ｍｌの酵素液を添加し、３７℃で予備加温した
後、基質溶液（メタノールで溶解した２０ｍＭアンドロ
ステロン（シグマ社製）溶液）を０．０２５ｍｌ添加
し、３７℃、５分間、反応させた後、反応停止液（０．
５％ドデシル硫酸ナトリウム（和光純薬工業社製））
２．５ｍｌを添加し、５５０ｎｍの吸光度を測定し、３
αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性を測定し
た。 （２）３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼによ
る胆汁酸測定 Ｒ１溶液（３０ｍＭグリシン、１．３５ｍＭチオ−ＮＡ
Ｄ（オリエンタル酵母工業社製）、０．８％塩化ナトリ
ウム、０．１％トリトンＸ−１００および０．０５％Ｎ
ａＮ3 を含むｐＨ４．０溶液）１．３０ｍｌに、胆汁酸
溶液０．０１５ｍｌを添加し、３７℃、５分間反応させ
た後、Ｒ２溶液（２００ｍＭジエタノールアミン、６．
６ｍＭＮＡＤＨ、９．５Ｕ／ｍｌ３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼ（旭化成工業社製）および０．０
５％ＮａＮ3 を含むｐＨ９．２溶液）０．６５ｍｌを添
加し、３７℃、２分後から、レートアッセイ法にて、吸
光度変化量を測定した。
測定 反応液（４０ｍＭトリス−塩酸緩衝液ｐＨ８．０、１ｍ
ＭＮＡＤ（興人化学社製）、０．０２５％ニトロテトラ
ゾリウムブルー（ＮＴＢ；同仁化学社製）、５Ｕ／ｍｌ
ジアホラーゼ（旭化成工業社製）、０．４％トリトンＸ
ー１００（米山化学社製）含む溶液）０．５ｍｌに、
０．０２ｍｌの酵素液を添加し、３７℃で予備加温した
後、基質溶液（メタノールで溶解した２０ｍＭアンドロ
ステロン（シグマ社製）溶液）を０．０２５ｍｌ添加
し、３７℃、５分間、反応させた後、反応停止液（０．
５％ドデシル硫酸ナトリウム（和光純薬工業社製））
２．５ｍｌを添加し、５５０ｎｍの吸光度を測定し、３
αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性を測定し
た。 （２）３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼによ
る胆汁酸測定 Ｒ１溶液（３０ｍＭグリシン、１．３５ｍＭチオ−ＮＡ
Ｄ（オリエンタル酵母工業社製）、０．８％塩化ナトリ
ウム、０．１％トリトンＸ−１００および０．０５％Ｎ
ａＮ3 を含むｐＨ４．０溶液）１．３０ｍｌに、胆汁酸
溶液０．０１５ｍｌを添加し、３７℃、５分間反応させ
た後、Ｒ２溶液（２００ｍＭジエタノールアミン、６．
６ｍＭＮＡＤＨ、９．５Ｕ／ｍｌ３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼ（旭化成工業社製）および０．０
５％ＮａＮ3 を含むｐＨ９．２溶液）０．６５ｍｌを添
加し、３７℃、２分後から、レートアッセイ法にて、吸
光度変化量を測定した。
【００３２】同様にして、既知濃度の胆汁酸溶液（シグ
マ社製グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）０．
０９４ｇを１００ｍｌに溶解し、その後４０倍希釈し５
０μＭに調製した溶液）を測定し、既知濃度の胆汁酸溶
液の吸光度変化量から、胆汁酸濃度を算出した。上記の
方法にて、Ｒ２溶液を、４℃にて開封保存し、酵素添加
後、０（初期値）、７、１４、２１、２６、５１日目
で、３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの残存
活性、Ｒ２溶液のｐＨ及び各種基質に対する感度を測定
した。基質は、ＧＣＤＣＡ（シグマ社製）、セロノルム
（第１化学薬品社製）、パソノルムＬ（第１化学薬品社
製）及びパソノルムＨ（第１化学薬品社製）を使用し
た。
マ社製グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）０．
０９４ｇを１００ｍｌに溶解し、その後４０倍希釈し５
０μＭに調製した溶液）を測定し、既知濃度の胆汁酸溶
液の吸光度変化量から、胆汁酸濃度を算出した。上記の
方法にて、Ｒ２溶液を、４℃にて開封保存し、酵素添加
後、０（初期値）、７、１４、２１、２６、５１日目
で、３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの残存
活性、Ｒ２溶液のｐＨ及び各種基質に対する感度を測定
した。基質は、ＧＣＤＣＡ（シグマ社製）、セロノルム
（第１化学薬品社製）、パソノルムＬ（第１化学薬品社
製）及びパソノルムＨ（第１化学薬品社製）を使用し
た。
【００３３】結果を、表１〜表６に示した。
【００３４】
【表１】
【００３５】
【表２】
【００３６】
【表３】
【００３７】
【表４】
【００３８】
【表５】
【００３９】
【表６】
【００４０】表１〜表６により、３αヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸測定において、炭
酸水素ナトリウムを添加した系においては、初期値に対
する相対感度が炭酸水素ナトリウムが無添加の系に比較
して、多いに向上していることが明らかとなった。かつ
炭酸水素ナトリウムの適宜な添加量によって、炭酸水素
ナトリウムの無添加の系の開封後のｐＨの変化に比べ
て、ｐＨの変動を抑制して安定化効果を奏したものであ
った。
イドデヒドロゲナーゼを用いた胆汁酸測定において、炭
酸水素ナトリウムを添加した系においては、初期値に対
する相対感度が炭酸水素ナトリウムが無添加の系に比較
して、多いに向上していることが明らかとなった。かつ
炭酸水素ナトリウムの適宜な添加量によって、炭酸水素
ナトリウムの無添加の系の開封後のｐＨの変化に比べ
て、ｐＨの変動を抑制して安定化効果を奏したものであ
った。
【００４１】
【実施例３】 ３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを用いた胆
汁酸測定 Ｒ２溶液（１００ｍＭＢｉｃｉｎｅ（同仁化学社製）緩
衝液、６．６ｍＭＮＡＤＨ、９．５Ｕ／ｍｌ３αヒドロ
キシステロイドデヒドロゲナーゼ（旭化成工業社製）お
よび０．０５％ＮａＮ3 を含むｐＨ９．０の溶液）に炭
酸水素ナトリウムを０〜５０ｍＭの濃度で添加し、４℃
にて開封保存し、添加後、０（初期値）、２１日目で、
３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの残存活性
及び各種基質に対する感度を実施例２と同様に測定し
た。結果を、表７に示した。
汁酸測定 Ｒ２溶液（１００ｍＭＢｉｃｉｎｅ（同仁化学社製）緩
衝液、６．６ｍＭＮＡＤＨ、９．５Ｕ／ｍｌ３αヒドロ
キシステロイドデヒドロゲナーゼ（旭化成工業社製）お
よび０．０５％ＮａＮ3 を含むｐＨ９．０の溶液）に炭
酸水素ナトリウムを０〜５０ｍＭの濃度で添加し、４℃
にて開封保存し、添加後、０（初期値）、２１日目で、
３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼの残存活性
及び各種基質に対する感度を実施例２と同様に測定し
た。結果を、表７に示した。
【００４２】
【表７】
【００４３】表７により、Ｂｉｃｉｎｅ緩衝液において
も、炭酸水素ナトリウムを添加した系においては、初期
値に対する相対感度が炭酸水素ナトリウムが無添加の系
に比較して、多いに向上していることが明らかとなっ
た。
も、炭酸水素ナトリウムを添加した系においては、初期
値に対する相対感度が炭酸水素ナトリウムが無添加の系
に比較して、多いに向上していることが明らかとなっ
た。
【００４４】
【実施例４】 開封保存ジエタノールアミン緩衝液溶液におけるアルカ
リフォスファターゼの活性測定 溶液（２００ｍＭジエタノールアミンに炭酸水素ナトリ
ウムを０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．０３）、２０
０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．１１）、５００ｍＭ
（最終的な溶液のｐＨ１０．０８）、６００ｍＭ（最終
的な溶液のｐＨ１０．１０）または８００ｍＭ（最終的
な溶液のｐＨ１０．１０）を含有せしめた溶液）を４℃
にて開封保存し、保存後１４日目で、アルカリフォスフ
ァターゼの活性を測定した。
リフォスファターゼの活性測定 溶液（２００ｍＭジエタノールアミンに炭酸水素ナトリ
ウムを０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．０３）、２０
０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ１０．１１）、５００ｍＭ
（最終的な溶液のｐＨ１０．０８）、６００ｍＭ（最終
的な溶液のｐＨ１０．１０）または８００ｍＭ（最終的
な溶液のｐＨ１０．１０）を含有せしめた溶液）を４℃
にて開封保存し、保存後１４日目で、アルカリフォスフ
ァターゼの活性を測定した。
【００４５】アルカリフォスファターゼの活性測定は、
開封保存した当該溶液１ｍｌにアルカリフォスファター
ゼ基質であるｐ−ニトロフェニルリン酸二ナトリウムを
１５ｍＭの濃度で添加し、次いでアルカリフォスファタ
ーゼ含有市販の管理血清であるセラクリアＮ（日本商事
社製）２０μｌを添加した。３７℃、１分後から、レー
トアッセイ法にて、活性を算出した。結果を、表８に示
した。
開封保存した当該溶液１ｍｌにアルカリフォスファター
ゼ基質であるｐ−ニトロフェニルリン酸二ナトリウムを
１５ｍＭの濃度で添加し、次いでアルカリフォスファタ
ーゼ含有市販の管理血清であるセラクリアＮ（日本商事
社製）２０μｌを添加した。３７℃、１分後から、レー
トアッセイ法にて、活性を算出した。結果を、表８に示
した。
【００４６】
【表８】
【００４７】表８から、炭酸水素ナトリウムを添加した
系においては、炭酸水素ナトリウムが無添加の系に比較
して、活性の低下が大いに軽減されていることが明らか
となった。
系においては、炭酸水素ナトリウムが無添加の系に比較
して、活性の低下が大いに軽減されていることが明らか
となった。
【００４８】
【実施例５】 開封保存したグッド緩衝液におけるアルカリフォスファ
ターゼの活性測定 グッド緩衝液の１つとして、Ｔｒｉｃｉｎｅ緩衝液を用
いた。即ち、溶液（１００ｍＭＴｒｉｃｉｎｅ（同仁化
学社製）緩衝液に炭酸水素ナトリウムを０ｍＭ（最終的
な溶液のｐＨ９．８０）、１００ｍＭ（最終的な溶液の
ｐＨ９．８２）、２００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．
８１）、３００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８３）、
４００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８２）または５０
０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８０）を含有せしめた
溶液）を４℃にて開封保存し、１４日目で、アルカリフ
ォスファターゼの活性を測定した。アルカリフォスファ
ターゼの活性測定は実施例４と同様に実施した。結果
を、表９に示した。
ターゼの活性測定 グッド緩衝液の１つとして、Ｔｒｉｃｉｎｅ緩衝液を用
いた。即ち、溶液（１００ｍＭＴｒｉｃｉｎｅ（同仁化
学社製）緩衝液に炭酸水素ナトリウムを０ｍＭ（最終的
な溶液のｐＨ９．８０）、１００ｍＭ（最終的な溶液の
ｐＨ９．８２）、２００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．
８１）、３００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８３）、
４００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８２）または５０
０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．８０）を含有せしめた
溶液）を４℃にて開封保存し、１４日目で、アルカリフ
ォスファターゼの活性を測定した。アルカリフォスファ
ターゼの活性測定は実施例４と同様に実施した。結果
を、表９に示した。
【００４９】
【表９】
【００５０】表９から、炭酸水素ナトリウムを添加した
系においては、炭酸水素ナトリウムが無添加の系に比較
して、活性の低下が大いに軽減されていることが明らか
となった。
系においては、炭酸水素ナトリウムが無添加の系に比較
して、活性の低下が大いに軽減されていることが明らか
となった。
【００５１】
【実施例６】 開封保存した生化学用緩衝液におけるアルカリフォスフ
ァターゼの活性測定 生化学用緩衝液の１つとして、塩酸−トリスアミノメタ
ン系緩衝液を用いた。即ち、溶液（５０ｍＭＴｒｉｓ
（シグマ社製、商品名Ｔｒｉｚｍａ−ｂａｓｅ）緩衝液
に炭酸水素カリウムを０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．
２０）または３００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．２
０）を含有せしめた溶液）を４℃にて開封保存し、１４
日目で、アルカリフォスファターゼの活性を測定した。
アルカリフォスファターゼの活性測定は実施例４と同様
に実施した。
ァターゼの活性測定 生化学用緩衝液の１つとして、塩酸−トリスアミノメタ
ン系緩衝液を用いた。即ち、溶液（５０ｍＭＴｒｉｓ
（シグマ社製、商品名Ｔｒｉｚｍａ−ｂａｓｅ）緩衝液
に炭酸水素カリウムを０ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．
２０）または３００ｍＭ（最終的な溶液のｐＨ９．２
０）を含有せしめた溶液）を４℃にて開封保存し、１４
日目で、アルカリフォスファターゼの活性を測定した。
アルカリフォスファターゼの活性測定は実施例４と同様
に実施した。
【００５２】その結果、１００ｍＭ炭酸水素カリウム含
有Ｔｒｉｓ緩衝液におけるｐＨおよびアルカリフォスフ
ァターゼの活性はそれぞれｐＨ９．２０および１１０Ｕ
／Ｌ（初期値、１１１Ｕ／Ｌ）であったが、炭酸水素カ
リウム不含Ｔｒｉｓ緩衝液におけるｐＨおよびアルカリ
フォスファターゼの活性はそれぞれｐＨ８．９０および
９５Ｕ／Ｌ（初期値、１１０Ｕ／Ｌ）であった。
有Ｔｒｉｓ緩衝液におけるｐＨおよびアルカリフォスフ
ァターゼの活性はそれぞれｐＨ９．２０および１１０Ｕ
／Ｌ（初期値、１１１Ｕ／Ｌ）であったが、炭酸水素カ
リウム不含Ｔｒｉｓ緩衝液におけるｐＨおよびアルカリ
フォスファターゼの活性はそれぞれｐＨ８．９０および
９５Ｕ／Ｌ（初期値、１１０Ｕ／Ｌ）であった。
【００５３】従って、炭酸水素カリウムを有効成分とし
て含む緩衝液組成物はｐＨの低下を抑制し、さらにアル
カリフォスファターゼの活性が再現性良く測定できるこ
とが明らかとなった。
て含む緩衝液組成物はｐＨの低下を抑制し、さらにアル
カリフォスファターゼの活性が再現性良く測定できるこ
とが明らかとなった。
【００５４】
【発明の効果】アルカリ域緩衝液を用いる組成物は、上
記した３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを用
いた胆汁酸の活性測定やアルカリフォスファターゼ活性
測定等の他に、ＮＡＤＨ等を用いたデヒドロゲナーゼの
活性測定またはその基質の測定、デヒドロゲナーゼを用
いた可逆反応に基づく酵素サイクリングによる酵素活性
測定やその基質の測定、キサンチンデヒドロゲナーゼ活
性測定等に利用され、炭酸化合物を含有せしめたアルカ
リ域緩衝液を用いる組成物は上記の酵素的測定において
再現性の良好な測定結果を与えることができ、さらに緩
衝液の濃度の低減化という効能を有するとともに、開封
後の組成物のｐＨを安定に維持、調整し得る。さらに、
本発明の緩衝液組成物は、酵素的測定用の媒体として好
適に用いられる。
記した３αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼを用
いた胆汁酸の活性測定やアルカリフォスファターゼ活性
測定等の他に、ＮＡＤＨ等を用いたデヒドロゲナーゼの
活性測定またはその基質の測定、デヒドロゲナーゼを用
いた可逆反応に基づく酵素サイクリングによる酵素活性
測定やその基質の測定、キサンチンデヒドロゲナーゼ活
性測定等に利用され、炭酸化合物を含有せしめたアルカ
リ域緩衝液を用いる組成物は上記の酵素的測定において
再現性の良好な測定結果を与えることができ、さらに緩
衝液の濃度の低減化という効能を有するとともに、開封
後の組成物のｐＨを安定に維持、調整し得る。さらに、
本発明の緩衝液組成物は、酵素的測定用の媒体として好
適に用いられる。
Claims (16)
- 【請求項１】 ｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液（但
し、炭酸系緩衝液を除く）を用い、主成分としてアルカ
リ域にて酵素的反応を行なう酵素含有組成であって、炭
酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分とす
る緩衝液組成。 - 【請求項２】 酵素が、デヒドロゲナーゼまたはアルカ
リホスファターゼである請求項１記載の緩衝液組成。 - 【請求項３】 デヒドロゲナーゼが、ステロイドデヒド
ロゲナーゼである請求項１記載の緩衝液組成。 - 【請求項４】 緩衝液が、２０ｍＭ〜２Ｍ濃度の有機ア
ミン系緩衝液、２０ｍＭ〜１Ｍ濃度のグッド緩衝液また
は２０ｍＭ〜１Ｍ濃度の生化学用緩衝液である請求項１
記載の緩衝液組成。 - 【請求項５】 炭酸化合物が、アルカリ金属またはアル
カリ土類金属化合物である請求項１記載の緩衝液組成。 - 【請求項６】 アルカリ金属またはアルカリ土類金属化
合物が、ナトリウムまたはカリウムであるアルカリ金
属、またはカルシウムまたはマグネシウムであるアルカ
リ土類金属化合物である請求項５記載の緩衝液組成。 - 【請求項７】 炭酸化合物が、１０ｍＭ〜１Ｍ濃度の炭
酸水素ナトリウムである請求項１記載の緩衝液組成。 - 【請求項８】 酵素が、基質の測定または酵素活性測定
用酵素である請求項１記載の緩衝液組成。 - 【請求項９】 ｐＨ８〜１１のアルカリ域緩衝液（但
し、炭酸系緩衝液を除く）を用い、主成分としてアルカ
リ域にて酵素的反応を行なう酵素含有組成であって、炭
酸水素イオンを放出せしめる炭酸化合物を有効成分とし
て含有せしめることを特徴とする当該緩衝液組のｐＨ変
動の抑制方法。 - 【請求項１０】 酵素が、デヒドロゲナーゼまたはアル
カリホスファターゼである請求項９記載の方法。 - 【請求項１１】 デヒドロゲナーゼが、ステロイドデヒ
ドロゲナーゼである請求項１０記載の方法。 - 【請求項１２】 緩衝液が、２０ｍＭ〜２Ｍ濃度の有機
アミン系緩衝液、２０ｍＭ〜１Ｍ濃度のグッド緩衝液ま
たは２０ｍＭ〜１Ｍ濃度の生化学用緩衝液である請求項
９記載の方法。 - 【請求項１３】 炭酸化合物が、アルカリ金属またはア
ルカリ土類金属化合物である請求項９記載の方法。 - 【請求項１４】 アルカリ金属またはアルカリ土類金属
化合物が、ナトリウムまたはカリウムであるアルカリ金
属、またはカルシウムまたはマグネシウムであるアルカ
リ土類金属化合物である請求項１３記載の方法。 - 【請求項１５】 炭酸化合物が、１０ｍＭ〜１Ｍ濃度の
炭酸水素ナトリウムである請求項９記載の方法。 - 【請求項１６】 酵素が、基質の測定または酵素活性測
定用酵素である請求項９記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05464698A JP4093507B2 (ja) | 1997-03-10 | 1998-03-06 | 緩衝液組成 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5437897 | 1997-03-10 | ||
| JP9-54378 | 1997-03-10 | ||
| JP05464698A JP4093507B2 (ja) | 1997-03-10 | 1998-03-06 | 緩衝液組成 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10309200A true JPH10309200A (ja) | 1998-11-24 |
| JP4093507B2 JP4093507B2 (ja) | 2008-06-04 |
Family
ID=26395138
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05464698A Expired - Fee Related JP4093507B2 (ja) | 1997-03-10 | 1998-03-06 | 緩衝液組成 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4093507B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003009857A (ja) * | 2001-07-02 | 2003-01-14 | Asahi Kasei Corp | アルカリホスファターゼの安定化方法 |
| JPWO2008117816A1 (ja) * | 2007-03-28 | 2010-07-15 | 悦朗 伊藤 | タンパク質および核酸の超高感度測定法 |
| JP2018512431A (ja) * | 2015-04-10 | 2018-05-17 | アディマブ， エルエルシー | 親ホモ二量体抗体種からのヘテロ二量体多重特異性抗体の精製方法 |
-
1998
- 1998-03-06 JP JP05464698A patent/JP4093507B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003009857A (ja) * | 2001-07-02 | 2003-01-14 | Asahi Kasei Corp | アルカリホスファターゼの安定化方法 |
| JPWO2008117816A1 (ja) * | 2007-03-28 | 2010-07-15 | 悦朗 伊藤 | タンパク質および核酸の超高感度測定法 |
| JP2018512431A (ja) * | 2015-04-10 | 2018-05-17 | アディマブ， エルエルシー | 親ホモ二量体抗体種からのヘテロ二量体多重特異性抗体の精製方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4093507B2 (ja) | 2008-06-04 |
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